CN114621322A - 一种莱古比星的分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种莱古比星的分离纯化方法。该分离纯化方法包括如下步骤：1)将莱古比星粗品溶解过滤，得到莱古比星溶液；2)将步骤1)得到的莱古比星溶液上样到装有硅胶微球的层析柱中进行层析，采用有机溶剂为流动相进行洗脱；3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的莱古比星。本发明莱古比星的分离纯化方法，仅需一步层析纯化即可满足莱古比星纯度＞99％的要求，收率可达70％以上，纯化收率高而稳定，同时本发明的分离纯化方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明属于药物纯化技术领域，涉及一种莱古比星的分离纯化方法。
背景技术
阿霉素(多柔比星)是一种广范应用于肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、肝癌、胶质瘤、骨转移瘤、前列腺癌等实体瘤以及白血病、淋巴瘤等血液系统恶性肿瘤的化疗药物，但是，其心脏毒性限制了该药的使用剂量，而肉瘤、胶质瘤、卵巢癌等多数肿瘤，至今还缺乏肺癌、淋巴瘤等靶向治疗和免疫治疗的疗效突破，化疗仍然是中晚期恶性肿瘤治疗的基石，因此，致力于新型化疗药物的研发，依然是科学家的重中之重。
注射用莱古比星是一种新型的蒽环类抗肿瘤药物，结构式如下：
其化学结构设计为3个部分，即6-马来酰亚胺基团(EMC)与四肽氨基酸基团(ALA-ALA-ASN-LEU) 连接，然后再与细胞毒抗肿瘤药物多柔比星相偶联。
注射用莱古比星经过静脉推注后，在血液中通过6-马来酰亚胺基团与白蛋白共价结合形成稳定、无毒性的莱古比星白蛋白复合物。因此，莱古比星在心脏和免疫系统等正常组织中以莱古比星复合物形式存在，从而有效降低多柔比星的心脏毒性和对免疫系统的损伤。
而莱古比星复合物在肿瘤微酸的微环境中能够被肿瘤细胞和肿瘤相关巨噬细胞所高度表达的Legumain激活，释放活性物质多柔比星和Leu-多柔比星 (Leu-Dox)，从而引发肿瘤细胞免疫原性死亡，刺激机体抗肿瘤免疫的功能，达到抑制肿瘤生长同时促进抗肿瘤免疫的双重效果。
莱古比星临床前的药理毒理学研究数据显示，莱古比星不但具有很好的抗肿瘤活性，且它的毒副作用较多柔比星相比大大降低，正好弥补了蒽环类药物的临床治疗缺陷，可为肿瘤受试者带来福音。
莱古比星是一类我国自主研发的新型蒽环类化疗药物，目前国内外专利、文献等对莱古比星的合成、纯化方法鲜有报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种莱古比星的分离纯化方法，仅需一步层析纯化即可满足莱古比星纯度＞99％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离纯化方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低了生产成本。
本发明的目的之一在于提供一种莱古比星的分离纯化方法，为达此目的，本发明采用以下技术方案：
一种莱古比星的分离纯化方法，包括如下步骤：
1)将莱古比星粗品溶解过滤，得到莱古比星溶液；
2)将步骤1)得到的莱古比星溶液上样到装有硅胶微球的层析柱中进行层析，采用有机溶剂为流动相进行洗脱；
3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的莱古比星。
本发明莱古比星的分离纯化方法，以硅胶微球作为固定相，以有机溶剂作为流动相进行层析，仅需一步层析纯化即可满足莱古比星纯度＞99％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离纯化方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低了生产成本。
本发明的步骤2)中，所述硅胶微球的粒径为10-30μm的单分散正相硅胶微球，所述硅胶微球为单分散的、具有孔道结构的正相硅胶微球，所述单分散正相硅胶微球的粒径为10μm、20μm或30μm等，选择粒径为10μm、20μm或 30μm的单分散正相硅胶微球，严格控制粒径大小和孔径结构，使其作为色谱填料时具有很好的针对性，尤其是针对莱古比星的分离纯化。
本发明的步骤2)中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷中的任意一种或至少两种的混合物。
优选地，所述有机溶剂为乙醇和二氯甲烷的混合物。
优选地，所述乙醇和二氯甲烷的体积比为(5-10):(90-95)，例如为5:95、6:94、 7:93、8:92、9:91、10:90等，优选为8:92。本发明优选上述配比的乙醇和二氯甲烷的混合物作为流动相，配合单分散正相硅胶微球作为固定相，仅需一步层析即可使莱古比星纯度高于99.5％，收率可达70％以上
本发明的步骤1)中，所述莱古比星粗品采用溶剂进行溶解，所述溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷中的任意一种或至少两种的混合物。
优选地，所述莱古比星粗品的莱古比星的纯度为60-80％，例如为60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、 74％、75％、75.23％、76％、77％、78％、79％或80％等。
优选地，所述莱古比星溶液中莱古比星的浓度为1-3mg/mL，例如为1 mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL或3mg/mL等。
本发明的步骤1)中，所述过滤采用0.3-0.5μm的滤膜过滤，例如滤膜的孔径为0.3μm、0.35μm、0.4μm、0.45μm或0.5μm等，优选地，所述滤膜为有机系滤膜。
本发明的步骤2)中，所述洗脱过程为，以低极性的有机溶剂作A相，以高极性的有机溶剂作B相，采用A相和B相的混合物作为流动相进行冲洗10-30 个柱体积，其中，B相占A相和B相体积总量的百分比为5-50％，例如B相占 A相和B相体积总量的体积百分比为5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、 20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％等；再用体积百分比100％的B相再生层析柱。本发明采用上述有机溶剂作为流动相，仅用10-30个柱体积就可完成莱古比星主峰的洗脱，洗脱程序简单，实验稳定，纯化周期比较短。
优选地，所述A相为二氯甲烷；所述B相为乙醇。
优选地，所述流动相的线流速为150-720cm/h，例如流速为150cm/h、200 cm/h、250cm/h、300cm/h、350cm/h、360cm/h、400cm/h、450cm/h、500cm/h、 550cm/h、600cm/h、650cm/h、700cm/h、720cm/h等。
本发明的步骤2)中，上样前还包括对层析柱进行柱前处理的步骤；
优选地，所述柱前处理的步骤具体为先用高极性有机溶剂对层析柱进行除杂，再用低极性的有机溶剂进行平衡1-3个柱体积；
优选地，所述高极性的有机溶剂为乙醇，所述低极性的有机溶剂为二氯甲烷。
作为本发明的优选方案，所述莱古比星的分离纯化方法包括如下步骤：
1)将莱古比星纯度为60-80％的莱古比星粗品用溶剂溶解，采用孔径为 0.3-0.5μm的滤膜进行过滤，得到莱古比星的浓度为1-3mg/mL的莱古比星溶液；
2)采用高极性有机溶剂对层析柱进行除杂，再用低极性的有机溶剂进行平衡1-3个柱体积，将步骤1)得到的莱古比星溶液上样到装有粒径为10-30μm的单分散正相硅胶微球的层析柱中进行层析，采用流动相进行10-30倍柱体积的洗脱，以低极性的有机溶剂作A相，以高极性的有机溶剂作B相，用A相和B 相的混合物作为流动相进行冲洗10-30个柱体积，其中，B相占A相和B相体积总量百分比为5-50％，再用B相再生层析柱，所述流动相的线流速为 150-720cm/h；
3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的莱古比星。
本发明的目的之二在于提供一种目的之一所述的分离纯化方法制备得到的莱古比星。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明莱古比星的分离纯化方法，仅需一步层析纯化即可满足莱古比星纯度＞99％的要求，收率可达70％以上，纯化收率高而稳定，同时本发明的分离纯化方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低了生产成本。
附图说明
图1为本发明的实施例1使用的粒径10μm的单分散正相硅胶的扫描电镜照片；
图2为本发明的实施例1分离纯化前的粗品的高效液相色谱分析；
图3为本发明的实施例1分离纯化后的高效液相色谱分析。
具体实施方式
下面结合附图1-3，并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。
如无具体说明，本发明的各种原料均可市售购得，或根据本领域的常规方法制备得到。
实施例1
本实施例的莱古比星的分离纯化方法，包括如下步骤：
1)取莱古比星纯度为77.23％的莱古比星粗品，用体积比为8:92的乙醇和二氯甲烷的混合物作为溶剂进行溶解，得到莱古比星的浓度为2mg/mL的莱古比星溶液；待溶液澄清后，用孔径为0.45μm的有机系滤膜过滤，收集滤液待用；
2)采用4.6×250mm的色谱柱，采用如图1所示的10μm的单分散正相硅胶微球Unisil 10-120(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为4.15mL；对层析柱进行柱前预处理，采用二氯甲烷和乙醇的混合物(A相) 和乙醇(B相)作为流动相进行洗脱，流动相的用量为18倍柱体积，流速控制在1mL/min；洗脱过程为，B相占A相和B相体积总量百分比为8％的A相和 B相的混合物作为流动相冲洗75分钟，后用B相冲洗20分钟；
3)分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的莱古比星。
经高效液相色谱分析，本实施例的洗脱液中莱古比星的纯度99.56％，收率 71％。
图2是分离纯化前的莱古比星粗品的高效液相色谱分析，可见有一定的杂质。具体的，在27.7min处为莱古比星的特征峰，在2.5min、7.5min、21min、 35min、39min等处有杂质峰。
图3是分离纯化后的莱古比星的高效液相色谱分析，可见杂质非常少，杂峰非常小。
实施例2
本实施例的莱古比星的分离纯化方法，包括如下步骤：
1)取莱古比星纯度为77.23％的莱古比星粗品，用体积比为8:92的乙醇和二氯甲烷的混合物作为溶剂进行溶解，得到莱古比星的浓度为2mg/mL的莱古比星溶液；待溶液澄清后，用孔径为0.45μm的有机系滤膜过滤，收集滤液待用；
2)采用10×250mm的色谱柱，采用如图1所示的10μm的单分散正相硅胶微球Unisil10-120(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为19.6mL；对层析柱进行柱前预处理，采用二氯甲烷和乙醇的混合物(A相) 和乙醇(B相)作为流动相进行洗脱，流动相的用量为19倍柱体积，流速控制在5mL/min；洗脱过程为，B相占A相和B相体积总量百分比为8％的A相和 B相的混合物作为流动相冲洗80分钟，后用B相冲洗20分钟；
3)分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，得到纯化的莱古比星。
经高效液相色谱分析，本实施例的洗脱液中莱古比星的纯度99.52％，收率 72％。
实施例3
本实施例与实施例1的区别之处在于，粗品的纯度为68.67％，其他的均与实施例1的相同。
经高效液相色谱分析，本实施例的洗脱液中莱古比星的纯度为99.32％，收率为70％。
实施例4
本实施例与实施例1的区别之处在于，步骤2)中，采用体积比为5:95的乙醇和二氯甲烷的混合物作为流动相，其他的均与实施例1的相同。
经高效液相色谱分析，本实施例的洗脱液中莱古比星的纯度为99.21％，收率为70.5％。
实施例5
本实施例与实施例1的区别之处在于，步骤2)中，采用体积比为10:90的乙醇和二氯甲烷的混合物作为流动相，其他的均与实施例1的相同。
经高效液相色谱分析，本实施例的洗脱液中莱古比星的纯度为99.07，收率为70.1％。
实施例6
本实施例与实施例1的区别之处在于，步骤2)中，有机溶剂乙醇改为甲醇，其他的均与实施例1的相同。
经高效液相色谱分析，本实施例的洗脱液中莱古比星的纯度为99.05％，收率为70％。
实施例7
本实施例与实施例1的区别之处在于，步骤2)中，采用体积比为4:96乙醇和二氯甲烷的混合物作为流动相，其他的均与实施例1的相同。
经高效液相色谱分析，本实施例的洗脱液中莱古比星的纯度为98.90％，收率为38％。
实施例8
本实施例与实施例1的区别之处在于，步骤2)中，采用体积比为15:85的乙醇和二氯甲烷的混合物作为流动相，其他的均与实施例1的相同。
经高效液相色谱分析，本实施例的洗脱液中莱古比星的纯度为97.33％，收率为29％。
实施例9
本实施例与实施例1的区别住处在于，步骤2)中，不包括上样前的前处理步骤，其他的均与实施例1的相同。
经高效液相色谱分析，本实施例的洗脱液中莱古比星的纯度为99.44％，收率为70％。
对比例1
本对比例与实施例1的区别之处在于，步骤2)中，采用50μm单分散正相硅胶作为固定相，其他的与实施例1的均相同。
经高效液相色谱分析，本对比例的洗脱液中莱古比星的纯度为98.43％，收率为43％。
对比例2
本对比例与实施例1的区别之处在于，步骤2)中，采用Unisil-NH2系列正相硅胶填料(苏州纳微科技股份有限公司)作为固定相，其他的与实施例1 的均相同。
经高效液相色谱分析，本对比例的洗脱液中莱古比星的纯度为98.2％，收率为60％。
本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
Claims (10)
1.一种莱古比星的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将莱古比星粗品溶解过滤，得到莱古比星溶液；
2)将步骤1)得到的莱古比星溶液上样到装有硅胶微球的层析柱中进行层析，采用有机溶剂为流动相进行洗脱；
3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的莱古比星。
2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述硅胶微球的粒径为10-30μm的单分散正相硅胶微球。
3.根据权利要求1或2所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷中的任意一种或至少两种的混合物。
4.根据权利要求3所述的分离纯化方法，其特征在于，所述有机溶剂为乙醇和二氯甲烷的混合物；
优选地，所述乙醇和二氯甲烷的体积比为(5-10):(90-95)。
5.根据权利要求1-4之一所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤1)中，所述莱古比星粗品采用溶剂进行溶解，所述溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷中的任意一种或至少两种的混合物；
优选地，所述莱古比星粗品的莱古比星的纯度为60-80％；
优选地，所述莱古比星溶液中莱古比星的浓度为1-3mg/mL。
6.根据权利要求1-5之一所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤1)中，所述过滤采用0.3-0.5μm的滤膜过滤。
7.根据权利要求1-6之一所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述洗脱过程为，以低极性的有机溶剂作A相，以高极性的有机溶剂作B相，用A相和B相的混合物作为流动相进行冲洗10-30个柱体积，其中，B相占A相和B相体积总量百分比为5-50％，再用B相再生层析柱；
优选地，所述A相为二氯甲烷；所述B相为乙醇；
优选地，所述流动相的线流速为150-720cm/h。
8.根据权利要求1-7之一所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，上样前还包括对层析柱进行柱前处理的步骤；
优选地，所述柱前处理的步骤具体为先用高极性有机溶剂对层析柱进行除杂，再用低极性的有机溶剂进行平衡1-3个柱体积；
优选地，所述高极性的有机溶剂为乙醇，所述低极性的有机溶剂为二氯甲烷。
9.根据权利要求1-7之一所述的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括如下步骤：
1)将莱古比星纯度为60-80％的莱古比星粗品用溶剂溶解，采用孔径为0.3-0.5μm的滤膜进行过滤，得到莱古比星的浓度为1-3mg/mL的莱古比星溶液；
2)采用高极性有机溶剂对层析柱进行除杂，再用低极性的有机溶剂进行平衡1-3个柱体积，将步骤1)得到的莱古比星溶液上样到装有粒径为10-30μm的单分散正相硅胶微球的层析柱中进行层析，采用流动相进行10-30倍柱体积的洗脱，以低极性的有机溶剂作A相，以高极性的有机溶剂作B相，用A相和B相的混合物作为流动相进行冲洗10-30个柱体积，其中，B相占A相和B相体积总量百分比为5-50％，再用B相再生层析柱，所述流动相的线流速为150-720cm/h；
3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的莱古比星。
10.一种采用权利要求1-9任一项所述的分离纯化方法制备得到的莱古比星。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105001309A (zh) * | 2015-06-23 | 2015-10-28 | 苏州纳微科技有限公司 | 一种达巴万星的分离纯化方法 |
| US20170106094A1 (en) * | 2012-12-26 | 2017-04-20 | Yafei (Shanghai) Biopharmaceutical Co., Ltd. | Legumain Activated Doxorubicin Derivative as well as Preparation Method and Application Thereof |
| CN109705176A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-05-03 | 苏州纳微科技股份有限公司 | 一种猪神经节苷脂的分离纯化方法 |
| CN110314672A (zh) * | 2019-07-12 | 2019-10-11 | 中国海洋大学 | 一种单分散硅胶微球色谱填料的制备方法 |
| WO2020182203A1 (zh) * | 2019-03-14 | 2020-09-17 | 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 | 一种万古霉素类似物的分离纯化方法 |
-
2022
- 2022-03-28 CN CN202210312048.0A patent/CN114621322A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170106094A1 (en) * | 2012-12-26 | 2017-04-20 | Yafei (Shanghai) Biopharmaceutical Co., Ltd. | Legumain Activated Doxorubicin Derivative as well as Preparation Method and Application Thereof |
| CN105001309A (zh) * | 2015-06-23 | 2015-10-28 | 苏州纳微科技有限公司 | 一种达巴万星的分离纯化方法 |
| CN109705176A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-05-03 | 苏州纳微科技股份有限公司 | 一种猪神经节苷脂的分离纯化方法 |
| WO2020182203A1 (zh) * | 2019-03-14 | 2020-09-17 | 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 | 一种万古霉素类似物的分离纯化方法 |
| CN110314672A (zh) * | 2019-07-12 | 2019-10-11 | 中国海洋大学 | 一种单分散硅胶微球色谱填料的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| "UniSil正相硅胶色谱填料产品使用说明书", Retrieved from the Internet <URL:https://max.book118.com/html/2018/1003/8104101065001125.shtm> * |
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