CN114703190B - 一种靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA在慢性髓细胞白血病中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA在制备治疗慢性髓细胞白血病药物疗中的应用。所述靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA是以KIAA1429基因中SEQ ID NO.1所示核苷酸序列为靶点设计的核酸分子,所述的核酸分子为SEQ ID NO.2‑3所示的ShRNA‑1或SEQ ID NO.4‑5所示的ShRNA‑2,本发明提供的针对靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA通过细胞和动物实验,证实其能抑制KIAA1429基因表达,并在抑制慢性髓细胞白血病细胞的增殖、转移等多方面具有显著效果,具有潜在的克服Imatinib耐药性的价值,为慢性髓细胞白血病的临床治疗提供新的靶向治疗药物。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域,具体涉及一种靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA及其在慢性髓细胞白血病中的应用。
背景技术
慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一种起源于骨髓多能造血干细胞的恶性克隆性骨髓增生性疾病,以成熟髓系细胞的异常增殖为主,在我国发病率高,约占成年人白血病的20%,Bcl/Abl融合基因是其特征及关键致病基因。目前CML治疗主要包括骨髓移植、基因治疗、免疫治疗和分子靶向药物治疗等。但分别存在着费用高、成功率低、副作用大等问题亟待解决,目前使用最广泛的酪氨酸激酶抑制剂(TKIs),如Imatinib,也存在约1/5的CML患者耐药,疗效不佳疾病则可能进一步恶性进展,出现急变,预后极差。目前CML演变及TKI耐药性阻碍着彻底治愈CML最终理想的实现。因此,深入研究CML恶性进展演变机制,寻找新的靶点和治疗方向,将更好的提高治疗效果,改善患者的生存质量。
表观遗传学是血液肿瘤的重要推动因素,N6-甲基腺苷(m6A)甲基化是真核生物mRNA中最常见的修饰,据报道,m6A修饰血液系统恶性肿瘤起重要调控作用,可能成为血液肿瘤分子诊断及治疗靶标。KIAA1429是m6A甲基转移酶,位于人染色体8q22.1,是一种介导m6A修饰的复合物(WMM)的主要成分,为m6A甲基化的关键调节因子,是目前发现的甲基转移酶复合体中分子量最大的蛋白,可以以依赖或不依赖m6A甲基化的方式,调控RNA剪接、出核运输、加工、翻译及稳定性,进而影响肿瘤、生殖、生物节律等多种生物学功能。已有研究显示KIAA1429表达异常与肝癌、胃癌、乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌、睾丸生殖细胞瘤等多种癌症类型的不良预后密切相关,KIAA1429高表达参与并促进癌症进展,在这些癌症类型中观察到明显的致癌作用,提示KIAA1429可能是癌症治疗中潜在的治疗靶点。但目前,KIAA1429在CML的发生发展及耐药中的作用及机制国内外尚未见报道。
发明内容
鉴于现有技术存在的问题,本发明的目的在于提供一种靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA及其在制备治疗CML的药物中的应用。本发明通过利用RNA干扰技术,设计并合成一种特异性抑制KIAA1429基因的ShRNA。上述ShRNA可以特异性地抑制靶基因KIAA1429的表达,从而抑制CML细胞的增殖、转移和Imatinib耐药,达到CML的基因靶向治疗的目的。本发明经试验和数据分析,KIAA1429基因在CML急变期患者中高表达,抑制CML细胞中KIAA1429基因的表达可以抑制细胞的增殖、转移和Imatinib耐药。本发明通过构建一种靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA可以用于CML治疗试剂的开发。KIAA1429基因的靶向抑制ShRNA在CML基因治疗与分子靶向治疗领域将发挥重要作用,为CML的临床治疗提供新的靶向治疗药物。
为了实现上述目的,本发明采用以下技术方案。
本发明提供了一种靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA,所述ShRNA是以KIAA1429基因中SEQ ID No.1所示核苷酸序列为靶点设计的核酸分子。
进一步,所述ShRNA为ShRNA-1或ShRNA-2,所述ShRNA-1包含正义链:
5’-CCGGCGGAATATGAAGCAACAAATTCTCGAGAATTTGTTGCTTCATATTCCGTTTTTG-3’和反义链:
5’-AATTCAAAAACGGAATATGAAGCAACAAATTCTCGAGAATTTGTTGCTTCATATTCCG-3’;所述ShRNA-2包含正义链:
5’-CCGGCGCTGAGCAAAGTTCTCATATCTCGAGATATGAGAACTTTGCTCAGCGTTTTTG-3’和反义链:
5’-AATTCAAAAACGCTGAGCAAAGTTCTCATATCTCGAGATATGAGAACTTTGCTCAGCG-3’。
本发明还提供了上述ShRNA在制备治疗慢性髓细胞白血病的药物中的应用。
进一步,本发明所述制备治疗慢性髓细胞白血病的药物中的应用,其中所述ShRNA为ShRNA-1和/或ShRNA-2,其中ShRNA-1和ShRNA-2如前所述。
进一步,本发明所述治疗是指抑制慢性髓细胞白血病细胞的增殖、抑制慢性髓细胞白血病细胞的迁移和/或抑制Imatinib耐药能力。
进一步,本发明所述药物的剂型为任何药物治疗学上可接受的剂型。
进一步,本发明所述药物的剂量为任何药物治疗学上可接受的剂量。
进一步,本发明所述药物包含所述的ShRNA以及药学上可接受的载体。
进一步,本发明所述药物包含ShRNA-1和/或ShRNA-2以及药学上可接受的载体。
本发明人首次研究发现,相较于CML初发期患者,KIAA1429在CML急变期患者样本中表达显著上调,提示KIAA1429可能与CML病情进展密切相关。本发明进一步通过细胞动物实验,验证KIAA1429功能,结果显示通过ShRNA沉默KIAA1429表达,能够抑制CML细胞增殖、迁移,促进细胞的凋亡,并能在体内有效的抑制CML成瘤能力。当前临床上酪氨酸激酶抑制剂是治疗的CML的重要手段,而沉默KIAA1429表达,能够提高CML细胞株对Imatinib的敏感性,基于以上研究成果,表明KIAA1429在CML疾病进展中起重要作用,是一个可用于CML的治疗的分子靶标,开发针对该靶标的治剂将推动CML,特别是CML急变期患者的治疗。
与现有技术相比,本发明的有益效果如下。
1)本发明首次提出利用RNA干扰技术开发特异性靶向抑制KIAA1429基因的ShRNA,可以显著地抑制CML细胞的增殖、转移和Imatinib耐药,是治疗CML的一种新型靶向药物制剂,与传统化疗药物相比具有显著特异性。
2)本发明提供的靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA通过细胞和动物实验证实,在抑制CML细胞的增殖、转移和Imatinib耐药方面具有显著效果,能有效发挥抑制KIAA1429基因表达的作用,对CML起到基因治疗的目的,为CML的临床治疗提供新的靶向治疗药物。
附图说明
图1为本发明实施例中KIAA1429基因在CML患者中表达情况图。
图2为本发明实施例中利用RT-qPCR和WB实验检测K562/G01细胞接受ShRNA处理组与空白对照组的细胞KIAA1429表达情况图。
图3为本发明实施例中利用CCK-8实验检测K562/G01细胞接受ShRNA处理组与空白对照组的细胞增殖能力图。
图4为本发明实施例中利用EdU染色检测K562/G01细胞接受ShRNA处理组与空白对照组的细胞增殖能力图。
图5为本发明实施例中利用流式细胞术检测K562/G01细胞接受ShRNA处理组与空白对照组的细胞凋亡情况图。
图6为本发明实施例中利用Transwell实验检测K562/G01细胞接受ShRNA处理组与空白对照组的细胞迁移能力图。
图7为本发明实施例中利用IC50实验检测K562/G01细胞接受ShRNA处理组与空白对照组的细胞Imatinib耐药能力图。
图8为本发明实施例中利用K562/G01细胞接受ShRNA处理组与空白对照组细胞在在体情况下细胞的增殖能力图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例,凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。除了特别指明,以下实施例中所使用的技术手段和操作方法为本领域技术人员所熟知的常规手段和方法,所使用原料均为市售商品。
以下结合附图和实施例对本发明的技术方案做进一步的说明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件如Sambrook等人,分子克隆实验室手册(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实验材料:人慢性髓细胞白血病细胞Imatinib耐药株K562/G01系重庆医科大学检验学院惠赠,ShRNA慢病毒购自中国吉凯公司,Anti KIAA1429(#88358)和Anti GAPDH(#5174)购自美国CST公司,Imatinib购自中国索莱宝公司,EDU试剂购自中国锐博公司,CCK8试剂购自中国汉恒生物技术公司,流式凋亡试剂盒购自美国BD公司,Tanswell小室购自美国康宁公司,Trizol购自中国TaKaRa公司,Ficoll淋巴细胞分离液购自北京索莱宝科技有限公司,Trizol试剂购自美国Invitrogen公司,Takara逆转录试剂盒和荧光定量试剂盒购自日本Takara公司。
实施例1
KIAA1429基因在CML患者中表达情况分析。
1、CML病患组标本采集。据2016年CML的NCCN诊断标准,收集初次诊断并未进行治疗CML慢性期患者样本(CML-CP)40例和CML急变期患者样本(CML-BP)18例。
2、提取患者外周血单个核细胞(PBMC)。Ficoll密度梯度离心法:①将2.5ml全血置入15ml离心管中,2.5ml PBS溶液稀释,轻轻混匀;②取15ml离心管先加入5ml Ficoll溶液。然后将稀释的血液用移液管轻轻加到Ficoll上层(避免两种溶液混合);③离心2000rpm,20min;④用吸管吸取白色细胞层(即PBMC)放入干净的15ml离心管中;⑤加入PBS至10-15ml,1500rpm,10min离心后去掉上清,备用。
3、RT-qPCR检测mRNA表达量
(1)通过时实荧光定量PCR方法,对各组间KIAA1429 mRNA表达量进行定量检测。来自各组样本的PBMC采用Trizol法提取总RNA。测定总RNA纯度和浓度,备用。
(2)模板DNA即cDNA的合成:按Takara逆转录反应试剂盒说明对制备的总RNA进行逆转录,扩增产物即为模板cDNA,-20℃保存备用。
(3)SYBR Green法RT-qPCR检测:①KIAA1429引物及内参基因GAPDH引物由华大基因公司合成,分别用无核酶水溶解为10nmol/ml,备用;②按Takara荧光定量试剂盒配制RT-qPCR反应体系如下表:
③反应条件:首先95℃30s,然后按95℃5s、60℃34s的顺序循环40次,最后95℃15s、60℃60s、95℃15s;④为减少试验误差,每例样本进行3次重复试验。⑤分析结果:结合扩增曲线及溶解曲线判断扩增效果,利用2-ΔΔCt法计算目的基因表达量。
结果如图1所示,KIAA1429 mRNA在CML急变期患者外周血单个核细胞PBMC中表达较CML初发期患者显著上调。
实施例2
针对KIAA1429基因ShRNA的设计、制备和验证。
1、首先设计针对KIAA1429基因的干扰序列,靶向抑制人KIAA1429基因表达的ShRNA-1正义链序列如下:
5’-CCGGCGGAATATGAAGCAACAAATTCTCGAGAATTTGTTGCTTCATATTCCGTTTTTG-3’(SEQID No.2)。ShRNA-1反义链序列如下:
5’-AATTCAAAAACGGAATATGAAGCAACAAATTCTCGAGAATTTGTTGCTTCATATTCCG-3’(SEQID No.3)。ShRNA-2正义链序列如下:
5’-CCGGCGCTGAGCAAAGTTCTCATATCTCGAGATATGAGAACTTTGCTCAGCGTTTTTG-3’(SEQID No.4)。ShRNA-2反义链序列如下:
5’-AATTCAAAAACGCTGAGCAAAGTTCTCATATCTCGAGATATGAGAACTTTGCTCAGCG-3’(SEQID No.5)。通过NCBI网站的同源序列对比分析软件nucleotide blast进行对比分析,结果表明该序列和人的其他mRNA基因没有高度同源性,可以用于特异性地干扰KIAA1429基因的表达。基于上述靶向抑制KIAA1429基因表达的序列,由中国吉凯公司进一步设计并合成用于靶向抑制KIAA1429基因表达ShRNA-1/ShRNA-2质粒,并包装为ShRNA-1/ShRNA-2慢病毒的形式用于细胞、动物和治疗等实验。
2、验证ShRNA慢病毒能够靶向抑制KIAA1429基因表达。接受ShRNA-1/ShRNA-2慢病毒转染的细胞分别命名为ShRNA-1/ShRNA-2实验组,接受空载质粒慢病毒处理的细胞为Sh-NC空白对照组。
3、RT-qRCR检测各组细胞KIAA1429基因mRNA表达量,方法如前所述。结果如图2-A所示,ShRNA组细胞KIAA1429 mRNA表达水平较空白对照组显著降低。
4、.Western Blot检测法各组细胞KIAA1429基因蛋白质表达量。收集各组细胞,用PBS洗涤后,以RIPA裂解法提取细胞总蛋白,以BCA法检测总蛋白浓度。取40μg蛋白溶于6×SDS上样缓冲液中,100℃煮沸,10min后,将上述各样品经8%SDS-PAGE凝胶电泳,湿转法将蛋白转移至PVDF膜,5%脱脂奶粉在室温下封闭1h,然后将PVDF膜与1:1000稀释的一抗KIAA1429和GAPDH于4℃孵育过夜,用TBST洗3次后将膜与1:5000稀释的兔二抗室温孵育1h。TBST漂洗后,加入显影剂用Bio-Rad图象分析系统曝光成像。结果如图2-B所示,ShRNA组细胞KIAA1429蛋白质表达水平较空白对照组显著降低。
实施例3
ShRNA作用于K562/G01对其增殖、迁移、凋亡及耐药影响的实验研究。
1、CCK-8实验检测细胞增殖能力:用于检测细胞增殖情况。取各组转染细胞,调整细胞密度为1×105/ml,取0.1ml/孔接种96孔细胞培养板,在37℃、5%CO2培养箱中分别培养0h、12h、24h和48h后,每孔加10微升CCK8试剂,培养箱继续培养3h后,酶标仪测定450nm/630nm处的各孔吸光度OD值,每组实验复孔3孔,计算绘制细胞增殖曲线。结果如图3所示,ShRNA组细胞增殖能力显著低于空白对照组。
2、EDU染色法检测细胞增殖能力。根据试剂说明书操作,取1×106对数生长期细胞,完全培养基1:1000稀释的EdU溶液共同孵育2小时,PBS洗涤两遍,4%多聚甲醛室温固定30分钟,2mg/ml甘氨酸脱色;0.5%Triton X渗透剂孵育后,加入Apollo染色反应液,室温避光孵育30分钟、0.5%Triton X渗透剂脱色摇床孵育10min,加入Hoechst33342室温避光孵育30分钟,PBS洗涤,染色完成,然后荧光显微镜拍照。结果如图4所示,ShRNA组细胞增殖能力显著低于空白对照组。
3、流式细胞术检测细胞凋亡情况。依据试剂盒说明书,分别离心收集各组1×106细胞,预冷的PBS漂洗2次,加0.1ml 1×Binding Buffer重悬细胞。加入5微升Annexin V-PE和5微升7-AAD避光孵育10分钟,加入0.4ml 1×Binding Buffer。1小时内流式细胞仪检测激发波长488nm下,FL2和FL3通道的荧光强度。结果如图5所示,ShRNA组细胞凋亡率显著高于空白对照组。
4、Transwell实验检测细胞迁移能力。收集各组细胞,PBS洗涤后,加入无血清的RPMI-1640培养基,饥饿培养24小时。饥饿培养的细胞离心去培养基,以无血清的RPMI-1640培养基重悬,调整细胞浓度至1×106/ml。Transwell小室置于24孔板中,下室中加入550μl含20%胎牛血清的RPMI-1640培养基,上室加入200μl无血清培养基细胞悬液。恒温细胞培养箱37℃培养48h后。取出Transwell小室以甲醇固定30min,用0.1%甲紫染色后,显微镜下观察拍照。结果如图6所示,ShRNA组细胞迁移能力显著低于空白对照组。
5、IC50实验检测细胞Imatinib耐药能力。收集各组细胞,调整细胞悬液浓度至1×105/ml。96孔板每孔加入100μl细胞悬液,并在相应的孔位分别加入不同浓度梯度相应药物,每样每个药物浓度设置三个复孔,并设置调零孔。将96孔板置于恒温细胞培养箱培养48h后,每孔加入10μl CCK-8溶液,在细胞培养箱内继续孵育2-4小时后,然后用酶标仪上以450nm/630nm读取吸光度,绘制IC50曲线。结果如图7所示,ShRNA组细胞Imatinib敏感性显著高于空白对照组。
实施例4
利用裸鼠皮下荷瘤模型验证ShRNA在体内情况下抑制CML进展的情况。
为进一步探究该抑制剂在在体情况下对CML进展的影响,采用小鼠皮下荷瘤模型进行研究。实验组每组各准备4只BALB/c裸鼠,ShRNA-1/ShRNA-2组和Sh-NC组各准备细胞悬液,细胞悬液的浓度为5×107/ml,细胞的悬浮液采用1640培养基,不含有FBS;向每组每只裸鼠的皮下注入0.2ml的细胞;在SPF级无菌动物饲养间进行30天的饲养;之后将上述裸鼠处死并记录裸鼠皮下成瘤的体积。统计数据分析提示ShRNA组裸鼠皮下成瘤率较Sh-NC组显著降低,瘤体体积显著缩小,提示ShRNA-1/ShRNA-2处理CML细胞可以在在体内情况下抑制CML的进展,如图8所示。
上述实施例各组间变化均有统计学差异(*P<0.05,**P<0.05,***P<0.001)。
上述步骤为本专利的较佳实施方式,但是本专利并不限于上述实施方式,在本领域的技术或研究人员,可在各所处知识领域内,且不脱离本专利宗旨的前提下作出相应的变化。
序列表
<110> 南昌大学第二附属医院
<120> 一种靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA在慢性髓细胞白血病治疗中的应用
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1 .0
<210> 1
<211> 6478
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
ctgttccccgcccgcggcaaacatggcggtggactcggcgatggagctgttatttttagatacttttaaacacccgagcgctgagcaaagttctcatatagatgtggttcgttttccatgtgtggtttatatcaatgaagtccgagtcatacccccaggagtaagagcccatagcagtctgccagacaatagagcatatggagagacatctccccatacatttcaattagacttattcttcaacaatgtaagcaaaccaagtgcccctgttttcgataggttgggaagcctggaatatgatgagaatacttccatcatctttagacctaactcaaaggtgaatactgatggtctggtgctaagaggctggtataactgtctgacactggcaatatatggatcagtggatagagtgataagtcatgacagagactctccaccaccaccacctccaccgccaccacctccccagccacaaccaagtttgaaaaggaatccaaaacatgctgatggggagaaagaagatcagtttaatggaagccctccaagaccacagccaaggggaccaagaactcctccaggaccccctccacctgatgatgatgaagatgatcctgtgcctctgccagtgtctggtgacaaggaagaggatgctcctcatagagaagattactttgagcccatttctcctgatcggaattctgttccccaggaagggcaatattctgatgaaggagaagtagaagaggaacaacaagaagaaggagaagaagatgaagatgatgtggatgtagaggaagaagaggatgaggatgaggatgatcgacgaacagtagacagtattcctgaggaggaagaggaagatgaagaggaagaaggtgaagaggatgaagaaggtgaaggggatgatggttatgaacaaatttccagtgatgaagatggaattgctgacttggaacgtgaaacatttaagtatccaaactttgatgttgaatacactgctgaagacttagcttcagttcctcctatgacatatgatccatatgacagggagcttgtaccactcttatacttcagttgtccatacaagactacttttgaaattgaaatcagtagaatgaaggatcaaggtccagataaagaaaattcaggggcaatcgaagcctcagtgaagttaacagaactcttagatttgtatagagaagatagaggtgcaaaatgggtaacagctttagaagaaattccaagtttaataataaaagggttaagctatttgcaattgaaaaacacaaaacaagactcccttggccagttggtagactggaccatgcaagctttaaatttacaagtagcgcttcgccaacctatcgccttaaatgttcgacagctcaaagctgggaccaaattagtgtcctcactagcagaatgtggggctcaaggagttacaggactgctacaagcaggagtgatcagtggattatttgaacttctgtttgctgatcacgtatcatcttctcttaagttaaatgcttttaaagctttggacagtgtcattagtatgacagaaggaatggaagcttttttaagaggtaggcagaatgaaaaaagtggttatcaaaagcttctggaactcatacttttagatcagactgtgagggttgttactgctggttcagctattctccaaaaatgccatttctatgaagtcttgtcagagattaaaagacttggtgaccatttagcagagaagacttcatctcttcctaaccacagtgaacctgatcacgacacagatgctggacttgagagaacaaacccagaatatgaaaatgaggtggaagcttctatggatatggatcttttggaatcctcaaatataagtgaaggggaaatagaaaggcttattaacctcctagaagaagtttttcatttaatggaaactgcccctcatacaatgatccaacaacctgttaagtctttcccaacgatggcacgaattactggacctccagagagggatgatccataccctgttctctttagatatcttcacagtcatcacttcttggagttggttaccttgcttctgtcaattccagtaacaagtgctcaccctggtgtgctgcaagccacaaaagatgttttgaagtttcttgcacagtcacagaagggtcttcttttttttatgtcggaatatgaagcaacaaatttattgatccgagctctgtgtcacttttatgatcaagatgaggaggaaggtctccaatctgatggtgttattgatgatgcatttgccttgtggctacaggactcaacacagacattgcaatgtattacagaactgttcagccattttcagcgttgtacagccagtgaagaaacagaccattcagatctcttgggaaccctgcacaatctttatttgattacttttaatcctgtgggaagatcagctgttggccatgtttttagtctggagaaaaatctccaaagtcttattactctaatggagtactattccaaagaagccttgggtgattccaaatctaagaagtcagtagcttataattacgcatgcatacttattttggtggtggttcagtcttccagtgatgttcaaatgctagaacaacatgcagcatctctcttgaagctttgtaaagcagatgaaaataatgctaaattgcaagaacttggcaagtggcttgaacctctgaaaaaccttagatttgaaattaactgcatcccaaacttaattgagtatgttaagcagaatatcgataacttgatgaccccagaaggagttggccttaccactgccttacgtgttctctgtaatgttgcatgcccaccacctcctgttgaaggtcaacagaaagatctgaaatggaatcttgccgttattcagcttttttctgctgaaggaatggacacgtttattcgagttctgcaaaaattgaacagtattctgactcagccttggaggctccatgtcaacatggggactacccttcacagagttactactatttcaatggctcgctgcacactcactcttcttaaaactatgttaacggaactcctgagaggtggatcctttgagtttaaggacatgcgtgttccttcagcgcttgttactttacatatgctcctgtgctctatccccctctcaggtcgtttggatagtgatgaacagaaaattcagaatgatatcattgatattttactgacttttacacaaggagttaatgaaaaactcacaatctcagaagagactctggccaataatacttggtctttaatgttaaaagaagttctttcttcaatcttgaaggttcctgaaggatttttttctggactcatactcctttcagagctgctgcctcttccattgcccatgcaaacaactcaggttattgagccacatgatatatcagtggcactcaacacccgaaaattgtggagcatgcaccttcatgttcaagcaaagttgctccaagaaatagttcgctctttctctggcacaacctgccagcccattcaacatatgttacggcgtatttgtgttcaattgtgtgaccttgcctcaccaactgcacttctgattatgagaactgtgttggatttgattgtagaagacttgcaaagcacttcagaagataaagaaaaacagtatactagccaaaccaccaggttgcttgctcttcttgatgctctggcttcacacaaagcttgtaaattagctattttgcatctaattaatggaactattaaaggtgatgaaagatatgcagagatattccaggatcttttagctttggtgcggtctcctggagacagtgttattcgccaacagtgtgttgaatatgtcacatccattttgcagtctctctgtgatcaggacattgcacttatcttaccaagctcttctgaaggttctatttctgaactggagcagctctccaattctctaccaaataaagaattgatgacctcaatctgtgactgtctgttggctacgctagctaactctgagagcagttacaactgtttactgacatgtgtcagaacaatgatgtttcttgcagagcatgattatggattatttcatttaaaaagttctttaaggaaaaacagtagtgctctgcatagtttactgaaacgagtggtcagcacatttagtaaggacacaggagagcttgcatcttcatttttagaatttatgagacaaattcttaactctgacacaattggatgctgtggagatgataatggtctcatggaagtagagggagctcatacatcacggacgatgagtattaatgctgcagagttaaaacagcttctacaaagcaaagaagaaagtccagaaaatttgttccttgaactagagaagcttgttttggaacattcaaaagatgatgacaatctggattctttgttggacagtgtagttggacttaagcagatgctggagtcatcaggtgaccctttacctctcagtgaccaggatgtagaaccagtactttcagctccagaatctcttcagaatctgtttaacaataggactgcctatgtgcttgctgatgtcatggatgatcagttgaaatctatgtggttcactccatttcaggctgaagagatagatacagatctggatttggtaaaggttgacttaattgaactctctgaaaaatgctgtagtgactttgatttgcactcagaattagagcgctcatttttgtcagaaccatcatctccaggaagaaccaagactactaaaggattcaaacttgggaagcacaagcatgagacctttataacgtcaagtggaaaatctgaatacattgaacctgccaaaagagctcatgttgtgccaccaccaagaggaaggggcaggggaggatttggacagggtatacgacctcatgatatttttcgtcagagaaaacagaacacaagtagaccaccatctatgcatgtggatgactttgttgctg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6478
<210> 2
<211> 58
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_RNA
<223> shRNA
<400> 1
CCGGCGGAAT ATGAAGCAAC AAATTCTCGA GAATTTGTTG CTTCATATTC CGTTTTTG 58
<210> 3
<211> 58
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_RNA
<223> shRNA
<400> 2
AATTCAAAAA CGGAATATGA AGCAACAAAT TCTCGAGAAT TTGTTGCTTC ATATTCCG 58
<210> 4
<211> 58
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_RNA
<223> shRNA
<400> 3
CCGGCGCTGAGCAAAGTTCTCATATCTCGAGATATGAGAACTTTGCTCAGCGTTTTTG 58
<210> 5
<211> 58
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_RNA
<223> shRNA
<400> 4
AATTCAAAAACGCTGAGCAAAGTTCTCATATCTCGAGATATGAGAACTTTGCTCAGCG 58
Claims (3)
1.一种靶向抑制KIAA1429基因表达的ShRNA在制备治疗慢性髓细胞白血病的药物中的应用,所述ShRNA是以KIAA1429基因中SEQ ID No.1所示核苷酸序列为靶点设计的核酸分子,所述ShRNA为ShRNA-1或ShRNA-2,所述ShRNA-1的正义链为:
5’-CCGGCGGAATATGAAGCAACAAATTCTCGAGAATTTGTTGCTTCATATTCCGTTTTTG-3’,反义链为:5’-AATTCAAAAACGGAATATGAAGCAACAAATTCTCGAGAATTTGTTGCTTCATATTCCG-3’;所述ShRNA-2的正义链为:5’-CCGGCGCTGAGCAAAGTTCTCATATCTCGAGATATGAGAACTTTGCTCAGCGTTTTTG-3’ ,反义链为:5’-AATTCAAAAACGCTGAGCAAAGTTCTCATATCTCGAGATATGAGAACTTTGCTCAGCG-3’。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述治疗是指抑制慢性髓细胞白血病细胞的增殖、抑制慢性髓细胞白血病细胞的迁移和/或抑制慢性髓细胞白血病细胞的Imatinib耐药能力。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物包含权利要求1所述的ShRNA以及药学上可接受的载体。
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