CN114561405A - 木霉菌Harzianolide的合成基因簇在制备提高植物灰霉病抗性制剂中的应用 - Google Patents

木霉菌Harzianolide的合成基因簇在制备提高植物灰霉病抗性制剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了木霉菌Harzianolide的合成基因簇在制备提高植物灰霉病抗性制剂中的应用。木霉菌次级代谢产物Harzianolide在制备提高植物灰霉病抗性的制剂中的应用。本发明提供了Harzianolide在提高植物灰霉病抗性中的应用。所述的植物具体可以为番茄。本发明以Harzianolide为主要有效成分制备的制剂，通过诱导植物体内的相关激素信号路径，可显著增强植物对灰霉病的抗性，减少因灰霉病给植株带来的经济损失。采用本发明制剂防治植物灰霉病简单易行，可显著延迟和抑制灰霉病菌在叶片上的生长及病害的扩散，大大提高了植株对灰霉病的抗性。

Description

木霉菌Harzianolide的合成基因簇在制备提高植物灰霉病抗 性制剂中的应用
技术领域
本发明涉及木霉菌次级代谢产物Harzianolide合成基因簇的确定及在提高植物灰霉病抗性中的应用，属于应用微生物技术应用领域。
技术背景
木霉属真菌不仅广泛存在于有机物丰富的土壤中，在植物、植物残体及植物根际也普遍存在。其菌丝生长及孢子萌发能够适应较广的温湿度和pH范围，且腐生性强、繁殖速度快，可迅速占据有利空间。目前，木霉属真菌已广泛用于多种植物真菌病害的防治，是一种较理想的生防真菌和植物促生菌(Plant Growth Promoting Fungus，PGPF)。目前国内外对木霉菌的促生机制和生防机制已经进行了大量的研究，但因菌株之间的差异，整体理论研究还处于不断完善的阶段，尤其对其次级代谢产物的功能研究未有深入的报道。
木霉以产生丰富的次级代谢产物而闻名，其富有多种生物学功能，首先，参与木霉自身形态分化，如孢子的形成和菌丝的延伸等等；其次，参与拮抗多种病原真菌，响应土著微生物竞争，协助木霉定殖于土壤中；再次，调节“木霉-植物”的分子对话，表现出诱导植物抗性和促进植物生长的生物学功能。非核糖体途径合成的酮合酶(Polyketide synthase，PKS)和非核糖体多肽(nonribosomalpeptide synthetase，NRPS)合成的聚酮类物质因其独特的催化过程而成为木霉次生代谢产物多样性的在主要组成部分。而对木霉次级代谢产物的研究水平一直处于化合物鉴定和活性分析，其合成基因簇和代谢物相关性的研究及代谢产物的活性机制仍然极少被研究。随着真菌基因组学的发展，目前已完成多株木霉基因组的测序，发现大量的次级代谢产物合成基因簇，只有很少部分在不同种属之间保守，并且次级代谢基因簇中大部分基因功能未知。利用基因工程技术不断发现催化新的生理活性次级代谢产物合成的关键酶基因，从DNA水平上深入分析基因的功能，鉴定木霉次级代谢活性物质及合成途径，对明确木霉菌的促生机制、拮抗机制、菌株筛选与改造、制剂开发与工艺改良和田间应用技术等都具有重要理论意义。另外一方面，结合现代生物合成生物学，拓展木霉菌在农业化学和医药领域上的应用。
发明内容
本发明的目的是针对以上现有技术的不足，确定了木霉菌次级代谢产物Harzianolide的合成基因簇，且提供了Harzianolide在提高植株灰霉病抗性中的应用。
本发明的目的可通过以下技术方案实现：
木霉菌次级代谢产物Harzianolide在制备提高植物灰霉病抗性的制剂中的应用；所述的Harzianolide结构式如下所示：
Figure BDA0003534713150000021
本发明提供了Harzianolide在提高植物灰霉病抗性中的应用。
所述的植物具体可以为番茄。
本发明还提供了一种提高植物灰霉病抗性的制剂，所述制剂的有效成分为Harzianolide；以1L计，包括：Harzianolide 0.01mg。
所述的制剂通过如下方法进行制备：将Harzianolide先溶解于少量甲醇中，再加水，得到混合溶液；
本发明还提供了一种提高植物灰霉病抗性的方法，即：将所述的制剂用水稀释后对植物进行灌根。
贵州木霉NJAU 4742中编码次级代谢产物Harzianolide的基因簇，其特征在于由如SEQ ID No.1-SEQ ID No.8所示核苷酸序列组成。
本发明所述的基因簇在制备Harzianolide中的应用。
本发明所述的基因簇在制备提高植物灰霉病抗性的制剂中的应用。
一种重组表达突变子，其特征将以hph为筛选标记，pUC19为载体敲除harB的重组表达质粒。
所述的重组表达质粒，优选通过以下方法构建得到：
以保藏号为CGMCC NO.12166的NJAU 4742的基因组为模板，用引物harB-5’-F和harB-5’-R扩增转录因子harB上游编码序列，用引物harB-3’-F和harB-3’-R扩增转录因子harB下游编码序列，以pPcdna1质粒为模板扩增hph片段，扩增产物经确认纯化后采用ClonExpress MultiS One Step Cloning Kit进行同源重组连接至由Hind III和EcoR I双酶切后的pUC19线性化质粒上，构建得到pUC19-harB质粒；
一种基因工程菌株，其特征在于将所述的重组质粒转化保藏号为CGMCC NO.12166的NJAU 4742的野生型菌株所得。
本发明所述的工程菌株在验证NJAU 4742中Harzianolide合成基因簇的应用。
本发明详述：
1.确定Harzianolide的合成基因簇及该基因簇的组成结构
前期依据Harzianolide的特点推测并验证了木霉菌NJAU 4742中编码Harzianolide基因簇在富营养PDB摇瓶条件下能够稳定表达。通过antiSMASH、BLAST和荧光定量分析，推测Har基因簇编码合成Harzianolide，且该基因包含8个基因(HarA-HarH)，并受到HarB的调控。通过对Har基因簇中8个基因依次进行敲除，结合HPLC-MS与NMR技术分离，鉴定出Har基因簇编码合成木霉菌NJAU 4742次级代谢产物Harzianolide。
2.生物学功能验证
本研究发现在较低浓度下(0.01ppm)，Harzianolide的促生和诱导植物免疫效果更好，尤其是能诱导植物对灰霉病产生显著抗性。
所述的验证次生代谢产物Harzianolide的合成基因簇的工程菌株构建过程如下：
(1)载体构建
利用同源重组双交换敲除技术，以潮霉素磷酸转移酶抗性基因元件(hphcassette)作为筛选标记，对NJAU 4742中目标基因(HarA-HarH)进行敲除，具体的敲除及验证流程如图2中所示。以NJAU 4742基因组DNA为模板扩增目标敲除基因的上下游同源臂，以pPcdna1质粒为模板扩增hph片段，引物如表1所示。载体构建所用片段均由高保真酶(Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase)进行PCR扩增，扩增产物经确认纯化后采用ClonExpress MultiS One Step Cloning Kit进行同源重组连接至由Hind III和EcoR I双酶切后的pUC 19线性化质粒上，20μl反应体系如下：
Figure BDA0003534713150000041
(2)转化
PDA平板接种SQR-T037菌块，28℃培养10天后，产生大量新鲜分生孢子；用10mL生理盐水(0.8-0.9％W/V NaCl,0.05％W/V Tween)洗涤菌丝表面，经玻璃绒过滤，去除菌丝体，得到孢子悬液；
在玻璃纸覆盖的PDA平板上，取200μL孢子悬液涂布，28℃，避光培养16-20h。观察PDA平板上孢子是否萌发，如未萌发，延长培养时间；
配制溶解酶溶液：0.15g溶解酶溶于20mL溶液A(1.2M sorbitol，0.1M KH2PO4，pH5.6)，0.2μm滤膜过滤除菌；
取玻璃纸，用溶解酶溶液洗涤玻璃纸，收集萌发的孢子；28℃，100rpm培养萌发的孢子悬液90min；萌发的孢子悬液经装有玻璃绒的离心管过滤，除去菌丝，用溶液A冲洗，终悬液体积控制在20-30mL；4℃、2000rpm离心10min，去上清；
加20mL溶液A，再次离心，去上清；加1mL溶液B(1M sorbitol，50mM CaCl2，10mMTrisHCl，pH 7.5)，冰上得到原生质体；用血球板观察、计数，稀释原生质体至108个/mL得到原生质体悬浮液。用质粒大提试剂盒分别提取质粒pUC19-HarA、pUC19-HarB、pUC19-HarC等，Nanodrop测DNA浓度，确保质粒浓度达到1μg/μL；
准备15mL离心管中分别加200μL原生质体悬浮液、10μL纯化的质粒，如pUC19-HarA和50μL PEG(25％W/V PEG6000，50mM CaCl2、10mM TrisHCl，pH 7.5)；用枪头混匀，冰上放置20min；
加2mL PEG，轻轻混匀，20℃下放置5min；加2mL溶液B，轻轻混匀；
将2mL混合液涂布在覆盖层析纸的含1M蔗糖PDA平板上，层析纸预先剪成条形；28℃避光培养24h；
将条形层析纸片转到含100mg/L潮霉素的PDA平板上，28℃，避光培养36h，待条形层析纸边缘长出菌落后，挑取菌落，转接至新鲜的抗生素平板上，培养10天，至产孢；稀释梯度法进行单孢分离，纯化突变子，得到工程菌株。
(3)突变株鉴定与纯化
在超净工作台中用牙签挑取适量上述转化子菌丝，使用Phire Plant DirectMaster Mix(Thermo Scientific)试剂盒进行PCR验证，验证引物列于表1中。
分析木霉菌NJAU 4742产次生代谢产物Harzianolide
PDB摇瓶发酵条件下的野生型及ΔharA-ΔharH发酵液。随后，分别取一定量发酵液至新的50ml离心管中，加入等量乙酸乙酯并充分涡旋，静止萃取分层后，将上层有机相吸取至新的离心管中，重复2次。有机相用氮吹仪吹干后，加入HPLC级甲醇充分溶解。液相检测用的样品浓缩20倍。
高效液相色谱(HPLC)检测使用的仪器为Agilent 1200System，色谱柱为反相C18(XBridge 5μm,4.6×250mm)，检测条件如下：柱温，35℃；流动相A：水；流动相B：甲醇；流速：0.6ml/min；检测波长，230nm。梯度洗脱：0-20min，80％-20％流动相A；20-25min，20％流动相A；20min-25.10min，80％流动相A；25.10min-30min，80％流动相A。所有样品检测前均使用0.22μm有机相滤膜过滤。
本发明的有益效果：
本发明以Harzianolide为主要有效成分制备的制剂，通过诱导植物体内的相关激素信号路径，可显著增强植物对灰霉病的抗性，减少因灰霉病给植株带来的经济损失。采用本发明制剂防治植物灰霉病简单易行，可显著延迟和抑制灰霉病菌在叶片上的生长及病害的扩散，大大提高了植株对灰霉病的抗性。
本发明首次在木霉中鉴定次级代谢产物Harzianolide的合成基因簇，该基因簇由8个基因组成，包括Zn2Cys6转录调节因子HarB(氨基酸序列在Genbank数据库的登录号为OPB46143)、未知蛋白质HarC(氨基酸序列在Genbank数据库的登录号为OPB46144)、异戊醇氧化酶HarD(氨基酸序列在Genbank数据库的登录号为OPB46145)、黄素结合单加氧酶类家族蛋白HarE(氨基酸序列在Genbank数据库的登录号为OPB46146)、未知蛋白质HarF(氨基酸序列在Genbank数据库的登录号为OPB46147)、聚酮合酶HarA(氨基酸序列在Genbank数据库的登录号为OPB46148)、CE12 GDSL脂肪酶HarG(氨基酸序列在Genbank数据库的登录号为OPB46149)和未知蛋白质HarH(氨基酸序列在Genbank数据库的登录号为OPB46150)，同时整个基因簇受转录因子HarB的调控；本发明解析了木霉次级代谢产物Harzianolide的合成基因簇，对菌株筛选与改造、拓展木霉菌在农业化学和医药领域上的应用有重要的价值。
附图说明
图1基因敲除及验证流程图。
图2木霉野生型与8个敲除突变株PDB发酵液提取物中物质差异高效液相色谱图；检测波长为230nm。Std:标品；WT:野生型；210：ΔharB；211：ΔharC；212：ΔharD；213：ΔharE；214：ΔharF；215：ΔharA；216：ΔharG；217：ΔharH；
图3物质结构。
图4为番茄灰霉病接种3天后，病害发生情况的比较。A为病斑数量比较；B为番茄灰霉病接种5天后，ΦPSII的定量；C为台盼蓝染色比较病害严重情况；D为番茄灰霉病接种5天后，光系统II(ΦPSII)光化学量子产率的代表性叶绿素荧光成像。
图5为番茄灰霉病接种12h后，番茄叶片中灰霉病原菌的Acitn相对含量的比较
具体实施方式
下面结合具体实施案例进一步阐述本发明。列举的实施案例仅用于举例说明本发明的实施方法，不用于限制本发明的使用范围。凡未注明具体实施条件的，均为按照本领域技术人员熟知的常规条件进行。
实施例1.鉴定Harzianolide的合成基因簇
前期依据Harzianolide的特点推测并验证了木霉菌NJAU 4742中编码Harzianolide基因簇在富营养PDB摇瓶条件下能够稳定表达。提取木霉菌NJAU4742在PDB摇瓶条件的RNA进行PKS相关基因的转录水平分析，着重分析最显著的两个基因簇，并依次敲除基因簇中包含的各个基因。PDB液体发酵NJAU 4742及各突变株，乙酸乙酯萃取后旋转蒸发，在溶于甲醇，HPLC分析差异峰，其中ΔharA-ΔharH缺少目标峰；Har基因簇由8个基因组成，包括Zn2Cys6转录调节因子、未知蛋白质、异戊醇氧化酶、黄素结合单加氧酶类家族蛋白、未知蛋白质、聚酮合酶、CE12 GDSL脂肪酶和未知蛋白质，同时整个基因簇受转录因子HarB的调控。
(1)突变株ΔharA-ΔharH的构建
依据Harzianolide的特点推测并验证了木霉菌NJAU 4742中编码Harzianolide的基因簇在富营养PDB条件是活跃。构建HarA-HarH的敲除载体。以NJAU 4742基因组DNA为模板扩增目标敲除基因的上下游同源臂，以pPcdna1质粒为模板扩增hph片段，引物如表3-1所示。载体构建所用片段均由高保真酶(Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase)进行PCR扩增，扩增体系如下：
Figure BDA0003534713150000071
扩增条件：
Figure BDA0003534713150000072
Figure BDA0003534713150000081
扩增获得的片段经1％的琼脂糖凝胶检测确认片段大小正确后，采用诺维赞公司的FastPure Gel DNA Extraction Mini Kit进行纯化。纯化后的片段采用ClonExpressMultiS One Step Cloning Kit进行同源重组连接至由EcoR I和Hind III双酶切后的pUC19线性化质粒上，20μl反应体系如下：
Figure BDA0003534713150000082
反应液经移液器轻轻吸打混匀，37℃水浴反应30分钟后立即置于冰上冷却。取10μl重组产物加入到含有100μl的大肠杆菌DH5α的感受态细胞的离心管中，轻弹管壁进行混匀，置于冰上静置30分钟。反应结束后，将离心管置于42℃水浴热激45秒，随后冰上放置3分钟。紧接着，在离心管中加入900μl灭菌的LB液体培养基，37℃摇菌1小时使大肠杆菌复苏。菌株复苏后，5000rpm离心3分钟获得菌体，重悬涂布于含有氨苄青霉素的LB固体平板上，置于37℃培养箱中培养。转化子接种于含有氨苄青霉素的LB试管中，37℃，170rpm过夜培养后使用诺维赞公司的FastPure Plasmid Mini Kit提取质粒。以质粒为模板，分别取上游同源臂5’引物和下游同源臂3’引物进行PCR扩增。PCR产物通过1％琼脂糖凝胶检测后测序验证是否正确。含有测序确认正确质粒的大肠杆菌保存于20％的甘油中。
以经验证正确的质粒为模板，继续使用上游同源臂5’引物和下游同源臂3’引物进行PCR扩增，获取足量的融合片段。将获得的PCR产物切胶回收后，依据浓度分装成每管10μl(>500ng/μl)并保存于-20℃冰箱待用。
引物见表1。引物HarA-5F，HarA-5R，HarA-hph-F，HarA-hph-R，HarA-3F和HarA-3R用于构建敲除HarA的敲除片段；引物HarA-P1F，HarA-P1R，HarA-P2F，HarA-P2R，HarA-P3F和HarA-P3R用于HarA阳性突变子的筛选。HarB-HarH敲除片段的构建及阳性突变子的筛选同HarA。
(2)高效液相色谱分析差异峰
PDB摇瓶发酵条件下的野生型及ΔharA-ΔharH发酵液。随后，分别取一定量发酵液至新的50ml离心管中，加入等量乙酸乙酯并充分涡旋，静止萃取分层后，将上层有机相吸取至新的离心管中，重复2次。有机相用氮吹仪吹干后，加入HPLC级甲醇充分溶解。液相检测用的样品浓缩20倍。
实施例2.木霉菌NJAU 4742次级代谢产物Harzianolide具有促进植物生长诱导植物系统抗性的功能
过滤PDB摇瓶发酵条件下NJAU 4742的发酵液，以除去菌丝。剩余液体以2ml/min流速通过预处理XAD-4大孔吸附树脂柱中，之后以纯水洗柱，以60％甲醇溶液洗脱Harzianolide，采用TLC方法监测流出物，合并含有Harzianolide馏分，蒸干得到粗Harzianolide。采用硅胶柱层析精制Harzianolide，以300-400目硅胶柱分离，TLC监测化合物洗脱时间并收集含有Harzianolide成分，氮吹去除溶剂，得到油状化合物，即为Harzianolide纯品。
纯化后的样品经过核磁共振鉴定，确定化合物结构，鉴定出该化合物为Harzianolide。
称取Harzianolide纯品5.0mg，量取甲醇溶液10ml；将Harzianolide完全溶解于甲醇溶液中，获得母液；量取0.01ml母液，加入499.99ml水混匀，搅拌均匀后获得制剂。
选取水培技术，对处理组10天的番茄幼苗灌根施用上述制剂，每周处理两次；而对照组番茄幼苗则用0.01ml甲醇加入499.99ml水混匀，灌根处理，持续40天。灰霉病原菌接种前12h和48h分别再处理两次。接种12h后，摘取相同叶位番茄叶片，对灰霉病病原菌的Actin基因表达进行了检测，检测结果如图5，本发明制剂处理的植株叶片比对照的植株叶片具有明显较强的灰霉病抗性,叶片灰霉病原菌的Actin基因表达量下降56.78％。接种灰霉病原菌5天后，观察到本发明制剂处理的植株叶片比对照的植株叶片病斑数量明显减少，结果如图4A；通过调制叶绿素荧光成像系统(Image-Pam)对接种灰霉病原菌5天的叶片对叶片状态进行观测及光系统II(ΦPSII)光化学量子产率进行测量，结果如图4D和4B；对叶片进行台盼蓝染色，结果如图4C，本发明制剂处理的植株叶片比对照的植株叶片死细胞数量数量明显减少。
表1
Figure BDA0003534713150000101
Figure BDA0003534713150000111
Figure BDA0003534713150000121
Figure BDA0003534713150000131
Figure BDA0003534713150000141
Figure BDA0003534713150000151
Figure BDA0003534713150000161
序列表
<110> 南京农业大学
南京思农生物有机肥研究院有限公司
<120> 木霉菌Harzianolide的合成基因簇在制备提高植物灰霉病抗性制剂中的应用
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2003
<212> DNA
<213> 贵州木霉NJAU 4742(Trichoderma guizhouense NJAU 4742)
<400> 1
atggacttgt cgagatttct cgtcaccctc aacaatagac tcagtaagtt cctgccgccc 60
ccgcgactat actttgtgac tcgtggctga cacgaatcgc agaacaagca gaggcgcagc 120
tcgccacgac acgcctgatg cagcagcgga atcgacaacc ctcctacccg atggcatggg 180
gagatgttga tatcacgccg caaattgtaa actcttcgcc aaactcgagt cccacgagag 240
aggtgacccc gccacacttg gcctccggac caggctcaac ttatgatctg cagaagatgg 300
aggtgatgca cgataagggc atggtgcagc aaaacgtatc agactggtaa gtcacagcat 360
aaagaatccc cgcaggagct tgaatagaga gattaacatg ttccttcgaa tcaggtgcaa 420
ccaaacgagc acaacgtcta ctgcccctac agaggcaccc gagttctcgc cgtttgatgc 480
atttgccacg tccttgtcag cggacatcat gatgagccaa gcaatgccag agaacccccc 540
cttcgagttc gagcccatgt tctttgacat ttcatcatca tctacgagcc agtctgtgcc 600
cacagtgtcg gccacaattc ttcagggact gtatgttgaa actgattctc cagaccggcg 660
acgcgaagct gacatgaata gttacgaccg atactttgaa gtttttcacc ctatcatccc 720
cattattaac agaacacgtt tccagcatga aatgtcgcag ccgtcaccgt cggttgaagt 780
gcaggcactg tcgtatgcca tcggcacctt gaccgcattc tccgtacctg agctgcatta 840
ttacgtagat cactactatg aacaggctcg caatctcatg gatatttgcg agcgacagga 900
cagcggcgac tcattaagca acatcaacat aatgcaagcc tacgtaatct taaccctcta 960
cgagctgaag cagccaaact ttgcccgagc ctggctgaca ctcggccgcg cgattcggct 1020
ttccaaaatg atggggttgg acactgtgga aacggattcg agcatgggta cacaatgggg 1080
actgcgtaag cagctcattc atccgattag ctcagcggac caggaggaga ggcggcgagt 1140
tttttggagc ctcttcatct tcgactcatt tgcgagctta cgggtgagcg gtggcccagc 1200
cttcgatgga gatgtaagta cacgtattgg atgcagattt ttgctgtgat tccagctaac 1260
aaaattcaaa ggtcaatgtc cagcttccta gtctgagcga ctaccctgat tattcgaacg 1320
agagaatgcc tgggttacag caggtattcg acctgaacga aacggctccc atttcctcat 1380
ttgctgcaaa cgccatcatg atctgcctct accagcgcta ctacagccac atccaatccg 1440
catattcaga agcctcccat gcattctggg agacgcacta tgcgattgat aagtccctca 1500
accattgccg tacaaccctg ctggcgcagc acatgaacgg caacagtggc gagaacccga 1560
cttccatcgc gctgcgaatg aacttgaacg ctctcaagat caatttgcac gagacggtgc 1620
ttatcaaggt tgagaaggat caattgccag tgaacctcgc aacagatgcg gtggctcaat 1680
gcgtttgcgc cgttaccgac attgtccagg ccgtccagct gggcatgcgg ctgacgggca 1740
acaagcttga aacattccga catttggacc gatttcttgt ttggccaatt acaacttcta 1800
ttcaagtgtg cttccgcatg ctttacaatg gggaggatga tgccactccc tacatcaact 1860
ccctccgcat tctatccaat gcgatgaagg accttatcga ccctgagcat attgctccgg 1920
gcttacttga aaaggccgag gcccgagttg ccgaggcagc gcggtctaca aggaagaaac 1980
gaacagttga cgacgaacta tga 2003
<210> 2
<211> 766
<212> DNA
<213> 贵州木霉NJAU 4742(Trichoderma guizhouense NJAU 4742)
<400> 2
ttacacatca ccggtaccgc agaggatacg agagacacga atctcagcaa ggggttgacc 60
ggtctcgcta atggcaaagc gctggctgca agcaaacatc atgccctcca ggggcttgta 120
ggcctcatgg cctgatgtga ttgtcatttg ctcaactagg acacacacga gagattagcc 180
aaaacggcca tgccggcgct agaggcggac tagaagcacg aatactcact tccatctcca 240
aaaggaggag tctttgcatc gggggagccg gtgatcagcc caagaatggc cggggtcagt 300
tgggagacgc cattggcctc aaggcggatg gaccggttct ccttgtctga gatgatgcaa 360
gaaacactaa ggcgggcgtg ggtcttgtct gcatcaatac ggaaccagtc gtggccatgg 420
ctgagagtca tgtccagctt gggctcgaag cccgcgacag acttcaaggt gccctggcca 480
agaggctatc aaagtacttt tgtgagtggg tgttgattcg gggaacttgg aactgggaat 540
tcaagatgtg gacttacaac accaacgagg gaagaaccag tgtagatgtc tccacaaggg 600
aactggccgg caatgctaac ctgcgtagtg tgttaggctt gttgacttat tctgcacata 660
tactcaacca gatgtgggaa catttccgaa gacgaacctt gatgacaaag gcaggctgca 720
gggtggggaa gctctcgaga ggagcaacaa agtcttcaga agccat 766
<210> 3
<211> 1856
<212> DNA
<213> 贵州木霉NJAU 4742(Trichoderma guizhouense NJAU 4742)
<400> 3
atggctttgc aatcagccct cctcatgggc ttggccgccg tgggaagcgc cagctacatc 60
ccttcaactc ccgctcctgc caactgcaga gttcttcctg gagactcaga ctggccagcg 120
acttctcagt ggaatgcgct caacaagacc atcaatggac gcttgatcgc cgctgttccc 180
caggccagtg cttgccacga tgcgccgttc aacaactaca acgctacatt ctgcgcacag 240
attcaagctg ggtggaacga gaccaagttg taccagtatg ttactagaag catagaagca 300
catgatgaga agattcaaat ggactgacat gatttcagca tcgattcgcc tgctgagttc 360
ttgaacatgt actttgagaa ctacacttgc gacccgttca ctcctcggtc caagccttgt 420
ggtctgggta actacgccag ctacatcatc aacgtcactg gagctgccga tgtccaggct 480
ggtatcagct ttgccaagca gcacaatgtt cgcttgaaca tcaagaacac tggtcacgag 540
tgagtagatt aacaaccact atacacctct ataagaatta gactaaccaa gatatcctca 600
gctaccttgg aaagagcacc ggcaagggcg gtttgacctt ctggactcac aacctcaagt 660
ccacccagta catccccaag tacagctctt cctactacaa cggccctgct ctgaagcttg 720
gcgctggtgt cgagggtttc gaggcttacc ttgctgctta caactccgga aaccaaatcg 780
ttggtggatc ttgccctaca gtcggtatct ctggtggtta cagccagggt ggtggtcact 840
ctatgcttat gcctgctttt ggtcttgctg ctgataacgt tctcgagtgg gaggtcgtca 900
ctgctgatgg tagccacctg attgccactc ctacccagaa ctctgatctg tactgggcta 960
ttagcggtgg tggtggtggc acttttggtg ttgttttgtc catgaccagc cgagttcaca 1020
aggacggtat tgttggcggt gcttctctcg tcttcgacga cagcaaggtt ggcaatgacg 1080
ttttctggga ggctatcggt gctttccaca ctcttctccc cagcctcgtc gaccacggta 1140
acggtgccac ttacgtcctt actcctcacg agttccttac tctggctttc accatgcccg 1200
gcaaggatct tgacggtgtc aacgctctga tgaagccatt ccttgatgat cttaccagcc 1260
gcggcattga gtaccagtac gctcctcgtg tctctgccag ctactatgat cacgtctcct 1320
tctaccttgg acccctgcct gagggtacct ccgactacgc tcccttcacc ggtagccgta 1380
tcatgccccg agatctcctc ctcgacccca agcagaaccc catcatcatg aacgcccttc 1440
gcaatgccac catgaccgag ggttatgctc ctttcccctg ccaggctttc aacgtctctt 1500
accaggctca ccccgacaac gctgttcacc ccgcttggcg aactggtctg tctgtctgct 1560
tgactcctgg tgactgggat cctactgccg ctcctgctgc catgcaggct cgccaggact 1620
atgccgccaa cgtcctccag cccatgattg atgctgtcac ccctggtggt ggtgtctacc 1680
tcaacgaggc caactacaag cagcacaact ggcaggatgc cttccacggc tccaactacc 1740
ccaagcttct ctcaatcaag aagaagtacg accccaactc ccttttctat gccaacactg 1800
ccgtcggcag tgaggcctgg actgtggacg gcaacaacag actttgccgc gcttaa 1856
<210> 4
<211> 2009
<212> DNA
<213> 贵州木霉NJAU 4742(Trichoderma guizhouense NJAU 4742)
<400> 4
tcagttaaat ccaagaggct taacagagtt ggtgtggccg ttttcttgct tcacaatgct 60
aagcccatca gggccaacac taggtgtggc ggacccggcg gagacggggg tcatagaacc 120
agaagcagta taatcgggag ttgccctttg gcccagtgac tgaaggtatt cttgctgcat 180
gcccttgtac tcgctcgggt atgcaggtgc gaatagtcct gagaaaaagc ccttcttgcg 240
gtaagttttg acgccaagat caccgagtag agtatcaatg tactatatgc gagttagaaa 300
taaagtaaaa agggttataa aggggacaaa ggtccactta ctgggaggaa gtcgtagata 360
gcgtaggcgt gtttccggcc ctgagcaaca tatcgcttgc cggtccaggt gttccattca 420
gcaacttctt gttccatttc ttcctgggat gggacatcat ggaggccgag gaggaaagcg 480
gtaccccaaa gggcttgtgt ctcagatact gtgggagtga aaatggagtg gatgaatcca 540
gggaaggtga ctgagcgatc tccttgagca gcgagcttag gaacaataag gcggcgatag 600
tgtcggctag gaccgtgtag aagcttccgt ccacctgctg tcaactctcg ctcaaacttc 660
ttctcgccaa aggggctctt cttgagataa ggcagaagct catcaaccgt cttctcagcc 720
tcttcaccaa gcttggccca cttttcgtct tcttcagggt tgggcaggaa tccaagctct 780
tgttgcagct cttcgctgaa aacctggaat gacttgtcga acccggtgca catgacaatg 840
taatccgtct ggaagctctc gccgttcttc aggttgacga cgttgccgtt atcaagtgat 900
gcgatatctg tcctgtgcac ggtgcagtcg ccgcggtgga aagtcttcca gaaaagaggg 960
acactggctg caccgagacc tgcgttcgcc cagaagattc cgtttccttc agggccgggc 1020
cgaagtttcc tggcattttc ggacttggag tagccggcgt gtcgatcagc aatccaattg 1080
acgatgagcc agaagatgta gacaaatccc cgtcccagaa gagtcctttg gaagaactgg 1140
tgaccagcgc cgtcagtgct cataatactc atgcccatca atgccatgaa tctagtggtg 1200
accacgtcca tggtgttcct aaggccgagg agagtcggag gcatgatggc caggggtcct 1260
gatccatctt ctcgaataat ccagttaacc tttttaccag cattcagcag gaaaaagact 1320
gtgtcgtagg ctgactttgc tcctccgatg acagtggcac tattgatttt tccaagcgcc 1380
tcgaggtgca cacccatttc ggaggaatgg attacggtag aggtaaagtt gtttctcggc 1440
caagcgggta tgacagggtg tgaagtagct cccgaggcgt agatgagctt ctcgcattca 1500
atgggagctt tgtcttcaat ctctagacgc catccgccag atgacagtcg aatgacacga 1560
gtcaccctag ttcgcagacg agttcggcgg gtcagatcat agtcctgggc gaaatcggtc 1620
aagtagttgt gaattgtttc gccagaaaca tatccatcgt cggtgatgcc ctcatgtttc 1680
atgggataga aggaatattc gaacaatcca tgtttgattt gtgcatagag acccgggtaa 1740
agcttatcgg ttgcccaaac accaccgaac gagctctgct catcgatgat aacgagattg 1800
gtcgtcggcg caaagtcgag gtaggttttc gcagaaatta gaccattcca gcctacacgc 1860
cacacaaatt ggccagtatc agcagtgttt cgaggtgcaa accagagtgt gtggttgtgt 1920
tcagaatgtg taggcagggg tgtgccagga gtttagtgct taccagcgcc aacgacaata 1980
acgtcgactt tctccgctgt agagtccat 2009
<210> 5
<211> 1142
<212> DNA
<213> 贵州木霉NJAU 4742(Trichoderma guizhouense NJAU 4742)
<400> 5
atggccttgg tcgacgctta ctacgtcttc agggccttta ctggccttgg gttttactcg 60
caatggattg tcatgatgca gaacggctct ttcatgacaa tgctttggac caatctgaaa 120
ggagtgtttc ccactggcac ccctgtcaag acttcctgga caggcatttg gcccgttgac 180
tttgttctcg gcctgctagt tgtctttttt ggtgccgtca acaacgtggc ggacttgagc 240
gatcttggtc cattcctaat gctggtggat ctggtctttg cactggttgt cttcaacatc 300
atgacattgg ttgaagatcg acgaaacagg aaaacaggcc cactgagata gtatgtttat 360
tccactacaa ctcaactcat acgatcgaga ctaatctgta attgttgata agtccggcgg 420
tatggcagtt cttgtggaac tggtgtggcg cggcttccgt gctccccgtg tattgccacc 480
tgtacgtgtc gaagagacta ggcagcaaga cttcgctcct ctcaaacgac caggcccagg 540
ccctaccact tacggcactc tggagtatcg tcatttcgct cccgctcttg cttccttcag 600
ccctgggagc ccagccgttt gatatccagg acggcgtggt agtctggttc tttgggcctt 660
tcttcctggg cctcttccaa gaccttgtca gcgtcctgtt ttctggtgaa aactacaagg 720
gaatccgcaa gccagtgact ctcgcttact ggattgttgg cctcaccagc gctgtggtcc 780
acattggagt tgcagtgtgg gcttacactg ctcctgagtt atcgtggtat cgcgtttact 840
ggcctaatca tgccgctgtc atagctgaca gcccgactta catgactgaa ggtgcaatgc 900
tcttcatgca atatgaccat gtcctcatct acctgtgtgt gatcggcatg gggctgtaca 960
tgctcagtcc tcagaaggct gtaacttctc agtttctggg agagaagatc agggcgggct 1020
ggccgatggt aaaactaact gccattaccg cagctgcagg gcccggagcg ggtctggcat 1080
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ga 1142
<210> 6
<211> 7165
<212> DNA
<213> 贵州木霉NJAU 4742(Trichoderma guizhouense NJAU 4742)
<400> 6
atgcctgctg ttactcgaaa cgctagccct tcttcccagt cgtcttttga cggtctgcac 60
aactctgata cgtccccatc cagcgctgcc tcttccgctg gcgatgacga gtatgctgcc 120
gcctctttcc ccgactacgc tgagaagcct ctcgatgaac aattggagcc aattgctgtt 180
gttggcatgg gtacgtatta ctcttgattt ccactttcga ctttcacgaa ttgagttgct 240
tactcccctt acaggttgcc gtctgcccgg cgatgtcaag tctgcttccg aattctggga 300
cctcatgatg agcaagggca ctggtaacac gcccaaggtc ccttcgactc gattcaacat 360
cgacgcccac attcacaaga acaatgaccg acctggaagc ttcggtgtcc ttggtggata 420
cttcctcaag gatgatcttg cggacttcga tcccggtttg ttcggtatca cccccgtcga 480
ggccatgtgg atggaccctc aacagcgaaa gctgctcgag gttgtctacg aggctctcga 540
gtccggtggt atctctctcg agaagattgc tggcacccga actgccgtct tcgccgccag 600
cttcactgct gattggcagc agatggcctt caaggagcac tctttccgtc actccttggc 660
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ttacctgaag cgtctctcgg atgctatccg tgatggtgac ccaatccgtg gtgttattcg 1020
atccagtgct accaactcca acggcaaggt ccctgctgct ggtatcaccc accccaaccg 1080
tgatggtcag gctcatgtca ttgccgctgc ctacaagcgc ggtggtgatc tcgatccccg 1140
cttgactggt tactttgagt gccacggtac tggtaccgct gttggtgacc ctctcgaggt 1200
caacgccgtc tccattgcca tgaaccagga ccgcaagcct ggtgaggagc ccctgtggat 1260
tggtgcagtc aaaacaaaca ttggccactc tgaagctgcc agtggtctgt ctgccctcat 1320
caaggccatc atgatcgtcg agcgtggtgt tatcccggcc actcgcggtc ttgtcaaccc 1380
cagccctgcc atcaagtggg atgactggaa ggtcaaggtc cctactgatg ccgttccctt 1440
ccctcgtcac ctccccgtcc gtcgtgtttc cattaactct ttcggatatg gtggtaccaa 1500
cgctcacgtt atcgttgagg gcaccgactc tctgactcgc aacgcccctg cctacaccta 1560
cacagacagc tgggctcagc agccaaagac caccggtcgc cgccgtgctc ttgagcgtaa 1620
ccgccccttc ctgttgcctt tctccgctca cgacaaggcc actgttcgcc gcaacattga 1680
cgcccacggc aaggttgctt ccaagtacag cctgcttgat ctctcctaca ctctgggtaa 1740
ccgccgtagc aaccttgcca gcaagggttt cgctgtcgcc agctacaact ctctgaccaa 1800
ggtctttgag aatgttggcg agaacttcac ctttgctgac aagaagagca tccgctctgt 1860
cggctttgtc ttcactggtc agggtgctca gtgggctcgc atgggtgctg acttgatggc 1920
ttactgccct tcattcctcc gctccattcg tgctcttgac cttgtccttg aggagcttcc 1980
tgatggccct gagtggtcca ttgaggatgt tctcctggag catgccgaga cctctcccat 2040
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gcttgacgct gacggtgtct ttgcccgtcc tgtcaagacc aacggcaagg cctaccactc 2460
ccaccacatg gctcctgtcg ccgagaagta cgaggcgatg gtccgagcca ccaaggagaa 2520
ggtcaagggc agccttcctc tggctaccaa cgccaagatg gtctcatctg tttacaacaa 2580
ggtcctcggc gatgaggacg tcgttgacga gacctactgg agtgccaacc ttcgcagccc 2640
tgtcctgttc gaccaggctg ttaccaccat cctggctgct gaggaattct ccgatgtcga 2700
tctgttcatc gagattggcc ctcactccgc catggctggt cccatcaagc agatcaaggc 2760
tgctgtcaag aacgacaaga ttgactacat ccctactctc ttgcgtggca agaactgtgc 2820
cgagcagctc ctcaagactg ccggtgagct cttcctccgc agctaccctg tgaacatgga 2880
gaagatctcc aacgcctacg ttgaccagcg tggtagcaat ggcaaggccc tcaagggtca 2940
aaccattgtc gatctccctc cctaccagtg gaactacact cgacccttct gggccgagag 3000
ccgtagctct caggagcagc gtctgcccaa gtaccctcgt cacgatgtcc tcggacagct 3060
ggtcgttggt aactccctgg ctgagcccac ctggcgcaac atgctccgta tccgcgatct 3120
gccttggctc aagcaccacc accttggtgg tgagtcggtc ttccctgctg ctggctactt 3180
cgccatggcc attgaagcca tccgccagat caacgagacg agtgctaacc ctgtcaacat 3240
tgagagctat gttatccgcg atgtgtctat caagactgct ctcgtgaccc ccgatgacga 3300
tgatggtatt gaagtcctct tcaacatgcg cccatccatc atcggtgctg gctggtggga 3360
ctggaacgtc tcatccgttg acgctgagcg tgtcaagaag gaccacatgt ctggcagcat 3420
cagcatcaac actcgccctc gtggcaagac tcctcgctct gttcctcacc tgccccagcg 3480
tgctactggt aaggcttgga accaggctct gcgcgaggtt ggcttcgact acggcccgac 3540
cttccaggac atggatgaca tccgcttcga cggccgaaac taccaggccg cctcttcaac 3600
caacatcaag cagtttgttg acgagaccct gggcgagtcc cgatacatcc tgcaccctgc 3660
tgttattgac tctactctgc agcttgccat cgctgccatt tacgctggtc gcaccaacgc 3720
catggactgt ggtgttgtgc ccgtccaggt tgatgaggtc gccatctggc ctcccaccga 3780
ggagcagctc aaggtgcaga aggcctccgc ctatgccact gtccaccgcc gtggtctccg 3840
tacttcggag agtaacgtcc agatggttgc tgctgacggc gagctgatca tggagctcac 3900
caacatgcgc gccactgcct acgaggctgc cgttcctcag aaggctgaga gtgctcttga 3960
ggaggctcct tacggcgaga tgtcttggga acttgacgtc gatgccgttg agaacagggc 4020
cggcctcagc gctcctgagc tggtcaacct tgctctcttc aagtaccccg gctacaagtc 4080
tattgagctg ggtgctaaga acgctgctgc catcctcagc cagaaccccc aggcctctta 4140
caccatcgtg gccgtctccg aggaggaggc tgagactttc aagcccattg ttgcccctta 4200
ccacaacgcg aagattgtcg ttgttgaccc cagccaggag ctcgaggctc agggcctcaa 4260
gaaggagtct ttcgatatcc tcgtcgctgg tggtgacctg tccctcgaca gcctcctgaa 4320
ggccggagct actgccattg gcgccggtgt ctctgtcgcc aagaaggctg aggaggctac 4380
taagaccgac aagcactctg tgcagctcgt ctaccgcacc acccagagct ccatcgtctc 4440
tcctgtgcga actgccctcg aggctcttgg ctgggaggtc accctctcca gccttgaggc 4500
ttccctgacc tctgctgttc ctgagcatgt cgtcgtcctg gctgactttg agggccctgt 4560
tctcttcacc ctgaaggagc aggagtttgc tgccatccag aacatcattg ctaagacctc 4620
caaccttctc tgggtcagca ctggtgctat tctcgagggt aagaagcccg agtatgccat 4680
gatctctggt cttgctcgtg ccattacctc cgagcaggct tccattgact tccgcaccct 4740
tgacgtcgat ctcgacaacg tcaagcctga gcagactgtc aaggccatca ccaagattgc 4800
ccagctccaa gtggccaagg ctgaggagct tcctgagcgc gagtttgtcc tgtccaacgg 4860
caagacttac atcagccgac ttgtccgcac caagggcctg aacaacgtct acactggagc 4920
caacaaggct gaggatgtca agttcacctt tggtgagcgc attcacggca aggctctccg 4980
caacaaggtt gtgttccaga aggatgacgc cgcccctgag gtcaagcctg gccacgtcga 5040
ggttgaggtt ctgagcagcg gtctcaccaa ggagggcgtt ctcgtcatca acggtgttga 5100
ctatgccacc accttcagcc acgagattgg cggtgttgtc aagcgtgttg gatctggcgc 5160
ctctggcttc caggttggtg acaaggttgt tggattcagc attggccgct ttgacagcta 5220
ccagcaagtc cctgctacgc tgcttcacaa ggttgccagc ggtgatgacc tcactggcat 5280
tgtcagcagc ctgactgctt atgccgctgc tctgcacgga ctccagactc ttgcctccgt 5340
ccaagacgac gagaacgttc tcgtcctcgg caactctggt ttcgctggtg ccgccgccat 5400
caaggttgct cagctcaagg gcgccaccgt ctacgctgtg gccaagactg atgacgaggc 5460
ttccttcttg gagaagcagt tcggcctcaa gaccgagaac atcctccgtc cttccaacgg 5520
cctggtctct gagcagctcg agaagctcac caacggccac ggcgccgatg ttgtcttcag 5580
cgccggcagc gttgactcca acgatgctca cgaggcatgg cgtaccattg cttctttcgg 5640
tcgcttcgtt gacagcggtc gcaaggacaa cctcagccgc agcgtccttg acggtatccc 5700
cgtccagaag agcgccagct accttccctt cgacatcatc gaggctctgg gctccaagcc 5760
ccagcttctg gctagactcc tgcctgccat tgttgagatt gctaagcagc cttctgccgc 5820
tcctggcgcc accaaggcca tcgagctggc tgaccttgac aaggctgttg ctgcttactc 5880
cgatgccttt ggctcagtca agtctgttgt cgagtaccag gcctctgtga cacccatcca 5940
gactctgcct acccgcacca agcttcagtt caacgctgac tctacctacc tgcttgtcgg 6000
atgcttgggt ggtctcggtc gtagcttgac ctcgtggatg atggaatctg gagctcgccg 6060
cttcactttc ctctcccgat ctggtgcgga ccaaccctcc gctgccaagc tggtcgccga 6120
ccttgaggct gccggagcca tcgtccaggt tgtccgcggt gacgccactt ctcgtgatga 6180
tgttgtccgt gctgtcaacg gcattcctgc cgagaacccc atcaagggtg ttgtccatgc 6240
tgccatggtt ctgagagtaa gttgacaatc tgatagtctc aaagatagta tgaacatagc 6300
taaccttcat caacaggatg ctctcttcca ctccatgacc tacgaggcct ggaagcagtc 6360
tactaacccc aaggttgtcg gtgcccagaa ccttcactcc gttttggccg agactcctct 6420
tgacttcttc gtcatgacct cttccgtctc aggtatcctg ggtactcccg gccagggcaa 6480
ctatgccgct gccaacgcct acctcgactc ccttgcccgc ttccgccaca cccagtccaa 6540
ggctcccgcc acctctgttg tcctgcctat ggttcttggt gttggtgtcg ttgctgagaa 6600
cgttgagctt gaggatgctc ttaagcgcaa gggtatgtac ggtgttgatg aggagcacct 6660
gctccagtcc ttcgaggctg ctatgatctc caacactctg gagactgttc ccgaccacgt 6720
tgttgtcggt cttgaccctg ccctgttgca gaaggccgtc aacgatgccg ctgctgttga 6780
cagcttctgg ctcgaggacg cccgcttcag ccacatggtc cacgacatta actcttccgc 6840
cgatgacgcc ggtgctggtg ccggtggcca gagcattgtt gctaccatca aggccgctga 6900
gactctcgct gaggctatca ccgctgtcaa cgaacacttt gttgacaagc tggctcgcat 6960
gctcatgctc aaccctgaag atgtcgaccc tgagaacggt tccattgcct cttacggtat 7020
cgactccatg attggtgctg agctgcgaaa ctggatcttc aaggagtaca agatggacgt 7080
gcccttccag cagctgcttg gacctactct gaccatctgc aagtttgccg ctcaggtctg 7140
cgctgcccag ggacgtgagg cgtaa 7165
<210> 7
<211> 810
<212> DNA
<213> 贵州木霉NJAU 4742(Trichoderma guizhouense NJAU 4742)
<400> 7
ttattgcttc acttgaactt cctgccatag cgtgtccggt aaattctccc tatctacatc 60
aaagatgtgt ggtagtatcg tcggtagtgc ttctgatcgt agttctggga aatccctctt 120
aatcaccgcc agcagttcat cataccatat cctgtagcct tcgccagtca gatgaacccc 180
atctgtcaac aattctttca gcactgttcc gcccgcgcct gattggcccg ggactggctg 240
ccctttcttc catcctaccc gctccatcat cgtatgccac atgtcaatga acggtacgcc 300
acagcgtgcc gcaacatcct ttgctgcctc cgagtatttc aggttgtgca tcactctgtt 360
gtagatggga ggctccagca tatcttcatc cacaggacct ggtcccacaa ttaggactct 420
ctcgacgccg gatttccgtg cctgttcaac aatccattcg agattctcgc gatatgtttc 480
taccggcacg gtttgtatgt cgcgctcaca ggcatcattc gtgccaattt ccaccaccaa 540
gagtttgatt gtctctccag ctgcggtctc tgcacgcaag gtgggcagca ggacgtgttt 600
cagatgtatt gagctgtaac ctccatatcc acgcgcaacc acggagagct ttcggaaata 660
ataatgctgt agagcgggtg tcagggcaaa ggaaagtgag tgaatatcgc tgctgagttc 720
tgtaagagag tctccaaaga tgaggatctt atcgtgcgtg actcggcgga tggccagggc 780
tgacggctcg ttgctttcgc cgactgccat 810
<210> 8
<211> 1697
<212> DNA
<213> 贵州木霉NJAU 4742(Trichoderma guizhouense NJAU 4742)
<400> 8
atgcaattgt ctctggcagc aggcattgcg gccgcggcgt tggcttttgt ctatgtcgcg 60
aacctgatcc tcgagagctt ccgatacaga gcccgatcca gggaactggg atgcaagccc 120
cccgtgtgga tgtcgggtta tgacccgaca ggtattaccg atatcgtctt gggcgtggat 180
gcgagccgca agaagcgatt ccccatccac gctgctgaaa actttggacg cgaagacaag 240
aagcatggcc gtacagtggg cacgctgcgt gttaaggcgc cgcttttccg agacaccttg 300
gtgacgattg atcctcagaa catccagacc atccttgcgc tcaagttcaa ggactttggc 360
ctgggtgtga accggactga gaactttgag ccattgctgg gacacggcat tgtaagttta 420
tgctacagat atccgtactc gtacgccctt gtttgacgaa agctgctgac tgtttttgcg 480
tgcaagttcg cgacaaacgg caagcaatgg gagcactctc gagcattgct gcgtccgcag 540
ttcatccgtg gccaagtcag cgaccttaac ttagaagaag agcacgtcaa gtctttgatg 600
acagtgctca atcgtcaggt tggtccggat ggctggactg atcttgtaga ccttttgcct 660
ctgttcttcc gcctcacact ggattccgca accgagtttc tctttggaga aagcgtcaat 720
agccaactcg atcaagtcca ccccacatct gaaaaagacg gcaacttcgc atttgctttt 780
gacaaggcac agtataatct atcgatcggg gctcgtctgg ggcccaatta ctgggtcgtc 840
cacactcccg agtttaaacg catggttaaa agggttcacg cctatgtcga ctactttgtt 900
caaaaggctc tcgttcaggg cgagaaaatg cccgtgaatg aggacaaata cgtcttcctc 960
aatgcactgg ccaaagaaac ccgagatccc gaagagctgc gatctcagct tctcaacata 1020
ttgcttgccg gccgagacac cactgcatct acactgggat ggttcttcta caccatggct 1080
gatcccgcgt atgaacccgt attccgacga ctgcgagcaa tcattttgga agaattcgga 1140
acatattcca accctaaaga aatcacattt gagaagatga aaggttgcca atatctccaa 1200
tggtgtctga acgaatgcct gcgtttatat cccgcagtgc cgatgaatgt ccgcactgca 1260
caagtagaca cgacgctgcc tattggcggc ggcccagacg gacagtcgcc aattttcgta 1320
ccaaagggcc aggatgttgg ttattcggta ggcaacgatt tcaatgcacc caaatccaaa 1380
ggtaaaatgc taatatgatc gttcaggttc acttgatgca ccgccgcaag gatatctggg 1440
gtcctgatgc cgaagtcttt aagccggaga ggtgggagac gcgcaggccg ggctgggatt 1500
atcttccctt caacggagga ccaagaatct gcattggcca gcaatttgcg cttaccgagg 1560
ttggctatgt tgtcatccgg ttgatgcagc gcatcgacaa cattgatggt tcacaagttg 1620
gccccatcaa gcacggcctg actttgacca actgccctgg cgagggagtt aatgtcaagc 1680
tacattttgc tgagtag 1697

Claims (8)

1.木霉菌次级代谢产物Harzianolide在制备提高植物灰霉病抗性的制剂中的应用；所述的Harzianolide结构式如下所示：
Figure FDA0003534713140000011
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的植物具体可以为番茄。
3.一种提高植物灰霉病抗性的制剂，其特征在于所述制剂的有效成分为Harzianolide；以1L计，包括：Harzianolide 0.01mg。
4.根据权利要求3或4所述的制剂，其特征在于所述的制剂通过如下方法进行制备：将Harzianolide先溶解于少量甲醇中，再加水，得到混合溶液。
5.一种提高植物灰霉病抗性的方法，其特征在于将权利要求3或4所述的制剂用水稀释后对植物进行灌根。
6.贵州木霉NJAU 4742中编码次级代谢产物Harzianolide的基因簇，其特征在于由如SEQ ID No.1-SEQ ID No.8所示核苷酸序列组成。
7.权利要求6所述的基因簇在制备Harzianolide中的应用。
8.权利要求6所述的基因簇在制备提高植物灰霉病抗性的制剂中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Patent Citations (1)

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Non-Patent Citations (1)

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Title
CAI F等: "Harzianolide, a novel plant growth regulator and systemic resistance elicitor from Trichoderma harzianum", PLANT PHYSIOLOGY AND BIOCHEMISTRY, no. 6, pages 106 - 113, XP028789484, DOI: 10.1016/j.plaphy.2013.08.011 *

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