CN114836436B

CN114836436B - 大豆基因GmRGS1与葡糖糖共同促进豆科植物根瘤产生中的应用

Info

Publication number: CN114836436B
Application number: CN202210490578.4A
Authority: CN
Inventors: 张大健; 李晓明; 庄永斌; 贾志杰
Original assignee: Shandong Agricultural University
Current assignee: Shandong Agricultural University
Priority date: 2022-04-28
Filing date: 2022-04-28
Publication date: 2023-06-02
Anticipated expiration: 2042-04-28
Also published as: CN114836436A

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一个编码大豆G蛋白信号调节因子的基因GmRGS1联合施加低浓度葡萄糖溶液共同提高大豆结瘤的应用。本发明利用pPOKII过量表达载体，通过农杆菌介导的大豆遗传转化，快速获得转基因植株，成功将GmRGS1进行了过量表达，并对嵌合体转基因植株进行了根瘤数目统计，结果表明GmRGS1基因能够正向调控大豆根瘤数目。在此基础上，用25mM的葡萄糖50mL分别处理大豆空载体和GmRGS1过量表达植株，发现相对于空载体，GmRGS1转基因植株根瘤数目增加60％，且根系健康完整、植株发育良好。由此可见，基因GmRGS1过表达联合施加低浓度葡萄糖溶液，可以有效的提高根瘤数目，增强固氮能力，提高大豆产量和质量。

Description

大豆基因GmRGS1与葡糖糖共同促进豆科植物根瘤产生中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及大豆G蛋白信号调节因子编码基因GmRGS1及与葡糖糖共同提高豆科植物根瘤数目中的应用。

背景技术

大豆(Glycine max(Linn.)Merr)作为重要的粮食作物和经济作物，广泛用于豆油压榨、豆制食品及豆粕饲料加工等，在保障粮油安全和保障民生方面具有重要的战略地位(宋朝辉，2021)。近年来，我国大豆产量逐步提升，然而仍存在巨大需求缺口，高度依赖进口。为了实施我国粮食安全战略，2019年，中央一号文件首次提出实施大豆振兴计划，多措并举提高大豆产量和质量，提升大豆产业经济(原梓涵等，2019)。

根瘤作为豆科植物特有的结构，能够将空气中游离的氮气转化为铵态氮和硝态氮，进而被生物体直接吸收利用。豆科植物-根瘤菌的共生包含了一系列复杂的信号转导过程。首先，豆科植物的根部向土壤中分泌类黄酮类化合物用以招募根瘤菌，根瘤菌分泌的结瘤因子被豆科植物根部细胞表面的受体蛋白激酶识别并触发共生信号级联反应，进而引起侵染线的形成和根瘤器官的产生(Svistoonoff et al.2014；Soyano et al.2021)。豆科植物的结瘤是一个高度消耗能量的生物学过程，因此，豆科植物进化产生了一系列结瘤自调控信号通路抑制过多根瘤的产生，以减少不必要的能量消耗(Djordjevic et al.2015；Zhang et al.2021)。

G蛋白信号转导系统在所有的真核生物中普遍存在，主要由G蛋白偶联受体(Gprotein-coupled receptor，GPCR)、G蛋白和下游效应器组成。在植物GPCR介导的G蛋白信号转导途径中，GPCR接受输入信号并传递给G蛋白，进而激活下游效应器发挥作用。G蛋白信号调节因子(Rgulators of G protein signaling，RGS)能够特异地结合激活态的G蛋白α亚基并表现GTP酶催化蛋白活性，导致G蛋白失活，从而迅速关闭与G蛋白偶联的信号途径(Liu et al.2021)。目前，在模式植物拟南芥中鉴定了一个RGS蛋白，即AtRGS1，其C端是一个RGS-box，N端是一段7次跨膜结构域，N端与GPCR的拓扑结构相似，推测AtRGS1可能是GPCR家族成员(Chen et al.2003)。已有研究表明，AtRGS1是植物糖信号转导的传感器，在植物的糖类感知中起着重要作用(Chen and Jones 2004；Johnston et al.，2007)。葡萄糖作为植物体内最重要的单糖之一，已被证明不仅是植物重要的物质基础和能量来源，还可以作为信号分子调控植物的生长发育、生殖、代谢等过程(Rolland et al.，2001；Singh etal.，2014)。

本发明首次提出了RGS通过介导葡萄糖信号转导从而调控大豆结瘤过程，对培育优质高产的大豆种质具有重要的理论价值和实际意义，在植物分子育种中具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的第一个目的，在于提供一个大豆基因GmRGS1，也就是大豆G蛋白信号调节因子的编码基因GmRGS1，其序列如序列表SEQ ID NO.1所示。

本发明的第二个目的，在于提供一种该基因编码的蛋白质，所编码氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示。

本发明的最主要的一个目的，在于提供通过提高大豆GmRGS1的表达量、以及在提高大豆GmRGS1的表达量的同时施加低浓度葡萄糖的方法在提高大豆根瘤数目中的应用。优选地，所述葡萄糖溶液的浓度为25mM，每株施加量为50mL。

本发明还保护一种植物育种方法，其特征在于，所述方法为(1)或(2)：

(1)通过增加目的植物中蛋白GmRGS1的活性，获得根瘤数目多于目的植物的植株；

(2)通过促进目的植物中基因GmRGS1的表达，获得根瘤数目多于目的植物的植株。

其中，目的植物，本发明所述目的植物是大豆。

目的基因(target gene)，也称靶标基因，在基因工程设计和操作中，被用于基因重组、改变受体细胞性状和获得预期表达产物的基因。可以是生物体本身的，也可以是来自不同生物体的。

“促进目的植物中基因GmRGS1的表达”的实现方式可为如下(1)或(2)或(3)：

(1)将基因GmRGS1导入目的植物；

(2)引入强启动子和/或增强子；

(3)本领域内的其它常见方法。

本发明中，对于适用于本发明的植物或目的植物没有特别的限制，只要其适合进行基因的转化操作，如各种农作物、花卉植物、或林业植物等。所述的植物比如可以是(不限于)：双子叶植物、单子叶植物或裸子植物。

作为一种优选方式，所述的“植物”包括但不限于：豆科植物，尤其是大豆，凡是具有该基因或者与之同源的基因均适用。

本发明中所说的“植物”包括整株植物，其亲本和子代植株以及植物的不同部位，包括种子、果实、芽、茎、叶、根(包括块茎)、花、组织和器官，在这些不同的部分均有我们目的基因或者核酸。这里所提及的“植物”也包括植物细胞、悬浮培养物、愈伤组织、胚、分生组织区、配子体、孢子体、花粉和小孢子，同样，其中每种前述对象包含目的基因/核酸。

本发明包括任何植物细胞，或任何由其中的方法获得或可获得的植物，以及所有的植物部分及其繁殖体。本专利也包含由任何前述方法所获得的转染细胞、组织、器官或完整植物。唯一的要求是子代表现出相同的基因型或表型特征，使用本专利中的方法获得的子代特性相同。

本发明还扩展到如上所述的植物的可收获的部分，但不限于种子、叶、果实、花、茎、根、根茎、块茎和球茎。同时进一步涉及植株收获后的其他衍生物，如干燥颗粒或粉末、油、脂肪和脂肪酸、淀粉或蛋白质。本发明还涉及由相关植物获得的食品或食品添加剂。

本发明还保护一种促进豆科植物根瘤产生的方法，通过增加目的植物中蛋白GmRGS1的活性并联合施加25mM葡萄糖溶液50mL或促进目的植物中基因GmRGS1的表达并联合施加25mM葡萄糖溶液50mL。

本发明的优点：

(1)本发明提供了一个编码大豆G蛋白信号调节因子的基因GmRGS1，在对其功能进行鉴定的过程中，本发明利用过量表达载体，通过农杆菌介导的大豆毛状根遗传转化快速获得嵌合体转基因植株，成功将基因GmRGS1过量表达，结果表明过量表达基因GmRGS1能够提高大豆的根瘤数目。并且在此基础上，对基因GmRGS1过量表达植株施用低浓度葡萄糖溶液，结果发现对于提高大豆根瘤数目的效果更加明显，可见在具体实际的应用中，可以首先对豆科植物进基因行GmRGS1过量表达，再结合施用一定量的葡萄糖溶液来提高其根瘤数目，增强固氮能力，进而提高大豆产量和质量。

(2)本发明证明了大豆基因GmRGS1与低浓度葡萄糖联合施用显著提高大豆根瘤数目，未来可能通过转基因、基因编辑、外施葡萄糖等手段应用于大豆生产和分子育种，具有十分重要的应用价值。

附图说明

图1为基因GmRGS1在大豆受到根瘤菌侵染后的表达模式；

图2为空载体和过量表达基因GmRGS1株系的大豆根瘤数目对比；

图3为空载体和过量表达基因GmRGS1、同时施用25mM葡萄糖溶液50mL株系的大豆根瘤数目对比；

图2和3中a(Control)、b分别表示空载体、过量表达GmRGS1的株系。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但下述实施例中所涉及的具体实验方法如无特殊说明，均为常规方法或按照制造厂商说明书建议的条件实施。

若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。如无特殊说明，所采用的试剂及材料，均可以从市场中购买获得。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

除非另有说明，本发明的实施将使用本领域技术人员显而易见的植物学常规技术、微生物、组织培养、分子生物学、化学、生物化学、DNA重组及生物信息学技术。这些技术均在已经公开的文献中进行了充分解释，另外，本发明所采用的DNA提取、系统发育树的构建、基因编辑方法、基因编辑载体的构建、基因编辑植物获得等方法，除了下述实施例采用的方法外，采用现有文献中已经公开的方法均能实现。

此处使用的“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸”、“核酸分子”或“多聚核苷酸”术语意思是指包括分离的DNA分子(例如，cDNA或者基因组DNA)，RNA分子(例如，信使RNA)，自然类型，突变类型，合成的DNA或RNA分子，核苷酸类似物组成的DNA或RNA分子，单链或是双链结构。这些核酸或多聚核苷酸包括基因编码序列、反义序列及非编码区的调控序列，但不仅限于此。这些术语包括一个基因。“基因”或“基因序列”广泛用来指一有功能的DNA核酸序列。因此，基因可能包括基因组序列中的内含子和外显子，和/或包括cDNA中的编码序列，和/或包括cDNA及其调控序列。在特殊实施方案中，例如有关分离的核酸序列，优先默认其为cDNA。

“表达载体”，Expression vectors，是指在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。

“农杆菌介导转化法”，Agrobacterium-mediated transformation，指将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株的技术。

实施例1大豆GmRGS1基因片段的预测

利用生物信息学手段筛选得到了大豆GmRGS1基因片段，其序列如SEQ ID NO.1所示，该基因全长编码框核苷酸序列长度为1395bp，由494个氨基酸组成，其蛋白序列如SEQID NO.2所示。

实施例2GmRGS1基因在大豆受到根瘤菌侵染过程中的表达模式检测

利用qRT-PCR方法检测了GmRGS1基因在大豆受到根瘤菌侵染过程中的表达模式。在大豆种子萌发3-4天时，用慢生根瘤菌USDA110菌液(OD₆₀₀＝0.08)均匀地浇在根系周围，接种量为每种植小穴50mL。接种后取不同时间段根系，液氮速冻后存于-80℃冰箱中。使用TRIzol法提取总RNA并反转录得到cDNA，采用TAKARA公司的荧光定量试剂盒进行反应。反应在定量PCR仪(Applied Biosystems Stepone Plus)上进行，按照相对定量的方法检测基因的表达量，反应程序按照TAKARA提供的操作手册进行，大豆Actin基因作为反应中的内参，引物序列为：

GmActin-F：

GmActin-R：

GmRGS1-F：

GmRGS1-R：

反应程序如下：预变性94℃ 5min，变性94℃ 30s，退火56℃ 40s，延伸72℃ 40s，反应35个循环。结束后，应用2^-ΔΔCt方法计算GmRGS1基因的表达量。分析结果表明，在大豆受到根瘤菌侵染的过程中，GmRGS1的表达量持续上升，直至第3天时达到顶峰，其后开始下降(图1)，说明其参与了大豆对根瘤菌侵染的响应过程。

实施例3过量表达GmRGS1的大豆转基因植株根瘤数目增加

3.1大豆GmRGS1基因过量表达载体的构建

一、大豆根系RNA的提取及反转录

1、利用TRIzol法提取总RNA

(1)称取大豆W82根系约0.1g，液氮速冻研磨成细粉，加入1mL TRIzol提取液，漩涡振荡2min，室温静置5min；

(2)4℃，12000rpm离心10min，去除沉淀；

(3)将上清液移入新的离心管，加入200μL氯仿，涡旋震荡，室温静置3min；

(4)4℃，11000rpm离心10min；

(5)将上清液转移至新离心管中，加入600μL异丙醇，室温静置10min；

(6)弃上清，加入75％乙醇1mL，重悬，4℃，11000rpm离心5min；重复一次。

(7)室温下开盖干燥5-7min，加入20μL DEPC-H₂O溶解沉淀，-80℃冻存。

2、反转录cDNA

(1)使用Vazyme公司提供的试剂盒按照说明书进行反转录，取上一步RNA产物为模板，在0.2ml的离心管中进行反应，共两步。首先配制基因组gDNA去除混合体系，在离心管中依次加入4×gDNA wiper Mix 4μL，RNA模板1μg，加入RNase free ddH₂O定容至16μL，移液枪轻轻混打均匀，离心，PCR仪上42℃反应2min：

表1基因组gDNA去除混合体系

(2)将上一步反应产物取出加入5×HiScript III qRT SuperMix 4μL定量至20μL，用枪头轻轻混匀，将微量离心管放在PCR仪上37℃，15min；85℃，5s；产物即为cDNA，反应结束后取出待用或-20℃保存。

二、cDNA全长序列的获得

设计特异性引物GmRGS1^OX-F，GmRGS1^OX-R，以反转录合成的cDNA为模板进行PCR扩增。

GmRGS1^OX-F：

GmRGS1^OX-R：

其中，PCR扩增体系见表2。

PCR反应程序：95℃预变性7min；95℃变性30s，56℃退火1min，72℃延伸1min，35次循环；72℃延伸5min。

表2 PCR扩增体系

PCR产物用1.5％琼脂糖凝胶进行电泳，得到长度为1395bp的GmRGS1的cDNA全长序列。

三、GmRGS1基因过量表达载体的构建

使用康为DNA回收纯化试剂盒进行目的条带的回收，然后将纯化的DNA片段连接至载体pGEM-T中(Promega公司)，转化E.coli DH5α感受态细胞，挑选阳性克隆提质粒，测序由华大基因完成，获得长度为1395bp的GmRGS1的片段，具有序列表SEQ ID NO.1的DNA序列。将上述纯化的cDNA片段通过TA克隆连入过量表达载体pPOKII，热激转化E.coli DH5α感受态细胞后对重组子进行菌落PCR，琼脂糖凝胶电泳检测，重组子中包含有与目的片段大小相同的条带。将鉴定好的重组子扩大培养后提取质粒，质粒测序后与原序列比对，连入的片段为全长cDNA并且没有碱基突变和缺失，证明GmRGS1过量表达载体pPOKII-35S-GmRGS1构建成功。将pPOKII-35S-GmRGS1质粒和pPOKII空载体质粒分别转入发根农杆菌K599中，以进行大豆毛状根遗传转化。

3.2大豆毛状根遗传转化

(1)将大豆Williams 82种植于混合土中，温室中萌发，待6天大子叶尚未完全展开时，用注射器挑取含有GmRGS1过量表达质粒的农杆菌和含有pPOKII空载体质粒的农杆菌分别侵染子叶节；

(2)注射完成后，用透明盖罩住，保持内部潮湿，待长出毛状根后，用蛭石将大豆子叶节侵染位点及其以下部分埋住，浇水浇透。

(3)6天后去掉透明盖子，用湿润的蛭石将侵染部位及其以下部分全部覆盖，以保持湿润环境，每2天浇一次水。28℃，14h光照/10h黑暗，培养2周左右进行结瘤表型分析。

3.3过量表达转基因材料的阳性鉴定

取GmRGS1基因过量表达植株的单根，提取基因组DNA，利用构建表达载体所用GmRGS1基因的特异性引物进行扩增，并对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。如能得到清晰的目的条带，则为GmRGS1过量表达的转基因阳性苗，可用于表型分析。

3.4大豆植株结瘤表型分析

(1)待植株生长25-30天(毛状根长度为5-10cm)时，将主根剪掉，将复合体植株移栽至营养土∶蛭石＝1∶1的小穴中继续培养；

(2)3天后每个小穴浇50mL大豆慢生根瘤菌USDA110，每隔一周处理一次，共浇菌3周。

(3)恢复1周后，将毛状根表面的土洗净，统计根瘤数目并拍照。由图2可知，转化空载体(Control)的毛状根平均根瘤数目为6个(图2a、2c)，而过量表达GmRGS1的大豆毛状根平均根瘤数目为11个(图2b、2c)，说明过量表达GmRGS1能够提高大豆根瘤数目。实施例4过量表达GmRGS1的大豆转基因植株施用低浓度葡萄糖后根瘤数目显著增加

在实施例3中3.4(1)完成之后，缓苗3天，每个小穴浇25mM葡萄糖溶液50mL处理大豆毛状根复合植株，1天后，每个小穴浇50mL大豆慢生根瘤菌USDA110。每隔一周处理一次，共分别使用0、25mM、50mM、100mM、150mM葡萄糖溶液和根瘤菌USDA110各处理3次。恢复1周后，将过表达毛状根和空载体毛状根表面的土洗净，统计根瘤数目并拍照。具体的数据统计如表3所示。

表3葡萄糖浓度对大豆根瘤数目的影响

从表1可以看出，在葡萄糖施入量相同的情况下(50mL)，葡萄糖的浓度对其结瘤具有较大的影响，在浓度为25mM时(图3)，转化空载体的毛状根施用低浓度葡萄糖后平均根瘤数目为10个(图3a、3c)，而过量表达GmRGS1的大豆毛状根施用低浓度葡萄糖后平均根瘤数目为16个(图3b、3c)，根瘤数量提高了60％，且根系完整、植株发育良好，但是当施用量在50mM-150mM时，随着用量的增加GmRGS1过表达株系结瘤数量反而降低，并且植株生长不良，叶片萎蔫，根系生长不良，根瘤小。可见，并不是葡萄糖的施用量越多越好，而是过量表达基因GmRGS1联合施用一定浓度(比如25mM)葡萄糖溶液，能够显著提高大豆根瘤数目。

以上所述之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，仅仅用以解释本发明，并非限制本发明实施范围，对于本技术领域的技术人员来说，当然可根据本说明书中所公开的技术内容，通过置换或改变的方式轻易做出其它的实施方式，故凡在本发明的原理上所作的变化和改进等，均应包括于本发明申请专利范围内。

序列表

<110> 山东农业大学

<120> 大豆基因GmRGS1与葡糖糖共同促进豆科植物根瘤产生中的应用

<130> 2022

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1395

<212> DNA

<213> Glycine max

<400> 1

atggagactt gtaccgtgaa aggaggctgc cccagtgact acatagctat tgccctatcc 60

attctttcct tcactgtgct tctcttatgg tccatatttc ccttcctagt tcacaaggtt 120

cctcgtacca aaggcagtgg cttctggtta cctgttattc aagttgttgc cagcttcaat 180

cttcttctat cgattgtgat gtcaaataat ttcttgaaaa tgggaaagag acattggttg 240

cggtcatgct acctatgggg agtctgggtt gaaggtccac tagggtttgg tttgctgttg 300

agctgtcgca taacacaagc ttcacaatta tattttatct tcgtcaagag gcgtttacca 360

ttgataagat catatatttt tcttccactt attctacttc cctggattgc tgctggtggt 420

gttatccatt caatgaagcc tctaagcagt cgctgtcaca tgaaagctca atggaccatc 480

ccagttgtat ccctccattc attgtatatt gccattttgg ttggggttac agctgctgtt 540

catcacatag agttcaggtt tgatgaactc aaagacctct ggcggggaat acttgtatca 600

gctgtgtcca ttgctgtgtg ggttactgct tacatactaa atgaaattta tgacaatatc 660

tcatggcttg aagttgcctc cagatttctg cttttagttg tggctagcat acttgtggtg 720

gctttctttt caatatcaag ttcacaacca cttctctcac aaatcagctt gaggagaaga 780

gaatccagag aatttcgcac aatgagtcag gctctgggca tacctgatag tggggtatta 840

gcacaaagtg aaccaatttc aaggatagat cctaatgaac cgttggataa gcttctcctg 900

aataagagat tccggctgtc ttttatggca tttgctgata gctgcttggc tggggagagt 960

gtgcacttct ttgatgaagt atatgagctt agtaaaatac ctgaagatga ctgtgtgaga 1020

aggatctata tggcacgaca tattattgag aaatacataa ttgcaggtgt ggctatggag 1080

gtgaacatct ctcatagaag cagacaagaa attttatcaa cttccagcct cacacgccct 1140

gatctcttcc ataatgcact taatgaaatc attcagctga tgaaaacaaa tctagctcga 1200

gattactggt cttcaatgtt cttcctgaag ttccaggaag acaccaatgt aagatctaat 1260

gagtacgagc tggagcaaat gaccgggtgg aacttttctc caaggttgag ttctgtgcat 1320

ggtatagacg atccttttca ccaggaccat cttctgaaga gctcaggctg tagcaatgat 1380

acaactgatt tatga 1395

<210> 2

<211> 464

<212> PRT

<213> Glycine max

<400> 2

Met Glu Thr Cys Thr Val Lys Gly Gly Cys Pro Ser Asp Tyr Ile Ala

1 5 10 15

Ile Ala Leu Ser Ile Leu Ser Phe Thr Val Leu Leu Leu Trp Ser Ile

20 25 30

Phe Pro Phe Leu Val His Lys Val Pro Arg Thr Lys Gly Ser Gly Phe

35 40 45

Trp Leu Pro Val Ile Gln Val Val Ala Ser Phe Asn Leu Leu Leu Ser

50 55 60

Ile Val Met Ser Asn Asn Phe Leu Lys Met Gly Lys Arg His Trp Leu

65 70 75 80

Arg Ser Cys Tyr Leu Trp Gly Val Trp Val Glu Gly Pro Leu Gly Phe

85 90 95

Gly Leu Leu Leu Ser Cys Arg Ile Thr Gln Ala Ser Gln Leu Tyr Phe

100 105 110

Ile Phe Val Lys Arg Arg Leu Pro Leu Ile Arg Ser Tyr Ile Phe Leu

115 120 125

Pro Leu Ile Leu Leu Pro Trp Ile Ala Ala Gly Gly Val Ile His Ser

130 135 140

Met Lys Pro Leu Ser Ser Arg Cys His Met Lys Ala Gln Trp Thr Ile

145 150 155 160

Pro Val Val Ser Leu His Ser Leu Tyr Ile Ala Ile Leu Val Gly Val

165 170 175

Thr Ala Ala Val His His Ile Glu Phe Arg Phe Asp Glu Leu Lys Asp

180 185 190

Leu Trp Arg Gly Ile Leu Val Ser Ala Val Ser Ile Ala Val Trp Val

195 200 205

Thr Ala Tyr Ile Leu Asn Glu Ile Tyr Asp Asn Ile Ser Trp Leu Glu

210 215 220

Val Ala Ser Arg Phe Leu Leu Leu Val Val Ala Ser Ile Leu Val Val

225 230 235 240

Ala Phe Phe Ser Ile Ser Ser Ser Gln Pro Leu Leu Ser Gln Ile Ser

245 250 255

Leu Arg Arg Arg Glu Ser Arg Glu Phe Arg Thr Met Ser Gln Ala Leu

260 265 270

Gly Ile Pro Asp Ser Gly Val Leu Ala Gln Ser Glu Pro Ile Ser Arg

275 280 285

Ile Asp Pro Asn Glu Pro Leu Asp Lys Leu Leu Leu Asn Lys Arg Phe

290 295 300

Arg Leu Ser Phe Met Ala Phe Ala Asp Ser Cys Leu Ala Gly Glu Ser

305 310 315 320

Val His Phe Phe Asp Glu Val Tyr Glu Leu Ser Lys Ile Pro Glu Asp

325 330 335

Asp Cys Val Arg Arg Ile Tyr Met Ala Arg His Ile Ile Glu Lys Tyr

340 345 350

Ile Ile Ala Gly Val Ala Met Glu Val Asn Ile Ser His Arg Ser Arg

355 360 365

Gln Glu Ile Leu Ser Thr Ser Ser Leu Thr Arg Pro Asp Leu Phe His

370 375 380

Asn Ala Leu Asn Glu Ile Ile Gln Leu Met Lys Thr Asn Leu Ala Arg

385 390 395 400

Asp Tyr Trp Ser Ser Met Phe Phe Leu Lys Phe Gln Glu Asp Thr Asn

405 410 415

Val Arg Ser Asn Glu Tyr Glu Leu Glu Gln Met Thr Gly Trp Asn Phe

420 425 430

Ser Pro Arg Leu Ser Ser Val His Gly Ile Asp Asp Pro Phe His Gln

435 440 445

Asp His Leu Leu Lys Ser Ser Gly Cys Ser Asn Asp Thr Thr Asp Leu

450 455 460

Claims

1.一种大豆G蛋白信号调节因子编码基因GmRGS1联合施加低浓度葡萄糖溶液在促进大豆根瘤产生中的应用，其特征在于，所述基因GmRGS1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示，所述葡萄糖溶液的浓度为25 mM，每株施加量为50 mL。

2.一种促进豆科植物根瘤产生的方法，其特征在于，通过增加目的植物中蛋白GmRGS1的活性并联合施加25 mM葡萄糖溶液50 mL或促进目的植物中基因GmRGS1的表达并联合施加25 mM葡萄糖溶液50 mL，所述目的植物为大豆。