CN114574385B - 一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂，包括以下重量份数的原料：纳米零价铁羽毛蛋白3‑5份、鸭粪7‑9份、大豆秸秆20‑25份、马粪10‑15份、虾壳粉15‑20份、尿素10‑12份、磷酸氢二铵15‑18份、氯化钾6‑8份、微生物菌悬液20‑40份、辅剂5‑8份；所述微生物菌悬液包括枯草芽孢杆菌菌悬液和地衣芽孢杆菌菌悬液，二者体积比为20:7‑11:13；所述复合微生物菌剂中有效活菌数不少于≥2亿/克。所制备的复合微生物菌剂对果蔬根线虫的防治效果好，作用时间长，同时促进植株生长繁殖，且易于存放和运输，失活率低。
Description
技术领域
本发明涉及复合微生物技术领域，特别是涉及一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂及其应用。
背景技术
目前，市面上出现的杀菌剂琳琅满目，主要用于杀灭各种病原微生物，主要是用于减少农作物病虫害的产生，在长期防治农作物病害的过程中，病菌容易对杀菌剂产生耐药性，并且所用杀菌药量会逐年增加，造成杀菌效果差、用药量高、药害强、抗药性的能力差，用药成本高，对土壤污染严重。
现有的杀菌剂大多采用化学试剂，化学制剂滥用会对农作物产生一定的药物残留，严重影响食品安全，亦或者出现的杀菌剂中成分单一，杀菌效果低；目前市面上出现的生物杀菌剂，大多含有的生物有效成分单一，单一的微生物菌种或是单一的中药杀菌剂，抗菌效果差、同时生产成本高。
微生物菌料是活体肥料，它能够减缓和或减少农产品污染，而且能够改善农产品的品质，同时施用微生物肥料能改善土壤物理性状，有利于提高土壤肥力，绿色环保。
鉴于以上生物菌肥具有的上述优势，研发一种生物菌肥在本技术领域具有极其重要的意义。
发明内容
针对上述情况，本发明之目的在于提供一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂，能够提高对果蔬的根线虫的防治效果，同时促进果蔬生长。
其解决的技术方案是：
一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂，包括以下重量份数的原料：纳米零价铁羽毛蛋白3-5份、鸭粪7-9份、大豆秸秆20-25份、马粪10-15份、虾壳粉15-20份、尿素10-12份、磷酸氢二铵15-18份、氯化钾6-8份、微生物菌悬液20-40份、辅剂5-8份。
进一步的，所述微生物菌悬液包括枯草芽孢杆菌菌悬液和地衣芽孢杆菌菌悬液，二者体积比为20:7-11:13。
进一步的，所述复合微生物菌剂中有效活菌数不少于≥2亿/克。
进一步的，所述辅剂为玉米淀粉、羟甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠中的至少一种。
进一步的，所述纳米零价铁羽毛蛋白由以下步骤制备：氮气保护下，将羽毛蛋白溶于乙醇水溶液中，然后加入5％过硫酸钠水溶液，搅拌引发5min，再将12％二甲基二烯丙基氯化铵溶液与硫酸钠溶液依次滴加至引发的羽毛蛋白溶液中，然后加入纳米零价铁的悬浮液，在回流条件下继续反应4h，然后旋转蒸发除去乙醇，调节pH至13，离心取上清液，冷冻干燥得到纳米零价铁羽毛蛋白。
进一步的，其特征在于，所述羽毛蛋白从家禽包括但不限于鸡、鸭、鹅中获取得到。
进一步的，所述的一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂的制备方法包含以下步骤：
(1)将鸭粪、大豆秸秆、马粪、虾壳粉、尿素、磷酸氢二铵、氯化钾、纳米零价铁载体蛋白混合粉碎至粉末，过100-200目，混合物；(2)将微生物菌悬液滴加到混合物中，发酵8-12h，然后低温干燥至含水量15-20％，得复合微生物菌湿粉；(3)将复合微生物菌湿粉与辅剂混合造粒，干燥，得含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂。
进一步的，所述复合微生物菌剂为圆形颗粒剂，粒径为3mm。
进一步的，所述复合微生物菌剂用于果蔬施肥和根线虫的防治。
由于以上技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明所制备的复合微生物菌剂纳米零价铁羽毛蛋白和枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌联合使用能够显著增强对根线虫的防治效果，减少根线虫对药物的抗性，同时添加马粪、鸭粪、虾壳粉等，为微生物菌的载体，提高菌落的存活时间和丰富土壤微生物，同时微生物又进一步促进马粪、鸭粪、虾壳粉中的营养物质被植株吸收利用，促进植株生长繁殖，此外，将微生物菌剂与辅剂制备成颗粒剂，易于存放和运输，有效减少微生物菌的失活率，使其保持较高的活性，同时能够减缓在土壤中的释放，延长作用时间。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作详细描述，但需要强调的是，本发明并不受限于所述的具体实施方式；下述实施例所用微生物菌种可自行分离或通过购买得到；下述实施例所述原料无特殊说明均可通过常规方法制备或购买获得。
实施例1
提供一种纳米零价铁羽毛蛋白的步骤制备：氮气保护下，将4g羽毛蛋白溶解在100mL的70％乙醇水溶液中，然后加入5％过硫酸钠水溶液4mL，搅拌引发5min；再将12％二甲基二烯丙基氯化铵溶液20mL与剩余过硫酸钠溶液16mL滴加至引发的羽毛蛋白溶液中，然后加入纳米零价铁的悬浮液10mL，在回流条件下继续反应4h，反应结束后旋转蒸发除去乙醇，调节pH至13，离心取上清液，冷冻干燥得到纳米零价铁羽毛蛋白；
所述纳米零价铁的悬浮液通过液相还原法，在氮气保护的液相体系中，用硼氢化钾还原硫酸亚铁得到纳米零价铁，用零价铁制备浓度为0.3g/L的纳米零价铁的悬浮液。
实施例2
提供一种枯草芽孢杆菌菌悬液的制备方法：将枯草芽孢杆菌种子液接种于PDA液体培养基，28℃下培养20h后，然后再按3％的接种量接种到发酵培养基上，于30℃下培养48h，得枯草芽孢杆菌菌悬液，所述发酵培养基由灭菌后的葡萄糖1％、蛋白胨1％、酵母粉0.5％、硫酸镁0.15％、磷酸二氢钾0.15％、余量的水组成，PH调节至6.8-7.2。
提供一种地衣芽孢杆菌菌悬液的制备方法：将地衣芽孢杆菌种子液接种于葡萄糖蛋白胨培养基，28℃下培养20h后，然后再按3％的接种量接种到发酵培养基上，于30℃下培养48h，得地衣芽孢杆菌菌悬液，所述发酵培养基由灭菌后的：豆粕粉11％、麸皮粉5％、玉米粉2％、余量的水组成，PH调节至5.5-6.5。
实施例3
一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂，包括以下重量份数的原料：纳米零价铁羽毛蛋白3份、鸭粪7份、大豆秸秆20份、马粪10份、虾壳粉15份、尿素10份、磷酸氢二铵15份、氯化钾6份、微生物菌悬液20份、辅剂5份；所述微生物菌悬液包括枯草芽孢杆菌菌悬液和地衣芽孢杆菌菌悬液，二者体积比为20:7；所述辅剂为玉米淀粉、羟甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮的混合物；所述羽毛蛋白从家禽包括但不限于鸡、鸭、鹅中获取得到。
实施例4
一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂，包括以下重量份数的原料：纳米零价铁羽毛蛋白4份、鸭粪8份、大豆秸秆22份、马粪13份、虾壳粉18份、尿素11份、磷酸氢二铵16份、氯化钾7份、微生物菌悬液30份、辅剂6份；所述微生物菌悬液包括枯草芽孢杆菌菌悬液和地衣芽孢杆菌菌悬液，二者体积比为17:13；所述辅剂为玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠中的混合物；所述羽毛蛋白从家禽包括但不限于鸡、鸭、鹅中获取得到。
实施例5
一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂，包括以下重量份数的原料：纳米零价铁羽毛蛋白5份、鸭粪9份、大豆秸秆25份、马粪15份、虾壳粉20份、尿素12份、磷酸氢二铵18份、氯化钾8份、微生物菌悬液40份、辅剂8份；所述微生物菌悬液包括枯草芽孢杆菌菌悬液和地衣芽孢杆菌菌悬液，二者体积比为11:13；所述辅剂为聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠中的混合物；所述羽毛蛋白从家禽包括但不限于鸡、鸭、鹅中获取得到。
实施例6
提供一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂的制备方法，包含以下步骤：按实施例3-5中所述比例(1)将鸭粪、大豆秸秆、马粪、虾壳粉、尿素、磷酸氢二铵、氯化钾、纳米零价铁载体蛋白混合粉碎至粉末，过200目，混合物；(2)将微生物菌悬液滴加到混合物中，发酵12h，然后低温干燥至含水量20％，得复合微生物菌湿粉；(3)将复合微生物菌湿粉与辅剂混合造粒，干燥，得含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂；所述复合微生物菌剂为圆形颗粒剂，粒径为3mm；所述复合微生物菌剂中有效活菌数不少于≥2亿/克。
对比例1
与将实施例4相同，区别是将“纳米零价铁羽毛蛋白”成分去掉，制备方法同实施例6。
对比例2
与将实施例4相同，区别是将“马粪”成分去掉，制备方法同实施例6。
对比例3
与将实施例4相同，区别是将“鸭粪”成分去掉，制备方法同实施例6。
对比例4
与将实施例4相同，区别是将“虾壳粉”成分去掉，制备方法同实施例6。
对比例5
与将实施例4相同，区别是将“地衣芽孢杆菌”成分去掉，制备方法同实施例6。
试验例
处理试剂：实施例3-5、以及对比例1-5制备的复合微生物菌剂。
处理方法：(1)实验组将处理试剂与表层土壤(25cm以上)混匀，用量：30g/m2；两个对照组：不添加任何处理试剂。
以黄瓜为例，将黄瓜种子催芽后，移栽于上述处理及对照土壤中，每个处理均匀播种10株，在移栽后的植株根部浇灌线虫卵悬液，每个处理接种1000粒根结线虫卵，其中一个对照组不接种根线虫卵，作为空白组，于温室下常规培养，土壤湿度保持65％左右。
检测：60天后，(1)采取五点取样法，在根际去除表土，取10-20cm深，距植株5cm的土壤，检测根线虫的含量；(2)并对黄瓜的株高、茎粗、地上部鲜重和干重进行调查，与对照组相比，计算提高率；(3)将黄瓜根部用水洗净，观察根结数，确定病情，计算防治率。
病情指数分级标准为：0级，根系上无根结；1级，1％～20％根系上有根结，但互不相连；2级，21％～40％的根系上有根结，仅少量根结相连；3级，41％～60％的根系上有根结，50％以下根结相连；4级，61％～80％的根系上有根结，50％以上根结相连，部分根系变粗呈畸形；5级，80％以上的根系上有根结，且相互连接，多数根系畸形；病情指数(％)＝∑(各级病株数×相对级数值)/(调查总株数×最高病级数)×100；防治率(％)＝(对照组病情指数-处理组病情指数)/对照组病情指数×100。结果如表1：
表1.复合微生物菌剂作用于黄瓜各指标的检测结果
从表1可以看出，本发明制备的复合微生物菌剂对黄瓜种子土壤根线虫作用于黄瓜植株的防治效果高达91.5％，纳米零价铁羽毛蛋白、地衣芽孢杆菌、草芽孢杆菌联合使用，起到了主要的防效作用，而马粪、鸭粪、虾壳粉的加入，既作为微生物菌的载体，为其提供良好的生长环境，增强微生物菌的防治功效，又能提供含有丰富的N、P、K等营养成分，为直接被黄瓜生长所利用，并以微生物菌分解，促进黄瓜植株吸收利用，显著促进黄瓜植株的的生长。
以上所述是结合具体实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明具体实施仅局限于此；对于本发明所属及相关技术领域的技术人员来说，在基于本发明技术方案思路前提下，所作的拓展以及操作方法、数据的替换，都应当落在本发明保护范围之内。
Claims (3)
1.一种含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂，其特征在于，包括以下重量份数的原料：纳米零价铁羽毛蛋白3-5份、鸭粪7-9份、大豆秸秆20-25份、马粪10-15份、虾壳粉15-20份、尿素10-12份、磷酸氢二铵15-18份、氯化钾6-8份、微生物菌悬液20-40份、辅剂5-8份；所述微生物菌悬液由枯草芽孢杆菌菌悬液和地衣芽孢杆菌菌悬液组成，二者体积比为20:7-11:13；所述复合微生物菌剂中有效活菌数不少于2亿/克；
所述纳米零价铁羽毛蛋白由以下步骤制备：氮气保护下，将羽毛蛋白溶于乙醇水溶液中，然后加入5％过硫酸钠水溶液，搅拌引发5min，再将12％二甲基二烯丙基氯化铵溶液与硫酸钠溶液依次滴加至引发的羽毛蛋白溶液中，然后加入纳米零价铁的悬浮液，在回流条件下继续反应4h，然后旋转蒸发除去乙醇，调节pH至13，离心取上清液，冷冻干燥得到纳米零价铁羽毛蛋白；
所述辅剂为玉米淀粉、羟甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠中的至少一种；
所述复合微生物菌剂的制备方法，包含以下步骤：(1)将鸭粪、大豆秸秆、马粪、虾壳粉、尿素、磷酸氢二铵、氯化钾、纳米零价铁羽毛蛋白混合粉碎成粉末，过100-200目，得到混合物；(2)将微生物菌悬液滴加到混合物中，发酵8-12h，然后低温干燥至含水量15-20％，得复合微生物菌湿粉；(3)将复合微生物菌湿粉与辅剂混合造粒，干燥，得含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂；
所述复合微生物菌剂用于果蔬施肥和根线虫的防治。
2.根据权利要求1所述的含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂，其特征在于，所述羽毛蛋白从鸡、鸭或鹅中获取得到。
3.根据权利要求1所述的含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂为圆形颗粒剂，粒径为3mm。
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