CN114573567A - 一种吲唑环联三氮唑类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种吲唑环联三氮唑类化合物及其制备方法和应用，采用基于片段的药物设计策略，在对吲唑环上氨基酰化的同时，在端部苯环上引入了卤化取代基，以构建具有激酶抑制活性的吲唑联三氮唑类化合物库，并通过激酶活性筛选发现具有Bcr‑Abl激酶抑制活性的酪氨酸激酶抑制剂，并且能够用于制备抗肿瘤药物中，具有一定的抑制Bcr‑AblWT、Bcr‑AblT315I激酶活性，并且对K562细胞具有一定的细胞增值抑制活性。同时活性试验显示吲唑联三氮唑对化合物的抑制活性具有重要作用，能够提高受体与化合物之间的亲和力，可以作为Bcr‑Abl酪氨酸激酶抑制剂的药效片段。

Description

一种吲唑环联三氮唑类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于抑制剂制备技术领域，涉及一种吲唑环联三氮唑类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
慢性粒细胞白血病(CML)是一种发生于骨髓造血干细胞的恶性克隆增生性疾病，在成年白血病患者中所占比例高达15％～20％，其特征是CML患者体内能检测出Ph染色体。Ph染色体是由人体正常的22号染色体和9号染色体相互易位形成的断裂点聚集簇-艾尔贝逊(Bcr-Abl)融合基因，此融合基因编码产生酪氨酸激酶活性持续激活的Bcr-Abl融合蛋白。目前市场上上市了针对Bcr-Abl为靶标的小分子酪氨酸激酶抑制剂，但都存在耐药性以及其他临床不良反应等问题。随之，研究与开发新型的Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂已成为药学领域的热点之一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含有吲唑联三氮唑类化合物以及其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：
一种吲唑联三氮唑类化合物，该类化合物的结构式如下：
Figure BDA0003554628850000011
其中，R1、R2与R’具体如下：
Figure BDA0003554628850000012
Figure BDA0003554628850000021
一种如上所述的吲唑联三氮唑类化合物的制备方法，包括以下步骤：
1)叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸与含取代基苯胺类化合物缩合生成氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物；
2)氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物与甲基磺酰氯发生取代反应生成氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物；
3)氮气保护下，将氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物与叠氮化钠经取代反应生成氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物；
4)在抗坏血酸钠和五水合硫酸铜作用下，将6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺类化合物与氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物缩合后得到Boc保护的吲唑联三氮唑类化合物；
5)用含酰基化合物与Boc保护的吲唑联三氮唑类化合物反应，再用三氟乙酸脱去Boc保护基，得到吲唑环联三氮唑类化合物。
进一步的，叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸通过以下过程制得：
a)4-溴-2-氟苯甲腈与一水合肼发生反应制备6-溴-1H-吲唑-3-胺；
b)氮气保护下，6-溴-1H-吲唑-3-胺与三甲基硅基乙炔发生反应制备6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺；
c)用四丁基氟化铵三水化合物将6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺脱去三甲基硅基得到6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺；
d)冰水浴中L-羟基脯氨酸与二碳酸二叔丁酯发生取代反应，制备叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸。
进一步的，所述的步骤a)具体过程为：将4-溴-2-氟苯甲腈溶于正丁醇中，然后加入一水合肼，加热回流4h，经后处理得到6-溴-1H-吲唑-3-胺；
所述的步骤b)具体过程为：将6-溴-1H-吲唑-3-胺、碘化铜以及四(三苯基膦)钯加入到反应容器中，然后用橡胶塞密封容器，抽真空并回填氮气，加入三乙胺后再加入三甲基硅基乙炔，加热回流反应12h，经后处理纯化得到6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺。
进一步的，所述的步骤c)具体过程为：在溶有6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺的四氢呋喃溶液中，加入四丁基氟化铵三水化合物，然后在25℃～30℃下搅拌12h，经后处理纯化得到6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺；
所述的步骤d)具体过程为：L-羟基脯氨酸在0℃下溶于四氢呋喃和氢氧化钠溶液中，0℃下加入二碳酸二叔丁酯，然后在25℃～30℃下反应6h，浓缩后的产品0℃下L-羟基脯氨酸与二碳酸二叔丁酯发生取代反应，制备得到叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸。
进一步的，所述的步骤1)具体过程为：将叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸溶于二氯甲烷中，加入三乙胺，冷却至0℃，滴加含氯甲酸乙酯的二氯甲烷溶液，反应30min～1h后，生成活性中间体，然后，将含取代基苯胺类化合物溶液以0℃滴加到活性中间体中，在25℃～30℃下继续搅拌12h，经后处理得到氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物。
进一步的，含取代基苯胺类化合物为5-氨基-2-氯三氟甲基苯、2,4-二氯苯胺、4-溴苯胺或3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺；
所述的步骤2)具体过程为：氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物溶于二氯甲烷中，冷却至0℃，加入三乙胺搅拌15min后滴加甲基磺酰氯，在25℃～30℃下反应12h，经后处理得到氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物；
所述步骤3)的具体过程为：氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物溶于DMF中，加入叠氮化钠，然后在65～70℃的氮气保护下反应16h，再冷却至25℃～30℃，经后处理纯化得到氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物。
进一步的，所述步骤4)的具体过程为：将化合物6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺和化合物氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物溶于乙醇和水的混合溶剂中，然后加入抗坏血酸钠和五水合硫酸铜，得到悬浮液，将悬浮液在30℃下搅拌24h，浓缩，经后处理纯化后得到Boc保护基保护的吲唑联三氮唑类化合物；
所述步骤5)的具体过程为：Boc保护基保护的吲唑联三氮唑类化合物溶于无水二氯甲烷中，加入三乙胺，然后在0℃下搅拌30min，滴加含有乙酰氯或环丙甲酰氯的二氯甲烷溶液，再在25℃～30℃下反应2h，经纯化后得到脱Boc保护基的吲唑环联三氮唑类化合物。
一种如上所述的吲唑环联三氮唑类化合物在制备Bcr-Abl激酶抑制剂中的应用。
进一步的，Bcr-Abl激酶为wild-Abl激酶或T315I突变Abl激酶。
一种如上所述的吲唑环联三氮唑类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
进一步的，抗肿瘤药物为抗白血病细胞的药物。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果：
本发明利用sonogashira反应、点击化学、叠氮化、缩合等反应合成目标化合物，并构建了化合物库，该类化合物是具有新型分子结构的Bcr-Abl小分子酪氨酸激酶抑制剂，并通过MS、NMR等手段表征了目标化合物的结构。本发明采用基于片段的药物设计策略，以吲唑联三氮唑为铰链区结合片段，引入L-脯氨酸为柔性Linker，以构建具有激酶抑制活性的小分子化合物库，并通过ADP-Glo的激酶活性筛选发现具有Bcr-Abl激酶抑制活性的酪氨酸激酶抑制剂。激酶筛选试验表明此类化合物对Abl激酶、T315I突变Abl激酶均具有一定的抑制活性，其中R1为2,4-二氯苯基时，R2为环丙基甲酰基时，对Abl激酶的活性最佳。细胞增殖试验表明大部分化合物对K562细胞具有一定的抑制活性。其中当R1为3-氯-4-((甲基哌嗪-1-基)甲基)取代基时抗增殖活性最佳。构效关系分析发现：引入L-脯氨酸的衍生物与Abl激酶的ATP位点的空间匹配良好，说明在Bcr-Abl抑制剂的设计中引入L-脯氨酸具备可行性。在吲唑环上引入酰胺侧链可以提高小分子与受体的亲和力，因此，酰化的吲唑联三氮唑可以作为Bcr-Abl激酶抑制剂的新型铰链区作用药效片段。
附图说明
图1为本发明的合成路线图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明进行详细说明。
本发明的吲唑环联三氮唑类化合物的结构式为：
Figure BDA0003554628850000051
其中，R1、R2与R’具体如下：
Figure BDA0003554628850000052
Figure BDA0003554628850000061
参见图1，
一种如上所述的吲唑联三氮唑类化合物的制备方法，包括以下步骤：
1)4-溴-2-氟苯甲腈与一水合肼发生反应制备6-溴-1H-吲唑-3-胺；
2)氮气保护下，6-溴-1H-吲唑-3-胺与三甲基硅基乙炔发生反应制备6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺；
3)用四丁基氟化铵三水化合物将6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺脱去三甲基硅基得到6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺；
4)冰水浴中L-羟基脯氨酸与二碳酸二叔丁酯发生取代反应，制备叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸(Boc-L-羟基脯氨酸)；
5)Boc-L-羟基脯氨酸与含取代基苯胺类化合物缩合生成氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物；含取代基苯胺类化合物为5-氨基-2-氯三氟甲基苯、2,4-二氯苯胺、4-溴苯胺或3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺。
6)氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物与甲基磺酰氯发生取代反应生成氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物；
7)氮气保护下，将氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物与叠氮化钠经取代反应生成氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物。
8)在抗坏血酸钠和五水合硫酸铜作用下，将6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺类化合物与氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物缩合后得到Boc保护的吲唑联三氮唑类化合物。
9)用含酰基化合物与Boc保护的吲唑联三氮唑类化合物反应，再用三氟乙酸脱去Boc保护基，得到吲唑环联三氮唑类化合物。其中，含酰基化合物乙酰氯或环丙甲酰氯。
所述的步骤1)具体过程为：将4-溴-2-氟苯甲腈溶于正丁醇中，然后加入一水合肼，反应混合物加热回流4h，经后处理得到6-溴-1H-吲唑-3-胺。
所述的步骤2)具体过程为：将6-溴-1H-吲唑-3-胺,碘化铜,以及四(三苯基膦)钯加入到反应容器中。然后用橡胶塞密封容器，抽真空并回填氮气。以三乙胺为碱和溶剂，用注射器注射。室温(25℃～30℃)下5min后，加入三甲基硅基乙炔，加热回流反应12h，薄层色谱法记录反应完全。经后处理纯化得到6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺。
所述的步骤3)具体过程为：在溶有6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺的四氢呋喃溶液中，加入四丁基氟化铵三水化合物。将反应溶液在室温下搅拌12h。然后蒸发溶液除去四氢呋喃，残渣溶解于乙酸乙酯中。经后处理纯化得到6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺。
所述的步骤4)具体过程为：L-羟基脯氨酸在0℃下溶于四氢呋喃和氢氧化钠溶液中。在冰水浴中加入二碳酸二叔丁酯。混合物在室温下反应6h，直到薄层色谱检测到完全反应。持续冰水浴条件下，反应溶液在真空中浓缩。浓缩后的产品冰水浴中L-羟基脯氨酸与二碳酸二叔丁酯发生取代反应，制备得到叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸，无需提纯即可继续使用。
所述的步骤5)具体过程为：将叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸溶于二氯甲烷中，加入三乙胺。将溶液冷却至0℃，滴加含氯甲酸乙酯的二氯甲烷溶液。反应30min～1h后，生成活性中间体。然后，将含取代基苯胺类化合物溶液以0℃滴加到上述溶液中，在室温下继续搅拌12h。经后处理得到氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物。
所述的步骤6)具体过程为：氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物溶于二氯甲烷中，冷却至0℃。加入三乙胺搅拌15min。滴加甲基磺酰氯，在室温下反应12h。反应产物经后处理得到氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物。
所述步骤7)的具体过程为：氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物溶于DMF中，加入叠氮化钠。混合物在65～70℃的氮气保护下反应16h。然后将反应溶液冷却至室温，于冰水中沉淀出固体。反应混合物经后处理纯化得到氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物。
所述步骤8)的具体过程为：将化合物6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺和化合物氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物溶于等比例的乙醇和水的混合溶剂中。然后加入抗坏血酸钠和五水合硫酸铜。悬浮液在30℃下搅拌24h，反应液在真空中浓缩，经后处理纯化后得到Boc保护基保护的吲唑联三氮唑类化合物。
所述步骤9)的具体过程为：Boc保护基保护的吲唑联三氮唑类化合物溶于30mL无水二氯甲烷中，加入三乙胺。溶液在0℃下搅拌30min，滴加含酰基化合物的二氯甲烷溶液。溶液在室温下反应2h，真空脱除二氯甲烷，用乙酸乙酯层析纯化，得到产物。之后溶于30mL无水二氯甲烷中。在0℃下，滴加三氟乙酸。溶液在室温下搅拌2h，经纯化后得到脱Boc保护基的吲唑环联三氮唑类化合物。
如上述的含有吲唑联三氮唑类化合物在制备用于抑制Abl激酶、T315I突变Abl激酶活性药物中的应用。
如上所述的含有吲唑联三氮唑类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
抗肿瘤药物为抗白血病药物。
下面通过具体实施例进行说明。
实施例1
一种吲唑环联三氮唑类化合物，R1为4-Cl-3-CF3，R2为H，R’为Boc或H时，制备方法如下：
1)6-溴-1H-吲唑-3-胺的合成：将4-溴-2-氟苯甲腈(5.0g，25.1mmol)溶于正丁醇(20mL)中，然后加入一水合肼(1.0mL，50.3mmol)。反应混合物加热回流4h，冷却至室温，过滤，正己烷洗涤干燥，得到白色固体4.77g，产率为85％。
2)6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺的合成：将6-溴-1H-吲唑-3-胺(3.42g,16.12mmol),CuI(10％,0.31g,1.61mmol),以及Pd(PPh3)4(10％,1.86g,1.61mmol)加入到带有冷凝管和磁力搅拌的100mL双颈圆底烧瓶中。然后用橡胶塞密封容器，抽真空并回填氮气(3次)。以三乙胺(30mL)为碱和溶剂，用注射器注射。室温下5min后，加入三甲基硅基乙炔(4.74mL,48.36mmol)，加热回流反应12h，薄层色谱法(TLC)记录反应完全。反应冷却至室温，用水(50mL)淬火。然后用乙酸乙酯(50mL)稀释溶液，过滤。用水冲洗滤液，直至水相中看不到铜配合物的蓝色。用乙酸乙酯(30mL×3)提取复合水层。结合有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤，蒸发溶剂。粗品经快速柱层析(体积比石油醚：乙酸乙酯＝5：1)纯化得到产品2.94g，产率为76％。
3)6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺的合成：在溶有6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺(2.94g,12.25mmol)的50mL四氢呋喃溶液中，加入含有四丁基氟化铵三水化合物(1M,15mL～15mmol)的四氢呋喃溶液。将反应溶液在室温下搅拌12h。然后蒸发溶液除去四氢呋喃，残渣溶解于乙酸乙酯(50mL)中。有机相用水洗涤两次，每次20mL，再用30mL盐水洗涤一次，用无水硫酸钠干燥。脱除溶剂得到粗产物，经色谱(体积比石油醚：乙酸乙酯＝3：1)纯化得到化合物2.94g，产率为76％。Mp 202～204℃；EI-MS(m/z)158[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),7.68(d,J＝8.2Hz,1H),7.34(s,1H),6.95(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),5.45(s,2H),4.14(s,1H)。
4)Boc-L-羟基脯氨酸的制备：L-羟基脯氨酸(9.0g，68.7mmol)在0℃下溶于四氢呋喃(82.5mL)和氢氧化钠溶液(1M，82.5mL)中。在冰水浴中加入二碳酸二叔丁酯(15.75mL，68.7mmol)。混合物在室温下反应6h，直到薄层色谱检测到完全反应。反应溶液在真空中浓缩至80mL左右，在冰水浴中冷却，用1M盐酸酸化至pH 2～3，用100mL乙酸乙酯稀释。用乙酸乙酯(50mL×3)提取。结合的有机层用50mL的盐水洗涤2次，然后在无水硫酸钠上烘干得到无色油状物，无需提纯即可继续使用。
5)(2S,4R)-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)-4-羟基吡咯-1-羧酸叔丁酯的制备：将Boc-L-羟脯氨酸(3.48g，15.31mmol)溶于50mL的二氯甲烷中，加入三乙胺(1.5mL，15.31mmol)。将溶液冷却至0℃，滴加含有氯甲酸乙酯(2mL，15.31mmol)的2mL二氯甲烷溶液。反应30min～1h后，生成活性中间体。然后，将5-氨基-2-氯三氟甲基苯(2.7g，13.92mmol)溶于二氯甲烷(10mL)溶液以0℃滴加到上述溶液中，在室温下继续搅拌12h。反应溶液用50mL的二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(30mL×2)洗涤两次、水(30mL)洗涤两次和盐水(30mL)洗涤1次。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、层析(体积比石油醚：乙酸乙酯＝3：1)得到产物4.26g，产率75％。
6)(2S,4R)-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)-4-甲磺酰氧基吡咯-1-羧酸叔丁酯的制备：化合物(2S,4R)-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)-4-羟基吡咯-1-羧酸叔丁酯(3.79g，9.27mmol)溶于80mL二氯甲烷中，冷却至0℃。加入三乙胺(1.55mL，11.12mmol)，搅拌15min。滴加甲基磺酰氯(0.86mL，11.12mmol)，在室温下反应12h。反应用20mL水淬灭，用30mL盐水洗涤一次。有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、蒸发，得到产物3.87g，产率86％。EI-MS(m/z)487.05.10[M+H]+,485.00[M-H]-。
7)(2S,4S)-4-叠氮基-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备：化合物(2S,4R)-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)-4-甲磺酰氧基吡咯-1-羧酸叔丁酯(3.78g，7.76mmol)溶于10mL DMF中，加入叠氮化钠(0.99g，15.52mmol)。混合物在65～70℃的氮气保护下反应16h。然后将反应溶液冷却至室温，倒入100mL冰水中，沉淀出白色固体。反应混合物用乙酸乙酯80mL提取3次。有机相混合，用50mL的盐水洗涤1次，用无水硫酸钠干燥，用层析(体积比石油醚：乙酸乙酯＝5：1)纯化得到产物2.69g，产率为80％。熔点57.6～58.2℃，EI-MS(m/z)434[M+H]+，432[M-H]-。
8)(2S,4S)-4-(4-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(IDZ1)的制备：100mL圆底烧瓶中加入40mL乙醇和40mL水的混合物。然后加入化合物6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺(0.47g，3.0mmol)和化合物(2S,4S)-4-叠氮基-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.2g，3mmol)。然后加入抗坏血酸钠(0.1g，0.5mmol)和五水合硫酸铜(0.055g，0.25mmol)。悬浮液在30℃下搅拌24h，反应液在真空中浓缩至40mL，用乙酸乙酯萃取3次，每次30mL。经无水硫酸钠干燥、过滤、层析(体积比石油醚：乙酸乙酯＝1：3)，得到产物IDZ10.92g，产率为52％。Mp 147～149℃；EI-MS(m/z)591.1809[M+H]+,589.1551[M-H]-。HRMS m/z对C26H27ClF3N8O3([M+H]+)计算值为591.18413,实测值为591.18616。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.49(s,1H),10.56(s,1H),8.81(d,J＝6.8Hz,1H),8.19(d,J＝4.8Hz,1H),7.93–7.82(m,1H),7.78–7.63(m,3H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),5.38(s,2H),5.37–5.31(m,1H),4.48–4.41(m,1H),4.24–4.11(m,1H),3.86–3.74(m,1H),3.05–2.91(m,1H),2.66–2.55(m,1H),1.44(s,3H),1.30(s,6H)。
9)(2S,4S)-4-(4-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(IDZ2)的制备：化合物(2S,4S)-4-(4-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.30g，0.51mmol)溶于30mL无水二氯甲烷中。在0℃下，滴加2mL三氟乙酸。溶液在室温下搅拌2h，用50mL二氯甲烷稀释，用碳酸氢钠溶液调节PH值至8，用水洗涤3次，每次30mL。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，经色谱层析纯化(体积比石油醚：乙酸乙酯＝1；3)，得到产物(IDZ2)0.20g，产率为81％。Mp 164～166℃；EI-MS(m/z)491.25[M+H]+,489.30[M-H]-。HRMS m/z对C21H19ClF3N8O计算值为([M+H]+)491.13170,实测值为491.13228。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.58(s,1H),8.97(s,1H),8.20(d,J＝2.4Hz,1H),8.00(d,J＝8.5Hz,1H),7.89(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.84(s,1H),7.74(d,J＝8.8Hz,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),5.62–5.50(m,1H),4.76–4.72(m,1H),4.00–3.94(m,1H),3.90–3.86(m,1H),3.28–3.21(m,2H),2.89–2.82(m,1H)。
实施例2
一种吲唑环联三氮唑类化合物，R1为4-Cl-3-CF3，R2为乙酰基时，制备方法如下：
步骤1)～步骤8)同实施例1，得到(2S,4S)-4-(4-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。
9)(2S,4S)-4-(4-(3-乙酰氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(IDZ3)的制备：化合物(2S,4S)-4-(4-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.30g，0.51mmol)溶于30mL无水二氯甲烷中，加入三乙胺(0.37mL，2.7mmol)。溶液在0℃下搅拌30min，滴加含有乙酰氯(43μL,0.61mmol)的二氯甲烷(2mL)。溶液在室温下反应2h，真空脱除二氯甲烷，用色谱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：5)，得到产物(2S,4S)-4-(4-(3-乙酰氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯0.18g，产率为56％。之后产物溶于30mL无水二氯甲烷中。在0℃下，滴加2mL三氟乙酸。溶液在室温下搅拌2h，用50mL二氯甲烷稀释，用碳酸氢钠溶液调节PH值至8，用水洗涤3次，每次30mL。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，经色谱层析纯化(乙酸乙酯)得到化合物(IDZ3)0.10g，产率为83％。Mp 136～138℃；EI-MS(m/z)533.1145[M+H]+,531.1284[M-H]-。HRMS m/z对C23H21ClF3N8O2([M+H]+)计算值为533.14281,实测值为533.14267。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),10.43(s,1H),10.40(s,1H),8.81(d,J＝9.5Hz,1H),8.27(d,J＝12.7Hz,1H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),7.86(s,1H),7.81(d,J＝4.3Hz,1H),7.74–7.60(m,1H),7.49–7.42(m,1H),5.50–5.39(m,1H),5.20–5.15(m,1H),4.29–4.19(m,1H),4.04–3.97(m,1H),3.73–3.69(m,1H),3.54–3.45(m,1H),2.89–2.80(m,1H),2.11(s,3H)。
实施例3
一种吲唑环联三氮唑类化合物，R1为4-Cl-3-CF3，R2为环丙酰基，R’为H时，制备方法如实施例2。将实施例2中的乙酰氯替换为环丙甲酰氯，得到产物(2S,4S)-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-4-(4-(3-(环丙基甲酰氨基)-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)吡咯烷-2-甲酰胺(IDZ4)0.12g，产率为41％。Mp 126～128℃；EI-MS(m/z)559.20[M+H]+,557.15[M-H]-。HRMS m/z对C25H23ClF3N8O2([M+H]+)计算值为559.15846,实测值为559.15757.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),8.84(s,1H),8.67(s,1H),8.24(s,1H),7.96(d,J＝8.7Hz,1H),7.91(d,J＝8.2Hz,1H),7.75(d,J＝8.2Hz,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,1H),6.49(s,2H),5.23–5.13(m,1H),4.02–3.93(m,1H),3.52–3.48(m,1H),3.00–2.92(m,1H),2.87–2.80(m,1H),2.47–2.40(m,1H),1.24(s,1H),1.04(d,J＝5.0Hz,4H)。
实施例4
一种吲唑环联三氮唑类化合物，R1为2,4-di-Cl，R2为H，R’为Boc或H时，制备方法如同实施例1。将实施例1中5-氨基-2-氯三氟甲基苯替换为2,4-二氯苯胺，制备得到(2S,4S)-4-(4-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-((2,4-二氯苯基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(IDZ5)和(2S,4S)-4-(4-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(2,4-二氯苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(IDZ6)。
化合物IDZ5经色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：3)得到产物0.92g，产率为52％。Mp147～149℃；EI-MS(m/z)591.1809[M+H]+,589.1551[M-H]-。HRMS m/z对C26H27ClF3N8O3([M+H]+)计算值为591.18413,实测值为591.18616.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.49(s,1H),10.56(s,1H),8.81(d,J＝6.8Hz,1H),8.19(d,J＝4.8Hz,1H),7.93–7.82(m,1H),7.78–7.63(m,3H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),5.38(s,2H),5.37–5.31(m,1H),4.48–4.41(m,1H),4.24–4.11(m,1H),3.86–3.74(m,1H),3.05–2.91(m,1H),2.66–2.55(m,1H),1.44(s,3H),1.30(s,6H)。
化合物IDZ6经色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：5)后得到产物0.33g，产率为80％。Mp 201～203℃；EI-MS(m/z)457.20[M+H]+,455.30[M-H]-。HRMS m/z对C20H19Cl2N8O([M+H]+)计算值为457.10534,实测值为457.10483.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.64(s,1H),9.00(s,1H),8.06(d,J＝8.5Hz,1H),7.87(s,1H),7.74(d,J＝2.3Hz,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,2H),7.47(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),5.63–5.51(m,1H),4.82–4.78(m,1H),3.98–3.94(m,1H),3.91–3.87(m,1H),3.29–3.19(m,2H),2.88–2.78(m,1H)。
实施例5
一种吲唑环联三氮唑类化合物，R1为2,4-di-Cl，R2为乙酰基时，制备方法如同实施例2。将实施例2中5-氨基-2-氯三氟甲基苯替换为2,4-二氯苯胺，制备得到(2S,4S)-4-(4-(3-乙酰氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(2,4-二氯苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(IDZ7)。经色谱层析纯化(乙酸乙酯：甲醇＝9：1)后得到产物0.17g，产率为39％。Mp 100～103℃；EI-MS(m/z)499.15[M+H]+,497.25[M-H]-。HRMS m/z对C22H21Cl2N8O2([M+H]+)计算值为499.11645,实测值为499.11622.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.70(s,1H),10.40(s,1H),10.38(s,1H),8.79(s,1H),8.29(d,J＝8.9Hz,1H),7.81(d,J＝6.8Hz,2H),7.63(d,J＝1.8Hz,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(d,J＝9.0Hz,1H),5.17–5.08(m,1H),4.11–4.01(m,1H),3.94–3.84(m,1H),3.62–3.51(m,1H),2.92–2.84(m,1H),2.59–2.53(m,1H),2.11(s,3H)。
实施例6
一种吲唑环联三氮唑类化合物，R1为2,4-di-Cl，R2为环丙酰基，R’为H时，制备方法如实施例2。将实施例2中5-氨基-2-氯三氟甲基苯替换为2,4-二氯苯胺，制备得到(2S,4S)-4-(4-(3-环丙基甲酰氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(2,4-二氯苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(IDZ8)。经色谱层析纯化(乙酸乙酯：甲醇＝9：1)后得到产物0.17g，产率为36％。Mp216～208℃；EI-MS(m/z)525.20[M+H]+,523.35[M-H]-。HRMS m/z对C24H23Cl2N8O2([M+H]+)计算值为525.13210,实测值为525.13358。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.74(s,1H),10.71(s,1H),10.41(s,1H),8.84(s,1H),7.86(d,J＝7.3Hz,2H),7.74(s,1H),7.49–7.46(m,2H),5.60–5.40(m,1H),4.83–4.58(m,1H),3.98–3.81(m,1H),3.21–3.13(m,1H),2.86–2.77(m,1H),1.99–1.89(m,1H),1.24(s,1H),0.86–0.80(m,4H)。
实施例7
一种吲唑环联三氮唑类化合物，R1为4-Br，R2为H，R’为Boc或H时，制备方法如同实施例1。将实施例1中5-氨基-2-氯三氟甲基苯替换为4-溴苯胺，制备得到(2S,4S)-4-(4-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-((4-溴苯基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(IDZ9)和(2S,4S)-4-(4-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(4-溴苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(IDZ10)。
化合物IDZ9经乙酸乙酯色谱纯化得到1.29g，产率为57％。Mp 195～197℃；EI-MS(m/z)569.20[M+H]+,567.30[M-H]-.HRMS m/z对C25H28BrN8O3([M+H]+)计算值为567.14623，实测值为567.14575.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.50(s,1H),10.30(s,1H),8.82(s,1H),7.77–7.69(m,2H),7.62–7.57(m,2H),7.53–7.49(m,2H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),5.39(s,2H),5.37–5.30(m,1H),4.49–4.38(m,1H),4.21–4.13(m,1H),3.80–3.71(m,1H),3.02–2.90(m,1H),2.57–2.54(m,1H),1.43(s,3H),1.30(s,6H)。
化合物IDZ10经乙酸乙酯色谱纯化后得到产物0.21g，产率为85％。Mp 276～278℃；EI-MS(m/z)468.25[M+H]+,503.25[M+HCl-H]-。HRMS m/z对C20H20BrN8O([M+H]+)计算值为467.09434,实测值为467.09415。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H),8.92(s,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(s,1H),7.62(d,J＝8.9Hz,2H),7.55(d,J＝8.9Hz,2H),7.52(d,J＝8.7Hz,1H),5.58–5.52(m,1H),4.72–4.67(m,1H),3.98–3.93(m,1H),3.86–3.82(m,1H),3.26–3.20(m,2H),2.81–2.72(m,1H)。
实施例8
一种吲唑环联三氮唑类化合物，R1为4-Br，R2为乙酰基时，制备方法如同实施例2，将实施例2中5-氨基-2-氯三氟甲基苯替换为4-溴苯胺，制备得到(2S,4S)-4-(4-(3-乙酰氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(4-溴苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(IDZ11)。经色谱层析纯化(体积比乙酸乙酯：甲醇＝9：1)后得到产物0.13g，产率为48％。Mp 193～195℃；EI-MS(m/z)509.10[M+H]+,507.20[M-H]-。HRMS m/z对C22H22BrN8O2([M+H]+)计算值为509.10491,实测值为509.10555。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.72(s,1H),10.40(s,1H),10.13(s,1H),8.83(s,1H),7.87(s,1H),7.83(d,J＝7.9Hz,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,2H),7.51(d,J＝10.5Hz,1H),7.47(d,J＝9.0Hz,2H),5.22–5.11(m,1H),4.00–3.91(m,1H),3.51–3.44(m,2H),2.88–2.80(m,1H),2.40–2.33(m,1H),2.12(s,3H)。
实施例9
一种吲唑环联三氮唑类化合物，R1为4-Br，R2为环丙酰基时，制备方法如同实施例2。将实施例2中5-氨基-2-氯三氟甲基苯替换为4-溴苯胺，制备得到(2S,4S)-4-(4-(3-环丙基甲酰氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(4-溴苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(IDZ12)。经色谱层析纯化(体积比乙酸乙酯：甲醇＝9：1)后得到产物0.13g，产率为45％。Mp>300℃；EI-MS(m/z)535.15[M+H]+,535.20[M-H]-。HRMS m/z对C24H24BrN8O2([M+H]+)计算值为535.12056,实测值为535.12080.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.72(s,1H),10.71(s,1H),10.13(s,1H),8.82(s,1H),7.86(s,1H),7.83(d,J＝8.2Hz,1H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.50(d,J＝8.3Hz,1H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),5.22–5.12(m,1H),4.00–3.90(m,1H),3.52–3.47(m,1H),2.91–2.79(m,1H),2.43–2.33(m,1H),2.01–1.90(m,1H),1.24(s,1H),0.89–0.80(m,4H)。
实施例10
一种吲唑环联三氮唑类化合物，R1为3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)甲基，R2为H时，制备方法如下：
步骤1)～步骤4)同实施例1。
5)(2R,4S)-2-((3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)氨基甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备：
①1-(溴甲基)-2-氯-4-硝基苯的制备：向1-甲基-4-硝基-2-氯-苯(3.43g,20mmol)的1,2-二氯乙烷溶液中加入NBS(4.28g,24mmol)和AIBN(330mg,2mmol)。将反应混合物90℃加热12h。冷却后，向混合物中加入水。分离有机层，水层用二氯甲烷萃取。合并的有机物用盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。除去溶剂后，经硅胶柱快速色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)，得到产物。
②1-(2-氯-4-硝基苄基)-4-甲基哌嗪的制备：将1-(溴甲基)-2-氯-4-硝基苯(2.2g，8.8mmol)溶于无水二氯甲烷(30mL)中，加入1-甲基哌嗪(1.95mL，17.16mmol)。搅拌5min后，向溶液中倒入碳酸钾(1.21g，8.8mmol)。混合物在室温下反应3h，向混合物中加水，分离出有机层。水层用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤、无水硫酸钠干燥12h、过滤、柱层析(乙酸乙酯：甲醇＝9：1)，得到产物2.12g，产率为89％。
③3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺的制备：将1-(2-氯-4-硝基苄基)-4-甲基哌嗪(2.12g，7.86mmol)溶于30mL乙醇中，再加入催化剂Pd/C(10％，0.2g)。混合物在氢气(气球)下搅拌一夜。将固体过滤掉，滤液浓缩，得到淡黄色的固体产物。EI-MS(m/z)240.25[M+H]+。
④与施例1步骤5)相似，其中所用苯胺类化合物试剂为3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺。得到产物(2R,4S)-2-((3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)氨基甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。EI-MS(m/z)453.25[M+H]+,451.15[M-H]-。
步骤6)～步骤9)同实施例1。将实施例1中5-氨基-2-氯三氟甲基苯替换为3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺，制备得到(2S,4S)-4-(4-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(IDZ13)。经色谱纯化(氯仿：甲醇＝10：1)后得到产物0.58g，产率为86％。Mp 240～242℃；EI-MS(m/z)535.35[M+H]+,533.45[M-H]-。HRMS m/z对C26H32ClN10O([M+H]+)计算值为535.24491,实测值为535.24423.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.65(s,1H),9.01(s,1H),8.07(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),7.89(d,J＝11.2Hz,2H),7.78(s,1H),7.66–7.62(m,2H),5.60–5.53(m,1H),4.78–4.74(m,1H),4.26(s,2H),3.99–3.94(m,1H),3.90–3.87(m,1H),3.57(s,8H),3.47–3.42(m,1H),3.34–3.25(m,1H),2.85–2.75(m,4H)。
下面对本发明制得的具有抗肿瘤活性的吲唑联三氮唑类化合物进行Bcr-Abl激酶抑制活性筛选。
测定方法具体如下：
激酶Bcr-Abl1、Bcr-Abl(T315I)和底物Abltide购自Signal-Chem公司，选用Promega公司的ADP-GloTM Kinase Assays检测试剂盒检测目标化合物的抑酶活性，操作方法按照试剂盒说明进行。
Abl实验中，用buffer(2×)(Tris 80mM,MgCl2 20mM,BSA 0.2mg/mL,DTT 2mM)将ATP(1mM)稀释到80倍并配制成ATP(125μM)的buffer(2×)溶液；再将ATP(125μM)溶液和Abltide溶液按体积1:1配制成ATP(62.5μM)-Abltide(0.5μg/μl)的混合溶液备用；用buffer(1×)(Tris 40mM,MgCl2 10mM,BSA 0.1mg/mL,DTT 1mM)将ABL1激酶溶液稀释到100倍并配制成Abl1(1ng/μL)的buffer(1×)溶液备用。
Abl(T315I)实验中，ATP-Abltide以及Abl1(T315I)的配制步骤同上，不同的是此实验中，ATP和Abl1(T315I)的浓度分别为12.5μM和2ng/μL。
用buffer(1×)将四个目标化合物分别配制成1.5×10-5，1.5×10-6，1.5×10-7，1.5×10-8，1.5×10-9，1.5×10-10mol/L浓度梯度的样品溶液，于384孔板上每孔依次加入2μL ATP-Abltide的混合溶液，1μL样品溶液，2μL酶溶液；空白孔加3μl缓冲液和2μL ATP-Abltide的混合溶液；对照孔每孔加2μL ATP-Abltide的混合溶液，1μL缓冲液，2μL酶溶液，加毕，30℃下孵育60min；加入ADP-Glo试剂5μL，在25℃下孵育40min；最后加入Kinasedetection试剂，再在25℃下孵育30min。采用PerkinElmer多功能酶标仪的化学发光模块测定每孔的发光值，计算化合物对Abl的抑制率和IC50。
上述吲唑联三氮唑类化合物的激酶抑制活性如表1所示：
表1吲唑联三氮唑类化合物对Bcr-AblWT和Bcr-AblT315I抑制活性IC50(nM)
Figure BDA0003554628850000191
Figure BDA0003554628850000201
化合物IDZ1-IDZ13对Bcr-Abl和Bcr-AblT315I的激酶抑制活性的测定结果汇总在表1。可以看出，当吲唑作为核心结构与不同结合基团相互作用时，大部分的化合物对Bcr-Abl激酶具有较好的抑制活性，其中活性最好的是化合物IDZ4和IDZ12，其IC50值分别为1.5nM和0.83nM。而在Bcr-AblT315I激酶，大部分化合物的活性和阳性对照相当，其中，化合物IDZ13的活性最好，其IC50值为84.82nM。由上表中的数据可以发现，吲唑环上的氨基酰化有助于提高对Bcr-Abl激酶的活性(IDZ3，IDZ4，IDZ7，IDZ8，IDZ11，IDZ12>IDZ2，IDZ6，IDZ10)。一般来说，环丙基甲酰化比乙酰化的氨基更好，可以提高该系列的活性。同时，在端部苯环上引入了卤化取代基，不同取代基与抑制活性之间的关系可以大致概括为：3-氯-4-((甲基哌嗪-1-基)甲基)取代基>4-氯-3-三氟甲基取代基>2，4-二氯取代基>4-溴取代基。以上结果表明，取代基的不同会直接影响到化合物对激酶的抑制活性。
下面测定吲唑联三氮唑类化合物对肿瘤细胞的增值抑制活性。
采用MTT法测定吲唑联三氮唑类化合物对肿瘤细胞的增值抑制活性作用。
本发明提供的吲唑联三氮唑类化合物具有抗肿瘤的作用。对肿瘤细胞具有体外抑制增值活性效果，在人白血病细胞(K562细胞)中具有抑制肿瘤细胞的增值活性效果，可用于对白血病的治疗。
将处于生长指数期的人白血病细胞(K562细胞)用RPMI1640培养基稀释成104个/mL数量级的细胞溶液，平行接种于96孔培养板中(2000-4000个/孔)，每孔接种体积为180μL，并在37℃、5％CO2下培养12h；
每孔加入不同浓度的待测化合物20μL，得到孔中化合物的最终浓度为：1.5×10- 7mol/L，1.5×10-6mol/L，1.5×10-5mol/L，1.5×10-4mol/L，每个浓度设3个复孔，阴性对照设6个复孔，每个孔加细胞不加化合物，尼罗替尼或伊马替尼为阳性对照，继续在37℃、5％CO2下培养48h；
每孔加入MTT(5mg/mL)20μl，得到每个孔中MTT的终浓度为0.5mg/mL，在37℃、5％CO2下培养4h，小心吸去上清，每孔再加DMSO 150μL，振荡15min，用酶联免疫检测仪测量各孔490nm处的紫外吸收值(OD值)，然后计算细胞抑制率，并根据抑制率采用线性回归法计算求出化合物的IC50值；
细胞抑制率的计算公式为：
抑制率％＝(对照孔平均OD值－用药组平均OD值)/对照孔平均OD值×100％；
检测结果显示：与阴性对照组相比，吲唑联三氮唑类化合物对上述肿瘤细胞具有不同程度的体外抑制作用，如表2所示。
K562细胞增殖活性：
表2吲唑联三氮唑类化合物对K562细胞抑制活性IC50(μM)
Figure BDA0003554628850000221
细胞活性筛选试验表明化合物IDZ1-IDZ13对K562细胞都具有一定的细胞增值抑制活性，其IC50值在都微摩尔水平，范围为0.18μM-28.36μM。其中活性最好的化合物是IDZ13，IC50值为0.18μM。对吲唑联三氮唑类化合物来讲，在端部苯环上引入了不同类型的取代基时，对细胞增殖抑制活性的影响有一定差异，其中，3-氯-4-(甲基哌嗪-1-基)甲基取代基的细胞活性最好。另外，化合物IDZ4和IDZ8对K562细胞的增殖抑制活性较好。综上，化合物IDZ4、IDZ8和IDZ13对Bcr-Abl激酶和K562细胞都具有良好的抑制活性，可以展开进一步的深入研究。
本发明采用基于片段的药物设计策略，在对吲唑环上氨基酰化的同时，在端部苯环上引入了卤化取代基，以构建具有激酶抑制活性的吲唑联三氮唑类化合物库，并通过激酶活性筛选发现具有Bcr-Abl激酶抑制活性的酪氨酸激酶抑制剂IDZ4、IDZ8和IDZ13。通过激酶活性筛选发现具有Bcr-Abl激酶抑制活性的酪氨酸激酶抑制剂IDZ4、IDZ8和IDZ13。这三个化合物能够用于制备抗肿瘤(慢性粒细胞白血病)药物中，具有一定的抑制Bcr-AblWT、Bcr-AblT315I激酶活性，并且对K562细胞具有一定的细胞增值抑制活性。端部苯环上引入的卤化取代基，可以扩展Bcr-Abl激酶抑制剂的结构多样性，同时活性试验显示吲唑联三氮唑对化合物的抑制活性具有重要作用，能够提高受体与化合物之间的亲和力，可以作为Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂的药效片段。

Claims (10)

1.一种吲唑联三氮唑类化合物，其特征在于，该类化合物的结构式如下：
Figure FDA0003554628840000011
其中，R1、R2与R’具体如下：
Figure FDA0003554628840000012
2.一种如权利要求1所述的吲唑联三氮唑类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸与含取代基苯胺类化合物缩合生成氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物；
2)氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物与甲基磺酰氯发生取代反应生成氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物；
3)氮气保护下，将氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物与叠氮化钠经取代反应生成氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物；
4)在抗坏血酸钠和五水合硫酸铜作用下，将6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺类化合物与氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物缩合后得到Boc保护的吲唑联三氮唑类化合物；
5)用含酰基化合物与Boc保护的吲唑联三氮唑类化合物反应，再用三氟乙酸脱去Boc保护基，得到吲唑环联三氮唑类化合物。
3.一种根据权利要求2所述的吲唑联三氮唑类化合物的制备方法，其特征在于，叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸通过以下过程制得：
a)4-溴-2-氟苯甲腈与一水合肼发生反应制备6-溴-1H-吲唑-3-胺；
b)氮气保护下，6-溴-1H-吲唑-3-胺与三甲基硅基乙炔发生反应制备6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺；
c)用四丁基氟化铵三水化合物将6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺脱去三甲基硅基得到6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺；
d)冰水浴中L-羟基脯氨酸与二碳酸二叔丁酯发生取代反应，制备叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸。
4.一种根据权利要求3所述的吲唑联三氮唑类化合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤a)具体过程为：将4-溴-2-氟苯甲腈溶于正丁醇中，然后加入一水合肼，加热回流4h，经后处理得到6-溴-1H-吲唑-3-胺；
所述的步骤b)具体过程为：将6-溴-1H-吲唑-3-胺、碘化铜以及四(三苯基膦)钯加入到反应容器中，然后用橡胶塞密封容器，抽真空并回填氮气，加入三乙胺后再加入三甲基硅基乙炔，加热回流反应12h，经后处理纯化得到6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺。
5.一种根据权利要求3所述的吲唑联三氮唑类化合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤c)具体过程为：在溶有6-((三甲基硅基)乙炔基)-1H-吲唑-3-胺的四氢呋喃溶液中，加入四丁基氟化铵三水化合物，然后在25℃～30℃下搅拌12h，经后处理纯化得到6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺；
所述的步骤d)具体过程为：L-羟基脯氨酸在0℃下溶于四氢呋喃和氢氧化钠溶液中，0℃下加入二碳酸二叔丁酯，然后在25℃～30℃下反应6h，浓缩后的产品0℃下L-羟基脯氨酸与二碳酸二叔丁酯发生取代反应，制备得到叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸。
6.一种根据权利要求2所述的吲唑联三氮唑类化合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤1)具体过程为：将叔丁氧羰基保护的L-羟基脯氨酸溶于二氯甲烷中，加入三乙胺，冷却至0℃，滴加含氯甲酸乙酯的二氯甲烷溶液，反应30min～1h后，生成活性中间体，然后，将含取代基苯胺类化合物溶液以0℃滴加到活性中间体中，在25℃～30℃下继续搅拌12h，经后处理得到氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物。
7.一种根据权利要求2所述的吲唑联三氮唑类化合物的制备方法，其特征在于，含取代基苯胺类化合物为5-氨基-2-氯三氟甲基苯、2,4-二氯苯胺、4-溴苯胺或3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺；
所述的步骤2)具体过程为：氨化的Boc-L-羟基脯氨酸类化合物溶于二氯甲烷中，冷却至0℃，加入三乙胺搅拌15min后滴加甲基磺酰氯，在25℃～30℃下反应12h，经后处理得到氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物；
所述步骤3)的具体过程为：氨化的Boc-L-甲基磺酰基脯氨酸类化合物溶于DMF中，加入叠氮化钠，然后在65～70℃的氮气保护下反应16h，再冷却至25℃～30℃，经后处理纯化得到氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物。
8.一种根据权利要求2所述的吲唑联三氮唑类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤4)的具体过程为：将化合物6-乙炔基-1H-吲唑-3-胺和化合物氨化的Boc-L-叠氮基脯氨酸类化合物溶于乙醇和水的混合溶剂中，然后加入抗坏血酸钠和五水合硫酸铜，得到悬浮液，将悬浮液在30℃下搅拌24h，浓缩，经后处理纯化后得到Boc保护基保护的吲唑联三氮唑类化合物；
所述步骤5)的具体过程为：Boc保护基保护的吲唑联三氮唑类化合物溶于无水二氯甲烷中，加入三乙胺，然后在0℃下搅拌30min，滴加含有乙酰氯或环丙甲酰氯的二氯甲烷溶液，再在25℃～30℃下反应2h，经纯化后得到脱Boc保护基的吲唑环联三氮唑类化合物。
9.一种如权利要求1所述的含有吡啶联三氮唑类化合物在制备Bcr-Abl激酶抑制剂中的应用。
10.一种如权利要求1述的含有吡啶联三氮唑类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
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