CN116212019B - Kiaa1429在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用 - Google Patents

Kiaa1429在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了KIAA1429在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用。本发明以具有吉非替尼耐药特征的非小细胞肺腺癌细胞株HCC827为实验对象，发现当靶向下调KIAA1429，可提高HCC827耐药株对吉非替尼的敏感性；进一步实验表明KIAA1429主要通过激活JNK通路发挥耐药作用，即KIAA1429通过阻断吉非替尼对JNK通路的抑制，导非小细胞肺腺癌的耐药。通过降低KIAA1429的表达水平，可以恢复吉非替尼通过JNK通路发挥抑制肿瘤细胞活性的作用；表明可通过降低肿瘤细胞中KIAA1429的表达水平，增强吉非替尼抗非小细胞肺癌的敏感性和功效，最终改善或治疗对吉非替尼耐药的非小细胞肺腺癌。

Description

KIAA1429在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，更具体地，KIAA1429在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用，尤其是涉及KIAA1429的表达抑制剂在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用。
背景技术
根据2018年全球癌症数据统计显示，肺癌是人群中发生率最高的癌症，且死亡率居肿瘤死亡率的榜首。80％的肺癌病理类型为非小细胞肺癌(Non-small cell lungcancer，NSCLC)，而肺腺癌是非小细胞肺癌中最常见的病理类型。肺腺癌以手术治疗、放射治疗和药物治疗为主。然而这些方法都有一定的局限性，受到不同因素的制约。目前，医治肺腺癌最有效的方法是手术治疗，但由于肺腺癌诊断难度较大，较多患者在肺腺癌晚期才得以确诊，往往已经错过最佳的治疗时期。
吉非替尼(Gefitinib，Iressa，伊瑞可，易瑞沙)是一种口服表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI，属小分子化合物)。对EGFR-TK的抑制可阻碍肿瘤的生长、转移和血管生成，并增加肿瘤细胞的凋亡。其适用于治疗既往接受过化学治疗的局部晚期或转移性NSCLC。但其作为靶向药，唯一避免不了就是出现耐药。据临床观察，吉非替尼平均耐药时间大概为1年。因此，针对肺腺癌对吉非替尼耐药的分子机制研究，对于辅助临床治疗至关重要，且有必要研究以降低肺腺癌细胞增殖、转移和侵袭能力为目标的新生物药。
KIAA1429是分子量最大的m6A甲基化转移酶，将METTL3、METTL14、WTAP和被修饰的RNA底物相连接，其作用相当于甲基化转移酶复合物的支架，主要通过影响复合物的结构，调控着整个修饰过程。KIAA1429还可以影响RNA转录和翻译的过程、基因表达的转录过程，以及引起细胞出现增殖缺陷，最终导致癌症发生。在肝癌研究中发现，KIAA1429可以通过诱导信mRNA前体(Precursor messenger ribonucleic acid，pre-mRNA)发生m6A甲基化修饰，导致其与结合蛋白分离而降解，最终驱使肝癌发生恶化和转移。在乳腺癌中，KIAA1429也发挥了致癌作用。KIAA1429通过靶向调控CDK1的表达促进乳腺癌的恶化，当药物结合二者使期表达降低时，乳腺癌的治疗效果明显改善。不仅如此，KIAA1429在胃癌组织中的表达水平较癌旁组织更高，抑制KIAA1429表达后，胃癌细胞增殖能力下降；上调其修饰的下游靶基因JUN原癌基因(Jun proto-oncogene，Jun)后，增殖活性恢复，提示KIAA1429通过提高下游靶基因Jun的m6A修饰水平，促进胃癌的进展；不仅如此，KIAA1429也会受lncRNA调控后，影响肿瘤细胞的糖酵解过程，从而促进胃癌的恶化。KIAA1429的致癌作用在骨瘤、结直肠癌、前列腺癌中均有所发现，且KIAA1429的表达除受上游miRNA或lncRNA的调控之外，其自身也可以独立调控下游mRNA的表达。
综上所述，m6A甲基化修饰与癌症发展过程有密切关系，但m6A甲基化转移酶KIAA1429在非小细胞肺腺癌中的吉非替尼耐药机制，目前尚无任何研究。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供KIAA1429在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用。。
本发明的第二个目的在于提供KIAA1429的表达抑制剂在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用。
本发明的第三个目的在于提供KIAA1429的表达抑制剂在制备用于增强吉非替尼抗非小细胞肺癌功效的药物中的应用。
本发明的第四个目的在于提供KIAA1429的表达抑制剂与吉非替尼联用在制备治疗非小细胞肺癌的药物中的应用。
本发明的第五个目的在于提供一种非小细胞肺癌治疗药物。
本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
本发明以具有吉非替尼耐药特征的非小细胞肺腺癌细胞株HCC827为实验对象，通过实验发现，当靶向下调KIAA1429，可以提高HCC827耐药株对吉非替尼的敏感性；进一步实验表明KIAA1429主要通过激活JNK通路发挥耐药作用，即KIAA1429通过阻断吉非替尼对JNK通路的抑制，导非小细胞肺腺癌的耐药。通过降低m6A甲基化转移酶KIAA1429的表达水平，可以恢复吉非替尼通过JNK通路发挥抑制肿瘤细胞活性的作用；表明可通过降低肿瘤细胞中KIAA1429的表达水平，增强吉非替尼抗非小细胞肺癌的敏感性和功效，最终改善或治疗对吉非替尼耐药的非小细胞肺腺癌。
因此，本发明首先提供KIAA1429在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用。
本发明还提供KIAA1429的表达抑制剂在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用。
本发明还提供KIAA1429的表达抑制剂在制备用于增强吉非替尼抗非小细胞肺癌功效的药物中的应用。
本发明还提供KIAA1429的表达抑制剂与吉非替尼联用在制备治疗非小细胞肺癌的药物中的应用。
优选地，所述非小细胞肺癌为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。
优选地，所述非小细胞肺癌为非小细胞肺腺癌。
本发明还提供一种非小细胞肺癌治疗药物，所述含有KIAA1429的表达抑制剂与吉非替尼。
具体地，所述KIAA1429的表达抑制剂为靶向沉默KIAA1429或下调KIAA1429表达量的试剂。
优选地，所述试剂为KIAA1429的shRNA。
进一步优选地，所述shRNA的序列为CACCGGAGTTGGTTACCTTGCTTCTTTCAAGAGAAGAAGCAAGGTAACCAACTCCTTTTTTG；GATCCAAAAAAGGAGTTGGTTACCTTGCTTCTTCTCTTGAAAGAAGCAAGGTAACCAACTCC。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供KIAA1429在制备吉非替尼抗非小细胞肺癌增敏剂中的应用。本发明以具有吉非替尼耐药特征的非小细胞肺腺癌细胞株HCC827为实验对象，发现当靶向下调KIAA1429，可以提高HCC827耐药株对吉非替尼的敏感性；进一步实验表明KIAA1429主要通过激活JNK通路发挥耐药作用，即KIAA1429通过阻断吉非替尼对JNK通路的抑制，导非小细胞肺腺癌的耐药。通过降低KIAA1429的表达水平，可以恢复吉非替尼通过JNK通路发挥抑制肿瘤细胞活性的作用；表明可通过降低肿瘤细胞中KIAA1429的表达水平，增强吉非替尼抗非小细胞肺癌的敏感性和功效，最终改善或治疗对吉非替尼耐药的非小细胞肺腺癌。
附图说明
图1为非小细胞肺腺癌细胞株HCC827和的吉非替尼耐药的HCC827细胞株对吉非替尼的敏感性验证结果图。
图2为稳定转染后的吉非替尼耐药株HCC827中，对照组sh-NC与sh-KIAA1429组的KIAA1429基因和蛋白的表达水平比较图。
图3为KIAA1429低表达的吉非替尼耐药特征的非小细胞肺腺癌细胞株HCC827对吉非替尼敏感性实验。其中图3中A为稳转KIAA1429低表达的耐药株HCC827的吉非替尼的IC50测试结果图，B为在sh-NC对照组、sh-KIAA1429对照组、sh-NC吉非替尼处理组及sh-KIAA1429吉非替尼处理组中的非小细胞肺腺癌细胞株相对细胞活力结果图。
图4为在sh-NC对照组、sh-KIAA1429对照组、sh-NC吉非替尼处理组及sh-KIAA1429吉非替尼处理组中吉非替尼对JNK、P38、ERK、和MEK四个通路的作用效果图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
本发明所采用的细胞株为：HCC827非小细胞肺腺癌细胞株，HCC827/Gefitinib非小细胞肺腺癌吉非替尼耐药细胞株。
选取上述两株细胞系，在37℃、5％CO2培养条件下，使用10％FBS DMEM培养基传代培养(完全培养基按每500mL基础培养基、55mL胎牛血清和5.5mL双抗(青霉素、链霉素)混合)。
实施例1 HCC827及吉非替尼耐药的HCC827细胞株对吉非替尼敏感性验证
细胞活性检测(MTS实验)：分别取对数生长期细胞(HCC827非小细胞肺腺癌细胞株、HCC827/Gefitinib非小细胞肺腺癌吉非替尼耐药细胞株)接种于96孔板内，细胞密度为3×105个/mL，每孔加入100μL细胞悬液。经过夜贴壁，将吉非替尼在DMSO中溶解，共有2，6，10，40，60μM共5个剂量组，同时设置阴性对照组，每组6个副孔。染毒24小时后，弃上清，100μL PBS清洗细胞，加入100μL MTS应用液(每5份体积完全培养基加入1份体积MTS)，继续培养2小时。最后用酶标仪测定450nm处各孔吸光值(absorbance，A)，计算出细胞活力。计算公式为：细胞活力(％)＝[A(处理组)－A(培养基组)]/[A(阴性对照组)－A(培养基组)]×100％，同时对各细胞的剂量-活性关系进行拟合，得出受试物对各细胞的半数抑制浓度(IC50)。
结果如图1所示，HCC827细胞株的吉非替尼的IC50为4.01μM，而耐药株HCC827的吉非替尼的IC50为26.28μM，表明吉非替尼耐药特征的HCC827细胞株可用于后续研究。
实施例2 KIAA1429低表达的吉非替尼耐药特征的非小细胞肺腺癌HCC827细胞株构建
S1.细胞培养：选取呈对数生长期的吉非替尼耐药特征的HCC827细胞株进行实验。随机将细胞分为2组：sh-NC组、sh-KIAA1429组。转染前，将细胞以1×105个/孔的数量接种于12孔板上，置于37℃、5％CO2细胞培养箱内培养24h。当细胞汇合度达70％～80％时，对12孔板细胞进行换液后转染。
S2.质粒转染：KIAA1429阴性对照质粒和低表达质粒由上海吉玛制药技术有限公司设计并合成。稀释质粒DNA：加入适量无血清培养基稀释1.6μg质粒DNA至终体积为100μL。稀释LipoFit 3.0转染试剂：取3.2μL转染试剂加入100μL无血清培养基混匀，静置5min。将稀释的LipoFit 3.0转染试剂和稀释的质粒DNA以1：1的比例混匀，室温孵育20min。将上述混合液加入12孔板中，缓慢摇晃使其混匀。在细胞培养箱内培养24h。
S3.构建稳转细胞：取出成功转染质粒细胞的12孔板，用PBS洗涤细胞两次，转染质粒后的吉非替尼耐药HCC827细胞株换成含浓度为1000ug/mL G418的完全DMEM培养基，培养1周。1周后，取出G418筛选后存活细胞的12孔板，每孔加入0.5mL的胰酶，放入37℃、5％CO2细胞培养箱内，静置3分钟后，加入完全培养基终止消化后，将细胞从板上消化下来转移至干净的EP管内。将消化下来的细胞以1个/孔种于96孔板上，置于37℃、5％CO2细胞培养箱内培养，24h后加入筛选浓度的G418继续培养。加G418继续培养2～3周时，观察96孔板内每孔细胞团数，对孔内含2个及2个以上的细胞团进行标记，不满足单克隆条件，不纳入后续的实验。对孔内仅有1个细胞团的小孔细长满后进行消化，按细胞团1个/孔转移至24孔板进行培养，依次转移12、6孔板，最后转移至中皿。采用实时定量聚合酶链式反应(Quantitativepolymerase chain reaction，qPCR)和免疫印迹(Western blot，WB)实验验证基因干扰的效果。
S4.细胞RNA水平检测：弃除培养瓶/板中的旧培养基，加入1mL 4℃预冷的PBS缓冲液轻柔冲洗三次后，弃除PBS。加入1mL Trizol，用无菌移液管反复吹打细胞，并将其转移至无RNA酶的1.5mL EP管内。
①向EP管中加入200μL氯仿，剧烈震荡30s，使其与Trizol充分混匀，冰上静置10min，12000r/min，4℃离心15min。离心后混合溶液分为三层，下层红色氯仿相，中间层及上层水相。RNA保留在上层水相中。吸取上层水相500μL于新的1.5mL EP管中，加入500μL异丙醇，颠倒混匀后冰上静置10min，12000r/min，4℃离心10min。此时，管内有白色沉淀。弃除上清液，用1mL 75％冰乙醇洗涤两次，轻轻摇晃使沉淀悬浮起来，12000r/min，4℃离心5min。弃除上清液，室温晾干2～3min。用30～50μL的DEPC水反复吹打，使RNA充分溶解。
②RNA质量检测：用DEPC水调零NanoDrop 2000超微量分光光度计后，取1μL待测RNA样品置于仪器上，检测RNA纯度(A260 nm/A280 nm＝1.8～2.0)及浓度。如RNA浓度过高，可适当使用DEPC水稀释，使其终浓度为250ng/μL。
③RNA逆转录：按照Evo M-MLV反转录试剂盒说明书要求，在无RNA酶的0.2mL EP管中配制下列表1所示混合液：
表1逆转录混合液体系
将溶液混匀后，瞬时离心，在逆转录仪进行逆转录，条件如下：37℃，15min；85℃，5s；4℃，+∞，反应结束后，得到的cDNA可立即用于后续的实验或置于-80℃冰箱保存。
④qPCR：按照SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR试剂盒说明书要求，在384孔PCR板上配制下列表2所示混合反应体系。KIAA1429引物序列为：Primer F：AAGTGCCCCTGTTTTCGATAG；Primer R：ACCAGACCATCAGTATTCACCT；β-ACTIN引物序列为：Primer F：CATGTACGTTGCTATCCAGGC；Primer R：CTCCTTAATGTCACGCACGAT。qPCR反应条件：95℃，5s；95℃，30s；60℃，5s，共40个循环。扩增完毕后观察溶解曲线评价扩增特异性。数据分析：采用QuantStudio 6Flex实时荧光定量PCR系统检测荧光强度后，导出每个样本的CT值。mRNA以β-actin作为内参，使用2-ΔΔCT法分别计算患者组织和细胞中目的基因的相对表达量。ΔCT＝CT目的基因-CT内参。
表2 qPCR混合液体系
S5.细胞蛋白水平检测：弃除旧培养基，加入预冷的PBS缓冲液冲洗三遍后，弃除。按照100：1的比例配制适量的裂解液(RIPA裂解液+磷酸酶/蛋白酶抑制剂)，充分混匀后每皿加入100μL裂解液。使用干净细胞刮匙将裂解液均匀铺在细胞表面，冰上裂解30min，期间经常摇晃培养皿。用细胞刮匙将细胞刮于培养皿一侧后，用移液器将细胞裂解液转移至无酶1.5mL EP管内。12000r/min，4℃离心30min，所得上清液为总蛋白溶液，将其转移至新的1.5mL EP管中，并记录体积。
①按照1：4配制适量考马斯亮蓝应用液(考马斯亮蓝染料+去离子水)。BSA蛋白标准品浓度为0.5μg/μL，所需体积依次为100μL、80μL、60uL、40uL、20uL、0，加入去离子水补充至终体积为100μL，混匀后取10μL分别加入96孔板中，每个浓度设置三个重复孔。取待测蛋白样品2μL，加入去离子水58μL，充分混匀。取10μL加入96孔板中，每个蛋白样品设置三个重复孔。加入200μL考马斯亮蓝应用液，贴膜后置于37℃培养箱孵育15min。将96孔板放入酶标仪，测得各浓度蛋白标准品及待测蛋白样品在595nm波长下的OD值。以蛋白标品的浓度为横坐标，测得的OD值为纵坐标，绘制标准曲线。根据标准曲线和待测蛋白样品的OD值计算样品总蛋白浓度。
②蛋白变性：根据所测得的蛋白样品浓度，分别加入适量的RIPA裂解液以调整蛋白样品浓度为2.5μg/μL，并按4体积的蛋白加入1体积的5×Loading buffer。涡旋混匀后瞬离，在金属浴中100℃变性10min，-80℃冰箱保存。
③电泳：清洁烘干玻璃板后，将长板置于外侧，短板置于内侧，确保底面平齐，用楔子固定并封闭玻璃板底部，检查两面夹紧后开始灌胶。配制含有8％丙烯酰胺的分离胶，充分混匀后，灌入玻璃板至指定位置，使用异丙醇液封以促进分离胶聚合。室温静置40min，使分离胶充分凝固。弃除异丙醇并用去离子水清洗后，将混合均匀的4％丙烯酰胺的浓缩胶灌入玻璃板，去除边缘气泡后小心插入梳子，用夹子固定，室温静置40min。待浓缩胶充分凝固。组装好电泳设备，倒入电泳缓冲液，垂直向上拔出梳子，每孔蛋白样品上样10μL，蛋白Marker上样5μL。连接电源后，设置电压为60V，30min后更改电压为95V，继续电泳1.5h，待蓝紫色条带电泳出底端可终止电泳。
④转膜：将配制的电转缓冲液置于4℃冰箱预冷。将待用的海绵、滤纸浸泡于电转缓冲液中备用。裁剪一张适当大小的PVDF膜浸泡于甲醇1min，使其活化。电泳完毕后，切好胶置于电转液中浸泡5min。按从正极到负极依次是海绵、3张滤纸、PVDF膜、凝胶、3张滤纸、海绵，制备“三明治胶”，应保持各层湿润且无气泡。将对应的正负极插入转膜槽中，加入足量的电转缓冲液，连接电源，设置电压为100V，转膜时间约为1.5h。
⑤免疫反应：将转膜完毕的PVDF膜做好标记后，浸泡在5％脱脂奶粉中，在摇床室温封闭2h。一抗孵育：用TBST洗涤PVDF膜三次，每次10min。将一抗用TBST溶液稀释至1：500，内参β-ACTIN稀释至1：1000。将PVDF膜置于抗体液中孵育1h后，转入4℃冰箱过夜。二抗孵育：用TBST在摇床上洗涤PVDF膜三次，每次10min。用TBST将二抗稀释至1:5000。将PVDF膜置于抗体液中室温孵育2h。用TBST洗涤三次，每次10min。
⑥化学发光显影：在避光条件下，吸取ECL发光液A液和B液各1mL并混合均匀，将PVDF膜浸泡在发光混合液中，反应1～2min，然后将PVDF膜移至荧光图像分析系统的平板上，再放入荧光图像分析系统显影区。待出现清晰的蛋白条带后可终止显影，保存条带图像。
⑦凝胶成像分析：用ImageJ软件对目的条带和内参条带进行定量分析，蛋白表达水平为目的条带定量结果/内参条带定量结果。
结果如图2所示，构建稳定转染实验所用的吉非替尼耐药株HCC827中，sh-KIAA1429组的KIAA1429基因和蛋白的表达水平比对照组sh-NC的表达水平低，表明稳转KIAA1429低表达的吉非替尼耐药特征的非小细胞肺腺癌HCC827细胞株构建成功。
实施例3吉非替尼对稳转KIAA1429低表达的耐药株HCC827细胞活性的影响。
S1.同实施例1，找出稳转KIAA1429低表达的耐药株HCC827的吉非替尼的IC50(8.91μM)。以该吉非替尼药物浓度为后续研究使用浓度(图3中A)。
S2.使用取对数生长期的sh-NC和sh-KIAA1429组细胞接种于96孔板内，设置sh-NC对照组，sh-KIAA1429对照组，sh-NC吉非替尼处理组，sh-KIAA1429吉非替尼处理组，细胞密度为3×105个/mL，每孔加入100μL细胞悬液。经过夜贴壁，将吉非替尼在DMSO中溶解，配制为9.00μM浓度进行染毒，染毒24小时后，弃上清，100μL PBS清洗细胞，加入100μL MTS应用液(每5份体积完全培养基加入1份体积MTS)，继续培养2小时。最后用酶标仪测定450nm处各孔吸光值(absorbance，A)，计算出细胞活力。计算公式为：细胞活力(％)＝[A(处理组)－A(培养基组)]/[A(阴性对照组)－A(培养基组)]×100％，得出受试物对各细胞活性的抑制作用。
结果如图3所示，与sh-NC对照组的吉非替尼用药效果相比，吉非替尼对sh-KIAA1429组的细胞活性抑制更为明显(图3中B)，表明通过靶向下调吉非替尼耐药特征的非小细胞肺腺癌细胞株HCC827中的KIAA1429，可以提高HCC827耐药株对吉非替尼的治疗敏感性。
实施例4 KIAA1429主要通过激活JNK通路发挥耐药作用
同实施例3的分组方式，将细胞接种于6孔板，同实施例2步骤S5收集蛋白进行Western blot实验。检测JNK、P38、ERK、和MEK四个通路的关键蛋白。
结果如图4所示，仅发现JNK通路上的关键蛋白(p-JNK、JNK)在KIAA1429敲减后，吉非替尼处理可显著抑制上述蛋白的表达，提示m6A甲基化转移酶KIAA1429通过阻断吉非替尼对JNK通路的抑制，导致非小细胞肺腺癌的耐药。而本发明通过降低m6A甲基化转移酶KIAA1429的表达水平，可以恢复吉非替尼通过JNK通路发挥抑制肿瘤细胞活性的作用。表明可通过降低肿瘤细胞中KIAA1429的表达水平，增强吉非替尼抗非小细胞肺癌的敏感性和功效，最终改善或治疗对吉非替尼耐药的非小细胞肺腺癌。

Claims (3)

1.KIAA1429的表达抑制剂在制备吉非替尼抗吉非替尼耐药的非小细胞肺腺癌耐药细胞株HCC827/Gefitinib增敏剂中的应用；所述KIAA1429的表达抑制剂为靶向沉默KIAA1429或下调KIAA1429表达量的试剂；所述试剂为KIAA1429的shRNA，所述shRNA的序列为CACCGGAGTTGGTTACCTTGCTTCTTTCAAGAGAAGAAGCAAGGTAACCAACTCCTTTTTTG；GATCCAAAAAAGGAGTTGGTTACCTTGCTTCTTCTCTTGAAAGAAGCAAGGTAACCAACTCC。
2.KIAA1429的表达抑制剂在制备用于增强吉非替尼抗吉非替尼耐药的非小细胞肺腺癌耐药细胞株HCC827/Gefitinib功效的药物中的应用；所述KIAA1429的表达抑制剂为靶向沉默KIAA1429或下调KIAA1429表达量的试剂；所述试剂为KIAA1429的shRNA，所述shRNA的序列为CACCGGAGTTGGTTACCTTGCTTCTTTCAAGAGAAGAAGCAAGGTAACCAACTCCTTTTTTG；GATCCAAAAAAGGAGTTGGTTACCTTGCTTCTTCTCTTGAAAGAAGCAAGGTAACCAACTCC。
3.KIAA1429的表达抑制剂与吉非替尼联用在制备治疗由非小细胞肺腺癌耐药细胞株HCC827/Gefitinib引起的吉非替尼耐药的非小细胞肺腺癌的药物中的应用；所述KIAA1429的表达抑制剂为靶向沉默KIAA1429或下调KIAA1429表达量的试剂；所述试剂为KIAA1429的shRNA，所述shRNA的序列为CACCGGAGTTGGTTACCTTGCTTCTTTCAAGAGAAGAAGCAAGGTAACCAACTCCTTTTTTG；GATCCAAAAAAGGAGTTGGTTACCTTGCTTCTTCTCTTGAAAGAAGCAAGGTAACCAACTCC。
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