CN114561404A

CN114561404A - 苹果MdSHN1基因及在提高植物耐涝性中的应用

Info

Publication number: CN114561404A
Application number: CN202210436357.9A
Authority: CN
Inventors: 白团辉; 郑先波; 宋春晖; 焦健; 陈晓菲; 王苗苗; 宋尚伟
Original assignee: Henan Agricultural University
Current assignee: Henan Agricultural University
Priority date: 2022-04-20
Filing date: 2022-04-20
Publication date: 2022-05-31
Anticipated expiration: 2042-04-20
Also published as: CN114561404B

Abstract

本发明公开了一种苹果MdSHN1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明从耐涝苹果砧木平邑甜茶叶片中克隆得到MdSHN1基因cDNA全长序列，还公开了扩增所述的苹果MdSHN1基因的引物，并确定了该基因的氨基酸序列。通过拟南芥转基因功能验证分析发现，MdSHN1基因在提高植株的抗性方面具有显著效果，提高了转基因植株的抗逆境能力，尤其是和野生型相比，在淹水胁迫下，转基因植株的耐受性强于野生型，可见，MdSHN1基因跟耐涝有关，能够提高植株的耐涝性，对于苹果新品种的选育具有重要意义。

Description

苹果MdSHN1基因及在提高植物耐涝性中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及苹果MdSHN1基因及在提高植物耐涝性中的应用。

背景技术

苹果(Malus×domestica Borkh)是我国重要的果树树种之一。其面积和产量均具世界首位。近年来，受全球变暖影响，极端气候频繁出现，降雨量分布不均衡，经常发生大面积、不同程度的涝害，并呈逐年递增趋势。在实际生产中，果园常常在降雨后不及时排水，或灌溉不当等，导致果园土壤水分含量过高，苹果根系呼吸受阻，苹果叶片脱落，果实品质和产量下降，严重时造成多年生长受阻，甚至整株死亡，这已成为目前苹果生产中亟待解决的问题。而系统的研究苹果对淹水胁迫的响应，筛选和克隆与苹果耐涝性密切相关的基因，探究其分子机制，对于培育苹果耐涝品种有重要意义。

ERF(Ethylene-responsive factor)转录因子是AP2/ERF大家族中的一个大的亚家族，仅含1个AP2/ERF结构域，每个成员都含有1个由大约60个氨基酸组成的非常保守的DNA结合域。有研究表明，ERFs参与调控植物中不同信号转导途径，在生物胁迫和干旱、寒冷、高盐和脱落酸响应等非生物胁迫中发挥重要作用(Tang W et al 2006)。近年来，部分研究又发现ERFs转录因子家族在植物耐涝或低氧胁迫中也发挥重要作用。当植物发生涝害时，ERF在缓解厌氧胁迫抗性和信号转导中起重要作用(Guo H et al 2003)。例如，在矮牵牛耐涝性研究中发现，与野生型植株相比，PhERF2沉默表达植株表现出比野生株系更早和更严重的叶片失绿和坏死，降低了矮牵牛对淹水的耐受性。而过表达PhERF2植株在淹水胁迫下的存活率高于野生株系(Yin D et al 2019)。有研究从大麦中分离出来一个乙烯响应因子HvERF2.11，淹水处理发现，过表达HvERF2.17基因能够增强拟南芥对淹水胁迫的耐受性(Luan H et al 2020)。本发明中，我们鉴定到一个新的苹果ERF亚家族成员MdSHN1，其含有AP2保守结构域，过表达MdSHN1基因能增强拟南芥的耐涝性，对苹果耐涝定向遗传改良和砧木选育有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种苹果MdSHN1基因及在提高植物耐涝性中的应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种苹果的MdSHN1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的核苷酸序列由717个碱基组成。

一种苹果的MdSHN1蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。所述的序列由238个氨基酸残基组成。

扩增上述MdSHN1基因的引物对，所述引物对的正向引物序列如SEQ ID No.3所示，反向引物序列如SEQ ID No.4所示。

包含上述苹果MdSHN1基因的过表达载体也落入本发明的保护范围，本发明所选用的过表达载体为农杆菌过表达载体。

本发明最重要的发明点在于通过淹水胁迫实验，发现该基因能够提高植物耐涝性。也就是说，该基因或蛋白或过表达载体在提高植物耐涝性方面具有重要的作用。具体地，利用强启动子(花椰菜花叶病毒35S启动子)驱动原理的转基因技术，将MdSHN1基因的过表达2300载体转入拟南芥中，从而获得转基因材料。实验证明，过表达MdSHN1基因的转基因拟南芥，对淹水胁迫的耐受力增强，说明MdSHN1基因在植株抗性中发挥重要作用。

上述植物包括苹果、拟南芥，但不限于此，凡是可以利用转基因技术将MdSHN1基因的过表达载体转入该植物中，均可以获得相同的技术效果。

本发明所述耐涝性表现包括：在淹水胁迫下，相对于野生型植株来讲，转基因植株的耐受性强于野生型。

并且，对于淹水胁迫后叶绿素的变化具体表现为：淹水胁迫后，转基因植株和野生型植株的叶绿素含量均呈现下降趋势，且野生型植株下降程度显著高于转基因植株。恢复培养10天后，转基因植株和野生型植株的叶绿素含量上升，且转基因植株叶绿素含量显著高于野生型植株。

对于淹水胁迫后花青苷含量的变化具体表现为：淹水胁迫后，转基因拟南芥花青苷含量约上升80倍，野生型拟南芥花青苷含量约上升23倍。转基因拟南芥的花青苷含量显著高于野生型拟南芥。恢复培养后，转基因拟南芥和野生型拟南芥花青苷含量迅速下调，野生型拟南芥花青苷含量显著高于转基因拟南芥。转基因拟南芥花青苷含量与处理前水平差异不明显。

对于淹水胁迫后相对电导率的变化具体表现为：野生型拟南芥在淹水胁迫处理第6d时，相对电导率含量显著上升，大约上升了5％，恢复培养10d后，叶片电导率含量下降，但是仍然高于正常水平。而转基因拟南芥的相对电导率在淹水处理6d和恢复培养10d时均无明显变化。

本发明还保护一种植物育种方法，其特征在于，所述方法为(1)或(2)：

(1)通过增加目的植物中MdSHN1蛋白的活性，获得耐涝性强于目的植物的植株；

(2)通过促进目的植物中MdSHN1基因的表达，获得耐涝性强于目的植物的植株。

其中，目的植物(target plant)，本发明所述目的植物是拟南芥。

目的基因(target gene)，也称靶标基因，在基因工程设计和操作中，被用于基因重组、改变受体细胞性状和获得预期表达产物的基因。可以是生物体本身的，也可以是来自不同生物体的。

本发明中，对于适用于本发明的植物或目的植物没有特别的限制，只要其适合进行基因的转化操作，如各种农作物、花卉植物、或林业植物等。所述的植物比如可以是(不限于)：双子叶植物、单子叶植物或裸子植物。

作为一种优选方式，所述的“植物”包括但不限于：苹果、拟南芥，凡是具有该基因或者与之同源的基因均适用。

本发明中所说的“植物”包括整株植物，其亲本和子代植株以及植物的不同部位，包括种子、果实、芽、茎、叶、根(包括块茎)、花、组织和器官，在这些不同的部分均有我们目的基因或者核酸。这里所提及的“植物”也包括植物细胞、悬浮培养物、愈伤组织、胚、分生组织区、配子体、孢子体、花粉和小孢子，同样，其中每种前述对象包含目的基因/核酸。

本发明包括任何植物细胞，或任何由其中的方法获得或可获得的植物，以及所有的植物部分及其繁殖体。本专利也包含由任何前述方法所获得的转染细胞、组织、器官或完整植物。唯一的要求是子代表现出相同的基因型或表型特征，使用本专利中的方法获得的子代特性相同。

本发明还扩展到如上所述的植物的可收获的部分，但不限于种子、叶、果实、花、茎、根、根茎、块茎和球茎。同时进一步涉及植株收获后的其他衍生物，如干燥颗粒或粉末、油、脂肪和脂肪酸、淀粉或蛋白质。本发明还涉及由相关植物获得的食品或食品添加剂。

另外，还公开了一种苹果MdSHN1基因的克隆方法，包括以下步骤：

(1)设计全长序列兼并性引物，引物如下所示：

MdSHN1-F序列为5，-CATTCTTCTCTGTCTCTCTCAGA-3′(SEQ ID No.3)，

MdSHN1-R序列为5，-CTTTGCTTCACCTATGTACGTAC-3′(SEQ ID No.4)，

(2)平邑甜茶叶片RNA提取及反转录；

(3)cDNA全长序列获得。

一种苹果MdSHN1基因过量表达的方法，包括以下步骤：

(1)MdSHN1基因过量表达载体的构建：将pCAMBIA2300-GFP载体使用Xbal和Kpn酶切，将回收产物与目的基因连接，转入DH5 d感受态细胞中，筛菌后进行测序，构成MdSHN1过表达载体。将MdSHN1过表达载体转入到农杆菌GV3101；

(2)MdSHN1过量表达株系的获得，具体可以采用现有技术中的方法。

本发明的优点：

本发明从耐涝苹果砧木平邑甜茶叶片中克隆得到MdSHN1基因cDNA全长序列，还公开了扩增所述的苹果MdSHN1基因的引物，并确定了该基因的氨基酸序列。将该基因过表达转入拟南芥中，发现过表达MdSHN1能增强拟南芥的耐涝性，有利于从分子机制上阐明MdSHN1基因在淹水胁迫响应方面的作用，并且对苹果耐涝定向遗传改良和砧木选育有重要意义。

附图说明

图1为MdSHN1 PCR扩增产物电泳图谱；

图2为qRT-PCR检测MdSHN1转基因拟南芥的表达，其中WT为对照，L1、L2、L3为3个过表达转基因株系；

图3为对照WT和3个MdSHN1转基因拟南芥(L1、L2、L3)在淹水胁迫5d和淹水胁迫恢复培养10d的状态；

图4为对照WT和3个MdSHN1转基因拟南芥(L1、L2、L3)在淹水胁迫6d和淹水胁迫恢复培养10d的叶绿素含量；

图5为对照WT和3个MdSHN1转基因拟南芥(L1、L2、L3)在淹水胁迫6d和淹水胁迫恢复培养10d的花青苷含量；

图6为对照WT和3个MdSHN1转基因拟南芥(L1、L2、L3)在淹水胁迫6d和淹水胁迫恢复培养10d的相对电导率。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但下述实施例中所涉及的具体实验方法如无特殊说明，均为常规方法或按照制造厂商说明书建议的条件实施。

若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。如无特殊说明，所采用的试剂及材料，均可以从市场中购买获得。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

除非另有说明，本发明的实施将使用本领域技术人员显而易见的植物学常规技术、微生物、组织培养、分子生物学、化学、生物化学、DNA重组及生物信息学技术。这些技术均在已经公开的文献中进行了充分解释，另外，本发明所采用的DNA提取、系统发育树的构建、基因编辑方法、基因编辑载体的构建、基因编辑植物获得等方法，除了下述实施例采用的方法外，采用现有文献中已经公开的方法均能实现。

此处使用的“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸”、“核酸分子”或“多聚核苷酸”术语意思是指包括分离的DNA分子(例如，cDNA或者基因组DNA)，RNA分子(例如，信使RNA)，自然类型，突变类型，合成的DNA或RNA分子，核苷酸类似物组成的DNA或RNA分子，单链或是双链结构。这些核酸或多聚核苷酸包括基因编码序列、反义序列及非编码区的调控序列，但不仅限于此。这些术语包括一个基因。“基因”或“基因序列”广泛用来指一有功能的DNA核酸序列。因此，基因可能包括基因组序列中的内含子和外显子，和/或包括cDNA中的编码序列，和/或包括cDNA及其调控序列。在特殊实施方案中，例如有关分离的核酸序列，优先默认其为cDNA。

“表达载体”，Expression vectors，是指在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。

“农杆菌介导转化法”，Agrobacterium-mediated transformation，指将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株的技术。

实施例1苹果MdSHN1基因的克隆

(一)平邑甜茶叶片RNA提取及反转录

1、苹果总RNA的提取

苹果叶片的总RNA提取方法是按照RNA提取试剂盒(生工)说明书的基础上稍作优化进行抽提。具体流程如下：

(1)取500μl Buffer Rlysis-PG加入1.5mlRNase-free的离心管中备用。

(2)将50mg植物组织经液氮研磨后的样品迅速加入上述1.5ml离心管中，立即震荡混匀，室温放置5min。

(3)13，400g，4℃离心3min，将上清移至新的1.5mL RNase-free离心管中。

(4)加入1/2体积无水乙醇，充分混匀。

(5)将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液全部加至吸附柱中，静置1min，室温13，400g离心1min倒掉收集管中废液。

(6)将吸附柱放回收集管中，加入500μl GT Solution(GT Solution中预先加入12ml无水乙醇)，静置1min，室温13，400g离心1min，倒掉收集管中废液。

(7)将吸附柱放回收集管中，加入500μl NT Solution(NT Solution中预先加入24ml无水乙醇)，静置1min，室温13，400g离心1min，倒掉收集管中废液。

(8)将吸附柱放回收集管中，13，400g离心2min。

(9)将吸附柱放入RNase-free的1.5ml离心管中，在吸附膜中央加入50μl DEPC-treated ddH₂O₂，静置2min，13，400g离心2min，获得植物总RNA溶液。

(10)将所得到的RNA溶液使用核酸检测仪对核酸纯度进行检测，再利用1％浓度的琼脂糖凝胶电泳的方式检测核酸质量。检测质量合格的RNA溶液置于-80℃保存，用于后续试验。

2、反转录cDNA

(1)使用诺唯赞“HiSc如tIII Q RT SuperMix for qPCR(+g DNA wiper)”试剂盒按照说明进行反转录，取上一步RNA产物为模板，在0.2ml的微量离心管中进行两步反应，首先配制基因组gDNA去除混合体系(表1)，在离心管中依次加入4*gDNAwiper Mix 4μL，RNA模板1pg-1μg,加入RNase free ddH₂O定容至16μL，移液枪轻轻混打均匀，离心，PCR仪上42℃反应2min：

表1基因组gDNA去除混合体系

(2)将上一步反应产物取出加入5*HiScript III qRT SuperMix 4μL定量至20μL，用枪头轻轻混匀，将微量离心管放在PCR仪上37℃，15min；85℃，5s；产物即为cDNA,反应结束后取出待用或-20℃保存。

(二)cDNA全长序列的获得

根据MdSHN1的cDNA序列及表达载体pCAMBIA2300-GFP设计特异性引物F1(5’-CTTCTCTGTCTCTCTCAGA-3’)和R1(5’-CTTTGCTTCACCTATGTACGTAC-3’)，以含有目的基因的平邑甜茶苹果砧木叶片的cDNA为模板扩增MdSHN1基因CDS序列。其中，PCR扩增体系见表2。

PCR反应程序：95℃预变性7min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸10s，35次循环；72℃延伸5min。

表2 PCR扩增体系

获得PCR产物；15μL的PCR产物加入0.5μL的rTaq酶在72℃反应30min后，加入5μL10*DNALoading Buffer混匀后进行琼脂糖(1.2％)凝胶电泳(图1)。选择单一的目的条带，PCR产物按照胶回收试剂盒(V-ELUTE Gel Mini Purification Kit)(庄盟，北京)的说明书进行切胶回收。

实施例2植物过表达载体构建

为研究MdSHN1基因的功能，将pCAMBIA2300-GFP载体使用Xbal和Kpn酶切，将回收产物与目的基因连接，转入DH5α感受态细胞中，筛菌后进行测序，构成MdSHN1过表达载体。将MdSHN1过表达载体转入到农杆菌GV3101，备用。

实施例3转基因拟南芥的获得

采用花序侵染法侵染拟南芥，参照Clough等(1998)的方法。选取4周龄的生长健壮的拟南芥植株，在第一次侵染之前将已经开花的果荚减掉，并浇足水，保持土壤湿润。为了提高转化效率，大约一周后，进行第二次侵染。待种子成熟后，将T0代种子收于干燥的离心管中，待种子干燥后保存，放于4℃条件下春化备用。植物过表达载体pCAMBIA2300-GFP的植物抗性为卡娜霉素，能够在转化时随目的基因一起整合到植物基因组中，所以使用卡那霉素筛选侵染后得到的拟南芥种子。

首先对得到的拟南芥种子进行消毒处理：5％次氯酸钠浸泡5min，用无菌水冲洗4-6次。然后点播到含有50mg/L卡那霉素的MS培养基上，在光照培养箱(光照16h/黑暗8h，22℃)中水平放置培养15-20d。大部分拟南芥种子不萌发或萌发后根短叶片发黄，只有小部分拟南芥幼苗有卡那霉素抗性，叶片较大较绿，根较长且扎入培养基中。将具有卡那霉素抗性的拟南芥幼苗播种到混合均匀营养土(基质∶蛙石＝1∶1)。将种好的拟南芥放到长日照培养室(光照16h/黑暗8h，22℃)中，每隔3天浇一次水。20d后，标记每一株拟南芥的序号，且一一对应提取叶片DNA，用PCR检测，共获取6株转基因株系。利用qRT-PCR对T3代纯合的转基因株系进行检测，分析MdSHN1在各株系中的表达量(图2)，从中挑选三个表达高的植株(L1,L2,L3)用于后期分析。

实施例4转基因拟南芥的耐涝性鉴定

以T3代纯合转基因拟南芥(L1，L2，L3)和野生型(WT)拟南芥幼苗为试材，各挑选30颗长势一致的苗龄为30d的拟南芥进行淹水处理，将其分为对照组和处理组。将处理组的拟南芥完全浸没于水中进行淹水处理，淹水处理6天后，将水倒掉进行恢复培养；对照组则正常浇水。

如图3所示，淹水处理5d后，转基因和野生型拟南芥叶片颜色变成紫红色；野生型拟南芥叶片生长受阻，转基因拟南芥萌发出新叶，且大部分拟南芥开始抽薹开花。恢复培养10d后，转基因和野生型拟南芥叶片均复绿。转基因拟南芥继续抽薹开花，株高显著高于野生型植株，而野生型拟南芥生长发育受阻。可以看出，淹水胁迫会影响植株的生长发育，转基因拟南芥具有更好的耐受性。

如图4所示，在淹水胁迫处理前转基因拟南芥和野生型拟南芥的叶绿素无明显差异。但是受到淹水胁迫后，转基因植株和野生型植株的叶绿素含量均呈现下降趋势，且野生型植株下降程度显著高于转基因植株。恢复培养10天后，转基因植株和野生型植株的叶绿素含量上升，且转基因植株叶绿素含量显著高于野生型植株。

如图5所示，在正常生长状态下，转基因拟南芥的花青苷含量显著低于野生型拟南芥。淹水胁迫后，转基因拟南芥花青苷含量约上升80倍，野生型拟南芥花青苷含量约上升23倍。转基因拟南芥的花青苷含量显著高于野生型拟南芥。恢复培养后，转基因拟南芥和野生型拟南芥花青苷含量迅速下调，野生型拟南芥花青苷含量显著高于转基因拟南芥，而转基因拟南芥花青苷含量与处理前水平差异不明显。

如图6所示，野生型拟南芥在淹水胁迫处理第6d时，相对电导率含量显著上升，大约上升了5％，恢复培养10d后，叶片电导率含量下降，但是仍然高于正常水平。而转基因拟南芥的相对电导率在淹水处理6d和恢复培养10d时均无明显变化。这说明MdSHN1基因跟耐涝有关，能够缓解淹水胁迫对植株带来的伤害。

综上，本发明的MdSHN1基因，通过拟南芥转基因功能验证分析发现，MdSHN1基因在提高植株的抗性方面具有显著效果，提高了转基因植株的抗逆境能力，尤其是和野生型相比，在淹水胁迫下，转基因植株的耐受性强于野生型，可见，MdSHN1基因跟耐涝有关，能够提高植株的耐涝性，有利于从分子机制上阐明MdSHN1基因在淹水胁迫响应方面的作用，并且对于苹果新品种的选育具有重要意义。

以上所述之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，仅仅用以解释本发明，并非限制本发明实施范围，对于本技术领域的技术人员来说，当然可根据本说明书中所公开的技术内容，通过置换或改变的方式轻易做出其它的实施方式，故凡在本发明的原理上所作的变化和改进等，均应包括于本发明申请专利范围内。

序列表

<110> 河南农业大学

<120> 苹果MdSHN1基因及在提高植物耐涝性中的应用

<130> 2022

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 717

<212> DNA

<213> Malus×domestica Borkh

<400> 1

atggtgaaat cgaaaaagta cagaggcgtc aggcagcgcc actggggctc ttgggtctca 60

gaaatccgcc accccttact gaagagaagg gtgtggctag gcacatttga gacagctgaa 120

gaagcagccc gagcatacga tgaagcttcc gttttgatga gcggacgaaa tgccaagacc 180

aatttcccaa taacaactac tacaactcag agtaatggta cccgtaccac agtaggatca 240

tcagatcacc caaaaactag tagcggcgac ttggattcac gatccgaaca gaagggtctg 300

tcggaaatct tgcatgccaa gctaaggaaa tgcggcaaga taccatctcc atccatgacc 360

tgcttgaggc tcgacaatga gagctctcat ataggagtat ggcaaaaacg tgcaggtcaa 420

cgctctgata actccaattg ggtcatgact gttccacttg gcaagaagaa gaataatagt 480

actgttgata ctaataatgc tgatgatcag agtgttctgt catcacaatt tatgtcgaat 540

tcagatcaat ctgcttcgat tgaaacatca tcagagaggc ccccccaact tatggcggag 600

atggatgaag aagagaaaat tgcgttgcag atgatagaag agctgcttaa cggaaattgt 660

gcaagtccgg atttatcatt tggcattcaa caaggggagg aaagaattta tttgtag 717

<210> 2

<211> 238

<212> PRT

<213> Malus×domestica Borkh

<400> 2

Met Val Lys Ser Lys Lys Tyr Arg Gly Val Arg Gln Arg His Trp Gly

1 5 10 15

Ser Trp Val Ser Glu Ile Arg His Pro Leu Leu Lys Arg Arg Val Trp

20 25 30

Leu Gly Thr Phe Glu Thr Ala Glu Glu Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Glu

35 40 45

Ala Ser Val Leu Met Ser Gly Arg Asn Ala Lys Thr Asn Phe Pro Ile

50 55 60

Thr Thr Thr Thr Thr Gln Ser Asn Gly Thr Arg Thr Thr Val Gly Ser

65 70 75 80

Ser Asp His Pro Lys Thr Ser Ser Gly Asp Leu Asp Ser Arg Ser Glu

85 90 95

Gln Lys Gly Leu Ser Glu Ile Leu His Ala Lys Leu Arg Lys Cys Gly

100 105 110

Lys Ile Pro Ser Pro Ser Met Thr Cys Leu Arg Leu Asp Asn Glu Ser

115 120 125

Ser His Ile Gly Val Trp Gln Lys Arg Ala Gly Gln Arg Ser Asp Asn

130 135 140

Ser Asn Trp Val Met Thr Val Pro Leu Gly Lys Lys Lys Asn Asn Ser

145 150 155 160

Thr Val Asp Thr Asn Asn Ala Asp Asp Gln Ser Val Leu Ser Ser Gln

165 170 175

Phe Met Ser Asn Ser Asp Gln Ser Ala Ser Ile Glu Thr Ser Ser Glu

180 185 190

Arg Pro Pro Gln Leu Met Ala Glu Met Asp Glu Glu Glu Lys Ile Ala

195 200 205

Leu Gln Met Ile Glu Glu Leu Leu Asn Gly Asn Cys Ala Ser Ser Asp

210 215 220

Leu Ser Phe Gly Ile Gln Gln Gly Glu Glu Arg Ile Tyr Leu

225 230 235

<210> 3

<211> 23

<212> DNA

<213> Malus×domestica Borkh

<400> 3

cattcttctc tgtctctctc aga 23

<210> 4

<211> 23

<212> DNA

<213> Malus×domestica Borkh

<400> 4

ctttgcttca cctatgtacg tac 23

Claims

1.一种苹果MdSHN1基因，其特征在于，所述MdSHN1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种编码权利要求1所述MdSHN1基因的蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.扩增权利要求1所述MdSHN1基因的引物对，其特征在于，所述引物对的正向引物序列如SEQ ID No.3所示，反向引物序列如SEQ ID No.4所示。

4.包含权利要求1所述苹果MdSHN1基因的过表达载体。

5.权利要求1所述基因或权利要求2所述蛋白或权利要求4所述过表达载体在提高植物耐涝性的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物为苹果、拟南芥。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述耐涝性表现为：在淹水胁迫下，相对于野生型植株来讲，转基因植株的耐受性强于野生型。

8.一种植物育种方法，其特征在于，所述方法为(1)或(2)：

9.根据权利要求8所述的植物育种方法，其特征在于，所述目的植物为苹果、拟南芥。