CN114605242A - 间苯三酚类化合物的制备方法与药物、保健产品和食品 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种间苯三酚类化合物的制备方法与药物、保健产品和食品，属于天然产物活性成分技术领域。该化合物的化学结构式为
其制备方法包括：将藤黄果乙醇提取物依次进行石油醚、氯仿萃取，取氯仿萃取液进行大孔树脂分离。该方法简单，易操作，质量可控，安全稳定。上述间苯三酚类化合物可用于制备用于预防或治疗肥胖、高血糖或高血脂的药物或者用于制备保健产品、食品。经验证，上述化合物可以提高解耦联蛋白1表达，减少细胞内脂质积聚；对体重、内脏附睾脂肪和皮下腹股沟脂肪的重量具有明显的降低作用，有效的降低小鼠胰岛素水平、血清胆固醇和甘油三酯水平，改善胰岛素敏感性，且无明显毒副作用。
Description
技术领域
本发明涉及天然产物活性成分技术领域，具体而言，涉及一种间苯三酚类化合物的制备方法与药物、保健产品和食品。
背景技术
根据WHO统计，2016年，18岁及以上的成年人中有39％超重，且13％为肥胖。不健康饮食和缺乏运动是导致超重和肥胖比例日趋上升最重要的原因。部分肥胖病人，由于身体或工作的原因，不适合利用运动锻炼减肥，药物就成为唯一的选择。目前FDA批准的减肥药物只有5个，包括抑制食欲或减少脂肪吸收的药物，但是这些药物都存在毒副作用。因此，迫切需要寻找有效、安全、机制新颖的减肥药物。
棕色脂肪细胞具有大量线粒体，利用线粒体内膜上的解偶联蛋白1(UCP1)消耗脂肪，转而以热量的形式释出。以前，棕色脂肪被认为只存在于啮齿类动物以及人类新生婴儿，后来一系列研究发现，棕色脂肪也存在于成人，分散的存在于颈部和肩膀部位。因此，激发棕色脂肪的产热效应，成为开发减肥药物的新策略。
藤黄果(Garcinia cambogia)系藤黄科藤黄属植物，主产地印度南部，也分布于东南亚的泰国等地方。藤黄果在民间医药中常用作治疗便秘，胃溃疡，腹泻，和痢疾。藤黄果提取物具有抗炎，治疗糖尿病，抗痢疾，减肥等多种药理活性。至今已经从该植物中分离得到黄酮类成分以及柠檬酸类成分。长久以来，藤黄果被广泛的用作管理体重的药物以及保健品。其中，羟基柠檬酸(HCA)被认作是藤黄果的主要活性成分。许多研究发现，从藤黄果果实中提取的HCA可以用于控制体重。在2013年Chuah等的研究中，在随机双盲安慰剂对照的临床试验当中，HCA在降低食欲，抑制脂肪合成和减轻人体体重方面具有非常好的作用。但是，1998年Heymsfield等人的研究发现，和安慰剂组相比，给予藤黄果提取物(50％HCA)十二周以后，治疗组并没有减少肥胖人群的体重或脂肪量。2000年Vanloon等人的研究发现，急性服用高剂量的HCA以后，人的耐力训练能力和碳水化合物的氧化率不会影响。到目前为止，对于藤黄果的研究主要集中在HCA，而HCA的减肥作用存在互相矛盾的报道，效果并不确切。而关于藤黄果中其他化合物在减肥、降血糖和降血脂方面的研究，国内外都未见报导。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种间苯三酚类化合物的制备方法。
本发明的目的之二在于提供一种含有上述间苯三酚类化合物的药物。
本发明的目的之三在于提供一种含有上述间苯三酚类化合物的保健产品。
本发明的目的之四在于提供一种含有上述间苯三酚类化合物的食品。
本申请可这样实现：
第一方面，本申请提供一种间苯三酚类化合物的制备方法，间苯三酚类化合物的化学结构式为：
其制备方法包括以下步骤：
将藤黄果乙醇提取物依次进行石油醚、氯仿萃取，取氯仿萃取液进行大孔树脂分离；
大孔树脂分离包括：以乙醇-水为洗脱剂，按乙醇与水的体积比依次为0:100、25-35:75-65、55-65:45-35、85-95:15-5的比例进行梯度洗脱，收集第四个梯度洗脱所得的洗脱液。
在可选的实施方式中，藤黄果乙醇提取物是经乙醇体积浓度为92-98vt％的乙醇水溶液对藤黄果果实进行提取而得。
在可选的实施方式中，藤黄果乙醇提取物是经乙醇体积浓度为95vt％的乙醇水溶液提取而得。
在可选的实施方式中，大孔树脂分离是按乙醇与水的体积比依次为0:100、30:70、60:40、90:10的比例进行梯度洗脱。
在可选的实施方式中，大孔树脂分离过程中，所用的大孔树脂的填料为D101，每个梯度所使用的洗脱剂的体积为8-15L，洗脱剂的流速为80-180mL/min。
在可选的实施方式中，还包括：将大孔树脂分离过程中收集的所述洗脱液进行硅胶柱层析；
硅胶柱层析是以体积比为85-95:15-5的石油醚-丙酮为洗脱剂进行等度洗脱。
在可选的实施方式中，硅胶柱层析是以体积比为90:10的石油醚-丙酮为洗脱剂进行等度洗脱。
在可选的实施方式中，硅胶柱层析过程中，硅胶柱中硅胶的目数为200-500目，洗脱剂的总体积为15-20L，洗脱剂的流速为50-100mL/min。
在可选的实施方式中，还包括将硅胶柱层析所得的组分进行凝胶柱层析；
凝胶柱层析是以体积比为45-55:55-45的氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱。
在可选的实施方式中，凝胶柱层析是以体积比为50:50的氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱。
在可选的实施方式中，凝胶柱层析过程中，洗脱剂的总体积为1.5-2L，洗脱剂的流速为5-10mL/min。
第二方面，本申请提供一种药物，该药物的成分中含有前述实施方式的间苯三酚类化合物。
在可选的实施方式中，上述药物为用于预防或治疗肥胖、高血糖或高血脂的药物。
在可选的实施方式中，上述药物的剂型包括硬胶囊剂、软胶囊剂、散剂、颗粒剂、片剂、丸剂、蜜膏剂、口服液、酒剂或注射剂。
第三方面，本申请提供一种保健产品，其成分中含有前述实施方式的间苯三酚类化合物。
第四方面，本申请提供一种食品，其成分中含有前述实施方式的间苯三酚类化合物。
本申请的有益效果包括：
本申请提供的间苯三酚类化合物guttiferone J来源于藤黄果果实，其制备方法简单，易操作，质量可控，安全稳定。上述间苯三酚类化合物可用于制备预防或治疗肥胖、高血糖或高血脂的药物或者用于制备食品，既为藤黄果的生物活性研究奠定基础，也为更好地研究、开发、利用藤黄果植物资源提供科学依据。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为试验例2中guttiferone J减少3T3-L1脂肪细胞中脂质积聚实验结果图；
图2为试验例3中葡萄糖耐受性实验和胰岛素耐受性实验结果图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本申请提供的间苯三酚类化合物的制备方法与药物、保健产品和食品进行具体说明。
本申请提出的间苯三酚类化合物的化学结构式为：
该间苯三酚类化合物是由藤黄果(Garcinia cambogia)果实经过提取、分离以及纯化等工艺所制得。
经体外3T3-L1和C3H10T1/2脂肪细胞模型验证，上述化合物可以提高解耦联蛋白1(UCP1)表达，减少细胞内脂质积聚。经高脂饮食诱导肥胖小鼠药效学实验研究证实，上述化合物对体重、内脏附睾脂肪和皮下腹股沟脂肪的重量具有明显的降低作用，可有效降低小鼠胰岛素水平、血清胆固醇和甘油三酯水平，改善胰岛素敏感性，且无明显毒副作用。
也即，上述化合物具有减肥、降血糖和降血脂的功效，可用于相关的食品或药物中。
相应地，本申请还提供了上述间苯三酚类化合物的制备方法，包括以下步骤：
将藤黄果乙醇提取物依次进行石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，取氯仿萃取液进行大孔树脂分离。
可参考地，藤黄果乙醇提取物是经乙醇体积浓度为92-98vt％(优选为95vt％)的乙醇水溶液对藤黄果果实进行提取而得。具体的提取方法可以为浸泡提取。乙醇水溶液与藤黄果果实的料液比可以为50L：15Kg。
在提取之前，还可将藤黄果果实进行自然阴干以及粉碎过筛。作为参考地，过筛所用的筛孔直径为1-2mm。
提取之后，可将所得的藤黄果乙醇提取物进行浓缩，得到浸膏。
随后，将所得的浸膏与水混合，随后再依次进行石油醚、氯仿萃取，收集氯仿部分的萃取液，得到氯仿萃取液。
较佳的，石油醚与浸膏的用量比可以为2.5L：1Kg，氯仿与浸膏的用量比可以为2.5L：1Kg。
较佳地，可对上述氯仿萃取液进行浓缩，得到氯仿浸膏后再进行大孔树脂分离。
本申请中，大孔树脂分离包括：以乙醇-水为洗脱剂，按乙醇与水的体积比依次为0:100、25-35:75-65、55-65:45-35、85-95:15-5的比例进行梯度洗脱，收集第四个梯度洗脱所得的洗脱液，即可获得含有上述化合物的组分。
在一些优选的实施方式中，大孔树脂分离是按乙醇与水的体积比依次为0:100、30:70、60:40、90:10的比例进行梯度洗脱。
可参考地，上述大孔树脂分离所用的大孔树脂的填料为D101，每个梯度所使用的洗脱剂的体积为8-15L(优选10L)，洗脱剂的流速为80-180mL/min(优选100mL/min)。
进一步地，将收集的第四个梯度洗脱所得的洗脱液在60℃以下减压浓缩至黄色粘稠状固体。
进一步地，将大孔树脂分离过程中收集的洗脱组分(或该洗脱组分经浓缩后所得的浓缩物)进行硅胶柱层析。
硅胶柱层析是以体积比为85-95:15-5的石油醚-丙酮为洗脱剂进行等度洗脱。
在一些优选的实施方式中，硅胶柱层析是以体积比为90:10的石油醚-丙酮为洗脱剂进行等度洗脱。
可参考地，硅胶柱层析过程中，硅胶柱中硅胶的目数为200-500目(优选400-500目)，洗脱剂的总体积为15-20L(优选20L)，洗脱剂的流速为50-100mL/min(优选50mL/min)。
进一步地，将硅胶柱层析后的洗脱组分进行凝胶柱层析。
凝胶柱层析是以体积比为45-55:55-45的氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱。
在一些优选的实施方式中，凝胶柱层析是以体积比为50:50的氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱。
可参考地，凝胶柱层析过程中，洗脱剂的总体积为1.5-2L(优选1.5L)，洗脱剂的流速为5-10mL/min(优选5mL/min)。
经上述凝胶柱层析后，即可得到纯度较高的间苯三酚类化合物，以下称为guttiferone J。
通过3T3-L1脂肪细胞模型，使用油红O染色的方法，检测化合物减少3T3-L1脂肪细胞中的脂肪含量的作用。实验证明：间苯三酚类化合物guttiferone J可以减少脂肪细胞中的脂质堆积，提高脂肪细胞的脂质代谢效率。
通过高脂食物喂饲小鼠实验证明：间苯三酚类化合物guttiferone J对小鼠体重、腹腔附睾脂肪和皮下腹股沟脂肪的重量具有明显的降低作用，能有效的降低小鼠胰岛素水平、血清总甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白水平，改善胰岛素敏感性，且无明显毒副作用。
此外，本申请还提供了一种药物，该药物的成分中含有上述间苯三酚类化合物。
该药物的成分还可含有制药学上可接受的附加剂。
可参考地，上述药物的剂型示例性但非限定性地可包括硬胶囊剂、软胶囊剂、散剂、颗粒剂、片剂、丸剂、蜜膏剂、口服液、酒剂或注射剂。
上述药物可以为用于预防或治疗肥胖、高血糖或高血脂的药物。
此外，本申请还提供了一种保健产品，其成分中含有上述间苯三酚类化合物。上述保健产品可以为保健食品。
此外，本申请还提供了一种食品，其成分中含有上述间苯三酚类化合物。上述食品可以为功能性食品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
化合物guttiferone J的制备
(1)、精选藤黄果果实(15Kg)，自然阴干，粉碎过筛(筛孔直径为1-2mm)后，用95vt％的乙醇水溶液(50L)浸泡，浓缩得到总浸膏(5.4Kg)；
(2)、将(1)处理后的总浸膏，加水(2.5L)后，依次用石油醚(13.5L)、氯仿(13.5L)进行萃取，收集氯仿部分的萃取液，浓缩得到氯仿部位浸膏(700g)；
(3)、将(2)所得的氯仿部位浸膏进行大孔树脂分离，大孔树脂分离所用的大孔树脂的填料为D101。
大孔树脂分离包括：以乙醇-水为洗脱剂，按乙醇与水的体积比依次为0:100、30:70、60:40、90:10的比例进行梯度洗脱，每个梯度所使用的洗脱剂的体积为10L，洗脱剂的流速为100mL/min，收集第四个梯度洗脱所得的洗脱液，60℃以下减压浓缩至黄色粘稠状固体，即得到间苯三酚类成分提取物。
(4)、将(3)所得的间苯三酚类成分提取物进一步进行硅胶柱层析，硅胶柱层析是以体积比为90:10的石油醚-丙酮为洗脱剂进行等度洗脱。上述过程中，硅胶柱中硅胶的目数为400-500目，洗脱剂的总体积为20L，洗脱剂的流速为50mL/min。
(5)、将(4)所得的洗脱组分进一步进行凝胶柱层析，凝胶柱层析是以体积比为50:50的氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱，上述过程中，洗脱剂的总体积为1.5L，洗脱剂的流速为5mL/min，即得到化合物guttiferone J。
实施例2
化合物guttiferone J的制备
(1)、精选藤黄果果实，自然阴干，粉碎过筛后，用92vt％的乙醇水溶液浸泡，浓缩得到总浸膏；
(2)、将(1)处理后的总浸膏，加水后，依次用石油醚、氯仿进行萃取，收集氯仿部分的萃取液，浓缩得到氯仿部位浸膏；
(3)、将(2)所得的氯仿部位浸膏进行大孔树脂分离，大孔树脂分离所用的大孔树脂的填料为D101。
大孔树脂分离包括：以乙醇-水为洗脱剂，按乙醇与水的体积比依次为0:100、25:75、55:45、85:15的比例进行梯度洗脱，每个梯度所使用的洗脱剂的体积为15L，洗脱剂的流速为180ml/min，收集第四个梯度洗脱所得的洗脱液，60℃以下减压浓缩至黄色粘稠状固体，即得到间苯三酚类成分提取物。
(4)、将(3)所得的间苯三酚类成分提取物进一步进行硅胶柱层析，硅胶柱层析是以体积比为85:15的石油醚-丙酮为洗脱剂进行等度洗脱。上述过程中，硅胶柱中硅胶的目数为300-400目，洗脱剂的总体积为15L，洗脱剂的流速为80mL/min。
(5)、将(4)所得的洗脱组分进一步进行凝胶柱层析，凝胶柱层析是以体积比为45:55的氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱，上述过程中，洗脱剂的总体积为2L，洗脱剂的流速为10mL/min，即得到化合物guttiferone J。
实施例3
化合物guttiferone J的制备
(1)、精选藤黄果果实，自然阴干，粉碎过筛后，用98vt％的乙醇水溶液浸泡，浓缩得到总浸膏；
(2)、将(1)处理后的总浸膏，加水后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取，收集氯仿部分的萃取液，浓缩得到氯仿部位浸膏；
(3)、将(2)所得的氯仿部位浸膏进行大孔树脂分离，大孔树脂分离所用的大孔树脂的填料为D101。
大孔树脂分离包括：以乙醇-水为洗脱剂，按乙醇与水的体积比依次为0:100、35:65、65:35、95:5的比例进行梯度洗脱，每个梯度所使用的洗脱剂的体积为8L，洗脱剂的流速为80mL/min，收集第四个梯度洗脱所得的洗脱液，60℃以下减压浓缩至黄色粘稠状固体，即得到间苯三酚类成分提取物。
(4)、将(3)所得的间苯三酚类成分提取物进一步进行硅胶柱层析，硅胶柱层析是以体积比为95:5的石油醚-丙酮为洗脱剂进行等度洗脱。上述过程中，硅胶柱中硅胶的目数为200-300目，洗脱剂的总体积为18L，洗脱剂的流速为100mL/min。
(5)、将(4)所得的洗脱组分进一步进行凝胶柱层析，凝胶柱层析是以体积比为55:45的氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱，上述过程中，洗脱剂的总体积为1.7L，洗脱剂的流速为8mL/min，即得到化合物guttiferone J。
试验例1
结构验证
重复实施实施例1-3，得到足够多的化合物guttiferone J。
对所得的化合物guttiferone J进行核磁共振测试，其数据结果如下：
1H NMR(600MHz,CD3OD):δH 7.16(t,J＝7.9Hz,1H),7.01(dd,J＝2.5,1.6Hz,1H),6.97(ddd,J＝8.1,2.6,1.0Hz,1H),6.90(dt,J＝7.7,1.2Hz,1H),5.11(tdt,J＝5.9,3.0,1.6Hz,1H),5.06(tq,J＝6.8,1.3Hz,1H),5.01-4.96(m,1H),4.90-4.83(m,1H),2.75(dd,J＝14.0,8.0Hz,1H),2.67(dd,J＝13.9,5.4Hz,1H),2.51(dd,J＝14.1,8.8Hz,1H),2.45(dd,J＝14.1,5.8Hz,1H),2.11-2.06(m,1H),2.04(dd,J＝13.4,3.6Hz,1H),1.96(dd,J＝7.4,6.6Hz,1H),1.76-1.73(m,2H),1.71(s,3H),1.70-1.69(m,4H),1.67-1.65(m,7H),1.65-1.62(m,6H),1.60(d,J＝1.4Hz,3H),1.56(d,J＝1.3Hz,3H),1.53-1.43(m,1H),0.82(s,3H)。
13C NMR(150MHz,CD3OD):δC 198.75,195.03,192.36,160.13,159.87,159.34,159.06,158.79,158.51,158.47,140.31,135.61,135.14,134.54,132.51,129.82,125.34,123.42,121.19,121.08,120.66,119.20,116.93,116.24,115.05,69.43,63.66,51.79,43.22,41.87,37.36,31.50,30.06,26.53,26.29,26.28,26.01,25.96,25.20,18.40,18.24,18.21,17.93,16.27。
由此可以证明本申请制备所得而得化合物guttiferone J的结构式为
试验例2
guttiferone J减少3T3-L1脂肪细胞中脂质积聚实验
在完全分化的3T3-L1脂肪细胞上，利用油红O染色分析细胞内的脂滴含量，检测方便，分辨率高，评价化合物对减少3T3-L1脂肪细胞中脂肪含量的作用。
3T3-L1脂肪细胞模型的构建：
将生长状态良好的3T3-L1前脂肪细胞，以100000个/孔细胞密度接种至6孔板中，待细胞完全融合，更换为含0.5mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、1μM地塞米松及5μg/mL胰岛素的诱导分化培养基，培养2天，随后换成含有5μg/mL胰岛素的培养基继续培养4-5天，每2天换一次液。当完全分化成脂肪细胞时，加不同剂量的guttiferone J培养24小时，DMSO作为空白对照。然后，细胞用PBS洗涤两次，用4％的多聚甲醛固定30分钟，用60％的异丙醇洗涤两次，用油红O溶液染色30分钟，接着用60％的异丙醇洗涤两次。然后用异丙醇溶出脂滴，在510nm波长下测定吸光值。
实验证明：间苯三酚类化合物guttiferone J可以促进脂肪细胞的脂质代谢，减少脂肪细胞里的脂质堆积，在10μM的剂量下，可以减少3T3-L1脂肪细胞中70％的脂质(图1中A所示)。蛋白印迹实验表明，guttiferone J显著提高UCP1蛋白的表达水平(图1中B所示)。
试验例3
高脂食物诱导的肥胖小鼠改善胰岛素抵抗实验
观察间苯三酚类化合物guttiferone J对高脂食物诱导的肥胖小鼠血糖水平的影响。
受试药物：间苯三酚类化合物guttiferone J，以60％PEG400-生理盐水分别配制成浓度为1mg/mL和2mg/mL的溶液。
实验动物：C57BL/6小鼠，SPF级，雄性，澳门大学健康科学学院实验动物中心提供。动物房温度为22±1℃，湿度40-70％，12小时昼夜周期，自由进食饮水。
高血糖小鼠造模和干预：将24只小鼠在实验环境下给予普通饲料饲养一周，适应环境后随即分成普通食物对照组(RD)6只，高脂食物(TP23000，南通特络菲动物饲料科技有限公司，含45％脂肪)模型组18只，高脂食物喂养小鼠8周，然后将高脂模型组小鼠随机分成3组，高脂模型对照组(HFD)6只，低剂量guttiferone J给药组(GOJL)6只、高剂量guttiferone J给药组(GOJH)6只，持续十二周。
给药途径：腹腔注射给药。
给药方式和剂量：普通食物对照组(RD)和高脂模型对照组(HFD)腹腔给予相同体积的60％PEG400-生理盐水，低剂量组给于10mg/kg体重的guttiferone J，高剂量组给于20mg/kg体重的guttiferone J，每天给药一次，连续给药十二周。
稳态模型评估法计算胰岛素抵抗指(homeostasis model assessment ratio,HOMA-IR)：小鼠禁食12小时后，尾尖采血，用血糖仪测小鼠空腹血糖浓度，并用小鼠胰岛素ELISA试剂盒测定空腹血清中胰岛素的水平。计算内稳态模型评价指数，HOMA-IR＝空腹血糖(mmol/L)×空腹血清中胰岛素(mU/L)/22.5，具体结果见表1。
表1间苯三酚类化合物guttiferone J改善胰岛素抵抗
##与RD组差异非常显著。*与HFD模型组差异显著。
葡萄糖耐受性实验：小鼠禁食16小时后，尾静脉采血，用血糖仪测量小鼠基础血糖浓度，然后腹腔注射2mg/kg体重的葡萄糖溶液，在15、30、60、120分钟之后分别尾静脉采血，用血糖仪测量小鼠血糖浓度，结果见图2中A所示。横坐标为时间，单位为分钟，纵坐标为血糖浓度，单位为毫摩尔每升。
胰岛素耐受性实验：小鼠禁食6小时后，尾静脉采血，用血糖仪测量小鼠基础血糖浓度，然后腹腔注射1.0U/kg体重的人胰岛素溶液，在15、30、60、120分钟之后分别尾静脉采血，用血糖仪测量小鼠血糖浓度，结果见图2中B所示。横坐标为时间，单位为分钟，纵坐标为血糖浓度，单位为毫摩尔每升。
药效学试验表明：间苯三酚类化合物guttiferone J具有极好的降血糖，增强胰岛素敏感性的作用，且表现出一定的浓度依赖性。间苯三酚类化合物guttiferone J给药治疗后能改善高脂食物喂饲导致的胰岛素抵抗，给药后相较模型组血清胰岛素水平以及HOMA-IR水平显著降低，改善胰岛素抵抗。
试验例4
高脂食物诱导的肥胖小鼠减肥实验
观察本发明所涉及的间苯三酚类化合物guttiferone J对高脂食物诱导的肥胖小鼠体重和脂肪组织系数的影响。
肥胖小鼠造模和干预：方法同上述试验例3。
体重和脏器系数：称量小鼠体重，解剖小鼠，取附睾脂肪组织、腹股沟脂肪组织和肝脏，分别用天平称重，并计算脏器系数，结果见表2和表3。
表2间苯三酚类化合物guttiferone J对高脂食物诱导的肥胖小鼠体重的作用
#与RD组差异显著。*与HFD模型组差异显著。
表3间苯三酚类化合物guttiferone J对高脂食物诱导的肥胖小鼠脂肪组织和肝脏重量的作用
#与RD组差异显著。*与HFD模型组差异显著。
药效学试验表明：间苯三酚类化合物guttiferone J具有极好的减肥作用，且表现出一定的浓度依赖性。间苯三酚类化合物guttiferone J给药治疗后能降低高脂食物喂饲导致的小鼠体重增加，低剂量组和高剂量组体重下降率显著低于模型组，另外附睾脂肪组织、腹股沟脂肪组织的重量，在间苯三酚类化合物guttiferone J给药后显著下降，而肝脏的重量不影响。
试验例5
高脂食物诱导的肥胖小鼠降血脂实验
观察间苯三酚类化合物guttiferone J对高脂食物诱导的高血脂小鼠胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白的影响。
高血脂小鼠造模和干预：方法同上述试验例3。
血脂分析：小鼠禁食16小时后，摘眼球取血，血凝后于3500r/min离心10分钟，将上层血清转移，按照总甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白试剂盒(南京建成)说明测定血清甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白含量，结果见表4。
表4间苯三酚类化合物guttiferone J对总甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白的作用
#与RD组差异显著。*与HFD模型组差异显著。
药效学试验表明：间苯三酚类化合物guttiferone J具有良好的降血脂作用。与模型组相比，本发明间苯三酚类化合物guttiferone J给药治疗后能降低总甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白水平，低剂量组和高剂量组总甘油三酯下降率分别为35.0％和36.2％低剂量组和高剂量组总胆固醇下降率分别为41.0％和41.9％，低剂量组和高剂量组低密度脂蛋白下降率分别为34.5％和34.0％。
综上所述，本申请提供的间苯三酚类化合物guttiferone J可用于制备预防和/或治疗肥胖、高血糖和高血脂的食品或药物，以及该化合物可作为活性成分与制药学上可接受附加剂的药物组合物用于制备预防和/或治疗肥胖、高血糖和高血脂的食品或药品。
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种间苯三酚类化合物的制备方法，其特征在于，所述间苯三酚类化合物的化学结构式为：
所述间苯三酚类化合物的制备方法包括以下步骤：
将藤黄果乙醇提取物依次进行石油醚、氯仿萃取，取氯仿萃取液进行大孔树脂分离；
大孔树脂分离包括：以乙醇-水为洗脱剂，按乙醇与水的体积比依次为0:100、25-35:75-65、55-65:45-35、85-95:15-5的比例进行梯度洗脱，收集第四个梯度洗脱所得的洗脱液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述藤黄果乙醇提取物是经乙醇体积浓度为92-98vt％的乙醇水溶液对藤黄果果实进行提取而得；
优选地，所述藤黄果乙醇提取物是经乙醇体积浓度为95vt％的乙醇水溶液提取而得。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，大孔树脂分离是按乙醇与水的体积比依次为0:100、30:70、60:40、90:10的比例进行梯度洗脱；
优选地，大孔树脂分离过程中，所用的大孔树脂的填料为D101，每个梯度所使用的洗脱剂的体积为8-15L，洗脱剂的流速为80-180mL/min。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，还包括：将大孔树脂分离过程中收集的洗脱液进行硅胶柱层析；
硅胶柱层析是以体积比为85-95:15-5的石油醚-丙酮为洗脱剂进行等度洗脱。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，硅胶柱层析是以体积比为90:10的石油醚-丙酮为洗脱剂进行等度洗脱；
优选地，硅胶柱层析过程中，硅胶柱中硅胶的目数为200-500目，洗脱剂的总体积为15-20L，洗脱剂的流速为50-100mL/min。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括将硅胶柱层析所得的组分进行凝胶柱层析；
凝胶柱层析是以体积比为45-55:55-45的氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，凝胶柱层析是以体积比为50:50的氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱；
优选地，凝胶柱层析过程中，洗脱剂的总体积为1.5-2L，洗脱剂的流速为5-10mL/min。
8.一种药物，其特征在于，所述药物的成分中含有权利要求1所述的间苯三酚类化合物；
优选地，所述药物为用于预防或治疗肥胖、高血糖或高血脂的药物；
优选地，所述药物的剂型包括硬胶囊剂、软胶囊剂、散剂、颗粒剂、片剂、丸剂、蜜膏剂、口服液、酒剂或注射剂。
9.一种保健产品，其特征在于，所述保健产品的成分中含有权利要求1所述的间苯三酚类化合物。
10.一种食品，其特征在于，所述食品的成分中含有权利要求1所述的间苯三酚类化合物。
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