CN114699424A - 脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多糖的新应用 - Google Patents

脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多糖的新应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多糖的新应用。主要涉及脆弱拟杆菌的荚膜多糖提取物在制备抗焦虑症的药物中的应用，所述脆弱拟杆菌的保藏编号为CGMCC NO.10685，所述荚膜多糖提取物为荚膜多糖A的提取物。与传统技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明的发明人发现，脆弱拟杆菌ZY312的荚膜多糖A提取物对焦虑症显效，并且该效果通过在大鼠模型上进行高架十字迷宫行为学测定和旷场实验得以验证。

Description

脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多 糖的新应用
技术领域
本发明涉及益生菌技术领域，特别涉及一种脆弱拟杆菌的两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多糖的新应用。
背景技术
焦虑是人类在与环境作斗争及生存适应的过程中发展起来的基本人类情绪，焦虑并不意味着都是有临床意义的病理情绪，只有具备某些病理性特征同时对正常的社会功能造成影响时，才成为病理性焦虑，即焦虑障碍。DSM-5将焦虑障碍定义为“共享过度害怕和焦虑，以及有相关行为紊乱的特征的障碍”。各种焦虑障碍可通过导致害怕、焦虑或回避行为以及伴随的认知观念的问题或情境类型有所不同进行区分，包括分离焦虑障碍、选择性缄默、特定恐怖症、社交恐惧症、惊恐障碍、广场恐怖症、广泛性焦虑障碍、物质或其他躯体疾病所致的焦虑障碍和其他特定或不特定的焦虑障碍。焦虑障碍的主要表现为：无明确客观对象的紧张担心，坐立不安，躯体可能出现植物神经功能失调症状，如心悸、手抖、出汗、尿频等，及特征性的惊恐发作。
目前，关于焦虑症的发病机制仍不明确，认知心理学派认为，心理因素是疾病产生的原因；行为主义心理学派认为，焦虑症通过防患学习产生；神经科学家认为，焦虑症的发生是生理病变(神经递质分泌异常、神经内分泌紊乱)的结果。目前常用的焦虑症治疗方法是药物联合心理治疗，抗焦虑药物包括三环类抗抑郁药、选择性5-HT再摄取抑制剂(SSRIS)、选择性5-HT去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SSNRI)、苯二氮卓类药物、单胺氧化酶抑制剂、、5-HT1A受体拮抗剂丁螺环酮、抗组胺药等，其中SSRIS和SSNRI是抗焦虑的一线药物，5-HT1A受体拮抗剂丁螺环酮对广泛性焦虑效果明显。这些抗焦虑药物基本上会引起患者不同程度的胃肠道不适、头痛、头晕、嗜睡、乏力等不良反应；且相当一部分患者的治疗效果并不理想。因此，开发新的的抗焦虑药物显得尤为重要。
发明内容
基于上述技术问题，本发明的主要目的是提供一种脆弱拟杆菌的两性离子荚膜多糖及其改性多糖的新应用，主要是将脆弱拟杆菌ZY-312的两性离子荚膜多糖及其改性多糖用于制备抗焦虑的药物。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
脆弱拟杆菌的两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多糖在制备抗焦虑的药物中的应用，所述脆弱拟杆菌的保藏编号为CGMCC No.10685，所述两性离子荚膜多糖包含荚膜多糖A。
在其中一些实施例中，所述改性的两性离子荚膜多糖为硫酸化两性离子荚膜多糖、磷酸化两性离子荚膜多糖中的一种或多种。
在其中一些实施例中，所述荚膜多糖A的重均分子量为70-90KD。例如为70KD、71KD、72KD、73KD、74KD、75KD、76KD、77KD、78KD、79KD、80KD、81KD、82KD、83KD、84KD、85KD、86KD、87KD、88KD、89KD、90KD。
在其中一些实施例中，所述两性离子荚膜多糖含有荚膜多糖A，所述荚膜多糖A的重均分子量为80-90KD，Mw分布于70-100KD的部分占总量的70-80％，重均分子量/数均分子量(Mw/Mn)的比值为1.0-1.3。
在其中一些实施例中，所述两性离子荚膜多糖中所述荚膜多糖A的含量大于95wt％。例如为95wt％、95.5wt％、96wt％、96.5wt％、97wt％、97.5wt％、98wt％、98.5wt％、99wt％、99.5wt％、100wt％。
在其中一些实施例中，所述荚膜多糖A的重均分子量为80-85KD。
在其中一些实施例中，所述两性离子荚膜多糖的制备方法包括以下步骤：
(1)将发酵培养后的脆弱拟杆菌菌液离心收集沉淀物，即得脆弱拟杆菌菌泥；取菌泥，加入菌泥质量3-10倍的纯化水使菌体重悬，用酸溶液调节其pH至2.0-4.5，50-120℃提取0.5-～3.0h，冷却至室温，常温离心，取上清，得到粗糖溶液；
(2)粗糖溶液经超滤膜超滤浓缩、除小分子杂质，至电导率稳定，收集回流液；
(3)回流液中加入等体积40mmol/L Tris-HCl转盐；离子交换柱层析，梯度洗脱，分段收集，SEC-HPLC跟踪监测，合并206nm吸收峰为单一、对称峰的组分，超滤膜超滤，加入纯化水反复超滤，至电导率稳定，收集回流液，冻干，得到脆弱拟杆菌提取物。
在其中一些实施例中，步骤(1)中，所述离心为11000-13000g离心8-12min。
在其中一些实施例中，步骤(1)中，所述酸溶液可以是有机酸、无机酸和酸性缓冲液中的一种或多种。其中，无机酸可以是盐酸、硫酸、磷酸等；有机酸可以是乙酸、柠檬酸等。
在其中一些实施例中，步骤(2)中，所述超滤膜的切割分子量可以为100、50、30、10、5、3KD或者任意两个分子量值之间的范围。
在其中一些实施例中，步骤(3)中，所述离子交换柱优选为DEAE Sepharose FastFlow的16mm×200mm，层析时的流速15-25mL/min，pH5.0-9.0含0.2mol/L NaCl20mmol/LTris-HCl梯度洗脱25个柱体积，分段收集，100mL/瓶(组分)；所述超滤膜为10KD。
在其中一些实施例中，所述硫酸化两性离子荚膜多糖的制备方法包括以下步骤：
1)取所述脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖，加入溶剂，制备成悬浮液；
2)在所述悬浮液中加入硫酸化试剂进行硫酸酯化反应，冷却后调节pH至中性，离心，收集上清液，将所述上清液用流水透析，再用乙醇水溶液进行沉淀，离心，收集沉淀物，将所述沉淀物冷冻干燥，得冻干粉末；所述硫酸化试剂由氯磺酸与无水吡啶制备得到；
3)将所述冻干粉末进行纯化，得到所述硫酸化脆弱拟杆菌两性荚膜多糖。
在其中一些实施例中，步骤1)中，所述溶剂为二甲基亚砜；步骤1)所述悬浮液中，脆弱拟杆菌荚膜多糖的浓度为10-50mg/mL。
在其中一些实施例中，步骤2)中，所述硫酸酯化试剂的制备方法包括以下步骤：在-15至-10℃以及剧烈搅拌的条件下，向预冷至0-4℃的无水吡啶中逐滴加入氯磺酸，所述氯磺酸与所述无水吡啶的体积比1:5-10，即得硫酸酯化试剂。
在其中一些实施例中，步骤2)中，所述悬浮液和所述酯化试剂的体积比为1:2-6；
在其中一些实施例中，步骤2)中，所述硫酸酯化反应的条件为：60-90℃持续搅拌反应2-4h；
在其中一些实施例中，步骤2)中所述流水透析的条件为：用3-10KD的透析膜流水透析24-36小时；所述乙醇水溶液的体积浓度为80-90％，所述用乙醇水溶液进行沉淀的时间为4-12小时。
在其中一些实施例中，步骤3)所述的纯化包括以下步骤：将所述冻干粉末溶于pH为7.5-8.5的缓冲液中，用DEAE Sepharose FastFlow的阴离子交换填料进行离子交换层析，所用洗脱剂为0.18-0.22M的NaCl水溶液，收集洗脱液，超滤除盐，冻干，即得所述硫酸化脆弱拟杆菌荚膜多糖。
在其中一些实施例，所述磷酸化两性离子荚膜多糖包括的制备方法包括以下步骤：
A)磷酸化试剂的制备：三聚磷酸钠和三偏磷酸钠混合，用水溶解，配置磷酸化试剂，磷酸化试剂的浓度为0.1-0.15g/mL；
B)在磷酸化试剂中加入冻干的脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖，溶解得溶液，溶液中的所述多糖浓度为0.01-0.02g/mL；
C)调节溶液的pH值为8.0-9.0，进行反应后，取出，冷却至室温；
D)往溶液中缓慢加入3-4倍95％的乙醇溶液，静置；离心，取沉淀，置于50±3℃的环境下2-3h，以去除残留的乙醇，冷冻干燥；往冷冻干燥后得到的多糖中加入超纯水，复溶，透析，冷冻干燥得到磷酸化两性离子荚膜多糖。
在其中一个实施例中，所述三聚磷酸钠和三偏磷酸钠的质量比为5-6:1。
在其中一个实施例中，所述反应的条件为：置于80-85℃环境下，反应5-6h。
在其中一个实施例中，步骤D)中，在50-60℃的环境下复溶，转移至截留分子量为10000-14000D的透析袋中透析48±2h，冷冻干燥得到磷酸化脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖。
在其中一些实施例中，所述药物包含所述荚膜多糖A和/或改性的两性离子荚膜多糖，和药学上可以接受的辅料。
在其中一些实施例中，所述辅料包含稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂和等渗或等张调节剂中的一种或者多种。
在其中一些实施例中，所述稀释剂选自淀粉类、糖类、纤维素类以及无机盐类中的至少一种；或/和，所述润湿剂选自水以及乙醇中的至少一种；或/和，所述黏合剂选自淀粉浆、糊精、糖、纤维素衍生物、明胶、聚维酮以及聚乙二醇中的至少一种；或/和，所述崩解剂选自干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、表面活性剂以及泡腾崩解剂中的至少一种；或/和，所述润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、十二烷基硫酸镁、微粉硅胶以及聚乙二醇中的至少一种；或/和，所述色香味调节剂选自色素、香料、甜味剂、胶浆剂以及矫臭剂中的至少一种；或/和，所述溶剂选自水、油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、二甲基亚砜、液体石蜡、脂肪油以及乙酸乙酯中的至少一种；或/和，所述增溶剂选自吐温类、卖泽类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、肥皂类、硫酸化物、以及磺酸化物中的至少一种；或/和，所述助溶剂选自有机酸及其盐类、酰胺及胺类化合物、无机盐、聚乙二醇、聚维酮以及甘油中的至少一种；或/和，所述乳化剂选自司盘类、吐温类、卖泽类、苄泽类、甘油脂肪酸酯、高级脂肪酸盐、硫酸化物、磺酸化物、阿拉伯胶、西黄耆胶、明胶、果胶、磷脂、琼脂、海藻酸钠、氢氧化物、二氧化硅以及皂土中的至少一种；或/和，所述助悬剂选自甘油、糖浆、阿拉伯胶、西黄耆胶、琼脂、海藻酸钠、纤维素衍生物、聚维酮、卡波普、聚乙烯醇以及触变胶中的至少一种；或/和，所述抗氧剂选自亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、抗坏血酸、没食子酸及其酯类中的至少一种；或/和，所述金属络合剂选自乙二胺四乙酸二钠以及多羧酸化合物中的一种；或/和，所述惰性气体选自氮气以及二氧化碳中的一种；或/和，所述防腐剂选自尼泊金类、有机酸及其盐、季铵类化合物、醋酸氯己定、醇类、酚类以及挥发油中的至少一种；或/和，所述局部止痛剂选自苯甲醇、三氯叔丁醇、利多卡因以及普鲁卡因中的至少一种；或/和，所述pH调节剂选择盐酸、硫酸、磷酸、枸橼酸、酒石酸、醋酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、乙二胺、葡甲胺、磷酸盐、醋酸盐以及枸橼酸盐中的至少一种；或/和，所述等渗或等张调节剂选自葡萄糖、氯化钠、枸橼酸钠、山梨醇以及木糖醇中的至少一种。
在其中一些实施例中，所述药物的剂型为片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、胶囊剂、注射剂、灌肠剂、口服液或管饲制剂。
在其中一些实施例中，所述药物的给药途径为口服给药、灌肠给药或注射给药。
在其中一些实施例中，所述药物还包括其他治疗焦虑症的药物，所述两性离子荚膜多糖和/或改性的两性离子荚膜多糖与所述其他治疗焦虑症的药物联合使用。
在其中一些实施例中，所述其他治疗焦虑症的药物包含帕罗西汀、地西泮、艾司西酞普兰和文拉法新中的一种或者多种。
与传统技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明的发明人发现，脆弱拟杆菌ZY-312的两性离子荚膜多糖及其改性多糖对焦虑症显效，该效果通过在大鼠模型上进行高架十字迷宫行为学测定和旷场实验得以验证，并且以脆弱拟杆菌ZY-312的两性离子荚膜多糖或其改性多糖制备抗焦虑症的药物，不会产生毒副作用。
附图说明
图1为本发明实施例1的荚膜多糖A核磁共振波谱仪分析1H谱图；
图2为本发明实施例1的荚膜多糖A核磁共振波谱仪分析13C谱图；
图3为本发明实施例1的荚膜多糖A核磁共振波谱仪分析COSY谱图；
图4为本发明实施例1的荚膜多糖A核磁共振波谱仪分析HSQC谱图；
图5为本发明实施例1的荚膜多糖A核磁共振波谱仪分析HMBC谱图；
图6为本发明实施例1制备得到的脆弱拟杆菌荚膜多糖A的结构单元的化学结构式。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更详细的描述。但是，应当理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式或实施例。相反地，提供这些实施方式或实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式或实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”的可选范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。
本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
本发明中，涉及到数值区间，如无特别说明，则包括数值区间的两个端点。
本发明中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相-固相混合均指质量百分比，对于液相-液相混合指体积百分比。
本发明中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。
本发明中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内进行处理。所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。
文献(梦丹丽、郭先文等.肠道菌群与焦虑症、抑郁症关系的研究进展[J].临床消化病杂质，2018，30(2)：127-130.)表明神经系统、免疫系统、下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)等共同构成了神经-免疫-内分泌网络，肠道菌群和大脑通过该网络相互作用，而这种相关作用对抑郁症、焦虑症的发生有着重要的影响；例如益生菌双歧杆菌的使用可能通过提高肠道及血循环中5-HT的水平，从而调节中枢神经系统的发育及情绪反应，使焦虑、抑郁的症状有所缓解；另外益生元可调节肠道紊乱以缓解焦虑症状。专利CN110066753B说明了植物乳杆菌DP189可提高抑郁大鼠的学习和记忆能力，提高抑郁大鼠脑源神经营养因子的水平，减少抑郁大鼠海马神经元的损伤和神经元细胞的凋亡，改善抑郁大鼠的肠道菌群紊乱，从而对抑郁/焦虑、自闭症、炎症性肠炎具有良好的预防和治疗作用。专利CN102065710B说明了长双歧杆菌ATCC BAA-999可用于增强海马BDNF表达、用于治疗或预防焦虑和相关疾病。专利CN102202527B说明了益生菌罗伊乳杆菌DSM 17938和长双歧杆菌NCC3001(即ATCCBAA-999)可以用于制备降低由抑郁、焦虑或压力所诱导的睡眠紊乱的人或动物用药物。脆弱拟杆菌ZY-312是肠道里的益生菌，传统上用于促进机体免疫系统发挥作用、缓解炎症等疾病。然而基于机体的复杂性，以及益生菌及其提取物的功效不可预测性，脆弱拟杆菌ZY-312，特别是其两性离子荚膜多糖，是否对焦虑症有效，本领域技术人员难以预测。本发明的发明人经过长期的研究，发现脆弱拟杆菌ZY-312的荚膜多糖A(特别是70KD-90KD)，对焦虑症有效。
本发明提供脆弱拟杆菌的两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多糖在制备抗焦虑的药物中的应用，所述脆弱拟杆菌的保藏编号为CGMCC NO.10685，所述两性离子荚膜多糖包含荚膜多糖A。
本发明所用的脆弱拟杆菌为脆弱拟杆菌ZY-312(bacteroides fragilis ZY-312)，于2015年4月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，其保藏编号为CGMCC No.10685，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株是一株非产肠毒脆弱拟杆菌。
本发明的发明人发现，脆弱拟杆菌ZY-312的两性离子荚膜多糖及其改性多糖对焦虑症显效，并且该效果通过在大鼠模型上进行高架十字迷宫行为学测定和旷场实验得以验证。
在其中一些实施例中，所述改性两性离子荚膜多糖为硫酸化两性离子荚膜多糖或/或磷酸化两性离子荚膜多糖。
在其中一些实施例中，所述两性离子荚膜多糖含有荚膜多糖A，所述荚膜多糖A的重均分子量为80-90kD，Mw分布于70-100KD的部分占总量的70-80％，重均分子量/数均分子量(Mw/Mn)的比值为1.0-1.3。
在其中一些实施例中，其中，所述荚膜多糖A的含量大于95wt％。
本发明上述应用中，脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖的制备，可以，包括但不限于，包括以下步骤：
(1)将发酵培养后的脆弱拟杆菌菌液离心收集沉淀物，即得脆弱拟杆菌菌泥；取菌泥，加入菌泥质量3-10倍的纯化水使菌体重悬，用酸溶液调节其pH至2.0-4.5，50-120℃提取0.5-3.0h，冷却至室温，常温离心，取上清，得到粗糖溶液；
(2)粗糖溶液经超滤膜超滤浓缩、除小分子杂质，至电导率稳定，收集回流液；
(3)回流液中加入等体积40mmol/L Tris-HCl转盐；离子交换柱层析，梯度洗脱，分段收集，SEC-HPLC跟踪监测，合并206nm吸收峰为单一、对称峰的组分，超滤膜超滤，加入纯化水反复超滤，至电导率稳定，收集回流液，冻干，得到脆弱拟杆菌提取物。
在其中一些实施例中，步骤(1)中，所述离心为11000-13000g离心8-12min。
在其中一些实施例中，步骤(1)中，所述酸溶液可以是有机酸、无机酸和酸性缓冲液中的一种或多种。其中，无机酸可以是盐酸、硫酸、磷酸等；有机酸可以是乙酸、柠檬酸等。
在其中一些实施例中，步骤(2)中所述超滤膜的切割分子量可以为100、50、30、10、5、3KD或者任意两个分子量值之间的范围。
在其中一些实施例中，步骤(3)中所述离子交换柱优选为DEAE Sepharose FastFlow的16mm×200mm，层析时的流速15-25mL/min，pH5.0-9.0含0.2mol/L NaCl 20mmol/LTris-HCl梯度洗脱25个柱体积，分段收集，100mL/瓶(组分)；所述超滤膜为10KD。
本发明上述应用中，硫酸化脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖的制备，可以，包括但不限于，包括以下步骤：
1)取所述脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖，加入溶剂，制备成悬浮液；
2)在所述悬浮液中加入硫酸化试剂进行硫酸酯化反应，冷却后调节pH至中性，离心，收集上清液，将所述上清液用流水透析，再用乙醇水溶液进行沉淀，离心，收集沉淀物，将所述沉淀物冷冻干燥，得冻干粉末；所述硫酸化试剂由氯磺酸与无水吡啶制备得到；
3)将所述冻干粉末进行纯化，得到所述硫酸化脆弱拟杆菌两性荚膜多糖。
在其中一些实施例中，步骤1)中，所述溶剂为二甲基亚砜；步骤1)所述悬浮液中，脆弱拟杆菌荚膜多糖的浓度为10～50mg/mL。
在其中一些实施例中，步骤2)中，所述硫酸酯化试剂的制备方法包括以下步骤：在-15至-10℃以及剧烈搅拌的条件下，向预冷至0-4℃的无水吡啶中逐滴加入氯磺酸，所述氯磺酸与所述无水吡啶的体积比1:5-10，即得硫酸酯化试剂。
在其中一些实施例中，步骤2)中，所述悬浮液和所述酯化试剂的体积比为1:2-6；
在其中一些实施例中，步骤2)中，所述硫酸酯化反应的条件为：60-90℃持续搅拌反应2～4h；
在其中一些实施例中，步骤2)中所述流水透析的条件为：用3-10KD的透析膜流水透析24-36小时；所述乙醇水溶液的体积浓度为80-90％，所述用乙醇水溶液进行沉淀的时间为4-12小时。
在其中一些实施例中，步骤3)所述的纯化包括以下步骤：将所述冻干粉末溶于pH为7.5-8.5的缓冲液中，用DEAE Sepharose FastFlow的阴离子交换填料进行离子交换层析，所用洗脱剂为0.18-0.22M的NaCl水溶液，收集洗脱液，超滤除盐，冻干，即得所述硫酸化脆弱拟杆菌荚膜多糖。
本发明上述应用中，磷酸化脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖的制备，可以，包括但不限于，包括以下步骤：
A)磷酸化试剂的制备：三聚磷酸钠和三偏磷酸钠混合，用水溶解，配置磷酸化试剂，磷酸化试剂的浓度为0.1-0.15g/mL；
B)在磷酸化试剂中加入冻干的脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖，溶解得溶液，溶液中的所述多糖浓度为0.01-0.02g/mL；
C)调节溶液的pH值为8.0-9.0，进行反应后，取出，冷却至室温；
D)往溶液中缓慢加入3-4倍95％的乙醇溶液，静置；离心，取沉淀，置于50±3℃的环境下2-3h，以去除残留的乙醇，冷冻干燥；往冷冻干燥后得到的多糖中加入超纯水，复溶，透析，冷冻干燥得到磷酸化两性离子荚膜多糖。
在其中一个实施例中，所述三聚磷酸钠和三偏磷酸钠的质量比为5-6:1。
在其中一个实施例中，所述反应的条件为：置于80～85℃环境下，反应5-6h。
在其中一个实施例中，步骤D)中，在50-60℃的环境下复溶，转移至截留分子量为10000-14000D的透析袋中透析48±2h，冷冻干燥得到磷酸化脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖。
在其中一个示例中，所述药物包含所述荚膜多糖A和/或改性的两性离子荚膜多糖，和药学上可以接受的辅料。
可以理解得是，所述辅料例如为稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂、等渗或等张调节剂等，可以含一种，也可以含两种或者两种以上。所述的辅料可以选自，包括但不限于，如下：稀释剂为淀粉类、糖类、纤维素类以及无机盐类；所述润湿剂选自水以及乙醇中的至少一种；所述黏合剂选自淀粉浆、糊精、糖、纤维素衍生物、明胶、聚维酮以及聚乙二醇中的至少一种；所述崩解剂选自干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、表面活性剂以及泡腾崩解剂中的至少一种；所述润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、十二烷基硫酸镁、微粉硅胶以及聚乙二醇中的至少一种；所述色香味调节剂选自色素、香料、甜味剂、胶浆剂以及矫臭剂中的至少一种；所述溶剂选自水、油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、二甲基亚砜、液体石蜡、脂肪油以及乙酸乙酯中的至少一种；所述增溶剂选自吐温类、卖泽类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、肥皂类、硫酸化物、以及磺酸化物中的至少一种；所述助溶剂选自有机酸及其盐类、酰胺及胺类化合物、无机盐、聚乙二醇、聚维酮以及甘油中的至少一种；所述乳化剂选自司盘类、吐温类、卖泽类、苄泽类、甘油脂肪酸酯、高级脂肪酸盐、硫酸化物、磺酸化物、阿拉伯胶、西黄耆胶、明胶、果胶、磷脂、琼脂、海藻酸钠、氢氧化物、二氧化硅以及皂土中的至少一种；所述助悬剂选自甘油、糖浆、阿拉伯胶、西黄耆胶、琼脂、海藻酸钠、纤维素衍生物、聚维酮、卡波普、聚乙烯醇以及触变胶中的至少一种；所述抗氧剂选自亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、抗坏血酸、没食子酸及其酯类中的至少一种；所述金属络合剂选自乙二胺四乙酸二钠以及多羧酸化合物中的一种；所述惰性气体选自氮气以及二氧化碳中的一种；所述防腐剂选自尼泊金类、有机酸及其盐、季铵类化合物、醋酸氯己定、醇类、酚类以及挥发油中的至少一种；所述局部止痛剂选自苯甲醇、三氯叔丁醇、利多卡因以及普鲁卡因中的至少一种；所述pH调节剂选择盐酸、硫酸、磷酸、枸橼酸、酒石酸、醋酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、乙二胺、葡甲胺、磷酸盐、醋酸盐以及枸橼酸盐中的至少一种；所述等渗或等张调节剂选自葡萄糖、氯化钠、枸橼酸钠、山梨醇以及木糖醇中的至少一种。
可以理解的是，所述药物可以根据临床需求制备成合适的剂型，例如片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、胶囊剂、注射剂、口服液、管饲制剂等。
可以理解的是，所述药物可以根据临床需求通过合适的给药途径进行给药，例如注射给药、口服给药、灌肠给药等。
在其中一个示例中，所述药物还包含其他治疗焦虑症的药物，所述两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多糖与所述其他治疗焦虑症的药物联合使用；所述其他治疗焦虑症的药物包含帕罗西汀、地西泮、艾司西酞普兰和文拉法新中的一种或者多种。
实施例1、脆弱拟杆菌荚膜多糖A的制备
(1)将脆弱拟杆菌ZY-312菌种划线接种于血平皿，厌氧培养48h，选取单个菌落接种于植物源蛋白胨液体培养基中进行发酵培养8小时(温度为37℃)，所得菌液离心沉淀，转速3000r/min，离心15min，去上清，收集沉淀物，即得脆弱拟杆菌ZY-312菌泥。
(2)取步骤(1)中所制菌泥50g，加入300g纯化水使菌体重悬，用1mol/L盐酸溶液调节其pH至3.5，100℃提取1.5h，冷却至室温，12000g常温离心10min，取上清，得到粗糖溶液。
(3)粗糖溶液经10KD超滤膜超滤浓缩、除小分子杂质，至电导率稳定，收集回流液。
(4)回流液中加入等体积40mmol/L Tris-HCl(pH8.5)转盐；DEAE Sepharose FastFlow离子交换柱层析(16mm×200mm)，流速20mL/min，20mmol/L Tris-HCl(pH8.5，含0.2mol/L NaCl)梯度洗脱25个柱体积，分段收集，100mL/瓶(组分)，SEC-HPLC跟踪监测，合并206nm吸收峰为单一、对称峰的组分，10KD超滤膜超滤，加入纯化水反复超滤，至电导率稳定，收集回流液，冻干，得到脆弱拟杆菌提取物。
(5)称量30mg步骤(4)所述的脆弱拟杆菌提取物，溶于0.5mL D2O，加入1μL丙酮(1H，2.22；13C，30.89)定标。采用500MHz Bruker核磁共振波谱仪分析1H、13C、COSY、HSQC、HMBC谱(参见图1至图5)，确证步骤(3)收集的脆弱拟杆菌提取物为荚膜多糖A，结合脂质含量低于0.02％，蛋白残留低于1％，核酸残留低于0.05％。通过GPC(凝胶渗透色谱)分析，制得的荚膜多糖A重均分子量为80-90kDa，Mw/Mn为1.0-1.3，化学结构参见图6。
制得的提取物称为PSA-ZY-312。
实施例2、硫酸化脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖的制备
(1)将实施例1制得的脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖(荚膜多糖A)用二甲基亚砜配制成浓度为10mg/mL的脆弱拟杆菌荚膜多糖悬浮液；
(2)在步骤(1)得到的悬浮液中加入硫酸化试剂(悬浮液与硫酸化试剂的体积比为1:2)，90℃持续搅拌反应2h，冷却，调节pH至中性，离心，收集上清液，将所述上清液用3KD的透析膜流水透析28h，再用体积浓度为80％的乙醇水溶液4℃沉淀12h，离心，收集沉淀，冷冻干燥，得冻干粉末；
(3)将步骤(2)获得的冻干粉末用20mM Tris-HCl缓冲液(pH8.0)溶解，经DEAESepharose FastFlow的阴离子交换填料进行离子交换层析纯化(洗脱液为0.2MNaCl的水溶液)，收集洗脱样品，超滤除盐，冻干，得到硫酸化脆弱拟杆菌荚膜多糖(S-TP2)，收率为65％。
步骤(2)中硫酸化试剂的制备方法为：在有持续搅拌和冷凝装置的三口烧瓶中，加入预冷后的无水吡啶(0-4℃)，-15℃至-10℃冰浴盐中剧烈搅拌10min，在无水吡啶中逐滴缓慢加入氯磺酸，氯磺酸与无水吡啶的体积比1:10，获得硫酸化试剂，-20℃保存备用。
实施例3、磷酸化脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖的制备
(1)磷酸化试剂的制备：三聚磷酸钠和三偏磷酸钠的质量比为5:1，超纯水溶解，磷酸化试剂的浓度为0.1g/mL；
(2)在磷酸化试剂中加入冻干的实施例1制备的脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖，溶解，使多糖浓度为0.02g/mL；
(3)调节溶液的pH值为9.0；溶液置于80℃环境下，反应5h，取出，冷却至室温；
(4)往溶液中缓慢加入4倍95％的乙醇溶液，静置24h；离心，取沉淀，置于50℃的环境下3h，以去除残留的乙醇，冷冻干燥；往冷冻干燥后得到的多糖中加入超纯水，55℃的环境下复溶，转移至截留分子量为10000D的透析袋中透析48h，冷冻干燥得到磷酸化脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖。
实施例4、脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖及其改性多糖在抗焦虑上的应用
一、试验设计和流程
(1)动物及分组
挑选健康SPF级SD雄性大鼠80只，体重210g-230g，实验室适应1周，自由饮水摄食。随机分组，分为正常对照组、模型组、地西泮组(1mg/kg)和脆弱拟杆菌荚膜多糖A(PSA-ZY-312，实施例1制得)低剂量组(G1，1mg/只)、中剂量组(G2，1.5mg/只)、高剂量组(G3，2mg/只)、硫酸化脆弱拟杆菌荚膜多糖组(实施例2制得，G4，1.5mg/只)、磷酸化脆弱拟杆菌荚膜多糖组(实施例3制得，G5，1.5mg/只)，每组10只。
(2)焦虑模型建立及给药
正常对照组自由饮水摄食；其他各组定时喂水训练7d，每天早上8:00-8:10，晚上20:00-20:10给水，其他时间撤去容器不给水；7d后，在这两个时间段给予1次不确定空瓶刺激，持续14d。在不确定空瓶刺激期间，各给药组每天分别给予相应剂量药物，模型组每天给予0.5mL生理盐水。
(3)大鼠外观状态观察及体质量测量
观察各组大鼠皮毛色泽，是否有攻击行为(尤其在不确定空瓶应激期间，是否出现撕咬瓶子或撞击笼子等行为)，自主活动行为。造模开始后，每周称量大鼠体重并记录。
(4)高架十字迷宫行为学测定
于第21d末次给药2h后，所有动物进行高架十字迷宫行为学测定。
高架十字迷宫具有一对开臂和一对闭臂，啮齿类动物由于嗜暗性会倾向于在闭臂中活动，但出于好奇心和探究性又会在开臂中活动，在面对新奇刺激时，动物同时产生探究的冲动与恐惧，这就造成了探究与回避的冲突行为，从而产生焦虑心理。而抗焦虑药物能明显增加进入开臂的次数与时间。
在高架十字迷宫模型(EPM)实验开始前，每只大鼠分别单独放入一个60cm×60cm×35cm塑料盒中，自由探究5min后迅速置于EPM的中央平台上，使其头部正对一个开放臂，释放后即开始记录5min内大鼠的活动情况。每只大鼠测试后，用70％乙醇溶液清洗高架十字迷宫，并清除异物。
(5)旷场实验
旷场(open field test)分析系统是观察研究实验动物神经精神变化、进入开阔环境后的各种行为，例如动物对新开阔环境的恐惧而主要在周边区域活动，在中央区域活动较少，但动物的探究特性又促使其产生在中央区域活动的动机，也可观察由此而产生的焦虑心理。
各组大鼠在第22d开展旷场实验。敞箱(80cm×80cm×40cm)内壁及底面均为黑色，用黄线将底面平均划分为25个正方形。将大鼠放置于自制敞箱底面的中央格内，观察大鼠水平运动和垂直运动，以穿越底面格为水平运动次数，以大鼠后肢直立次数为垂直运动。测定时间为5min，每只大鼠测试1次。每只大鼠测试后，用70％乙醇溶液清洗敞箱内壁及底面，并清除异物。
(6)观察指标
1)高架十字迷宫
进入开放臂的次数(OE)：进或出入到任一开放臂的次数，以大鼠身体进入70％分区为准；
进入开放臂的时间(OT)：进入开放臂的时间单位(s)；
进入封闭臂的次数(CE)：进或出入到任一封闭臂的次数，以大鼠身体进入70％分区为准；
进入封闭臂的时间(CT)：进入封闭臂的时间单位(s)；
开臂时间百分率：OT(％)＝OT/(OT+CT)×100％；
开臂次数百分率：OE(％)＝OE/(OE+CE)×100％。
2)旷场实验
水平运动计分标准：大鼠1/2身体进入另一方格计1分；
垂直运动计分标准：两前肢离地1cm以上，后肢性站立1次计1分。
(7)数据分析结果
实验数据采用SAS 9.4统计软件进行统计分析，数据均以均数±标准差表示，P＜0.05为有统计学意义。
二、试验结果
(1)大鼠外观及体质量
表1、各组大鼠体质量(mean±SD)
Figure BDA0003506542200000141
注：与模型组比较，*表示差异显著p<0.05；**表示差异极显著p<0.01。
造模开始前各组大鼠均毛发柔顺光亮，脾性温顺，自主活动较多。由表1可以看出，造模后正常对照组大鼠与造模开始前基本没有区别；模型组大鼠表现出焦躁不安，明显消瘦，有主动攻击性。各给药组减轻了大鼠的焦躁和攻击反应。
D0、D7，各组大鼠体质量没有明显差异；D14起，正常对照组大鼠体质量明显高于模型组大鼠，地西泮组大鼠体质量与正常对照组大鼠相近，G1-G5组大鼠体质量高于模型组；D21，正常对照组大鼠体质量明显高于模型组，地西泮组大鼠体质量与正常对照组相近，G1-G5组大鼠体质量有一定差别，但均明显高于模型组大鼠。上述结果说明模型符合焦虑症病人体重减轻的症状，造模成功，各给药组均有效上调了大鼠体重。
(2)高架十字迷宫行为学试验
表2、各组大鼠高架十字迷宫行为(mean±SD)
组别 (OE+CE)/次 OE/％ OT/％
正常对照组 10.59±1.58 27.53±4.46 29.53±5.13
模型组 11.28±1.49 15.74±3.21<sup>a</sup> 16.19±2.67<sup>a</sup>
地西泮组 10.67±1.36 28.42±2.89<sup>c</sup> 30.07±4.11<sup>c</sup>
低剂量G1 11.41±1.67 22.62±3.31<sup>b</sup> 23.83±4.56<sup>b</sup>
中剂量G2 11.58±2.00 27.82±2.43<sup>c</sup> 28.55±3.91<sup>c</sup>
高剂量G3 11.88±2.12 29.17±3.09<sup>c</sup> 30.44±4.25<sup>c</sup>
硫酸化G4 11.72±2.24 29.21±3.36<sup>c</sup> 30.32±4.44<sup>c</sup>
磷酸化G5 11.71±2.01 29.38±2.98<sup>c</sup> 30.53±4.17<sup>c</sup>
注：a：与正常对照组相比，P＜0.05；，b：与模型组相比，P＜0.05；c：与模型组相比，P＜0.01。
与正常对照组相比，模型组大鼠的OT％和OE％明显减少；与模型组相比，地西泮组、脆弱拟杆菌荚膜多糖A低、中、高剂量组及其改性多糖的OT％和OE％显著升高，G2-G5组上升最明显，幅度与地西泮相似。表明脆弱拟杆菌荚膜多糖A及其改性多糖在此焦虑模型上有明显的抗焦虑作用。这种抗焦虑作用与荚膜多糖A具有一定的剂量依赖性。
(3)旷场实验
表3、各组大鼠旷场中运动行为(mean±SD)
组别 水平运动 垂直运动
正常对照组 43.05±5.09 10.63±4.28
模型组 28.65±5.78<sup>a</sup> 5.79±2.83<sup>a</sup>
地西泮组 38.91±4.56<sup>b</sup> 8.28±3.24<sup>b</sup>
低剂量G1 33.85±6.01 7.61±2.47
中剂量G2 38.43±3.22<sup>b</sup> 7.83±4.32<sup>b</sup>
高剂量G3 39.87±5.13<sup>b</sup> 8.92±3.02<sup>b</sup>
硫酸化G4 39.92±4.66<sup>b</sup> 8.67±4.32<sup>b</sup>
磷酸化G5 38.85±4.29<sup>b</sup> 8.84±3.43<sup>b</sup>
注：a：与正常对照组相比，P＜0.01；b：与模型组相比，P＜0.05。
与正常对照组相比，模型组大鼠的水平运动评分和垂直运动评分明显降低；与模型组相比，地西泮组、脆弱拟杆菌荚膜多糖A及其改性多糖各组的水平运动评分和垂直运动评分显著升高，G2-G5组上升最明显，与地西泮上升幅度相当。这表明脆弱拟杆菌荚膜多糖A及其改性多糖在此焦虑模型上有明显的抗焦虑作用。这种抗焦虑作用与荚膜多糖A具有一定的剂量依赖性。
实施例5、脆弱拟杆菌荚膜多糖A联用地西泮在抗焦虑上的应用
一、试验设计和流程
(1)动物
SPF级ICR雄性小鼠50只，体重22-24g，实验室适应1周，自由饮水摄食。
(2)分组
挑选健康小鼠50只，随机分组，分为正常对照组、模型组、地西泮组(2.5mg/kg)、脆弱拟杆菌荚膜多糖A组(PSA-ZY-312，2mg/只)，地西泮联用荚膜多糖A组(2.5mg/kg，2mg/只)，每组10只。
(3)焦虑模型建立及给药
正常对照组自由饮水摄食；其他各组定时喂水训练7d，每天早上8:00-8:10，晚上20:00-20:10给水，其他时间撤去容器不给水；7d后，在这两个时间段给予1次或2次不确定空瓶刺激，共计饮水12次，空瓶16次，持续14d。在不确定空瓶刺激期间，各给药组每天给予相应剂量药物，模型组每天给予0.5mL生理盐水。
(4)小鼠外观状态观察及体质量测量
观察各组小鼠皮毛色泽，是否有攻击行为(尤其在不确定空瓶应激期间，是否出现撕咬瓶子或撞击笼子等行为)，自主活动行为。造模开始前及实验结束时，称量并记录小鼠体重。
(5)高架十字迷宫行为学测定
于第21d末次给药0.5h后，所有动物进行高架十字迷宫行为学测定。
高架十字迷宫具有一对开臂和一对闭臂，啮齿类动物由于嗜暗性会倾向于在闭臂中活动，但出于好奇心和探究性又会在开臂中活动，在面对新奇刺激时，动物同时产生探究的冲动与恐惧，这就造成了探究与回避的冲突行为，从而产生焦虑心理。而抗焦虑药物能明显增加进入开臂的次数与时间。
在高架十字迷宫模型(EPM)实验开始前，每只小鼠分别单独放入一个40cm×40cm×15cm塑料盒中，自由探究5min后迅速置于EPM的中央平台上，使其头部正对一个开放臂，释放后即开始记录5min内小鼠的活动情况。每只小鼠测试后，用70％乙醇溶液清洗高架十字迷宫，并清除异物。
(6)明暗箱实验
在明暗箱中，小鼠或大鼠喜欢在暗箱活动，但动物的探究习性促使其试图去探究明箱。然而，明箱的亮光刺激又抑制动物在明箱的探究活动。抗焦虑药物可解除这种抑制作用。
各组小鼠在第21d，高架十字迷宫实验完成0.5h后开展明暗箱实验。小鼠明暗箱为一个上面敞开的箱子(45cm×27cm×27cm)，内部分为明箱和暗箱，明箱占箱子的3/5，暗箱占2/5，有一个高出箱壁20cm的隔板分开，隔板的底部开一个7.5cm×7.5cm的方口。明箱内涂成白色，由一个60W的白纸灯泡照明，灯泡高出箱子17cm。暗箱内涂成黑色，上方17cm置一个不通电的红色灯泡。箱子底部划上边长9cm的方格。先在安静条件下让小鼠在一个35cm×10cm×5cm的笼中自由活动5min，然后将小鼠背对暗室放置于明箱中央，观察小鼠在明暗箱中的活动。测定时间为10min，每只小鼠测试1次。每只小鼠测试后，用70％乙醇溶液清洗明暗箱内壁及底面，并清除异物。
(7)观察指标
1)高架十字迷宫
进入开放臂的次数(OE)：进或出入到任一开放臂的次数，以小鼠身体进入70％分区为准；
进入开放臂的时间(OT)：进入开放臂的时间单位(s)；
进入封闭臂的次数(CE)：进或出入到任一封闭臂的次数，以小鼠身体进入70％分区为准；
进入封闭臂的时间(CT)：进入封闭臂的时间单位(s)；
开臂时间百分率：OT(％)＝OT/(OT+CT)×100％；
开臂次数百分率：OE(％)＝OE/(OE+CE)×100％。
2)明暗箱实验
明箱与暗箱之间的穿梭次数(TT)：穿过隔板的次数，以小鼠四足完全进入明箱或暗箱为准。
(8)数据分析结果
实验数据采用SAS 9.4统计软件进行统计分析，数据均以均数±标准差表示，P＜0.05为有统计学意义。
二、试验结果
(1)小鼠外观状态观察及体质量测量
表4、各组小鼠体重(mean±SD)
Figure BDA0003506542200000171
注：与模型组比较，*表示差异显著p<0.05；**表示差异极显著p<0.01。
造模开始前(D0)各组小鼠均毛发柔顺光亮，脾性温顺，自主活动较多。造模后正常对照组小鼠与造模开始前基本没有区别；模型组小鼠表现出焦躁不安，明显消瘦，有主动攻击性。各给药组减轻了小鼠的焦躁和攻击反应。
D0，各组小鼠体重无明显差异；D21，正常组小鼠体重显著高于模型组，各给药组小鼠体重均高于模型组，其中PSA与地西泮联合用药组小鼠体重更接近于正常组。上述结果说明模型符合焦虑症病人体重减轻的症状，造模成功；各给药组均有效上调了小鼠体重，荚膜多糖联用地西泮组效果更佳。
(2)高架十字迷宫实验
表5、各组大鼠高架十字迷宫行为(mean±SD)
组别 OE(％) OT(％)
正常对照组 57.59±11.17* 52.31±10.26*
模型组 38.56±11.79 42.13±5.64
PSA-ZY-312 45.39±7.64 46.22±7.27
地西泮 49.36±10.52 47.94±8.44
PSA+地西泮 56.78±8.17* 52.73±8.80*
注：与模型组比较，*表示差异显著p<0.05；**表示差异极显著p<0.01。
与正常对照组相比，模型组小鼠的OT％和OE％明显减少；与模型组相比，各给药组的OT％和OE％均有所上升，脆弱拟杆菌荚膜多糖A联用地西泮组具有显著性差异。这表明脆弱拟杆菌荚膜多糖A在此焦虑模型上有一定的抗焦虑作用，与地西泮联用时这种抗焦虑作用更佳。
(3)明暗箱实验
表6、各组小鼠穿箱次数(mean±SD)
组别 TT(次)
正常对照组 42.34±7.66**
模型组 16.75±4.35
PSA-ZY-312 28.31±6.43
地西泮 32.87±7.74*
PSA+地西泮 42.92±8.48*
注：与模型组比较，*表示差异显著p<0.05；**表示差异极显著p<0.01。
与正常对照组相比，模型组小鼠的穿箱次数极显著下降；与模型组相比，各给药组不同程度地上调了小鼠的穿箱次数，其中地西泮组及联用组具有显著性差异，联用组幅度最高。这表明脆弱拟杆菌荚膜多糖A在此焦虑模型上有一定的抗焦虑作用，与地西泮联用时这种抗焦虑作用更佳。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所述附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.脆弱拟杆菌的两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多糖在制备抗焦虑症的药物中的应用，所述脆弱拟杆菌的保藏编号为CGMCC NO.10685，所述两性离子荚膜多糖含荚膜多糖A。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述荚膜多糖A的重均分子量为70KD-90KD。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述荚膜多糖A的重均分子量为80-90KD，Mw分布于70-100KD的部分占总量的70-80％，重均分子量/数均分子量(Mw/Mn)的比值为1.0-1.3；优选的，所述荚膜多糖A的重均分子量为80-85KD。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述改性的两性离子荚膜多糖为磷酸化的两性离子荚膜多糖或/和硫酸化的两性离子荚膜多糖。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述两性离子荚膜多糖中所述荚膜多糖A的含量大于95wt％。
6.根据权利要求1至5任一项所述的应用，其特征在于，所述药物包含所述荚膜多糖A或/和改性的两性离子荚膜多糖，和药学上可以接受的辅料。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述辅料包含稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂和等渗或等张调节剂中的一种或者多种。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述稀释剂选自淀粉类、糖类、纤维素类以及无机盐类中的至少一种；或/和，所述润湿剂选自水以及乙醇中的至少一种；或/和，所述黏合剂选自淀粉浆、糊精、糖、纤维素衍生物、明胶、聚维酮以及聚乙二醇中的至少一种；或/和，所述崩解剂选自干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、表面活性剂以及泡腾崩解剂中的至少一种；或/和，所述润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、十二烷基硫酸镁、微粉硅胶以及聚乙二醇中的至少一种；或/和，所述色香味调节剂选自色素、香料、甜味剂、胶浆剂以及矫臭剂中的至少一种；或/和，所述溶剂选自水、油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、二甲基亚砜、液体石蜡、脂肪油以及乙酸乙酯中的至少一种；或/和，所述增溶剂选自吐温类、卖泽类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、肥皂类、硫酸化物、以及磺酸化物中的至少一种；或/和，所述助溶剂选自有机酸及其盐类、酰胺及胺类化合物、无机盐、聚乙二醇、聚维酮以及甘油中的至少一种；或/和，所述乳化剂选自司盘类、吐温类、卖泽类、苄泽类、甘油脂肪酸酯、高级脂肪酸盐、硫酸化物、磺酸化物、阿拉伯胶、西黄耆胶、明胶、果胶、磷脂、琼脂、海藻酸钠、氢氧化物、二氧化硅以及皂土中的至少一种；或/和，所述助悬剂选自甘油、糖浆、阿拉伯胶、西黄耆胶、琼脂、海藻酸钠、纤维素衍生物、聚维酮、卡波普、聚乙烯醇以及触变胶中的至少一种；或/和，所述抗氧剂选自亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、抗坏血酸、没食子酸及其酯类中的至少一种；或/和，所述金属络合剂选自乙二胺四乙酸二钠以及多羧酸化合物中的一种；或/和，所述惰性气体选自氮气以及二氧化碳中的一种；或/和，所述防腐剂选自尼泊金类、有机酸及其盐、季铵类化合物、醋酸氯己定、醇类、酚类以及挥发油中的至少一种；或/和，所述局部止痛剂选自苯甲醇、三氯叔丁醇、利多卡因以及普鲁卡因中的至少一种；或/和，所述pH调节剂选择盐酸、硫酸、磷酸、枸橼酸、酒石酸、醋酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、乙二胺、葡甲胺、磷酸盐、醋酸盐以及枸橼酸盐中的至少一种；或/和，所述等渗或等张调节剂选自葡萄糖、氯化钠、枸橼酸钠、山梨醇以及木糖醇中的至少一种。
9.根据权利要求1至5、7和8任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、胶囊剂、注射剂、灌肠剂、口服液或管饲制剂；或/和，所述药物的给药途径为口服给药、灌肠给药或注射给药。
10.根据权利要求1至5、7和8任一项所述的应用，其特征在于，所述药物还包含其他治疗焦虑症的药物，所述两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多糖与所述其他治疗焦虑症的药物联合使用；所述其他治疗焦虑症的药物包含帕罗西汀、地西泮、艾司西酞普兰和文拉法新中的一种或者多种。
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