CN114645097B - 水稻花柱长度基因qSYL3及其连锁标记和在高异交结实率水稻核不育系选育中的应用 - Google Patents

水稻花柱长度基因qSYL3及其连锁标记和在高异交结实率水稻核不育系选育中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种水稻花柱长度基因qSYL3及其连锁标记和在高异交结实率水稻核不育系选育中的应用，属于水稻分子育种技术领域。本发明通过对水稻花柱长度性状的初定位和精细定位，以及对水稻花柱长度性状紧密连锁标记的开发得到了控制水稻花柱长度的长花柱等位基因qSYL3‑k及其连锁标记D30。采用杂交、回交和连锁标记D30辅助选择相结合的选育方法，再结合育性观察和异交结实率调查，筛选到了长花柱、高异交结实率的水稻光温敏核不育系新品系。利用本发明选育的长花柱、高异交结实率的水稻光温敏核不育新品系进行杂交水稻制种，可显著提高杂交水稻制种产量、降低制种成本、增加种植效益。

Description

水稻花柱长度基因qSYL3及其连锁标记和在高异交结实率水 稻核不育系选育中的应用
技术领域
本发明涉及水稻分子育种技术领域，尤其涉及一种水稻花柱长度基因qSYL3及其连锁标记和在高异交结实率水稻核不育系选育中的应用。
背景技术
水稻是我国最重要的粮食作物，也是世界上最重要的粮食作物之一，全国有65％以上的人口以稻米为主食。在人口持续增长而耕地却以数百万亩的速度逐年减少的情况下，要保障几十亿人口的粮食安全，大幅度的提高单位面积产量是必然选择。始于我国20世纪70年代的杂交水稻，较同熟期的常规稻单产增加15％左右，其商业化种植使水稻生产力有了大幅度提高。实践证明，利用水稻杂种优势提高水稻单产是最有效的途径之一。
杂交水稻需要年年生产一代杂种种子。我国是世界最大的杂交水稻种子生产和消费国，每年杂交水稻种植面积为1400万公顷，需杂交水稻种子约35万吨。研究表明，限制杂交水稻制种产量的主要因素是不育系异交结实率低。水稻母本颖花柱头外露是影响杂交稻制种异交结实率的决定因素。柱头外露是指水稻开花结束后，雌蕊柱头仍然留在颖壳外的现象。柱头外露率是指柱头外露颖花数占调查总颖花数的百分率，是水稻重要的异交性状。由于外露柱头展开度大、花粉承接面积增加，解除了颖壳对外源花粉的传播障碍，开花的第二天甚至若干天仍有授粉机会。有研究发现，不育系V41A和V20A开花当天未授粉的颖花，凭外露柱头在田间自由授粉，天然异交率分别可达到35％和37％。说明不育系柱头外露率越高，就越有利于异交。
柱头外露率属数量性状遗传，不同研究者利用不同定位群体在水稻所有12条染色体上共检测到195个控制该性状的QTL。然而，柱头外露率易受各种外界环境(如抽穗开花期的天气、湿度、温度等)的影响，加之性状调查步骤繁琐、误差大，导致初定位后很难进行后续的深入研究。
柱头性状主要包括柱头外露率、柱头长度、花柱长度和柱花总长度(是指柱头长度和花柱长度之和)等。研究表明，柱头性状间存在紧密联系，如柱头外露率与柱花总长度呈(极)显著正相关，柱头长度、花柱长度和柱花总长度两两间均呈极显著正相关。但当前对于柱头性状的研究是远落后于水稻米质、抗性等其他性状，更未见柱头长度相关性状基因在水稻育种实践上应用的报道。现有证据表明，生产上一些配合力高、米质好、抗性强等优良性状的不育系因其柱头性状差，异交结实率低而不能应用于生产实际。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种水稻花柱长度基因qSYL3在高异交结实率水稻核不育系选育中的应用。
本发明还提供了一种水稻花柱长度基因qSYL3的连锁标记D30，所述连锁标记D30的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
本发明还提供了一种所述的连锁标记D30在高异交结实率水稻核不育系选育中的应用。
本发明还提供了一种利用水稻花柱长度基因qSYL3和所述的连锁标记D30选育高异交结实率水稻核不育系新品系的方法，包括如下步骤：
(1)以长花柱水稻材料为父本，以光温敏核不育系水稻材料为母本杂交，得到F1；
(2)以长花柱水稻材料为父本，以F1为母本回交，得到BC1F1；
(3)BC1F1自交得到BC1F2，利用所述连锁标记D30从高温不结实的BC1F2植株中筛选携带水稻花柱长度基因qSYL3的等位基因qSYL3-k的水稻单株；
(4)之后以所述水稻单株作为自交材料，按照步骤(3)的方法，筛选得到各世代的水稻单株，直至得到稳定品系的水稻单株；
(5)所述稳定品系的水稻单株经育性观察后，筛选得到高异交结实率水稻核不育系新品系。
优选的，所述长花柱水稻材料为SSSL14；所述光温敏核不育系水稻材料为7001S、农垦58S、广茉S、广茉HS、新二S和矮占43S中的一种或几种。
优选的，所述长花柱水稻材料中含有水稻花柱长度基因qSYL3的等位基因qSYL3-k。
优选的，所述等位基因qSYL3-k的凝胶电泳条带大小为145bp。
本发明通过对水稻花柱长度性状的初定位和精细定位，以及对水稻花柱长度性状紧密连锁标记的开发，得到了控制水稻花柱长度性状的长花柱等位基因qSYL3-k及其连锁标记D30。采用杂交、回交和D30标记辅助选择相结合的选育方法，再结合育性观察和异交结实率的调查，筛选得到长花柱、高异交结实率的水稻光温敏核不育系新品系。利用本发明选育的长花柱、高异交结实率的水稻光温敏核不育系新品系进行杂交水稻制种，可显著提高杂交水稻制种产量、降低制种成本、增加种植效益。
附图说明
图1为实施例1中Nipponbare、SSSL14和Kasalath柱头长度相关性状的表现及差异显著性测验；A：Nipponbare、SSSL14和Kasalath柱头长度相关性状的表现；B：Nipponbare、SSSL14和Kasalath柱花总长度的显著性测验；C：Nipponbare、SSSL14和Kasalath柱头长度的显著性测验；D：Nipponbare、SSSL14和Kasalath花柱长度的显著性测验。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
水稻的花器构造：稻穗由主轴、一次枝梗、二次枝梗、小穗梗和小穗组成；每个小穗由基部的2片退化颖片(副互颖)小花梗和3朵小花构成；3朵小花中，顶端1朵正常发育，其下2朵均退化，仅见两片外稃(互颖)；可育小花有外颖、内颖、2个浆片、6枚雄蕊和1枚雌蕊；花药有4个花粉囊，柱头二裂呈羽毛状。
水稻柱头：是指水稻的雌蕊，是水稻的雌性生殖器官，其正常受精结实可发育成水稻种子。
花柱长度：是指毛刷状底部与子房交界处之间的长度。
柱头长度：是指水稻雌蕊上毛刷状部分的长度。
柱花总长度：是指花柱长度和柱头长度之和。
柱头外露率：是指主茎穗的外露柱头数除以总柱头数所得的百分数。
光温敏核不育系：是指一种育性受隐性核基因控制，表现雄性退化(主要是花粉败育退化)雌蕊发育正常的水稻品系。该品系在特定的温光条件下发生育性转换，育性转换以温度为主，光长起一定的修饰作用，长日高温表现不育，作母本用于杂交水稻生产制种用；短日低温表现可育，用于自交繁殖不育系。
实施例1
(1)柱头相关性状的QTL定位：调查4个环境下Nipponbare、Kasalath及其54个CSSLs的4个柱头相关性状(柱头外露率、柱头长度、花柱长度和柱花总长度)(Nipponbare、Kasalath和相应的CSSL种子由RGRC提供)。对柱花总长度、花柱长度和柱头外露率3个柱头相关性状进行QTL定位，共检测到62个QTLs，其中柱花总长度检测到19个QTL，花柱长度检测到16个QTLs，柱头外露率检测到27个QTLs(如表1所示)。其中，在水稻第3染色体C63-C563区间4个环境中均同时检测到控制水稻柱花总长度、花柱长度和柱头外露率的加性主效QTL(qTSSL3、qSYL3和qPES3)，且在54个片段置换系中找到了携带该区间(C63-C563)片段的单片段置换系，即SSSL14。
表1CSSL群体中检测到的3个柱头相关性状加性QTL
注：TSSL：柱花总长度；SYL：花柱长度；PES：柱头外露率。
(2)分析Nipponbare、Kasalath和SSSL14的柱花总长度、柱头长度和花柱长度，显著性测验结果表明，SSSL14的柱花总长度和花柱长度与Nipponbare相比均存在极显著差异而柱头长度则无显著差异(图1)，说明该主效位点是通过影响水稻花柱长度进而影响柱花总长度。
(3)qSYL3的精细定位：利用初定位区间的双亲间有多态性的11对SSR标记和7对新开发的Indel标记(参见表2)，对以SSSL14为母本、Nipponbare为父本杂交、自交构建的次级F2分离群体的6953个单株进行凝胶电泳以鉴定各单株的基因型，将qSYL3精细定位于SSR标记RM14680和Indel标记D17区间。
表2用于精细定位的11对SSR标记和7对Indel标记
注：表中序列1～18从左到右、从上到下依次对应序列表中的SEQIDNO：3～38。
(4)qSYL3连锁标记的开发：通过T-DNA插入突变体分析确定qSYL3的注释基因为LOC_Os03g14850(核苷酸序列如SEQ ID NO：39所示)，根据注释基因LOC_Os03g14850在Nipponbare和Kasalath的内含子3个碱基插入缺失设计了1个Indel标记D30(F：CTCCAGCATAGTAGAAGTAG；如SEQ ID NO：1所示R：GATTGGATGATAAACAGGAC；如SEQ ID NO：2所示)；利用连锁标记D30对NK-CSSL群体中的54个单株进行基因型扫描，发现这个3碱基缺失的等位变异仅存在于Kasalath中，D30在Nipponbare(短花柱长度材料)和Kasalath(长花柱长度材料)的条带大小150bp和145bp，因此D30可作为LOC_Os03g14850的基因特异标记，用于对Kasalath类型的长花柱等位基因qSYL3-k进行分子标记辅助选择。
实施例2
长花柱、高异交率水稻光温敏核不育系新品系的选育过程
以长柱头水稻材料SSSL14为父本，分别以光温敏核不育系7001S、农垦58S、广茉S、广茉HS、新二S、矮占43S为母本。
2015年12月1日、10日和20日将母本分三期播种于海南陵水基地，25天后移栽，株行距16.5×26.5cm；待父本SSSL14抽穗开花后，从光温敏核不育系中选刚抽穗但尚未开花的单株，采用温汤法去雄，以SSSL14为父本进行杂交、套袋人工授粉，配制7001S/SSSL14、农垦58S/SSSL14、广茉S/SSSL14、广茉HS/SSSL14、新二S/SSSL14和矮占43S/SSSL14等6个组合的F1，6个组合的F1种子量在208粒至521粒之间。
2016年4月25日将6个组合所配的F1种子及其亲本播于合肥庐江基地，5月27日移栽，株行距16.5×26.5cm，待F1抽穗后，选择F1作母本，人工去雄后以SSSL14为父本进行回交，收获6个组合的BC1F1种子。
2016年11月20日将各组合的BC1F1种子种植于海南陵水基地，抽穗成熟后同一组合混收得到BC1F2种子。
2017年4月28日将6个组合的BC1F2种子种植于合肥庐江基地，每个组合的BC1F2群体种植1000株，对每个组合中在高温不结实(即温度超过24℃后不结实)的单株取叶片提DNA，利用连锁标记D30对各单株的DNA进行凝胶电泳，将凝胶电泳结果中带型为145bp(长花柱等位基因qSYL3-k带型)的单株割茬留种，去除带型为150bp(短花柱等位基因qSYL3-n带型)的单株，6个组合割茬留种的单株数在18～35株之间，收获BC1F3种子。
2017年11月18日将各组合的BC1F3种子分株系种植于海南陵水基地，从中选择高温不结实或分段结实的单株再次利用连锁标记D30进行分子标记辅助选择，将带型为145bp(长花柱基因带型)的不育系按单株收种，6个组合收获的单株数在7～12株之间，收获BC1F4种子。
2018年，夏季在合肥庐江基地4月下旬播种，冬季在海南陵水基地12月初播种，如此合肥、海南加代，各世代根据育性性状(高温不结实或分段结实)及连锁标记D30辅助选择的结果优选单株直至品系稳定。
当选的稳定品系利用分期播种和人工气候箱进行育性观察与鉴定。至2019年秋，育成6株长花柱、高异交率光温敏核不育系水稻新品系，分别命名为：7001KS、农垦58KS、广茉KS、广茉HKS、新二KS和矮占43KS。
2020年在合肥庐江基地自然条件下，自4月11日始播至7月11日结束，每10d播1期共10期，观察各期不同长花柱、高异交率光温敏核不育系的育性动态。每期种植90株，株行距16.5×26.5cm，秧龄26天；从始穗(7月11日)开始到抽穗结束，每隔1或2天取5穗镜检花粉，观察花粉败育程度；同时选与镜检穗同时期抽穗的10穗进行套袋，成熟时调查自交结实率。镜检时每朵颖花内6个花药全部取出，放在载玻片上，滴适量1％的I-KI溶液，用镊子把花药充分捣碎染色后，放在10×10倍显微镜下观察花粉类型；取样的同时选同时期抽穗的单穗套自交袋，20天后调查自交结实情况；根据镜检和套袋自交结实的结果，自交不结实、无花粉或少量典败花粉粒的单株中选。
以7001KS为例，结果如下：7月11日～9月8日期间镜检，花粉败育率99.92％～100％，套袋自交不结实均为0；9月11日～22日期间镜检，花粉败育率76.32％～91.23％，套袋自交结实率9.87％～26.34％。说明观察的长花柱光温敏核不育系水稻品种7001KS，在合肥庐江基地的不育时段较长，不育可育转换期明显(具体记录参见表3)。其他5个长花柱光温敏核不育系水稻新品系的育性观察结果和7001KS一致。
表32020年合肥自然条件下长花柱光温敏核不育系7001KS的育性观察
实施例3
水稻长花柱光温敏核不育系异交结实率的测定
5个恢复系：扬稻6号、明恢63、蜀恢527、闽恢3301和远恢2号；12个光温敏核不育系：7001S、7001KS、农垦58S、农垦58KS、广茉S、广茉KS、广茉HS、广茉HKS、新二S、新二KS、矮占43S和矮占43KS。
2021年5月5日和15日分2期将5个恢复系播种于合肥庐江基地，分别于6月3日和14日移栽；12个不育系分6月8日和18日2期播种，分别于7月4日和13日移栽。每份材料每期种植10行，每行9株，常规栽培管理。
待不育系开花时，调查12个不育系的3个柱头相关性状，结果列于表4。同时用120目的隔离布将2期的5个恢复系父本分别围住，选择即将开花的不育系整穗，保留即将开花但尚未开花的，每个组合选50个完整的不育系穗子放进隔离布中，中午开花时进行人工赶粉，赶粉时间从不育系搬进去即刚抽穗时开始，直至最下部的小穗全部开完后，再赶粉2天，20天后每个组合随机调查正常的20个不育系穗子的结实率(表5)。
5个恢复系父本的柱花总长度分别为：扬稻6号的TSSL为1.996±0.078mm，明恢63的TSSL为2.097±0.052mm，蜀恢527的TSSL为2.184±0.109mm，闽恢3301的TSSL为2.426±0.060mm，远恢2号的TSSL为1.831±0.053mm。
表412个水稻光温敏核不育系3个柱头相关性状的表现
注：*和**分别表示5％和1％水平的差异。
由表4可知，改良后的材料较原材料的3个柱头相关性状均出现显著或极显著的增加。其中，柱花总长度的增加幅度在7001KS的7.45％至新二KS的10.98％之间；花柱长度的增加幅度在矮占43KS的8.23％至新二KS的21.96％之间；柱头外露率的增加幅度在广茉KS的18.34％至7001KS的32.48％之间。可见，将水稻长花柱等位基因qSYL3-k导入至2个粳型光温敏核不育系和4个籼型光温敏核不育系中，均能不同程度的增加其花柱长度、柱花总长度和柱头外露率。
从表5改良前后的6个光温敏核不育系的异交结实率的结果来看，改良后的7001KS较7001S的异交结实率增幅在5个恢复系父本间的变化在明恢63的20.25％至扬稻6号的38.79％之间；改良后的农垦58KS较农垦58S的异交结实率增幅在5个父本间的变化在闽恢3301的23.40％至蜀恢527的38.32％之间；改良后的广茉KS较广茉S的异交结实率增幅在5个父本间的变化在明恢63的28.96％至扬稻6号的40.22％之间；改良后的广茉HKS较广茉HS的异交结实率增幅在5个父本间的变化在明恢63的27.62％至蜀恢527的37.13％之间；改良后的新二KS较新二S的异交结实率增幅在5个父本间的变化在扬稻6号的20.27％至明恢63的37.33％之间；改良后的矮占43KS较矮占43S的异交结实率增幅在5个父本间的变化在远恢2号的18.05％至明恢63的44.67％之间。说明将水稻长花柱等位基因qSYL3-k导入至不同类型的光温敏核不育系中，均能显著或极显著提高其异交结实率。
表512个水稻光温敏核不育系异交结实率的调查
/>
/>
注：*和**分别表示5％和1％水平的差异。
由以上实施例可知，本发明通过对水稻花柱长度性状的初定位和精细定位，以及对花柱长度性状紧密连锁标记的开发，得到了控制水稻花柱长度的长花柱等位基因qSYL3-k及其连锁标记D30。采用杂交、回交和连锁标记D30辅助选择相结合的选育方法，再结合育性观察和鉴定、异交结实率的调查，筛选到了长花柱、高异交结实率的水稻光温敏核不育系新品系：7001KS、农垦58KS、广茉KS、广茉HKS、新二KS和矮占43KS。利用本发明选育的长花柱、高异交结实率的水稻光温敏核不育系进行杂交水稻制种，可显著提高杂交水稻制种产量、降低制种成本、增加种植效益。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 安徽省农业科学院水稻研究所 重庆市农业科学院 安徽省农业科学院作物研究所
<120> 水稻花柱长度基因qSYL3及其连锁标记和在高异交结实率水稻核不育系选育中的应用
<160> 39
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ctccagcata gtagaagtag 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gattggatga taaacaggac 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ttatagagcc aacacaacgg 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
atcgatctct ctcctggaaa 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ccggtatcct tcgatattgc 20
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ccgacttttc ctcctgacg 19
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
ggaagaacag agttgctcgg 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gtgccattta tttccgtccc 20
<210> 9
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
agggttcttc agtattgcca agc 23
<210> 10
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gcagtaacta atagccgtct tcacc 25
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
tctcgacctg gctctcctct agc 23
<210> 12
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
agtgcacgga catgtcactc tcg 23
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
acctggtgca agaacctgac 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
cggtagagga cgtccatgtc 20
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
acctgggagt acagaagagt cg 22
<210> 16
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
ggacatgtgg atgtatctga tcg 23
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
ggcggcgtga tctggaaacc 20
<210> 18
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
actgacggga gtggcatgag agg 23
<210> 19
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
atacctccca tgcatatgta gc 22
<210> 20
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
gatgtacctg ttgaagtgta ggc 23
<210> 21
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
atcacacgga tggcacacag c 21
<210> 22
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
gaagataaag cgaaagggac caaacc 26
<210> 23
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
cgtcggcatc atcaactact cc 22
<210> 24
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
cttcgcggag gctaatttaa tcg 23
<210> 25
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
tcgtacatca atcaaacatg c 21
<210> 26
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
gtgcgccacc tttatttta 19
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
taacatccgg tcaaacatcc 20
<210> 28
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
gctcaacagt caacatcttc 20
<210> 29
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
gtaatgaggt gaccgaacc 19
<210> 30
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
agatcagaaa tcccagtgc 19
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
ggaaacacgg ctaaagtttg 20
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
ttattggttc gaccagccat 20
<210> 33
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
aggtgcgttt agttagtagc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
agttttgatg tgatgaaaaa gtt 23
<210> 35
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
ctggaaaagc gaaatccaat a 21
<210> 36
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
ttttgtgtct tttacggtgt 20
<210> 37
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
tcgtacatca atcaaacatg c 21
<210> 38
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
gtgcgccacc tttatttta 19
<210> 39
<211> 2226
<212> DNA
<213> 稻(Oryza sativa)
<400> 39
cttgaatttg ttaagtatct cataaatgca cagattaaac ctttcaacag tccaaccatt 60
atctatacaa aactaaggcc ctctttgttt aggcttataa gccaacttat aagtcgaaaa 120
gtctaagcca aaacaaacaa gcagcttttt catttggctt ttttaagcca taagccactc 180
taacactatt aagccaaaag ctaggttgga gaagcttttt tttggcttat atgagataga 240
tgtatgactc taccattaaa cttaggacat taaatccact ggcttataaa tcatataagc 300
caataagctg acttaaaagt ctaggccaat aagcctaagc ctaaacaaag agggcctaag 360
tatctcataa atcctcggat taaaatcttc taataattca tgtcttcacc tttatctatc 420
taaaactaag tatctcgtaa attcacgaat taaaaccttc taatagtcca tgttttcact 480
gttatctatc caaaactaag taccttgcaa attcacggat taaaaccttc taactgtgtt 540
ttcactgtta tatatccaaa actaagtata ttgtaaattc atggattaaa accttataac 600
aattcatttt ttcaatgtta tctatcacaa aggctcatta atatgtacca attgaacccc 660
atgcttcact ttctctctat ataaccttcc atgtaacctc agctcactgc tcatcatgta 720
caatcgctgc acaccattct ttcgctgata cataggcaag ctgtgctagt taccagctag 780
gagatggtga agtgtagggc acgcacgact aggaaaaaga ttgagatcaa gcgcggggac 840
aagaaggtac gagatgcatg cttttccaag cgccacacta ccatcttcaa caaggccaat 900
gagctcgcta tcctctgtgg cgtgatggtt gctgttgttt ttgtctctcc caatgccaat 960
ggcgggattt tctcatttgg ctacccatct gtcagctctg tggcaaatcg cttcctcgcc 1020
aatgctccaa acaacaccag tgtgagtagc tcaacccaaa gcgggaggga tgtggaaatc 1080
cgtgaactag aacgtgaaga aagagagttg aaagagcatc tacaagcttc cacagatcag 1140
aataagcttc tgcgggaggc aatagcagca agggatggag ggcaattgat gcttctcctg 1200
cagagtgatt gtagtgagtt gggaccaaaa ggtctggtga gaggaggaac aaaatattga 1260
aggataatgc catgcgtgtc catgttttag caaaaccata atttctatct ggttgttagt 1320
gtgcaccctt ggcttggctc tccctgtaat gttgcttgta gggtttgctc catgggaatt 1380
ctctatgatt attttgccaa atgatgagaa caaatttatc ataataatgt tgtggttgtc 1440
atatttgcaa ggactgagtg cgtagatcta tatattaata ttggtggtgt tgtgtatttt 1500
attttacttc tagtgctcag ttctctttag accttgtttc ttttaattcc agctgctcta 1560
atctcttgta attggtgaat ttatattatt tgtcctgctt gtgatgttat atctatctac 1620
ttgtttgtat gtttgttgca tcaaatatag ttttcatttc gtgggaactt ataccattat 1680
ctcattgtga tcattaacca tcagtttaat ctttaaacgt cttgtctgtg caacattttt 1740
gcttcagtct ctcgtaatct attatgttca tggtgaactt acctatccaa tctttaaacc 1800
catgatgcat atgcaggtga agctgaaagt agaagtgaac ttaacatcat agcctacgca 1860
aagcggtgaa aactgacatg ctttcagatg acacatgtac cattctgtcc catgggttta 1920
ttgacaatca actggatttt atgtatttga agtatgatgc cctttctctg attcgcatat 1980
caatggaaaa actcaaaacc gtctctagat tttgcagatg acagttacga agttctctga 2040
attgcctcaa tcatgtcttc atttctaatt tgtagctctt cttcgttcca caaactcact 2100
gcttgtgcat gatatatgca ggtggcagtt gtgcggttgt ggttccgcaa ttctcttgtt 2160
ggcattgggc ttgatcggtt gtgctggctg ctgcagcaaa tactctttgg tttggattgg 2220
ggctga 2226

Claims (7)

1.一种水稻花柱长度基因qSYL3在高异交结实率水稻核不育系选育中的应用，其特征在于，所述应用为在水稻花柱长度基因qSYL3上开发连锁标记D30，用于高异交结实率水稻核不育系的选育，所述连锁标记D30的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
2.一种检测水稻花柱长度基因qSYL3的连锁标记D30的引物对，其特征在于，所述连锁标记D30的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
3.一种权利要求2所述的连锁标记D30的引物对在高异交结实率水稻核不育系选育中的应用。
4.一种利用水稻花柱长度基因qSYL3和权利要求2所述的连锁标记D30的引物对选育高异交结实率水稻核不育系新品系的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)以长花柱水稻材料为父本，以光温敏核不育系水稻材料为母本杂交，得到F1；
(2)以长花柱水稻材料为父本，以F1为母本回交，得到BC1F1；
(3)BC1F1自交得到BC1F2，利用所述连锁标记D30的引物对从高温不结实的BC1F2植株中筛选携带水稻花柱长度基因qSYL3的等位基因qSYL3-k的水稻单株；
(4)之后以所述水稻单株作为自交材料，按照步骤(3)的方法，筛选得到各世代的水稻单株，直至得到稳定品系的水稻单株；
(5)所述稳定品系的水稻单株经育性观察后，筛选得到高异交结实率水稻核不育系新品系。
5.如权利要求4所述的选育水稻高异交结实率核不育系新品系的方法，其特征在于，所述长花柱水稻材料为SSSL14；所述光温敏核不育系水稻材料为7001S、农垦58S、广茉S、广茉HS、新二S和矮占43S中的一种或几种。
6.如权利要求5所述的选育高异交结实率水稻核不育系新品系的方法，其特征在于，所述长花柱水稻材料中含有水稻花柱长度基因qSYL3的等位基因qSYL3-k。
7.如权利要求4～6任一项所述的选育高异交结实率水稻核不育系新品系的方法，其特征在于，所述等位基因qSYL3-k的凝胶电泳条带大小为145bp。
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