CN114681586A - 一种流感外用疫苗及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种流感外用疫苗，属于生物预防医药领域。本发明提供的流感外用疫苗，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1％～3％、甘草锌0.5％～2％、新洁灵0.5％～1％、大豆萃取肽级蛋白0.5％～1％和聚乙二醇400 93％～97.5％。本发明提供的流感外用疫苗不仅对流感病毒感染具有很好的预防作用，而且不是针对病毒特异序列产生的单一抗原抗体反应，故可在不同流感季通用，克服了传统疫苗只能针对特异种类的流感病毒具有预防作用、研发成本高和周期长的缺陷。

Description

一种流感外用疫苗及其制备方法
技术领域
本发明属于生物预防医药领域，具体涉及一种流感外用疫苗及其制备方法。
背景技术
传统疫苗是指用各类病原微生物制作的用于预防接种的生物制品。其中用细菌或螺旋体制作的疫苗亦称为菌苗。疫苗分为活疫苗和死疫苗两种。常用的活疫苗有卡介苗，脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、鼠疫菌苗等。常用的死疫苗有百日咳菌苗、伤寒菌苗、流脑菌苗、霍乱菌苗等。
然而，传统流感疫苗均是针对特异病毒株进行预防接种，每年均需根据流行病毒不同而接种不同疫苗；一旦有新型病毒出现或病毒发生变异，则需进行新疫苗的研发，成本高、周期长，预防接种普及率有限。目前，人类已经进入各种危险病毒不断侵害的敏感时期，病毒变异迅速，传统疫苗的研发、生产、使用已经明显跟不上病毒肆虐的步伐，效果明确、工艺简单、使用快捷的新型疫苗产品是人类目前最大的医疗健康需求。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种流感外用疫苗及其制备方法。本发明提供的流感外用疫苗适用各种流感病毒，且制备工艺简单、使用快捷，是一种新型外用流感疫苗。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种流感外用疫苗，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1％～3％、甘草锌0.5％～2％、新洁灵0.5％～1％、大豆萃取肽级蛋白0.5％～1％和聚乙二醇40093％～97.5％。
优选的，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1％～2.5％、甘草锌0.5％～1.8％、新洁灵0.5％～0.8％、大豆萃取肽级蛋白0.5％～0.8％和聚乙二醇40094.1％～97.5％。
优选的，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1％～2.4％、甘草锌0.5％～1.7％、新洁灵0.5％～0.7％、大豆萃取肽级蛋白0.5％～0.7％和聚乙二醇40094.5％～97.5％。
优选的，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1.2％、甘草锌0.7％、新洁灵0.7％、大豆萃取肽级蛋白0.5％和聚乙二醇96.9％。
优选的，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1.4％、甘草锌0.9％、新洁灵0.6％、大豆萃取肽级蛋白0.6％和聚乙二醇40096.5％。
优选的，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1.9％、甘草锌1.4％、新洁灵0.7％、大豆萃取肽级蛋白0.7％和聚乙二醇40095.3％。
本发明还提供了上述技术方案所述的流感外用疫苗的制备方法，包括如下步骤：将甘草锌和薄荷精提取物混匀，磨成细末；将磨成细末的甘草锌和薄荷精提取物的混合物与新洁灵、聚乙二醇400混合，得到流感外用疫苗。
优选的，所述磨成细末的甘草锌和薄荷精提取物的混合物的粒径为80～120目。
优选的，所述流感外用疫苗还包括灭菌步骤，所述灭菌的方法包括钴60辐照灭菌。
本发明提供了上述技术方案中所述的流感外用疫苗或上述技术方案中所述的制备方法得到的流感外用疫苗在制备预防流感的药物中的应用。
有益效果：
本发明提供了一种流感外用疫苗，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1％～3％、甘草锌0.5％～2％、新洁灵0.5％～1％、大豆萃取肽级蛋白0.5％～1％和聚乙二醇40093％～97.5％。薄荷精提取物富含薄荷脑，能选择性的刺激人体皮肤或粘膜的冷觉感受器，产生冷觉反射和冷感，引起皮肤黏膜血管收缩，具有消炎，止痛，止痒，促进血液循环，减轻浮肿的作用；新洁灵在本发明中进一步强化薄荷提取物杀灭病毒作用，与薄荷提取物配伍刚柔相济，互相弥补；甘草锌与薄荷提取物、新洁灵配伍，充分保证了抑菌和杀灭病毒过程中鼻腔上皮细胞的生理活性不会受到损伤和影响，并能及时修复和更新鼻腔上皮细胞，使其更有效配合杀灭病毒，使各组分持续有效发挥作用；聚乙二醇400为溶剂，能改变薄荷脑的生物活性，使与皮肤接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，增强薄荷脑的抗病毒、抗炎、止痒、止痛作用。本发明提供的流感外用疫苗不仅对流感病毒感染具有很好的预防作用，而且不是针对病毒特异序列产生的单一抗原抗体反应，故可在不同流感季通用，克服了传统疫苗只能针对特异种类的流感病毒具有预防作用、研发成本高和周期长的缺陷。
附图说明
图1为实施例7各处理组小鼠肺组织HE染色结果；其中A为0倍剂量组，B为10倍剂量组，C为15倍剂量组；
图2为实施例7各处理组小鼠肝脏组织HE染色结果；其中A为0倍剂量组，B为10倍剂量组，C为15倍剂量组。
具体实施方式
本发明提供了一种流感外用疫苗，包括以下质量百分含量的组分：甘草锌0.5％～2％、薄荷精提取物1％～3％、新洁灵0.5％～1％、大豆萃取肽级蛋白0.5％～1％和聚乙二醇40093％～97.5％。
在本发明中，所述流感外用疫苗包括质量百分含量为1％～3％的薄荷精提取物，进一步优选为1％～2.4％，更进一步优选为1.9％。本发明对薄荷精提取物的来源没有特殊要求，采用本领域常规市售产品，生产厂须具备《药品生产企业许可证》，并持有《药品GMP》证书。薄荷精提取物具有解毒、解表、辟秽、清利咽喉、疏肝行气、解热发汗、祛风止咳的功效；且薄荷精提取物富含薄荷脑，能选择性的刺激人体皮肤或粘膜的冷觉感受器，产生冷觉反射和冷感，引起皮肤黏膜血管收缩，具有消炎，止痛，止痒，促进血液循环，减轻浮肿的作用，在本发明中是长效杀菌抗菌的主要成分。
在本发明中，所述流感外用疫苗包括质量百分含量为0.5％～2％的甘草锌，进一步优选为0.5％～1.7％，更进一步优选为1.4％。本发明对甘草锌的来源没有特殊要求，采用本领域常规市售产品即可。甘草锌具有清热解毒、补脾益气、调和诸药、缓解止痛、促进粘液分泌、促进上皮细胞更新的作用，本发明将甘草锌与薄荷提取物、新洁灵配伍，充分保证了抑菌和杀灭病毒过程中鼻腔上皮细胞的生理活性不会受到损伤和影响，并能及时修复和更新鼻腔上皮细胞，使其更有效配合杀灭病毒，使各组分持续有效发挥作用。
在本发明中，所述流感外用疫苗包括质量百分含量为0.5％～1％的新洁灵，进一步优选为0.5％～0.7％，更进一步优选为0.7％。本发明对新洁灵的来源没有特殊要求，采用本领域常规市售产品即可。新洁灵具有快速而强力的抗病毒作用，协同薄荷提取物强化杀灭病毒的作用，新洁灵与薄荷提取物配伍刚柔相济，互相弥补，起到预防和治疗的长效作用。
在本发明中，所述流感外用疫苗包括质量百分含量为0.5％～1％的大豆萃取肽级蛋白，进一步优选为0.5％～0.7％，更进一步优选为0.7％。本发明对大豆萃取肽级蛋白的来源没有特殊要求，只要其分子量等参数符合低聚肽各项指标即可，本发明实施例中的大豆萃取肽级蛋白优选购自南京威尔药业集团股份有限公司。大豆萃取肽级蛋白中富含大豆低聚肽，大豆低聚肽含有丰富的生理活性，包括抗氧化、降血压、降血脂、降血糖、降低胆固醇、抗疲劳、增强免疫力，能够增强细胞免疫和组织代谢活性，从而加强预防流感病毒的作用。
在本发明中，所述流感外用疫苗包括质量百分含量为93％～97.5％的聚乙二醇400，进一步优选为94.5％～97.5％，更进一步优选为95.3％。本发明对聚乙二醇400的来源没有特殊要求，采用本领域常规市售产品即可。聚乙二醇400在本发明中为溶剂，增强薄荷精提取物的抗病毒、抗炎、止痒、止痛作用。
在本发明中，所述流感外用疫苗优选包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1.2％、甘草锌0.7％、新洁灵0.7％、大豆萃取肽级蛋白0.5％和聚乙二醇96.9％；或优选为薄荷精提取物1.4％、甘草锌0.9％、新洁灵0.6％、大豆萃取肽级蛋白0.6％和聚乙二醇40096.5％；或优选为薄荷精提取物1.9％、甘草锌1.4％、新洁灵0.7％、大豆萃取肽级蛋白0.7％和聚乙二醇40095.3％。
本发明提供的流感外用疫苗改变传统疫苗注射的给药方式为外用给药，通过鼻唇沟及鼻腔涂抹，在粘膜表面成膜，无死角覆盖粘膜表面，形成物理屏障，能避免病毒直接接触鼻腔粘膜，切断病毒侵入途径，同时杀死附着于疫苗液体层的病毒，达到预防流感传播目的，可在不同流感季通用，克服传统疫苗只能针对特异种类的流感病毒具有预防作用、研发成本高和周期长的缺陷。同时，本发明提供的流感外用疫苗的组成为安全有效的天然化合物及化学药物的复方合剂，杜绝了疫苗注射引起的不良反应；而且，本发明提供的流感外用疫苗使用简单，没有时间空间限制，任何需要预防流感的情况，如人员外出、去往可能发生流感传播的人群密集区时涂抹即可，更加适合家庭日常预防使用，尤其适用于尚无特效药或特异性疫苗的流感病毒流行季。本发明提供的流感外用疫苗从作用机理、生产技术及运输保存条件(常温保存运输)，都实现了跨越式的进步，是一种新型流感疫苗。
本发明还提供了上述技术方案所述的流感外用疫苗的制备方法，包括如下步骤：将甘草锌和薄荷精提取物混匀，磨成细末；将磨成细末的甘草锌和薄荷精提取物的混合物与新洁灵、聚乙二醇400混合，得到流感外用疫苗。
本发明将甘草锌和薄荷精提取物混匀，磨成细末。在本发明中，所述磨成细末的甘草锌和薄荷精提取物的混合物的粒径为80～120目，进一步优选为100目。本发明将甘草锌和薄荷精提取物磨成细末可使溶解率和融合水平达到最佳状态，增强产品的皮肤渗透和吸收。
将甘草锌和薄荷精提取物磨成细末后，本发明将磨成细末的甘草锌和薄荷精提取物的混合物与新洁灵、聚乙二醇400混合，得到流感外用疫苗混合物。本发明对混合的方式没有特殊要求，采用本领域常规混合方式即可。
混合后得到流感外用疫苗。在本发明中，所述流感外用疫苗还优选包括灭菌步骤，所述灭菌的方法优选包括钴60辐照灭菌，灭菌可保证产品预期效果和增加产品稳定性。本发明选用钴60辐照灭菌不仅可操作性强，且对疫苗的成分没有影响，进而保障疫灭菌效果和疫苗的预防效果。本发明提供的流感外用疫苗的制备方法操作简单，成本低廉，利于生产。
本发明提供了上述技术方案中所述的流感外用疫苗或上述技术方案中所述的制备方法得到的流感外用疫苗在制备预防流感的药物中的应用。本发明对流感的种类没有特殊要求，适用于各种流感病毒。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种流感外用疫苗及其制备方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种流感外用疫苗，由以下质量的组分组成：
薄荷精提取物12g、甘草锌7g、新洁灵7g、大豆萃取肽级蛋白5g、聚乙二醇400969g。上述原料均采购于南京威尔药业集团股份有限公司，产品代码分别为B01856、B01823、B01811、B01824和B01865。
制备方法：准备所需原料聚乙二醇400、甘草锌、薄荷精提取物、新洁灵、大豆萃取肽级蛋白；将甘草锌与薄荷精提取物充分混匀，磨成100目细末，再与新洁灵、聚乙二醇混匀，充分搅拌均匀，过滤，检查装量无偏差，并经钴60灭菌照射，得到本发明流感外用疫苗。
实施例2
一种流感外用疫苗，由以下质量的组分组成：
薄荷精提取物14g、甘草锌9g、新洁灵6g、大豆萃取肽级蛋白6g、聚乙二醇400965g。
原料来源和制备方法同实施例1。
实施例3
一种流感外用疫苗，由以下质量的组分组成：
薄荷精提取物19g、甘草锌14g、新洁灵7g、大豆萃取肽级蛋白7g、聚乙二醇400953g。
原料来源和制备方法同实施例1。
实施例4
一种流感外用疫苗，由以下质量的组分组成：
薄荷精提取物18g、甘草锌13g、新洁灵6g、大豆萃取肽级蛋白7g、聚乙二醇400956g。
原料来源和制备方法同实施例1。
实施例5
流感外用疫苗预防H1N1甲型流感病毒感染细胞试验
1 H1N1甲型流感病毒TCID50值测定
HINI甲型流感病毒原液：活化病毒甲型H1N1流感病毒种(购自哈尔滨医科大学)经鸡胚尿襄腔和羊膜活化后，将活化后的H1N1流感病毒进行梯度稀释，然后将梯度稀释的H1N1流感病毒加入接种了MDCK细胞(购自哈尔滨医科大学)的96孔板中，100μL/孔，并补充含10％FBS的DMEM细胞培养液(FBS，DMEM均购自Gibco公司)至200μL，48h后检测不同稀释梯度的H1N1流感病毒感染的MDCK的细胞病变(CPE)，根据Reed-Muench法计算H1N1甲型流感病毒的组织半数感染量TCID50值。细胞病变是指细胞变圆、肿大、融合和脱落等特异细胞病变出现。细胞病变(CPE)记录方法：(-)细胞正常生长，无病变出现；(+)少于整个细胞单层的25％细胞出现病变；(++)25％～50％细胞出现病变；(+++)50％～75％细胞出现病变；(++++)75％～100％细胞出现病变。检测结果见表1。
表1 H1N1甲型流感病毒攻击48h后各组细胞CPE结果
Figure BDA0002860504220000071
由表1的结果可知，该活化后的甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的TCID50为10-7.6/100μL，作为本试验用病毒原液。
2流感外用疫苗的细胞毒性测定
采用DMEM细胞培养液将实施例1流感外用疫苗原液作倍比稀释至20％、10％、5％、2.5％，在96孔已形成DMEM细胞单层的微孔内加入不同稀释疫苗液100μL，37℃作用5min后吸弃，加入等量DMEM细胞培养液，每个稀释浓度5个复孔，同时保留5个复孔为未经药物处理的细胞作为正常对照组，培养36h，CCK8法(碧云天)检测细胞450nm吸光度值，以评价疫苗液对MDCK细胞的毒性，检测结果见表2。
表2不同稀释浓度疫苗液对细胞的毒性作用
Figure BDA0002860504220000081
由表2的结果可知，各浓度疫苗液稀释液对细胞无明显毒性作用。
3流感外用疫苗对H1N1流感病毒的预防作用
采用DMEM细胞培养液将实施例1流感外用疫苗作倍比稀释至20％、10％、5％、2.5％，将不同稀释浓度疫苗液100μL接种于已形成单层细胞的微孔内，以100TCID50病毒液加入孔中攻击细胞，同时设立空白对照组(仅加入100μL DMEM培养液)及病毒液组(仅加入病毒液)，5％CO2培养箱37℃培养24h，弃去混合液，PBS(碧云天)清洗细胞2次，加入100μLDMEM培养液(含1％FBS)，继续培养48h，CCK-8法(碧云天)检测细胞增殖情况，检测结果见表3。
病毒抑制率(％)＝(实验组平均OD值-病毒组平均OD值)/(空白对照组平均OD值-病毒组平均OD值)×100％。
表3不同浓度疫苗稀释液对病毒的预防作用
Figure BDA0002860504220000091
由表3的结果可知，与病毒液组相比，20％稀释浓度疫苗液可显著提高细胞OD值(*P<0.01)，其余稀释浓度组提高细胞OD值不明显。
实施例6
流感外用疫苗预防H1N1甲型流感病毒感染动物体内试验
1小鼠流感模型建立
SPF级BALB/c小鼠12只，雄性，4～6周龄，体重16g～18g(购买自哈医大实验动物中心)，随机分为四组，分别用PBS对实施例1的H1N1流感病毒原液作102、103、104稀释，相当于104TCID50，103TCID50，100TCID50，麻醉条件下滴鼻给药，50μL/只，左右鼻孔各25μL，空白对照组给予生理盐水滴鼻，记录生命体征变化。
各组小鼠染毒2d后陆续出现弓背、蜷缩、精神萎靡，呼吸浅促，饮食减少，毛发出现倒毛现象，体重下降，证明各组小鼠均造模成功。其中102及103组小鼠症状更明显，102组3只小鼠在染毒后6d全部死亡，103组小鼠染毒后6d死亡1只，2只于9d后死亡。104组小鼠至10d无死亡，体征趋于平稳并逐渐恢复。
最终确定将病毒原液作102倍稀释，相当于104TCID50进行后续实验。
2流感外用疫苗液对流感模型小鼠的死亡保护作用
将30只SPF级BALB/c小鼠，雄性，4～6周龄，体重16g～18g(购买自哈医大实验动物中心)随机分为空白对照组、模型给药组、病毒感染组，每组10只。模型给药组：麻醉状态下，滴鼻给药实施例1疫苗液，25μL/只，左右鼻孔各12.5μL；随后，采用2倍的104TCID50给药浓度，滴鼻给药，25μL/只，左右鼻孔各12.5μL，以达到终浓度为标准浓度的效果。病毒感染组：将上述疫苗液替换为生理盐水滴鼻给药。空白对照组：仅滴鼻给药生理盐水。记录小鼠每日行为变化及生存期。
实验结果：空白对照组小鼠精神较好，呼吸、饮食均正常，毛发顺滑有光泽。病毒组小鼠于感染病毒2d后陆续发病，出现寒战、弓背、蜷缩、饮食水减少、精神萎靡、倒毛等现象，4d后陆续出现死亡，第9天全部死亡。模型给药组小鼠总体情况尚可，在第6天和第7天各有一只小鼠意外死亡，其余小鼠无死亡，共观察21天，不同组别小鼠存活情况见表4。
表4不同组别小鼠存活情况
Figure BDA0002860504220000101
由表4的结果可知，与病毒感染组相比，模型给药组能显著降低染毒小鼠的死亡率，本发明的流感外用疫苗可以达到有效的预防H1N1流感的效果。
实施例6
流感外用疫苗人群预防效果
2020年1月，将本发明实施1的流感外用疫苗在黑龙江省克东县作为居民日常防疫使用，以考察本发明流感外用疫苗的人群预防效果。
该县常驻人口29.9万，采用每户1支的形式分发，使用方法为每次外出前采用棉球/棒浸湿塞入鼻腔中及鼻唇沟涂抹。至2020年10月，克东县未报道一例发热病例，证明了本发明在人群中预防流感病毒的效果。
实施例7
流感外用疫苗毒理试验研究
1急性毒性试验
采用SPF级BALB/c小鼠，雄性，4～6周龄，体重16g～18g(购买自哈医大实验动物中心)进行试验。以小鼠滴鼻剂量(25μL/只)的0、10、20倍剂量给Balb/C小鼠灌胃给药，每组20只，雌雄各10只，观察其每日行为、体重变化，连续观察七天,记录小鼠死亡情况。
试验结果：3组小鼠精神较好，呼吸、饮食均正常，毛发顺滑有光泽，无一例死亡。
2长期毒性试验
以小鼠外用用药量的0、5、10倍剂量Balb/C小鼠(6～8周龄)灌胃组药，每组20只，雌雄各10只，试验期为2月，观察小鼠行为、饮食等变化。
试验结果：3组小鼠精神较好，呼吸、饮食均正常，毛发顺滑有光泽，未发现毒副作用，无一例死亡。各组小鼠的生化指标(生化试剂购自九强生物)见表5；处死小鼠后，取其心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、胰脏进行称重，计算脏器指数(例：肺指数＝肺脏质量(g)/体质量(g)x100％)，结果见表6；对各处理组小鼠的肺脏、肝脏进行多聚甲醛固定以及石蜡包埋，进行病理HE染色(采用碧云天苏木素伊红染色试剂盒)，观察病理变化，结果见图1和图2。
表5各处理组小鼠血清生化指标结果
Figure BDA0002860504220000111
mg％：每100mg血清中所含的mg数
由表5的结果可知，各处理组之间生化指标无显著差异，长期使用本发明的流感外用疫苗对小鼠生化指标没有显著影响。
表6各处理组小鼠脏器指数结果
Figure BDA0002860504220000112
Figure BDA0002860504220000121
由表6的结果可知，各处理组小鼠的脏器指数没有显著差异，长期使用本发明的流感外用疫苗对小鼠各脏器没有显著影响。
由图1和图2的结果可知，各组小鼠肺脏及肝脏均呈正常组织形态，长期使用本发明的流感外用疫苗对小鼠肺脏及肝脏没有显著病理改变。
由上述实施例的结果可知，本发明提供的流感外用疫苗对流感病毒具有良好的预防效果；同时，本发明为安全有效的天然化合物及化学药物的复方合剂，杜绝了疫苗注射引起的不良反应，且制备工艺简单、价格低廉、使用快捷，是一种新型外用流感疫苗。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其它实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (10)

1.一种流感外用疫苗，其特征在于，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1％～3％、甘草锌0.5％～2％、新洁灵0.5％～1％、大豆萃取肽级蛋白0.5％～1％和聚乙二醇40093％～97.5％。
2.根据权利要求1所述的流感外用疫苗，其特征在于，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1％～2.5％、甘草锌0.5％～1.8％、新洁灵0.5％～0.8％、大豆萃取肽级蛋白0.5％～0.8％和聚乙二醇40094.1％～97.5％。
3.根据权利要求1所述的流感外用疫苗，其特征在于，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1％～2.4％、甘草锌0.5％～1.7％、新洁灵0.5％～0.7％、大豆萃取肽级蛋白0.5％～0.7％和聚乙二醇40094.5％～97.5％。
4.根据权利要求1所述的流感外用疫苗，其特征在于，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1.2％、甘草锌0.7％、新洁灵0.7％、大豆萃取肽级蛋白0.5％和聚乙二醇96.9％。
5.根据权利要求1所述的流感外用疫苗，其特征在于，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1.4％、甘草锌0.9％、新洁灵0.6％、大豆萃取肽级蛋白0.6％和聚乙二醇40096.5％。
6.根据权利要求1所述的流感外用疫苗，其特征在于，包括以下质量百分含量的组分：薄荷精提取物1.9％、甘草锌1.4％、新洁灵0.7％、大豆萃取肽级蛋白0.7％和聚乙二醇40095.3％。
7.权利要求1～6任一项所述的流感外用疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将甘草锌和薄荷精提取物混匀，磨成细末；将磨成细末的甘草锌和薄荷精提取物的混合物与新洁灵、聚乙二醇400混合，得到流感外用疫苗。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述磨成细末的甘草锌和薄荷精提取物的混合物的粒径为80～120目。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述流感外用疫苗混合物还包括灭菌步骤，所述灭菌的方法包括钴60辐照灭菌。
10.权利要求1～6任一项所述的流感外用疫苗或权利要求7～9任一项所述的制备方法得到的流感外用疫苗在制备预防流感的药物中的应用。
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