CN113957011A - 一种农用液体微生物菌剂及其生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种农用液体微生物菌剂及其生产方法。本发明提供的农用液体微生物菌剂，包含枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌，所述微生物菌剂中，枯草芽孢杆菌活菌数为50‑100×108cfu/ml，地衣芽孢杆菌活菌数为5‑10×108cfu/ml。本发明同时提供了所述微生物菌剂的生产方法，包括菌株活化与扩繁、菌株发酵、成品配置三个步骤。本发明所提供的农用液体微生物菌剂功能菌株多样，且富含多种微生物次级代谢产物，产品均一稳定，货架期长，正确施入土壤后功能菌能快速在植物根系周边定殖，改良土壤微环境，促进植物生长。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种农用液体微生物菌剂及其生产方法。
背景技术
农用微生物菌剂是指目标微生物(有效菌)经过工业化生产扩繁后加工制成的活菌制剂。它具有直接或间接改良土壤、恢复地力，维持农作物根际微生物生态平衡，降解有毒、有害物质的作用；应用于农业生产，通过其中所含的微生物的生命活动，增加农作物养分的供应量或促进农作物生长，改善农产品品质及农业生态环境。
农用微生物菌剂主要针对农作物苗期及生长期多发的连作重茬和根部病害，可很好的改善日益严重的土壤退化问题，缓解作物产出状况越来越差的状况，有效提升农作物质量和品质。农用微生物菌剂产品按内含的微生物种类或功能特性可分为根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类微生物菌剂、硅酸盐微生物菌剂、光合细菌菌剂、有机物料腐熟剂、促生菌剂、菌根菌剂、生物修复菌剂等；按剂型可分为液体、粉剂、颗粒型。
现有的农用微生物菌剂产品存在着菌种类型单一，有效活菌数含量偏低，作物根系定殖率低等缺点，不能有效发挥出农用微生物菌剂的天然优势。
发明内容
本发明的目的是提供一种农用液体微生物菌剂及其生产方法。
第一方面，本发明提供一种农用液体微生物菌剂，包括菌液、助剂和营养成分；所述菌液包括枯草芽孢杆菌发酵液和地衣芽孢杆菌发酵液；所述助剂包括增稠剂、保水剂或稳定剂；所述增稠剂为糊精、淀粉、聚丙烯酸钠或琼脂中的一种或多种、所述的保水剂为聚丙烯酰胺、膨润土或三聚磷酸钠中的一种或多种。
在本发明提供的农用液体微生物菌剂中，营养成分的加入量为微生物菌剂总重量的20-30％，增稠剂加入量为微生物菌剂总重量的0.02-0.1％，保水剂加入量为微生物菌剂总重量的0.2-1.0％，稳定剂的加入量为微生物菌剂总重量的0.5-10％。
在本发明提供的农用液体微生物菌剂中，所述菌液中，枯草芽孢杆菌发酵液与地衣芽孢杆菌发酵液的质量比为(4.5-5.5):(0.8-1.2)。
在本发明提供的农用液体微生物菌剂中，枯草芽孢杆菌活菌数为50-100×108cfu/ml，地衣芽胞杆菌活菌数为5-10×108cfu/ml。
第二方面，本发明提供制备上述的农用液体微生物菌剂的方法，包括：菌株活化与扩繁、菌株发酵、成品配置；
所述成品配置中，向枯草芽孢菌发酵液和地衣芽孢菌发酵液的混合液中加入助剂和营养成分；所述的营养成分为有机养分和无机养分；所述的助剂为增稠剂、保水剂或稳定剂中的一种或多种。
本发明提供的方法中，营养成分的加入量为微生物菌剂总重量的20-30％，增稠剂加入量为微生物菌剂总重量的0.02-0.1％，保水剂加入量为微生物菌剂总重量的0.2-1.0％，稳定剂的加入量为微生物菌剂总重量的0.5-10％。
本发明提供的方法中，所述有机养分选自黄腐酸钾、糖蜜提取液、复合氨基酸溶液、大豆蛋白浓缩液、酵母提取液或谷氨酸结晶母液中的一种或多种，所述的无机养分选择磷酸氢二钾、磷酸一铵、磷酸二铵、硝铵磷、硫酸脲或磷酸脲中的一种或多种。
本发明提供的方法中，增稠剂为糊精、淀粉、聚丙烯酸钠和琼脂中的一种或多种，保水剂为聚丙烯酰胺、膨润土或三聚磷酸钠中的一种或多种，稳定剂为甘油、甘露醇、黄原胶、抗坏血酸或柠檬酸钠中的一种或多种。
本发明通过采用特定助剂与营养成分的搭配和协同生效作用，延长微生物菌剂的保质期，保质期为12-20个月；将微生物菌剂的杂菌率降为1.8％-3.6％。
本发明提供的方法，进行枯草芽孢菌株发酵时，0-8h通气比1:0.4，搅拌速度为80-100r/min；8-20h通气比1:1.2，搅拌速度为120-160r/min；20-32h通气比1:1搅拌速度为120-160r/min；32-40h通气比1:0.6，搅拌速度为80-100r/min的条件下发酵培养；芽孢率达到95％以上即停止发酵培养；得到枯草芽孢菌发酵液。
本发明提供的方法，进行地衣芽孢菌株发酵时，0-8h通气比1:0.6，搅拌速度为80-100r/min；8-16h通气比1:1.2，搅拌速度为120-160r/min；16-28h通气比1:1搅拌速度为120-160r/min；28-36h通气比1:0.6，搅拌速度为80-100r/min的条件下发酵培养；芽孢率达到95％以上即停止发酵培养；得到地衣芽孢菌发酵液。
本发明所用的通气比，更有利于得到高活菌数的发酵液，且发酵液染杂菌的概率更低。本发明所说的通气比(vvm，air volume/culture volume/min)是指，每分钟通气量与罐体实际料液体积的比值，其单位是立方米/(立方米*分钟)。例如，装有2m3培养液的发酵罐，若每分钟通入无菌空气1m3，则称为通气比为1:0.5，或简称通风量为0.5(V/V〃m)。
现有技术中，在发酵过程中通常采用固定的通气比，本发明在具体实践中发现，不同发酵时期，采用不同的通气比，可以达到纯化菌种和提高单位有效活菌数的目的，菌种纯化了，单位有效活菌数含量高了，杂菌的生存和营养空间就会被压缩，杂菌的含量比自然会降低。
本发明提供的方法，枯草芽孢杆菌发酵的温度为34-36℃，接种量为发酵培养基质量的3-13％，发酵时间为32-40小时；
地衣芽孢杆菌发酵的温度为34-36℃，接种量为发酵培养基质量的3-15％，发酵时间为28-35小时。
在本发明提供方的方法中，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的活化和扩繁培养基采用LB培养基，按照以下质量比例配成：胰蛋白胨1.0％、氯化钠1.0％、酵母提取物0.5％、纯化水配制、调节pH中性，121℃灭菌30min备用。
在本发明提供的方法中，枯草芽孢杆菌株发酵培养基按照以下质量比例配成：玉米淀粉2％-8％、豆粕粉2％-8％、葡萄糖0.5％-2％、白砂糖0.5％-2％、氯化钠0.05％-0.2％、磷酸氢二铵0.03％-0.2％、甘露醇0.02％-0.04％、硫酸锰0.025％-0.1％、磷酸氢二钾0.05％-0.2％、硫酸镁0.025％-0.1％、碳酸钙0.25％-1％，纯化水定容。
在本发明提供的方法中，地衣芽孢杆菌的发酵培养基按照以下质量比例配成：玉米浆干粉2％-8％、大豆粉2％-8％、乳糖0.5％-2％、氯化钠0.05％-0.2％、磷酸二氢钾0.03％-0.2％、甘露醇0.02％-0.04％、二氧化锰0.025％-0.1％、磷酸氢二钾0.05％-0.2％、硫酸镁0.025％-0.1％、碳酸钙0.25％-1％，纯化水定容。
根据本领域技术人员的理解，本发明还请求保护上述的农用液体微生物菌剂在提高土壤有益菌群落中的作用。以及上述的农用液体微生物菌剂在提高农作物产量，减少农作为病菌感染中的应用。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明提供的农用液体微生物菌剂中含枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌两种功能菌株；本发明通过在发酵过程中，对发酵通气比的精准控制，保持微生物菌剂中有效活菌数高，其中枯草芽孢杆菌活菌数为50-100×108cfu/ml，地衣芽胞杆菌活菌数为5-10×108cfu/m；
(2)本发明通过成品配置中，助剂和营养成分的协同效果，达到保质期长、杂菌率低的效果。本发明提供的农用液体微生物菌剂保质期为12-20个月，杂菌率仅为1.8％-3.6％。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明所用枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌在山东农大肥业科技有限公司购买得到。
实施例1
本实施例提供一种农用液体微生物菌剂的生产方法，具体步骤如下：
1、菌株活化与扩繁
(1)枯草芽孢杆菌活化与扩繁
将枯草芽孢杆菌菌种接种于平板培养基上，32℃培养24小时，得到活化菌种；所述平板培养基为LB固体培养基；
将枯草芽孢杆菌的活化菌种接种于摇瓶内的LB液体培养基中，接种量为培养基质量的2％，置于摇床培养箱中，转速为160转/分，通气量为1：0.6，32℃培养24小时，得到扩繁种子液；
(2)地衣芽孢杆菌活化与扩繁
将地衣芽孢杆菌菌种接种于平板培养基上，32℃培养24小时，得到活化菌种；所述平板培养基为LB固体培养基；
将地衣芽孢杆菌的活化菌种接种于摇瓶内的LB液体培养基中，接种量为培养基质量的2％，置于摇床培养箱中，转速为180转/分，通气量为1：0.6，32℃培养24小时，得到扩繁种子液；
2、菌株发酵
(1)枯草芽孢杆菌菌株发酵
发酵培养基灭菌：将发酵培养基各组分称量好，加入发酵罐内，开动搅拌，100rpm搅拌15min；加热，增压，发酵罐内压力达到0.12MPa，温度达到121℃，灭菌25-30min；
所述发酵培养基按照以下质量比例配成：
玉米淀粉2％、豆粕粉2％、葡萄糖0.5％、白砂糖0.5％、氯化钠0.05％、磷酸氢二铵0.03％、甘露醇0.02％、硫酸锰0.025％、磷酸氢二钾0.05％、硫酸镁0.025％、碳酸钙0.25％、纯化水定容；调pH为6.8。
接种：发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入枯草芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的5％；
发酵过程控制：接种后，控制发酵罐温度36℃，整个过程持续通入无菌空气，其中：0-8h通气比1:0.4，搅拌速度为80r/min；8-20h通气比1:1.2，搅拌速度为120r/min；20-32h通气比1:1搅拌速度为150r/min；32-40h通气比1:0.6，搅拌速度为80r/min的条件下发酵培养；发酵培养30h以后，每隔60分钟从发酵培养液中取样进行染色、镜检和计数，并计算芽孢率；芽孢率达到95％以上即停止发酵培养。
(2)地衣芽孢杆菌菌株发酵
发酵培养基灭菌：将发酵培养基各组分称量好，加入发酵罐内，开动搅拌，100rpm搅拌15min；加热，增压，发酵罐内压力达到0.12MPa，温度达到121℃，灭菌25-30min；
所述发酵培养基按照以下质量比例配成：
玉米浆干粉2％、大豆粉2％、乳糖0.5％、氯化钠0.05％、磷酸二氢钾0.03％、甘露醇0.02％、二氧化锰0.025％、磷酸氢二钾0.05％、硫酸镁0.025％、碳酸钙0.25％，纯化水定容；调pH为6.8。
接种：发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入地衣芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的5％；
发酵过程控制：接种后，控制发酵罐温度34℃，整个过程持续通入无菌空气，其中：0-8h通气比1:0.6，搅拌速度为80-100r/min；8-16h通气比1:1.2，搅拌速度为120-160r/min；16～28h通气比1:1搅拌速度为120-160r/min；28-36h通气比1:0.6，搅拌速度为80-100r/min的条件下发酵培养；发酵培养26h以后，每隔60分钟从发酵培养液中取样进行染色、镜检和计数，并计算芽孢率；芽孢率达到95％以上即停止发酵培养。
3、成品配置
载体配置：将步骤2中所得发酵液加热至80℃，维持20分钟后过滤，得到枯草芽孢杆菌发酵液和地衣芽孢杆菌发酵，以质量比5：1比例混合搅拌均匀，备用。
成品配置：将15％黄腐酸钾、5％磷酸二氢钾、0.02％淀粉、0.2聚丙烯酰胺、0.5％甘油，加入到微生物菌剂液体制剂混合液中搅拌混合均匀，纯化水定容。
实施例2
本实施例提供一种农用液体微生物菌剂的生产方法，具体步骤如下：
本实施例与实施例1相同，区别在于，本实施例中枯草芽孢杆菌菌株发酵所用发酵培养基组分为：玉米淀粉5％、豆粕粉5％、葡萄糖1％、白砂糖1％、氯化钠0.1％、磷酸氢二铵0.1％、甘露醇0.03％、硫酸锰0.05％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.5％，纯化水定容；调pH为7.0。
发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入枯草芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％。
本实施例中地衣芽孢杆菌菌株发酵，所述发酵培养基按照以下质量比例配成：玉米浆干粉5％、大豆粉5％、乳糖1％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、甘露醇0.03％、二氧化锰0.05％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.5％，纯化水定容；调pH为7.0。
发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入地衣芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％。
本实施例对成品进行配置时，将所得发酵液加热至80℃，维持20分钟后过滤，得到枯草芽孢杆菌发酵液和地衣芽孢杆菌发酵，以质量比5：1比例混合搅拌均匀。
成品配置：将20％黄腐酸钾、5％磷酸二氢钾、0.05％淀粉、0.5％聚丙烯酰胺、5％甘油，加入到微生物菌剂液体制剂混合液中搅拌混合均匀，纯化水定容。
实施例3
本实施例提供一种农用液体微生物菌剂的生产方法，具体步骤如下：
1、菌株活化与扩繁
(1)枯草芽孢杆菌活化与扩繁
将枯草芽孢杆菌菌种接种于平板培养基上，36℃培养24小时，得到活化菌种；所述平板培养基为LB固体培养基；
将枯草芽孢杆菌的活化菌种接种于摇瓶内的液体培养基中，接种量为培养基质量的2％，置于摇床培养箱中，转速为160转/分，通气量为1：0.6，36℃培养24小时，得到扩繁种子液；
(2)地衣芽孢杆菌活化与扩繁
将地衣芽孢杆菌菌种接种于平板培养基上，36℃培养24小时，得到活化菌种；所述平板培养基为LB固体培养基；
将地衣芽孢杆菌的活化菌种接种于摇瓶内的液体培养基中，接种量为培养基质量的2％，置于摇床培养箱中，转速为180转/分，通气量为1：0.6，36℃培养24小时，得到扩繁种子液。
2、菌株发酵
(1)枯草芽孢杆菌菌株发酵
发酵培养基灭菌：将发酵培养基各组分称量好，加入发酵罐内，开动搅拌，100rpm搅拌15min；加热，增压，发酵罐内压力达到0.12MPa，温度达到121℃，灭菌25-30min；
所述发酵培养基按照以下质量比例配成：
玉米淀粉8％、豆粕粉8％、葡萄糖2％、白砂糖2％、氯化钠0.2％、磷酸氢二铵0.2％、甘露醇0.04％、硫酸锰0.1％、磷酸氢二钾0.2％、硫酸镁0.1％、碳酸钙1％，纯化水定容；调pH为7.2。
接种：发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入枯草芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％；
发酵过程控制：接种后，控制发酵罐温度36℃，整个过程持续通入无菌空气，其中：0-8h通气比1:0.4，搅拌速度为80r/min；8-20h通气比1:1.2，搅拌速度为120r/min；20-32h通气比1:1搅拌速度为150r/min；32-40h通气比1:0.6，搅拌速度为80r/min的条件下发酵培养；发酵培养30h以后，每隔60分钟从发酵培养液中取样进行染色、镜检和计数，并计算芽孢率；芽孢率达到95％以上即停止发酵培养。
(2)地衣芽孢杆菌菌株发酵
发酵培养基灭菌：将发酵培养基各组分称量好，加入发酵罐内，开动搅拌，100rpm搅拌15min；加热，增压，发酵罐内压力达到0.12MPa，温度达到121℃，灭菌25-30min；
所述发酵培养基按照以下质量比例配成：
玉米浆干粉8％、大豆粉8％、乳糖2％、氯化钠0.12％、磷酸二氢钾0.2％、甘露醇0.04％、二氧化锰0.2％、磷酸氢二钾0.2％、硫酸镁0.1％、碳酸钙1％，纯化水定容；调pH为7.2。
接种：发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入地衣芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％；
发酵过程控制：接种后，控制发酵罐温度34℃，整个过程持续通入无菌空气，其中：0-8h通气比1:0.6，搅拌速度为80-100r/min；8-16h通气比1:1.2，搅拌速度为120-160r/min；16-28h通气比1:1搅拌速度为120-160r/min；28-36h通气比1:0.6，搅拌速度为80-100r/min的条件下发酵培养；发酵培养26h以后，每隔60分钟从发酵培养液中取样进行染色、镜检和计数，并计算芽孢率；芽孢率达到95％以上即停止发酵培养。
3、成品配置
载体配置：将步骤2中所得发酵液加热至80℃，维持20分钟后过滤，得到枯草芽孢杆菌发酵液和地衣芽孢杆菌发酵液，以质量比5：1比例混合搅拌均匀，备用。
成品配置：将20％黄腐酸钾、10％磷酸二氢钾、0.1％淀粉、1％聚丙烯酰胺、10％甘油，加入到微生物菌剂液体制剂混合液中搅拌混合均匀，纯化水定容。
对比例1
本实施例提供一种农用液体微生物菌剂的生产方法，具体步骤如下：
本实施例与实施例1相同，区别在于，本实施例中枯草芽孢杆菌菌株发酵所用发酵培养基组分为：玉米淀粉5％、豆粕粉5％、葡萄糖1％、白砂糖1％、氯化钠0.1％、磷酸氢二铵0.1％、甘露醇0.03％、硫酸锰0.05％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.5％，纯化水定容；调pH为7.0。
发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入枯草芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％。
本实施例中地衣芽孢杆菌菌株发酵，所述发酵培养基按照以下质量比例配成：玉米浆干粉5％、大豆粉5％、乳糖1％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、甘露醇0.03％、二氧化锰0.05％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.5％，纯化水定容；调pH为7.0。
发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入地衣芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％。
本实施例对成品进行配置时，将所得发酵液加热至80℃，维持20分钟后过滤，得到枯草芽孢杆菌发酵液和地衣芽孢杆菌发酵液，以质量比5：1比例混合搅拌均匀。
成品配置：将20％糖蜜提取液、5％磷酸二铵、0.05％淀粉、0.5％聚丙烯酰胺、5％甘油，加入到微生物菌剂液体制剂混合液中搅拌混合均匀，纯化水定容。
对比例2
本实施例提供一种农用液体微生物菌剂的生产方法，具体步骤如下：
本实施例与实施例1相同，区别在于，本实施例中枯草芽孢杆菌菌株发酵所用发酵培养基组分为：玉米淀粉5％、豆粕粉5％、葡萄糖1％、白砂糖1％、氯化钠0.1％、磷酸氢二铵0.1％、甘露醇0.03％、硫酸锰0.05％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.5％，纯化水定容；调pH为7.0。
发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入枯草芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％。
本实施例中地衣芽孢杆菌菌株发酵，所述发酵培养基按照以下质量比例配成：玉米浆干粉5％、大豆粉5％、乳糖1％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、甘露醇0.03％、二氧化锰0.05％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.5％，纯化水定容；调pH为7.0。
发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入地衣芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％。
本实施例对成品进行配置时，将所得发酵液加热至80℃，维持20分钟后过滤，得到枯草芽孢杆菌发酵液和地衣芽孢杆菌发酵，以质量比5：1比例混合搅拌均匀。
成品配置：将20％黄腐酸钾、5％磷酸二氢钾、0.5％聚丙烯酰胺、5％甘油，加入到微生物菌剂液体制剂混合液中搅拌混合均匀，纯化水定容。
对比例3
本实施例提供一种农用液体微生物菌剂的生产方法，具体步骤如下：
本实施例与实施例1相同，区别在于，本实施例中枯草芽孢杆菌菌株发酵所用发酵培养基组分为：玉米淀粉5％、豆粕粉5％、葡萄糖1％、白砂糖1％、氯化钠0.1％、磷酸氢二铵0.1％、甘露醇0.03％、硫酸锰0.05％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.5％，纯化水定容；调pH为7.0。
发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入枯草芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％。
本实施例中地衣芽孢杆菌菌株发酵，所述发酵培养基按照以下质量比例配成：玉米浆干粉5％、大豆粉5％、乳糖1％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、甘露醇0.03％、二氧化锰0.05％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.5％，纯化水定容；调pH为7.0。
发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入地衣芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％。
本实施例对成品进行配置时，将所得发酵液加热至80℃，维持20分钟后过滤，得到枯草芽孢杆菌发酵液和地衣芽孢杆菌发酵，以质量比5：1比例混合搅拌均匀。
成品配置：将20％黄腐酸钾、5％磷酸二氢钾、0.05％淀粉、0.5％三聚磷酸钠、5％甘油，加入到微生物菌剂液体制剂混合液中搅拌混合均匀，纯化水定容。
对比例4
本实施例提供一种农用液体微生物菌剂的生产方法，具体步骤如下：
本实施例与实施例1相同，区别在于，本实施例中枯草芽孢杆菌菌株发酵所用发酵培养基组分为：玉米淀粉5％、豆粕粉5％、葡萄糖1％、白砂糖1％、氯化钠0.1％、磷酸氢二铵0.1％、甘露醇0.03％、硫酸锰0.05％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.5％，纯化水定容；调pH为7.0。
发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入枯草芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％。
本实施例中地衣芽孢杆菌菌株发酵，所述发酵培养基按照以下质量比例配成：玉米浆干粉5％、大豆粉5％、乳糖1％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、甘露醇0.03％、二氧化锰0.05％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.5％，纯化水定容；调pH为7.0。
发酵罐温度降至32℃，无菌条件下，从接种口加入地衣芽孢杆菌的扩繁种子液，接种量为发酵培养基质量的6％。
本实施例对成品进行配置时，将所得发酵液加热至80℃，维持20分钟后过滤，得到枯草芽孢杆菌发酵液和地衣芽孢杆菌发酵，以质量比5：1比例混合搅拌均匀。
成品配置：将20％黄腐酸钾、5％磷酸二氢钾、0.05％淀粉、0.5％聚丙烯酰胺、5％柠檬酸钠，加入到微生物菌剂液体制剂混合液中搅拌混合均匀，纯化水定容。
对比例5固定发酵通气比
本对比例与实施例2相同，区别在于，本对比例发酵枯草芽孢杆菌及地衣芽孢杆菌时，采用1:1的固定通气比。
实验例1
本实验例中，对实施例1-3和对比例1-5配置完成的农用液体微生物菌剂进行跟踪检测；持续检测结果见表1。
表1
由表1可知，本发明的农用液体微生物菌剂，总菌含量为55-110×108cfu/ml，枯草芽孢杆菌活菌数为40-100×108cfu/ml，地衣芽胞杆菌活菌数为4-10×108cfu/ml，杂菌率仅为1.8-3.6％，货架期长达12-20个月。
实验例2
本实验例将实施例1-3和对比例1-4的农用液体微生物菌剂施入辣椒种植地块中，每亩施入微生物菌剂20-30kg(稀释800-1000倍)，种植辣椒2季后，土壤性状得到明显改良，具体指标见表2。
表2
由表2可见，施用农用液体微生物菌剂后，土壤性状得到明显改善，土壤pH降低至6.03-6.76，土壤容重降低为1.27-1.53g/cm3，电导率降为20.76-42.57ms/m；土壤中有益微生物的数量和含量明显提升。
施用农用液体微生物菌剂后，辣椒亩产量提高了20-25％，幼苗移栽成活率提高了10-15％，畸形果率降低了10-15％。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种农用液体微生物菌剂，其特征在于，包括菌液、助剂和营养成分；所述菌液包括枯草芽孢杆菌发酵液和地衣芽孢杆菌发酵液；所述助剂包括增稠剂、保水剂或稳定剂；所述增稠剂为糊精、淀粉、聚丙烯酸钠或琼脂中的一种或多种、所述的保水剂为聚丙烯酰胺、膨润土或三聚磷酸钠中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的农用液体微生物菌剂，其特征在于，营养成分的加入量为微生物菌剂总重量的20-30％，增稠剂加入量为微生物菌剂总重量的0.02-0.1％，保水剂加入量为微生物菌剂总重量的0.2-1.0％，稳定剂的加入量为微生物菌剂总重量的0.5-10％。
3.根据权利要求1所述的农用液体微生物菌剂，其特征在于，
所述菌液中，枯草芽孢杆菌发酵液与地衣芽孢杆菌发酵液的质量比为(4.5-5.5):(0.8-1.2)。
4.根据权利要求1-3任一项所述的农用液体微生物菌剂，其特征在于，所述农用液体微生物菌剂中，枯草芽孢杆菌活菌数为50-100×108cfu/ml，地衣芽胞杆菌活菌数为5-10×108cfu/ml。
5.制备权利要求1-4任一项所述的农用液体微生物菌剂的方法，其特征在于，包括：菌株活化与扩繁、菌株发酵、成品配置；
所述成品配置中，向枯草芽孢菌发酵液和地衣芽孢菌发酵液的混合液中加入助剂和营养成分；所述的营养成分为有机养分和无机养分；所述的助剂为增稠剂、保水剂或稳定剂中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，枯草芽孢菌株发酵中，0-8h通气比1:0.4，搅拌速度为80-100r/min；8-20h通气比1:1.2，搅拌速度为120-160r/min；20-32h通气比1:1搅拌速度为120-160r/min；32-40h通气比1:0.6，搅拌速度为80-100r/min的条件下发酵培养；芽孢率达到95％以上即停止发酵培养；得到枯草芽孢菌发酵液。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，地衣芽孢菌株发酵中，0-8h通气比1:0.6，搅拌速度为80-100r/min；8-16h通气比1:1.2，搅拌速度为120-160r/min；16-28h通气比1:1搅拌速度为120-160r/min；28-36h通气比1:0.6，搅拌速度为80-100r/min的条件下发酵培养；芽孢率达到95％以上即停止发酵培养；得到地衣芽孢菌发酵液。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌发酵的温度为34-36℃，接种量为发酵培养基质量的3-13％，发酵时间为32-40小时；
地衣芽孢杆菌发酵的温度为34-36℃，接种量为发酵培养基质量的3-15％，发酵时间为28-35小时。
9.权利要求1-4任一项所述的农用液体微生物菌剂在提高土壤有益菌群落中的作用。
10.权利要求1-4任一项所述的农用液体微生物菌剂在提高农作物产量，减少农作为病菌感染中的应用。
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