CN114685268A

CN114685268A - 一种大麻二酚酸的提取方法及纯化方法

Info

Publication number: CN114685268A
Application number: CN202011643571.9A
Authority: CN
Inventors: 华茉莉; 徐云辉; 朱敏航; 周靖; 孙静; 罗嘉嘉
Original assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry; China State Institute of Pharmaceutical Industry
Current assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry; China State Institute of Pharmaceutical Industry
Priority date: 2020-12-31
Filing date: 2020-12-31
Publication date: 2022-07-01
Anticipated expiration: 2040-12-31
Also published as: CN114685268B

Abstract

本发明公开了一种大麻二酚酸的提取方法及纯化方法。本发明提供了提供一种大麻二酚酸的提取方法，其包括以下步骤：将大麻花叶经过二氧碳萃取，并除去二氧碳得大麻二酚酸粗品；所述二氧化碳萃取过程中，无需添加夹带剂；所述的萃取的温度为40～70℃；所述的萃取的压力为25～55Mpa。本发明还提供一种大麻二酚酸的纯化方法，其包括以下步骤：将大麻二酚酸粗品经过第一次液相分离，收集分离产品，分离产品再经过第二次液相分离得大麻二酚酸纯品；所述的第一次液相分离的色谱柱填料为硅胶微球或聚苯乙烯微球；所述的第二次液相分离的色谱柱填料为反相硅胶色谱填料。本发明无需添加夹带溶剂实现对大麻花叶一次提取大麻二酚酸收率大于90％。

Description

一种大麻二酚酸的提取方法及纯化方法

技术领域

本发明涉及一种分离纯化方法，具体涉及一种大麻二酚酸的提取方法及纯化方法。

背景技术

大麻Cannabis sativa L.为桑科大麻属一年生草本植物，在世界各地均有野生或栽培。

大麻中主要生物活性物质为大麻素类化学成分，迄今已从不同大麻植株中分离鉴定百余种大麻素类化合物，其中最广为人知的是四氢大麻酚(THC，精神活性成分，有致幻作用和成瘾性)和大麻二酚(CBD，具有广泛生物活性，公认无致幻作用和成瘾性)。以国际通行的分类方法，工业大麻一般是指其干燥植物花叶原料中精神活性物质THC含量小于0.3％，因而直接作为毒品使用的价值相对较小。近十余年，工业大麻逐步在部分国家和地区实现合法化，如我国云南省2005年、黑龙江省2017年先后通过地方立法，允许在公安系统监控下合法种植加工工业大麻；2018年12月20日，美国通过“Farm Bill”(农业改善法)联邦法律，将干重含THC≤0.3％的工业大麻及其制品从受控物质法(CSA)中移除，这为大麻的医药应用研究开发提供了可利用的植物资源。

工业大麻依据其含有的主要大麻素类成分分为不同表型，目前主要聚焦于含有CBD型植株作为医疗保健应用开发。大麻二酚酸(cannabidiolic acid，

简写CBDA)是大麻植物中CBD的生物合成前体，在不同生长环境

大麻二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)结构式下植物中不同程度含有CBDA，在有些植株中CBDA占比甚至远超CBD。虽然CBDA在一定条件下可转化为CBD，但已有研究显示CBDA具有不同于CBD的生物活性，如CBDA具有明确的环氧化酶抑制活性(抗炎镇痛的主要药理作用机制之一)，而CBD则无环氧化酶抑制活性，因此提取分离制备CBDA纯品十分必要，不仅可用于工业大麻植物的质量研究与分析，也方便作为非精神活性大麻素药物研究开发的先导化合物或原料。

目前国内尚未见大麻二酚酸的提取分离制备技术应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中大麻二酚酸的提取和纯化效率较低，本发明提供了一种大麻二酚酸的提取方法及纯化方法。

本发明提供一种大麻二酚酸的提取方法，其包括以下步骤：将大麻花叶经过二氧化碳萃取，并除去二氧化碳得大麻二酚酸粗品；所述二氧化碳萃取过程中，无需添加夹带剂；

所述的萃取的温度为40～70℃；

所述的萃取的压力为25～55Mpa。

本发明中，较佳地，所述的萃取的温度为40～55℃；例如40℃、50℃或55℃。

本发明中，较佳地，所述的萃取的压力为30～35Mpa；例如35Mpa或32Mpa。

本发明中，所述的萃取的萃取时间为本领域常规的萃取时间，所述的萃取的萃取时间一般与萃取规模相关，较佳地，(本发明的萃取时间为大麻花叶为1kg时的萃取时间)所述的萃取的萃取时间为90min～120min；例如90min或120min。

本发明中，所述的除去二氧化碳时的温度为40～55℃；例如40℃或45℃。

本发明中，所述的除去二氧化碳时的压力为5～15Mpa；例如7Mpa。

本发明中，较佳地，所述的大麻花叶为工业大麻花叶的粉碎物料(其中THC干重含量低于0.3％)。

本发明中，较佳地，在除去二氧化碳前通过一个吸附剂层。

本发明中，较佳地，所述的吸附剂层中的吸附剂可选择有机或无机吸附材料，更佳地，所述的吸附剂选自硅藻土、硅胶、活性炭、纤维素和无机纤维棉中的一种或多种。吸附剂层可较大程度去除与大麻素性质不同的植物成分，从而使初级提取物为透明油状液体，其中CBDA含量相较花叶原料可至少提高20倍，部分甚至可达30倍，而未经吸附层处理的初级提取物一般为灰绿色半固体，其中CBDA含量相较花叶原料含量一般提升约10倍。

本发明还提供一种大麻二酚酸的纯化方法，其包括以下步骤：将大麻二酚酸粗品经过第一次液相分离，收集分离产品，分离产品再经过第二次液相分离得大麻二酚酸纯品；

所述的第一次液相分离的色谱柱填料为硅胶微球或聚苯乙烯微球；

所述的第二次液相分离的色谱柱填料为反相硅胶色谱填料。

本发明中，所述的大麻二酚酸粗品可按照前述大麻二酚酸的分离方法分离得到。

本发明中，较佳地，所述的硅胶微球的粒径小于100μm，且不为0。

本发明中，较佳地，所述的硅胶微球为新型硅胶，更加地为所述的硅胶微球均一的单分散球型微粒。

本发明中，较佳地，所述的聚苯乙烯微球的粒径小于100μm，且不为0。

本发明中，较佳地，当所述的第一次液相分离的色谱柱填料为硅胶微球时，所述的第一次液相分离的流动相选自石油醚、乙醚、环己烷、乙酸乙酯和丙酮中的一种或多种，例如乙酸乙酯和石油醚；优选为乙酸乙酯和石油醚按照1～2倍柱体积的石油醚，4～5倍柱体积的体积比为1：99的乙酸乙酯和石油醚(乙酸乙酯：石油醚)，10～20倍柱体积的体积比为2：98的乙酸乙酯和石油醚，(乙酸乙酯：石油醚)进行梯度洗脱。

本发明中，较佳地，当所述的第一次液相分离的色谱柱填料为聚苯乙烯时，所述的第一次液相分离的流动相包括：丙酮、乙醇、甲醇或乙腈中的一种或多种的水溶液，例如含50～70％丙酮的水溶液等度洗脱。

本发明中，较佳地，所述的反相硅胶色谱填料的粒径不大于10μm，且不为0。

本发明中，较佳地，所述的第二次液相分离的流动相为丙酮、乙醇、甲醇或乙腈中的一种或多种的水溶液；更佳地，还包括质量分数为0.05-0.15％的甲酸或乙酸；优选为乙腈-0.1％甲酸水溶液(乙腈与甲酸水溶液的体积比为68:32或70：30)按该体积比等度洗脱。

本发明中，所述的大麻二酚酸粗品的HPLC纯度为70％-90％。

本发明中，所述的大麻二酚酸粗品为草绿色、红棕或褐色透明油状提取物。

本发明中，所述的草绿色浸膏CBDA含量为15％-20％。

本发明中，所述的红棕或褐色透明油状提取物CBDA含量为20-28％。

本发明中，所述的第一次液相分离得到的分离产品为CBDA含量大于90％，THC含量小于0.2％。

本发明，大麻二酚酸的纯化方法，其包括以下步骤：将大麻花叶在温度为40～70℃，压力为25～55Mpa经过二氧碳萃取，并除去二氧碳得大麻二酚酸粗品；将大麻二酚酸粗品经过第一次液相分离，收集分离产品，分离产品再经过第二次液相分离得大麻二酚酸纯品。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

除工业大麻花叶原料外，本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：

本发明通过超临界压力和温度的组合控制，在无需添加夹带溶剂实现对大麻花叶一次提取大麻二酚酸收率大于90％。所采用的反相硅胶填料和液相分离设备均有工业化成型产品，可实现从实验室制备到可工业化生产。

附图说明

图1为大麻二酚酸纯品液相色谱图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

工业大麻花叶原料由黑龙江省黑河市孙吴县科技局提供。

本发明使用的工业大麻花叶粉末中大麻二酚酸的含量为0.7～1％。

实施例1：

取工业大麻花叶粉末1kg(其中大麻二酚酸的含量约为0.8％)，装填至5升超临界萃取釜中，设置萃取釜的萃取温度为50℃，压力为35MPa，提取90min，逐步调节分离釜的温度和压力收集温度为45℃、压力为7MPa条件下的初级提取物，为灰绿色半固体37g，HPLC纯度75.1％，其中，大麻二酚酸的含量为20％，分离萃取率为92.5％。

实施例2

取工业大麻花叶粉末1kg(其中大麻二酚酸的含量约为0.8％)，装填至超临界萃取釜中，设置萃取仪的萃取釜温度为55℃，压力为32MPa，提取120min，逐步调节不同分离釜的温度和压力，收集温度为45℃、压力为7MPa条件下的初级提取物，为灰绿色半固体43g，HPLC纯度75.7％，其中，大麻二酚酸的含量为17.8％，萃取率95.8％。

实施例3：

取工业大麻花叶粉末1kg(其中大麻二酚酸的含量约为0.8％)，装填至超临界萃取釜中，设置萃取仪的萃取釜温度为50℃，压力为35MPa，提取90min，调节温度和压力，同时在一级分离釜中加入吸附剂(硅藻土)，收集温度为40℃、压力为7MPa条件下的初级提取物，为红棕色透明油状液体28g，HPLC纯度79.4％，其中，大麻二酚酸的含量为27％，萃取率95.3％。

实施例4：

取粒径75μm硅胶微球100g，以石油醚湿法装柱，另取灰绿色半固体(实施例1萃取得到的)初级提取物4g，加适量石油醚溶解上样，采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，洗脱梯度顺序为：石油醚(约500mL)→含1％乙酸乙酯的石油醚(约500mL)→含2％乙酸乙酯的石油醚(约3.5L)→含5％乙酸乙酯的石油醚(约500mL)，收集CBDA集中的洗脱流份(主要是含2％乙酸乙酯的石油醚部分)，回收溶剂，得到含量大于90％的CBDA粗品，收率为60％，HPLC纯度为92％。

实施例5：

取粒径100μm的聚苯乙烯微球以丙酮-水浸泡充分，取150ml装柱，另取实施例3中透明油状初级提取物5g加适量丙酮溶解上样，采用50％丙酮-水等度洗脱，收集CBDA集中的洗脱流份，减压回收溶剂，得到含量大于90％的CBDA粗品，收率为79％，HPLC纯度为90％。

实施例6：

取实施例5制备得到的CBDA粗品0.33g加适量甲醇溶解，注入高效液相色谱仪，采用Waters Symmetry PrepC18半制备色谱柱(7.8×300mm，7μm)，流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液(68:32)，UV检测器波长210nm，收集CBDA流出部分，减压回收溶剂并蒸干，即得CBDA纯品99％，共得纯品0.27g，收率为91％(85.3％)，HPLC纯度为99.5％。纯品的液相图如图1所示。

实施例7：

取10μm C18色谱填料加甲醇浸泡，加压装柱(柱内径50mm×填料高度约300mm)，取取实施例5制备得到的CBDA粗品0.28g加适量甲醇溶解，注入中高压制备型色谱仪(DSC-50型，国外制造商有BUCHI，国内制造商有汉邦等)，流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液(70:30)，UV检测器波长210nm，收集CBDA流出部分，减压回收溶剂并蒸干，即得CBDA纯品共得纯品0.21g，收率为83％，HPLC纯度为99.2％，纯品的液相图如图1所示。

Claims

1.一种大麻二酚酸的提取方法，其特征在于，其包括以下步骤：将大麻花叶经过二氧化碳萃取，并除去二氧化碳得大麻二酚酸粗品；所述二氧化碳萃取过程中，无需添加夹带剂；

所述的萃取的温度为40～70℃；

所述的萃取的压力为25～55Mpa。

2.如权利要求1所述的大麻二酚酸的提取方法，其特征在于，所述的萃取的温度为40～55℃；

和/或，所述的萃取的压力为30～35Mpa；

和/或，所述的萃取的萃取时间为90min～120min；

和/或，所述的除去二氧化碳时的温度为40～55℃；

和/或，所述的除去二氧化碳时的压力为5～15Mpa；

和/或，所述的大麻花叶为工业大麻花叶的粉碎物料；

和/或，在除去二氧化碳前通过一个吸附剂层。

3.如权利要求2所述的大麻二酚酸的提取方法，其特征在于，所述的萃取的温度为40℃、50℃或55℃；

和/或，所述的萃取的压力为35Mpa或32Mpa；

和/或，所述的萃取的萃取时间为90min或120min；

和/或，所述的除去二氧化碳时的温度为40℃或45℃；

和/或，所述的除去二氧化碳时的压力为7Mpa；

和/或，所述的吸附剂层中的吸附剂为有机或无机吸附材料。

4.如权利要求3所述的大麻二酚酸的提取方法，其特征在于，所述的吸附剂选自硅藻土、硅胶、活性炭、纤维素和无机纤维棉中的一种或多种。

5.一种大麻二酚酸的纯化方法，其特征在于，其包括以下步骤：将大麻二酚酸粗品经过第一次液相分离，收集分离产品，分离产品再经过第二次液相分离得大麻二酚酸纯品；

所述的第二次液相分离的色谱柱填料为反相硅胶色谱填料。

6.如权利要求5所述的大麻二酚酸的纯化方法，其特征在于，所述的大麻二酚酸粗品如权利要求1-4中任一项所述的大麻二酚酸的分离方法分离得到；

和/或，所述的硅胶微球的粒径小于100μm，且不为0；

和/或，所述的硅胶微球为新型硅胶；

和/或，所述的聚苯乙烯微球的粒径小于100μm，且不为0；

和/或，当所述的第一次液相分离的色谱柱填料为硅胶微球时，所述的第一次液相分离的流动相选自石油醚、乙醚、环己烷、乙酸乙酯和丙酮中的一种或多种；

和/或，当所述的第一次液相分离的色谱柱填料为聚苯乙烯时，所述的第一次液相分离的流动相包括：丙酮、乙醇、甲醇或乙腈中的一种或多种的水溶液；

和/或，所述的反相硅胶色谱填料的粒径不大于10μm，且不为0；

和/或，所述的第二次液相分离的流动相为丙酮、乙醇、甲醇或乙腈中的一种或多种的水溶液；

和/或，所述的大麻二酚酸粗品的HPLC纯度为70％-90％；

和/或，所述的大麻二酚酸粗品为草绿色、红棕或褐色透明油状提取物；

和/或，所述的第一次液相分离得到的分离产品为CBDA含量大于90％，THC含量小于0.2％。

7.如权利要求6所述的大麻二酚酸的纯化方法，其特征在于，所述的硅胶微球为均一的单分散球型微粒；

和/或，当所述的第一次液相分离的色谱柱填料为硅胶微球时，所述的第一次液相分离的流动相为乙酸乙酯和石油醚；

和/或，当所述的第一次液相分离的色谱柱填料为聚苯乙烯时，所述的第一次液相分离的流动相为50～70％丙酮的水溶液等度洗脱；

和/或，所述的第二次液相分离的流动相还包括质量分数为0.05-0.15％的甲酸或乙酸；

和/或，所述的草绿色浸膏CBDA含量为15％-20％；

和/或，所述的红棕或褐色透明油状提取物CBDA含量为20-28％。

8.如权利要求7所述的大麻二酚酸的纯化方法，其特征在于，当所述的第一次液相分离的色谱柱填料为硅胶微球时，所述的第一次液相分离的流动相为乙酸乙酯和石油醚按照1～2倍柱体积的石油醚，4～5倍柱体积的体积比为1：99的乙酸乙酯和石油醚，10～20倍柱体积的体积比为2：98的乙酸乙酯和石油醚进行梯度洗脱；

和/或，所述的第二次液相分离的流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液。

9.如权利要求5-8中任一项所述的大麻二酚酸的纯化方法，其特征在于，所述的第二次液相分离的流动相为乙腈与甲酸水溶液，所述乙腈与所述甲酸水溶液的体积比为68:32或70：30，按该体积比等度洗脱。

10.如权利要求5所述的大麻二酚酸的纯化方法，其特征在于，其包括以下步骤：将大麻花叶在温度为40～70℃，压力为25～55Mpa经过二氧碳萃取，并除去二氧碳得大麻二酚酸粗品；将大麻二酚酸粗品经过第一次液相分离，收集分离产品，分离产品再经过第二次液相分离得大麻二酚酸纯品。