CN114555587A - 使细胞对抗癌剂敏感的新咔唑衍生物 - Google Patents

使细胞对抗癌剂敏感的新咔唑衍生物 Download PDF

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CN114555587A CN202080071452.2A CN202080071452A CN114555587A CN 114555587 A CN114555587 A CN 114555587A CN 202080071452 A CN202080071452 A CN 202080071452A CN 114555587 A CN114555587 A CN 114555587A
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Abstract

本发明涉及式(I)化合物，式(I)中，R、R1和R2独立地选自由以下组成的组：‑氢原子，‑卤原子，‑包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，‑包含1～10个碳原子的酰基，‑羧基，‑包含1～10个碳原子的酰氨基，和‑亚氨基，可以被直链、环状或支链的、饱和或不饱和的烷基取代，以及，R3、R4、R5和R6独立地选自由以下组成的组：‑氢原子，‑卤原子，‑羟基，‑包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，‑包含1～10个碳原子的烷氧基，‑包含1～10个碳原子的酰基，‑1～10个碳原子的碳酸酯基，‑羧基，和‑氰基。

Description

使细胞对抗癌剂敏感的新咔唑衍生物
技术领域
本发明涉及式(I)的新咔唑衍生物。
本发明还涉及式(I)化合物的制备方法。
本发明还涉及包含如式(I)化合物的药物组合物。
最后，本发明还涉及式(I)化合物在癌症治疗方法中的用途。
背景技术
目前，使用紫杉醇治疗包括肺癌、乳腺癌和卵巢癌的多种癌症。紫杉醇是靶向细胞微管、结合β-微管蛋白的紫杉烷位点并通过增强微管中的横向和/或纵向微管蛋白接触来稳定微管晶格的药物。在高浓度下，它促进微管组装。在低的和临床相关的浓度下，紫杉醇主要抑制微管动力学，而不显著影响微管-聚合物质量。
然而，紫杉醇的低溶解度、其毒性及其对多种耐药机制的敏感性仍然对其使用造成了严重的限制。
此外，在肺腺癌或子宫肿瘤的情况下，经常观察到称为肿瘤抑制剂基因的LKB1基因的萌发突变。这些突变也是大多数Peutz-Jeghers综合征病例的原因，该综合征导致息肉的形成和恶性肿瘤的发病率增加，特别是消化性和乳腺肿瘤。
LKB1-缺陷细胞在这些癌症中的这种高度流行表明急需集中于开发靶向这些细胞的治疗。
发明内容
本发明的一个目的是提供能够缓解上述限制的针对癌症的改进治疗。
具体地，本发明旨在提供一种降低稳定细胞微管的化合物，特别是紫杉醇的毒性的技术问题的解决方案。
本发明旨在提供一种降低对稳定微管的化合物的抗性，特别是对紫杉醇的抗性的技术问题的解决方案。
本发明旨在提供一种提供靶向LKB1-缺陷细胞的新治疗方法的技术问题的解决方案。
本发明的一个目的是提供化合物在药物治疗，特别是抗癌中的用途，其能够缓解上述技术限制。
本发明的另一个目的是降低对稳定微管的化合物的抗性，特别是对紫杉醇的抗性。
本发明的另一个目的是提供对LKB1-缺陷细胞具有选择性细胞毒性的化合物。
本发明涉及式(I)化合物，
Figure BDA0003590787480000021
其中，R、R1和R2独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-包含1～10个碳原子的酰基，
-羧基，
-包含1～10个碳原子的酰氨基，和
-亚氨基，可以被直链、环状或支链的、饱和或不饱和的烷基取代，
以及，
其中，R3、R4、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-包含1～10个碳原子的烷氧基，
-包含1～10个碳原子的酰基，
-1～10个碳原子的碳酸酯基，
-羧基，和
-氰基。
本发明的式(I)化合物也可以是其互变异构、外消旋、对映体或多晶型形式或药学上可接受的盐的形式。
令人惊奇的是，本发明人发现本发明的式(I)化合物在不显著增加其毒性的情况下增强了化合物稳定细胞微管的作用，特别是紫杉醇的作用。这样的式(I)化合物可以允许在癌症治疗中使用较低剂量的稳定微管的化合物，特别是紫杉醇，并且可以限制耐药性的发生。
式(I)化合物能够使细胞对低的、无毒剂量的稳定微管的化合物，特别是紫杉醇敏感。
单独的式(I)化合物对相间微管动力学没有主要影响，并且表现出适度的细胞毒性。然而，式(I)化合物与稳定微管的化合物，特别是与紫杉醇发挥协同的细胞毒性作用。
不受理论的约束，发明人认为式(I)化合物诱导微管动力学的调节，其增加稳定微管内部微管的化合物的积累。
本发明人还意外地发现，本发明的式(I)化合物对LKB1-缺陷细胞具有选择性的细胞毒性。
本发明涉及“取代的”的基团或部分，其已知是指所述基团或部分的至少一个氢基团被称作取代基的原子或一组原子取代。
优选的取代基的实例是卤素(氯-、碘-、溴-或氟-)、烷基、烯基、炔基、羟基、烷氧基、硝基、硫醇、硫醚、亚胺、氰基、酰氨基、膦酸盐、膦、羧基、硫羰基、磺酰基、磺酰胺、酮、醛、酯、氧(-O)、卤代烷基(例如三氟甲基)、环烷基(其可以是单环的或稠合的或未稠合的多环的(例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基)，或杂环烷基，其可以是单环的或稠合的或未稠合的多环的(例如，吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或噻嗪基)，单环的或稠合的或未稠合的多环芳基或杂芳基(例如苯基、萘基、吡咯基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、吖啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并噻吩基或苯并呋喃基))、氨基(伯、仲或叔)、CO2H3、CONH2、OCH2CONH2、NH2、SO2NH2、OCHF2、CF3、OCF3，这些部分也可以任选地被稠环结构或桥取代，例如-OCH2O-。这些取代基可任选地被选自这些基团的取代基进一步取代。
本发明涉及“酰基”基团，其已知为通过从羧酸中除去羟基而衍生的部分。酰基的实例是醛、酮、酯、酰胺或酰氯。
优选地，在根据本发明的式(I)化合物中，R、R1和R2独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-式-CnH2n+1-xXx的烷基，X选自由氢原子、卤素原子、羟基组成的组，n是1～10的整数，x是存在于烷基中的X的数目，优选x是1且X在烷基中的末端位置，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)H的酰基，
-羧基(-COOH)，
-式-C(O)NRb的酰氨基，Rb是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，和
-式-C＝N-Rc的亚氨基，Rc选自由氢原子、包含1～10个碳原子的直链、饱和的烷基或苯基组成的组，以及，
R3、R4、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-式-CnH2n+1的烷基，其为直链、饱和的且n是1～10的整数，
-式-ORd的烷氧基，Rd是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)Re的酰基，Re是氢原子或包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-式-OC(O)ORf的碳酸酯基，Rf是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-羧基(-COOH)，和
-氰基(-CN)。
更优选地，在根据本发明的式(I)化合物中，R和R1独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-直链、饱和且包含1～10个碳原子的烷基，
R2选自：
-氢原子，
-卤原子，
-式-CnH2n+1-xXx的烷基，X选自由氢原子、卤素原子、羟基组成的组，n是1～10的整数，x是存在于烷基中的X的数目，优选x是1且X在烷基中的末端位置，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)H的酰基，
-羧基(-COOH)，
-式-C(O)NRb的酰氨基，Rb是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，和
-式-C＝N-Rc的亚氨基，Rc选自由氢原子、包含1～10个碳原子的直链、饱和的烷基或苯基组成的组，
R3、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-式-CnH2n+1的烷基，其为直链、饱和的且n为1～10的整数，以及，R4选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-式-CnH2n+1的烷基，其为直链、饱和的且n是1～10的整数，
-式-ORd的烷氧基，Rd是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)Re的酰基，Re是氢原子或包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-式-OC(O)ORf的碳酸酯基，Rf是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-羧基(-COOH)，和
-氰基(-CN)。
更优选地，在根据本发明的式(I)化合物中，R和R1独立地选自由氢原子、氯原子和甲基组成的组，R2选自由氢原子、甲基、-COH基、式-CH2X的烷基(X选自由氯原子、溴原子、碘原子和羟基组成的组)、式-C(O)ORa的酰基(Ra是甲基或乙基)、式-C(O)H的酰基、羧基(-COOH)、式-C(O)NRb的酰氨基(Rb是甲基或乙基)和式-C＝N-Rc的亚氨基(Rc是苯基)组成的组，R3、R5和R6独立地选自由氢原子、氯原子、甲基和乙基组成的组，以及，R4选自由氢原子、甲基、羟基、氯原子、溴原子、氟原子、碘原子、式-ORd的烷氧基(Rd是甲基或乙基)、式-C(O)ORa的酰基(Ra为甲基或乙基)、式-C(O)Re的酰基(Re是甲基、乙基、直链丙基、直链戊基、-CH2CH2-环戊基和(对甲基)苯基)、式-OC(O)ORf的碳酸酯基(Rf是甲基或乙基)、羧基(-COOH)和氰基(-CN)组成的组。
有利地，在根据本发明的式(I)化合物中，R和R1独立地选自由氢原子和甲基组成的组，R2选自由氢原子、-COH基和-CH2OH基组成的组，R3、R5和R6独立地选自由氢原子、氯原子和乙基组成的组，以及，R4选自由氢原子、羟基、氯原子、溴原子、氟原子、式-OC(O)ORf的碳酸酯基(Rf是乙基)和式-C(O)ORa的酰基(Ra为甲基)组成的组。
根据一种实施方式，根据本发明的式(I)化合物的特征在于至少三个选自由R3、R4、R5和R6组成的组的取代基是氢原子。
根据一种实施方式，在式(I)化合物中，R4不是氢原子。
根据一种实施方式，在式(I)化合物中，R4是卤原子。
根据一种实施方式，式(I)化合物包含至少一个选自由R、R1和R2组成的组的取代基是氢原子。
根据一种实施方式，式(I)化合物包含至少两个选自由R、R1和R2组成的组的取代基是氢原子。
根据一个实施例，R＝R1＝R2＝H。
在优选的实施方式中，式(I)化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003590787480000071
Figure BDA0003590787480000081
Figure BDA0003590787480000091
在优选的实施方式中，式(I)化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003590787480000092
Figure BDA0003590787480000101
Figure BDA0003590787480000111
优选地，式(I)化合物选自由式(I-a)化合物、式(I-f)化合物、式(I-h)化合物、式(I-e)化合物、式(I-m)化合物、式(I-n)化合物、式(I-c)化合物、式(I-s)化合物及其任意组合组成的组。
优选地，式(I)化合物选自由式(I-a)化合物、式(I-f)化合物、式(I-h)化合物、式(I-e)化合物及其任意组合组成的组。
优选地，式(I)化合物选自由式(I-a)化合物、式(I-f)化合物、式(I-h)化合物及其任意组合组成的组。
优选地，式(I)化合物选自由式(I-a)化合物、式(I-f)化合物、式(I-h)化合物、式(I-c)化合物、式(I-s)化合物及其任意组合组成的组。
更优选地，式(I)化合物选自由式(I-a)化合物、式(I-c)化合物、式(I-s)化合物及其任意组合组成的组。
有利地，式(I)化合物是式(I-a)化合物。
有利地，式(I)化合物是式(I-c)化合物、式(I-s)化合物及其任意组合。
本发明还涉及制备根据本发明的式(I)化合物的方法，包括步骤a)使式(II)化合物在酸优选有机酸的存在下接触式(III)化合物或式(IV)化合物
Figure BDA0003590787480000121
其中，R、R1和R2独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-包含1～10个碳原子的酰基，
-羧基，
-包含1～10个碳原子的酰氨基，和
-亚氨基，可以被直链、环状或支链的、饱和或不饱和的烷基取代，以及，
其中，R3、R4、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-包含1～10个碳原子的烷氧基，
-包含1～10个碳原子的酰基，
-包含1～10个碳原子的碳酸酯基，
-羧基，和
-氰基。
优选地，制备根据本发明的式(I)化合物的方法包括步骤a)使式(II)化合物在酸优选有机酸的存在下接触式化合物(III)，
Figure BDA0003590787480000131
Figure BDA0003590787480000141
其中，R、R1和R2独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-包含1～10个碳原子的酰基，
-羧基，
-包含1～10个碳原子的酰氨基，和
-亚氨基，可以被直链、环状或支链的、饱和或不饱和的烷基取代，以及，
其中，R3、R4、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-包含1～10个碳原子的烷氧基，
-包含1～10个碳原子的酰基，
-包含1～10个碳原子的碳酸酯基，
-羧基，和
-氰基。
在一种实施方式中，制备式(I)化合物的方法包括步骤a’)在使式(III)化合物与式(II)或(IV)化合物，优选与式(II)化合物接触之前，使式(III)化合物与所述酸接触。
优选地，步骤a)或a’)的酸是乙酸。
优选地，步骤a)在25℃至120℃，更优选60℃至100℃的温度下进行，通常在15分钟至180分钟，更优选60分钟至150分钟的时间内进行。
优选地，步骤a’)在15℃至40℃，更优选20℃至30℃的温度下进行，通常在1分钟至60分钟，更优选10分钟至20分钟的时间内进行。
根据特定的实施方式，步骤a)在有机溶剂中进行，优选在包含1～8个碳原子的醇中，更优选在乙醇中进行。
优选地，在本发明的方法中：
R、R1和R2独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-式-CnH2n+1-xXx的烷基，X选自由氢原子、卤素原子、羟基组成的组，n是1～10的整数，x是存在于烷基中的X的数目，优选x是1且X在烷基中的末端位置，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)H的酰基，
-羧基(-COOH)，
-式-C(O)NRb的酰氨基，Rb是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，和
-式-C＝N-Rc的亚氨基，Rc选自由氢原子、包含1～10个碳原子的直链、饱和的烷基或苯基组成的组，以及，
R3、R4、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-式-CnH2n+1的烷基，其为直链、饱和的且n是1～10的整数，
-式-ORd的烷氧基，Rd是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)Re的酰基，Re是氢原子或包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-式-OC(O)ORf的碳酸酯基，Rf是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-羧基(-COOH)，和
-氰基(-CN)。
更优选地，在本发明的方法中：
R和R1独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-直链、饱和且包含1～10个碳原子的烷基，
R2选自：
-氢原子，
-卤原子，
-式-CHnX的烷基，X选自由氢原子、卤素原子、羟基组成的组，n是1～10的整数，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)H的酰基，
-羧基(-COOH)，
-式-C(O)NRb的酰氨基，Rb是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，和
-式-C＝N-Rc的亚氨基，Rc选自由氢原子、包含1～10个碳原子的直链、饱和的烷基或苯基组成的组，
R3、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-包含1～10个碳原子的直链、饱和的烷基，以及，
R4选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-包含1～10个碳原子的直链、饱和的烷基，
-式-ORd的烷氧基，Rd是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)Re的酰基，Re是氢原子或包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-式-OC(O)ORf的碳酸酯基，Rf是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-羧基(-COOH)，和
-氰基(-CN)。
更优选地，在本发明的方法中：
R和R1独立地选自由氢原子、氯原子和甲基组成的组，
R2选自由氢原子、甲基、-COH基、式-CH2X的烷基(X选自由氯原子、溴原子、碘原子和羟基组成的组)，式-C(O)ORa的酰基(Ra是甲基或乙基)、式-C(O)H的酰基、羧基(-COOH)、式-C(O)NRb的酰氨基(Rb是甲基或乙基)和式-C＝N-Rc的亚氨基(Rc是苯基)组成的组，
R3、R5和R6独立地选自由氢原子、氯原子、甲基和乙基组成的组，以及，
R4选自由氢原子、甲基、羟基、氯原子、溴原子、氟原、碘原子、式-ORd的烷氧基(Rd是甲基或乙基)、式-C(O)ORa的酰基(Ra为甲基或乙基)、式-C(O)Re的酰基(Re是甲基、乙基、直链丙基、直链戊基、-CH2CH2-环戊基和(对甲基)苯基)、式-OC(O)ORf的碳酸酯基(Rf是甲基或乙基)、羧基(-COOH)和氰基(-CN)组成的组。
有利地，在本发明的方法中：
R和R1独立地选自由氢原子和甲基组成的组，
R2选自由氢原子、-COH基和-CH2OH基组成的组，
R3、R5和R6独立地选自由氢原子、氯原子和乙基组成的组，以及，
R4选自由氢原子、羟基、氯原子、溴原子、氟原子、式-OC(O)ORf的碳酸酯基(Rf是甲基)和式-C(O)ORa的酰基(Ra为甲基)组成的组。
根据一种实施方式，在式(II)化合物中，至少三个选自由R3、R4、R5和R6组成的组的取代基是氢原子。
根据一种实施方式，在式(III)化合物中，至少一个选自由R、R1和R2组成的组的取代基是氢原子。
根据一种实施方式，在式(III)化合物中，至少两个选自由R、R1和R2组成的组的取代基是氢原子。
根据一种实施方式，在式(III)化合物中，R＝R1＝R2＝H。
根据一种实施方式，在式(IV)化合物中，至少一个选自由R、R1和R2组成的组的取代基是氢原子。
根据一种实施方式，在式(IV)化合物中，至少两个选自由R、R1和R2组成的组的取代基是氢原子。
根据一种实施方式，在式(IV)化合物中，R＝R1＝R2＝H。
在优选的实施方式中，在根据本发明的方法中，式(II)化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003590787480000181
Figure BDA0003590787480000191
优选地，式(II)化合物选自由式(II-a)化合物、式(II-c)化合物、式(II-d)化合物及其任意组合组成的组。
有利地，式(II)化合物是式(II-a)化合物。
在另一优选实施方式中，式(III)化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003590787480000192
优选地，式(III)化合物是式(III-a)化合物或式(III-c)化合物。非常优选地，式(III)化合物是式(III-a)化合物。
在另一优选实施方式中，式(IV)化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003590787480000193
优选地，式(IV)化合物是式(IV-b)化合物。
根据一种实施方式，根据本发明的方法还包括步骤b)对从步骤a)获得的化合物进行化学改性。优选地，步骤b)是酰基的还原。优选地，步骤b)包括使从步骤a)获得的化合物与还原醛的化合物(例如硼氢化物盐)接触，优选与硼氢化钠接触。更优选地，步骤b)是醛的还原，优选通过使从步骤a)获得的化合物与还原醛的化合物(例如硼氢化物盐)接触，优选与硼氢化钠接触。
优选地，步骤b)在15℃至40℃，更优选20℃至30℃的温度下进行，通常在60分钟至150分钟的时间内进行。
本发明还涉及一种药物组合物，其特征在于它包含至少一种根据本发明的式(I)化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。
表述“药学上可接受的赋形剂”是指任何稀释剂、佐剂或赋形剂，例如防腐剂、填料、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、溶剂、分散介质、涂层、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。
本发明的药物组合物可以通过任何合适的途径给药，例如通过口服、口腔、吸入、舌下、鼻、经皮即透皮或胃肠外(包括静脉内、肌肉内、皮下和冠内)给药。因此，本发明的药物组合物可以以各种形式提供，例如以硬明胶胶囊的形式、胶囊的形式、压缩片剂的形式、口服的悬浮液的形式、锭剂的形式或可注射溶液的形式、软膏或任何其它适合于给药方法的形式。
确切的制剂、给药途径和剂量可由个体医师根据患者的状况选择。可单独调节给药量和给药间隔，以提供足以维持预防或治疗效果的式(I)化合物的血浆水平。因此，给药的药物组合物的量取决于被治疗的受试者，取决于受试者的体重，疼痛的严重程度和给药方式。在一种实施方式中，给予式(I)化合物的量取决于被治疗对象对共同给予的稳定细胞微管的化合物的反应。
本发明还涉及一种药物组合物，其特征在于它包含至少一种根据本发明的式(I)化合物、至少一种稳定细胞微管(优选人细胞)的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。
根据本发明，稳定细胞微管的化合物稳定微管聚合物并防止其解聚，从而抑制细胞分裂过程以及依赖于微管动力学的其它不同过程。
优选地，稳定细胞微管的化合物选自紫杉烷，埃坡霉素，TPI-287，卡巴他赛，赞普诺利特(Zampanolide)，达基洛利(dactylolide)，圆皮海绵内酯(discodermolide)，taccalonolide(他卡洛内酯)，达夫内肽(davunetide)，软珊瑚醇(eleutherobin)，粘菌素抑制素(dictyostatin)和肉毒碱(sarcodictyins)A和B。
更优选地，稳定细胞微管的化合物选自由紫杉烷组成的组。
有利地，稳定细胞微管的化合物是紫杉醇。
特别地，根据本发明的稳定细胞微管的化合物在体外对HeLa细胞具有活性。根据一种实施方式，根据本发明的稳定细胞微管的化合物在体外以小于或等于5nM，优选严格小于5nM的浓度对HeLa细胞具有活性。
本发明还涉及根据本发明的式(I)化合物在治疗选自由癌症和涉及微管失调的病症组成的组中的疾病和/或病症方法中的用途。
本发明还涉及治疗选自由癌症和涉及微管失调的病症组成的组中的疾病和/或病症的方法，所述方法包括给予有此需要的受试者治疗有效的式(I)化合物。
本发明还涉及根据本发明的式(I)化合物在制备用于治疗选自由癌症和涉及微管失调的病症组成的组中的疾病和/或病症的药物中的用途。
根据本发明，涉及微管失调的病症是涉及失调的微管动力学的病症。
优选地，涉及微管失调的病症选自神经元疾病(例如阿尔茨海默病或精神分裂症)、心脏病和脊柱损伤。
本发明还涉及根据本发明的式(I)化合物在治疗癌症的方法中的用途，所述癌症选自由需要稳定细胞微管的癌症，优选通过紫杉烷，和由LKB1-缺陷细胞诱导的癌症组成的组。
优选地，可通过稳定细胞微管的化合物治疗的癌症选自由乳腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、胰腺癌和前列腺癌组成的组。
优选地，由LKB1-缺陷细胞诱导的癌症选自由肺腺癌和子宫癌、宫颈癌、乳腺癌、肠癌、睾丸癌、胰腺癌和皮肤癌组成的组。
有利地，根据本发明的式(I)化合物用于治疗选自由乳腺癌、卵巢癌、肺癌、肝癌、子宫癌和AIDS相关的卡波西肉瘤组成的组的癌症的方法中。
本发明还涉及根据本发明的式(I)化合物在治疗人或动物体的方法中的用途，其特征在于所述化合物与至少一种稳定细胞微管(优选人细胞)的化合物共同给药。
优选地，稳定细胞微管的化合物选自紫杉烷、埃坡霉素、TPI-287、卡巴他赛、赞普诺利特(Zampanolide)、达基洛利(dactylolide)、圆皮海绵内酯(discodermolide)、taccalonolide(他卡洛内酯)、达夫内肽(davunetide)、软珊瑚醇(eleutherobin)、粘菌素抑制素(dictyostatin)和肉毒碱(sarcodictyins)A和B，优选紫杉烷。
有利地，稳定细胞微管的化合物是紫杉醇。
本发明还涉及根据本发明的式(I)化合物在治疗人或动物体的方法中的用途，其特征在于将所述式(I)化合物给予患有LKB1-缺陷细胞的患者。
根据本发明，LKB1-缺陷细胞是不表达活性肝激酶B1(LKB1)的细胞，因为编码LKB1的STK11基因遭受种系突变，或者因为它们通过包括突变的各种机制具有失活的LKB1活性。
通过阅读下面的非限制性实施例，可以更好地理解本发明。
附图说明
图1示出了HeLa细胞活力随紫杉醇(PTX)浓度的变化，单独或与不同浓度(0.5、1、6、12和25μM)的化合物(I-a)组合。
图2示出了用DMSO(对照)或12μM或25μM的化合物(I-a)处理的细胞中细胞微管(上)和DNA(下)的图像。
图3示出了用DMSO(对照)或12μM或25μM的化合物(I-a)处理的细胞中染色体聚集的图像。
图4示出了用浓度为12μM或25μM的化合物(I-a)或DMSO(对照)处理HeLa细胞后的细胞周期分布。通过流式细胞术分析细胞周期。在subG1、G1和S步骤以及24小时后，对应于DMSO和化合物(I-a)12μM的曲线基本重叠。
图5示出了用浓度为1nM或5nM的紫杉醇或用DMSO(对照)处理HeLa细胞后的细胞周期分布。通过流式细胞仪分析细胞周期。
图6示出了用化合物(I-a)(12μM)和紫杉醇(1nM)或DMSO(对照)的混合物处理HeLa细胞后的细胞周期分布。通过流式细胞仪分析细胞周期。
图7是表示肿瘤大小随时间的体内演变的图表，取决于小鼠接受的治疗(单独的紫杉醇、单独的化合物(I-a)或紫杉醇和化合物(I-a)的组合)。
图8是表示LKB1-缺陷细胞或重新引入LKB1的细胞的细胞活力百分比的图表，取决于化合物(I-a)的浓度。
图9是表示用单独的化合物(I-a)或用紫杉醇和化合物(I-a)的组合培养的RPE-1细胞的细胞活力百分比的图表。
具体实施方式
实施例
实施例1：式(I)化合物的合成
式(II)化合物是根据公开在以下文献中的方法合成的：
-Tabka等，European Journal of Medicinal Chemistry(1989)，24(6)，605-610，
-Lancelot等，Heterocyles(1990)，31(2)，
-Lancelot等，Gazzetta chimica Italiana，121，1991,
-Lancelot等，(1986)，第22届国际治疗化学会议(22ème RencontresInternationales de chimie thérapeutique)，克莱蒙费朗(Clermont-Ferrand)，9月3-5，124，
-Lancelot等，(1989)，第25届国际治疗化学会议(25ème RencontresInternationales de chimie thérapeutique)，格勒诺布尔(Grenoble)，7月2-5，
-Panno等，新的1,4-二甲基咔唑：合成、反应性、生物学评价(Nuovi1,4-Dimethilcarbazoli:Sintesi,Reattivitàe valutazione Biologica)。卡拉布里亚大学博士论文：卡拉布里亚大学(Tesi Di Dottorato d’UniversitàCalabria:UniversitàDellaCalabria)，2011。
式(III-a)(CAS：696-59-3)、(III-c)(CAS：50634-05-4)和(IV-b)(CAS-110-13-4)化合物可商购。
化合物(I-a)、(I-d)、(I-e)、(I-f)、(I-i)、(I-m)、(I-n)、(I-p)、(I-q)的合成
在室温下在50mL乙酸中搅拌式(III-a)(0.0033-0.0044mol)化合物15分钟。然后，加入1当量的式(II-x)(x＝a～i)化合物。将混合物在80℃加热1小时。冷却后，减压浓缩溶液。将残余物重新溶解在50mL饱和碳酸氢钠溶液中，然后用70mL乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机相，倾析，用硫酸镁干燥并减压浓缩。通过在乙腈中结晶得到式(I-x)(x＝a、d、e、f、j、m、n、p、q)化合物。
化合物(I-c)、(I-h)、(I-k)的合成
在室温下在50mL乙酸中搅拌式(III-c)(0.0041mol)化合物15分钟。然后，加入1当量的式(II-x)(x＝a、d、e)化合物。将混合物在80℃加热2小时。冷却后，减压浓缩溶液。将残余物再溶解在50mL碳酸氢钠饱和溶液中，然后用70mL乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机相，倾析，用硫酸镁干燥并蒸发。通过在乙腈中结晶得到式(I-x)(x＝c、h、k)化合物。
化合物(I-b)、(I-g)、(I-j)、(I-o)的合成
将式(II-x)(x＝a、d、e、g)(0.0041～0.0049mol)化合物在50mL无水乙醇中，在1.2当量式(IV-b)化合物和0.3mL乙酸的存在下，在80℃加热2小时。冷却后，减压浓缩溶液。将残余物再溶解在40mL碳酸氢钠饱和溶液中，然后用60mL乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机相，倾析，用硫酸镁干燥并减压浓缩。通过在乙腈中结晶得到式(I-x)(x＝b、g、j、o)化合物。
化合物(I-s)的合成
在0℃下，在2mL干燥甲醇和2mL干燥四氢呋喃中搅拌式(I-c)化合物(0.35mmol)。加入2当量的硼氢化钠。将混合物在室温下搅拌2小时。减压浓缩该溶液。将残余物再溶解在5mL冰水中，然后用5mL乙酸乙酯萃取两次。有机相用硫酸镁干燥并蒸发。通过硅胶(二乙基醚)层析纯化得到式(I-s)化合物。
化合物(I-a)～(I-q)和(I-s)通过IR光谱和/或NMR光谱表征。各化合物的特征汇总于下表。
Figure BDA0003590787480000251
Figure BDA0003590787480000261
实施例2：评估紫杉醇(PTX)与式(I)化合物联合的细胞毒性
2.1对HeLa细胞的细胞毒性
使用比色Prestoblue测定法(Invitrogen，#A13262)分析细胞生存力。将细胞以每孔2500个细胞的密度接种在96孔微孔板(Greiner，#655077)中，并在用DMSO(最终浓度0.1％)或指定浓度的药物处理72小时之前使细胞粘附24小时。72小时处理后，向每个孔中加入10μL Prestoblue，并将细胞再培养45分钟。使用Fluostar Optima酶标仪(激发，544nm；发射，580nm)测量每个孔的吸光度。
首先，用上述“prestoblue”测定法评估化合物(I-a)、(I-c)、(I-f)、(I-h)、(I-e)、(I-m)、(I-n)和(I-s)对HeLa细胞的细胞毒性。
发现化合物(I-a)具有轻微的细胞毒性，GI50(50％的生长抑制)值为19.4μM至21.8μM。
还发现化合物(I-f)和(I-e)略带毒性，GI50值分别为16.2μM和14.8μM。化合物(I-h)的GI50值为1.06μM。化合物(I-c)和(I-s)的GI50值均为2μM。
然后，在72小时内用不同浓度的紫杉醇(0.05、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5nM)和化合物(I-a)、(I-f)、(I-h)、(I-e)、(I-m)、(I-n)、(I-c)和(I-s)的混合物处理HeLa细胞。
获得以下结果：
添加到紫杉醇中的化合物(I-a)的浓度 0μM 3μM 6μM 12μM
紫杉醇的GI<sub>50</sub> 1.5nM 1.36nM 1.2nM 0.68nM
添加到紫杉醇中的化合物(I-f)的浓度 0μM 1.5μM 3μM 6μM
紫杉醇的GI<sub>50</sub> 1.5nM 1.36nM 1.25nM 0.88nM
添加到紫杉醇中的化合物(I-h)的浓度 0μM 0.1μM 0.2μM 0.4μM
紫杉醇的GI<sub>50</sub> 1.5nM 1.25nM 1.07nM 0.79nM
添加到紫杉醇中的化合物(I-e)的浓度 0μM 0.8μM 1.5μM 3μM
紫杉醇的GI<sub>50</sub> 1.5nM 1.36nM 1.25nM 1.2nM
添加到紫杉醇中的化合物(I-m)的浓度 0μM 3μM 6μM 12μM
紫杉醇的GI<sub>50</sub> 1.5nM 1.5nM 1.5nM 1.25nM
添加到紫杉醇中的化合物(I-n)的浓度 0μM 3μM 6μM 12μM
紫杉醇的GI<sub>50</sub> 1.5nM 1.5nM 1.5nM 1.25nM
添加到紫杉醇中的化合物(I-c)的浓度 0μM 1.2μM
紫杉醇的GI<sub>50</sub> 1.5nM 0.75nM
添加到紫杉醇中的化合物(I-s)的浓度 0μM 1.2μM
紫杉醇的GI<sub>50</sub> 1.5nM 0.75nM
可以观察到，紫杉醇的GI50随着化合物(I-a)浓度的增加而降低。
当化合物(I-a)的浓度为12μM(其中化合物(I-a)自身不具有细胞毒性的浓度)时，与单独使用紫杉醇的GI50相比，紫杉醇的GI50降低了2.2倍(1.5nM vs.0.68nM)。
当化合物(I-f)、(I-h)、(I-c)和(I-s)与紫杉醇结合时，观察到类似的结果，当化合物(I-e)、(I-m)或(I-n)与紫杉醇结合时，程度较低。
这些结果突出了给予式(I)化合物与紫杉醇组合的协同作用。
2.2对细胞凋亡的影响
利用FITC Annexin V凋亡检测试剂盒I(BD Biosciences，#556547)使用流式细胞术进行凋亡分析，并通过FCS express软件进行分析。
Figure BDA0003590787480000281
与DMSO相比，当化合物(I-a)以12μM的浓度给予48小时时，没有检测到额外的凋亡，而在25μM时，其通过凋亡诱导细胞死亡。这些结果表明化合物(I-a)毒性适中。
当与紫杉醇组合时，化合物(I-a)还显示出对细胞凋亡的协同作用。
2.3鼠类癌细胞的细胞毒性
使用比色Prestoblue测定法(Invitrogen，#A13262)分析细胞生存力。将细胞以每孔2500个细胞的密度接种在96孔微孔板(Greiner，#655077)中，并在用DMSO(最终浓度0.1％)或指定浓度的药物处理72小时之前使细胞粘附24小时。72小时处理后，向每个孔中加入10μL Prestoblue，并将细胞再培养45分钟。使用Fluostar Optima酶标仪(激发，544nm；发射，580nm)测量每个孔的吸光度。
在小鼠乳腺癌细胞系(4T1细胞)上也观察到式(I-a)化合物与紫杉醇组合的协同作用(图1)。
实施例3：式(I)化合物对细胞周期和有丝分裂的影响
通过流式细胞术和免疫荧光分析式(I)化合物对HeLa细胞的细胞周期和有丝分裂的影响。
对于流式细胞术分析，用所示浓度的化合物(I-a)处理HeLa细胞12小时、24小时和48小时。然后收集细胞并在PBS中离心洗涤。然后，在4℃下，将105细胞固定在1mL 70％甲醇中过夜。用PBS洗涤两次后，分析前，将细胞与50μg.mL-1碘化丙啶和0.2mg.mL-1RNaseA/PBS在37℃下培养30分钟。使用Accuri C6流式细胞仪(Becton Dickinson)测定特定细胞周期阶段(G0、G1、S、G2和M)中细胞的百分比。
结果表示为三个独立实验的平均值±SD。显著性通过学生t检验确定(*p<0.05，**p<0.01，***p<0.0001，与对照组相比)。
对于免疫荧光分析，细胞在置于24孔微孔板中的玻璃盖玻片上生长48小时。当细胞达到70％汇合时，将培养基更换为补充有化合物(I-a)的新鲜培养基。在化合物(I-a)暴露5小时后，用-20℃无水甲醇固定和透化细胞6分钟。用3％BSA/PBS洗涤和饱和后，将细胞在室温(RT)下与抗α-微管蛋白抗体(1:4000)一起培养45分钟。将细胞再次洗涤两次，随后与Alexa 488偶联的抗小鼠抗体(1:1000)在室温下培养30分钟。将DNA用20μmol.L-1Hoechst33342染色，盖玻片用Mowiol 4-88(Calbiochem,#475904)固定在显微镜载玻片上。使用配备采集软件AxioVision的Zeiss AxioimagerM2显微镜捕获图像，并使用Fiji软件进行分析。
测定化合物(I-a)对细胞微管的作用。化合物(I-a)处理(12～25μM)不会明显干扰间期细胞中的微管网络(图2)。
如图3所示，在12μM处理的细胞群的几个有丝分裂细胞中可见染色体粘连缺陷。在较高剂量(25μM)的化合物(I-a)时，这种缺陷的发生增加。
使用时间推移荧光显微镜对GFP-EB3转染的细胞测量高剂量(25μM)化合物(I-a)对微管动态不稳定性参数的影响(表1)。
表1：分析紫杉醇(1nM)和化合物(I-a)(25μM)对微管动力学的影响
参数 DMSO 0.25％ 化合物(I-a)25μM
生长时间％ 84.19±0.20 60.40±0.25***
暂停时间％ 15.81±0.47 39.60±0.31***
生长速率(μm/min±SE) 14.65±0.10 10.20±0.05***
突变频率(μm<sup>-1</sup>±SE) 0.23±0.03 0.46±0.05***
突变频率(min<sup>-1</sup>±SE) 2.80±0.61 2.74±0,70
***p<0.001，与使用学生t检验的对照值(DMSO)显著不同。
化合物(I-a)降低了微管生长速率以及微管生长长度，如基于距离的突变频率的增加和暂停时间的增加所示，这表明化合物(I-a)在25μM抑制了微管动力学。
流式细胞术分析表明12μM浓度的化合物(I-a)诱导中期完成的显著延迟，因为细胞在G2/M期被阻断(图4)。当以25μM的浓度给予化合物(I-a)时，大部分细胞在中期被阻断。
实施例4：式(I)化合物与紫杉醇(PTX)的组合对细胞周期和有丝分裂的影响
使用HeLa细胞进行流式细胞术分析。用所示浓度的紫杉醇与或不与化合物(I-a)处理HeLa细胞12小时、24小时和48小时，然后用甲醇固定，用碘化丙啶染色并通过流式细胞术分析。结果表示为三个独立实验的平均值±SD。显著性通过学生t检验(*p<0.05，**p<0.01，***p<0.0001与对照组相比)。
流式细胞术分析表明，用5nM紫杉醇处理15小时后，一半的细胞群被阻断在G2/M期，近20％的细胞已经处于凋亡状态。然后，G2/M期细胞比例逐渐减少，同时凋亡(subG1)或多核细胞数量增加(图5)。
如图6所示，1nM紫杉醇(PTX)与12μM化合物(I-a)的组合诱导了细胞周期的阻断，该阻断与用5nM紫杉醇处理细胞时观察到的阻断几乎重叠。用该组合获得的结果与用5nM紫杉醇获得的结果的相似性表明：该组合的总体效果是通过化合物(I-a)增加了紫杉醇效果引起的。
实施例5：化合物(I-a)和紫杉醇(PTX)协同作用于体内肿瘤生长
在肿瘤小鼠模型中比较分别注射的化合物(I-a)和紫杉醇对肿瘤生长的影响与化合物(I-a)和紫杉醇联合给药的影响。
第一系列实验(未示出)评估HeLa细胞肿瘤对紫杉醇治疗剂量的敏感性。为此，由异种移植的HeLa细胞形成的带有相当大小肿瘤的小鼠在10天内每两天接受静脉内(i.v.)紫杉醇(2至8mg/Kg)注射。在相同的实验中，分析了以相同方案注射的化合物(I-a)(15至60mg/Kg，i.v.)的效果。紫杉醇或化合物(I-a)处理的动物和载体处理的动物的重量没有显著差异。而且，动物没有显示出任何不适的征兆，表明对治疗有良好的耐受性。紫杉醇在以4mg/kg和8mg/kg给药时，诱导了肿瘤大小的显著减小。无论注射的剂量如何，化合物(I-a)都不会诱导对肿瘤大小的显著影响，尽管随着化合物(I-a)浓度的增加，出现了肿瘤变小的趋势。结果证实了该模型中高紫杉醇浓度的抗肿瘤作用。它们还表明单独给予化合物(I-a)时，即使在高浓度下也没有显著的抗肿瘤活性。
进行第二个实验以研究低(2～3mg/kg)紫杉醇剂量与不同浓度的化合物(I-a)组合对肿瘤大小的影响。
该联合研究的方案：将10×106指数分裂的HeLa细胞皮下注射到72只NMRI裸鼠(5周大的雌性)的右侧。当肿瘤体积达到约200mm3时，即细胞注射后9天，将小鼠随机分为9组，每组8只小鼠，每两天静脉内注射药物。第一组接受2mg/kg的紫杉醇，第二组接受3mg/kg的紫杉醇，第三组接受40mg/kg的化合物(I-a)，第四组接受60mg/kg的化合物(I-a)，第五组接受化合物(I-a)(40mg/kg)和紫杉醇(2mg/kg)的组合，第六组接受化合物(I-a)(40mg/kg)和紫杉醇(3mg/kg)的组合，第七组接受化合物(I-a)(60mg/kg)和紫杉醇(2mg/kg)的组合，第八组接受化合物(I-a)(60mg/kg)和紫杉醇(3mg/kg)的组合，第九组接受载体(14％DMSO，14％Tween 80和72％PBS)。用游标卡尺每周监测肿瘤生长三次。
在整个研究中没有观察到体重的改变，提示该组合物具有良好的耐受性。如图7所示，虽然当每种化合物单独给药时没有观察到作用，但是使用紫杉醇和化合物(I-a)的组合观察到对肿瘤大小的显著作用。该抗肿瘤作用在化合物(I-a)和紫杉醇浓度方面随剂量而变化。这些结果表明，在体外观察到的紫杉醇和化合物(I-a)之间的协同作用也发生在体内，产生治疗功效。
实施例6：评估式(I)化合物对LKB1-缺陷细胞的影响
应用合成致死性概念来评估式(I)化合物对LKB1-缺陷细胞的选择性毒性。该方法包括确定导致LKB1缺陷的突变与式(I)化合物的作用的组合是否导致致死性，而该突变本身不是致死性的，式(I)化合物在单独应用时也不是致死性的。
在MEF KO LKB1细胞(LKB1-缺陷细胞)或重新导入LKB1的细胞上测定化合物(I)对LKB1-缺陷细胞的差异细胞毒性。使用MTT的细胞生存力分析：该分析在96孔微孔板中进行。以每孔20,000个细胞接种LKB1 KO MEF细胞(LKB1-/-)和LKB1修复的MEF细胞(LKB1+/+)，并使其生长24小时。然后用含有化合物(I-a)(0至25μM)或DMSO(0.25％)的新鲜培养基替换培养基。使细胞再生长48小时。然后，向每个孔中加入5mg/mL的20μL 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-四唑溴化物(MTT)溶液，并在37，培养4小时。弃去培养基，在每个孔中加入100μL DMSO：乙醇(1：1)溶液，轻轻摇动10分钟混合。在570nm的微孔板读取器中测量吸光度。
得到的结果示于图8中。
实施例7：评估式(I)化合物与紫杉醇组合对非癌细胞生存力的影响
RPE-1细胞与指定的化合物(I-a)/紫杉醇的组合一起培养72小时。活细胞的百分比是根据以下公式计算的：如上所述的Prestoblue测定法。数据表示为三个独立实验的平均值±SEM。
所得结果示于图9中。
可以看出，式(I)化合物对非癌细胞没有毒性。(注意，单独使用不同剂量的化合物(I-a)对细胞生存力的影响可以在图9的图中的x坐标＝0处看到，对应于0nM的紫杉醇)。PTX(7nM)的GI50在该细胞系中高于HeLa细胞。当与PTX联合使用时，化合物I-a能够在高剂量(25μM)下协同影响细胞生存力。这些结果表明化合物(I-a)不诱导额外的毒性。

Claims (15)

1.一种式(I)化合物，
Figure FDA0003590787470000011
其中，R、R1和R2独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-包含1～10个碳原子的酰基，
-羧基，
-包含1～10个碳原子的酰氨基，和
-亚氨基，可以被直链、环状或支链的、饱和或不饱和的烷基取代，以及，
其中，R3、R4、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-包含1～10个碳原子的烷氧基，
-包含1～10个碳原子的酰基，
-1～10个碳原子的碳酸酯基，
-羧基，和
-氰基。
2.根据权利要求1所述的式(I)化合物，
其中，R、R1和R2独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-式-CnH2n+1-xXx的烷基，X选自由氢原子、卤素原子、羟基组成的组，n是1～10的整数，x是存在于烷基中的X的数目，优选x是1且X在烷基中的末端位置，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)H的酰基，
-羧基-COOH，
-式-C(O)NRb的酰氨基，Rb是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，和
-式-C＝N-Rc的亚氨基，Rc选自由氢原子、包含1～10个碳原子的直链、饱和的烷基或苯基组成的组，以及，
其中，R3、R4、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-式-CnH2n+1的烷基，所述烷基是直链、饱和的且n是1～10的整数，
-式-ORd的烷氧基，Rd是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)Re的酰基，Re是氢原子或包含1～10个碳原子的直链的、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-1～10个碳原子的碳酸酯基，
-羧基-COOH，和
-氰基-CN。
3.根据权利要求1或2所述的式(I)化合物，
其中，R和R1独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-直链、饱和且包含1～10个碳原子的烷基，
其中，R2选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-式-CnH2n+1-xXx的烷基，X选自由氢原子、卤素原子、羟基组成的组，n是1～10的整数，x是存在于烷基中的X的数目，优选x是1且X在烷基中的末端位置，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)H的酰基，
-羧基-COOH，
-式-C(O)NRb的酰氨基，Rb是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，和
-式-C＝N-Rc的亚氨基，Rc选自由氢原子、或包含1～10个碳原子的直链的、饱和的烷基或苯基组成的组，
其中，R3、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-式-CnH2n+1的烷基，所述烷基是直链、饱和的且n为1～10的整数，以及，
其中，R4选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-式-CnH2n+1的烷基，所述烷基是直链、饱和的且n是1～10的整数，
-式-ORd的烷氧基，Rd是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)ORa的酰基，Ra是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-式-C(O)Re的酰基，Re是氢原子或包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-式-OC(O)ORf的碳酸酯基，Rf是包含1～9个碳原子的直链和饱和烷基，
-羧基-COOH，和
-氰基-CN。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的式(I)化合物，
其中，R和R1独立地选自由氢原子、氯原子和甲基组成的组，
其中，R2选自由氢原子、甲基、-COH基、式-CH2X的烷基、式-C(O)ORa的酰基、式-C(O)H的酰基、羧基-COOH、式-C(O)NRb的酰氨基和式-C＝N-Rc的亚氨基组成的组，并且，X选自由氯原子、溴原子、碘原子和羟基组成的组，Ra是甲基或乙基，Rb是甲基或乙基，Rc是苯基，
其中，R3、R5和R6独立地选自由氢原子、氯原子、甲基和乙基组成的组，以及，
其中，R4选自由氢原子、甲基、羟基、氯原子、溴原子、氟原子、碘原子、式-ORd的烷氧基、式-C(O)ORa的酰基、式-C(O)Re的酰基、式-OC(O)ORf的碳酸酯基、羧基-COOH和氰基-CN组成的组，并且，Rd是甲基或乙基，Ra是甲基或乙基，Re是甲基、乙基、直链丙基、直链戊基、-CH2CH2-环戊基和(对甲基)苯基，Rf是甲基或乙基。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的式(I)化合物，
其中，R和R1独立地选自由氢原子和甲基组成的组，
其中，R2选自由氢原子、-COH基和-CH2OH基组成的组，
其中，R3、R5和R6独立地选自由氢原子、氯原子和乙基组成的组，以及，
其中，R4选自由氢原子、羟基、氯原子、溴原子、氟原子、式-OC(O)ORf的碳酸酯基和-C(O)ORa的酰基组成的组，并且，Rf是乙基，Ra是甲基。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的式(I)化合物，其特征在于，至少三个选自R3、R4、R5和R6的取代基是氢原子。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的式(I)化合物，其特征在于，所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0003590787470000051
Figure FDA0003590787470000061
Figure FDA0003590787470000071
8.根据权利要求1～7中任一项所述的式(I)化合物的制备方法，包括步骤a)使式(II)化合物在酸优选有机酸的存在下接触式(III)化合物或式(IV)化合物，
Figure FDA0003590787470000072
Figure FDA0003590787470000081
其中，R、R1和R2独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-包含1～10个碳原子的酰基，
-羧基，
-包含1～10个碳原子的酰氨基，和
-亚氨基，可以被直链、环状或支链的、饱和或不饱和的烷基取代，以及，
其中，R3、R4、R5和R6独立地选自由以下组成的组：
-氢原子，
-卤原子，
-羟基，
-包含1～10个碳原子的直链、环状或支链的、饱和或不饱和的、可以被取代的烷基，
-包含1～10个碳原子的烷氧基，
-包含1～10个碳原子的酰基，
-1～10个碳原子的碳酸酯基，
-羧基，和
-氰基。
9.一种药物组合物，其特征在于，包含至少一种根据权利要求1～7中任一项所述的式(I)化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。
10.根据权利要求1～7中任一项所述的式(I)化合物，其用于治疗选自由癌症和涉及微管失调的病症组成的组中的疾病和/或病症方法中。
11.根据权利要求1～7中任一项所述的式(I)化合物，其用于治疗癌症的方法中，所述癌症选自由需要优选通过紫杉烷来稳定细胞微管的癌症和由LKB1-缺陷细胞诱导的癌症组成的组。
12.根据权利要求1～7任一项所述的式(I)化合物，其用于治疗人或动物体的方法中，其特征在于，所述化合物与至少一种稳定优选人细胞的细胞微管的化合物共同给药。
13.根据权利要求12所述的式(I)化合物，其中，所述稳定细胞微管的化合物选自紫杉烷、埃坡霉素、TPI-287、卡巴他赛、赞普诺利特、达基洛利、圆皮海绵内酯、他卡洛内酯、达夫内肽、软珊瑚醇、粘菌素抑制素和肉毒碱A和B，优选紫杉烷。
14.根据权利要求12或13所述的式(I)化合物，其中，所述稳定细胞微管的化合物是紫杉醇。
15.根据权利要求1～7中任一项所述的式(I)化合物，其用于治疗人或动物体的方法中，其特征在于，将所述式(I)化合物给予具有LKB1缺陷细胞的患者。
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