CN114555585A - Hpk1抑制剂及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种如结构式(I‑0)或式(II)代表之化合物：

Description

HPK1抑制剂及其用途
【技术领域】
相关申请案之交叉参考文献
本申请案主张2019年7月4日申请之国际专利申请案案号PCT/CN2019/094634之优先权。上述申请案之完整内容均以引用之方式并入本文中。
【先前技术】
造血性前驱细胞激酶1(HPK1)，亦称为丝裂原活化蛋白质激酶激酶激酶激酶1(Mitogen-Activated Protein Kinase Kinase Kinase Kinase 1(MAP4K1))，为一种蛋白质激酶，其作用在典型三层式MAPK途径之上游，该等途径包括MAP3K(MAP激酶激酶激酶(MAPKinase Kinase Kinase))，其激活MAP2K(MAP激酶激酶(MAP Kinase Kinase))，其进而激活双重Thr与Tyr MAPK家族成员JNK(c-Jun N-末端激酶)。原始在造血性前驱细胞中选殖之HPK1/MAP4K1主要表现在淋巴器官/组织，包括骨髓、胎儿肝脏、淋巴结、胎盘、脾脏、及胸腺(Hu等人，Gene&Dev.10(18):2251-2264,1996；Kiefer等人，The EMBO J.15(24):7013-7025,1996)。在细胞层级，HPK1系表现在造血性单位中所有细胞型态，包括造血性前驱细胞、T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突细胞、嗜中性血球、及肥大细胞(Hu，如上述文献，Kiefer，如上述文献)。
HPK1/MAP4K1为包括HPK1(MAP4K1)、GCK(MAP4K2)、GLK(MAP4K3)、HGK/NIK(MAP4K4)、KHS/GCKR(MAP4K5)、及MINK(MAP4K6)之六种MAP4K之其中之一。总言之，此等MAP4K为目前已判别岀之约26种哺乳动物之类Ste20丝胺酸/苏胺酸激酶之成员，其等系酵母sterile20蛋白质(Ste20p)之同源物，系一种在酵母费洛蒙讯号传导途径中激活MAP3K之假定存在之MAP4K。此等哺乳动物之类Ste20激酶依据功能域结构分成两个次族群：p21-活化激酶(PAK)及胚胎中心激酶(GCK)。GCK次族群中，有数个成员可激活MAP3K激酶级联反应，造成JNK活化。
MAP4K具有高度类似之结构，其具有N-末端激酶功能域(KD)，接着为2-4个富集脯胺酸之基序，及C-末端枸橼同源(citron-homology)功能域(CNH)。
HPK1之激酶功能域之ATP-结合位点包括Lys-46。此残基突变成为Met(HPK1-M46)破坏HPK1之催化性活化(Hu，如上述文献)。
HPK1之激酶功能域内有多个保留之Ser/Thr磷酸化位点，及在其前两个富集脯胺酸之基序之间有一个保留之Tyr磷酸化位点。HPK1激活似乎需要Tyr379(小鼠中，或在人类中之Tyr381)被LCK/ZAP70磷酸化，因为在Jurkat T细胞中，受到抗-CD3刺激时，LCK或ZAP70之缺陷破坏Tyr-379磷酸化及HPK1之激酶活性(Ling等人，JBC276(22):18908-18914,2001；Liou等人，Immunity 12(4):399-408,2000；Sauer等人，JBC 276(48):45207,45216,2001)。另一方面，Thr-355自体磷酸化调节HPK1之泛素化与降解。Thr-355为靶向PP4之脱磷酸化位点；此脱磷酸化作用防止CUL7/Fbxw8-介导之泛素化及已活化之HPK1之蛋白酶体降解(Wang等人，Cancer Res.69(3):1063-1070,2009)，因此HPK1亦被蛋白质磷酸酶4(PP4)稳定化及活化(Zhou等人，JBC 279(47):49551-49561,2004)。
Tyr磷酸化位点亦邻接雕亡蛋白酶(caspase)裂解位点(DDVD)。已显示，全长度HPK1可在雕亡细胞中在此位点被雕亡蛋白酶-3裂解，造成N-末端HPK1片段之增强的催化活性(Chen等人，Oncogene18:7370-7377,1999)。
HPK1之四种富集Pro之基序介导HPK1与许多含SH3功能域之蛋白质交互作用(Boomer&Tan,JCB 95(1):34-44,2005)。
HPK1之CNH功能域可能涉及HPK1-介导之淋巴细胞吸附作用，因为另一种类Ste20激酶TNIK之枸橼同源功能域结合Rap2，且调节肌动蛋白细胞骨架(Taira等人，JBC 279(47):49488-49496,2004)。
MAP4K在免疫系统中扮演重要角色，尤其在淋巴细胞中，透过调节细胞讯号传导、免疫细胞激活、细胞转形、及细胞迁移。HPK1剔除(KO)小鼠显示增强之T-细胞活化，增加细胞激素产生，及在KLH免疫后增加抗体产生。HPK1 KO小鼠亦更能感受EAE诱发。HPK1 KO T细胞与B细胞显示增强的细胞活化及抗原受体讯号传导。HPK1 KO树突细胞显示较高量之共同刺激分子及促炎性细胞激素(Alzabin等人，J.Immunol.182(10):6187-6194,2009；Shui等人，Nat.Immunol.8(1):84-91,2007)。
在细胞株(例如，HEK293与COS-1细胞，及造血性Jurkat T细胞与白血病HL-60细胞)中过度表现，证实HPK1可以透过多种MAP3K(包括TAK1、MEKK1、及MLK3)激活MAPK JNK(但不是p38或ERK MAP激酶)，其等均激活MAP2K MKK4与MKK7，进而激活JNK。
值得注意，MAP4K在免疫细胞中之调节功能似乎主要受到不依赖JNK之机转介导。已证实IKK-NF-κB活化需要HPK1激酶活化，且咸信HPK1系利用调节CARMA1来运作。CARMA1为在所谓CBM(CARMA1/BCL10/MALT1)复合物中之转接蛋白质，其在Jurkat T细胞中受到抗-CD3刺激时，促进IKKβ活化。活化之IKK裂解IκB，幷释出相关之NF-κB核转录因子。特定言之，HPK1可被诱发与CARMA1相联，直接在Ser-551磷酸化CARMA1，其系NF-κB活化所必需(Brenner等人，PNAS USA,196(34):14508-14513,2009)。
T细胞中，当TCR刺激时，淋巴细胞蛋白质酪胺酸激酶(Lck)使TCR/CD3复合物之细胞溶质侧之免疫受体酪胺酸活化基序(ITAM)磷酸化。Zap-70随后募集至TCR/CD3复合物，在此进行磷酸化及活化。活化之ZAP-70使称为SLP-76之转接蛋白质磷酸化，其转移至浆膜，藉由与许多蛋白质(包括HPK1)结合，促进形成多重蛋白质讯号小体复合物。此等蛋白质集体传送TCR讯号至不同效应分子，造成T-淋巴细胞之活化、存活、及增殖。
此过程中，HPK1直接结合SLP-76之SH2功能域，主要作为TCR讯号传导之负向调节剂。例如，在HPK1 KO原生T细胞中加强TCR讯号传导，当于活体外连接TCR时，其等显示过度增殖及产生IL-2(Shui，如上述文献)。咸信HPK1可透过负向反馈机转，在Ser-376磷酸化SLP-76转接蛋白质，而下调TCR讯号传导。当Ser-376被HPK1磷酸化时，SLP-76透过已磷酸化之Ser-376残基结合至14-3-3，造成SLP-76之Lys-30(K30)残基泛素化，随后即成为蛋白酶体降解之标靶。HPK1亦藉由类似机转，在其他转接蛋白质(包括GADS)下调TCR讯号传导(例如，藉由GADS之Thr-254之磷酸化及促进14-3-3交互作用)。
因此，HPK1似乎在JNK活化及TCR讯号传导扮演双重且相反角色。虽然HPK1已证实在不同过度表现系统中透过MAP3K-MAP2K-MAPK途径直接激活JNK途径，但HPK1-介导SLP-76活化的抑制亦造成TCR讯号传导中之JNK活性的抑制。此点与HPK1剔除之原生T细胞显示未受影响之JNK活性结果一致(Shui，如上述文献)。同样地，HPK1似乎依两种不同且相反机转来调节IKK活化-HPK1一方面藉由直接磷酸化CARMA1来激活IKK；另一方面HPK1亦藉由抑制SLP-76活化来负向调节IKK活化。此点似乎与HPK1扮演之双重角色相反，咸信HPK1在TCR讯号传导初始期促进JNK及IKK活化，但在末期阻碍TCR讯号传导中扮演重要角色。
HPK1亦在B细胞中之BCR所诱发细胞活化及增殖扮演类似之负向调节角色。B细胞利用称为BLNK之类SLP-76转接蛋白质来转导BCR讯号传导，包括JNK及IKK活化。B细胞中，Tyr激酶Syk及Lyn促进HPK1之Tyr磷酸化与活化，及造成HPK1之pY379介导HPK1-BLNK结合作用。BLNK之HPK1的负向反馈系透过BLNK之Thr-152。pT152被14-3-3结合，造成在多重Lys残基的BLNK泛素化，随后BLNK的蛋白酶体降解(因此阻碍BCR讯号传导)。
值得注意的是HPK1似乎为调节性T细胞(Treg)之压制功能之正向调节剂(Sawasdikosol等人，J Immunol.188(supp.1):163,2012)。HPK1缺陷小鼠Foxp3+Tregs在压制TCR所诱发效应子T细胞增殖出现缺陷，反而在TCR接合时，矛盾地得到制造IL-2的能力(Sawasdikosol，如上述文献)。因此，HPK1为Treg功能及周边自体耐受性之重要调节剂。
HPK1亦涉及PGE2所介导CD4+T细胞活化的抑制(Ikegami等人，J Immunol.166(7):4689-4696,2001)。US2007/0087988显示，CD4+T细胞曝露到PGE2之生理浓度时，透过PGE2所诱发PKA活化，可增加HPK1激酶活性。HPK1缺陷之T细胞之增殖可耐受PGE2之压制效应(US2007/0087988)。因此，PGE2所介导HPK1活化可能代表一种调控免疫反应之新颖调节途径。
不同于TCR及BCR，HPK1亦转导TGF-R(转化生长因子受体)(Wang等人，JBC 272(36):22771-22775,1997)或Gs-偶联PGE2受体(EP2及EP4)(Ikegami等人，J Immunol.166(7):4689-4696,2001)下游之讯号。
HPK1负向调节免疫细胞附着。T细胞中，TCR活化亦诱发整合素活化，造成T-细胞附着及免疫突触形成。此系由促进降解之转接蛋白质(ADAP)之SLP-76结合来达成，其系TCR所诱发整合素活化所必需(Wang等人，J.Exp.Med.200(8):1063-1074,2004)，但其组成性相关之SKAP55蛋白质使活化之小GTPase Rap1靶向浆膜，造成整合素活化(Kliche等人，MCB 26(19):7130-7144,2006)。换言之，SLP-76/ADAP/SKAP55三元复合物接力传达TCR讯号传导给整合素家族之附着分子，藉以促进T-细胞附着。HPK1不仅透过下调SLP-76(如上述文献)，而且透过与ADAP竞争SLP-76的相同SH2结合位点，而负向调节此途径，进而阻碍ADAP下游效应子Rap1之活性(Patzak等人，Eur.J.Immunol.40(11):3220-3225,2010)。
HPK1同样负向调节B细胞中之整合素活化及细胞附着。其中，HPK1系与称为SKAP-HOM之SKAP55同源物相关(Konigsberger等人，PloS One 5(9).pii:e12468,2010)，其系B-细胞附着所必需(Togni等人，MCB 25(18):8052-8063,2005)。咸信HPK1诱发SKAP-HOM之负向磷酸化位点，进而压制Rap1活化。
然而，在嗜中性细胞中，HPK1正向调节其附着。嗜中性细胞运送，包括缓慢滚动、紧密结合、细胞扩散、及血球渗出，系受到β2-整合素活化之由外往内讯号传导所控制，诱发肌动蛋白与HIP-55(55kDa之HPK1-交互作用蛋白质)间之交互作用。其强化β2-整合素之高亲和性构形，有助于嗜中性细胞附着(Hepper等人，J.Immunol.188(9):4590-4601,2012；Schymeinsky等人，Blood114(19):4209-4220,2009)。当β2-整合素介导附着作用时，HPK1与HIP-55及肌动蛋白共同定位在嗜中性细胞之板状伪足(Jakob等人，Blood 121(20):4184-4194,2013)。CXCL1所介导嗜中性细胞附着作用被活体内及活体外之HPK1缺陷或HIP-55缺陷破坏(Jakob，如上述文献Schymeinsky，如上述文献)。
与HPK1下调TCR及BCR功能之角色一致，HPK1负向调节后天免疫反应，幷丧失HPK1所介导调节T-细胞活化，且免疫反应可能为自体免疫病源之重要机转。在HPK1 KO小鼠中，虽然T及B细胞之发展似乎不受影响(Shui，如上述文献)，但来自此等动物之T细胞显示，当在活体外受到抗-CD3刺激时，TCR近端之讯号传导及下游ERK之活化大幅增加，造成此等细胞过度增殖(Shui，如上述文献)。来自已免疫之HPK1-缺陷小鼠之T细胞受到抗原性特异性刺激时过度反应，显著产生较高量的发炎细胞激素，如IL-2、IFN-γ、及IL-4。此等小鼠亦产生更高量之IgM及IgG同型，表示已加强剔除HPK1之B细胞功能(Shui，如上述文献)。
HPK1亦负向控制小鼠之自体免疫性，因为HPK1 KO小鼠对诱发实验性自体免疫脑脊髓炎(EAE)之敏感性较高(Shui，如上述文献)。HPK1衰减亦有助于异常之T-及B-细胞活化及人类患者之自体免疫力。干癣性关节炎患者之周边血液单核细胞或全身性红斑性狼疮(SLE)患者之T细胞之HPK1已下调。
HPK1之生理功能不限于淋巴细胞，HPK1亦透过未知机转负向调节树突状细胞(DC)成熟及活化(Alzabin，如上述文献)。在HPK1KO小鼠中，骨髓衍生之树突状细胞(BMDC)显示共同刺激分子CD80/CD86之加强的含量，并增加产生促炎细胞激素(Alzabin，如上述文献)。结果，HPK1 KO小鼠中之树突状细胞之抗原呈现活性更有效(Alzabin，如上述文献)。更重要的是，由HPK1 KO BMDC所介导CTL反应肿瘤根除之效力比野生型BMDC更高(Alzabin，如上述文献)。此外，HPK1亦可利用T-及B-淋巴细胞依赖性机转控制抗肿瘤免疫性。已显示HPK1缺陷T细胞之过继移转在控制肿瘤生长及转移比野生型T细胞更有效(Alzabin等人，CancerImmunol Immunother 59(3):419-429,2010)。同样地，来自HPK1剔除小鼠之BMDC在提供T细胞反应来根除路易士肺癌瘤(Lewis lung carcinoma)比野生型BMDC更有效(Alzabin等人，J Immunol.182(10):6187-6194,2009)。
因此，需要HPK1抑制性化合物透过调控HPK1活性来治疗疾病或疾患。
【发明内容】
本文说明为抑制HPK1活性之式(I-0)、(I-1)、(I-2)、(I)、(II)、(II-1)、(II-2)、或(II-2’)化合物，及实例化合物(统称为「本发明化合物」)，及其医药上可接受之盐类。
一项态样中，本发明提供一种如结构式(I-0)代表之化合物：
Figure BDA0003506712340000091
或其医药上可接受之盐或立体异构物，其中
X为CR2R3或NR3；
A为CR2或N；
R为8-10员双环含氮杂芳基或8-10员双环含氮杂环基，其可视需要经侧氧基取代，其中由R代表之含氮杂芳基或含氮杂环基具有1至3个选自：N、O、与S之杂原子，且可视需要经1至4个Ra取代，及其中R系利用氮环原子连接嘧啶环，或R系以如下结构式代表：
Figure BDA0003506712340000092
R1为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)O C1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、苯基、5-6员杂芳基、C3-6环烷基、或3-7员杂环基，其中由R1代表或在由R1代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、杂芳基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、
C1-4烷氧基、C1-4卤烷基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12；或
R及R1与其等所附接之碳原子共同形成如下代表之环：
Figure BDA0003506712340000101
其中
Figure BDA0003506712340000102
键结系连接嘧啶环；
R2之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、或S(＝O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基团中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12；
R3为H、C1-6烷基、C(O)C1-6烷基、C3-6环烷基、或3-7员杂环基，其中由R3代表或在由R3代表之基团中之烷基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基、3-7员杂环基、及NR11R12；
R11及R12之各例分别独立为H或C1-6烷基，其中由R11或R12代表之烷基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基、及3-7员杂环基，或
R11及R12与其等所附接之氮原子或磷原子共同形成3-7员杂环基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、及C1-4卤烷氧基；
Ra之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、C3-6环烷基、3-7员杂环基、或5-6员杂芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、及5-6员杂芳基；或
两个Ra与其等所附接碳原子(群)共同形成C3-6环烷基或3-7员杂环基，其中环烷基或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、及C1-4卤烷氧基；
Rb之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、C3-6环烷基、3-7员杂环基、或5-6员杂芳基，其中由Rb代表或在由Rb代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、及5-6员杂芳基；
Rc之各例分别独立为苯基、具有1至3个选自N及O之杂原子之5-6员单环状杂环基；具有1至3个选自N及O之杂原子之5-6员单环状杂芳基；其中由Rc代表之苯基、杂环基、或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、及P(O)二-C1-6烷基；
Ra'为C1-6烷基，其可视需要经OH、CN、5-6员杂芳基、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12取代；
m为0、1、2、或3；
n为0、1、2、3、或4；
p为1、2、或3；
q为1、2、或3；及p+q≤4。
另一态样中，本发明提供一种如结构式(II)代表之化合物：
Figure BDA0003506712340000121
或其医药上可接受之盐或立体异构物，其中
A1为CR’或N；
X为–P(＝O)R3’R4’；
R’为H、氘、卤素、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基，其中由R’代表或在由R’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
R1’之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、C3-7环烷基、或3-7员杂环基，其中由R1’代表或在由R1’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
R2’之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、苯基、5-6员杂芳基、C3-7环烷基、或3-7员杂环基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、杂芳基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
各R3’及R4’分别独立为H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中由R3’或R4’代表之烷基、烯基、或炔基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
R11’及R12’之各例分别独立为H或C1-6烷基，其中由R11’或R12’代表之烷基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基、及3-7员杂环基，或
R11’及R12’与其等所附接之氮原子共同形成3-7员杂环基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、或C1-4卤烷氧基；
m’为0、1、或2；及
n’为0、1、或2。
本文提供一种医药组成物，其包含有效量之本发明化合物或其医药上可接受之盐，及医药上可接受之载剂。
亦提供一种组合，其包含医疗有效量之本发明化合物、或其医药上可接受之盐，及一或多种医疗活性并用制剂。
本发明进一步提供一种为有此需要之个体抑制HPK1活性之方法，该方法包括对该个体投与医疗有效量之本发明化合物、或其医药上可接受之盐。
本发明进一步提供一种治疗罹患本文所说明疾病或病症(如癌症，如乳癌、结肠直肠癌、肺癌、卵巢癌、及胰脏癌)之方法，该方法包括对该个体投与医疗有效量之本发明化合物、或其医药上可接受之盐。
某些具体例揭示本发明化合物或其医药上可接受之盐，用为医药，如作为HPK1抑制剂之医药。.
本发明亦提供一种以本发明化合物或其医药上可接受之盐或含其等之医药组成物于上文所说明任何本发明方法中之用途。一具体例中，提供一种本发明化合物或其医药上可接受之盐或含其等之医药组成物，用于上文所说明任何本发明方法中。另一具体例中，提供一种以本发明化合物或其医药上可接受之盐或含其等之医药组成物于制造用于上文所说明任何本发明方法中之医药上之用途。
【实施方式】
1.概述
本文说明之本发明提供一种HPK1/MAP4K1抑制剂、其医药上可接受之盐类、其医药组成物、及使用其等调控(例如，抑制)HPK1/MAP4K1活性之方法，该方法包括对有需要之患者/个体投与本发明HPK1/MAP4K1抑制剂化合物，或其医药上可接受之盐类。某些具体例中，本发明化合物或其医药上可接受之盐类适用于医疗性投药，以在治疗癌症时，加强、刺激及/或增加免疫力。
例如，治疗与抑制HPK1交互作用有关之疾病或疾患之方法包括对有此需要之患者投与医疗有效量之本文所提供化合物或其医药上可接受之盐类。本发明化合物可以单独使用、组合其他制剂或疗法使用、或作为佐剂或前置佐剂使用，供治疗疾病或疾患，包括癌症。
2.定义
本文所采用术语「一种」、「一个」、「该」及类似术语用于本发明内容中(尤其在申请专利范围的内容中)系涵括单数与复数，除非本文中另有其他说明或与内文抵触。
本文所采用「卤基」意指卤素，且包括氯、氟、溴、及碘。
单独使用或作为较大部份体(如「烷氧基」或「卤烷基」及类似基团)之一部份所使用术语「烷基」意指饱和脂系直链或分支单价烃基。除非另有明确说明，否则烷基通常具有1-4或1-6个碳原子，亦即(C1-C4)烷基或(C1-C6)烷基。此时，「(C1-C4)烷基」意指具有1至4个碳原子之呈直链或分支排列之基团。实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、第二丁基、异丁基、第三丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基等等。
术语「C1-6伸烷基」系指具有1至6个碳原子之二价完全饱和之分支或直链单价烃基。同样地可解释术语「C1-4伸烷基」、「C1-3伸烷基」及「C1-2伸烷基」。C1-6伸烷基之代表性实例包括(但不限于)：亚甲基、伸乙基、伸正丙基、伸异丙基、伸正丁基、伸第二丁基、伸异丁基、伸第三丁基、伸正戊基、伸异戊基、伸新戊基、及伸正己基。
术语「可视需要经羟基取代之C1-C6烷基」系指可经一个或多个羟基取代之如上述定义之C1-C6烷基。其实例包括(但不限于)羟基甲基、羟基乙基、1,2-二羟基乙基、2,3-二羟基-丙基等等。
本文所采用术语「二C1-6烷基胺基」系指如式-N(Ra)-Ra之部份体，其中各Ra为如上述定义之C1-6烷基，其等可相同或相异，类似术语「单C1-6烷基胺基」，系指如式-N(H)-Ra之部份体，其中Ra为如上述定义之C1-6烷基。
术语「烯基」意指含有至少一个双键之分支或直链单价烃基。烯基可为单不饱和或多不饱和，且可呈E或Z组态。除非另有明确说明，否则烯基通常具有2-6个碳原子，亦即(C2-C6)烯基。例如，「(C2-C6)烯基」意指具有2-6个碳原子之呈直链或分支排列之基团。
术语「炔基」意指含有至少一个参键之分支或直链单价烃基。除非另有明确说明，否则炔基通常具有2-6个碳原子，亦即(C2-C6)炔基。例如，「(C2-C6)炔基」意指具有2-6个碳原子之呈直链或分支排列之基团。
术语「烷氧基」意指透过氧连接原子附接之烷基，由-O-烷基代表。例如，「C1-C6烷氧基」系指-O-C1-C6烷基，其中烷基如本文上述定义，及「(C1-C4)烷氧基」包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、及丁氧基等等。烷氧基之代表性实例包括(但不限于)甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、第三丁氧基、戊基氧基、己基氧基、环丙基氧基-、环己基氧基-及类似物。通常，烷氧基具有约1至6个碳原子、1至4个碳原子、或1至2个碳原子。
术语「卤烷基」及「卤烷氧基」意指可能经一个或多个卤原子取代之烷基或烷氧基。卤烷基实例包括(但不限于)三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基及类似物。
因此术语「可视需要经卤素取代之C1-6烷基」系指可经一个或多个卤素取代之如上述定义之C1-C6烷基。其实例包括(但不限于)三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基、3-溴-2-氟丙基、及1-溴甲基-2-溴乙基。
本文所采用术语「环烷基」包括具有3至14个碳且含有指定环数与碳原子数之饱和环状、双环状、三环状、或多环状烃基(例如，C3-C14单环、C4-C14双环、C5-C14三环、或C6-C14多环之环烷基)。有些具体例中，「环烷基」为单环状环烷基。单环状环烷基实例包括环戊基(C5)、环己基(C6)、环丙基(C3)、环丁基(C4)、环庚基(C7)及环辛基(C8)。有些具体例中，「环烷基」为双环状环烷基。双环状环烷基实例包括双环[1.1.0]丁烷(C4)、双环[1.1.1]戊烷(C5)、螺[2.2]戊烷(C5)、双环[2.1.0]戊烷(C5)、双环[2.1.1]己烷(C6)、双环[3.3.3]十一碳烷(C11)、十氢萘(C10)、双环[4.3.2]十一碳烷(C11)、螺[5.5]十一碳烷(C11)及双环[4.3.3]十二碳烷(C12)。有些具体例中，「环烷基」为三环状环烷基。三环状环烷基实例包括金刚烷(C12)。除非另有其他说明，否则「环烷基」具有3至6个碳原子，且系单环。
单独使用或作为如「芳烷基」、「芳烷氧基」或「芳基氧烷基」之较大部份体中一部份使用之术语「芳基」意指碳环系芳香环。术语「芳基」可与术语「芳基环」、「碳环系芳香环」、「芳基基团」及「碳环系芳香基」交换使用。通常，芳基为具有6-20个碳原子，通常为6-14个环碳原子之单环、双环或三环状芳基。此外，本文所采用术语「芳基」系指可为单一芳香环或共同稠合之多重芳香环之芳香系取代基。其实例包括苯基、萘基、蒽基、1,2-二氢萘基、1,2,3,4-四氢萘基、芴基、茚满基、茚基及类似物。
「经取代之芳基」系取代在任何一个或多个可经取代之环原子，其为与氢键结之环碳原子。经取代之芳基通常经1-5个(如一个或两个或三个)分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：羟基、硫醇基、氰基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、C1-C4烷氧基、C1-C4硫烷基、C1-C4烯基氧基、C1-C4炔基氧基、卤素、C1-C4烷基羰基、羧基、C1-C4烷氧基羰基、胺基、C1-C4烷基胺基、二-C1-C4烷基胺基、C1-C4烷基胺基羰基、二-C1-C4烷基胺基羰基、C1-C4烷基羰基胺基、C1-C4烷基羰基、C1-C4烷基胺基、磺酰基、胺磺酰基、烷基胺磺酰基、及C1-C4烷基胺基磺酰基，其中上述各烃基(例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基残基)在每次出现时可再经一个或多个分别独立选自下列之残基取代：卤素、羟基或C1-C4烷氧基。
术语「杂环基」或「杂环系基团」意指单环状非芳香系(包括部份饱和)环，其较佳具有3至10个组员及较佳包含1-4个环杂原子，或指多环，其环中较佳具有7至20个组员及较佳1至4个环杂原子，其中多环状环具有一个或多个单环状非芳香系杂环与一个或多个芳香系或杂芳香系环稠合。杂环基通常具有3至7个、3至24个、4至16个、5至10个、或5或6个环原子；其中可视需要有1至4个，尤指1或2个环原子为杂原子(因此其余环原子为碳)。各杂原子分别独立选自：氮、四级氮、氧化氮(例如，NO)；氧；及硫，包括亚砜与砜。杂环系基团可以附接在杂原子或碳原子上。杂环实例包括四氢呋喃(THF)、二氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、吗啉、1,4-二硫杂环己烷、呱嗪、呱啶、1,3-二氧杂环戊烷、咪唑啶、咪唑啉、吡咯啉、吡咯啶、四氢呱喃、二氢呱喃、氧硫杂环戊烷、二硫杂环戊烷、1,3-二氧杂环己烷、1,3-二硫杂环己烷、氧硫杂环己烷、硫吗啉及类似物。
杂环基可包括稠合或桥连环，及螺环。一具体例中，杂环基为具有单环状非芳香系杂环与苯基稠合之双环。多环之杂环系基团实例包括四氢异喹啉基(如1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基、2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基、1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基及2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)、异吲哚啉基(如2-乙基异吲哚啉-5-基、2-甲基异吲哚啉-5-基)、吲哚啉基、四氢苯幷[f]氧杂氮杂环庚烷基(例如，2,3,4,5-四氢苯幷[f][1,4]氧杂氮杂环庚烷-7-基)。
术语「杂环」、「杂环基」、或「杂环系」不论饱和或部份饱和，亦指可视需要经取代之环。经取代之杂环基可为分别独立经1-4个，如一个、或两个、或三个、或四个取代基取代之杂环基。
有些具体例中，杂环基为具有环碳原子及1-4个环杂原子之3-14员非芳香环系，其中各杂原子分别独立选自：氮、氧、及硫(「3-14员杂环基」)。
单独使用或作为如「杂芳烷基」或「杂芳基烷氧基」之较大部份体中之一部份使用之术语「杂芳基」、「杂芳香系」、「杂芳基环」、「杂芳基基团」、「杂芳香环」、及「杂芳香基」系指具有5至14个选自碳及至少一个(通常为1至4个，更常为1或2个)杂原子(例如，氧、氮、或硫)之环原子之芳香系环基。「杂芳基」包括单环状环及多环状(例如，双-或三环状)环，其中由单环状杂芳香系环与一个或多个其他碳环芳香系或杂芳香系环稠合。因此，「5-14员杂芳基」包括单环、双环或三环状环系。
单环状5-6员杂芳基实例包括呋喃基(例如，2-呋喃基、3-呋喃基)、咪唑基(例如，N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基)、异
Figure BDA0003506712340000201
唑基(例如，3-异
Figure BDA0003506712340000202
唑基、4-异
Figure BDA0003506712340000203
唑基、5-异
Figure BDA0003506712340000204
唑基)、
Figure BDA0003506712340000205
二唑基(例如，2-
Figure BDA0003506712340000206
二唑基、5-
Figure BDA0003506712340000207
二唑基)、
Figure BDA0003506712340000208
唑基(例如，2-
Figure BDA0003506712340000209
唑基、4-
Figure BDA00035067123400002010
唑基、5-
Figure BDA00035067123400002011
唑基)、吡唑基(例如，3-吡唑基、4-吡唑基)、吡咯基(例如，1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基)、吡啶基(例如，2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基)、嘧啶基(例如，2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基)、嗒嗪基(例如，3-嗒嗪基)、噻唑基(例如，2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基)、三唑基(例如，2-三唑基、5-三唑基)、四唑基(例如，四唑基)、噻吩基(例如，2-噻吩基、3-噻吩基)、嘧啶基、吡啶基及嗒嗪基。
通常，杂芳基为5-10员环系(例如，5-6员单环或8-10员双环)或5-6员环系。典型杂芳基包括2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-或3-吡咯基、2-、4-、或5-咪唑基、3-、4-、或5-吡唑基、2-、4-、或5-噻唑基、3-、4-、或5-异噻唑基、2-、4-、或5-
Figure BDA0003506712340000211
唑基、3-、4-、或5-异
Figure BDA0003506712340000212
唑基、3-或5-1,2,4-三唑基、4-或5-1,2,3-三唑基、四唑基、2-、3-、或4-吡啶基、3-或4-嗒嗪基、3-、4-、或5-吡嗪基、2-吡嗪基、及2-、4-、或5-嘧啶基。
多环状芳香系杂芳基实例包括咔唑基、苯幷咪唑基、苯幷噻吩基、苯幷呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯幷三唑基、苯幷噻唑基、苯幷
Figure BDA0003506712340000213
唑基、苯幷咪唑基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、吖啶基、或苯幷异
Figure BDA0003506712340000214
唑基。
因此术语「杂芳基」亦指其中杂芳香环与一个或多个芳基、环脂系、或杂环基环稠合，其中该基团或附接点在杂芳香环。其非限制实例包括1-、2-、3-、5-、6-、7-、或8-吲哚嗪基、1-、3-、4-、5-、6-、或7-异吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-吲唑基、2-、4-、5-、6-、7-、或8-嘌呤基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、或9-喹嗪基、2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-异喹啉基、1-、4-、5-、6-、7-、或8-酞嗪基、2-、3-、4-、5-、或6-萘啶基、2-、3-、5-、6-、7-、或8-喹唑啉基、3-、4-、5-、6-、7-、或8-噌啉基、2-、4-、6-、或7-蝶啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-4aH咔唑基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-咔唑基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-咔啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-、或10-吩萘啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-吖啶基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-萘嵌间二氮杂苯基、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、或10-菲绕啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、或9-吩嗪基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-、或10-吩噻嗪基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-、或10-吩
Figure BDA0003506712340000221
嗪基、2-、3-、4-、5-、6-、或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、或10-苯幷异喹啉基、2-、3-、4-、或噻吩幷[2,3-b]呋喃基、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、或11-7H-吡嗪幷[2,3-c]咔唑基、2-、3-、5-、6-、或7-2H-呋喃幷[3,2-b]-呱喃基、2-、3-、4-、5-、7-、或8-5H-吡啶幷[2,3-d]-o-
Figure BDA0003506712340000222
嗪基、1-、3-、或5-1H-吡唑幷[4,3-d]-
Figure BDA0003506712340000223
唑基、2-、4-、或5-4H-咪唑幷[4,5-d]-噻唑基、3-、5-、或8-吡嗪幷[2,3-d]嗒嗪基、2-、3-、5-、或6-咪唑幷[2,1-b]-噻唑基、1-、3-、6-、7-、8-、或9-呋喃幷[3,4-c]噌啉基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10-、或11-4H-吡啶幷[2,3-c]咔唑基、2-、3-、8-、或7-咪唑幷[1,2-b][1,2,4]三嗪基、7-苯幷[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-、或7-苯幷
Figure BDA0003506712340000224
唑基、2-、4-、5-、6-、或7-苯幷咪唑基、2-、4-、4-、5-、6-、或7-苯幷噻唑基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-苯幷氧杂环庚烷基、2-、4-、5-、6-、7-、或8-苯幷
Figure BDA0003506712340000225
嗪基、1-、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、或11-1H-吡咯幷[1,2-b][2]苯幷氮杂环庚烷基。
典型稠合杂芳基包括(但不限于)2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-异喹啉基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-苯幷[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-、或7-苯幷
Figure BDA0003506712340000231
唑基、2-、4-、5-、6-、或7-苯幷咪唑基、及2-、4-、5-、6-、或7-苯幷噻唑基。
本文所采用术语可视需要经羟基取代之吡啶或吡啶基(例如，2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基)系分别指羟基-吡啶或羟基-吡啶基，且可包括其互变异构型，如分别指吡啶酮或吡啶酮基。
本文所采用术语可视需要经侧氧基取代之吡啶或吡啶基(例如，2-吡啶基、3-吡啶基、或4-吡啶基)系分别指吡啶酮或吡啶酮基，且可包括其互变异构型，如分别指羟基-吡啶或羟基-吡啶基，其限制条件为可得到该互变异构型。可视需要经侧氧基取代之吡啶或吡啶基可进一步分别称为吡啶-N-氧化物或吡啶基-N-氧化物。
「经取代之杂芳基」系在任何一个或多个可以取代之环原子取代，其为与氢键结之环碳或环氮原子。
术语「桥连双环基」系指包括两个环共用至少三个相邻环原子之环系。
本文所采用许多部份体(例如，烷基、伸烷基、环烷基、芳基、杂芳基、或杂环基)系指「经取代」或「可视需要经取代」。当以此等术语其中之一修饰部份体时，系指该部份体中如习此相关技艺者已知可经取代之任何部份，包括一个或多个取代基。其中若出现超过一个取代基时，则各取代基可分别独立选择。此等取代方式系相关技艺习知者及/或本发明教示者。视需要选用之取代基可为任何适合附接该部份体之取代基。
若未明确指示合适取代基时，取代基实例包括(但不限于)：(C1-C5)烷基、(C1-C5)羟基烷基、(C1-C5)卤烷基、(C1-C5)烷氧基、(C1-C5)卤烷氧基、卤素、羟基、氰基、胺基、-CN、-NO2、-ORc1、-NRa1Rb1、-S(O)iRa1、-NRa1S(O)iRb1、-S(O)iNRa1Rb1、-C(＝O)ORa1、-OC(＝O)ORa1、-C(＝S)ORa1、-O(C＝S)Ra1、-C(＝O)NRa1Rb1、-NRa1C(＝O)Rb1、-C(＝S)NRa1Rb1、-C(＝O)Ra1、-C(＝S)Ra1、NRa1C(＝S)Rb1、-O(C＝O)NRa1Rb1、-NRa1(C＝S)ORb1、
-O(C＝S)NRa1Rb1、-NRa1(C＝O)NRa1Rb1、-NRa1(C＝S)NRa1Rb1、苯基、或5-6员杂芳基。各Ra1及各Rb1分别独立选自–H及(C1-C5)烷基，其可视需要经羟基或(C1-C3)烷氧基取代；Rc1为–H、(C1-C5)卤烷基或(C1-C5)烷基，其中(C1-C5)烷基可视需要经羟基或(C1-C3)烷氧基取代。
本文所说明化合物可能呈各种不同互变异构型。术语「互变异构物」或「互变异构性」系指两种或更多种可以互相转换之化合物/取代基，其系由氢原子之至少一种形式移动及至少一种价数变化所造成(例如，由单键变成双键，由参键变成单键，或反之亦然)。互变异构化实例包括酮转成烯醇、酰胺转成亚酰胺、内酰胺转成内酰亚胺、烯胺转成亚胺、及烯胺转成(不同烯胺)之互变异构化。本教示包括呈互变异构物型式之化合物，包括未出示结构之型式。所有此等化合物之异构型均包括在内。若化合物之互变异构物为芳香系，则此化合物为芳香系。
上文所述任一化学式之化合物均可呈一或多种异构性(例如，光学、几何、或互变异构型)。上文所述任一化学式之化合物亦可标记同位素。此等变异系隐含在上文所定义任一化学式之化合物中，因为其等提及其结构式特色，因此均在本发明范围内。
含有一个或多个不对称碳原子之上文所述任一化学式之化合物可呈两种或更多种立体异构物。若上述任一化学式之化合物含有烯基或伸烯基时，可能出现几何顺式/反式(或Z/E)异构物。若结构式异构物可经由低能量屏障互相转换时，可发生互变异构性(「互变异构化」)。其可在含有例如，亚胺基、酮基、或肟基之上文所述任一化学式之化合物中出现质子互变异构化形式，或在含有芳香系部份体之化合物中出现所谓之价数变异构化。因此单一化合物可能呈超过一种异构化。
具有一个或多个对掌性中心之化合物可呈各种不同立体异构型。立体异构物为仅在其空间排列上不同之化合物。立体异构物包括所有非对映异构物、对映异构物、及差向异构物型式，及其消旋物与混合物。术语「几何异构物」系指具有至少一个双键之化合物，其中双键可能呈顺式(亦称为同侧(syn或entgegen)(E))或反式(亦称为反侧(anti或zusammen)(Z))型式，及其混合物。当以名称或结构式揭示之化合物未出示立体化学时，咸了解该名称或结构式涵括一或多种可能之立体异构物、或几何异构物、或涵括立体异构物或几何异构物之混合物。
当以名称或结构式说明几何异构物时，咸了解以该名称或结构式指示之异构物存在之程度高于另一种异构物，亦即以该名称或结构式指示之几何异构物之几何异构性纯度高于50％，如至少60％、70％、80％、90％、99％、或99.9％重量比纯度。几何异构性纯度系由混合物中以该名称或结构式指示之几何异构物之重量除以混合物中所有几何异构物总重量后决定。
消旋性混合物意指50％为一种对映异构物及50％为对应之对映异构物。当具有一个对掌性中心之化合物以名称或结构式表示，但未出示该对掌性中心之立体化学时，咸了解该名称或结构式涵括该化合物之两种可能对映异构型(例如，两种纯对映异构性、富集对映异构性或消旋性)。当具有两个对掌性中心之化合物以名称或结构式表示，但未出示该对掌性中心之立体化学时，咸了解该名称或结构式涵括该化合物之所有可能非对映异构型(例如，纯非对映异构性、富集非对映异构性及一或多种非对映异构物之等莫耳混合物(例如，消旋混合物))。
对映异构物及非对映异构物混合物可采用习知方法解析成其对映异构物或立体异构物组份，如对掌相气相层析法、对掌相高效液相层析法、化合物结晶形成对掌性盐复合物、或于对掌性溶剂中结晶化合物。亦可由纯非对映异构性或纯对映异构性中间物、试剂、及触媒采用习知之不对称合成法，制得对映异构物及非对映异构物。
當化合物系以指示单一對映異構物之名称或結構式代表时，除非另有其他說明，否則该化合物之光学纯度为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％(亦称为「纯对映异构性」)。光学纯度系由混合物中以该名称或结构式指示之对映异构物之重量除以混合物中两种对映异构物总重量而决定。
当所揭示化合物之立体化学以名称或结构式表示及该名称或所出示结构式涵括超过一种立体异构物(例如，呈一对非对映异构物)时，咸了解其包括所涵括其中一种立体异构物或所涵括立体异构物之任何混合物。亦咸了解，该以名称或结构式表示之立体异构物之立体异构性纯度为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％重量比。此时之立体异构性纯度系由该名称或结构式所涵括立体异构物混合物总重量除以所有立体异构物之混合物总重量而决定。
上文所述任一化学式之化合物之医药上可接受之盐类亦可包含光学活性之抗衡离子(例如，d-乳酸盐或l-离胺酸)或为消旋性(例如，dl-酒石酸盐或dl-精胺酸)。
顺式/反式异构物可采用习此相关技艺者习知之技术分离，例如，层析法及分段结晶法。
常用于制备/单离个别对映异构物之技术包括由合适之纯光学性前体进行对掌性合成法或由消旋物(或盐或衍生物之消旋物)使用例如，对掌性高效液相层析法(HPLC)解析。或者，可由消旋物(或消旋性前体)与合适之光学活性化合物(例如，醇)，或若上述任一化学式之化合物包含酸性或碱性部份体时，与碱或酸(如1-苯基乙基胺或酒石酸)反应。所得之非对映异构物混合物可采用层析法及/或分段结晶法分离，及由一或两种非对映异构物采用习此相关技艺者习知之方式转化成对应之纯对映异构物。上文所述任一化学式之对掌性化合物(及其对掌性前体)可采用层析法(通常为HPLC)，在不对称树脂上，使用由包含0至50％体积比之异丙醇(通常为2％至20％)与0至5％体积比之烷基胺(通常为0.1％二乙基胺)之烃(通常为庚烷或己烷)组成之移动相，得到富集对映异构性。取溶出液浓缩，得到富集之混合物。可采用使用低于临界及超临界之流体进行对掌性层析法。适用于本发明有些具体例之对掌性层析法系相关技艺已知者(参见例如，Smith,Roger M.,LoughboroughUniversity,Loughborough,UK；Chromatographic Science Series(1998),75(Supercritical Fluid Chromatography with Packed Columns),pp.223-249及其中摘录之参考文献)。管柱可得自Chiral Technologies,Inc,West Chester,Pa.,USA，系
Figure BDA0003506712340000281
Chemical Industries,Ltd.,Tokyo,Japan之子公司。
必需强调，上文所述任一化学式之化合物已以单一互变异构型绘出，本发明范围内包括所有可能之互变异构型。
本发明亦包括上文所述任一化学式之所有医药上可接受之标记同位素化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子数，但其原子质量或质量数不同于主要存在于天然界之原子质量或质量数之原子置换。
适合纳入本发明化合物中之同位素实例包括氢之同位素(如2H及3H)、碳之同位素(如11C、13C及14C)、氯之同位素(如36Cl)、氟之同位素(如18F)，碘之同位素(如123I及125I)、氮之同位素(如13N及15N)、氧之同位素(如15O、17O及18O)、磷之同位素(如32P)、及硫之同位素(如35S)。
上述任一化学式之某些标记同位素化合物，例如，彼等已纳入放射活性同位素之化合物，适用于药物及/或受质组织分布研究。放射活性同位素氚，亦即3H，及碳-14，亦即14C，特别适用于此目的，因为其等容易纳入且容易检测。
使用较重之同位素如氘，亦即2H，可能因代谢安定性较高而提供某些医疗效益，例如，延长活体半衰期或降低剂量需求。
改以发射正子之同位素如11C、18F、15O及13N取代，可用于检测受质受体占有率之正子发射电脑断层扫描(Positron Emission Topography)(PET)研究。
上文所述任一化学式之标记同位素化合物通常可采用习此相关技艺者已知之常用技术制备或可采用类似随附之实例及制法所说明彼等制程，使用适当标记同位素试剂替代先前所使用未标记之试剂制备。
根据本发明之医药上可接受之溶剂合物包括彼等其中结晶溶剂可经同位素取代者，例如，D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
咸了解，当本文化合物以结构式代表或以本文之化学名称表示时，该化合物可能存在之所有其他互变异构型均涵括在该结构式内。
本文所示任何化学式亦计画代表化合物之未标记型及标记同位素型，如2H。此外，使用氘(亦即2H或D)取代，可能因代谢安定性较高而提供某些医疗效益，例如，增加活体半衰期或降低剂量需求或改善医疗指数，此时咸了解，以氘为式(I-0)、(I-1)或(I-2)化合物之取代基。此等较重同位素，具体地为氘之浓度可由同位素富集系数界定。本文所采用术语「同位素富集系数」意指该同位素丰度与指定同位素之天然丰度之间之比值。若本发明化合物上之取代基为氘时，此等化合物针对各指定氘原子之同位素富集系数为至少3500(在各指定氘原子纳入52.5％氘)、至少4000(在各指定氘原子纳入60％氘)、至少4500((在各指定氘原子纳入67.5％氘)、至少5000(在各指定氘原子纳入75％氘)、至少5500(在各指定氘原子纳入82.5％氘)、至少6000(在各指定氘原子纳入90％氘)、至少6333.3(在各指定氘原子纳入95％氘)、至少6466.7(在各指定氘原子纳入97％氘)、至少6600(在各指定氘原子纳入99％氘)、或至少6633.3(在各指定氘原子纳入99.5％氘)。
本发明化合物可呈游离型用于治疗，或若适当时，呈医药上可接受之盐型。
本文所采用术语「盐」或「盐类」系指本发明化合物之酸加成盐或碱加成盐。「盐类」特别包括「医药上可接受之盐类」。术语「医药上可接受之盐类」系指保留本发明化合物之生物有效性及性质之盐类，其等通常不为生物或其他方面所不期望者，许多例子中，本发明化合物可以利用所存在之胺基及/或羧基或类似基团，形成酸及/或碱盐类。
可与无机酸及有机酸形成医药上可接受之酸加成盐类，例如，乙酸盐、天冬胺酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、十八碳烷酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、次水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐及三氟乙酸盐。
可衍生成盐类之无机酸包括例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及类似物。
可衍生成盐类之有机酸包括例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸及类似物。医药上可接受之碱加成盐类可由无机碱及有机碱类形成。可衍生成盐类之无机碱包括例如，铵盐类及周期表第I至XII族金属。某些具体例中，盐类可衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌、及铜。某些具体例中，合适之盐类包括铵、钾、钠、钙、及镁等盐类。
可衍生成盐类之有机碱包括例如，一级、二级、及三级胺类、经取代之胺类，包括天然之经取代之胺类、环状胺类、碱性离子交换树脂及类似物。某些有机胺类包括异丙基胺、芐乙二胺(benzathine)、胆酸盐、二乙醇胺、二乙基胺、离胺酸、甲基葡糖胺、呱嗪及三羟甲基甲胺。
本发明医药上可接受之盐类可由碱性或酸性部份体采用习知化学方法合成。通常，此等盐类之制法可由此等化合物之游离酸型与化学计量之适当碱(如Na、Ca、Mg、或K之氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐或类似物)反应，或由此等化合物之游离碱型与化学计量之适当酸反应。此等反应通常在水中或在有机溶剂中、或此二者之混合物中进行。通常，若可行时，希望使用非水性介质，如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇、或乙腈。其他合适盐类之列表可参见例如，第20版之「Remington’s Pharmaceutical Sciences」,Mack Publishing Company,Easton,PA,(1985)；及Stahl及Wermuth之「Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use」，(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)。
术语「组成物」及「调配物」可以交换使用。
「个体」为哺乳动物，较佳为人类，但亦可为需要兽医治疗之动物，例如，宠物动物(例如，狗、猫，及类似动物)，农场动物(例如，牛、羊、猪、马、及类似动物)及实验室动物(例如，大鼠、小鼠、天竺鼠、及类似动物)。
本文所采用之个体系「需要」治疗，如果此等个体可因此等治疗而在生物、医学或生活品质上受益时。
术语「投与」、「投药」或「投药法」系指以本发明化合物或其组成物提供到个体之内或之上。此等方法包括(但不限于)经关节内(至关节内)、经静脉内、肌内、肿瘤内、皮内、腹膜内、皮下、经口、局部表面、经鞘内、吸入、穿皮式、经直肠及类似方式。本文所说明制剂及方法可采用之投药技术可参见例如，Goodman及Gilman之The Pharmacological Basis ofTherapeutics，目前版本；Pergamon；及Remington之Pharmaceutical Sciences(目前版本),Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania。
本文所采用术语「抑制」、「抑制性」或「抑制法」系指降低或压制指定病症、症状、或疾患、或疾病，或使生物活性或过程之基线活性显著下降。
术语「治疗」、「处理」及「处理法」系指逆转、减缓、或抑制本文所说明疾病之进程。有些具体例中，可在已发展出或观察到疾病之一或多种症兆或症状之后投与治疗(亦即医疗性处理)。其他具体例中，可在没有疾病之症兆或症状下投与治疗。例如，可在易感性个体之症状发作之前投与治疗(亦即预防性处理)(例如，依据症状之病史及/或依据所接触之病原菌)。亦可在症状解除之后继续治疗，例如，延缓或预防复发。
术语「病症」、「疾病」及「疾患」可以交换使用。
通常，本文所教示化合物之有效量系依各种不同因素而异，如指定之药物或化合物、医药调配物、投药途径、疾病或疾患型态、所治疗个体或宿主之特征、及类似因素，但照例需要由习此相关技艺者决定。本文所教示化合物之有效量很容易由习此相关技艺者采用相关技艺习知之例行方法决定。
术语「有效量」意指当投与个体可造成有利或所需结果时之用量，该等结果包括临床结果，例如，使所治疗个体病症之症状相较于对照组受到抑制、压制或降低。例如，有效量可呈单位剂型提供(例如，每天1mg至约50g，例如，每天1mg至约5g)。
术语本发明化合物之「医疗有效量」系指本发明化合物可诱发个体之生物或医学反应时之量，例如，降低或抑制酵素或蛋白质活性，或缓解症状、减轻病症、减慢或延缓疾病进程、或防止疾病等等。一项非限制具体例中，术语「医疗有效量」系指本发明化合物当投与个体时之量可有效(1)至少部份减轻、抑制、防止及/或缓解(i)由HPK1介导、或(ii)与HPK1活性有关、或(iii)特征在于HPK1活性(正常或异常)之病症或疾患或疾病；或(2)降低或抑制HPK1活性；或(3)降低或抑制HPK1表现；或(4)修饰HPK1之蛋白质含量。另一项非限制具体例中，术语「医疗有效量」系指本发明化合物投与细胞、或组织、或非细胞生物材料、或介质时之量可以有效至少部份降低或抑制HPK1活性；或部份或完全降低或抑制HPK1表现。
本文所说明所有方法均可依任何合适顺序进行，除非本文中另有指示或其他清楚说明。使用本文所提供任何实例及其他实例，或例示性说法(例如，「如」)仅计画更佳阐述本发明，除非另有主张，否则无意限制本发明范围。
上述化学式所采用一般化学术语具有其一般定义。
本文所采用「h」或「hr」系指小时，「min」系指分钟，「MCL」系指套细胞淋巴瘤，「AML」系指急性骨髓性白血病，「CML」系指慢性骨髓性白血病，「Boc」系指N-第三丁氧基羰基，「EA」系指乙酸乙酯，「DCM」系指二氯甲烷，「DMSO」系指二甲亚砜，「DMA」系指二甲基乙酰胺，「THF」系指四氢呋喃，「MtBE」系指甲基第三丁基醚，「TEA」系指三乙基胺，「FBS」系指胎牛血清，「PBS」系指磷酸盐缓冲生理食盐水，「BSA」系指牛血清白蛋白，「RT」系指室温，「mpk」意指每公斤毫克数，「po」系指经口(per os)，「qd」意指一天投药一次，「HPLC」意指高效液相层析法，「q2d」意指每2天投与单一剂量，「q2dx10」意指每2天投与单一剂量乘以10，「VSMC」系指血管平滑肌细胞，及「XRD」系指X-射线绕射。
本文所采用术语「医药上可接受之载剂」包括任何及所有溶剂、匀散介质、包衣、界面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、延缓吸收剂、盐类、防腐剂、药物安定剂、结合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染剂及类似物及其组合，其等彼等系习此相关技艺者已知(参见例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Printing Company,1990,pp.1289-1329)。除非任何常用之载剂无法与活性成份相容，否则其均可用在医疗或医药组成物中。
此外，本发明化合物，包括其盐类，亦可制得其水合物型式，或包括其用于结晶之其他溶剂。本发明化合物可能本身即为溶剂合物或可设计与医药上可接受之溶剂(包括水)形成溶剂合物；因此本发明计画包括溶剂合物与非溶剂合物两种型式。术语「溶剂合物」系指本发明化合物(包括其医药上可接受之盐类)与一个或多个溶剂分子形成之复合物。此等溶剂分子为彼等医药技艺上常用，且已知对接受者无害，例如，水、乙醇及类似物。术语「水合物」系指其中溶剂分子为水之复合物。
本发明化合物，包括其盐类、水合物及溶剂合物，可能本身即为多形物或可设计形成多形物。另一态样中，本发明提供一种包含本发明化合物及医药上可接受之载剂之医药组成物。医药组成物可调配供特定投药途径，如经口投药、非经肠式投药、及直肠投药等等。此外，本发明医药组成物可制成固体型式(包括，但不限于胶囊、锭剂、丸剂、粒剂、粉剂、或栓剂)，或呈液体型式(包括，但不限于溶液、悬浮液或乳液)。医药组成物可以经过常用之医药操作法，如杀菌及/或可包含常用之惰性稀释剂、润滑剂、或缓冲剂，及佐剂，如防腐剂、安定剂、湿化剂、乳化剂、及缓冲剂等等。
通常，医药组成物为锭剂或明胶囊，其包含活性成份，连同a)稀释剂，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素及/或甘油；b)润滑剂，例如，硅石、滑石、硬脂酸、其镁盐或钙盐、及/或聚乙二醇；及用于锭剂之c)结合剂，例如，硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧基甲基纤维素钠及/或聚乙烯吡咯啶酮；若需要时，使用d)崩解剂，例如，淀粉、洋菜、藻酸或其钠盐，或起泡混合物；及/或e)吸收剂、着色剂、调味剂及甜味剂。锭剂可依据相关技艺已知方法包覆膜衣或肠衣。
适合经口投药之组成物包括有效量之本发明化合物，其系呈锭剂、含锭、水性或油性悬浮液、匀散性粉剂或粒剂、乳液、硬式或软式胶囊、或糖浆或酏剂。计画口服用之组成物系依据相关技艺已知用于制造医药组成物之任何方法制备，且此等组成物可含有一或多种选自下列各物所组成群中之制剂：甜味剂、调味剂、着色剂、及防腐剂，以便产生医药上美观及适口之制剂。锭剂可含有活性成份与适合制造锭剂之无毒性医药上可接受之赋形剂形成混合物。此等赋形剂为例如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙、或磷酸钠；造粒剂及崩解剂，例如，玉米淀粉，或藻酸；结合剂，例如，淀粉、明胶或金合欢胶；及润滑剂，例如，硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。锭剂可以没有包衣或可采用已知技术包覆包衣，以延缓在胃肠道中崩解及吸收，藉以提供持续长期效用。例如，可采用延时材料，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服用调配物可呈硬式明胶胶囊，其中活性成份系与惰性固体稀释剂混合，例如，碳酸钙、磷酸钙、或高岭土，或软式明胶胶囊，其中活性成份系与水或油介质混合，例如，花生油、液态石蜡或橄榄油。
某些注射组成物为水性等渗溶液或悬浮液，及栓剂宜由脂肪乳液或悬浮液制成。该等组成物可经过杀菌及/或包含佐剂，如防腐剂、安定剂、湿化剂、或乳化剂、促进溶解剂、调节渗透压之盐类及/或缓冲剂。此外，其等亦可含有其他具有医疗价值之物质。该等组成物系分别依据一般混合、造粒、或包衣方法制备，且含有约0.1-75％或含有约1-50％之活性成份。适合穿皮式施用之组成物包括有效量之本发明化合物与合适之载剂。适合穿皮式递送之载剂包括可吸收之医药上可接受之溶剂，以促进通过宿主皮肤。例如，穿皮式装置系呈绷带形式，其包含背衬元件、含有化合物及视需要选用之载剂之储积槽、视需要选用之速率控制障壁，以便依控制且预定之速率长期递送化合物给宿主皮肤，及包含可固定该装置在皮肤上之方式。
适合局部(例如，投药至皮肤及眼睛)施用之组成物包括水性溶液、悬浮液、油膏、乳霜、凝胶、或喷洒调配物，例如，采用气溶胶递送，或类似物。此等局部表面递送系统特别适合皮肤施用，例如，供治疗皮肤癌症，例如，用在防晒乳、洗液、喷雾及类似物中之预防性用法。因此其等特别适用于局部，包括相关技艺习知之美容调配物。此等可含有溶解剂、安定剂、张力加强剂、缓冲剂及防腐剂。
本文所采用局部施用法亦有关吸入或鼻内施用法。其等适宜呈干粉剂(单独、呈混合物(例如，与乳糖之干式掺合物，或与例如，磷脂形成混合组份粒子)，从干粉吸药器递送，或从加压容器、帮浦、喷瓶、雾化器或气雾器，使用或不使用合适推进剂下，呈气溶胶喷雾递送。
本发明进一步提供包含本发明化合物作为活性成份之无水医药组成物及剂型，因为水可能促进某些化合物降解。
本发明无水医药组成物及剂型可使用无水或低水份含量之成份，在低水份及低湿度条件下制备。可以制备及储存无水医药组成物，因此维持其无水性质。因此，无水组成物系使用已知可阻止曝露到水份之材料包装，以便其等可容纳在合适之调配套组内。合适包装实例包括(但不限于)气密式箔包、塑胶、单位剂量容器(例如，小瓶)、泡壳包、及长条包。
本发明进一步提供一种医药组成物及剂型，其包含一或多种可以降低作为活性成份之本发明化合物之降解速率之制剂。此等制剂在本文中称为「安定剂」，包括(但不限于)抗氧化剂，如抗坏血酸、pH缓冲剂、或盐缓冲剂等等。
3.化合物
本文揭示具有式(I-0)或(II)之一般结构式之化合物之具体例：
Figure BDA0003506712340000381
本发明第一具体例提供一种如式(I-0)代表之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
X为CR2R3或NR3；
A为CR2或N；
R为8-10员双环含氮杂芳基或8-10员双环含氮杂环基，其可视需要经侧氧基取代，其中由R代表之含氮杂芳基或含氮杂环基具有1至3个选自：N、O、与S之杂原子，且可视需要经1至4个Ra取代，及其中R系利用氮环原子连接嘧啶环或R系以如下结构式代表：
Figure BDA0003506712340000382
R1为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)O C1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、苯基、5-6员杂芳基、C3-6环烷基、或3-7员杂环基，其中由R1代表或在由R1代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、杂芳基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12；或
R及R1与其等所附接之碳原子共同形成如下代表之环：
Figure BDA0003506712340000391
其中
Figure BDA0003506712340000392
键结系连接嘧啶环；
R2之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、或S(＝O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基团中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12；
R3为H、C1-6烷基、C(O)C1-6烷基、C3-6环烷基、或3-7员杂环基，其中由R3代表或在由R3代表之基团中之烷基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基、3-7员杂环基、及NR11R12；
R11及R12之各例分别独立为H或C1-6烷基，其中由R11或R12代表之烷基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基、及3-7员杂环基，
R11及R12与其等所附接之氮原子或磷原子共同形成3-7员杂环基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、及C1-4卤烷氧基；
Ra之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、C3-6环烷基、3-7员杂环基、或5-6员杂芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、及5-6员杂芳基；或
两个Ra与其等所附接之碳原子(群)共同形成C3-6环烷基或3-7员杂环基，其中环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、及C1-4卤烷氧基；
Rb之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、C3-6环烷基、3-7员杂环基、或5-6员杂芳基，其中由Rb代表或在由Rb代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、及5-6员杂芳基；
Rc之各例分别独立为苯基、具有1至3个选自N及O之杂原子之5-6员单环状杂环基；具有1至3个选自N及O之杂原子之5-6员单环状杂芳基；其中由Rc代表之苯基、杂环基、或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、及P(O)二-C1-6烷基；
Ra'为C1-6烷基，其可视需要OH、CN、5-6员杂芳基、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12取代；
m为0、1、2、或3；
n为0、1、2、3、或4；
p为1、2、或3；
q为1、2、或3；及p+q≤4。
本发明第二具体例中，该化合物系由结构式(I-1)代表：
Figure BDA0003506712340000421
或其医药上可接受之盐或立体异构物，其余变数系如第一具体例中之定义。
本发明第三具体例中，该化合物系由结构式(I-2)代表：
Figure BDA0003506712340000422
本发明第四具体例提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或
其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure BDA0003506712340000423
Figure BDA0003506712340000424
Figure BDA0003506712340000431
Figure BDA0003506712340000432
其中
Figure BDA0003506712340000433
键结系连接嘧啶环，及其余变数系如第一、第二及/或第三具体例中之定义。
第五具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中Ra之各例分别独立为H、卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OR11、NR11C(O)C1-4烷基、NR11S(＝O)2R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、P(＝O)R11R12、C3-6环烷基、3-7员杂环基、或5-6员杂芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基团中之烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、及5-6员杂芳基，及其余变数系如第一、第二、第三及/或第四具体例中之定义。
第六具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R1为H、卤素、CN、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基，其中由R1代表或在由R1代表之基团中之烷基、烯基、或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12，及其余变数系如第一、第二、第三、第四及/或第五具体例中之定义。
第七具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中各例R2分别独立为H、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、NR11C(O)C1-4烷基、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、或S(＝O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基团中之烷基或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五及/或第六具体例中之定义。
第八具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R3为H、C1-6烷基、或C(O)C1-6烷基，其中由R3代表或在由R3代表之基团中之烷基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、及/或第七具体例中之定义。
第九具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中各例Ra分别独立为H、卤素、OH、CN、C1-4烷基、C3-6环烷基、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、N(R11)S(＝O)2R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、P(O)R11R12、或5-6员杂芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基团中之烷基或环烷基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、及5-6员杂芳基；各例R11及R12分别独立为H或C1-6烷基，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、及/或第八具体例中之定义。
第十具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R1为H、卤素、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C2-4烯基、C1-4烷氧基、或C1-4卤烷氧基，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、及/或第九具体例中之定义。
第十一具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure BDA0003506712340000451
Figure BDA0003506712340000461
Figure BDA0003506712340000462
其中
Figure BDA0003506712340000463
键结系连接嘧啶环，及n为0至4，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、及/或第十具体例中之定义。
第十二具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure BDA0003506712340000464
Figure BDA0003506712340000465
其中
Figure BDA0003506712340000466
键结系连接嘧啶环，及n为0至2，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、及/或第十具体例中之定义。
第十三具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure BDA0003506712340000467
Figure BDA0003506712340000468
其中
Figure BDA0003506712340000469
键结系连接嘧啶环，及n为0至2，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、及/或第十具体例中之定义。
第十四具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Ra之各例分别独立为H、卤素、C1-4烷基、-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kS(＝O)2R11、-(CHRaa)kC(O)NR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)kS(＝O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)k-5-6员杂芳基、或-(CHRaa)kP(＝O)R11R12；
Raa分别独立为H或可视需要经卤素取代之C1-3烷基；
R11及R12分别独立为H或C1-4烷基；及
k为0或1，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、及/或第十三具体例中之定义。
第十五具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R1为H、F、Cl、CN、或CF3，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三及/或第十四具体例中之定义。
第十六具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure BDA0003506712340000471
Figure BDA0003506712340000472
其中
Figure BDA0003506712340000473
键结系连接嘧啶环，及n为0至4，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、及/或第十五具体例中之定义。
第十七具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
R is
Figure BDA0003506712340000481
其中
Figure BDA0003506712340000482
键结系连接嘧啶环，Ra1分别独立为H、C1-4烷基、或C1-4羟基烷基；
Ra1’分别独立为-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kS(＝O)2R11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kC(O)NR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)kS(＝O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)k-5-6员杂芳基、或-(CHRaa)kP(＝O)R11R12；
Raa分别独立为H或可视需要经卤素取代之C1-3烷基；
Ra分别独立为H、F、或Cl；
R11及R12分别独立为H或C1-4烷基；
k为0或1，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、及/或第十具体例中之定义。
第十八具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Ra1分别独立为H、CH3、或CH2OH；
Ra1’分别独立为-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kS(＝O)2R11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kC(O)NR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)kS(＝O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)k-四唑、或-(CHRaa)kP(＝O)R11R12；
Raa分别独立为H、CH3、或CF3；
R11及R12分别独立为H或C1-2烷基；及
k为0或1，及其余变数系如第十七具体例中之定义。
本发明第十九具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中各例Ra分别独立为H或F，及其余变数系如第十八具体例中之定义。
本发明第二十具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R1为Cl，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、及/或第十九具体例中之定义。
第二十一具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R及R1与其等所附接之碳原子共同形成如下代表之环：
Figure BDA0003506712340000491
其中
Figure BDA0003506712340000492
键结系连接嘧啶环，及其余变数系如第一、第二、及/或第三具体例中之定义。
第二十二具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Rb之各例分别独立为H、卤素、OH、CN、NH2、COOH、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4羟基烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C1-4羟基烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NR11OR12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、NR11(S＝O)2R12、C(O)NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、5-6员杂芳基、或NR11C(O)C1-4烷基；及
Rc之各例为苯基或吡啶基，其各可视需要经一或两个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、及P(＝O)二-C1-6烷基，及其余变数系如第一、第二、第三、及/或第二十一具体例中之定义。
第二十三具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R及R1与其等所附接之碳原子共同形成如下代表之环：
Figure BDA0003506712340000501
其中
Figure BDA0003506712340000502
键结系连接嘧啶环，及其余变数系如第一、第二、第三、第二十一及/或第二十二具体例中之定义。
第二十四具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Rb之各例分别独立为H、卤素、CN、COOH、C1-2烷基、或C1-2卤烷基；
Rc之各例为苯基或吡啶基，其各可视需要经一或两个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、及P(＝O)二-C1-6烷基，及
R11及R12之各例分别独立为H或C1-6烷基，及其余变数系如第一、第二、第三、第二十一、第二十二、及/或第二十三具体例中之定义。
第二十五具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Rb之各例分别独立为H、CN、或COOH；及
Rc之各例为苯基或吡啶基，其各可视需要经一或两个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：C1-4烷基、C(O)N(CH3)2、及P(＝O)(CH3)2，及其余变数系如第一、第二、第三、第二十一、第二十二、第二十三、及/或第二十四具体例中之定义。
第二十六具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中m为0或1，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、及/或第二十五具体例中之定义。
第二十七具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Figure BDA0003506712340000521
为
Figure BDA0003506712340000522
及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、及/或第二十六具体例中之定义。
第二十八具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R2之各例为H、卤素、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基；及R3为H、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、或COCH2NR11R12，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、及/或第二十七具体例中之定义。
第二十九具体例中，提供一种式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R2之各例为H、F、Cl、或OCH3；及R3为H或C1-4烷基，及其余变数系如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、及/或第二十八具体例中之定义。
本发明第三十具体例中，提供一种如式(II)代表之化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，
Figure BDA0003506712340000531
其中
A1为CR’或N；
X为–P(＝O)R3’R4’；
R’为H、氘、卤素、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基，其中由R’代表或在由R’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
R1’之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、C3-7环烷基、或3-7员杂环基，其中由R1’代表或在由R1’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
R2’之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、苯基、5-6员杂芳基、C3-7环烷基、或3-7员杂环基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、杂芳基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
各R3’及R4’分别独立为H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中由R3’或R4’代表之烷基、烯基、或炔基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
R11’及R12’之各例分别独立为H或C1-6烷基，其中由R11’或R12’代表之烷基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基、及3-7员杂环基，或
R11’及R12’与其等所附接之氮原子共同形成3-7员杂环基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、或C1-4卤烷氧基；
m’为0、1、或2；及
n’为0、1、或2。
本发明第三十一具体例中，式(II)化合物系由结构式(II-1)代表：
Figure BDA0003506712340000551
或其医药上可接受之盐或立体异构物，其中R’为H、卤素、NR11’R12’、或C1-6烷基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’，及其余变数系如第三十具体例中之定义。
第三十二具体例中，式(II)或(II-1)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R3’及R4’分别独立为H或C1-6烷基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’，及其余变数系如第三十及/或第三十一具体例中之定义。
第三十三具体例中，式(II)或(II-1)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
R1’之各例分别独立为H、卤素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、或3-7员杂环基，其中由R1’代表之烷基、烯基、炔基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
R2’之各例分别独立为H、卤素、OH、NO2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、5-6员杂芳基、或3-7员杂环基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基团中之烷基、烷氧基、杂芳基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’，及其余变数系如第三十、第三十一、及/或第三十二具体例中之定义。
第三十四具体例中，式(II)或(II-1)化合物系由结构式(II-2)或(II-2’)代表：
Figure BDA0003506712340000561
或其医药上可接受之盐或立体异构物，其中R’为H、卤素、或NH2，及其余变数系如第三十、第三十一、第三十二、及/或第三十三具体例中之定义。
第三十五具体例中，式(II)、(II-1)、(II-2)或(II-2’)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R2’之各例分别独立为H、卤素、OH、C1-4烷基(其可视需要经卤素或OH或NR11’R12’取代)、C1-4烷氧基、C(O)OC1-6烷基、C(O)NR11’R12’,NR11’R12’,NR11’C(O)C1-6烷基、5-6员杂环基、或5-6员杂芳基；及各例R1’分别独立为H或C1-4烷基，及其余变数系如第三十、第三十一、第三十二、第三十三、及/或第三十四具体例中之定义。
第三十六具体例中，式(II)、(II-1)、(II-2)或(II-2’)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R3’及R4’分别独立为C1-6烷基；及各例R2’分别独立为H、卤素、OH、C1-4烷基(其可视需要经卤素或OH或NR11’R12’取代)、C1-4烷氧基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NR11’R12’、NR11’R12’、NHC(O)C1-6烷基、吡咯啶基、吡咯啶-2-酮、
Figure BDA0003506712340000571
唑，其中R11’及R12’之各例分别独立为H或C1-4烷基，及其余变数系如第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、及/或第三十五具体例中之定义。
第三十七具体例中，式(II)、(II-1)、(II-2)或(II-2’)化合物，或其医药上接受之盐或立体异构物，其中X为-P(O)(CH3)2及R2’之各例分别独立为H、F、Cl、OH、CH3、NH2、或NHCOCH3，及其余变数系如第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、及/或第三十六具体例中之定义。
1.一种如结构式(I)代表之化合物：
Figure BDA0003506712340000572
或其医药上可接受之盐，其中
A为CR2或N；
R为8-10员双环含氮杂芳基或8-10员双环含氮杂环基，其可视需要经侧氧基取代，其中由R代表之含氮杂芳基或含氮杂环基具有1至3个选自：N、O、与S之杂原子，且可视需要经1至4个Ra取代；
R1为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、苯基、5-6员杂芳基、C3-6环烷基、或3-7员杂环基，其中由R1代表或在由R1代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、杂芳基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12；或
R及R1与其等所附接之碳原子共同形成如下代表之环：
Figure BDA0003506712340000581
其中
Figure BDA0003506712340000582
键结系连接嘧啶环；
R2为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、-P(＝O)R11R12,-S(＝O)2R11、或-S(＝O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基团中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12；
R3为H、C1-6烷基、C(O)C1-6烷基、C3-6环烷基、或3-7员杂环基，其中由R3代表或在由R3代表之基团中之烷基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基、3-7员杂环基、及NR11R12；
R11及R12之各例分别独立为H或C1-6烷基，其中由R11或R12代表之烷基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基、及3-7员杂环基，或
R11及R12与其等所附接之氮原子或磷原子共同形成3-7员杂环基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、或C1-4卤烷氧基；
Ra之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、-P(＝O)R11R12、-S(＝O)2R11、或-S(＝O)2NR11R12、C3-6环烷基、或3-7员杂环基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基团中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12；或
两个Ra与其等所附接之碳原子共同形成C3-6环烷基或3-7员杂环基，其中环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、及C1-4卤烷氧基；
Rb之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、或NR11C(O)C1-6烷基，其中由Rb代表或在由Rb代表之基团中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12；
Rc为苯基、具有1至3个选自N及O之杂原子之5-6员单环状杂环基；具有1至3个选自N及O之杂原子之5-6员单环状杂芳基；其中由Rc代表之苯基、杂环基、或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、-C(O)NR11R12、及-P(O)二-C1-6烷基；及
m为0、1、2或3。
2.如段1之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R为
Figure BDA0003506712340000601
其中
Figure BDA0003506712340000602
键结系连接嘧啶环，及n为0至4。
3.如段1或2之化合物，或其医药上可接受之盐，其中Ra之各例分别独立为H、卤素、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4羟基烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C1-4羟基烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、NR11C(O)C1-4烷基、-P(＝O)R11R12、-S(＝O)2R11、-S(＝O)2NR11R12、C3-6环烷基、或3-7员杂环基，或
两个Ra与其等所附接之碳原子共同形成C3-6环烷基或3-7员杂环基，其中环烷基或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、及C1-4卤烷氧基。
4.如段1至3中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R1为H、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基，其中由R1代表或在由R1代表之基团中之烷基、烯基、或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12。
5.如段1至4中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中Ra之各例分别独立为H、卤基、OH、C1-4烷基、COOH、C(O)NR11R12、或–P(O)R11R12，其中R11及R12之各例分别独立为H或C1-6烷基。
6.如段1至5中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R1为H、卤素、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C2-4烯基、C1-4烷氧基、或C1-4卤烷氧基。
7.如段1至6中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R为
Figure BDA0003506712340000611
Figure BDA0003506712340000612
其中
Figure BDA0003506712340000613
键结系连接嘧啶环，及n为0至2。
8.如段1至7中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R为
Figure BDA0003506712340000621
Figure BDA0003506712340000622
Figure BDA0003506712340000623
其中
Figure BDA0003506712340000624
键结系连接嘧啶环，及n为0至2。
9.如段1至8中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中Ra之各例分别独立为H、F、Cl、C1-4烷基、COOH、CONH2、C(O)N(CH3)2、或–P(O)(CH3)2。
10.如段1至9中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R1为H、Cl、或CF3。
11.如段1之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R及R1与其等所附接之碳原子共同形成如下代表之环：
Figure BDA0003506712340000625
其中
Figure BDA0003506712340000626
键结系连接嘧啶环。
12.如段1或11之化合物，或其医药上可接受之盐，其中Rb之各例分别独立为H、卤素、OH、NH2、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4羟基烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C1-4羟基烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、或NR11C(O)C1-4烷基；及
Rc之各例为苯基或吡啶基，其各可视需要经一或两个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、-C(O)NR11R12、及-P(O)二-C1-6烷基。
13.如段1、11、及12中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中
Rb之各例分别独立为H、卤素、C1-2烷基、C1-2卤烷基；及
Rc之各例为苯基或吡啶基，其各可视需要经一或两个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、-C(O)NR11R12、及-P(O)二-C1-6烷基，及
R11及R12之各例分别独立为H或C1-6烷基。
14.如段1及11至13中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中
Rb之各例分别独立为H；及
Rc之各例为苯基或吡啶基，其各可视需要经一或两个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：C1-4烷基、-C(O)N(CH3)2、及-P(O)(CH3)2。
15.如段1至14中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R2为H、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR11R12、-C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、NR11C(O)C1-4烷基、-P(＝O)R11R12、-S(＝O)2R11、或-S(＝O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基团中之烷基或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12；及m为0或1。
16.如段1至15中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中
Figure BDA0003506712340000641
为
Figure BDA0003506712340000642
17.如段1至16中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中各例R2为H、卤素、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基；及R3为H、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、或COCH2NR11R12，其中各例R11及R12分别独立为H或C1-6烷基。
18.如段1至17中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中各例R2为H、Cl、或OCH3；及R3为H、C1-4烷基、C1-4羟基烷基、或COCH2N(CH3)2。
19.一种如结构式(II)代表之化合物：
Figure BDA0003506712340000643
或其医药上可接受之盐，其中
A1为CR’或N；
X为–P(＝O)R3’R4’或–S(O)2NR5’R6’；
R’为H、氘、卤素、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基，其中由R’或在由R’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
R1’之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、C3-7环烷基、或3-7员杂环基，其中由R1’代表或在由R1’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
R2’之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、苯基、5-6员杂芳基、C3-7环烷基、或3-7员杂环基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、杂芳基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
各R3’及R4’分别独立为H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中由R3’或R4’代表之烷基、烯基、或炔基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；
各R5’及R6’分别独立为H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中由R5’或R6’代表之烷基、烯基、或炔基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’；或
R5’及R6’与其等所附接之氮原子共同形成3-7员杂环基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、或C1-4卤烷氧基；
R11’及R12’之各例分别独立为H或C1-6烷基，其中由R11’或R12’代表之烷基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基、及3-7员杂环基，或
R11’及R12’与其等所附接之氮原子共同形成3-7员杂环基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、或C1-4卤烷氧基；
m’为0、1、或2；及
n’为0、1、或2。
20.如段19之化合物，其中该化合物系由结构式(II-1)代表：
Figure BDA0003506712340000661
或其医药上可接受之盐，其中
A1为CR’或N；及
R’为H、卤素、NR11’R12’、或C1-6烷基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’。
21.如段19或20之化合物，或其医药上可接受之盐，其中X为–P(＝O)R3’R4’或–S(O)2NR5’R6’；
各R3’及R4’分别独立为H或C1-6烷基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11R12；及各R5’及R6’分别独立为H或C1-6烷基，或
R5’及R6’与其等所附接之氮原子共同形成3-7员杂环基，其可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、或C1-4卤烷氧基。
22.如段19至21中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R1’之各例分别独立为H、卤素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、或3-7员杂环基，其中由R1’代表之烷基、烯基、炔基、环烷基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’。
23.如段19至22中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R2’之各例分别独立为H、卤素、OH、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、5-6员杂芳基、或3-7员杂环基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基团中之烷基、烷氧基、杂芳基、或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、及NR11’R12’。
24.如段19至23中任一者之化合物，其中该化合物系由结构式(II-2)或(II-2’)代表：
Figure BDA0003506712340000681
或其医药上可接受之盐，其中A1为CR’或N；及R’为H、卤素、或NH2。
25.如段19至24中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R2’之各例分别独立为H、卤素、OH、C1-4烷基(其可视需要经卤素或OH或NR11’R12’取代)、C1-4烷氧基、C(O)OC1-6烷基、C(O)NR11’R12’、NR11’R12’、NR11’C(O)C1-6烷基、5-6员杂环基(吡咯啶基或吡咯啶-2-酮)、或杂芳基(
Figure BDA0003506712340000682
唑)。
26.如段19至25中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中
X为–P(＝O)R3’R4’或–S(O)2NR5’R6’；
R3’及R4’分别独立为C1-6烷基；及
R5’及R6’分别独立为H或C1-6烷基。
27.如段19至26中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R1’之各例分别独立为H或C1-4烷基。
28.如段19至27中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R2’之各例分别独立为H、卤素、OH、C1-4烷基(其可视需要经卤素或OH或NR11’R12’取代)、C1-4烷氧基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NR11’R12’、NR11’R12’、NHC(O)C1-6烷基、吡咯啶基、吡咯啶-2-酮、
Figure BDA0003506712340000691
唑，其中R11’及R12’之各例分别独立为H或C1-4烷基。
29.如段19至28中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中X为–P(O)(CH3)2或-S(O)2NHMe。
30.如段19至29中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中R2’之各例分别独立为H、F、Cl、OH、CH3、NH2、或-NHCOCH3。
31.如段19至30中任一者之化合物，或其医药上可接受之盐，其中X为–P(＝O)(CH3)2。
一具体例中，化合物或其医药上可接受之盐或立体异构物系选自：式(I-0)、(I-1)、(I-2)、(I)、(II)、(II-1)、(II-2)或(II-2’)化合物或实例中之化合物。
某些具体例中，HPK1抑制剂(本发明化合物)系选择性对抗选自以下之一或多种激酶：Lck、ZAP70、JAK3、PKCθ、TBK1、及MAP4K3。某些具体例中，本发明HPK1抑制剂系选择性对抗选自以下之一或多种激酶：Lck、ZAP70、及JAK3。某些具体例中，本发明HPK1抑制剂系选择性对抗JAK3。
例如，该等HPK1抑制剂系选择性对抗Lck，因此其对抗Lck之IC50比对抗HPK1之IC50较高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
某些具体例中，HPK1系选择性对抗ZAP70，因此其对抗ZAP70之IC50比对抗HPK1之IC50较高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
某些具体例中，HPK1系选择性对抗JAK3，因此其对抗JAK3之IC50比对抗HPK1之IC50较高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
某些具体例中，HPK1系选择性对抗PKCθ，因此其对抗PKCθ之IC50比对抗HPK1之IC50较高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
某些具体例中，HPK1系选择性对抗TBK1，因此其对抗TBK1之IC50比对抗HPK1之IC50较高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
某些具体例中，HPK1系选择性对抗MAP4K3，因此其对抗MAP4K3之IC50比对抗HPK1之IC50较高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
对抗HPK1、Lck、ZAP70、PKCθ、JAK3、TBK1、及MAP4K3之活性可采用相关技艺已认可之任何方法测定(例如，测定IC50值)，如生物实例中举例说明之程序，如生物实例1-7(其等均以引用之方式并入本文中)。
4.可治疗之疾病
HPK1抑制剂、其医药上可接受之盐类、其医药组成物可用于调控(亦即抑制)HPK1活性之方法，该方法包括对有需要之患者/个体投与本文所说明本发明HPK1抑制剂化合物，或其医药上可接受之盐。
特定言之，本发明提供本发明化合物、或其立体异构物、互变异构物、N-氧化物、水合物、溶剂合物、及盐类，特别指其医药上可接受之盐类、或其等之混合物之用途，其系用于治疗或预防疾病，特定言之癌症(特别指造血性及实体肿瘤)或免疫反应失调之病症或与异常MAP4K1讯号传导相关之其他疾患。根据本发明化合物之医药活性至少部份可由其作为MAP4K1抑制剂之活性来解释。
某些具体例中，本发明化合物或其医药上可接受之盐类适用于医疗性投与有此需要之个体，来治疗疾病或适应症，包括(但不限于)良性增生、动脉粥状硬化疾患、败血症、自体免疫疾患、血管疾患、病毒感染、神经退化性疾患、发炎疾患、及男性生育控制疾患。
某些具体例中，本发明化合物或其医药上可接受之盐类适用于医疗性投药，以在治疗癌症时，加强、刺激及/或增加免疫力。
本发明HPK1抑制剂化合物可以单独使用或组合使用其他制剂或医疗剂，或作为治疗疾病或疾患(包括癌症)之佐剂或前置佐剂。
某些具体例中，本发明方法可用于治疗癌症，包括(但不限于)骨癌、胰脏癌、皮肤癌、头或颈部癌症、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门部位之癌症、胃癌、睪丸癌、子宫癌、输卵管之癌瘤、子宫内膜之癌瘤、子宫内膜癌、子宫颈之癌瘤、阴道之癌瘤、外阴之癌瘤、何杰金氏(Hodgkin’s)症、非何杰金氏(non-Hodgkin’s)淋巴瘤、食道之癌症、小肠之癌症、内分泌系统之癌症、甲状腺之癌症、副甲状腺之癌症、肾上腺之癌症、软组织之肉瘤、尿道之癌症、阴茎之癌症、慢性或急性白血病(包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、儿童之实体肿瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱之癌症、肾脏或尿道之癌症、肾盂之癌瘤、中枢神经系统(CNS)之新生赘瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管新生、脊柱肿瘤、脑干神经胶细胞瘤、脑下垂体腺瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T-细胞淋巴瘤、环境诱发之癌症(包括彼等被石棉诱发者)，及上述癌症之组合。
有些具体例中，可使用本发明化合物治疗之癌症包括黑色素瘤(例如，转移性恶性黑色素瘤)、肾癌(例如，透明细胞癌瘤)、摄护腺癌(例如，激素顽抗性摄护腺腺癌瘤)、乳癌、三阴性乳癌、结肠癌、及肺癌(例如，非小细胞肺癌及小细胞肺癌)。此外，亦可治疗可使用本发明化合物抑制其生长之顽抗性或复发性恶性病。
有些具体例中，可使用本发明化合物治疗之癌症包括(但不限于)实体肿瘤(例如，摄护腺癌、结肠癌、食道癌、子宫内膜癌、卵巢癌、子宫癌、肾癌、肝癌、胰脏癌、胃癌、乳癌、肺癌、呼吸道癌症、脑癌、眼部癌症、甲状腺及副甲状腺癌症、皮肤癌、头与颈之癌症、生殖器官之癌症、消化道之癌症、泌尿道之癌症、神经胶母细胞瘤、肉瘤、膀胱癌等等)、血液癌症(例如，淋巴瘤、白血病如：急性淋巴母细胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、DLBCL、套细胞淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(包括复发或顽抗性NHL及复发性滤泡)、何杰金氏淋巴瘤或多发性骨髓瘤)、肉瘤、及其远距转移。
有些具体例中，可使用本发明化合物可治疗之疾病及适应症包括(但不限于)血液癌症、肉瘤、肺癌、胃肠癌、生殖泌尿道癌、肝脏癌症、骨癌、神经系统癌症、妇科癌症、及皮肤癌。
例示性血液癌症包括淋巴瘤及白血病，如急性淋巴母细胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、急性前髓性细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、弥漫性大型B-细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(包括复发或顽抗性NHL及复发性滤泡)、何杰金氏淋巴瘤、骨髓增生性疾病(例如，原发性骨髓纤维变性(PMF)、真性多红血球症(PV)、本态性血小板数目过高(ET)、骨髓增生不良症候群(MDS)、T-细胞急性淋巴母细胞淋巴瘤(T-ALL)、多发性骨髓瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s Macroglubulinemia)、毛细胞淋巴瘤、慢性骨髓性淋巴瘤、及伯基氏(Burkitt’s)淋巴瘤。
例示性肉瘤包括软骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤、脂肉瘤、粘液瘤、横纹肌瘤、横纹肉瘤、纤维肌瘤、脂肪瘤、错构瘤、及畸胎瘤。
例示性肺部癌症包括非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、支气管癌瘤(鳞状细胞、未分化小细胞、未分化大细胞、腺癌瘤)、肺泡(细支气管)癌瘤、支气管腺瘤、软骨错构瘤、及间皮瘤。
例示性胃肠癌症包括食道(鳞状细胞癌瘤、腺癌瘤、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰脏(胰脏管腺癌瘤、胰岛素瘤、升糖激素瘤、胃泌素瘤、类癌性肿瘤、血管活性肠肽瘤(vipoma))、小肠(腺癌瘤、淋巴瘤、类癌性肿瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维肌瘤、纤维肌瘤)、大肠(腺癌瘤、管状腺瘤、绒毛腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)之癌症及结肠直肠癌。
例示性生殖泌尿道癌症包括肾脏(腺癌瘤、威尔姆氏肿瘤(Wilms’tumor)[肾母细胞瘤])、膀胱及尿道(鳞状细胞癌瘤、移行细胞癌瘤、腺癌瘤)、摄护腺(腺癌瘤、肉瘤)、及睪丸(精母细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌瘤、畸胎癌、绒毛膜癌瘤、肉瘤、间质细胞癌瘤、纤维肌瘤、纤维腺瘤、类腺瘤、脂肪瘤)之癌症。
例示性肝脏癌症包括肝癌(肝细胞癌瘤)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、及血管瘤。
例示性骨癌包括例如，骨源性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维性组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、恶性淋巴瘤(内质网细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞肿瘤原索瘤、骨外生骨疣(骨软骨性外生骨赘)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液性纤维肌瘤、骨样性骨瘤、及巨细胞肿瘤。
例示性神经系统癌症包括头骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄脂瘤、变形性骨炎)、脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶细胞瘤病)、脑(星细胞瘤、髓母细胞瘤、神经胶细胞瘤、室管膜细胞瘤、胚细胞瘤(松果腺瘤)、神经胶母细胞瘤、多形性神经胶母细胞瘤、寡突神经胶细胞瘤、许旺细胞瘤(schwannoma)、视网膜母细胞瘤、天生性肿瘤)、及脊柱(神经纤维肌瘤、脑膜瘤、神经胶细胞瘤、肉瘤)，以及神经母细胞瘤及发育不良性节细胞瘤(Lhermitte-Duclosdisease)之癌症。
例示性妇科癌症包括子宫(子宫内膜癌瘤)、子宫颈(子宫颈癌瘤、肿瘤前之子宫颈发育不良)、卵巢(卵巢癌瘤(浆液性囊状腺癌瘤、粘液性囊状腺癌瘤、未分类癌瘤)、粒层细胞-鞘细胞肿瘤、支持间质细胞(Sertoli-Leydig cell)肿瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状细胞癌瘤、上皮内癌瘤、腺癌瘤、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道(透明细胞癌瘤、鳞状细胞癌瘤、葡萄状肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)、及输卵管(癌瘤)之癌症。
例示性皮肤癌症包括黑色素瘤、基底细胞癌瘤、鳞状细胞癌瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、默克(Merkel)细胞皮肤癌、再生不良性痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维肌瘤、及蟹足肿。有些具体例中，可使用本发明化合物治疗之疾病及适应症包括(但不限于)镰状细胞疾病(例如，镰状细胞贫血)、三阴性乳癌(TNBC)、骨髓增生不良症候群、睪丸癌、胆道癌、食道癌、及泌尿道上皮癌瘤。
例示性头与颈部癌症包括神经胶母细胞瘤、黑色素瘤、横纹肉瘤、淋巴肉瘤、骨肉瘤、鳞状细胞癌瘤、腺癌瘤、口癌、喉癌、鼻咽癌、鼻与鼻旁癌症、及甲状腺与副甲状腺癌症。
有些具体例中，该HPK1抑制剂可用于治疗产生PGE2之肿瘤(例如，过度表现Cox-2之肿瘤)及/或腺苷之肿瘤(过度表现CD73及CD39之肿瘤)。已在许多种肿瘤中检测到过度表现之Cox-2，如结肠直肠、乳房、胰脏及肺脏等癌症，其等与预后不佳相关。已在血液癌症模式中(如RAJI(伯基氏淋巴瘤)及U937(急性前单核细胞白血病))以及患者之芽细胞中报告过COX-2之过度表现。CD73在各种不同人类癌瘤中系上调，包括彼等结肠、肺、胰脏及卵巢之癌症。CD73之表现程度提高已与肿瘤血管新生、侵袭性、及转移相关，幷与乳癌患者存活期缩短有关。
可治疗之乳癌实例包括(但不限于)三阴性乳癌、侵袭性乳管癌瘤、侵袭性乳叶癌瘤、原位乳管癌瘤、及原位乳叶癌瘤。
呼吸道癌症实例包括(但不限于)小细胞及非小细胞肺癌瘤，以及支气管腺瘤及肋膜肺脏母细胞瘤。
可治疗之脑部癌症实例包括(但不限于)脑干及下视丘神经胶细胞瘤、小脑及大脑星细胞瘤、神经胶母细胞瘤、髓质母细胞瘤、室管膜细胞瘤，以及神经外胚层及松果体肿瘤。
可治疗之男性生殖器官肿瘤实例包括(但不限于)摄护腺及睪丸之癌症。
可治疗之女性生殖器官肿瘤包括(但不限于)子宫内膜、子宫颈、卵巢、阴道、及外阴之癌症，以及子宫之肉瘤。
可治疗之卵巢癌症包括(但不限于)浆液性肿瘤、子宫内膜样肿瘤、粘液性囊状腺癌瘤、颗粒细胞肿瘤、支持间质细胞(Sertoli-Leydig cell)肿瘤及雄胚瘤。
可治疗之子宫颈癌症包括(但不限于)鳞状细胞癌瘤、腺癌瘤、腺鳞状癌瘤、小细胞癌瘤、神经内分泌肿瘤、玻璃状细胞癌瘤及子宫颈乳头状腺癌瘤。
可治疗之消化道肿瘤包括(但不限于)肛门、结肠、结肠直肠、食道、膀胱、胃、胰脏、直肠、小肠、及唾液腺之癌症。
可治疗之食道癌症包括(但不限于)食道细胞癌瘤及腺癌瘤，以及鳞状细胞癌瘤、平滑肌肉瘤、恶性黑色素瘤、横纹肌肉瘤及淋巴瘤。
可治疗之胃部癌症包括(但不限于)肠道型及扩散型胃腺癌瘤。
可治疗之胰脏癌症包括(但不限于)胰管腺癌瘤、腺鳞状癌瘤及胰脏内分泌肿瘤。
可治疗之尿道肿瘤包括(但不限于)膀胱、阴茎、肾脏、肾盂、输尿管、尿道及人类乳突肾癌症。
可治疗之肾脏癌症包括(但不限于)肾细胞癌瘤、泌尿道上皮细胞癌瘤、近肾小球细胞肿瘤(肾素瘤)、血管平滑肌脂肪瘤、肾腮腺嗜酸性颗粒细胞瘤、毕氏管(Bellini duct)癌瘤、肾脏之透明细胞肉瘤、中胚叶肾瘤及威尔姆氏肿瘤(Wilms’Tumor)。
可治疗之膀胱癌症包括(但不限于)移行细胞癌瘤、鳞状细胞癌瘤、腺癌瘤、肉瘤及小细胞癌瘤。
可治疗之眼部癌症包括(但不限于)眼内黑色素瘤及视网膜母细胞瘤。
可治疗之肝脏癌症包括(但不限于)肝细胞癌瘤(出现或不出现纤维薄层型变异之肝脏细胞癌瘤)、胆管癌(肝内胆管癌瘤)、及混合肝细胞胆管癌。
可治疗之皮肤癌症包括(但不限于)鳞状细胞癌瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、恶性黑色素瘤、默克(Merkel)细胞皮肤癌、及非黑色素瘤皮肤癌。
可治疗之头与颈部癌症包括(但不限于)头与颈之鳞状细胞癌、喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌、唾液腺癌、唇及口腔癌症及鳞状细胞。
可治疗之淋巴瘤包括(但不限于)AIDS-相关淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、伯基氏淋巴瘤、何杰金氏疾病、及中枢神经系统淋巴瘤。
可治疗之肉瘤包括(但不限于)软组织之肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维性组织细胞瘤、淋巴肉瘤、及横纹肌肉瘤。
可治疗之白血病包括(但不限于)急性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、及毛细胞白血病。
某些具体例中，本发明化合物可用于治疗涉及MAP4K1之各种不同其他疾病，如心血管与肺部疾病。
某些具体例中，本发明化合物可用为医药，供治疗及/或预防心血管、发炎及纤维化疾患、肾疾患，特定言之急性及慢性肾功能不全，及急性及慢性肾衰竭。
本文中，术语「肾功能不全」包括肾功能不全之急性及慢性两种症兆，及原发或相关之肾疾患，如糖尿病及非糖尿病性肾病变、高血压性肾病变、缺血性肾疾患、肾灌流不足、透析中低血压、阻塞性尿路病变、肾脉管狭窄、肾小球病变、肾小球肾炎(如，例如，原发性肾小球肾炎；微小病变型肾小球肾炎(类脂肪变性肾病)；膜性肾小球肾炎；局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)；膜-增生性肾小球肾炎；急进性肾小球肾炎；环间膜增生性肾小球肾炎(IgA肾炎、柏格氏病(Berger’s disease))；感染后肾小球肾炎；续发性肾小球肾炎)、糖尿病、全身性红斑狼疮、类淀粉沉积症、古巴斯捷氏症候群(Goodpasture syndrome)、韦格纳肉芽肿(Wegener’s granulomatosis)、过敏性紫斑症(Henoch-Schonlein purpura)、显微性多血管炎、急性肾小球肾炎、肾盂肾炎(例如，因尿石症、良性摄护腺肥大、糖尿病、畸形、滥用止痛药、克隆氏症(Crohn's disease)所致者)、肾小球硬化症、肾脏之小动脉坏死(arteriolonecrose)、肾小管间质性疾病、肾病变性疾患如原发性及先天性或后天性肾疾患、亚伯氏症候群(Alport syndrome)、肾炎、免疫性肾脏疾患如肾脏移植排斥及免疫复合体诱发之肾疾患、毒性物质诱发之肾病变、显影剂诱发之肾病变、糖尿病及非糖尿病性肾病变、肾囊肿、肾硬化、高血压性肾硬化及可经诊断特征之肾病症候群，例如，肌酸酐及/或排水量异常减少、血中尿素、氮、钾及/或肌酸酐等浓度异常升高、肾酵素活性改变(例如，麸胺酸合成酶)、尿液渗透压或尿液体积改变、微白蛋白尿升高、巨量白蛋白尿、肾小球及小动脉损伤、肾管扩张、高磷酸盐血症及/或需要洗肾。
某些具体例中，本发明化合物可用于治疗及/或预防肾功能不全之后遗症，例如，肺水肿、心脏衰竭、尿毒症、贫血、电解质不平衡(例如，高血钙症、低血钠症)及骨与碳水化合物代谢障碍。
某些具体例中，本发明化合物可用于治疗及/或预防肾功能不全之后遗症，例如，肺水肿、心脏衰竭、尿毒症、贫血、电解质不平衡(例如，高血钙症、低血钠症)及骨与碳水化合物代谢障碍。
某些具体例中，本发明化合物进一步适合治疗及/或预防多囊性肾脏疾病(PCKD)及ADH分泌失调症候群(SIADH)。
某些具体例中，本发明化合物亦适合治疗及/或预防代谢症候群、高血压、顽固性高血压、急性及慢性心脏衰竭、冠状动脉心脏疾病、稳定性及不稳定性心绞痛、周边及心脏血管疾患、心律不整、心房及心室心律不整及传导功能受损，例如，第l-lll级房室传导阻滞(AB阻滞l-lll)、上心室心搏过速、心房纤维性颤动、心房扑动、心室纤维性颤动、心室扑动、心室心搏过速、尖端扭转型心搏过速、心房及心室额外收缩、AV-交界区性额外收缩、病窦症候群、昏厥、AV-结回旋心搏过速、沃夫-巴金森-怀特症候群(Wolff-Parkinson-Whitesyndrome)、急性冠状动脉症候群(ACS)、自体免疫心脏疾患(心包膜炎、心内膜炎、心瓣膜炎、主动脉炎、心肌病变)、休克(如心源性休克、败血性休克及过敏性休克)、动脉瘤、拳击手心脏病变(心室提前收缩(PVC))；供治疗及/或预防血栓栓塞性疾患及缺血症如心肌缺血、心肌梗塞、中风、心脏肥大、暂时性及缺血性发作、子痫前症、发炎性心血管疾患、冠状动脉及周边动脉痉孪、水肿形成(例如，肺水肿、脑水肿、肾水肿或因心脏衰竭、周边循环不良、再灌流伤害、动脉与静脉血栓造成之水肿)、心肌功能不全、血管内皮功能障碍；供预防术后再狭窄(例如，在血栓溶解疗法、经皮经腔血管成形术(PTA)、经腔冠状动脉血管成形术(PTCA)、心脏移植及绕道手术之后)，及微血管与大血管伤害(脉管炎)、增加纤维蛋白原及低密度脂蛋白(LDL)之浓度及增加纤维蛋白溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)之浓度，及供治疗及/或预防勃起功能障碍及女性性功能障碍。
某些具体例中，本发明化合物亦适合治疗及/或预防气喘疾患、肺动脉高血压(PAH)及其他肺高血压(PH)型式，包括左边心脏疾病、HIV、镰状细胞贫血、血栓栓塞(CTEPH)、结节病、COPD或肺纤维变性相关之肺高血压、慢性阻塞性肺病(COPD)、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、急性肺损伤(ALI)、α-1-抗胰蛋白酶缺陷(AATD)、肺纤维变性、肺气肿(例如，因吸烟造成之肺气肿)及囊状纤维变性(CF)。
某些具体例中，本发明化合物亦可有效控制特征在于NO/cGMP系统失调之中枢神经系统疾患。其等特别适合在认知力减损之后改善知觉、注意力、学习力或记忆力，如彼等特别与诸如以下状态/疾病/症候群相关之下发生之彼等认知力减损，如轻度认知力减损、老化相关之学习及记忆力减损、老化相关之记忆力丧失、血管性失智、脑外伤、中风、中风后发生之失智(中风后失智)、创伤后脑外伤、一般专注力减损、患有学习及记忆力问题之儿童之专注力减损、阿兹海默症(Alzheimer’s disease)、路易体(Lewy body)失智、颞前叶退化之失智，包括皮克氏(Pick's)症候群、帕金森氏症(Parkinson's disaese)、皮质基底退化之渐进性失智、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、亨丁顿氏症(Huntington’s Disease)、髓鞘脱失、多发性硬化、丘脑退化、库贾氏(Creutzfeld-Jacob)失智症、HIV失智、患有失智之精神分裂症或柯沙科夫精神病(Korsakoff’s psychosis)。
某些具体例中，本发明化合物亦适合治疗及/或预防中枢神经系统疾患，如焦虑、紧张及抑郁的状态、CNS-相关之性功能障碍及睡眠障碍，及供控制在摄取食物、兴奋剂、及成瘾物之病理性紊乱。
某些具体例中，本发明化合物进一步适合控制脑部血流，因此代表控制偏头痛之有效制剂。
某些具体例中，本发明化合物亦适合预防及控制脑梗塞(脑中风)(如中风、脑缺血及脑外伤)之后遗症。根据本发明化合物同样可用于控制疼痛及耳鸣状态。
某些具体例中，本发明化合物具有抗发炎作用，因此可作为消炎剂，用于治疗及/或预防败血病(SIRS)、多重器官衰竭(MODS、MOF)、肾脏之发炎疾患、慢性肠部发炎(IBD，克隆氏症(Crohn's disease)、UC)、胰脏炎、腹膜炎、类风湿疾患、发炎皮肤疾患及眼部发炎疾患。
某些具体例中，本发明化合物亦可用于治疗及/或预防自体免疫疾病。
某些具体例中，本发明化合物亦适合治疗及/或预防内脏器官之纤维化疾患，例如，肺脏、心脏、肾脏、骨髓及特定言之肝脏，及皮肤纤维变性及眼部纤维化疾患。
本文所采用术语「纤维化疾患」特定言之包括下列：肝纤维变性、肝硬化、肺纤维变性、心肌纤维变性、肾病变、肾小球肾炎、间质性肾纤维变性、因糖尿病造成之纤维化伤害、骨髓纤维变性及类似之纤维化疾患、硬皮病、硬斑病、蟹足肿、增生性疤痕(亦继手术过程之后)、痣、糖尿病视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变及结缔组织疾患(例如，结节病)。
某些具体例中，本发明化合物亦适合控制手术后结疤，例如，因青光眼手术造成。
某些具体例中，本发明化合物亦可用于老化及角质化皮肤之美容。
某些具体例中，本发明化合物适合治疗及/或预防肝炎、新生瘤、骨质疏松症、青光眼及胃轻瘫。
某些具体例中，本发明化合物适合治疗及/或预防病毒感染(例如，HIV及卡波西氏肉瘤)；发炎及自体免疫疾病(例如，结肠炎、关节炎、阿兹海默症(Alzheimer’s disease)、肾小球肾炎及伤口愈合)；细菌、真菌、及/或寄生虫感染；皮肤疾病(例如，干癣)；特征在于细胞(例如，纤维母细胞、肝细胞、骨头与骨髓细胞、软骨或平滑肌细胞或上皮细胞)数量增加之基于过度增生之疾病(例如，子宫内膜增生)；骨头疾病及心血管疾病(例如，术后再狭窄及肥大)。
另一具体例中，本发明化合物亦可用于治疗或预防妇女之子宫纤维瘤(子宫平滑肌瘤或子宫肌瘤)。子宫纤维瘤为子宫肌膜(系子宫的平滑肌层)之良性肿瘤。子宫纤维瘤在女人生命中慢慢生长，其生长系依赖女性性激素雌二醇及孕酮。因此，约70％及>80％的白人及非裔美国妇女的子宫纤维瘤的好发高峰分别在35岁到更年期之间，之后因激素量减少即会萎缩。约30％及45％的白人及非裔美国妇女分别因其纤维瘤而出现临床相关症状，其等系与月经周期相关之大量经血及疼痛(David等人，Eur J Obstet Gynecol ReprodBiol.199:137-140,2016)。此时的大量经血系界定在月经周期中流血超过80mL。子宫纤维瘤之粘膜下位置(例如，彼等直接位于子宫内膜下之位置)似乎对子宫流血的影响甚至更严重，可能造成妇女患者贫血。此外，会因此随子宫纤维瘤的症状，严重影响妇女患者的生活品质。
某些具体例中，本发明化合物适用于治疗及/或预防慢性肾疾患、急性及慢性肾功能不全、糖尿病、发炎或高血压性肾病变、纤维化疾患、心脏功能不全、心绞痛、高血压、肺高血压、缺血、血管疾患、血栓栓塞性疾患、动脉血管硬化、镰状细胞贫血、勃起功能障碍、良性摄护腺肥大、与良性摄护腺肥大相关之排尿困难、亨丁顿氏症(Huntington)、失智、阿兹海默症及库贾氏症。
本发明提供一种方法，供治疗及/或预防慢性肾疾患、急性及慢性肾功能不全、糖尿病、发炎或高血压性肾病变、纤维化疾患、心脏功能不全、心绞痛、高血压、肺高血压、缺血、血管疾患、血栓栓塞性疾患、动脉血管硬化、镰状细胞贫血、勃起功能障碍、良性摄护腺肥大、与良性摄护腺肥大相关之排尿困难、亨丁顿氏症(Huntington)、失智、阿兹海默症及库贾氏症。
本发明进一步提供一种根据本发明化合物之用途，用于治疗及/或预防疾患，尤指上述疾患。
本发明进一步提供一种治疗及/或预防疾患，特定言之上述疾患之方法，其系使用有效量之至少一种根据本发明化合物。
因此，本发明化合物可用于藉由外因性及/或内因性配体来抑制、阻断、减少、或降低MAP4K1活化，而降低肿瘤生长及调控失调之免疫反应，例如，在癌症及癌症免疫疗法之背景下，用于阻断免疫抑制性，及提高免疫细胞活化与浸润。此方法包括对有此需要之哺乳动物(包括人类)投与本发明之化合物量或其医药上可接受之盐、异构物、多形物、代谢物、水合物、溶剂合物或酯以治疗该疾患。
本发明亦提供一种治疗涉及MAP4K1之各种不同其他疾患之方法，如(但不限于)出现免疫反应失调之疾患、发炎、感染与癌症之疫苗接种、病毒感染、肥胖、及膳食诱发之肥胖、肥胖症、代谢疾患、肝脂肪变性及子宫纤维瘤。此等疾患在人体的特征已完全了解，但亦在其他哺乳动物中具有类似病因，可藉由投与本发明医药组成物来治疗。
5.组合疗法
本发明化合物可用于幷用一或多种适合治疗可利用该化合物治疗之疾病或适应症之其他/次要医疗剂之组合疗法。
因此某些具体例中，例如，使用本发明化合物之本发明方法可包括对有此需要之个体再投与其他医疗剂。该其他医疗剂可为：(i)阻断或抑制免疫系统检查点之免疫调控剂，该检查点可能是或可能不是NF-κB途径之组份；及/或(ii)可直接刺激免疫效应子反应之制剂，如细胞激素、或肿瘤特异性授受性转移T细胞族群、或针对肿瘤细胞所表现蛋白质之抗体；及/或(iii)包含肿瘤抗原或其免疫原性片段之组成物；及/或(iv)化疗剂。
某些具体例中，该第二医疗剂包括PI3K-AKT-mTOR途径之抑制剂、Raf-MAPK途径之抑制剂、JAK-STAT途径之抑制剂、β连环蛋白(catenin)途径之抑制剂、notch途径之抑制剂、刺猬信号途径之抑制剂、Pim激酶之抑制剂、及/或伴护蛋白蛋白质与细胞循环演进之抑制剂。某些具体例中，本发明之组合疗法可降低细胞族群出现抗药性的可能性，及/或降低治疗之毒性。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂化合物可以组合使用一或多种下列激酶之抑制剂，供治疗癌症：Akt1、Akt2、Akt3、TGF-βΡν、PKA、PKG、PKC、CaM-激酶、磷酸化激酶、MEKK、ERK、MAPK、mTOR、EGFR、HER2、HER3、HER4、INS-R、IGF-1R、IR-R、PDGFαR、PDGFβR、CSFIR、KIT、FLK-II、KDR/FLK-1、FLK-4、flt-1、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、c-Met、Ron、Sea、TRKA、TRKB、TRKC、FLT3、VEGFR/Flt2、Flt4、EphAl、EphA2、EphA3、EphB2、EphB4、Tie2、Src、Fyn、Lck、Fgr、Btk、Fak、SYK、FRK、JAK、ABL、ALK、及B-Raf。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂化合物可以组合使用一或多种下列抑制剂，供治疗癌症，包括：FGFR抑制剂(FGFR1、FGFR2、FGFR3或FGFR4，例如，AZD4547、BAY 1187982、ARQ087、BGJ398、BIBF1120、TKI258、德立替尼(lucitanib)、多韦替尼(dovitinib)、TAS-120、JJ-42756493、Debiol347、INCB54828、INCB62079、及INCB63904)、JAK抑制剂(JAK1及/或JAK2，例如，鲁索利替尼(ruxolitinib)、巴希替尼(baricitinib)、或抑塔替尼(itacitinib)(INCB39110))、IDO抑制剂(例如，恩帕斯塔(epacadostat)及NLG919)、LSD1抑制剂(例如，GSK2979552、INCB59872及INCB60003)、TDO抑制剂、PI3K-δ抑制剂(例如，INCB50797及INCB50465)、PI3K-γ抑制剂(如PI3K-γ选择性抑制剂)、CSF1R抑制剂(例如，PLX3397及LY3022855)、TAM受体酪胺酸激酶(Tyro-3、Axl、及Mer)、芳基烃受体(AhR)调控剂(如拉喹莫德(laquinimod)、胺基黄酮、CB7993113、CH223191、6,2’,4’-三甲氧基黄酮(TMF)、GNF351(N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-异丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺)、胺基黄酮、NKI150460、吲哚-3-甲醇、β-萘幷黄酮及其二聚体、二吲哚基甲烷(DIM)、4-羟基泰莫西芬(tamoxifen)、来氟米特(leflunomide)、雷洛昔芬(raloxifene)、曲尼司特(tranilast)、氟他胺(flutamide)、美西律(mexiletine)、尼莫地平(nimodiphine)、奥美拉唑(omeprazole)、舒林酸(sulindac)、曲尼司特(tranilast)、及TCDD(2,3,7,8-四氯二苯幷-p-戴奥辛))、血管新生抑制剂、间白素受体抑制剂、含溴与额外末端家族成员抑制剂(例如，溴功能域抑制剂或BET抑制剂，如OTX015、CPI-0610、INCB54329、及INCB57643)、及腺苷受体拮抗剂或其组合。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂化合物可以组合使用HDAC之抑制剂，如班诺斯塔(panobinostat)及菲诺斯塔(vorinostat)。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂化合物可以组合使用c-Met之抑制剂，如昂纳珠单抗(onartumzumab)、替万提尼(tivantnib)、及卡马替尼(capmatinib)(INC-280)。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂化合物可以组合使用BTK之抑制剂，如依鲁替尼(ibrutinib)。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂化合物可以组合使用mTOR之抑制剂，例如，雷帕霉素(rapamycin)、西罗莫司(sirolimus)、特罗莫司(temsirolimus)、及依维莫司(everolimus)。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂化合物可以组合使用MEK之抑制剂，如曲美替尼(trametinib)、希鲁替尼(selumetinib)及GDC-0973。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂化合物可以组合使用Hsp90之抑制剂(例如，坦螺旋霉素(tanespimycin))、周期素依赖性激酶之抑制剂(例如，帕伯希利(palbociclib))、PARP之抑制剂(例如，奥拉帕尼(olaparib))及Pim激酶之抑制剂(LGH447、INCB053914、及SGI-1776)。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂化合物可以组合使用DNA感测器(c-GAS)及/或其下游转接蛋白质STING之促效剂。
cGAS(环状GMP-AMP合成酶)-STING(干扰素基因之刺激剂)途径为先天免疫系统之组份，其功能在于检测细胞溶质DNA之存在，且反应会启动发炎基因之表现，造成衰老或激活防御机转。DNA从正常核位置移至细胞溶质系与肿瘤发生或病毒感染相关。已在细胞溶质中发现cGAS，且当直接结合细胞溶质DNA时，cGAS会形成二聚体，催化由ATP及GTP产生2’3’-cGAMP。所得cGAMP即具有第二信使者之作用，结合STING并启动激活转录因子IRF3。活化之IRF3造成第1型IFN-β转录，使许多下游标靶基因开始进行多样生物反应，如病毒反应、肿瘤侦测、自体免疫、及细胞衰老。许多肿瘤细胞中，构成性活性DNA伤害反应造成细胞质DNA累积及激活cGAS/STING途径。已在淋巴瘤细胞中显示，NKG2D配体Rae1会以依赖STING/IRF3之方式上调，因此有助于NK所介导之肿瘤清除。在抗原呈现细胞(如树突状细胞)中激活c-GAS-STING途径已显示加强其功能及补强抗肿瘤免疫力。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂化合物可以组合使用一或多种免疫检查点抑制剂。
效应子T细胞活化作用通常系被MHC复合物所呈示之TCR辨识之抗原性肽启动。然后由刺激之讯号与抑制效应子T细胞反应之讯号间之平衡来决定所达成之活化型态与程度。本文所采用「免疫系统检查点」系指任何可改变平衡状态而倾向抑制效应子T细胞反应之分子交互作用。亦即当发生该分子交互作用时，负向调节效应子T细胞之活化。此等交互作用可能为直接性，如配体与细胞表面受体间之交互作用传递抑制讯号给效应子T细胞。或其可能为间接性，如阻断或抑制配体与细胞表面受体间之交互作用传递活化讯号给效应子T细胞，或该交互作用促进抑制性分子或细胞的止调，或被效应子T细胞所需要之代谢物之酵素消耗，或其任何组合。
免疫系统检查点实例包括：a)吲哚胺2,3-二氧合酶(IDO1与其受质间之交互作用；b)PD1与PD-L1之间及/或PD1与PD-L2间之交互作用；c)CTLA-4与CD86及/或CTLA-4与CD80间之交互作用；d)B7-H3及/或B7-H4与其个别配体间之交互作用；e)HVEM与BTLA间之交互作用；f)GAL9与TIM3间之交互作用；g)I或II类MHC与LAG 3间之交互作用；及h)I或II类MHC与KIR间之交互作用；i)OX40(CD134)与OX40L(CD252)间之交互作用；j)CD40与CD40L(CD154)间之交互作用；k)4-1BB(CD137)与配体(包括4-1BBL)间之交互作用；l)GITR与配体(包括GITRL)间之交互作用。
因此免疫检查点抑制剂实例包括对抗以下免疫检查点分子之抑制剂，如：CD20、CD27、CD28、CD39、CD40、CD 122、CD96、CD73、CD47、OX40、GITR、CSF1R、JAK、PI3Kδ、PI3Kγ、TAM、精胺酸酶、CD137(亦已知为4-1BB)、ICOS、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、LAG3、TIM3、VISTA、PD-1、PD-L1、及PD-L2。
针对本发明目的之代表性检查点为检查点(b)，亦即PD1与其任一配体PD-L1及PD-L2间之交互作用。PD1系表现在效应子T细胞上。与其任一配体接合所产生之讯号下调活化作用。有些肿瘤表现该等配体。许多实体肿瘤(包括黑色素瘤)特别表现PD-L1。因此此等肿瘤透过T细胞的抑制性PD-1受体之活化来下调免疫介导之抗肿瘤效应。藉由阻断PD1与其一或两种配体间之交互作用，可移除免疫反应之检查点，造成增大的抗肿瘤T细胞反应。因此，PD1及其配体即为免疫系统检查点组份之实例，可能成为本发明方法之目标。
针对本发明目的之另一个检查点为检查点(c)，亦即T细胞受体CTLA-4与其配体(B7蛋白质(B7-1及B7-2))间之交互作用。T细胞表面在开始活化后，通常上调CTLA-4，且与配体结合时，抑制进一步/继续活化。CTLA-4与亦表现在T细胞表面之受体CD28竞争结合至B7蛋白质，但上调活化作用。因此藉由阻断与B7蛋白质之CTLA-4交互作用，但不阻断CD28与B7蛋白质之交互作用，可移除免疫反应之其中一个正常检查点，造成增大的抗肿瘤T细胞反应。因此，CTLA-4及其配体即为免疫系统检查点组份之实例，可能成为本发明方法之目标。
有些具体例中，免疫检查点分子为选自CD27、CD28、CD40、ICOS、OX40、GITR、及CD137之刺激性检查点分子。
有些具体例中，免疫检查点分子为选自A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、IDO、KIR、LAG3、PD-1、HΜ3、及VISTA之抑制性检查点分子。
有些具体例中，本文所提供化合物可以组合使用一或多种选自以下之制剂：KIR抑制剂、TIGIT抑制剂、LAIR1抑制剂、CD 160抑制剂、2B4抑制剂及TGFRβ抑制剂。
有些具体例中，本文所提供化合物可以组合使用免疫检查点抑制剂，其等通常为小型有机分子之小分子抑制剂(SMI)。例如，某些具体例中，IDO1之抑制剂包括恩帕斯塔(Epacadostat)(INCB24360)、吲哚莫德(Indoximod)、GDC-0919(NLG919)及F001287。IDO1之其他抑制剂包括1-甲基色胺酸(1MT)。
有些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂亦称为「免疫调控剂」，其包括投与个体时阻断或抑制免疫系统检查点之作用之任何制剂，在个体中造成上调免疫效应子反应，通常为T细胞效应子反应，其可能包括抗肿瘤T细胞效应子反应。
本发明方法所使用之免疫调控剂可阻断或抑制上述任何免疫系统检查点。该制剂可能为抗体或可造成该阻断或抑制作用之任何其他合适制剂。因此该制剂通常称为该检查点之抑制剂。
本文所采用「抗体」包括完整抗体及其任何抗原结合片段(亦即「抗原结合部份」)或单链。抗体可为多株抗体或单株抗体，且可能采用任何合适方法制造。术语抗体之「抗原结合部份」所涵括之结合性片段实例包括Fab片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、Fd片段、Fv片段、dAb片段，及单离之互补决定区(CDR)。单链抗体(如scFv)及重链抗体(如VHH及骆驼抗体)亦计画涵括在术语抗体之「抗原结合部份」内。
某些具体例中，本发明HPK1抑制剂所使用之免疫调控剂为抗-PD1抗体、抗-PD-Ll抗体、或抗-CTLA-4抗体。
有些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂为PD-1之抑制剂，例如，抗-PD-1单株抗体。有些具体例中，抗-PD-1单株抗体为纳武单抗(nivolumab)(MDX-1106)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)(Merck 3475或拉博利珠单抗(Lambrolizumab))、皮得利珠单抗(pidilizumab)(CT-011)、替雷利珠单抗(Tislelizumab)(BGB-A317)、卡瑞利珠单抗(Camrelizumab)(SHR-1210)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)(PDR001)、或AMP-514(MEDI0680)。有些具体例中，抗-PD-1单株抗体为纳武单抗(nivolumab)或帕博利珠单抗(pembrolizumab)。有些具体例中，抗-PD1抗体为帕博利珠单抗(pembrolizumab)。有些具体例中，抗PD-1抗体为卡瑞利珠单抗(Camrelizumab)(SHR-1210)。某些具体例中，PD-1之抑制剂为AMP-224(会与PD-1结合之PD-L2 Fc融合蛋白质)或AUNP-12(抗-PD-1肽)。
有些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂为PD-L1之抑制剂，例如，抗-PD-L1单株抗体。有些具体例中，抗-PD-L1单株抗体为BMS-935559、BMS-936559(MDX-1105)、MEDI-4736(德瓦鲁单抗(durvalumab))、MPDL3280A(亦称为RG7446)、YW243.55.S70(HPAB-0381-WJ)、或MSB0010718C。有些具体例中，抗-PD-L1单株抗体为MPDL3280A或MEDI-4736。某些具体例中，抗-PD-L1抗体包括阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)或MEDI-4736、及MPDL3280A。
有些具体例中免疫检查点分子之抑制剂为CTLA-4之抑制剂，例如，抗-CTLA-4抗体。有些具体例中，抗-CTLA-4抗体为伊匹木单抗(ipilimumab)、曲美木单抗(tremelimumab)，或WO2014/207063所揭示之任何抗体(已以引用之方式并入本文中)。其他分子包括多肽，或可溶性突变体CD86多肽。某些具体例中，抗体为易普利单抗(Ipilumumab)。
某些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂为两种或更多种本文所说明调控剂之组合，如靶向两种或更多种不同标靶之组合(例如，PD-1、PD-L1及PD-L2)。例示性组合包括：α-PD-1与α-PD-L1；α-CTLA-4、α-PD-L1、与α-CD20等等。
有些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂为阻断或抑制4-1BB与其配体间交互作用之抗体，包括乌特鲁单抗(utomilumab)。
有些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂为CSFIR之抑制剂，例如，抗-CSF1R抗体。有些具体例中，抗-CSF1R抗体为IMC-CS4或RG7155。
有些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂为LAG3之抑制剂，例如，抗-LAG3抗体。有些具体例中，抗-LAG3抗体为BMS-986016、LAG525、IMP321或GSK2831781。
有些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂为GITR之抑制剂，例如，抗-GITR抗体。有些具体例中，抗-GITR抗体为TRX518、MK-4166、MK1248、BMS-986156、MEDI1873、或GWN323。
有些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂为OX40之抑制剂，例如，抗-OX40抗体或OX40L融合蛋白质。有些具体例中，抗-OX40抗体为MEDI0562、MEDI6469、MOXR0916、PF-04518600、或GSK3174998。有些具体例中，OX40L融合蛋白质为MEDI6383。
有些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂为TIM3之抑制剂，例如，抗-TIM3抗体。有些具体例中，抗-TIM3抗体为MBG-453。
有些具体例中，免疫检查点分子之抑制剂为CD20之抑制剂，例如，抗-CD20抗体。有些具体例中，抗-CD20抗体为奥宾珠单抗(obinutuzumab)或利妥昔单抗(rituximab)。
有些具体例中，本发明化合物可以组合使用一或多种代谢酵素抑制剂。有些具体例中，代谢酵素抑制剂为IDO l、TDO、或精胺酸酶之抑制剂。IDO1抑制剂之实例包括恩帕斯塔(epacadostat)及NGL919。精胺酸酶抑制剂之实例为CB-1158。
有些具体例中，本发明化合物可以组合使用双特异性抗体。有些具体例中，双特异性抗体之其中一个功能域靶向PD-1、PD-L1、CTLA-4、GITR、OX40、TIM3、LAG3、CD137、ICOS、CD3或TGFβ受体。
有些具体例中，本发明化合物可以组合使用一或多种治疗疾病(如癌症)之制剂。有些具体例中，该制剂为烷化剂、蛋白酶体抑制剂、皮质类固醇、或免疫调控剂。烷化剂实例包括苯达莫司汀(bendamustine)、氮芥、乙烯亚胺衍生物、磺酸烷基酯、硝基脲与三氮烯类、尿嘧啶氮芥、氯乙胺(chlormethine)、环磷酰胺(CytoxanTM)、异环磷酰胺(ifosfamide)、马法兰(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、双溴丙基呱嗪(pipobroman)、三伸乙基-蜜胺、三伸乙基硫代磷酰胺、白消安(busulfan)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、链脲佐菌素(streptozocin)、达卡巴仁(dacarbazine)、及替莫唑胺(temozolomide)。有些具体例中，蛋白酶体抑制剂为卡非佐米(carfilzomib)。有些具体例中，皮质类固醇为地塞美松(dexamethasone)(DEX)。有些具体例中，免疫调控剂为来那度胺(lenalidomide)(LEN)或泊马度胺(pomalidomide)(POM)。
本发明化合物可以进一步组合使用其他治疗癌症之方法，例如，化疗法、放射疗法、肿瘤标靶疗法、化疗前置疗法、免疫疗法或手术。免疫疗法实例包括细胞激素治疗法(例如，干扰素、GM-CSF、G-CSF、IL-2)、CRS-207免疫疗法、癌症疫苗、单株抗体、过继性T细胞转移、溶瘤病毒疗法及免疫调控小分子，包括沙利窦迈(thalidomide)或JAK1/2抑制剂及类似物。
本发明化合物可以组合投与一多种抗癌药物，如化疗剂。化疗法实例包括任何：阿巴瑞克(abarelix)、阿比特龙(abiraterone)、阿法替尼(afatinib)、阿柏西普(aflibercept)、阿地白介素(aldesleukin)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿利维甲酸(alitretinoin)、别嘌呤醇(allopurinol)、六甲蜜胺(altretamine)、安耐曲唑(anastrozole)、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿西替尼(axitinib)、阿扎胞苷(azacitidine)、贝伐单抗(bevacizumab)、贝瑟罗汀(bexarotene)、巴希替尼(baricitinib)、比卡鲁胺(bicalutamide)、博来霉素(bleomycin)、硼替佐必(bortezombi)、硼替佐米(bortezomib)、布立尼布(brivanib)、布帕利希(buparlisib)、白消安(busulfan)(静脉内)、白消安(口服)、二甲睾酮(calusterone)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、西地尼布(cediranib)、西妥昔单抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、克罗拉滨(clofarabine)、克唑替尼(crizotinib)、环磷酰胺、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴仁(dacarbazine)、达克替尼(dacomitinib)、更生霉素(dactinomycin)、达肝素钠(dalteparin sodium)、达沙替尼(dasatinib)、更生霉素(dactinomycin)、唐霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、地加瑞克(degarelix)、地尼介白素(denileukin)、地尼介白素迪夫托斯(denileukindiftitox)、脱氧柯福霉素(deoxycoformycin)、右雷佐生(dexrazoxane)、欧洲紫杉醇(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、卓罗沙吩(droloxafine)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、抑克珠单抗(eculizumab)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、表足叶草毒(epidophyllotoxin)、泛艾霉素(epirubicin)、厄洛替尼(erlotinib)、雌氮芥(estramustine)、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)、依托泊苷(etoposide)、依西美坦(exemestane)、柠檬酸芬太尼(fentanyl citrate)、非格司亭(filgrastim)、氟尿嘧啶脱氧核苷(floxuridine)、福达乐(fludarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟他胺(flutamide)、氟维司群(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨(gemcitabine)、吉妥珠单抗(gemtuzumab ozogamicin)、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、乙酸组胺瑞林(histrelin acetate)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、伊达比星(idarubicin)、依得利斯(idelalisib)、异环磷酰胺(ifosfamide)、甲磺酸伊马替尼(imatinibmesylate)、干扰素α2a、伊立替康(irinotecan)、二甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinibditosylate)、来那度胺(lenalidomide)、来曲唑(letrozole)、若克瘤(leucovorin)、乙酸柳菩林(leuprolide acetate)、左旋咪唑(levamisole)、洛莫司汀(lomustine)、甲氮芥(meclorethamine)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、马法兰(melphalan)、巯基嘌呤、甲胺蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、光辉霉素(mithramycin)、丝裂霉素(mitomycin C)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、苯丙酸诺龙(nandrolonephenpropionate)、温诺平(navelbene)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、奈拉滨(nelarabine)、来那替尼(neratinib)、尼洛替尼(nilotinib)、尼鲁米特(nilutamide)、若莫单抗(nofetumomab)、欧色林(oserelin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、裴米卓耐特(pamidronate)、帕尼单抗(panitumumab)、帕唑帕尼(pazopanib)、培门冬酶(pegaspargase)、培非格司亭(pegfilgrastim)、培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)、喷司他汀(pentostatin)、皮拉利希(pilaralisib)、双溴丙基呱嗪(pipobroman)、普卡霉素(plicamycin)、普纳替尼(ponatinib)、泼尼松(prednisone)、丙卡巴肼(procarbazine)、奎纳克林(quinacrine)、乐布力斯(rasburicase)、瑞格非尼(regorafenib)、瑞罗沙吩(reloxafine)、利妥昔单抗(rituximab)、鲁索利替尼(ruxolitinib)、索拉非尼(sorafenib)、链脲佐菌素(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、马来酸舒尼替尼、泰莫西芬(tamoxifen)、替加氟(tegafur)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、睾内酯(testolactone)、沙利窦迈(thalidomide)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、噻替呱(thiotepa)、托普替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗(tositumomab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、维甲酸(tretinoin)、曲普瑞林(triptorelin)、尿嘧啶氮芥、戊柔比星(valrubicin)、凡德他尼(vandetanib)、长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、长春瑞滨(vinorelbine)、菲诺斯塔(vorinostat)、及唑来膦酸(zoledronate)。
其他抗癌剂包括抗体疗法，如曲妥珠单抗(trastuzumab)(贺癌平(Herceptin))、针对共同刺激分子之抗体如CTLA-4(例如，伊匹木单抗(ipilimumab)或曲美木单抗(tremelimumab))、4-1BB、针对PD-1及PD-L1之抗体、或针对细胞激素(IL-10、TGF-β等等)之抗体。可与本发明化合物组合用于治疗癌症或感染(如病毒、细菌、真菌、及寄生虫感染)之针对PD-1及/或PD-L1之抗体实例包括(但不限于)纳武单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、MPDL3280A、MEDI-4736、及SHR-1210。
其他抗癌剂包括与细胞增生性疾患相关之激酶之抑制剂。此等激酶包括(但不限于)Aurora-A、CDK1、CDK2、CDK3、CDK5、CDK7、CDK8、CDK9、ephrin受体激酶、CHK1、CHK2、SRC、Yes、Fyn、Lck、Fer、Fes、Syk、Itk、Bmx、GSK3、JNK、PAKl、PAK2、PAK3、PAK4、PDKl、PKA、PKC、Rsk、及SGK。
其他抗癌剂亦包括彼等阻断免疫细胞移动之制剂，如趋化素受体(包括CCR2及CCR4)之拮抗剂。本发明化合物可进一步组合使用一或多种抗发炎剂、类固醇、免疫抑制剂、或治疗性抗体。
有些具体例中，本发明化合物可以组合使用直接刺激免疫效应子反应之其他医疗性剂，如细胞激素，或针对授受性转移T细胞族群之肿瘤、或针对肿瘤细胞所表现蛋白质之抗体。
本文所采用「直接刺激免疫效应子反应之制剂」意指任何合适制剂，但通常指细胞激素或趋化素(或刺激产生其中一种之制剂)、特异性过继性转移T细胞族群之肿瘤、或针对肿瘤细胞所表现蛋白质之抗体。
细胞激素可为选自以下之干扰素：IFNα、ΙΡΝβ、IFNγ及IFNA、或间白素，如IL-2。趋化素可能为发炎介质，例如，选自CXCL9、10、及11，其吸引表现CXCR3之T细胞。该刺激产生细胞激素或趋化素之制剂可能为适合投药给人类之佐剂。一种实例为卡介苗(BacilleCalmette-Guerin)(BCG)，其通常投药至膀胱内(亦即尿道)，供治疗膀胱癌。BCG用于膀胱癌之典型剂量疗程为每周一次共6周，但为了长期安全性病史，亦可无限期维持投药。已知BCG可刺激对膀胱癌之免疫反应。BCG亦已用为佐剂，与包含肿瘤抗原之组成物(亦即使用癌症疫苗)组合使用，通常当皮内投药时，特别用于结肠癌。此等BCG用法亦涵括在本发明内。肿瘤特异性过继性转移T细胞族群直接增加个体中肿瘤特异性T细胞族群数量，且可采用任何合适方式产生。然而，该制程通常涉及从来自患者之肿瘤样本中单离肿瘤特异性T细胞，并选择性培养彼等细胞后，再将已扩增之肿瘤特异性T细胞族群送回患者。或者，可采用遗传工程处理T细胞受体基因座，然后扩增已改变之细胞，产生肿瘤特异性T细胞族群。
特异性针对肿瘤细胞所表现蛋白质之抗体通常藉由与肿瘤细胞结合来刺激免疫活性，幷透过抗体依赖性细胞介导细胞毒性(ADCC)促进细胞瓦解。此类抗体实例包括抗-CD20抗体如奥法木单抗(ofatumumab)或利妥昔单抗(rituximab)，及抗-CD52抗体，如阿仑单抗(alemtuzumab)。
因此某些例示性具体例中，本发明化合物可以组合使用钙调磷酸酶(calcineurin)抑制剂，例如，环孢素A或FK 506；mTOR抑制剂，例如，雷帕霉素(rapamycin)、40-0-(2-羟基乙基)-雷帕霉素(rapamycin)、必欧莫斯(biolimus)-7或必欧莫斯(biolimus)-9；具有免疫抑制性质之子囊霉素(ascomycin)，例如，ABT-281、ASM981；皮质类固醇；环磷酰胺；硫唑嘌呤(azathioprene)；甲胺蝶呤(methotrexate)；来氟米特(leflunomide)；咪唑立宾(mizoribine)；霉酚酸或盐；霉酚酸莫太盐(mycophenolatemofetil)；IL-1β抑制剂。
另一具体例中，本发明化合物系与幷用制剂组合使用，其系PI3激酶抑制剂。
另一具体例中，本发明化合物系与影响BTK(布鲁顿氏(Bruton’s)酪胺酸激酶)之幷用制剂组合使用。
供治疗肿瘤疾病之本发明化合物可以组合使用B-细胞调控剂，例如，利妥昔单抗(rituximab)、BTK或Syk抑制剂；PKC、PI3激酶、PDK、PIM、JAK与mTOR及BH3拟似物之抑制剂。
有些具体例中，本发明化合物(包括其盐类)可以组合使用另一种免疫原剂，如癌细胞、纯化之肿瘤抗原(包括重组蛋白质、肽、及碳水化合物分子)、细胞、及经过编码免疫刺激细胞激素之基因转染之细胞。可使用之肿瘤疫苗之无限制实例包括黑色素瘤抗原之肽，如gp100之肽、MAGE抗原、Trp-2、MARTI及/或酪胺酸酶、或已转染而表现细胞激素GM-CSF之肿瘤细胞。
有些具体例中，本发明化合物或其盐类亦可用于与治疗癌症之疫苗接种过程组合。有些具体例中，该肿瘤细胞经过转导而表现GM-CSF。有些具体例中，肿瘤疫苗包括来自涉及人类癌症之病毒之蛋白质，如人类乳突病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV及HCV)及卡波西氏(Kaposi’s)疱疹肉瘤病毒(KHSV)。有些具体例中，本发明化合物可以组合使用肿瘤特异性抗原，如从肿瘤组织本身单离之心脏休克蛋白质。有些具体例中，本发明化合物或其盐类可以组合使用树突状细胞免疫接种法，以激活强力之抗肿瘤反应。
有些具体例中，本发明化合物可以组合使用让表现Feα或Feγ受体之效应子细胞靶向肿瘤细胞之双特异性大环肽。本发明化合物亦可组合使用激活宿主免疫反应之大环肽。
有些具体例中，本发明化合物可以组合使用骨髓移植物，供治疗各种不同造血来源之肿瘤。
计画与本发明化合物组合使用之合适抗病毒剂包含核苷及核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)、蛋白酶抑制剂及其他抗病毒药物。合适NRTI之实例包括齐多夫定(zidovudine)(AZT)；地达诺新(didanosine)(ddl)；扎西他滨(zalcitabine)(ddC)；司他夫定(stavudine)(d4T)；拉米夫定(lamivudine)(3TC)；阿巴卡维(abacavir)(1592U89)；阿德福韦酯(adefovir dipivoxil)[双(POM)-PMEA]；洛布卡韦(lobucavir)(BMS-180194)；BCH-10652；恩曲他滨(emitricitabine)[(-)-FTC]；β-L-FD4(亦称为β-L-D4C，命名为β-L-2’,3’-二去氧-5-氟-胞苷)；DAPD((-)-β-D-2,6-二胺基-嘌呤二氧杂环戊烷)；及二去氧腺苷(lodenosine)(FddA)。典型之合适NNRTI包括奈韦拉平(nevirapine)(BI-RG-587)；地拉韦啶(delaviradine)(BHAP、U-90152)；依法韦仑(efavirenz)(DMP-266)；PNU-142721；AG-1549；MKC-442(l-(乙氧基-甲基)-5-(l-甲基乙基)-6-(苯基甲基)-(2,4(1H,3H)-嘧啶二酮)；及(+)-胡桐素(calanolide)A(NSC-675451)及B。典型之合适蛋白酶抑制剂包括沙奎那维(saquinavir)(Ro 31-8959)；利托那韦(ritonavir)(ABT-538)；茚地那韦(indinavir)(MK-639)；奈非那韦(nelfnavir)(AG-1343)；安佩那韦(amprenavir)(141W94)；拉西那韦(lasinavir)(BMS-234475)；DMP-450；BMS-2322623；ABT-378；及AG-1549。其他抗病毒剂包括羟基脲、利巴韦林(ribavirin)、IL-2、IL-12、喷他夫西(pentafuside)及亿生计画(Yissum Project)No.11607。
咸了解，本发明方法所使用许多另一种医疗剂可能为需要经静脉内、腹膜内、或储积式投药之生物制剂。再一具体例中，本发明化合物系经口投药，而另一种医疗剂则非经肠式投药，例如，经静脉内、经腹膜内或呈储积物投药。
本文说明之任何组合疗法中，当对患者投与超过一种医药剂时，其等可同时、分开、依序、或组合投药(例如，超过两种药剂时)。
一具体例中，本发明提供一种包含本发明化合物之产品(如主要化合物或其任何次族群)及至少一种其他医疗剂，成为组合制剂，供同时、分开、或依序用于疗法。呈组合制剂提供之产品包括在同一个医药组成物中包含本发明化合物或其任何次族群及其他医疗剂(群)之组成物，或呈分开型式包含主要化合物或其任何次族群及其他医疗剂(群)之组成物，例如，呈套组型式。
一具体例中，本发明提供一种包含两种或更多种分开医药组成物之套组，其中至少一种包含主要化合物，及另一种包含本文所讨论之第二种医疗剂。一具体例中，套组包含用于分开收纳该组成物之手段，如容器、分开的瓶子、或分开的箔包。此等套组实例为泡壳包，通常用于包装锭剂、胶囊及类似物。本发明套组可用于在不同投药间隔投与不同剂型，例如，经口及非经肠式，投与分开之组成物，或由分开之组成物彼此调整剂量。为了促进适应性，本发明套组通常包含投药说明书。
6.化合物筛选/分析法
本发明化合物抑制HPK1之激酶活性，该激酶活性可直接采用许多种生化分析法分析，如实例1中说明之分析法。可依据一个抑制剂浓度范围来决定任何化合物之IC50值。此外，化合物之抑制效力亦可采用生物分析法评估，以决定化合物对T细胞受到TCR及CD28刺激后之细胞激素分泌之影响。
例如，实例5说明此等功能分析法，用于决定HPK1抑制剂对受到刺激之Pan T细胞之IL-2&IFN-γ释放之影响。可采用标准ELISA分析法测定/定量所分泌之IL-2&IFN-γ。简言之，采用自商品购得之套组，如：MACS(Miltenyl Biotec)Pan T单离套组(目录编号130-096-535)，自周边血液(PB)单核细胞(MNC)、或PBMC单离出pan T细胞。原生人类pan-T细胞包括CD4与CD8 T细胞及一些γ/δT细胞子群。pan-T细胞可以使用阴性免疫磁性分离技术单离，不使用管柱。
单离之pan-T细胞依100,000个细胞/孔分配在96孔盘中，使用固定化抗-CD3抗体及可溶性抗-CD28抗体刺激，或使用PMA/离子霉素(Ionomycin)作为阳性对照组(或作为阴性对照组之培养基)。可添加不同浓度之试验化合物至细胞中，在受到TCR-刺激/CD28共同刺激后，分析化合物对细胞激素分泌之影响。受刺激之细胞再培养2天后，收集各孔之上清液(包含pan-T细胞分泌之细胞激素)，供进行ELISA分析法，及定量IL-2及IFN-γ。
亦可采用其他分析法来分析任何HPK1抑制剂抑制HPK1之能力，或筛选具有HPK1抑制活性之化合物。
例如，在一种分析法中，可采用下文说明之Treg分析法(调节性T-细胞增生分析法)分析对HPK1激酶活性之抑制性。明确言之，采用合适套组，如一种来自Thermo FisherScientific(目录编号11363D)之套组，从人体捐赠之周边血液单核细胞(PBMC)中单离原生CD4+/CD25-T-细胞及CD4+/CD25+调节性T-细胞。依据供应商提供之程序，在CD4+/CD25-T-细胞上标记CFSE(Thermo Fisher Scientific,C34554)。取标记CFSE之T-细胞及CD4+/CD25+调节性T-细胞依1×106个细胞/mL之浓度再悬浮于RPMI-1640培养基中。取100μL标记CFSE之T-细胞使用或不使用50μL CD4+/CD25+调节性T-细胞混合，使用5μL抗-CD3/CD28珠(ThermoFisher Scientific,11132D)及于50μL RPMI-1640培养基中稀释成各种不同浓度之化合物处理。混合之细胞族群培养5天(37℃，5％CO2)，于第5天时，采用BD LSRFortessa X-20，使用FITC通道，分析标记CFSE之T-细胞之增生。预期该主要化合物抑制HPK1，以加强Treg功能及抑制标记CFSE之原生CD4+/CD25-T-细胞之增生。
另一实例中，可以采用下文说明之p-SLP-76S376 HTRF分析法(Cisbio)分析对HPK1激酶活性之抑制性。此基于HTRF细胞之分析法可以快速定量检测藉由HPK1之SLP-76在丝胺酸376之磷酸化。磷-SLP-76成为一个可在上面建立关键性讯号传导复合物的骨架，幷作为T-淋巴细胞活化作用之标记物。根据制造商，磷-SLP-76(Ser376)分析法使用两种标记抗体：一种使用供体萤光团，另一种使用接受体。第一种抗体特异性针对SLP-76上磷酸化S376基序之结合，及第二种系针对其辨识不依赖其磷酸化状态之SLP-76之能力。蛋白质磷酸化可以形成涉及两种标记抗体之免疫-复合物，幷将供体萤光团带到紧邻接受体之附近，藉以产生FRET讯号。其强度与样本中所含磷酸化蛋白质浓度成正相关性，幷提供一种在免洗分析模式(no-wash assay format)下分析蛋白质磷酸化状态的方式。
简言之，收集Jurkat细胞(于含10％FBS之RPMI1640培养基中培养)及离心后，再依3×106个细胞/mL悬浮于适当培养基中。然后取Jurkat细胞(35μL)分配至384孔盘之各孔中。使用细胞培养基，依40倍稀释度稀释试验化合物(添加39μL细胞培养基至1μL化合物中)。使用各种不同浓度之试验化合物(添加5mL稀释化合物至35μL Jurkat细胞中，从3μΜ开始稀释1：3)处理多孔盘中之Jurkat细胞，于37℃及5％CO2进行1小时，然后使用抗-CD3(5μg/ml，OKT3纯系)处理30min，以激活TCR及HPK1。使用4×溶胞缓冲剂(LB)制备1：25稀释度之100×阻断试剂(来自p-SLP76ser376HTRF套组)，及取15μL含阻断试剂之4×LB缓冲剂加至各孔中，及于室温，在温和振荡下培养45mins。取溶胞液(16μL)加至Greiner白色盘中，使用p-SLP76 Ser376 HTRF试剂(2μL供体，2μL接受体)处理，及于4℃培养一夜。次日，在PHERAstar分析盘判读仪上测定均相时差性萤光(HTRF)。采用GraphPad Prism 5.0软体，由抑制百分比代入相对于抑制剂浓度之曲线，决定IC50。
上述任何分析法均可放大规模或放大高通量筛选(HTS)。可采用上述任何分析决定主要化合物之IC50。
7.医药组成物
本发明提供一种医药组成物，其包含本文所说明任一种化合物、或其医药上可接受之盐，及一种或多种医药上可接受之载剂或赋形剂。
「医药上可接受之赋形剂」及「医药上可接受之载剂」系指协助调配及/或投与活性剂给个体及/或被个体吸收之物质，并可包括在本发明组成物中，不会对个体引起显著之不良毒性副作用。医药上可接受之载剂及赋形剂之非限制实例包括水、NaCl、生理食盐水溶液、乳酸化林格氏(Ringer’s)溶液、生理蔗糖溶液、生理葡萄糖溶液、结合剂、填料、崩解剂、润滑剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、盐溶液(如林格氏溶液)、醇类、油类、明胶、碳水化合物(如乳糖、直链淀粉或淀粉)、脂肪酸酯类、羟基甲基纤维素、聚乙烯吡咯啶、与着色剂及类似物。此等制剂可经过杀菌，若需要时，再与不与本文所提供化合物之活性有不良反应或干扰性之辅剂混合，如润滑剂、防腐剂、安定剂、湿化剂、乳化剂、影响渗透压之盐类、缓冲剂、着色剂及/或芳香物质及类似物。习此相关技艺者咸了解其他适合本发明化合物使用之医药载剂及赋形剂。
此等组成物可视需要再进一步包含一或多种额外医疗剂。或者，本发明化合物可以对有需要之患者组合投与一或多种其他医疗性疗程(例如，Gleevec或其他激酶抑制剂、干扰素、骨髓移植、法呢基(farnesyl)转移酶抑制剂、双膦酸盐类、沙利窦迈(thalidomide)、癌症疫苗、激素疗法、抗体、放射线等等)。例如，用于与本发明化合物共同投药或包含在医药组成物中之额外医疗剂可能为另一种或多种抗癌剂。
如本文所说明，本发明组成物包含本发明化合物及医药上可接受之载剂，如本文中所使用，其包括适合所需特定剂型之任何及所有溶剂、稀释剂、或其他媒剂、匀散剂或悬浮助剂、界面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体结合剂、润滑剂及类似物。Remington’s Pharmaceutical Sciences，第十五版，E.W.Martin(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1975)揭示用于调配医药组成物之各种不同载剂及其制法之已知技术。除非任何习知载剂介质无法与本发明化合物相容，如会产生任何不期望之生物效应或会依有害方式与医药组成物中任何其他组份(群)交互作用，否则其等用法均计画涵括在本发明范围内。有些可作为医药上可接受之载剂之材料实例包括(但不限于)：糖类(如乳糖、葡萄糖及蔗糖)；淀粉(如玉米淀粉及马铃薯淀粉)；纤维素及其引衍生物(如羧基甲基纤维素钠、乙基纤维素及纤维素乙酸酯)；黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；赋形剂(如可可奶油及栓剂蜡)；油类，如花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；二醇类，如丙二醇；酯类，如油酸乙酯及月桂酸乙酯；洋菜；缓冲剂，如氢氧化镁及氢氧化铝；藻酸；无热原水；等渗性生理食盐水；林格氏溶液；乙醇，及磷酸盐缓冲溶液，以及其他无毒之相容性润滑剂，如月桂基硫酸钠及硬脂酸镁，以及着色剂、释离剂、包衣剂、甜味剂、调味剂及香料剂、防腐剂及抗氧化剂亦可含在组成物中。
8.调配物
本发明亦包括一类别组成物，其包含本发明活性化合物与一或多种医药上可接受之载剂及/或稀释剂及/或佐剂(本文中统称为「载剂」材料)，及若需要时，与其他活性成份组合。
某些具体例中，本发明提供一种治疗癌症，特定言之本文所说明癌症之医药调配物，其包含本发明化合物或其医药上可接受之盐，及医药上可接受之载剂。
某些具体例中，本发明提供一种治疗选自下列各物所组成群中之癌症之医药调配物：乳癌、结肠直肠癌、肺癌、卵巢癌、及胰脏，其包含本发明化合物或其医药上可接受之盐，与医药上可接受之载剂。
本发明化合物可采用任何合适途径投药，较佳系呈配合此等途径之医药组成物型式及可有效治疗之剂量投药。本发明化合物及组成物例如，可以经口、粘膜、局部表面、直肠、肺(如吸入式喷雾)或非经肠式(包括经血管、静脉内、腹膜内、皮下、肌内、穿皮、眼框内、鞘内、脑室内、肿瘤内、鼻内、颅内、植入、吸入、及采用输注技术，呈包含医药上可接受之载剂、佐剂、及媒剂之剂量单位调配物投药。
典型地，医药组成物为锭剂或明胶胶囊，其包含活性成份及a)稀释剂，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素及/或甘胺酸；b)润滑剂，例如，硅石、滑石、硬脂酸、其镁或钙盐、及/或聚乙二醇；用于锭剂之c)结合剂，例如，硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧基甲基纤维素钠、及/或聚乙烯吡咯啶酮；若需要时使用d)崩解剂，例如，淀粉、糖、藻酸或其钠盐，或发泡混合物；及/或e)吸附剂、着色剂、调味剂、及甜味剂。锭剂可依据相关技艺已知之技术进一步包覆膜衣或肠溶性包衣。
适合经口投药之组成物包括有效量之本发明化合物，呈锭剂、含锭、水性或油性悬浮液、匀散性粉剂或粒剂、乳液、硬性或软性胶囊、或糖浆或酏剂之型式。计画口服用之组成物系依据相关技艺已知制造医药组成物之任何方法制备，且此等组成物可包含一或多种选自下列各物所组成群中之制剂：甜味剂、调味剂、着色剂及防腐剂，以产生医药上美观且适口之制剂。锭剂可包含活性成份与适合制造锭剂之无毒之医药上可接受之赋形剂混合。此等赋形剂为例如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒及崩解剂，例如，玉米淀粉、或藻酸；结合剂，例如，淀粉、明胶或金合欢胶；及润滑剂，例如，硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。锭剂可以无包衣，或可采用已知技术包覆包衣，以便在胃肠道中延缓崩解及吸收，藉以长期提供持续作用。可使用例如，缓释性材料，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服用调配物可呈硬式明胶胶囊，其中活性成份与惰性固体稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或呈软式明胶胶囊，其中活性成份与水或油介质(例如，花生油、液态石蜡或橄榄油)混合。
某些注射组成物为水性等渗性溶液或悬浮液，及栓剂宜由脂肪乳液或悬浮液制备。该等组成物可经过杀菌及/或包含佐剂，如防腐剂、安定剂、湿化剂或乳化剂、促进溶解剂、调整渗透压之盐类、及/或缓冲剂。此外，其等亦可包含其他具有医疗价值之物质。该组成物系分别依据常用之混合、造粒、或包覆方法制备，且包含约0.1-75％或包含约1-50％之活性成份。适合穿皮式施用之组成物包括有效量之本发明化合物及合适载剂。适合穿皮递送之载剂包括可吸收之医药上可接受之溶剂，以促进通过宿主皮肤。例如，穿皮式装置系呈绷带形式，其包含背衬元件、含有化合物及视需要选用之载剂之储积槽、视需要选用之速率控制障壁，以便依控制且预定之速率长期递送化合物给宿主皮肤，及包含可固定该装置在皮肤上之方式。
适合局部施用(例如，投药至皮肤及眼睛)之组成物包括水性溶液、悬浮液、油膏、乳霜、凝胶、或喷洒调配物，例如，采用气溶胶递送或类似物。此等局部递送系统特别适合皮肤施用，例如，供治疗皮肤癌症，例如，用在防晒乳、洗液、喷雾及类似物中之预防性用法。因此其等特别适用于局部，包括相关技艺习知之美容调配物。此等可包含溶解剂、安定剂、张力加强剂、缓冲剂及防腐剂。
本文所采用局部施用法亦有关吸入或鼻内施用法。其等适宜呈干粉形式(单独、呈混合物，例如，与乳糖之干式掺合物，或与例如，磷脂形成混合组份粒子)，从干粉吸药器递送，或从加压容器、帮浦、喷瓶、雾化器或气雾器，使用或不使用合适推进剂下呈气溶胶喷雾递送。
本发明进一步提供包含本发明化合物作为活性成份之无水医药组成物及剂型，因为水可能促使某些化合物降解。
本发明无水医药组成物及剂型可使用无水或低水份含量之成份，及在低水份及低湿度条件下制备。可以制备及储存无水医药组成物，以保持其无水性质。因此，无水组成物系使用已知可阻止曝露到水份之材料包装，以便其等可容纳在合适之调配套组内。合适包装实例包括(但不限于)：气密式箔包、塑胶、单位剂量容器(例如，小瓶)、泡壳包、及长条包。
本发明进一步提供一种医药组成物及剂型，其包含一或多种可以降低作为活性成份之本发明化合物之降解速率之制剂。此等制剂在本文中称为「安定剂」，包括(但不限于)抗氧化剂，如抗坏血酸、pH缓冲剂、或盐缓冲剂等等。
本发明医药活性化合物可依据制药上习知之方法制成投与患者(包括人类及其他哺乳动物)之药剂。
使用根据本发明化合物及/或组成物治疗疾病病症之化合物投药量及剂量疗程系依各种不同因素而定，包括个体之年龄、体重、性别及医学病症、疾病型态、疾病严重性、投药途径与频率、及所采用之特定化合物。因此，剂量疗程可能有很大变化，但照例由标准方法决定。如前述，日剂量可以投药一次或可分成2、3、4或更多次投药。
基于医疗目的，本发明活性化合物通常与适合指定投药途径之一或多种佐剂、赋形剂或载剂组合。若经口投药时，化合物可与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸类之纤维素酯类、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸或硫酸之钠盐及钙盐、明胶、金合欢胶、藻酸钠、聚乙烯吡咯啶酮、及/或聚乙烯醇混合，及接着压锭或囊封，以方便投药。此等胶囊或锭剂可包含控制释放之调配物，因为可以让活性化合物匀散在羟基丙基甲基纤维素中。
以皮肤状况为例，其较佳系在患部施加局部用之本发明化合物制剂，一天2至4次。适合局部投药之调配物包括适合渗透皮肤之液体或半液体制剂(例如，擦剂、洗液、油膏、乳霜、或糊剂)，及适合投药至眼睛、耳朵或鼻之滴剂。供局部投药之活性成份可占调配物之0.001％至10％w/w，例如，1％至2％重量比，但其可能占调配物高达10％w/w，但较佳不超过5％w/w，及更佳为0.1％至1％。
本发明化合物亦可采用穿皮式装置投药。较佳系利用贴布达成穿皮式投药，贴布系呈储积槽与多孔膜型或呈固体基质变化型。这两例之活性剂均从储积槽或微胶囊透过膜连续递送至与接受者之皮肤或粘膜接触之活性剂通透性胶粘剂中。若透过皮肤吸收活性剂，则以控制且预定之流速投与活性剂给接受者。以微胶囊为例，囊封剂亦具有作为膜之功能。本发明乳液之油相可由已知成份，依已知方式构成。
虽然该相可仅包含乳化剂，但其可能包含至少一种乳化剂与脂肪或油或脂肪与油二者之混合物。较佳地，包括亲水性乳化剂与亲脂性乳化剂共同作为安定剂。亦较佳系同时包括油与脂肪。总言之，乳化剂(群)使用或不使用安定剂(群)构成所谓的乳化蜡，及该蜡连同油与脂肪共同构成所谓的乳化油膏基质，形成乳霜调配物之油匀散相。适用于本发明调配物之本发明乳化剂及乳液安定剂包括Tween 60、Span 80、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸钠、二硬脂酸甘油酯单独或幷用蜡，或相关技艺上习知之其他材料。
依据要所需达成之美妆性质，来选择适合调配物之油类或脂肪，因为活性化合物在可能用于医药乳液调配物中之大多数油类中之溶解度极低。因此，乳霜较佳应为不油腻、不沾粘及可以洗除之产品，具有合适之坚实度，以避免从管子或其他容器中渗漏。可使用直链或分支链之单碱价-或二碱价烷基酯如二-异己二酸酯、硬脂酸异鲸蜡基酯、椰子脂肪酸之丙二醇酯、肉豆蔻酸异丙基酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙基酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己基酯或分支链酯之混合物。此等可以依所需性质单独使用或组合使用。
或者，可使用高熔点脂质，如白色软石蜡及/或液态石蜡或其他矿物油。
适合局部表面投药至眼睛之调配物亦包括滴眼液，其中活性成份已溶解或悬浮于合适载剂中，尤指活性成份之水性溶剂。
活性成份于此等调配物中之较佳浓度为0.5至20％，宜在0.5至10％，特别指约1.5％w/w。
供非经肠式投药之调配物可呈水性或非水性等渗无菌注射溶液或悬浮液型式。此等溶液及悬浮液可由无菌粉剂或粒剂，使用一或多种上述用于调配经口投药之载剂或稀释剂制备，或使用其他合适匀散剂或湿化剂及悬浮剂制备。化合物可以溶于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠、黄蓍胶、及/或各种不同缓冲剂中。其他佐剂及投药模式系医药技艺广泛已知者。活性成份亦可使用合适载剂(包括生理食盐水、右旋糖、或水，或使用环糊精(亦即Captisol)、共溶剂溶解法(亦即丙二醇)或胶束溶解法(亦即Tween 80))形成组成物，供注射投药。
无菌注射剂亦可为含于无毒之非经肠式可接受之稀释剂或溶剂中之无菌注射溶液或悬浮液，例如，呈1,3-丁二醇之溶液。可使用之可接受之媒剂及溶剂为水、林格氏溶液、及等渗性氯化钠溶液。此外，经常使用无菌之非挥发性油类作为溶剂或悬浮介质。基于此目的可以采用任何温和非挥发性油类，包括合成性单酸-或二酸甘油酯。此外，脂肪酸(如油酸)可用在注射制剂中。
供肺部投药之医药组成物可呈气溶胶型式投药或使用包含干粉气溶胶之吸药器投药。
供直肠投与药物之栓剂制法为混合药物与合适之无刺激性赋形剂如可可奶油及聚乙二醇，其等在常温呈固体，但在直肠温度即呈液态，因此将会在直肠中熔化及释放药物。
医药组成物可经过一般医药操作法，如杀菌，且/或包含常用之佐剂，如防腐剂、安定剂、湿化剂、乳化剂、缓冲剂等等。锭剂与丸剂可以另外使用肠溶性包衣制备。此等组成物亦可包含佐剂，如湿化剂、甜味剂、调味剂、及香料剂。本发明医药组成物包含本文所说明化学式之化合物。或其医药上可接受之盐；选自下列之额外制剂：激酶抑制剂(小分子、多肽、抗体等等)、免疫抑制剂、抗癌剂、抗病毒剂、消炎剂、抗真菌剂、抗生素、或抗血管过度增生之化合物；及任何医药上可接受之载剂、佐剂或媒剂。
另一种本发明组成物包含本文所说明化学式之化合物。或其医药上可接受之盐；及医药上可接受之载剂、佐剂或媒剂。此等组成物可视需要包含一或多种额外医疗剂，包括例如，激酶抑制剂(小分子、多肽、抗体等等)、免疫抑制剂、抗癌剂、抗病毒剂、消炎剂、抗真菌剂、抗生素、或抗血管过度增生之化合物。
术语「医药上可接受之载剂或佐剂」系指可本与本发明化合物共同投与患者之载剂或佐剂，及当投与足以递送医疗量之化合物时，不会破坏其药理活性，且无毒。本发明医药组成物可使用之医药上可接受之载剂、佐剂及媒剂包括(但不限于)离子交换剂、矾土、硬脂酸铝、卵磷脂、自行乳化药物递送系统(self emulsifying drug delivery systems)(SEDDS)(如d-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸盐)、用于医药剂型之界面活性剂(如Tweens或其他类似之聚合递送母质)、血清蛋白质(如人类血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物性脂肪酸之部份甘油酯混合物、水、盐类或电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐类、胶体硅石、三硅酸镁、聚乙烯吡咯啶酮、基于纤维素之物质、聚乙二醇、羧基甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡类、聚乙二醇-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。亦宜使用环糊精，如u-、P-、及y-环糊精，或其化学修饰衍生物，如羟基烷基环糊精，包括2-及3-羟基丙基-环糊精，或其他可溶性衍生物，以加强递送本文所说明化学式之化合物。
医药组成物可呈任何口服可接受之剂型经口投药，包括(但不限于)胶囊、锭剂、乳液及水性悬浮液、匀散液及溶液。以口服用锭剂为例，常用之载剂包括乳糖及玉米淀粉。通常亦添加润滑剂，如硬脂酸镁。呈胶囊型式经口投药时，适用之稀释剂包括乳糖及干燥玉米淀粉。当经口投与水性悬浮液及/或乳液时，活性成份可以悬浮或溶解于油相中，与乳化剂及/或悬浮剂组合。
若需要时，可添加某些甜味剂、调味剂及/或着色剂。医药组成物可包括利用脂质体或微囊封技术之调配物。其各种不同实例系相关技艺已知者。
医药组成物可利用鼻气溶胶或吸入法投药。此等组成物系依据医药调配物技艺习知之技术制备，幷可于生理食盐水中，使用苯甲醇或其他合适防腐剂、加强生体可用率之促进吸收剂，氟碳化物、及/或其他溶解剂或匀散剂制成溶液，其实例亦系相关技艺习知者。
9.治疗套组
本发明一项态样系有关一种方便且有效进行根据本发明方法及用途之套组。通常，医药包装物或套组包含一个或多个容器，内部填充本发明医药组成物之一或多种成份。此等套组尤其适于递送口服用固体剂型，如锭剂或胶囊。此等套组较佳包括许多单位剂量，且亦可包括一张卡片，让剂量依其计画使用顺序排列。若需要时，可提供帮助记忆的方式，例如，以数字、字母、或其他标记或插入日历，依治疗计画标示投与剂量之日期。可视需要在此等容器加上由管理医药产品之制造、用法或贩售的政府机关规定的说明书形式，该说明书反映该机关已核准供人类投药之制造、用法或贩售。
下列代表性实例包含在各种不同具体例及其等效物上配合操作本发明之重要的额外资讯、范例及指南。此等实例希望协助说明本发明，幷无意且不应构成限制本发明。的确，除了彼等本文所示及说明者外，彼等习此相关技艺者在审查本案时，即可了解本发明各种不同修饰及其许多其他具体例，包括下列实例及本文所摘录科学与专利文献之参考文献。
所摘录参考文献之内容已以引用之方式幷入本文，以助于说明相关技艺。
此外，针对本发明目的，化学元素系依据CAS版之Handbook of Chemistry andPhysics，第75版内页的元素周期表说明。此外，一般有机化学原理及特定官能基部份体及反应性均说明于「Organic Chemistry」,Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999，及「Organic Chemistry,」Morrison&Boyd(第3版)，此二者之完整内容已以引用之方式并入本文。
10.合成反应方案
本发明化合物可由习此相关技艺者依据相关技艺认可之技术及制程制备。更明确言之，本发明化合物可依下文所示反应方案、方法及实例制备。习此相关技艺者咸了解，下列反应方案的个别步骤均可以变化，产生本发明化合物。试剂及起始物很容易由习此相关技艺者取得。除非另有明确说明，否则所有取代基均如前述定义。
实例
下列为说明书中所采用之缩写及其等之定义：
EtOAc：乙酸乙酯
DCM：二氯甲烷
ACN：乙腈
THF：四氢呋喃
DMSO：二甲亚砜
MeOH：甲醇
EtOH：乙醇
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DMA：N,N-二甲基乙酰胺
DMF DMA：N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛
NCS：N-氯琥珀酰亚胺
NBS：N-溴琥珀酰亚胺
NIS：N-碘琥珀酰亚胺
Pd-C：碳载钯
LDA：二异丙基胺化锂
TFA：三氟乙酸
PTSA：对甲苯磺酸
DIBAL-H：二异丁基铝氢化物
LAH：氢化锂铝
Py：吡啶
DPPA：二苯基磷酰基叠氮化物
CDI：1,1-羰基二咪唑
TEA：三乙基胺
DIPEA：N,N-异丙基乙基胺
DMAP：4-(二甲基胺基)吡啶
EDCI：N-(3-二甲基胺基丙基)-N-乙基碳化二亚胺盐酸盐
HATU：(1-[双(二甲基胺基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑幷[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
HOBT：1-羟基苯幷三唑
TfOH：三氟甲烷磺酸
dppf：1,1-二茂络铁二基-双(二苯基膦)
DAST：(二乙基胺基)硫三氟化物
Pd2(dba)3：参(二亚苯甲基丙酮)二钯(0)
Boc：第三丁氧基羰基
Ac：乙酰基
TMSI：三甲基硅烷基碘化物
TBAI：四丁基铵碘化物
PPh3：三苯基膦
dba：二亚苯甲基丙酮
BINAP：2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘
MsCl：甲烷磺酰氯
TsCl：甲苯磺酰氯
DMAP：4-二甲基胺基吡啶
LiHMDS：双(三甲基硅基)胺化锂
NaHMDS：双(三甲基硅基)胺化钠
DMS：二甲基硫醚
DME：二甲氧基乙烷
DCE：二氯乙烷
NMR：核磁共振
LC-MS：液相层析法-质谱
ESI-MS：电喷洒电离化-质谱
GCMS：气相层析法-质谱
TLC：薄层层析法
TCR：T细胞受体
BCR：B细胞受体
CARD：凋亡蛋白酶(caspase)活化及募集功能域
mM：毫莫耳浓度
μM：微莫耳浓度
mL：毫升
ng：奈克
nM：奈莫耳浓度
nm：奈米
IC50：一半最大抑制浓度
OD：光密度
A.生物实例
生物实例1 HPK1生化分析法
本实例使用ADP-GLOTM激酶分析法量测有潜力的HPK1抑制剂化合物对HPK1激酶活性之影响。
ADP-GLOTM激酶分析法(Promega Corp.,Madison,WI)量测激酶反应所形成之ADP。依据制造商，激酶分析法中形成之ADP首先转化成ATP，其接着用于在萤光素酶反应中产生光。发光度与激酶活性具相关性。下文说明例示性实验设定，但个别分析法中可能有些微调整。
材料与仪器
1.试剂：
Figure BDA0003506712340001191
2.仪器&供应商：
Figure BDA0003506712340001201
3.盘设定
化合物从10μM(最高浓度)连续稀释3倍至0.508nM(最低浓度)。阳性对照组为10μM参考物+酵素+受质。阴性对照组为1％DMSO+酵素+受质。
4.制程
1.缓冲剂制备
40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT
缓冲剂储液
Figure BDA0003506712340001202
Figure BDA0003506712340001211
1M MgCl<sub>2</sub>，95.21g/mol
添加4.7605g至50mL H<sub>2</sub>O中
添加20mL 1M Tris及10mL 1M MgCl2至470mL ddH2O中，得到缓冲剂储液，储存于室温。
2.制备新鲜1*分析缓冲剂
试剂 [储液] [最终] 倍数 添加(mL)
DTT(mM) 10 0.05 200 0.015
BSA(mg/mL) 100 0.1 1000 0.003
缓冲剂储液 3
3.化合物制备
1)取10μL 10mM各化合物储液，与90μL DMSO混合，稀释化合物至1mM。
2)接着使用BRAVO稀释化合物3倍制成10种剂量(从5μL稀释至10μL)。最高化合物浓度为1mM(100×)，DMSO浓度为100％。
3)利用ECHO，取100nL各稀释化合物样本移至384孔盘(Corning-4512)
4)分析盘于1,500rpm离心1分钟。
4.制备2×ATP-MBP混合物：20μM ATP，0.2μg/μL MBP含于激酶缓冲剂(最终浓度：10μM ATP，0.1μg/μL MBP)
Figure BDA0003506712340001221
5.使用分析缓冲剂制备2×HPK1操作溶液HPK1最终浓度为0.6ng/μL。高效力之化合物则使用较低浓度之HPK1(0.26ng/μL-0.065ng/μL)。
6.添加5μL/孔之2×HPK1操作溶液，于1,500rpm离心1分钟。
7.添加5μL/孔之2×ATP-受质，于1,500rpm离心1分钟。
8.于25℃培养1小时(或针对高效力化合物则为6小时)。
9.添加5μL/孔ADP-GLOTM试剂中止激酶反应，并在1小时后消耗未用完的ATP。于1,500rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
10.添加10μL激酶检测试剂，使ADP转化成ATP。于1,500rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
11.于Envision判读仪(384-CTG)记录发光讯号。
5.数据分析
依据及相对于包含在各分析盘内之高对照组与低对照组中之讯号，计算各化合物浓度之抑制百分比(％)。高对照组孔作为0％抑制性，及未包含任何化合物但仅包含DMSO(最终浓度＝0.5％)之低对照组孔则作为100％抑制性。以试验化合物之浓度及抑制性％数值作图，并采用三参数对数剂量反应公式决定达50％抑制性时所需之化合物浓度(IC50)。评估各实验中参考物肽/化合物之终点值(IC50)，作为品质控制量测值。若终点值在期望值的3倍数内，则该实验视为可以接受。
生物实例2 PKC-θ生化分析法
本实例采用ADP-GLOTM激酶分析法量测有潜力的HPK1抑制剂化合物对PKC-θ激酶活性之影响。下文说明例示性实验设定，但个别分析法中可能有些微调整。
材料与仪器
1.试剂：
Figure BDA0003506712340001231
2.仪器&供应商：
仪器 来源 目录编号
96-孔V型底盘 Greiner 651201
384孔盘 Corning 4512
LDV盘 Labcyte LP0200
Bravo Agilent -
Envision PerkinElmer -
纯水系统 Millipore Milli-Q参考系统 -
Bravo 10μL滴管尖 Axygen VT-384-10uL-R
Bravo 30μL滴管尖 Axygen VT-384-31uL-R
手动单管吸管 RAININ -
多管式电子吸管 Thermo/RAININ -
3.盘设定
化合物从10μM(最高浓度)连续稀释3倍至0.508nM(最低浓度)。阳性对照组为10μM参考物+酵素+受质。阴性对照组为1％DMSO+酵素+受质。
4.制程
1.缓冲剂制备
40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT
缓冲剂储液
1M Tris，PH7.5，121.14g/mol
添加6.057g至50mL H<sub>2</sub>O中，调整PH至7.5
1M MgCl<sub>2</sub>，95.21g/mol
添加4.7605g至50mL H<sub>2</sub>O
添加20mL 1M Tris及10mL 1M MgCl2至470mL ddH2O中，得到缓冲剂储液，及存放在室温。
2.制备新鲜1*分析缓冲剂
Figure BDA0003506712340001251
3.化合物制备
1)取10μL 10mM各化合物储液，与90μL DMSO混合，稀释化合物至1mM。
2)接着使用BRAVO稀释化合物3倍制成10种剂量(从5μL稀释至10μL)。最高化合物浓度为1mM(100×)，DMSO浓度为100％。
3)利用ECHO，取50nL各稀释化合物样本移至384孔盘(Corning-4512)。
4)分析盘于于1,500rpm离心1分钟。
4.于激酶缓冲剂中制备2×酵素操作溶液：
Figure BDA0003506712340001261
5.制备2×ATP-次混合物：
Figure BDA0003506712340001262
6.添加2.5μL/孔之2×酵素操作溶液，于1,500rpm离心1分钟。
7.添加2.5μL/孔之2×ATP-受质，于1,500rpm离心1分钟。
8.于25℃培养60min。
9.添加5μL/孔之ADP-GLOTM试剂中止激酶反应，并在1小时后消耗未用完的ATP。于1,500rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
10.添加10μL激酶检测试剂，使ADP转化成ATP。于1,500rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
11.于Envision判读仪(384-USL)记录发光讯号。
5.数据分析
依据及相对于包含在各分析盘内之高对照组与低对照组中之讯号，计算各化合物浓度之抑制百分比(％)。高对照组孔作为0％抑制性，及未包含任何化合物但仅包含DMSO(最终浓度＝0.5％)之低对照组孔则作为100％抑制性。以试验化合物之浓度与抑制％数值作图，并采用三参数对数剂量反应公式决定达50％抑制性时所需之化合物浓度(IC50)。评估各实验中参考物肽/化合物之终点值(IC50)，作为品质控制量测值。若终点值在期望值的3倍数内，则该实验视为可以接受。
生物实例3 TBK1生化分析法
本实例采用ADP-GLOTM激酶分析法量测有潜力的HPK1抑制剂化合物对TBK1激酶活性之影响，下文说明例示性实验设定，但个别分析法中可能有些微调整。
材料与仪器
1.试剂：
Figure BDA0003506712340001271
2.仪器&供应商：
仪器 来源 目录编号
96-孔V型底盘 Greiner 651201
384孔盘 Corning 4512
LDV盘 labcyte LP0200
Bravo Agilent -
Envision PerkinElmer -
纯水系统 Millipore Milli-Q参考系统 -
Bravo 10μL滴管尖 Axygen VT-384-10uL-R
Bravo 30μL滴管尖 Axygen VT-384-31uL-R
手动单管吸管 RAININ -
多管式电子吸管 Thermo/RAININ -
3.盘设定
参见上文。
4.制程
1.缓冲剂制备
40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT
缓冲剂储液
1M Tris，PH7.5，121.14g/mol
添加6.057g至50mL H<sub>2</sub>O中，调整PH至7.5
1M MgCl<sub>2</sub>，95.21g/mol
添加4.7605g至50mL H<sub>2</sub>O中
添加20mL 1M Tris及10mL 1M MgCl2至470mL ddH2O中，得到缓冲剂储液，及存放在RT(室温)。
2.制备新鲜1*分析缓冲剂
Figure BDA0003506712340001291
3.化合物制备
1)取10μL 10mM各化合物储液与90μL DMSO混合，稀释化合物至1mM。
2)接着使用BRAVO稀释化合物3倍制成10种剂量(从5μL稀释至10μL)。最高化合物浓度为1mM(100×)，DMSO浓度为100％。
3)利用ECHO取50nL各稀释化合物样本移至384孔盘(Corning-4512)。
4)分析盘于1,500rpm离心1分钟。
4.于激酶缓冲剂中制备2×酵素操作溶液：
Figure BDA0003506712340001292
5.制备2×ATP-次混合物：
Figure BDA0003506712340001301
6.添加2.5μL/孔之2×酵素操作溶液，于1,500rpm离心1分钟。
7.添加2.5μL/孔之2×ATP-受质，于1,500rpm离心1分钟。
8.于25℃培养60min。
9.添加5μL/孔之ADP-GLOTM试剂中止激酶反应，并在1小时后消耗未用完的ATP。于1,500rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
10.添加10μL激酶检测试剂，使ADP转化成ATP。于1,500rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
11.于Envision判读仪(384-USL)记录发光讯号。
5.数据分析
依据及相对于包含在各分析盘内之高对照组与低对照组中之讯号，计算各化合物浓度之抑制百分比(％)。高对照组孔作为0％抑制性，及未包含任何化合物但仅包含DMSO(最终浓度＝0.5％)之低对照组孔则作为100％抑制性。以试验化合物之浓度与抑制％数值作图，并采用三参数对数剂量反应公式决定达50％抑制性时所需之化合物浓度(IC50)。评估各实验中参考物肽/化合物之终点值(IC50)，作为品质控制量测值。若终点值在期望值的3倍数内，则该实验视为可以接受。
生物实例4 JAK3生化分析法
本实例采用ADP-GLO激酶分析法量测有潜力的HPK1抑制剂化合物对JAK3激酶活性之影响。下文说明例示性实验设定，但个别分析法中可能有些微调整。
材料与仪器
1.试剂：
Figure BDA0003506712340001311
2.仪器&供应商：
Figure BDA0003506712340001321
3.制程
1.制备JAK3激酶缓冲剂
新鲜添加DTT及BSA至缓冲剂中(最终浓度：40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT)。
Figure BDA0003506712340001322
Figure BDA0003506712340001331
2.化合物制备
试验化合物：取5μL 10mM化合物储液至45μL DMSO中混合，稀释化合物至1mM。化合物溶液接着连续稀释3倍制成10种剂量。最高化合物浓度为1mM(100×)，DMSO浓度为100％。
利用ECHO，从10种剂量之稀释化合物各取50nL加至384孔分析盘(Corning#4512)中。
阳性对照组：利用ECHO，取50nL 1mM参考物化合物加至384孔分析盘(Corning#4512)。
阴性对照组：取50nL DMSO移至384-孔分析盘中，作为阴性对照组。
分析盘于1,500rpm离心1分钟。
3.依据下列程序，利用ECHO转移化合物：
参考化合物与试验化合物1-15：从10μM连续稀释3倍至0.508nM(10种剂量)；阴性对照组为0.78ng JAK3、4μM ATP&0.2μg/μL poly、1％DMSO；阳性对照组为最高剂量之参考物化合物、0.78ng JAK3、0.2μg/μL Poly(E4Y1)、4μMATP、1％DMSO。
4.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2×JAK3操作溶液，于1,500rpm离心1分钟。
5.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2×ATP-Poly(E4Y1)操作混合物，于1,500rpm离心1分钟。
6.分析盘于25℃培养60min。
7.利用BRAVO添加5μL/孔之ADP-GLOTM试剂中止激酶反应，并在1小时后消耗未用完的ATP。于1,500rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
8.利用BRAVO添加10μL激酶检测试剂，使ADP转化成ATP。于1,500rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
9.于Envision判读仪(384-USL)记录发光讯号。
10.使用XL-fit处理数据。抑制性％＝[1-(试验孔-阴性对照组)/(阳性对照组-阴性对照组)]*100％。
5.数据分析
依据及相对于包含在各分析盘内之阴性对照组与阳性对照组中之讯号，计算各化合物浓度之抑制百分比(％)。阴性对照组孔作为0％抑制性，及阳性对照组孔则作为100％抑制性。以试验化合物之浓度与抑制％数值作图，并采用三参数对数剂量反应公式决定达50％抑制性时所需之化合物浓度(IC50)。评估各实验中参考物肽/化合物之终点值(IC50)，作为品质控制量测值。若终点值在期望值的3倍数内，则该实验视为可以接受。
生物实例5 ZAP70生化分析法
本实例采用ADP-GLOTM激酶分析法量测有潜力的HPK1抑制剂化合物对ZAP70激酶活性之影响。下文说明例示性实验设定，但个别分析法中可能有些微调整。
材料及仪器
1.试剂：
Figure BDA0003506712340001351
2.仪器&供应商：
Figure BDA0003506712340001361
3.制程
1.ZAP70激酶缓冲剂制备：
新鲜添加DTT及BSA至缓冲剂中(最终浓度：40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT，2mM MnCl2)。
Figure BDA0003506712340001371
2.化合物制备：
试验化合物：取5μL 10mM化合物储液至45μL DMSO中混合，稀释化合物至1mM。化合物溶液接着稀释3倍制成10种剂量。最高化合物浓度为1mM(100×)，DMSO浓度为100％。
利用ECHO，取50nL化合物溶液移至384孔分析盘(Corning#4512)中。
阳性对照组：利用ECHO，取50nL 1mM星孢菌素(staurosporine)移至384孔分析盘中作为阳性对照组。
阴性对照组：取50nL DMSO移至384孔分析盘中，作为阴性对照组。分析盘于1,500rpm离心1分钟
3.依据下列程序，利用ECHO转移化合物：
星孢菌素与试验化合物1-15：从10μM连续稀释3倍至0.508nM(10种剂量)；阴性对照组为6.25ng ZAP70、10μM ATP&0.4μg/μL poly、1％DMSO；阳性对照组为10μM星孢菌素、6.25ng ZAP70、10μM ATP&0.4μg/μL poly、1％DMSO。
4.制备2×ATP-Poly(E4Y1)混合物：20μM ATP、0.8μg/μL poly(E4Y1)含于激酶缓冲剂(最终浓度：10μM ATP、0.4μg/μL poly(E4Y1)。
5.制备2×ZAP70操作溶液：(2.5ng/μL)含于激酶缓冲剂中(最终浓度为1.25ng/μL)。
6.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2×ZAP70操作溶液，于1,500rpm离心1分钟。
7.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2×ATP-Poly(E4Y1)操作混合物，于1,500rpm离心1分钟。
8.分析盘于25℃培养60min。
9.利用BRAVO添加5μL/孔之ADP-GLOTM试剂中止激酶反应，并在1小时后消耗未用完的ATP。于1,500rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
10.利用BRAVO添加10μL激酶检测试剂，使ADP转化成ATP。于1,500rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
11.于Envision判读仪(384-USL)记录发光讯号。
12.使用XL-fit处理数据。抑制性％＝[1-(试验孔-阴性对照组)/(阳性对照组-阴性对照组)]*100％。
5.数据分析
依据及相对于包含在各分析盘内之阴性对照组与阳性对照组中之讯号，计算各化合物浓度之抑制百分比(％)。阴性对照组孔作为0％抑制性，及阳性对照组孔则作为100％抑制性。以试验化合物之浓度与抑制％数值作图，并采用三参数对数剂量反应公式决定达50％抑制性时所需之化合物浓度(IC50)。评估各实验中参考物肽/化合物之终点值(IC50)，作为品质控制量测值。若终点值在期望值的3倍数内，则该实验视为可以接受。
生物实例6 LCK生化分析法
本实例采用ADP-GLO激酶分析法量测有潜力的HPK1抑制剂化合物对Lck激酶活性之影响。下文说明例示性实验设定，但个别分析法中可能有些微调整。
材料及仪器
1.试剂：
Figure BDA0003506712340001391
2.仪器&供应商：
Figure BDA0003506712340001401
3.制程
1.LCK激酶缓冲剂制备：
新鲜添加DTT及BSA至缓冲剂中(最终浓度：40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT，2mM MnCl2)。
Figure BDA0003506712340001411
2.化合物制备：
试验化合物：取5μL 10mM化合物储液于45μL DMSO中混合，先稀释化合物至1mM。化合物溶液接着连续稀释3倍制成10种剂量。最高化合物浓度为1mM(100×)，DMSO浓度为100％。
阳性对照组：取3μL之10mM星孢菌素(staurosporine)储液于97μL DMSO中混合，稀释成300μM。
采用BRAVO，取50nL化合物溶液及300μM星孢菌素移至384-孔分析盘(Corning#4512)。
阴性对照组：取50nL DMSO移至384-孔分析盘中作为阴性对照组。分析盘于1,500rpm离心1分钟。
3.依据以下程序，利用ECHO转移化合物：
星孢菌素与试验化合物1-15：从10μM连续稀释3-倍至0.508nM(10种剂量)；阴性对照组为7ng LCK、20μM ATP&0.4μg/μL poly、1％DMSO；阳性对照组为3μM星孢菌素、7ng LCK、20μM ATP&0.4μg/μL poly、1％DMSO。
4.制备2×ATP-Poly(E4Y1)混合物：40μM ATP、0.8μg/μL poly(E4Y1)含于激酶缓冲剂(最终浓度：20μM ATP、0.4μg/μL poly(E4Y1))。
5.制备2×LCK操作溶液：(2.8ng/μL)含于激酶缓冲剂中(最终浓度为1.4ng/μL)。
6.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2×LCK操作溶液，于1,000rpm离心1分钟。
7.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2×ATP-Poly(E4Y1)操作混合物，于1,000rpm离心1分钟。
8.分析盘于25℃培养60min。
9.利用BRAVO添加5μL/孔之ADP-GLOTM试剂中止激酶反应，并在1小时后消耗未用完的ATP。于1,000rpm离心1分钟。于25℃培养40min。
10.利用BRAVO添加10μL激酶检测试剂，使ADP转化成ATP。于1,000rpm离心1分钟。于25℃培养30min。
11.于Envision判读仪(384-USL)记录发光讯号。
12.采用XL-fit处理数据。抑制性％＝(阴性对照组-试验孔)/(阴性对照组-阳性对照组)×100％。
4.数据分析
依据及相对于包含在各分析盘内之阴性对照组与阳性对照组中之讯号，计算各化合物浓度之抑制百分比(％)。阴性对照组孔作为0％抑制性，及阳性对照组孔则作为100％抑制性。以试验化合物之浓度与抑制％数值作图，并采用三参数对数剂量反应公式决定达50％抑制性时所需之化合物浓度(IC50)。评估各实验中参考物肽/化合物之终点值(IC50)，作为品质控制量测值。若终点值在期望值的3倍数内，则该实验视为可以接受。
生物实例7 MAP4K3蛋白质激酶分析法
本实例提供量测蛋白质激酶MAP4K3对肽受质之磷酸化之分析法。
简言之，取MAP4K3、其受质、及辅因子(ATP及Mg2+)于微量分析盘之孔中组合，幷于25℃培养5小时。培养结束时，添加含EDTA之缓冲剂中止反应。分开受质与产物，并采用来自Caliper Life Sciences之以微量流体为主之LabChip 3000 Drug Discovery System进行电泳法定量。
针对此分析法，MAP4K3受质为FAM-GAGRLGRDKYKTLRQIRQ-NH2(FAM为羧基萤光素)。肽受质藉由毛细管电泳之纯度较佳为>98％。
典型分析设定及条件提供于下文。
1.在384孔盘之孔中添加5μL 2×酵素缓冲剂(或对照物)。
2.添加100nL 100×化合物。若需要时，酵素及化合物可在此时预先培养。
3.添加5μL 2×受质缓冲剂。
4.盘于25℃培养5小时。
5.添加40μL 1.25×中止缓冲剂中止反应。
6.使用下表提供之数值，于Caliper
Figure BDA0003506712340001431
3000 Drug Discovery System作业。
12个吸液晶片之分离条件
初始延迟吸液时间 50sec
样本缓冲剂后吸液时间 40sec
染剂缓冲剂后吸液时间 40sec
样本吸液时间 0.2sec
最终延迟吸液时间 120sec
染剂吸液时间 0.2sec
压力 -2psi
下游电压 -3000伏特
上游电压 -800伏特
7.架好盘，开始进行电泳，使用蓝色雷射(480nm)为激发光及使用绿色CCD(520nm)进行检测(CCD2)。
依下列反应条件运转上述分析法：共5小时；于25℃，在20mM 100％抑制剂EDTA之存在下进行。
最终分析反应混合物为：100mM HEPES，pH 7.5；0.1％BSA；0.01％Triton X-100；1mM DTT；5mM MgCl2、10μM正钒酸钠、10μMβ-甘油磷酸酯、20μM ATP；1％DMSO(来自化合物)；0.5μM FAM-GAGRLGRDKYKTLRQIRQ-NH2；0.5nM MAP4K3酵素。
应注意，MAP4K3之比活性随每批次变化，且酵素浓度可能必需调整，使受质转化成产物之产率为～10-20％。
使用LabChip 3000毛细管电泳仪器进行电泳法，分离存在于各样本中之受质及产物肽。当受质及产物肽分离时，观察到两个萤光波峰。以测定之受质与产物波峰之相对萤光强度变化为参数，反映酵素活性。采用HTS WELL Analyzer软体(Caliper Life Sciences)分析毛细管电泳图(RDA取得档案)。由总比值(PSR)：P/(S+P)决定各样本中之激酶活性，其中P为产物肽之波峰高度，及S为受质肽之波峰高度。
各化合物在各种不同浓度(12种化合物浓度，间隔3×稀释度)测定酵素活性。收集四次重复之阴性对照组样本(0％-没有抑制剂下之抑制性)及阳性对照组样本(100％-在20mM EDTA存在下之抑制性)，用于计算各化合物在各浓度下之抑制性％数值。
采用下列公式决定抑制性百分比(Pinh)：
Pinh＝(PSR0％-PSRinh)/(PSR0％-PSR100％)*100，其中PSRinh为在抑制剂之存在下之总比值，PSR0％为没有抑制剂时之平均产物总比值，及PSR100％为100％-抑制性对照样本之平均产物总比值。
采用4参数S型剂量-反应模式，使用XLfit 4软体(IBDS)，代入抑制曲线(Pinh相对于抑制剂浓度)，决定抑制剂之IC50值。
该分析法中采用之某些材料与缓冲剂列于下表中以供参考。
Figure BDA0003506712340001451
Figure BDA0003506712340001461
生物实例8人类Pan T细胞所释放IL2&IFN-γ之化合物效力研究
本实例为一种使用pan T细胞及ELISA分析模式来决定化合物对IL2&IFN-γ之释放影响之分析方法。
材料及仪器
1.试剂：
Figure BDA0003506712340001471
Figure BDA0003506712340001481
2.仪器&供应商：
Figure BDA0003506712340001482
Figure BDA0003506712340001491
3.制程
Pan T单离及试剂制备制程(第0天)：
1.细胞生长培养基：
RPMI1640：ATCC，目录编号30-2001
10％FBS：Gibco，目录编号10099141
1％Pen-Strep：Gibco，目录编号15140122
1％非必需胺基：Gibco，目录编号11140050
β-巯基乙醇：Gibco，目录编号21985023
2.Pan T单离缓冲剂制备：
使用
Figure BDA0003506712340001492
润洗溶液稀释
Figure BDA0003506712340001493
BSA储液溶液(#130-091-376)20次，制备包含磷酸盐缓冲生理食盐水(PBS)(pH 7.2)、0.5％牛血清白蛋白(BSA)、及2mMEDTA之溶液。缓冲剂保持在4℃。缓冲剂在使用前先脱气，因为气泡会阻滞管柱。
内容物 [储液] [最终浓度] 倍数 体积(mL)
BSA 10％ 0.5％ 20 5mL
EDTA 0.5M 2mM 250 0.4mL
PBS，pH7.2 1× 1× 1 94.6mL
总计 100mL
3.冷冻之PBMC之解冻
1)培养基于37℃水浴中预热。
2)细胞于37℃水浴中快速解冻。
3)添加预温热之培养基至15mL试管中。将细胞移至管中。
4)于300×g离心8min.(离心提高0，下降0)。
5)使用润洗缓冲剂洗涤PBMC。
6)PBMC于300×g离心8min，洗涤2次(离心提高9，下降1)。
7)细胞使用Pan T细胞单离缓冲剂再次悬浮，及计算细胞数。
4.Pan T细胞单离法：
使用微珠混合液染色细胞
1)准备细胞及决定细胞数。使用70μm细胞过滤器过滤细胞。
2)细胞集结块再次悬浮，每107个总细胞数含于40μL缓冲剂中。
3)每107个总细胞数添加10μL Pan T细胞生物素-抗体混合液。
4)混合孔及于冰箱(冰)中培养10分钟。
5)每107个总细胞数添加30μL缓冲剂。
6)每107个总细胞数添加20μL Pan T细胞微珠混合液。
7)混合孔及于冰箱(冰)中培养15分钟。
8)接着进行磁性细胞分离法。
注：a.动作快，保持细胞低温，及使用预冷溶液(2-8℃)。b.针对达成107总计细胞数之磁性标记体积。当使用较少细胞操作时，使用指示之相同体积。c.当使用较高细胞数操作时，随之放大所有试剂体积及总体积。d.为了最优性能，重点在于磁性标记之前先取得单一细胞悬浮液。
随后之手动细胞分离法：
1)取LS管柱置入合适MACS分离器之磁场中。其细节可参见各MACS管柱数据表。
2)使用3mL缓冲剂润洗，准备管柱。
3)加载细胞悬浮液至管柱。收集流出液，代表已富集之T细胞。
4)使用5mL缓冲剂洗涤管柱。收集已通过之无标记细胞，代表已富集之T细胞。
提醒：一定要等到管柱储槽已排空才可以继续进行下一个步骤。
5.Pan T细胞FACS:
1)分别取出50μL PBMC及Pan T细胞加至FACS管中。
2)细胞与抗-人类CD3/CD4/CD8抗体(1μL/1μL/1μL/管)于4℃培养20min。未染色之对照组，由细胞与FACS染色缓冲剂培养。
3)使用冷的染色缓冲剂(含0.2％BSA及1mM EDTA之PBS)洗涤2次。
4)操作FACS。拦截CD3+、CD3+CD4+、及CD3+CD8+族群，分析其百分比。
5)若Pan T细胞之纯度高于90％时，则使用适当体积之细胞培养基稀释细胞悬浮液至1百万个细胞/mL。
6)取细胞悬浮液分配至无菌之可弃式储槽中备用。
制备化合物及抗-人类CD3/CD28之制程(第0天)：
化合物制备
化合物连续稀释液(起始分析盘1000×)
化合物溶于100％DMSO，至浓度为10mM。然后连续稀释3倍制成8个点之剂量。
制备4×化合物剂量(中间分析盘：Corning-3599)：
于培养基中制备4×化合物溶液。上下吸取。ZPE对照组系于培养基中制备0.4％DMSO(4×)。HPE对照组系于培养基中制备0.4μM RGT003-026(4×)。
2.抗-人类CD3(储液浓度6.76mg/ml)：存放在4℃。
1)使用PBS稀释抗-人类CD3至最终浓度0.5μg/mL。
2)除了阳性及阴性对照组孔以外，在各孔中添加50μL/孔之CD3。阳性及阴性对照组孔没有CD3/CD28刺激。
3)于37℃之5％CO2培养箱中培养2小时。
4)从细胞培养盘中排除50μL抗体溶液。每次使用200μL无菌PBS润洗各孔2次。
3.抗-人类CD28(4×)制备
使用培养基稀释抗体，从储液浓度11.07mg/mL稀释成2μg/mL(4×)。
4.PMA/离子霉素制备(4×)
1)于培养基中稀释PMA至400ng/mL(8×)。
2)于培养基中稀释离子霉素至8μM(8×)。
3)混合等体积之PMA与离子霉素，得到4×混合物。
刺激细胞之制程(第0天)
1.取1×105个细胞/孔(100μL/孔)之细胞悬浮液移至96孔盘(细胞分析盘：greiner-655180)。
2.试验化合物组及ZPE/HPE对照组系添加50μL/孔之抗-人类CD28。阳性或阴性对照组则分别添加50μL/孔之4x PMA/离子霉素溶液或培养基。
3.依据下文出示之分析盘地图，添加50μL/孔之化合物至细胞分析盘中。ZPE/HPE对照组系分别添加50μL/孔之0.4％DMSO溶液或0.4μM RGT003-026(4×)。阳性或阴性对照组，则添加50μL/孔之培养基。
4.分析盘培养48小时。
IL-2&IFN-γELISA之制程：
第1天：涂布盘：
1)每孔使用100μL之IL-2&IFN-γ捕捉抗体(于涂布缓冲剂中稀释)涂布微量孔。建议之抗体涂布稀释液参见批次特定说明书/分析证明书。密封分析盘，于4℃培养一夜。
第2天：收集样本：
1)于37℃与5％CO2培养箱中培养48小时后，细胞盘于1,000rpm离心10min。收集100μL/孔上清液后，进行IL-2及IFN-γELISA分析法。上清液存放在-80℃，次日进行IL-2及IFN-γELISA分析法。上清液可能需要稀释30至40倍，以确保分析不会超过IL-2及IFN-γ标准曲线之线性范围。
2)添加新的培养基(包含抗-CD28、P/I及化合物)至分析盘中，100μL/孔。
3)盘地图：
第3-4天：IL-2&IFN-γELISA：
1)吸清孔及使用≥300μL/孔之洗涤缓冲剂洗涤3次。洗涤最后一次后，反转分析盘，贴在吸墨纸，以排除任何残留之缓冲剂。
2)使用≥200μL/孔分析稀释剂阻断分析盘。于室温培养1小时。
3)如步骤2吸清/洗涤。
4)于分析稀释剂中制备标准物。
制备IL-2标准储液：
添加1mL去离子水至小瓶中(235ng/瓶)，储液浓度为235ng/mL。分装标准储液成10μL/瓶，于-80℃冷冻。
制备IFN-γ标准储液：
添加1mL去离子水至小瓶中(145ng/瓶)，储液浓度为145ng/mL。分装标准储液成10μL/瓶，于-80℃冷冻
制作IL-2/IFNγ之标准曲线：
稀释标准样本至最高浓度500pg/mL。然后连续稀释2倍制成10个点剂量(包括空白对照组)。取不同浓度之标准物移至ELISA盘中，100μL/孔。
1)吸取100μL之各标准物、样本、及对照组至适当孔中。密封分析盘及于室温培养2小时。
2)如步骤2吸清/洗涤，但共洗涤5次。
3)添加100μL操作检测剂(检测抗体+SAv-HRP试剂)至各孔中。密封分析盘及于室温培养1小时。
4)如步骤2吸清/洗涤，但共洗涤7次。注：在这个最后洗涤步骤中，每次洗涤均让孔浸在洗涤缓冲剂中30秒至1分钟。
5)添加100μL受质溶液至各孔中。盘(没有盘密封盖)于室温黑暗中培养30分钟。
6)添加50μL中止反应溶液至各孔中。.
7)在中止反应30分钟内，在450nm下读取吸光度。OD450 nm校正至570nm之OD值。
4.数据分析
生化分析法中，依据及相对于包含在各分析盘内之HPE及ZPE孔之讯号，计算各化合物浓度之抑制百分比(％)。HPE孔视为100％效力，及不包含任何化合物但包含DMSO(最终浓度＝0.1％)之ZPE孔则视为0％效力。
细胞分析法中，在各化合物浓度下计算IL-2或IFN-γ相对于DMSO对照组之反应(未出示数据)。参见表2。EC2x代表产生200％反应(2倍)时之化合物浓度，及采用GraphPadPrism计算EC50。
得自实例化合物之生化与细胞数据列于下表1及2。
Figure BDA0003506712340001561
Figure BDA0003506712340001571
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Figure BDA0003506712340001901
Figure BDA0003506712340001911
B.合成实例
仪器说明
NMR光谱系采用Varian Mercury光度计，于400MHz(1H)、376MHz(19F)或75MHz(13C)下操作。样本所采用之溶剂已于各化合物之实验制程中明确说明。化学位移系以每百万分之一(ppm，δ单位)表示。偶合常数系以赫兹单位(Hz)表示。以裂峰型态说明表观之多峰，幷以s(单峰)、d(双峰)、t(参峰)、q(肆峰)、quint(五峰)、m(多峰)、br(宽峰)表示。
LCMS采用下列系统：Agilent 6120(二元梯度模组帮浦(Binary Gradient Modulepump))，Xbridge分析管柱C18，5μm，4.6×50mm，25℃，5μL注射体积，2mL/min，依据下列时程使用乙腈于0.1％乙酸铵水溶液中之梯度：
Figure BDA0003506712340001921
实验制程：所有反应均在无水氮蒙气下进行，除非另有说明。TLC板系采用紫外光目视检测。快速层析法系指使用玻璃管柱之硅胶管柱层析法(40-60μm)。或者，使用BiotageSP1或Biotage Isolera系统进行自动化层析法，于220或254nm进行u.v.检测，及采用Biotage正相或逆相硅石卡管。其中细节可参见相关之实验制程。
一般方法及制法
包括彼等通式(I-0)、(I-1)、(I-2)、(I)、(II)、(II-1)、(II-2)、或(II-2’)之化合物、中间物及明确实例系透过本文说明之合成法制备。实验制程中，除了明确述及之酸、碱、试剂、偶合试剂、溶剂等等，对诸如温度、溶液浓度、溶剂体积、施加之微波条件，反应历时或其组合等反应条件之修饰均计画成为本发明之一部份，可使用替代之合适酸、碱、试剂、偶合试剂、溶剂等等，且均包括在本发明范围内。所有可能之几何异构物、立体异构物、盐型均计画包括在本发明范围内。
嘧啶化合物之一般反应图及合成制程：
Figure BDA0003506712340001931
条件A1：于0℃，在含Int.E(或自商品取得之试剂)(1.0eq.)之DMF溶液中添加氢化钠(60％匀散于矿物油中，1.2eq.)，混合物于0℃搅拌30分钟。于0℃，在上述反应混合物中添加5-R1取代之2,4-二氯嘧啶(1.0-1.3eq.)，所得混合物接着在室温搅拌1小时，冷却至0℃，及使用冰-H2O中止反应。纯化粗产物，产生4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶。
条件A2：在含5-R1取代之2,4-二氯嘧啶(1.0-1.5eq.)之DMF溶液中添加碳酸钾(2.0eq.)及Int.E(或自商品取得之试剂)(1.0eq.)。混合物于80℃搅拌一夜，冷却至室温，加H2O稀释，及使用EA萃取。纯化粗产物，产生4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶。
条件A3：在含Int.E(或自商品取得之试剂)(1.0eq.)之正丁醇溶液中依序添加5-R1取代之2,4-二氯嘧啶(1.0-1.5eq.)及DIPEA(1.0-2.0eq.)。反应混合物于100℃搅拌18小时，加水稀释，及使用EA萃取。纯化粗产物以提供4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶。
条件B1：在含Int.W(1.0-1.4eq.)之2-甲氧基乙醇溶液中添加4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶(1.0eq.)及HCl之EtOH溶液(3.0eq.)。所得混合物于120℃搅拌20小时及真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法及/或制备性-HPLC纯化。
条件B2：在含4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶(1.0eq.)及Int.W(1-1.3eq.)之异丙醇溶液中添加三氟乙酸(1.0-3.0eq.)。混合物于N2及100℃搅拌20小时，冷却至室温，使用饱和NaHCO3水溶液碱化至pH～8，使用DCM萃取。有机相使用盐水洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法及/或制备性-HPLC纯化。
条件B3：在含4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶(1.0eq.)及Int.W(1-1.3eq.)之异丙醇溶液中添加TsOH.H2O(1.0-1.2eq.)。混合物于100℃搅拌一夜，冷却至室温，使用饱和NaHCO3水溶液碱化pH～8，使用DCM萃取。有机相使用盐水洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残经硅胶快速管柱层析法及/或制备性-HPLC纯化。
条件B4：在含4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶(1.0eq.)之二
Figure BDA0003506712340001941
烷溶液中添加Int.W(1.0-1.2eq.)、Pd2(dba)3(0.2eq.)、Xantphos(0.2eq.)、及碳酸钾(2.0eq.)。混合物于100℃及N2下搅拌12小时，冷却至室温，及过滤。残质经硅胶快速管柱层析法及/或制备性-HPLC纯化。
依特定实例而定，经4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶在条件A与B之间另外转化，并在条件B之后进一步转化。
中间物
Int.W1
Figure BDA0003506712340001951
6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
Figure BDA0003506712340001952
步骤1：在含2-(3-甲氧基苯基)乙烷胺(20.0g,132.27mmol,19.23mL)之HCl水溶液(1N,192mL,192mmol)混合物中添加甲醛水溶液(37％w.t.,41.64g,529.08mmol)。混合物于60℃搅拌1小时，冷却至0℃，及滴加0℃之50％NaOH水溶液(17.44g,218mmol)碱化。所得混合物于室温搅拌一夜，及过滤。取滤液浓缩，产生双(6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)甲烷之白色固体(23g,100％产率)。
步骤2：于0℃，在含双(6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)甲烷(28g,82.73mmol)之i-PrOH(200mL)悬浮液中滴加浓HCl(15.20g,182.01mmol,15.3mL)，混合物于室温搅拌18小时。添加MTBE(70mL)至上述混合物中，悬浮液于室温再搅拌4小时。过滤后，滤饼使用MTBE/i-PrOH混合物(100mL,1/1v/v)洗涤及干燥以提供6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐之白色固体，其悬浮于DCM(300mL)中。在混合物中添加饱和NaHCO3水溶液(500mL)，及混合物于室温搅拌2小时。分离后，水层使用DCM萃取(50mL x4)。合幷之有机层经无水Na2SO4脱水，过滤，及浓缩以提供6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉之黄色油(10g,75％产率)。LC-MS(ESI)m/z:164[M+H]+。
步骤3：于室温，在含6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.63g,9.99mmol)之MeOH(30mL)溶液中添加甲醛水溶液(37％w/w,4.8g,59.92mmol,1.67mL)。混合物于室温搅拌15分钟，及冷却至0℃，在其中分批添加NaBH4(1.13g,29.96mmol)。混合物于室温搅拌3小时，使用冰-水(10mL)中止反应，及使用DCM萃取(20mL x 5)。有机层经无水硫酸钠脱水，过滤，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝10/1v/v)以提供6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉之黄色油(1.7g,96％产率)。LC-MS(ESI)m/z:178[M+H]+。
步骤4：于0℃，在浓硫酸之预冷却(0℃)溶液(4mL)中依序添加6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(2g,11.28mmol)及硝酸胍(1.17g,9.59mmol)。所得混合物于0℃搅拌30分钟，使用冰-水(20mL)中止反应，使用NaOH水溶液(4N)碱化至pH 10-11，及使用DCM萃取(50mL x 4)。合幷之有机层经无水Na2SO4脱水，过滤，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE 100％v/v，PE/EA＝1/1v/v，EA 100％v/v，及接着DCM/MeOH＝20/1，v/v)以提供6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉之黄色固体(0.9g,36％产率)。LC-MS(ESI)m/z:223[M+H]+。
步骤5：在含6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(4.2g,14.40mmol)之EA(32mL)、H2O(16mL)、及EtOH(144mL)溶液中添加Fe粉(5.5g,93.99mmol)及氯化铵(793.96mg,13.08mmol)。混合物于60℃搅拌48小时，冷却至室温，及过滤。使用甲醇洗涤滤饼(30mL x 3)，及取滤液浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝20/1至10/1v/v)以提供6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺盐酸盐之黄色固体(4.5g,100％产率)。LC-MS(ESI)m/z:193[M+H]+。
另一种合成法：
Figure BDA0003506712340001971
步骤1：于0℃，在含三乙基胺(13.38g,132.27mmol,18.44mL)、2-(3-甲氧基苯基)乙烷胺(10g,66.13mmol)及DMAP(807.96mg,6.61mmol)之DCM(100mL)溶液中慢慢添加BOC2O(15.88g,72.75mmol,16.70mL)。混合物接着在室温搅拌16小时，使用冰-水(200mL)稀释及使用EtOAc萃取(3x200mL)。合幷之有机相使用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤，及真空浓缩。残质经快速层析法纯化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1)以提供(3-甲氧基苯乙基)胺甲酸第三丁基酯(14.6g,79.06％产率，90％纯度)之无色液体。LC-MS(ESI)m/z:196[M+H-56]+。
步骤2：于-78℃，在含(3-甲氧基苯乙基)胺甲酸第三丁基酯(7g,27.85mmol)及2-氯吡啶(4.74g,41.78mmol,3.92mL)之CH2Cl2(50mL)溶液中添加Tf2O(8.64g,30.64mmol,5.15mL)之CH2Cl2(5mL)溶液。20分钟后，滴加BH3.Et2O(19.77g,139.26mmol)至上述溶液中。反应混合物随后回升至室温，搅拌2小时，及小心使用饱和NaHCO3溶液中止反应。所得混合物使用CH2Cl2萃取(3x100mL)。合幷之有机层使用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤，及真空浓缩。残质经快速层析法纯化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯/甲醇＝5/1/0至10/10/1)以提供6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(3.4g,68.89％产率)之灰白色固体。LC-MS(ESI)m/z:178[M+H]+。
步骤3：于-20℃，在含6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(3.8g,21.44mmol,9.62mL)之浓H2SO4(50mL)溶液中滴加HNO3(2.16g,22.29mmol,65％纯度)。混合物于-20℃～-25℃搅拌3小时，倒至冰水(300mL)中。水层使用二氯甲烷萃取(3x200mL)。合幷之有机层真空浓缩，及残质经快速管柱层析法纯化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯/甲醇＝10/1/0～10/10/1)以提供6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(2.02g,40.78％产率)。LC-MS(ESI)m/z:223[M+H]+。
步骤4：在含6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(2.02g,9.09mmol)之THF(200mL)溶液中添加1M BH3/THF(45.46mmol,45.5mL)。混合物于回流下搅拌20小时，及小心使用甲醇(30mL)中止反应。所得溶液真空浓缩。残质于2N HCl(50mL)中，于80℃加热3小时，冷却，使用氢氧化铵水溶液碱化，及使用二氯甲烷萃取(3x100mL)。合幷之有机层经无水硫酸钠脱水，过滤，及浓缩以提供6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.89g,100.00％产率)。LC-MS(ESI)m/z:209[M+H]+。
步骤5：于室温，在含6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.89g,9.08mmol,9.62mL)之甲醇(30mL)溶液中添加甲醛(1.64g,54.46mmol,1.51mL)。混合物于室温搅拌15分钟及冷却至0℃。然后分批添加NaBH4(1.03g,27.23mmol)至上述混合物中。所得混合物于室温搅拌3小时，使用冰-水(10mL)中止反应，及使用DCM萃取(20mL x 5)。合幷之有机层经无水硫酸钠脱水，过滤，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝10/1,v/v)以提供6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.4g,69.40％产率)之黄色油。LC-MS(ESI)m/z:223[M+H]+。
步骤6：在含6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.3g,5.85mmol)之EtOAc(2mL)、H2O(1mL)、及EtOH(10mL)溶液中添加Fe(2.19g,39.19mmol)及氯化铵(284.74mg,5.32mmol)。混合物于60℃搅拌16小时，冷却至室温，及过滤。使用甲醇洗涤滤饼(30mL x 3)，及取滤液浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝20/1至10/1v/v)以提供6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺盐酸盐之黄色固体(0.85g,75.6％产率)。LC-MS(ESI)m/z:193[M+H]+。
Int.W2
Figure BDA0003506712340001991
2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
Figure BDA0003506712340002001
步骤1：在含1,2,3,4-四氢异喹啉(4.8g,36.04mmol)之浓硫酸(20mL)冰冷溶液中分批添加硝酸钾(4.01g,47.21mmol)，保持温度低于5℃。反应混合物于室温搅拌一夜，倒至冰(100g)中，使用NH3.H2O调整至pH～9，及使用CH2Cl2萃取(50mL x 3)。合幷之有机层经无水硫酸钠脱水，过滤，及浓缩。残质于甲醇中结晶以提供7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐之黄色固体(4.2g,54％产率)。LC-MS(ESI)m/:179[M+H]+。
步骤2：在含7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐(5.0g,23.29mmol)之无水1,2-二氯乙烷(200mL)搅拌混合物中添加福马林(37％甲醛水溶液，2.0mL,25.86mmol)，然后添加三乙酰氧基硼氢化物(19.81g,104.82mmol)。反应混合物于室温激烈搅拌4小时，及浓缩。残质使用EtOAc(400mL)稀释，慢慢使用饱和NaHCO3水溶液(400mL)中止反应，及搅拌30分钟。混合物使用EA萃取(100mL x4)。有机层经无水硫酸钠脱水，过滤及浓缩以提供2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉之褐色固体(3.8g,85％产率)。LC-MS(ESI)m/:193[M+H]+。
步骤3：取含2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(3.8g,19.77mmol)、Fe(5.52g,98.85mmol)、NH4Cl(15.86g,296.54mmol)之EA(10mL)、EtOH(100mL)、及H2O(20mL)悬浮液于70℃激烈搅拌24小时。过滤后，滤饼使用EA/EtOH混合溶剂(100mL,10/1,v/v)洗涤，及取滤液浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(MeOH之DCM溶液，0％至25％v/v)以提供2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺之黄色固体(1.84g,57％产率)。LC-MS(ESI)m/z:163[M+H]+。
Int.W3
Figure BDA0003506712340002011
6-氯-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
Figure BDA0003506712340002012
步骤1：于室温，在含6-氯异喹啉(2.0g,12.22mmol)之MeCN(15mL)溶液中添加MeI(5.21g,36.67mmol)。混合物于50℃之密封管中搅拌2天。冷却至室温后，过滤收集固体，干燥以提供6-氯-2-甲基异喹啉-2-鎓碘化物之黄色固体(3.2g,86％产率)。LC-MS(ESI)m/z:178[M]+。
步骤2：于0℃，在含6-氯-2-甲基异喹啉-2-鎓碘化物(200mg,0.65mmol)之MeOH(8mL)溶液中分批添加NaBH4(127.06mg,3.36mmol)。混合物于室温搅拌3小时，使用饱和NaHCO3水溶液调整至pH～9，及使用DCM萃取(30mL x 3)。有机层经无水硫酸钠脱水，过滤及浓缩。残质经制备性-TLC纯化(DCM/MeOH＝20/1,v/v)以提供6-氯-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉之黄色固体(90mg,44％产率)。LC-MS(ESI)m/z:182[M+H]+。
步骤3&4：依Int.W1步骤4&5之相同制程，使用6-氯-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉替代6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉。LC-MS(ESI)m/z:197[M+H]+。
Int.W4
Figure BDA0003506712340002021
2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺
Figure BDA0003506712340002022
步骤1：取含1-甲基-3,5-二硝基-吡啶-2-酮(4.5g,22.60mmol)及1-甲基呱啶-4-酮(2.81g,24.86mmol)之NH3/MeOH溶液(7N,50mL)于密封管中，在50℃搅拌一夜。冷却至室温后，混合物浓缩，及残质分溶于DCM(100mL)与饱和NaHCO3水溶液(50mL)之间。分层，及水层使用DCM萃取(50mL x 2)。合幷之有机层经无水Na2SO4脱水，过滤，及浓缩以提供6-甲基-3-硝基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶之红色固体(2.84g,65％产率)。LC-MS(ESI)m/z:194[M+H]+。
步骤2：在含6-甲基-3-硝基-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶(1.3g,6.73mmol)之乙醇(35mL)及THF(35mL)溶液中添加10％Pd/C(817.20mg)，混合物于H2(1atm)下搅拌2小时。过滤后，滤饼使用EtOH(5mL x 2)洗涤，及取滤液浓缩以提供6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺之黄色固体(1.1g,100％产率)。LC-MS(ESI)m/z:164[M+H]+。
步骤3：于室温，在含6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺(1.2g,7.35mmol)及AcONa(1.21g,14.70mmol)之乙酸(25mL)溶液中添加溴(1.17g,7.35mmol)，混合物于室温搅拌1小时。混合物于DCM(100mL)及水(30mL)中稀释，使用NaHCO3慢慢调整至pH～9。有机层经无水Na2SO4脱水，过滤，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝20/1,v/v)以提供2-溴-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺之黄色固体(570mg,32％)。LC-MS(ESI)m/z:242[M+H]。
步骤4：在含2-溴-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺(250mg,1.03mmol)、碳酸铯(672.86mg,2.07mmol)及MeONa(83.67mg,1.55mmol)之MeOH(2mL)混合物中添加CuI(19.67mg,103.26umol)及1,10-邻二氮菲单水合物(40.94mg,206.51umol)。混合物于N2保护之微波条件下，在120℃搅拌2小时。冷却至室温后，残质经制备性-TLC纯化(DCM/MeOH＝15/1,v/v)以提供2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺之黄色固体(74mg,37％产率)。LC-MS(ESI)m/z:194[M+H]+。
Int.W5
Figure BDA0003506712340002031
2-异丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
Figure BDA0003506712340002032
步骤1：于室温，在含6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉(340mg,2.08mmol)之MeOH(10mL)混合物中滴加丙酮(725.93mg,12.50mmol,917.74uL)，混合物于室温搅拌30分钟。然后于0℃，分批添加NaBH(AcO)3(6.25mmol)至上述混合物中，所得混合物于室温搅拌3小时，于0℃使用饱和NaHCO3水溶液(10mL)中止反应，及浓缩。残质使用DCM萃取(50mL x 2)，合幷之有机层使用盐水(20mL x 2)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝20/1,v/v)以提供2-异丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉之白色固体(150mg,35％产率)。LC-MS(ESI)m/z:206[M+H]+。
步骤2：依Int.W1步骤4之相同制程，使用2-异丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉替代6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉。LC-MS(ESI)m/z:251[M+H]+。
步骤3：取含2-异丙基-6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(200mg,799.06umol)及10％碳载钯(30mg,799.06umol)之EA(6mL)混合物于室温及H2(1atm)下搅拌16小时，及过滤。取滤液浓缩，残质经制备性-TLC纯化(DCM/MeOH＝10/1,v/v)以提供2-异丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺之白色固体(50mg,28％产率)。LC-MS(ESI)m/z:221[M+H]+。
Int.W6
Figure BDA0003506712340002041
7-胺基-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸第三丁基酯
Figure BDA0003506712340002042
步骤1：于-10℃，在含浓H2SO4(5mL)之冷溶液中添加6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.0g,1.84mmol)。于-10℃，分批添加硝酸胍(758mg,6.13mmol)至上述混合物中。混合物于-10℃搅拌30分钟，倒至冷水(20mL)中，使用NaOH水溶液(4N)调整至pH～8，及使用EA萃取(40mL x 4)。合幷之有机层经无水硫酸钠脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM 100％v/v，及接着DCM/MeOH＝10/1，v/v)以提供6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉之黄色固体(200mg,16％产率)。LC-MS(ESI)m/z:209[M+H]+。
步骤2：取含6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(100mg,0.48mmol)、Boc2O(157mg,0.72mmol)、及Et3N(97mg,0.96mmol)之DCM(5mL)混合物于室温搅拌4小时，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM 100％v/v，及接着DCM/MeOH＝10/1，v/v)以提供6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸第三丁基酯之黄色油(150mg,100％产率)。LC-MS(ESI)m/z:209[M-100+1]+。
步骤3：取含6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸第三丁基酯(150mg,0.48mmol)及10％Pd/C(50mg)之EtOH(5mL)混合物于H2(1atm)及室温搅拌16小时，及过滤。取滤液浓缩，以提供7-胺基-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸第三丁基酯之黄色固体(110mg,81％产率)。LC-MS(ESI)m/z:223[M-55]+。
Int.W7
Figure BDA0003506712340002051
6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
Figure BDA0003506712340002061
步骤1：于0℃，在含6-氟-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-酮(900mg,5.45mmol)之H2SO4(9mL)溶液中分批添加硝酸钾(578.47mg,5.72mmol)。所得混合物于0℃搅拌2小时，及倒至冰-水中。有白色固体沉淀，过滤收集，及真空干燥以提供6-氟-7-硝基-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-酮(1.04g,86％产率)。LC-MS(ESI)m/z:211[M+H]+。
步骤2&3&4：依Int.W1之另一种之合成法之步骤4&5&6之相同制程，使用6-氟-7-硝基-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-酮替代6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-酮。LC-MS(ESI)m/z:181[M+H]+。
Int.W8
Figure BDA0003506712340002062
2-乙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
Figure BDA0003506712340002063
步骤1：在含6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(300mg,1.44mmol)之CH3CN(10mL)溶液中添加碘乙烷(224.72mg,1.44mmol,115.83uL)及K2CO3(796.52mg,5.76mmol)。反应混合物于20℃搅拌16小时，及分溶于乙酸乙酯(100mL)及水(100mL)之间。分离有机层，经无水硫酸镁脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(0-20％甲醇之二氯甲烷溶液，含氢氧化铵水溶液)以提供2-乙基-6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(136mg,40％产率)。LC-MS(ESI)m/z:237[M+H]+。
步骤2：依Int.W1之另一种之合成法之步骤6相同制程，使用2-乙基-6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉替代2-甲基-6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉。LC-MS(ESI)m/z:207[M+H]+。
Int.W9
Figure BDA0003506712340002071
6-甲氧基-2-甲基异吲哚啉-5-胺
Figure BDA0003506712340002072
步骤1：依Int.W7步骤1之相同制程，使用5-甲氧基异吲哚啉-1-酮替代6-氟-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮。LC-MS(ESI)m/z:209[M+H]+。
步骤2&3&4：依Int.W1之另一种之合成法之步骤4&5&6之相同制程，使用5-甲氧基-6-硝基异吲哚啉-1-酮替代6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-酮。LC-MS(ESI)m/z:179[M+H]+。
Int.W10
Figure BDA0003506712340002073
6-异丙氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
Figure BDA0003506712340002081
步骤1：在含6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(50mg,224.98umol)之水(5mL)溶液中添加1M溴化氢(1mL)。混合物于回流下搅拌16小时，使用饱和碳酸氢钠水溶液碱化至pH 8，及使用二氯甲烷/甲醇(v/v,10/1,20mL x 3)萃取。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供粗产物2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-醇(46.84mg,90％产率)。LC-MS(ESI)m/z:209[M+H]+。
步骤2：在含2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-醇(230mg,1.10mmol)及2-碘丙烷(187.78mg,1.10mmol,110.46uL)之DMF(2mL)溶液中添加碳酸钾(229.00mg,1.66mmol)。混合物于室温搅拌16小时，及使用盐水(10mL)稀释。分离水相，及使用乙酸乙酯萃取(20mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE:10～50％)以提供6-异丙氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(240mg,87％产率)。LC-MS(ESI)m/z:251[M+H]+。
步骤3：依Int.W1之另一种合成法之步骤6之相同制程，使用6-异丙氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉替代6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉5-甲氧基-6-硝基异吲哚啉-1-酮。LC-MS(ESI)m/z:221[M+H]+。
Int.W11
Figure BDA0003506712340002091
1-(7-胺基-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮
Figure BDA0003506712340002092
步骤1：于0℃，在含6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(908mg,4.14mmol)之二氯甲烷(15mL)溶液中添加三乙基胺(838.43mg,8.29mmol,1.15mL)，接着添加三氟乙酸酐(1.04g,4.97mmol,700.78uL)。反应混合物于室温搅拌3小时，使用饱和NaHCO3水溶液碱化至pH 8，及使用二氯甲烷萃取(10mL x 3)。合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供粗产物2,2,2-三氟-1-(6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮之黄色固体(1.26g,95％产率)。LC-MS(ESI)m/z:305[M+H]+。
步骤2：取含2,2,2-三氟-1-(6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(1.33g,4.14mmol)及10％碳载钯(400mg,3.76mmol)之甲醇(30mL)混合物于25℃与H2蒙气下搅拌16小时，及通过硅藻土(celite)过滤。使用甲醇洗涤滤饼(30mL x 3)，取滤液真空浓缩以提供1-(7-胺基-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮之淡黄色固体(1.14g,95％产率)。LC-MS(ESI)m/z:275[M+H]+。
Int.E1
Figure BDA0003506712340002093
(1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物
Figure BDA0003506712340002101
步骤1：于0℃，在含1H-吲哚(2.34g,19.97mmol)及KOH(1.34g,23.97mmol)之DMF(40mL)混合物中滴加含I2(5.08g,19.97mmol)之DMF(10mL)溶液。所得混合物于0℃搅拌30分钟，加冷水(200mL)稀释，再搅拌30分钟。过滤收集固体，使用H2O(30mL x 3)洗涤，及真空干燥以提供3-碘-1H-吲哚之黄色固体(2.58g,53％产率)。
步骤2：在含3-碘-1H-吲哚(2.4g,9.87mmol)之DCM(15mL)溶液中添加三乙基胺(3.00g,4.13mL,29.62mmol)、BocO(4.31g,19.75mmol)、及DMAP(120.64mg,0.99mmol)。混合物于室温搅拌1小时及真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝20/1,v/v)以提供3-碘-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之褐色油(4.6g,100％产率)。
步骤3:取3-碘吲哚-1-羧酸第三丁基酯(1.0g,2.91mmol)、二甲基膦氧化物(250.19mg,3.21mmol)、Pd(OAc)2(65.42mg,0.29mmol)、Xantphos(168.61mg,0.29mmol)、及K3PO4(680.40mg,3.21mmol)之DMF(8mL)混合物于N2保护之微波条件下，在80℃搅拌5小时。冷却至室温后，混合物浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM 100％v/v，及接着DCM/MeOH＝20/1v/v)以提供第3-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-1-羧酸三丁基酯之褐色油(1g,100％产率)。LC-MS(ESI)m/z:294[M+H]+。
步骤4：于0℃，在含3-(二甲基磷酰基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(1.0g,3.41mmol)之DCM(6mL)溶液中添加TFA(3mL)。混合物于室温搅拌一夜，及真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝20/1,v/v)以提供(1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物之白色固体(460mg,70％产率)。LC-MS(ESI)m/z:194[M+H]+。
Int.E2
Figure BDA0003506712340002111
N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
Figure BDA0003506712340002112
于0℃，在含1H-吲哚-3-羧酸(1.0g,6.21mmol)、HATU(4.72g,12.41mmol)、及二甲基胺盐酸盐(1.01g,12.41mmol)之DMF(15mL)溶液中滴加三乙基胺(2.51g,3.46mL,24.82mmol)。混合物于室温搅拌14小时，使用H2O(100mL)稀释，及使用乙酸乙酯萃取(100mLx 3)。合幷之有机层使用盐水(100mL x 5)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺之白色固体(650mg,56％产率)。LC-SM(ESI)m/z:189[M+H]+。
Int.E3
Figure BDA0003506712340002121
3-氟-1H-吲哚
Figure BDA0003506712340002122
步骤1：于0℃，在含3,3-二氟吲哚啉-2-酮(300mg,1.77mmol)之THF(5mL)溶液中滴加BH3/S(CH3)2(2M)(6.21mmol,3mL)。混合物于室温搅拌2小时，于0℃使用10％柠檬酸水溶液中止反应，及加水稀释。所得混合物使用乙酸乙酯萃取(50mL x 3)，及取有机相使用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供3-氟-1H-吲哚(220mg,91.78％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:136.1[M+H]+。
Int.E4
Figure BDA0003506712340002123
N,N-二甲基-1H-吲哚-2-羧酰胺
依Int.E2之相同制程，使用1H-吲哚-2-羧酸替代1H-吲哚-3-羧酸。LC-MS(ESI)m/z:189[M+H]+。
Int.E5
Figure BDA0003506712340002124
2,3-二氢咪唑幷[1,2-a]吡啶-5(1H)-酮
Figure BDA0003506712340002125
步骤1：取含2,6-二氟吡啶(2.3g,19.99mmol,1.81mL)及2-胺基乙醇(12.21g,199.86mmol,12.09mL)之乙醇(40mL)混合物于90℃搅拌16小时，加水(50mL)中止反应，及使用EtOAc萃取(3×100mL)。合幷之有机相使用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水及过滤，及真空浓缩。残质经快速层析法纯化(SiO2,乙酸乙酯100％)以提供2-((6-氟吡啶-2-基)胺基)乙烷-1-醇(3g,93.24％产率，97％纯度)之无色液体。LC-MS(ESI)m/z:157.2[M+H]+。
步骤2：取含2-((6-氟吡啶-2-基)胺基)乙烷-1-醇(500mg,3.20mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2,2,2-三氟乙酰基)酯(1.68g,8.00mmol,1.13mL)之MeCN(1mL)混合物于55℃，在密封管中搅拌16小时，及真空浓缩。残质未纯化即用于下一个步骤。
步骤3：取一份粗产物5-氟-2,3-二氢-1H-咪唑幷[1,2-a]吡啶-4-鎓(500mg,3.59mmol)溶于水(25mL)，及含于236.18uL水中之NaOH(503.05mg,12.58mmol)。混合物于室温搅拌30小时，使用浓HCl中和，及真空浓缩。所得固体悬浮于DCM中，通过硅藻土垫过滤，及使用EtOAc洗涤。合幷之有机相真空浓缩，及残质经硅胶层析法纯化(DCM/MeOH＝20/1)以提供2,3-二氢咪唑幷[1,2-a]吡啶-5(1H)-酮(100mg,10.22％产率，50％纯度)。LC-MS(ESI)m/z:137.1[M+H]+。
Int.E6
Figure BDA0003506712340002131
吲哚啉-3-基甲醇
Figure BDA0003506712340002141
步骤1：于-10℃，在含1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(1.75g,9.99mmol)之TFA(30mL)溶液中分批添加NaBH3CN(6.28g,99.90mmol)。然后于相同温度再搅拌混合物一小时，使用NaOH水溶液(10％,100mL)中止反应。所得混合物使用二氯甲烷萃取(3x100mL)。合幷之有机层经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供吲哚啉-3-羧酸甲基酯(0.54g,1.52mmol,50％纯度)。LC-MS(ESI)m/z:178[M+H]+。
步骤2：取含吲哚啉-3-羧酸甲基酯(0.2g,1.13mmol)之THF(10mL)溶液使用1.0MLiAlH4(94.24mg,2.48mmol)之THF溶液处理，及于回流下搅拌2小时。在混合物中小心添加甲醇(10mL)中止反应。所得溶液真空浓缩。所得残质经硅胶快速管柱层析法纯化(MeOH/DCM＝0～10％)以提供吲哚啉-3-基甲醇之无色油(90mg,53％产率)。LC-MS(ESI)m/z:150[M+H]+。
Int.E7
Figure BDA0003506712340002142
吲哚啉-3-基二甲基膦氧化物
Figure BDA0003506712340002143
步骤1：于0℃，在含吲哚(2g,17.07mmol)之THF(20mL)溶液中添加NaH(819.40mg,20.49mmol,60％矿物油中)。混合物于0℃搅拌30分钟，及添加苯磺酰氯(3.62g,20.49mmol)至上述混合物中。所得混合物于室温搅拌一小时，冷却至0℃，使用冰-水(100mL)中止反应。混合物使用乙酸乙酯萃取(3x50mL)，及合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝9/1)以提供1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚之无色油(3.8g,87％产率)。LC-MS(ESI)m/z:258[M+H]+。
步骤2：取含1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚(500mg,1.94mmol)及AgNO3(330.34mg,1.94mmol)之CH3CN(30mL)混合物于N2蒙气及室温搅拌2小时，接着添加二甲基膦氧化物(455.00mg,5.83mmol)。混合物于100℃搅拌16小时，及通过硅胶过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝10/1)以提供(1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物之黄色油(150mg,13％产率)。LC-MS(ESI)m/z:194[M+H]+。
步骤3：于-5℃，在含(1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物(175mg,905.88umol)之TFA(5mL)溶液中分批添加NaBH3CN(570.71mg,9.06mmol)。反应混合物于室温搅拌一夜，使用2NNaOH溶液调整至pH 9-10，及使用二氯甲烷/甲醇(10/1)稀释。水相使用二氯甲烷/甲醇(10/1,20mL x 3)萃取。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，产生吲哚啉-3-基二甲基膦氧化物之无色油(40mg,14％产率)。LC-MS(ESI)m/z:196[M+H]+。
Int.E8
Figure BDA0003506712340002151
3-(甲基磺酰基)-1H-吲哚
Figure BDA0003506712340002161
在含吲哚(1g,8.54mmol)之THF(20mL)溶液中添加2-甲基丙烷-2-醇钾(1.05g,9.39mmol)。反应混合物于25℃搅拌30分钟，接着依序添加三乙基甲硼烷(920.15mg,9.39mmol)及甲烷磺酰氯(1.08g,9.39mmol,726.77uL)。反应混合物于-15℃搅拌16小时，使用饱和氯化铵溶液(50mL)中止反应，及使用乙酸乙酯萃取(30mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝5/1)以提供3-甲基磺酰基-1H-吲哚之淡黄色固体(810mg,46％产率)。LC-MS(ESI)m/z:196[M+H]+。
Int.E9
Figure BDA0003506712340002162
3-(甲基磺酰基)吲哚啉
Figure BDA0003506712340002163
步骤1：于0℃，在含3-甲基磺酰基-1H-吲哚(546mg,2.8mmol)之THF(5mL)溶液中慢慢添加NaH(172mg,4.3mmol,60％矿物油中)。反应混合物于0℃搅拌30分钟，接着添加Boc2O(934mg,4.3mmol)。反应混合物于25℃搅拌16小时，使用饱和氯化铵溶液(10mL)中止反应，及使用乙酸乙酯萃取(10mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，残质经过硅胶管柱层析法纯化(PE/EA＝5/1)以提供3-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之黄色固体(530mg,64％产率)。LC-MS(ESI)m/z:296[M+H]+。
步骤2：在含3-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(530mg,1.70mmol)之二氯甲烷(14mL)及甲醇(52mL)搅拌溶液中慢慢添加镁(207.mg,8.52mmol)。反应混合物于25℃搅拌16小时，使用饱和氯化铵溶液(60mL)稀释，及使用二氯甲烷萃取(60mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质通过硅胶快速管柱层析法纯化(使用含10％至20％乙酸乙酯之石油醚溶离)以提供3-(甲基磺酰基)吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(260mg,49％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:298[M+H]+。
步骤3：于0℃，在含3-(甲基磺酰基)吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(260mg,0.831mmol)之二氯甲烷(4mL)溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(2mL)。所得溶液于25℃搅拌2小时及真空浓缩，产生粗产物3(-甲基磺酰基)吲哚啉，其未进一步纯化即使用。LC-MS(ESI)m/z:198[M+H]+。
Int.E10
Figure BDA0003506712340002171
4-甲氧基吲哚啉
Figure BDA0003506712340002172
在含4-甲氧基-1H-吲哚(500mg,3.40mmol)之AcOH(5mL)溶液中，以10分钟时间分批添加氰基硼氢化钠(895.00mg,13.59mmol)。混合物于室温搅拌30分钟，加水(40mL)稀释及真空浓缩。残质使用乙酸乙酯萃取(25mL x 3)。合幷之有机相使用饱和NaHCO3水溶液(50mL)及盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，产生粗产物4-甲氧基吲哚啉(500mg,79％产率)，其未进一步纯化立即使用。LC-MS(ESI)m/z:150[M+H]+。
Int.E11
Figure BDA0003506712340002181
3-((甲基磺酰基)甲基)-1H-吲哚
Figure BDA0003506712340002182
步骤1：在含1-(1H-吲哚-3-基)-N,N-二甲基甲胺(1g,5.74mmol)之水(15mL)悬浮液中添加20％甲硫醇钠之水溶液(402.25mg,5.74mmol,5mL)。反应混合物于105℃搅拌16小时，冷却至室温，使用氯甲烷萃取(50mL x 3)。有机相使用0.5M HCl水溶液(40mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)、及盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1)以提供3-((甲基硫)甲基)-1H-吲哚之白色固体(594mg,55％产率)。LC-MS(ESI)m/z:178[M+H]+。
步骤2：3-((甲基磺酰基)甲基)-1H-吲哚。在含3-((甲基硫)甲基)-1H-吲哚(250mg,1.34mmol)之甲醇(0.5mL)溶液中添加过硫酸氢钾复合盐(oxone)(904.90mg,1.47mmol)。反应混合物于25℃搅拌16小时，使用饱和碳酸氢钠水溶液碱化至pH 8，及使用乙酸乙酯萃取(10mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1)以提供3-(甲基磺酰基甲基)-1H-吲哚之白色固体(139mg,47％产率)。LC-MS(ESI)m/z:210[M+H]+。
Int.E12
Figure BDA0003506712340002191
5-(二氟甲基)吲哚啉
Figure BDA0003506712340002192
步骤1：取含DMAP(896.50mg,7.34mmol)、1H-吲哚-5-甲醛(986.30mg,6.79mmol)及二碳酸二-第三丁基酯(1.63g,7.47mmol)之THF(15mL)混合物于室温搅拌16小时，添加10mL水中止反应，及使用乙酸乙酯萃取(3x 50mL)。有机层经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供5-甲酰基-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(1.4g,84％产率)。LC-MS(ESI)m/z:246[M+H]+。
步骤2：于0℃，在含5-甲酰基-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(500mg,2.04mmol)之DCM(20mL)溶液中添加N-乙基-N-(三氟-硫烷基)乙烷胺(1.64g,10.19mmol,1.35mL)。然后于室温搅拌混合物16小时，使用饱和NaHCO3水溶液碱化至pH 8，及使用二氯甲烷萃取(50mLx 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE,1/9)以提供5-(二氟甲基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之白色固体(336mg,62％产率)。
步骤3：取含5-(二氟甲基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(200mg,748.30umol)及钯(79.63mg,748.30umol)之MeOH(5mL)混合物于25℃及N2蒙气下搅拌一小时，及过滤。取滤液真空浓缩，产生粗产物5-(二氟甲基)吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯之黄色油(200mg,99％产率)。
步骤4：取含5-(二氟甲基)吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(200mg,742.70umol)之HCl-EA(568.67mg,15.60mmol,710.84uL)溶液于0℃搅拌2小时，及真空浓缩，产生5-(二氟甲基)吲哚啉之白色固体(126.59mg,81％产率)。LC-MS(ESI)m/z:170[M+H]+。
Int.E13
Figure BDA0003506712340002201
6-(二氟甲基)吲哚啉
依Int.E12之相同制程，使用1H-吲哚-6-甲醛替代1H-吲哚-5-甲醛。LC-MS(ESI)m/z:170[M+H]+。
Int.E14
Figure BDA0003506712340002202
4-(二氟甲基)吲哚啉盐酸盐
依Int.E12之相同制程，使用1H-吲哚-4-甲醛替代1H-吲哚-5-甲醛。LC-MS(ESI)m/z:170[M+H]+。
Int.E15
Figure BDA0003506712340002203
((1H-吲哚-3-基)磺酰基)胺甲酸第三丁基酯
Figure BDA0003506712340002211
步骤1：于0℃，在含1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚(1g,3.89mmol)之无水CH3CN(10mL)溶液中小心添加氯磺酸(1.36g,11.66mmol,776.33uL)。然后让反应混合物历时4小时回升至室温，搅拌一夜，倒至冰水(50mL)中，及使用二氯甲烷萃取(30mL x 2)。合幷之有机层使用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL x 2)及盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-3-磺酰氯之白色固体(868mg,63％产率)。
步骤2：于0℃，在含1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-3-磺酰氯(800mg,2.25mmol)之CH2Cl2(16mL)溶液中慢慢添加NH3/MeOH(960.00mg,56.47mmol,8mL)。然后于室温搅拌混合物一夜，加水稀释(20mL)，及使用CH2Cl2萃取(20mL x 3)。合幷之有机层依序使用1M HCl(20mL)、水(20mL)及盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-3-磺酰胺之白色固体(639mg,84％产率)。LC-MS(ESI)m/z:359[M+Na]+。
步骤3：于0℃，在含1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-3-磺酰胺(1.03g,3.06mmol)之THF(10mL)溶液中添加NaH(612mg,15.31mmol,60％悬浮于矿物油中)。混合物于0℃搅拌30分钟，接着添加Boc2O(2.67g,12.25mmol)。所得混合物于室温搅拌16小时及倒至冰-水中。分离两相，水相使用二氯甲烷/甲醇萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝9/1)以提供((1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-3-基)磺酰基)胺甲酸第三丁基酯(438mg,31％产率)之灰白色固体。LC-MS(ESI)m/z:381[M+H-56]+。
步骤4：取含((1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-3-基)磺酰基)胺甲酸第三丁基酯(438mg,1.00mmol)及K2CO3(553.90mg,4.01mmol)之甲醇(8mL)及H2O(2mL)混合物于室温搅拌一夜，使用乙酸酸化至pH5，及分层。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经逆相层析法纯化(H2O/甲醇)以提供((1H-吲哚-3-基)磺酰基)胺甲酸第三丁基酯之白色固体(200mg,67％产率)。LC-MS(ESI)m/z:319[M+Na]+。
Int.E16
Figure BDA0003506712340002221
3-(3-((第三丁基二甲基硅烷基)氧基)氧杂环丁烷-3-基)-1H-吲哚
Figure BDA0003506712340002222
步骤1：在含1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚(2g,7.38mmol)之DCM(60mL)溶液中滴加溴(1.18g,7.38mmol,378.23uL)。该红色反应混合物接着在25℃搅拌4.5小时，倒至饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)中，及分层。有机层使用饱和硫代硫酸钠水溶液(50mL)、水(50mL)、及盐水(50mL)洗涤，经无水MgSO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(20％EA/PE)，产生3-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚之白色固体(1.5g,57％产率)。LC-MS(ESI)m/z:336[M+H]+。
步骤2：于-78℃，在含3-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚(200mg,0.595mmol)之THF(5mL)溶液中添加2.5M丁基锂(0.36mL,0.892mmol)。反应混合物于-78℃搅拌30分钟，接着于-78℃添加氧杂环丁烷-3-酮(85.74mg,1.19mmol,76.55uL)。于-78℃30分钟后，反应混合物于25℃搅拌16小时，倒至饱和氯化铵水溶液(30mL)中，及分层。有机层使用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(10％EA/PE)以提供3-(1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-3-基)氧杂环丁烷-3-醇之淡黄色固体(110mg,53％产率)。LC-MS(ESI)m/z:276[M+H]+。
步骤3：取含3-(1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-3-基)氧杂环丁烷-3-醇(383mg,1.16mmol)之2M NaOH溶液(5mL)及甲醇(5mL)混合溶剂之溶液于85℃搅拌16小时，加水(20mL)稀释，及分层。有机层使用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(10％-100％EA/PE)以提供3-(1H-吲哚-3-基)氧杂环丁烷-3-醇之淡黄色固体(182mg,79％产率)。LC-MS(ESI)m/z:190[M+H]+。
步骤4：于0℃，在含3-(1H-吲哚-3-基)氧杂环丁烷-3-醇(600mg,3.01mmol)之DMF(6mL)溶液中添加第三丁基氯二甲基硅烷(1.14g,7.53mmol,1.40mL)及咪唑(615.25mg,9.04mmol)。反应混合物于25℃搅拌16小时，加水(20mL)稀释，使用饱和碳酸氢钠水溶液碱化至pH 8，及使用乙酸乙酯萃取(10mL x 3)。有机层使用盐水(20mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经过硅胶快速管柱层析法纯化(10％-100％EA/PE)，产生3-(3-((第三丁基二甲基硅基)氧基)氧杂环丁烷-3-基)-1H-吲哚之淡黄色固体(890mg,92％产率)。LC-MS(ESI)m/z:304[M+H]+。
Int.E17
Figure BDA0003506712340002241
吲哚啉-3-羧酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002242
步骤1：于0℃，在含1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(5g,28.54mmol)之THF(50mL)溶液中慢慢添加NaH(1.71g,42.81mmol,60％矿物油中)。反应混合物于0℃搅拌30分钟，接着添加Boc2O(9.34g,42.81mmol)。反应混合物于25℃搅拌16小时，使用饱和氯化铵溶液(100mL)中止反应，及使用乙酸乙酯萃取(100mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝5/1)以提供1H-吲哚-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯之黄色固体(5.3g,64％产率)。LC-MS(ESI)m/z:276[M+H]+。
步骤2：在含1H-吲哚-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(2g,6.90mmol)之二氯甲烷(60mL)及甲醇(211mL)之搅拌溶液中慢慢添加镁(838.72mg,34.51mmol)。反应混合物于25℃搅拌16小时，使用饱和氯化铵溶液(100mL)稀释，及使用二氯甲烷萃取(100mL x3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE:10-20％)以提供吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯之淡黄色油(1.1g,55％产率)。LC-MS(ESI)m/z:222[M+H-56]+。
步骤3：在含吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(500mg,1.71mmol)之DCM(5mL)溶液中添加三氟乙酸(1.25mL)。所得混合物于室温搅拌2小时及真空浓缩。残质溶于DCM(100mL)及使用饱和NaHCO3水溶液洗涤(30mL x 3)。有机相经无水Na2SO4脱水及过滤。取滤液真空浓缩以提供吲哚啉-3-羧酸甲基酯(308mg,94％产率)，其未进一步纯化即使用。LC-MS(ESI)m/z:178[M+H]+。
Int.E18
Figure BDA0003506712340002251
3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002252
步骤1：于25℃，在含吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(320mg,1.15mmol)及碘甲烷(491.36mg,3.46mmol)之DMF(8mL)溶液中添加氢化钠(50.77mg,1.27mmol,60％矿物油中)。混合物于25℃搅拌2小时，使用EA(200mL)稀释，及接着使用水(20mL x 3)及盐水(30mL)洗涤。取有机层经无水Na2SO4脱水及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE:15％)以提供3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯之淡黄色油(244mg,70％产率)。LC-MS(ESI)m/z:236[M+H-56]+。
步骤2：于25℃，在含3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(240mg,0.824mmol)之二氯甲烷(4mL)溶液中添加三氟乙酸(1mL)。混合物于室温搅拌2小时及真空浓缩以提供粗产物3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯，未进一步纯化。LC-MS(ESI)m/z:192[M+H]+。
Int.E19
Figure BDA0003506712340002261
3-甲基吲哚啉-3-羧酰胺
Figure BDA0003506712340002262
步骤1：在含3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(500mg,1.63mmol)之THF(10mL)溶液中滴加LiOH水溶液(2N,5mL)。反应混合物于25℃搅拌16小时，使用0℃之1M HCl溶液(10mL)调整至pH～4，及真空浓缩。残质使用EA萃取(10mL x 3)。有机相使用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供1-第三丁氧基羰基-3-甲基-吲哚啉-3-羧酸(452mg)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:278[M+H]+。
步骤2：在含1-第三丁氧基羰基-3-甲基-吲哚啉-3-羧酸(452mg,1.55mmol)之DMF(5mL)溶液中依序添加氯化铵(414.1mg,7.74mmol)、DIEA(600.4mg,4.65mmol)及HATU(765.4mg,2.01mmol)。反应混合物于25℃搅拌16小时，使用饱和氯化铵溶液(15mL)稀释，及使用EA萃取(10mL x 3)。有机相使用盐水(15mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1)以提供3-胺甲酰基-3-甲基-吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯之白色固体(420mg,93％产率)。LC-MS(ESI)m/z:277[M+H]+。
步骤3：依Int.18步骤3之相同制程，使用3-胺甲酰基-3-甲基-吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯替代3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯。LC-MS(ESI)m/z:177[M+H]+。
Int.E20
Figure BDA0003506712340002271
N,3-二甲基吲哚啉-3-羧酰胺
依Int.E19步骤2&3之相同制程，使用甲基胺盐酸盐替代氯化铵。LC-MS(ESI)m/z:191[M+H]+。
Int.E21
Figure BDA0003506712340002272
(3甲基吲哚啉-3-基)甲醇
Figure BDA0003506712340002273
于室温，在含3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(150mg,0.515mmol)之THF(10mL)溶液中添加1.0M LiAlH4之THF溶液(1mL,1.13mmol)。反应混合物于回流下搅拌2小时，及于室温小心添加甲醇(10mL)中止反应。所得混合物真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(MeOH/DCM＝0～10％)，产生(3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇(60mg,71％产率)。LC-MS(ESI)m/z:164[M+H]+。
Int.E22
Figure BDA0003506712340002281
5-氟吲哚啉-3-羧酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002282
步骤1&2：依Int.E17步骤1&2之相同制程，使用5-氟-1H-吲哚-3-羧酸酯替代1H-吲哚-3-羧酸酯。LC-MS(ESI)m/z:318[M+Na]+。
步骤3：取含5-氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(176mg,0.596mmol)之HCl/EA(4M,3mL)溶液于室温搅拌1小时，及真空浓缩，得到5-氟吲哚啉-3-羧酸甲基酯(110mg,94.6％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:196[M+H]+。
Int.E23
Figure BDA0003506712340002283
6-氟吲哚啉-3-羧酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002284
步骤1：在含6-氟-1H-吲哚-3-羧酸(600mg,3.35mmol)之乙醇(50mL)溶液中添加浓硫酸(0.1mL)。反应混合物于85℃搅拌16小时，冷却至室温，及使用饱和碳酸氢钠水溶液中和，及使用EA萃取(10mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1)，产生6-氟-1H-吲哚-3-羧酸乙基酯(646mg,94.9％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:208[M+H]+。
步骤2&3：依Int.E17之步骤1&2之相同制程，使用6-氟-1H-吲哚-3-羧酸乙基酯替代1H-吲哚-3-羧酸乙基酯(使用MeOH转酯化)。LC-MS(ESI)m/z:296[M+H]+。
步骤4：依Int.E22之步骤3之相同制程，使用6-氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-乙基酯替代5-氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯。LC-MS(ESI)m/z:196[M+H]+。
Int.E24
Figure BDA0003506712340002291
5-甲氧基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
依Int.E17之相同制程，使用5-甲氧基-1H-吲哚-3-羧酸酯替代1H-吲哚-3-羧酸酯。LC-MS(ESI)m/z:208[M+H]+。
Int.E25
Figure BDA0003506712340002292
6-甲氧基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
依Int.E23之相同制程，使用6-甲氧基-1H-吲哚-3-羧酸替代6-氟-1H-吲哚-3-羧酸。LC-MS(ESI)m/z:208[M+H]+。
Int.E26
Figure BDA0003506712340002301
4-甲氧基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002302
步骤1：于0℃，在含4-甲氧基-1H-吲哚(1.4g,9.51mmol)及吡啶(3.76g,47.56mmol,3.85mL)之DCM(10mL)溶液中滴加含2,2,2-三氯乙酰氯(8.65g,47.56mmol)之DCM(10mL)。于0℃搅拌1.5小时后，混合物真空浓缩。残质溶于甲醇(20ml)，以20分钟时间，加至含甲醇钠(1.54g,28.54mmol,1.59mL)之甲醇(50mL)搅拌悬浮液中。混合物于室温搅拌一小时，冷却至0℃，加水(50mL)稀释，及使用DCM萃取(30mL x 3)。有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(MeOH/DCM＝1％-10％)以提供4-甲氧基-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(800mg,38％产率)。LC-MS(ESI)m/z:206[M+H]+。
步骤2&3&4：依Int.E22之相同制程，使用4-甲氧基-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯替代5-氟-1H-吲哚-3-羧酸酯。LC-MS(ESI)m/z:208[M+H]+。
Int.E27
Figure BDA0003506712340002311
5-氟-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
依Int.E18，于步骤1中使用5-氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯替代吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯；于步骤2中，依Int.22步骤3之HCl/EA脱除保护基条件。LC-MS(ESI)m/z:210[M+H]+。
Int.E28
Figure BDA0003506712340002312
6-氟-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
依Int.E18之相同制程，于步骤1中使用5-氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯替代吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯；于步骤2中，依Int.22步骤3之HCl/EA脱除保护基条件。LC-MS(ESI)m/z:210[M+H]+。
Int.E29
Figure BDA0003506712340002313
2-(吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002314
于0℃，在含2-(1H-吲哚-3-基)乙酸甲基酯(500mg,2.64mmol)之二氯甲烷(16mL)及TFA(3mL)溶液中添加硼氢化钠(199.95mg,5.29mmol)。混合物于0℃搅拌2小时，使用DCM(200mL)稀释，及使用饱和NaHCO3水溶液(10mL)中止反应。分离有机相，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供2-吲哚啉-3-基乙酸甲基酯之褐色油(477mg,85％产率)。LC-MS(ESI)m/z:196[M+H]+。
Int.E30
Figure BDA0003506712340002321
2-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002322
步骤1：于氩蒙及室温，在含2-(1H-吲哚-3-基)乙酸甲基酯(1g,5.29mmol)之DCM(10mL)溶液中添加三乙基胺(2.14g,21.14mmol)、DMAP(129.13mg,1.06mmol)及碳酸二-第三丁基酯(1.73g,7.93mmol)。搅拌5小时后，反应混合物使用饱和NH4Cl水溶液(20mL)稀释，及使用DCM萃取(20mL x 2)。有机相使用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(0～20％EA/PE)以提供3-(2-甲氧基-2-侧氧基乙基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之淡黄色油(1.46g,95％产率)。LC-MS(ESI)m/z:307[M+18]+。
步骤2：于-20℃及N2下，以30分钟时间，在含3-(2-甲氧基-2-侧氧基乙基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(300mg,1.04mmol)之无水THF(10mL)溶液中滴加KHMDS(227.53mg,1.14mmol)。然后于-78℃再搅拌溶液40分钟，接着于-78℃滴加碘甲烷(147.18mg,1.04mmol)。于相同温度搅拌1.5小时后，反应混合物使用饱和NH4Cl水溶液(20mL)中止反应及分层。水层使用EtOAc萃取(20mL x 3)，及合幷之有机相使用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(0～20％EA/PE)，产生3-(1-甲氧基-1-侧氧基丙烷-2-基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之无色油(105mg,30％产率)。LC-MS(ESI)m/z:326[M+Na]+。
步骤3：取含3-(2-甲氧基-1-甲基-2-侧氧基-乙基)吲哚-1-羧酸第三丁基酯(550mg,1.81mmol)之盐酸/二
Figure BDA0003506712340002333
烷(4N,15mL)溶液于25℃搅拌48小时及真空浓缩。残质经逆相层析法纯化(0.01％TFA/甲醇)以提供2-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲基酯(110mg,51％纯度)之无色油。LC-MS(ESI)m/z:204[M+H]+。
Int.E31
Figure BDA0003506712340002331
1-(1H-吲哚-3-基)环丙烷-1-羧酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002332
步骤1：于-78℃，在含3-(2-甲氧基-2-侧氧基-乙基)吲哚-1-羧酸第三丁基酯(100mg,0.346mmol)之THF/HMPA(v/v,10/1)(5.5mL)溶液中添加LDA(81.5mg,0.760mmol)，30分钟后，接着添加1,2-二溴乙烷(97.4mg,0.518mmol)。然后反应混合物于室温搅拌一夜，添加冰-水中止反应及分层。水相使用二氯甲烷/甲醇(v/v,10/1,20mL x 3)萃取。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/9)以提供3-(1-甲氧基羰基)环丙基-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之黄色油(120mg,78％产率)。LC-MS(ESI)m/z:338[M+Na]+。
步骤2：依Int.E30步骤3之相同制程，使用3-(1-甲氧基羰基)环丙基-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯替代3-(2-甲氧基-1-甲基-2-侧氧基-乙基)吲哚-1-羧酸第三丁基酯。LC-MS(ESI)m/z:238[M+Na]+。
Int.E32
Figure BDA0003506712340002341
3,3,3-三氟-2-(1H-吲哚-3-基)丙酸
Figure BDA0003506712340002342
步骤1：在激烈搅拌下，在3,3,3-三氟-2-侧氧基-丙酸甲基酯(4.68g,29.96mmol)中添加吲哚(117mg,0.999mmol)。混合物于约1分钟内固化，溶于DMF(40mL)中，及冷却至0℃，接着滴加SOCl2(8.91g,74.91mmol)。所得混合物于相同温度搅拌，直到LCMS监测到已转化为止。在其中慢慢分批添加NaBH4(3.40g,89.89mmol)。混合物接着于0℃搅拌3小时，及在搅拌下倒至100mL饱和NH4Cl水溶液中。滤出所得固体，及滤液使用乙酸乙酯萃取(50mL x3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝0～20％)以提供3,3,3-三氟-2-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲基酯之黄色固体(6.5g,84％产率)。LC-MS(ESI)m/z:258[M+H]+。
步骤2：取含3,3,3-三氟-2-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲基酯(2.0g,7.78mmol)之浓HCl(12mL)与AcOH(60mL)混合溶剂溶液于激烈回流下搅拌16小时，冷却至室温，及真空浓缩。残质经逆相层析法纯化(H2O/MeOH＝100/0～50/50)以提供3,3,3-三氟-2-(1H-吲哚-3-基)丙酸之灰白色粉末(1g,50％产率)。LC-MS(ESI)m/z:244[M+H]+。
Int.E33
Figure BDA0003506712340002351
2-(3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002352
步骤1：在含3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(730mg,2.51mmol)之THF(20mL)溶液中添加含氢氧化钠(3.01g,75.17mmol)之水(1.41mL)溶液。混合物于室温搅拌16小时，使用1M HCl水溶液酸化，及使用EtOAc萃取(100mL x 3)。有机相使用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供粗产物1-第三丁氧基羰基-3-甲基吲哚啉-3-羧酸之黄色油(620mg,85％产率)。LC-MS(ESI)m/z:222[M+H-56]+。
步骤2：于0℃在含1-第三丁氧基羰基-3-甲基吲哚啉-3-羧酸(630mg,2.27mmol)之DCM(15mL)混合物中慢慢添加草酰二氯(865.1mg,6.82mmol)，及添加N,N-二甲基甲酰胺(8.3mg,0.114mmol)。混合物于室温搅拌16小时及真空浓缩。残质(670mg,1.13mmol)溶于THF(10mL)及MeCN(5.00mL)，慢慢添加重氮甲基(三甲基)硅烷(258.75mg,2.27mmol)(2M乙醚溶液)至上述溶液中。反应混合物于N2下搅拌2小时，使用10％柠檬酸(10mL)中止反应，及分溶于DCM(50mL)与水(50mL)之间。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝0-10％)以提供3-(2-重氮乙酰基)-3-甲基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯之黄色油(200mg,56％产率)。
步骤3：在含3-(2-重氮乙酰基)-3-甲基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(200mg,0.664mmol)之甲醇(5mL)溶液中添加苯甲酸银(76.0mg,0.332mmol)。反应混合物于室温与N2下搅拌1.5小时，使用DCM(50mL)及水(50mL)稀释。分离有机层，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝0-15％)以提供3-(2-甲氧基-2-侧氧基乙基)-3-甲基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯之无色油(100mg,42％产率)。LC-MS(ESI)m/z:250[M+H-56]+。
步骤4：取含3-(2-甲氧基-2-侧氧基乙基)-3-甲基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(100mg,0.278mmol)及HCl/EA(4M,1.5mL)之DCM(3mL)混合物于室温搅拌2小时，及真空浓缩以提供粗产物2-(3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯，未进一步纯化。LC-MS(ESI)m/z:206[M+H]+。
另一种合成法：
Figure BDA0003506712340002371
步骤1：于0℃，以30分钟时间，在含3-甲基吲哚啉-2-酮(20g,135.89mmol)之THF(200mL)溶液中添加NaH(6.52g,163.09mmol,60％悬浮于矿物油中)。反应混合物于0℃搅拌30分钟，接着滴加二碳酸二-第三丁基酯(29.07g,133.18mmol)之THF(50mL)溶液。反应混合物再搅拌一小时，使用饱和NH4Cl水溶液(50mL)稀释，及使用CH2Cl2萃取(100mL x 2)。合幷之有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝9/1)以提供3-甲基-2-侧氧基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(30g,74％产率)之黄色油。LC-MS(ESI)m/z:192[M+H]+。
步骤2：于0℃，以30分钟时间，在含3-甲基-2-侧氧基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(30g,103.12mmol)之THF(300mL)溶液中添加NaH(4.95g,123.74mmol,60％矿物油中)。反应混合物于0℃搅拌30分钟，接着滴加2-溴乙酸甲基酯(18.93g,123.74mmol)。反应混合物搅拌一小时，使用饱和NH4Cl水溶液(100mL)中止反应，及使用CH2Cl2萃取(200mL x 2)。合幷之有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝8/2)以提供3-(2-甲氧基-2-侧氧基乙基)-3-甲基-2-侧氧基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(28g,83％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:264[M+H-56]+。
步骤3：取含4M HCl之1,4-二
Figure BDA0003506712340002381
烷(35mL)与3-(2-甲氧基-2-侧氧基乙基)-3-甲基-2-侧氧基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(28g,87.68mmol)之CH2Cl2(200mL)混合物于室温搅拌2小时及真空浓缩。残质分溶于CH2Cl2(200mL)与饱和NaHCO3水溶液(50mL)之间。分离之水层使用CH2Cl2萃取(50mL x 3)，合幷之有机层经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供2-(3-甲基-2-侧氧基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(17.6g,82％产率)。LC-MS(ESI)m/z:220[M+H]+。
步骤4：取含2-(3-甲基-2-侧氧基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(15.6g,71.16mmol)及劳森试剂(Lawesson’s Rreagent)(14.71g,36.38mmol)之甲苯(220mL)混合物于130℃搅拌1.5小时及真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝80：20)以提供2-(3-甲基-2-硫酮基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(15.5g,74％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:236[M+H]+。
步骤5：于0℃，以1小时时间，在含2-(3-甲基-硫酮基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(9.5g,40.37mmol)及氯化镍(10.46g,80.75mmol)之混合THF(70mL)与甲醇(70mL)混合物中分批添加NaBH4(9.16g,242.24mmol)。所得混合物搅拌10分钟，及通过硅藻土垫过滤。固体滤饼使用MeOH(100mL)洗涤，取滤液真空浓缩。残质溶于EA(200mL)，使用水(60mL x 3)洗涤。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(CH2Cl2：甲醇＝95:5)以提供2-(3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(6.5g,75％产率)之黄色油。LC-MS(ESI)m/z:206[M+H]+。
Int.E34
Figure BDA0003506712340002391
2-(5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
依Int.E33之相同制程，使用5-氟-3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯替代3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯。LC-MS(ESI)m/z:224[M+H]+。
Int.E35
Figure BDA0003506712340002392
2-(6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
依Int.E33之相同制程，使用6-氟-3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯替代3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯。LC-MS(ESI)m/z:224[M+H]+。
Int.E36
Figure BDA0003506712340002393
2-(5,6-二氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002394
步骤1&2&3：依Int.E26步骤1&2&3之相同制程，使用5,6-二氟-1H-吲哚替代4-甲氧基-1H-吲哚。LC-MS(ESI)m/z:258[M+H-56]+。
步骤4：于-78℃，以20分钟时间，在含5,6-二氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(910mg,2.90mmol)之无水THF(60mL)溶液中添加碘甲烷(494.7mg,3.49mmol)，及于-78℃，以45分钟时间，在N2保护下，添加1M KHMDS(3.2mL)。反应混合物于-78℃搅拌2小时，使用饱和NH4Cl水溶液(50mL)中止反应及分层。水层使用EA萃取(50mL x 3)，及合幷之有机层使用盐水(40mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(10～20％EA/PE)以提供5,6-二氟-3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯之无色油(810mg,82％产率)。LC-MS(ESI)m/z:272[M+H-56]+。
步骤5&6&7&8：依Int.E33之相同制程，使用5-氟-3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯替代3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯。LC-MS(ESI)m/z:242[M+H]+。
Int.E37
Figure BDA0003506712340002401
3-(羟基甲基)吲哚啉-3-羧酸乙基酯
Figure BDA0003506712340002402
步骤1：在含吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(300mg,1.08mmol)之乙醇(5mL)溶液中添加多聚甲醛(48.72mg,1.62mmol)及K2CO3(448.53mg,3.25mmol)。反应混合物于室温搅拌16小时及过滤。取滤液真空浓缩以提供粗产物3-(羟基甲基)吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-乙基酯(330mg,99％产率)。LC-MS(ESI)m/z:222[M+H-100]+。
步骤2：于0℃，在含吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-乙基酯(300mg,1.08mmol)之DCM(5mL)溶液中添加4M HCl之二
Figure BDA0003506712340002413
烷溶液(3mL)。反应混合物于室温搅拌16小时，使用饱和NaHCO3水溶液(5mL)中和至pH～8，及使用DCM/MeOH(v/v,10/1,20mL x3)萃取。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供粗产物3-(羟基甲基)吲哚啉-3-羧酸乙基酯(239mg,89.9％产率)。LC-MS(ESI)m/z:222[M+H]+。
Int.E38
Figure BDA0003506712340002411
2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯
Figure BDA0003506712340002412
步骤1：取含2-亚环己基乙酸乙基酯(5g,29.72mmol)、N-(甲氧基甲基)-1-苯基-N-(三甲基硅基甲基)甲胺(14.11g,59.44mmol)及氟化锂(2.31g,89.16mmol)之MeCN(50mL)混合物于60℃搅拌48小时及真空浓缩。残质溶于EA(100mL)，使用预冷之K2CO3水溶液(10％,100mL x 2)、饱和CuSO4水溶液(100mL x 3)及盐水(100mL)洗涤。有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经逆相层析法纯化(0.03％NH4HCO3/MeOH)以提供2-苯甲基-2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯(5.55g,52.7％产率，85％纯度)之淡黄色油。LC-MS(ESI)m/z:302[M+H]+。
步骤2：在含2-苯甲基-2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯(2.65g,8.79mmol)之甲醇(30mL)溶液中添加二羟基钯(679.1mg,4.84mmol)。混合物于40℃与氢蒙气(14psi)下搅拌24小时及过滤。取滤液真空浓缩以提供粗产物2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯。LC-MS(ESI)m/z:212[M+H]+。
Int.E39
Figure BDA0003506712340002421
8-氧杂-2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯
依Int.E38之相同制程，使用2-四氢呱喃-4-亚基乙酸乙基酯替代2-环亚己基乙酸乙基酯。LC-MS(ESI)m/z:214[M+H]+。
Int.E40
Figure BDA0003506712340002422
2-氮杂螺[4.4]壬烷-4-羧酸乙基酯
Figure BDA0003506712340002423
步骤1：于0℃，在含氢化钠(2.08g,52.04mmol,60％匀散矿物油中)之乙醚(120mL)搅拌悬浮液中添加2-二乙氧基磷酰基乙酸乙基酯(11.64g,51.94mmol)。所得混合物搅拌5分钟，接着添加环戊酮(4.25g,50.53mmol)之乙醚(10mL)溶液。反应混合物于25℃搅拌4小时，于0℃使用饱和氯化铵水溶液(30mL)中止反应，加水(100mL)稀释，及使用乙醚萃取(50mL x 3)。合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(石油醚/乙醚＝10/1)以提供2-亚环戊基乙酸乙基酯之淡黄色油(6.0g,73％产率)。LC-MS(ESI)m/z:155[M+H]+。
步骤2&3：依Int.E38之相同制程，使用2-亚环戊基乙酸乙基酯替代2-亚环己基乙酸乙基酯。LC-MS(ESI)m/z:198[M+H]+。
中间物12
Figure BDA0003506712340002431
3-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶
Figure BDA0003506712340002432
步骤1：在N2下，在含无水AlCl3(3.40g,25.50mmol)之无水DCM(50mL)悬浮液中添加5-溴-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶(1.01g,5.10mmol)。混合物于室温搅拌1小时，及滴加AcCl(2.00g,25.50mmol,1.8mL)。所得混合物搅拌30分钟，冷却至0℃，小心添加MeOH中止反应，直到溶液转呈清澈为止。混合物浓缩，及残质使用H2O(30mL)稀释，使用NaOH水溶液(1N)调整至pH～4，及使用乙酸乙酯萃取(30mL x 3)。合幷之有机层使用盐水(30mL x 2)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤及浓缩。残质于EA中音波处理及过滤以提供1-(5-溴-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-3-基)乙烷-1-酮之淡黄色固体(0.87g,71％产率)。LC-MS(ESI)m/z:239[M+H]+。
步骤2：于0℃，在含1-(5-溴-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-3-基)乙烷-1-酮(200mg,0.84mmol)之异丙基醇(7mL)搅拌溶液中分批添加NaBH4(158.24mg,4.18mmol)。反应混合物于83℃回流24小时，冷却至0℃，及加水稀释(15mL)。所得混合物使用乙酸乙酯萃取(30mL x3)。有机层使用盐水(20mL x 2)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤，及浓缩。残质经制备性-TLC纯化(PE/EA＝3/2v/v)以提供5-溴-3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶之灰白色固体(70mg,33％产率)。LC-MS(ESI)m/z:225[M+H]+。
步骤3：在含5-溴-3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶(200mg,888.55umol)及4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(270.77mg,1.07mmol)之1,4-二
Figure BDA0003506712340002442
烷(6mL)溶液中添加CH3COOK(174.41mg,1.78mmol)及Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(72.56mg,88.86umol)。混合物于110℃及氮蒙气下搅拌一夜，冷却至室温，及过滤。取滤液浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝2/1v/v)，进一步于PE(10mL)中音波处理以提供3-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶之白色固体(40mg,9％产率)。LC-MS(ESI)m/z:273[M+H]+。
中间物13
Figure BDA0003506712340002441
(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure BDA0003506712340002451
步骤1：取含4-溴-2-碘-苯胺(2.0g,6.71mmol)、二甲基膦氧化物(628.76mg,8.06mmol)、Pd(OAc)2(150.71mg,671.33umol)、Xantphos(776.86mg,1.34mmol)、及K3PO4(2.85g,13.41mmol)之DMF(20mL)混合物于N2及60℃搅拌一夜。冷却至室温后，混合物过滤，及使用EA(40mL)洗涤。滤液使用H2O(40mL)稀释，及使用EA萃取(50mL x 30)。有机层使用盐水(40mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠脱水，过滤，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝60/1v/v)以提供(2-胺基-5-溴苯基)二甲基膦氧化物之黄色固体(1.6g,96％产率)。LC-MS(ESI)m/z:248[M+H]+。
步骤2：取含(2-胺基-5-溴苯基)二甲基膦氧化物(1.53g,6.17mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(1.88g,7.41mmol)、Pd(dppf)Cl2 -CH2Cl2(503.70mg,616.80umol)、及KOAc(1.21g,12.34mmol)之二
Figure BDA0003506712340002452
烷(20mL)混合物于N2与100℃搅拌5小时。冷却至室温后，混合物过滤，及使用EA(150mL)洗涤。有机层浓缩，及经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝20/1v/v)以提供(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)二甲基膦氧化物之黑色油(1.16g,64％产率)。LC-MS(ESI)m/z:296[M+H]+。
中间物14
Figure BDA0003506712340002461
2-氯-3-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶
Figure BDA0003506712340002462
取含5-溴-2-氯-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶(50mg,0.19mmol)、4,4,6,6-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼杂环己烷(73mg,0.27mmol)、无水AcOK(56mg,0.58mmol)、及Pd(dppf)Cl2.DCM(15mg,0.02mmol)之无水二
Figure BDA0003506712340002463
烷(1.5mL)混合物于氮气保护之微波条件下，于100℃搅拌3小时。冷却至室温后，混合物过滤，及取滤液浓缩以提供粗产物2-氯-3-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶(50mg)，未进一步纯化即用于下一个步骤。LC-MS(ESI)m/z:307[M+H]+。
中间物15
Figure BDA0003506712340002464
6-溴-2-碘吡啶-3-胺
Figure BDA0003506712340002465
在含6-溴吡啶-3-胺(1g,5.68mmol)及硫酸银(1.77g,5.68mmol)之乙醇(20mL)悬浮液中添加碘(1.44g,5.68mmol)，及反应混合物于室温搅拌一夜，使用PE(20mL)稀释，及过滤。取滤液浓缩，及残质于EA(30mL)中音波处理。过滤收集固体及干燥以提供6-溴-2-碘-吡啶-3-胺之褐色固体(380mg,22％产率)。LC-MS(ESI)m/z:299[M+H]+。
中间物16
Figure BDA0003506712340002471
(2-溴-4-碘苯基)(甲基)胺甲酸第三丁基酯
Figure BDA0003506712340002472
步骤1：在含2-溴-4-碘-苯胺(1g,3.36mmol)之DCM(10mL)溶液中添加TEA(339.66mg,467.85uL)、DMAP(410.08mg,3.36mmol)、及Boc2O(732.58mg,3.36mmol)。混合物于室温搅拌5小时，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1v/v)以提供N-(2-溴-4-碘-苯基)-N-第三丁氧基羰基-胺甲酸第三丁基酯之白色固体(732.58mg,43％产率)。
步骤2：在含N-(2-溴-4-碘-苯基)-N-第三丁氧基羰基-胺甲酸第三丁基酯(800mg,1.61mmol)之甲醇(20mL)溶液中添加碳酸钾(665.87mg,4.82mmol)。混合物于70℃搅拌2小时，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1v/v)以提供N-(2-溴-4-碘-苯基)胺甲酸第三丁基酯之白色固体(462mg,72％产率)。
步骤3：在含N-(2-溴-4-碘-苯基)胺甲酸第三丁基酯(400mg,1.00mmol)之DMF(10mL)溶液中添加碳酸钾(277.79mg,2.01mmol)及碘甲烷(213.96mg,1.51mmol)。混合物于40℃搅拌一夜。冷却至室温后，混合物使用H2O(30mL)稀释，及使用EA萃取(30mL x 3)。有机层使用盐水(20mL x 3)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1v/v)以提供N-(2-溴-4-碘-苯基)-N-甲基-胺甲酸第三丁基酯之黄色固体(400mg,96％产率)。LC-MS(ESI)m/z:356[M+H-55]+。
中间物17
Figure BDA0003506712340002481
N-(2-溴-4-碘苯基)乙酰胺
Figure BDA0003506712340002482
在含2-溴-4-碘-苯胺(1.0g,3.36mmol)之DCM(10mL)搅拌溶液中添加三乙基胺(680.00mg,6.72mmol,0.94mL)，接着添加乙酸酐(411.63mg,4.03mmol,381.14uL)。混合物于室温搅拌一夜，于40℃加热4小时。冷却至室温后，混合物浓缩以提供N-(2-溴-4-碘-苯基)乙酰胺之灰色固体(1.1g,96％产率)。LC-MS(ESI)m/z:340[M+H]+。
中间物18
Figure BDA0003506712340002483
1-(2-溴-4-碘苯基)吡咯啶
Figure BDA0003506712340002484
取含2-溴-4-碘-苯胺(1.0g,3.36mmol)、1,4-二溴丁烷(869.69mg,4.03mmol)、及碳酸钾(927.84mg,6.71mmol)之DMF(20mL)混合物于100℃搅拌一夜。冷却至室温后，混合物倒至水(40mL)中，及使用EA萃取(50mL x 3)。有机层使用盐水(30mL x 3)洗涤，及经无水硫酸钠脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE,100％v/v)以提供1-(2-溴-4-碘-苯基)吡咯啶之黄色油(200mg,17％产率)。LC-MS(ESI)m/z:352[M+H]+。
中间物19
Figure BDA0003506712340002491
2-溴-3-氟-6-碘苯胺
Figure BDA0003506712340002492
于室温，在含2-溴-3-氟-苯胺(200mg,1.05mmol)之DMF(2mL)溶液中滴加含NIS(236.81mg,1.05mmol)之DMF(2mL)溶液。反应混合物于室温搅拌3小时，使用EA(30mL)稀释，及使用盐水(20mL x 2)洗涤。有机层经无水Na2SO4脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝20/1v/v)以提供2-溴-3-氟-6-碘-苯胺之褐色固体(330mg,99％产率)。LC-MS(ESI)m/z:316[M+H]+。
中间物20
Figure BDA0003506712340002493
2-溴-4-碘苯甲酸甲基酯
Figure BDA0003506712340002494
在含2-溴-4-碘-苯甲酸(1g,3.06mmol)、碳酸钾(845.55mg,6.12mmol)之DMF(15mL)溶液中添加碘甲烷(651.27mg,4.59mmol)。反应混合物于室温搅拌一夜，使用H2O(50mL)中止反应，及使用EA萃取(25mL x 2)。合幷之有机层使用盐水(30mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠脱水脱水，过滤，及浓缩以提供2-溴-4-碘-苯甲酸甲基酯之褐色油(1g,95％产率)。LC-MS(ESI)m/z:341[M+H]+。
中间物21
Figure BDA0003506712340002501
2-溴-1-(二氟甲基)-4-碘苯
Figure BDA0003506712340002502
于0℃，在含2-溴-4-碘苯甲醛(200mg,0.64mmol)之DCM(6mL)溶液中添加BAST(284mg,1.29mmol)。混合物于室温搅拌2小时，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝20/1v/v)以提供2-溴-1-(二氟甲基)-4-碘苯之白色固体(180mg,84％产率)。
中间物22
Figure BDA0003506712340002503
2-溴-3-氟-4-碘-1-甲基苯
Figure BDA0003506712340002504
于N2及-70℃，以10分钟时间，在含2-溴-1-氟-3-甲基-苯(500mg,2.65mmol)之无水THF(5mL)溶液中滴加LDA(2N THF溶液，2mL,4.0mmol)，混合物于-70℃搅拌30分钟。取含I2(2.01g,7.94mmol)之无水THF(2mL)溶液滴加至上述-70℃混合物中，所得混合物于-70℃搅拌3小时。回升至室温后，混合物倒至饱和NH4Cl水溶液(20mL)中，使用EA萃取(20mL x2)。合幷之有机层使用盐水(30mL x 2)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤及浓缩。残质经制备性-TLC纯化(PE,100％v/v)以提供3-溴-2-氟-1-碘-4-甲基-苯之无色油(110mg,13％产率)。
中间物24
Figure BDA0003506712340002511
2,6-二溴-3-甲基吡啶
于-5℃，在含6-溴-5-甲基-吡啶-2-胺(100mg,0.535mmol)之48％氢溴酸水溶液(3mL)中滴加溴(69.2mg,0.855mmol)。取含亚硝酸钠(99.6mg,1.44mmol)之水(2mL)溶液于5℃滴加至上述混合物中。所得混合物于室温搅拌3小时，冷却至-5℃，使用KOH(100mg)之水溶液(5mL)中止反应，及使用EA萃取(20mL x 2)。合幷之有机层使用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-TLC纯化(PE/EA＝10/1v/v)以提供2,6-二溴-3-甲基-吡啶之白色固体(20mg,15％产率)。LC-MS(ESI)m/z:250[M+H]+。
中间物25
Figure BDA0003506712340002512
2-(2-溴-4-碘苯基)
Figure BDA0003506712340002513
唑
Figure BDA0003506712340002514
步骤1：在含2-溴-4-碘-苯甲酸(1g,3.06mmol)之DMF(10mL)之搅拌溶液中添加HATU(1.74g,4.59mmol)及DIPEA(1.19g,9.18mmol,1.60mL)。搅拌10分钟后，添加2,2-二甲氧基乙胺(418.08mg,3.98mmol,433.25uL)至上述混合物中。混合物搅拌一夜，使用EA(20mL)稀释，及使用NaHCO3水溶液(30mL x 2)洗涤。有机层经无水硫酸钠脱水，过滤，及真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1v/v)以提供2-溴-N-(2,2-二甲氧基乙基)-4-碘-苯甲酰胺之黄色固体(1g,2.42mmol)。LC-MS(ESI)m/z:382[M-MeO]+。
步骤2：取含2-溴-N-(2,2-二甲氧基乙基)-4-碘-苯甲酰胺(1g,2.42mmol)之伊顿试剂(Eaton’s reagent)(10mL)溶液于130℃搅拌一夜。冷却至室温后，溶液倒至冰-水(60mL)中。所得悬浮液过滤及干燥以提供2-(2-溴-4-碘-苯基)
Figure BDA0003506712340002521
唑之灰色固体(840mg,2.40mmol,99％产率)。LC-MS(ESI)m/z:350[M+H]+。
中间物26
Figure BDA0003506712340002522
1-(2-溴-4-碘苯基)-N,N-二甲基甲胺
Figure BDA0003506712340002523
取含2-溴-4-碘苯甲醛(300mg,0.94mmol)、二甲基胺(2M THF溶液，0.58mL,1.16mmol)、及AcOH(5滴)之MeOH(8mL)混合物于N2及室温搅拌1小时。然后添加NaBH3CN(90mg,1.45mmol)至上述混合物中，所得混合物于40℃搅拌16小时。冷却至室温后，混合物浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE 100％v/v，及接着PE/EA＝5/1，v/v)以提供1-(2-溴-4-碘苯基)-N,N-二甲基甲胺之黄色油(10mg,29％产率)。LC-MS(ESI)m/z:340[M+H]+。
中间物27
Figure BDA0003506712340002531
1-(2-溴-4-碘苯基)吡咯啶-2-酮
Figure BDA0003506712340002532
步骤1：于-20℃，在含2-溴-4-碘苯胺(600mg,2.0mmol)之DCM(10mL)混合物中滴加吡啶(175mg,2.2mmol)及4-氯丁酰氯(312mg,2.2mmol)。反应混合物于-20℃搅拌3小时，加水(20mL)稀释，使用HCl水溶液(2N)洗涤，及使用EA萃取(30mL x 3)。有机层经无水Na2SO4脱水，过滤，及浓缩以提供N-(2-溴-4-碘苯基)-4-氯丁酰胺之黑色固体(700mg,86％产率)。LC-MS(ESI)m/z:402[M+H]+。
步骤2：于0℃，在含N-(2-溴-4-碘苯基)-4-氯丁酰胺(700mg,1.74mmol)之无水THF(10mL)溶液中添加NaH(60％悬浮于油中，138mg,3.48mmol)。混合物于N2及室温搅拌2小时，使用冷水(20mL)稀释，及使用EA萃取(30mL x 3)。有机层使用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE 100％v/v，及接着PE/EA＝5/1，v/v)以提供1-(2-溴-4-碘苯基)吡咯啶-2-酮之白色固体(500mg,78％产率)。LC-MS(ESI)m/z:366[M+H]+。
中间物28
Figure BDA0003506712340002533
2-溴-4-碘苯甲酰胺
Figure BDA0003506712340002541
取含2-溴-4-碘-苯甲酸甲酯(500mg,1.47mmol)之28％氢氧化铵(5mL)混合物于100℃，于密封管中搅拌5小时，冷却至室温，及过滤。取滤液浓缩以提供2-溴-4-碘-苯甲酰胺之白色固体(400mg,84％产率)。LC-MS(ESI)m/z:326[M+H]+。
中间物29
Figure BDA0003506712340002542
N-(3,5-二溴苯基)乙酰胺
Figure BDA0003506712340002543
于0℃，在含3,5-二溴苯胺(200mg,797.07umol)之DCM(5mL)溶液中添加TEA(241.97mg,2.39mmol,333.29uL)及乙酰氯(93.85mg,1.20mmol,72.75uL)。混合物于室温搅拌2小时，使用H2O(20mL)稀释，及使用DCM萃取(30mL x 3)。合幷之萃液经无水Na2SO4脱水，过滤，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1v/v)以提供N-(3,5-二溴苯基)乙酰胺之黄色固体(185mg,79％产率)。LC-MS(ESI)m/z:292[M+H]+。
中间物30
Figure BDA0003506712340002544
N-(4-溴-2-碘苯基)氧杂环丁烷-3-胺
Figure BDA0003506712340002551
步骤1：取含4-溴苯胺(4g,23.25mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(2.18g,30.23mmol,1.94mL)、无水Na2SO4(3.30g,23.25mmol)之THF(20mL)混合物于室温搅拌1小时。然后于室温添加NaBH(OAc)3(7.39g,34.88mmol)至上述混合物中。混合物于室温搅拌16小时，加水稀释(50mL)，及使用EA萃取(100mL x 2)。合幷之有机层使用饱和NaHCO3水溶液(30mL x 3)及盐水(20mL x 2)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝2/1v/v)以提供N-(4-溴苯基)氧杂环丁烷-3-胺之白色固体(3.4g,64％产率)。LC-MS(ESI)m/z:228[M+H]+。
步骤2：于室温，在含N-(4-溴苯基)氧杂环丁烷-3-胺(1.5g,6.58mmol)之DMF(8mL)溶液中滴加NIS(1.48g,6.58mmol)之DMF(3mL)溶液。混合物于室温搅拌3小时，使用饱和NaHSO3水溶液(10mL)中止反应，及使用EA萃取(60mL x 2)。合幷之有机层使用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝4/1v/v)以提供粗产物N-(4-溴-2-碘-苯基)氧杂环丁烷-3-胺之黄色固体(630mg,30％产率，50％纯度)。LC-MS(ESI)m/z:354[M+H]+。
实例化合物
实例1
Figure BDA0003506712340002552
(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物
步骤1：于0℃，在含Int.E1(200mg,1.04mmol)之DMF(5mL)溶液中添加氢化钠(60％匀散矿物油中，50mg,1.24mmol)，混合物于0℃搅拌30分钟。在上述反应混合物中添加0℃之2,4,5-三氯嘧啶(227.9mg,1.24mmol)，所得混合物接着在室温搅拌1小时，冷却至0℃，使用冰-H2O(20mL)中止反应，及使用EA萃取(30mL x3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％HCOOH)以提供(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物之白色固体(110mg,31％产率)。LC-MS(ESI)m/z:340[M+H]+。
步骤2：在含Int.W1(25.4mg,0.13mmol)之2-甲氧基乙醇(3mL)溶液中添加(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物(30mg,0.09mmol)及HCl之EtOH溶液(2N,0.2mL)。所得混合物于120℃搅拌20小时及真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法(DCM/MeOH＝15/1v/v)及制备性-HPLC(MeCN/0.1％HCOOH)纯化以提供(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物之黄色固体(8.3mg,19％产率)。LC-MS(ESI)m/z:496[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ1.92(s,3H),1.95(s,3H),2.54(s,3H),2.90-2.97(m,4H),3.59(s,2H),3.91(s,3H),6.83(s,1H),7.35-7.40(m,2H),7.86-7.88(m,1H),7.91-7.94(m,1H),7.97(s,1H),8.22(d,J＝4.8Hz,1H),8.65(s,1H)。
实例2
Figure BDA0003506712340002571
N-(5-氯-4-(1H-吲哚-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例1之相同制程，于步骤1中使用吲哚替代Int.E1。LC-MS(ESI)m/z:420[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.79(s,3H),3.07-3.10(m,2H),3.26-3.27(m,2H),3.94(s,5H),6.75(d,J＝3.6Hz,1H),6.89(s,1H),7.21-7.30(m,2H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.83(d,J＝3.6Hz,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),8.13(s,1H),8.60(s,1H)。
实例3
Figure BDA0003506712340002572
N-(4-(1H-吲哚-1-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例1之相同制程，于步骤1中使用吲哚啉及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶替代Int.E1及2,4,5-三氯嘧啶。LC-MS(ESI)m/z:420[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.55(s,3H),2.92-2.96(m,4H),3.19(t,J＝8.0Hz,2H),3.45(s,2H),3.88(s,3H),4.16(t,J＝8.0Hz,2H),6.78(s,1H),7.02-7.07(m,1H),7.17(d,J＝7.2Hz,1H),7.31(d,J＝7.2Hz,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,1H),7.90(s,1H),8.49(s,1H)。
实例4
Figure BDA0003506712340002581
N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：在含2,4,5-三氯嘧啶(1g,5.45mmol)之DMF(20mL)溶液中添加碳酸钾(1.51g,10.90mmol)及吲哚啉(649.7mg,5.45mmol)。混合物于80℃搅拌一夜，冷却至室温，使用H2O(50mL)稀释，及使用EA萃取(50mL x 2)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/30,v/v)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉之白色固体(900mg,61％产率)。LC-MS(ESI)m/z:266[M+H]+。
步骤2：依条件B1(如实例1步骤2举例说明)，使用Int.W1(30mg,0.16mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(41.5mg,0.16mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝10/1)后以提供N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺之黄色固体(35mg,53％产率)。LC-MS(ESI)m/z:422[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ2.33(s,3H),2.59(t,J＝5.2Hz,2H),2.78(t,J＝5.2Hz,2H),3.13(t,J＝8.0Hz,2H),3.31(s,2H),3.78(s,3H),4.27(t,J＝8.4Hz,2H),6.75(s,1H),6.93(t,J＝7.6Hz,1H),7.08(t,J＝7.6Hz,1H),7.25(d,J＝6.8Hz,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.56(s,1H),7.96(s,1H),8.24(s,2H)。
实例5
Figure BDA0003506712340002591
N-(5-氯-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例4之相同制程，于步骤1中使用1,2,3,4-四氢异喹啉替代吲哚啉。C-MS(ESI)m/z:436[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.66(s,3H),2.99-3.05(m,6H),3.84(s,2H),3.89(s,3H),4.00(t,J＝6.0Hz,2H),4.87(s,2H),6.79(s,1H),7.19(s,4H),7.99(s,1H),8.10(s,1H)。
实例6
Figure BDA0003506712340002592
N-(5-氯-4-(3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例4之相同制程，于步骤1中使用1,2,3,4-四氢喹啉替代吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:436[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ1.99-2.06(m,2H),2.51(s,3H),2.80-2.86(m,4H),2.91(t,J＝6.0Hz,2H),3.44(s,2H),3.87-3.90(m,5H),6.73(s,1H),6.85(d,J＝8.0Hz,1H),6.99-7.03(m,1H),7.06-7.10(m,1H),7.19(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(s,1H),8.14(s,1H)。
实例7
Figure BDA0003506712340002601
N-(5-氯-4-(2,3-二氢-4H-苯幷[b][1,4]
Figure BDA0003506712340002602
嗪-4-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例4之相同制程，于步骤1中使用3,4-二氢-2H-苯幷[b][1,4]
Figure BDA0003506712340002603
嗪替代吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:438[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)2.48(s,3H),2.77(t,J＝6.0Hz,2H),2.88(t,J＝6.0Hz,2H),3.31(s,2H),3.87(s,3H),3.96(t,J＝4.4Hz,2H),4.28(t,J＝4.4Hz,2H),6.71(s,1H),6.83-6.87(m,1H),6.92-7.03(m,3H),7.79(s,1H),8.24(s,1H)。
实例8
Figure BDA0003506712340002604
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
步骤1：依条件A2(如实例4步骤1举例说明)，使用Int.E2(200mg,1.06mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(194.90mg,1.06mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/1,v/v)后以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺之白色固体(165mg,46％产率)。LC-MS(ESI)m/z:335[M+H]+。
步骤2：在含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺(52mg,0.16mmol)及Int.W1(29.8mg,0.16mmol)之异丙醇(2mL)溶液中添加三氟乙酸(53.1mg,0.48mmol)。混合物于N2及100℃搅拌20小时，冷却至室温，及经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％HCOOH)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺之黄色固体(7.0mg,9％产率)。LC-MS(ESI)m/z:491[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)2.63(s,3H),3.01-3.05(m,4H),3.22(s,6H),3.71(s,2H),3.91(s,3H),6.85(s,1H),7.31-7.36(m,2H),7.78-7.81(m,2H),8.02(s,1H),8.12(s,1H),8.63(s,1H)。
实例9
Figure BDA0003506712340002611
N-(4-(1H-苯幷[d]咪唑-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例8之相同制程，于步骤1中使用1H-苯幷[d]咪唑替代Int.E2。LC-MS(ESI)m/z:421[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.87(s,3H),3.12(t,J＝6.8Hz,2H),3.38(t,J＝6.8Hz,2H),3.93(s,3H),4.06(s,2H),6.91(s,1H),7.41-7.44(m,2H),7.78-7.81(m,1H),7.85-7.88(m,1H),8.03(s,1H),8.69(s,1H),8.79(s,1H)。
实例10
Figure BDA0003506712340002612
N-(4-(1H-吲哚-1-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：依条件A1(如实例1步骤1举例说明)，使用1H-吲哚(349.9mg,3.0mmol)及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(650.9mg,3.0mmol)，经制备性-HPLC纯化后以提供1-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚之黄色固体(88mg,7％产率)。LC-MS(ESI)m/z:298[M+H]+。
步骤2：在含1-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚(20mg,0.067mmol)及Int.W1(15.4mg,0.067mmol)之异丙醇(3mL)溶液中添加TsOH.H2O(11.6mg,0.067mmol)。混合物于100℃搅拌一夜，冷却至室温，使用饱和NaHCO3水溶液碱化至pH～8，使用DCM萃取(10mL x 3)。有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝10/1v/v)以提供N-(4-(1H-吲哚-1-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺之白色固体(17mg,55％产率)。LC-MS(ESI)m/z:454[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.56(s,3H),2.96-2.99(m,4H),3.60(brs,2H),3.91(s,3H),6.73(d,J＝3.6Hz,1H),6.85(s,1H),7.20-7.28(m,2H),7.48(d,J＝2.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.97(s,1H),8.83(s,1H)。
实例11
Figure BDA0003506712340002621
N-(5-氯-4-(3-氟-1H-吲哚-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例10之相同制程，于步骤1中使用Int.E3及2,4,5-三氯嘧啶替代1H-吲哚及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。LC-MS(ESI)m/z:438[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H),8.63(s,1H),7.91(d,J＝2.4Hz,1H),7.83(d,J＝6.8Hz,1H),7.64(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),7.37(s,1H),7.33-7.17(m,2H),6.73(d,J＝55.3Hz,1H),3.96-3.68(m,3H),3.33(s,2H),2.79(t,J＝5.6Hz,2H),2.55(t,J＝5.9Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例80
Figure BDA0003506712340002631
N-(5-氯-4-(3-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例10之相同制程，于步骤1中使用Int.E8及2,4,5-三氯嘧啶替代1H-吲哚及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。LC-MS(ESI)m/z:498[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.00(s,1H),8.74(s,1H),8.42(s,1H),7.94-7.85(m,1H),7.79-7.72(m,1H),7.41(dd,J＝6.1,3.1Hz,2H),7.33(s,1H),6.79(s,1H),3.79(s,3H),3.34(s,2H),3.30(s,3H),2.77(d,J＝5.8Hz,2H),2.54(d,J＝5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例81
Figure BDA0003506712340002641
N-(5-氯-4-(3-(甲基磺酰基)吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例10之相同制程，于步骤1中使用Int.E9及2,4,5-三氯嘧啶替代1H-吲哚及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。LC-MS(ESI)m/z:500[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.12(s,1H),7.49(d,J＝6.9Hz,2H),7.41(d,J＝8.1Hz,1H),7.27(t,J＝7.7Hz,1H),7.06(t,J＝7.3Hz,1H),6.75(s,1H),5.06(d,J＝7.5Hz,1H),4.72(dd,J＝12.4,9.5Hz,1H),4.58(dd,J＝12.5,2.6Hz,1H),3.77(s,3H),3.28-3.21(m,2H),2.89(s,3H),2.77(d,J＝5.5Hz,2H),2.55(t,J＝5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例82
Figure BDA0003506712340002642
N-(5-氯-4-(3-((甲基磺酰基)甲基)-1H-吲哚-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例10之相同制程，于步骤1中使用Int.E11及2,4,5-三氯嘧啶替代1H-吲哚及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。LC-MS(ESI)m/z:512[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,1H),8.66(s,1H),7.98(s,1H),7.80(s,2H),7.42(s,1H),7.25(dd,J＝6.0,3.1Hz,2H),6.80(s,1H),4.71(s,2H),3.79(s,3H),3.33(s,2H),2.95(s,3H),2.78(s,2H),2.55(d,J＝5.6Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例83
Figure BDA0003506712340002651
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-磺酰胺
依实例10之相同制程，于步骤1中使用Int.E15及2,4,5-三氯嘧啶替代1H-吲哚及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。LC-MS(ESI)m/z:499[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(d,J＝20.3Hz,1H),8.47(s,1H),7.96(s,1H),7.71(dd,J＝5.7,3.1Hz,1H),7.53(dd,J＝6.1,3.1Hz,1H),7.16(s,2H),7.12(dd,J＝6.8,3.7Hz,3H),6.56(s,1H),3.55(s,3H),3.24(s,2H),2.54(s,2H),2.31(d,J＝5.7Hz,2H),2.07(d,J＝14.9Hz,3H)。
实例14
Figure BDA0003506712340002652
N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依条件B3，使用Int.W2(36.58mg,0.23mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(60mg,0.23mmol)，经制备性-HPLC纯化后以提供N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺之黄色固体(10.4mg,12％产率)。LC-MS(ESI)m/z:392[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.51(s,3H),2.83-2.93(m,4H),3.17(t,J＝8.0Hz,2H),3.57(s,2H),4.33(t,J＝8.0Hz,2H),6.93-7.02(m,2H),7.12(t,J＝3.6Hz,1H),7.24-7.32(m,2H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.52(d,J＝8.0Hz,1H),8.14(s,1H)。
实例15
Figure BDA0003506712340002661
6-氯-N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依条件B3，使用Int.W3(50mg,0.25mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(67.66mg,0.25mmol)，经制备性-HPLC纯化后以提供6-氯-N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺之黄色固体(11.6mg,11％产率)。LC-MS(ESI)m/z:426[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.54(s,3H),2.89-2.96(m,4H),3.18(t,J＝8.0Hz,2H),3.54(s,2H),4.36(t,J＝8.0Hz,2H),6.96-7.00(m,1H),7.11(t,J＝8.0Hz,1H),7.24-7.28(m,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),7.93(s,1H),8.19(s,1H)。
实例19
Figure BDA0003506712340002662
N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺
依条件B3，使用Int.W4(30mg,155.24umol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(41.31mg,155.24umol)(微波处理2小时)，经快速管柱层析法(DCM/MeOH＝10/1,v/v)及制备性-HPLC(MeCN/0.05％TFA)纯化后以提供N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺(TFA盐)之黄色固体(6.6mg,10％产率)。LC-MS(ESI)m/z:423[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ3.03(s,3H),3.08-3.22(m,4H),3.44-3.56(m,1H),3.73-3.83(m,1H),4.02(s,3H),4.16(d,J＝6.4Hz,2H),4.38(t,J＝8.0Hz,2H),7.06(t,J＝7.6Hz,1H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.31(d,J＝8.0Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),8.25(s,1H),8.34(s,1H)。
实例22
Figure BDA0003506712340002671
N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-异丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依条件B3，使用Int.W5(50mg,0.227mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(60mg,0.227mmol)(微波处理2小时)，经快速管柱层析法(DCM/MeOH＝10/1,v/v)纯化后以提供N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-异丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺之黄色固体(2.5mg,2％产率)。LC-MS(ESI)m/z:450[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ1.17(d,J＝6.4Hz,6H),2.86-2.92(m,5H),3.19(t,J＝8.4Hz,2H),3.49(s,2H),3.88(s,3H),4.36(t,J＝8.4Hz,2H),6.73(s,1H),6.99(t,J＝6.8Hz,1H),7.17(t,J＝7.6Hz,1H),7.29(d,J＝7.2Hz,1H),7.50(d,J＝8.0Hz,1H),7.99(s,1H),8.16(s,1H)。
实例23
Figure BDA0003506712340002681
N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依条件B3，使用Int.W6(110mg,0.39mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(105mg,0.39mmol)(微波处理2小时)以提供N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(1.0TsOH盐)之黄色固体(130mg,58％产率)。过滤收集固体。LC-MS(ESI)m/z:408[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ2.29(s,3H),2.98(t,J＝6.4Hz,2H),3.16(t,J＝8.0Hz,2H),3.28-3.40(m,2H),3.82(s,3H),4.04(d,J＝4.6Hz,2H),4.37(t,J＝8.0Hz,2H),6.95(s,1H),7.02(dd,J＝7.4,1.0Hz,1H),7.07-7.20(m,3H),7.30(dd,J＝7.4,1.0Hz,1H),7.46-7.48(m,3H),7.65(s,1H),8.34(s,1H),8.72(s,1H),9.26(s,2H)。
实例26
Figure BDA0003506712340002682
1-(7-((5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)胺基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-(二甲基胺基)乙烷-1-酮
于0℃，在含2-(二甲基胺基)乙酸(5.06mg,49.03umol)、N-(5-氯-4-吲哚啉-1-基-嘧啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺甲苯磺酸盐(20mg,34.48umol)、及HATU(18.64mg,49.03umol)之无水CH2Cl2(3mL)溶液中滴加DIPEA(19.01mg,147.10umol,25.62uL)。反应混合物于室温搅拌3小时及真空浓缩。残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％HCOOH)以提供1-(7-((5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)胺基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-(二甲基胺基)乙烷-1-酮之白色固体(13.5mg,56％产率)。LC-MS(ESI)m/z:493[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.57(s,3H),2.62(s,3H),2.75(t,J＝6.4Hz,1H),2.86(t,J＝6.4Hz,1H),3.14(t,J＝8.4Hz,2H),3.54(s,1H),3.64-3.69(m,2H),3.71(s,1H),3.88(d,J＝6.4Hz,3H),4.30(s,1H),4.32-4.36(m,2H),4.42(s,1H),6.75(s,1H),6.98-7.04(m,1H),7.16(t,J＝8.0Hz,1H),7.24-7.29(m,1H),7.39-7.46(m,1H),8.01(d,J＝17.2Hz,1H),8.15(d,J＝9.6Hz,1H)。
实例27
Figure BDA0003506712340002691
2-(7-((5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)胺基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-醇
取含N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺甲苯磺酸盐(30mg,0.073mmol)、2-((第三丁基二甲基硅烷基)氧)乙醛(13mg,0.073mmol)、及AcOH(2滴)之MeOH(4mL)混合物于N2下搅拌1小时。然后添加NaBH(OAc)3(24mg,011mmol)至上述混合物中，混合物于室温搅拌16小时，及真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM 100％v/v，及接着DCM/MeOH＝5/1v/v)以提供2-(7-((5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)胺基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-醇之黄色固体(6.4mg,20％产率)。LC-MS(ESI)m/z:452[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.72(t,J＝6.4Hz,2H),2.86-2.91(m,4H),3.19(t,J＝8.4Hz,2H),3.47(s,2H),3.77(t,J＝6.4Hz,2H),3.88(s,3H),4.35(t,J＝8.4Hz,2H),6.73(s,1H),7.02(t,J＝7.6Hz,1H),7.18(t,J＝8.0Hz,1H),7.29(d,J＝7.6Hz,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.96(s,1H),8.16(s,1H)。
实例28
Figure BDA0003506712340002701
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-2-羧酰胺
步骤1：依条件A1(如实例1步骤1中举例说明)，使用Int.E4(673mg,3.58mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(787mg,4.29mmol)，经硅胶快速管柱层析法(EA/PE＝1/3,v/v)及制备性-HPLC纯化后以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-吲哚-2-羧酰胺之白色固体(160mg,22％产率)。LC-MS(ESI)m/z:335.[M+H]+。
步骤2：在含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-吲哚-2-羧酰胺(50mg,0.15mmol)之二
Figure BDA0003506712340002702
烷(4mL)溶液中添加Int.W1(28.7mg,0.15mmol)、Pd2(dba)3(27.3mg,0.03mmol)、Xantphos(17.3mg,0.03mmol)、及碳酸钾(41.2mg,0.3mmol)。混合物于100℃及N2下搅拌12小时，冷却至室温，及过滤。滤液浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％HCOOH)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-2-羧酰胺之黄色固体(2.4mg,3％产率)[HCOOH盐]。LC-MS(ESI)m/z:491[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.71(s,3H),2.99(s,3H),3.02-3.05(m,2H),3.14-3.17(m,2H),3.30(s,3H),3.88(s,2H),3.91(s,3H),6.85(s,1H),7.10(s,1H),7.26(t,J＝8.0Hz,1H),7.35(t,J＝8.0Hz,1H),7.49(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),8.02(s,1H),8.50(brs,1H),8.57(s,1H)。
实例12
Figure BDA0003506712340002711
N-(5-氯-4-(4-氯吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：依条件A2(如实例4步骤1中举例说明)，使用4-氯吲哚啉(111mg,1.06mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(200mg,1.09mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝20/1,v/v)后以提供4-氯-1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉之白色固体(160mg,59％产率)。LC-MS(ESI)m/z:300[M+H]+。
步骤2：依条件B3(如实例10步骤2举例说明)，使用Int.W1(68.5mg,299.43umol)及4-氯-1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(90mg,299.43umol)以提供N-(5-氯-4-(4-氯吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(TsOH盐)之黄色固体(115mg,84％产率)。过滤收集固体。LC-MS(ESI)m/z:456[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.35(s,3H),3.02(s,3H),3.05-3.16(m,1H),3.16-3.30(m,3H),3.41-3.45(m,1H),3.74-3.77(m,1H),3.87(s,3H),4.13-4.17(m,1H),4.32-4.35(m,1H),4.67(t,J＝8.4Hz,2H),7.04(s,1H),7.13-7.21(m,4H),7.49(s,1H),7.65-7.67(m,3H),8.21(s,1H)。
实例13
Figure BDA0003506712340002721
N-(5-氯-4-(5-氯吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例12之相同制程，于步骤1中使用5-氯吲哚啉及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:456[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.35(s,3H),3.04(s,3H),3.17-3.29(m,4H),3.41-3.48(m,1H),3.75-3.79(m,1H),3.88(s,3H),4.13-4.16(m,1H),4.27-4.31(m,1H),4.64(t,J＝8.0Hz,2H),7.04(s,1H),7.16-7.21(m,3H),7.38(brs,1H),7.53(s,1H),7.65-7.72(m,3H),8.20(s,1H)。
实例18
Figure BDA0003506712340002722
N-(5-氯-4-(6-氯吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例12之相同制程，于步骤1中使用6-氯吲哚啉及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:456[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.35(s,0.45H),3.01(s,3H),3.13-3.20(m,4H),3.35-3.40(m,1H),3.73-3.77(m,1H),3.90(s,3H),4.10-4.14(m,1H),4.31-4.35(m,1H),4.59(t,J＝8.4Hz,2H),7.02(s,1H),7.09-7.12(m,1H),7.21(d,J＝8.0Hz,0.3H),7.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.6-7.69(m,2.3H),8.24(s,1H)。
实例16
Figure BDA0003506712340002731
N-(5-氯-4-(2,3-二氢-1H-吡咯幷[3,2-b]吡啶-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例12之相同制程，于步骤1中使用2,3-二氢-1H-吡咯幷[3,2-b]吡啶盐酸盐及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:423[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ2.39(s,3H),2.67(brs,2H),2.81-2.84(m,2H),3.21(t,J＝8.4Hz,2H),3.41(s,2H),3.76(s,3H),4.36(t,J＝8.4Hz,2H),6.79(s,1H),6.99-7.02(m,1H),7.41(s,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),8.03(dd,J＝5.2,1.2Hz,1H),8.17(s,1H),8.25(s,1H)。
实例29
Figure BDA0003506712340002741
N-(5-氯-4-(2,3-二氢-1H-吡咯幷[3,2-b]吡啶-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-胺
依实例28步骤2之相同制程，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2,3-二氢吡咯幷[3,2-b]吡啶及Int.W4替代1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-吲哚-2-羧酰胺及Int.W1。LC-MS(ESI)m/z:424[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.51(s,3H),2.89-2.92(m,4H),3.27-3.34(m,2H),3.47(s,2H),3.97(s,3H),4.45(t,J＝8.8Hz,2H),7.16-7.19(m,1H),7.76(dd,J＝8.0,0.8Hz,1H),8.05(dd,J＝4.8,1.2Hz,1H),8.09(s,1H),8.25(s,1H),8.51(br,1H)。
实例17
Figure BDA0003506712340002742
N-(5-氯-4-(2,3-二氢-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例12之相同制程，于步骤1中使用2,3-二氢-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:423[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.44(s,3H),2.71-2.74(m,2H),2.87-2.91(m,2H),3.21(t,J＝8.0Hz,2H),3.47(s,2H),3.87(s,3H),4.25(t,J＝8.4Hz,2H),6.73(s,1H),6.89-6.92(m,1H),7.61(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),8.00(s,2H),8.30(s,1H)。
实例20
Figure BDA0003506712340002751
N-(5-氯-4-(5-氟吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例12之相同制程，于步骤1中使用5-氟吲哚啉及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:440[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.35(s,1.5H),2.79(s,3H),3.06(t,J＝6.0Hz,2H),3.19(t,J＝8.4Hz,2H),3.25(t,J＝6.0Hz,2H),3.84(s,2H),3.90(s,3H),4.38(t,J＝8.4Hz,2H),6.82(s,1H),6.90-6.95(m,1H),7.06(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.38-7.41(m,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.98(s,1H),8.18(s,1H)。
实例21
Figure BDA0003506712340002752
N-(5-氯-4-(6-氟吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例12之相同制程，于步骤1中使用6-氟吲哚啉及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:440[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.35(s,0.24H),3.04(s,3H),3.20(m,3H),3.35-3.45(m,2H),3.75-3.80(m,1H),3.87(s,3H),4.17(d,J＝14.8Hz,1H),4.42(d,J＝14.8Hz,1H),4.70(t,J＝7.6Hz,2H),6.87-6.92(m,1H),7.06(s,1H),7.21(d,J＝8.0Hz,0.2H),7.28-7.32(m,1H),7.42(s,1H),7.42-7.46(m,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,0.16H),8.22(s,1H)。
实例24
Figure BDA0003506712340002761
N-(5-氯-4-(1H-吲唑-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例12之相同制程，于步骤1中使用1H-吲唑及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:421[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,1H),8.61(s,1H),8.50(s,1H),8.23(s,1H),8.07(d,J＝7.9Hz,1H),7.89(d,J＝7.9Hz,1H),7.48-7.39(m,1H),7.35(dd,J＝8.9,5.9Hz,2H),6.84(s,1H),3.77(s,3H),3.37-3.37(m,2H),2.83(t,J＝5.8Hz,2H),2.59(t,J＝5.7Hz,2H),2.30(d,J＝13.4Hz,3H)。
实例25
Figure BDA0003506712340002762
N-(5-氯-4-(3,3-二甲基吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：在含3,3-二甲基吲哚啉(200mg,1.36mmol)之正丁醇(2mL)溶液中依序添加2,4,5-三氯嘧啶(250mg,1.36mmol)及DIPEA(175.6mg,1.36mmol)。反应混合物于100℃搅拌18小时，加水(5mL)稀释，及使用EA萃取(10mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/10,v/v)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3,3-二甲基-吲哚啉(385mg,94.41％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:296[M+H]+。
步骤2：依条件B3(依实例10步骤2举例说明)，使用Int.W1(86mg,0.323mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3,3-二甲基-吲哚啉(100mg,0.323mmol)，经过制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025％NH3.H2O)后以提供N-(5-氯-4-(3,3-二甲基吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(85.5mg,58.84％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:450[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),7.98(s,1H),7.56(s,1H),7.33(d,J＝7.9Hz,1H),7.24(d,J＝6.5Hz,1H),7.14-7.05(m,1H),6.98(dd,J＝7.8,7.0Hz,1H),6.74(s,1H),4.00(s,2H),3.77(s,3H),3.28(s,2H),2.77(t,J＝5.7Hz,2H),2.55(t,J＝5.8Hz,2H),2.30(s,3H),1.29(s,6H)。
实例84
Figure BDA0003506712340002771
N-(5-氯-4-(螺[环丙烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例25之相同制程，于步骤1中使用3,3-螺[环丙烷-1,3'-吲哚啉]盐酸盐替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:440[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.01(s,1H),7.51(s,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),7.08-6.97(m,1H),6.94-6.86(m,1H),6.85-6.68(m,2H),4.28(s,2H),3.78(s,3H),3.27(s,2H),2.77(t,J＝5.7Hz,2H),2.55(t,J＝5.9Hz,2H),2.30(s,3H),1.15-1.06(m,2H),1.03(dd,J＝6.6,4.5Hz,2H)。
实例85
Figure BDA0003506712340002781
N-(4-(5-溴吲哚啉-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例25之相同制程，于步骤1中使用5-溴吲哚啉替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:502[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.00(s,1H),7.52(s,1H),7.43(s,1H),7.30(d,J＝8.6Hz,1H),7.21(s,1H),6.76(s,1H),4.28(d,J＝7.7Hz,2H),3.78(s,3H),3.24(s,2H),3.15(s,2H),2.77(s,2H),2.55(s,2H),2.33(s,3H)。
实例86
Figure BDA0003506712340002782
(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-5-基)二甲基膦氧化物
取含N-(4-(5-溴吲哚啉-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(110mg,208.66umol)、二甲基膦氧化物(26.65mg,341.44umol)、Pd2(dba)3(10.42mg,11.38umol)、Xantphos(6.59mg,11.38umol)、及三乙基胺(69.10mg,682.88umol,95.18uL)之二
Figure BDA0003506712340002791
烷(2mL)混合物经过氮气吹扫，及于110℃搅拌16小时。反应混合物经制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3)以提供(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-5-基)二甲基膦氧化物之白色固体(57.3mg,55％产率)。LC-MS(ESI)m/z:498[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.09(s,1H),7.61(d,J＝10.9Hz,1H),7.53-7.36(m,3H),6.77(s,1H),4.31(t,J＝8.2Hz,2H),3.78(s,3H),3.29(s,2H),3.18(t,J＝7.8Hz,2H),2.77(s,2H),2.55(s,2H),2.31(s,3H),1.62(d,J＝13.2Hz,6H)。
实例87
Figure BDA0003506712340002792
(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-基)甲醇
依实例25之相同制程，于步骤1中使用Int.E6替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:502[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),8.28(s,1H),8.16(s,1H),7.70(d,J＝4.0Hz,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(d,J＝7.3Hz,1H),7.18(t,J＝7.7Hz,1H),6.98(t,J＝7.3Hz,1H),6.93(s,1H),4.38-4.33(m,1H),4.26(s,1H),4.16(s,2H),3.82(s,3H),3.66(d,J＝5.6Hz,2H),3.54-3.38(m,2H),3.30(s,1H),3.14-2.95(m,2H),2.92(d,J＝3.6Hz,3H)。
实例88
Figure BDA0003506712340002801
(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-基)二甲基膦氧化物
依实例25之相同制程，于步骤1中使用Int.E7替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:502[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.02(s,1H),7.59(s,1H),7.37(d,J＝7.4Hz,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),7.16(t,J＝7.7Hz,1H),6.99(t,J＝7.5Hz,1H),6.74(s,1H),4.70-4.48(m,1H),4.35(ddd,J＝18.3,11.1,3.6Hz,1H),3.85(d,J＝9.9Hz,1H),3.84-3.67(m,3H),3.27-3.15(m,2H),2.76(t,J＝5.6Hz,2H),2.55(d,J＝5.7Hz,1H),2.29(s,3H),1.31(dt,J＝33.1,16.5Hz,6H)。
实例89
Figure BDA0003506712340002802
N-(5-氯-4-(4-甲氧基吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例25之相同制程，于步骤1中使用Int.E10替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:452[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.93(s,1H),7.56(s,1H),7.02(dd,J＝19.1,8.0Hz,2H),6.74(s,1H),6.61(d,J＝8.0Hz,1H),4.27(t,J＝8.3Hz,2H),3.80(s,3H),3.78(s,3H),3.27(s,2H),3.01(t,J＝8.2Hz,2H),2.77(t,J＝5.6Hz,2H),2.55(t,J＝5.8Hz,2H),2.31(s,3H)。
实例90
Figure BDA0003506712340002811
N-(5-氯-4-(5-(二氟甲基)吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例25之相同制程，于步骤1中使用Int.E12替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:472[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.04(s,1H),7.55(s,1H),7.49-7.39(m,2H),7.29(d,J＝8.2Hz,1H),6.95(t,J＝56.3Hz,1H),6.76(s,1H),4.31(t,J＝8.3Hz,2H),3.79(s,3H),3.27(s,2H),3.19(t,J＝8.2Hz,2H),2.78(s,2H),2.56(br,2H),2.31(s,3H)。
实例91
Figure BDA0003506712340002812
N-(5-氯-4-(6-(二氟甲基)吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例25之相同制程，于步骤1中使用Int.E13替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:472[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.03(s,1H),7.52(s,1H),7.43-7.32(m,2H),7.13(d,J＝7.6Hz,1H),6.91(s,1H),6.80(s,1H),6.75(s,1H),6.69(s,1H),4.30(t,J＝8.3Hz,2H),3.79(d,J＝19.8Hz,3H),3.25(s,2H),3.18(t,J＝8.1Hz,2H),2.77(t,J＝5.6Hz,2H),2.54(t,J＝5.9Hz,2H),2.28(s,3H)。
实例92
Figure BDA0003506712340002821
N-(5-氯-4-(4-(二氟甲基)吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例25之相同制程，于步骤1中使用Int.E14替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z:472[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.27(s,1H),8.05(s,1H),7.93(s,1H),7.48(s,1H),7.19(dd,J＝13.6,5.6Hz,1H),7.13-7.04(m,1H),6.75(d,J＝5.8Hz,1H),4.32(t,J＝8.3Hz,2H),3.78(d,J＝9.6Hz,3H),3.32-3.20(m,4H),2.77(s,2H),2.55(t,J＝5.8Hz,2H),2.31(s,3H)。
实例31
Figure BDA0003506712340002822
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2,3-二氢咪唑幷[1,2-a]吡啶-5(1H)-酮
步骤1：取含Int.E5(65mg,0.239mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(53mg,0.286mmol)、NaOtBu(45.9mg,0.477mmol)、BINAP(3.9mg,0.006mmol)及乙酸钯(II)(1.3mg,0.006mmol)之DMF/二
Figure BDA0003506712340002832
烷(2mL/2mL)混合物于70℃与N2下搅拌16小时，使用冰-冷水(10mL)中止反应，及使用EA萃取(20mL x 3)。有机相使用盐水洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。滤液真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝10/1)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2,3-二氢咪唑幷[1,2-a]吡啶-5-酮(45mg,26.63％产率，40％纯度)。LC-MS(ESI)m/z:283.0[M+H]+。
步骤2：依条件B3(依实例10步骤2举例说明)，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2,3-二氢咪唑幷[1,2-a]吡啶-5-酮(40mg,0.056mmol)及Int.W1(10.9mg,0.056mmol)，经过制备性-HPLC(MeCN/0.1％HCOOH)纯化后以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2,3-二氢咪唑幷[1,2-a]吡啶-5(1H)-酮之黄色固体(2.5mg,9.73％产率)。LC-MS(ESI)m/z:439.0[M+H]+。
实例48
Figure BDA0003506712340002831
N-(5-氯-4-(异喹啉-4-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：在含4-异喹啉基硼酸(100mg,578.12umol)之DME/H2O(3mL/1mL)溶液中添加碳酸钾(159.8mg,1156umol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂络铁]二氯钯(II)(42.3mg,57.82umol)、及2,4,5-三氯嘧啶(106.0mg,578.12umol)。混合物于100℃及N2蒙气下搅拌一夜，冷却至室温，及使用EA(10mL)稀释。过滤后，滤液真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝4/1v/v)以提供4-(2,5-二氯嘧啶-4-基)异喹啉之黄色固体(50mg,63％产率)。LC-MS(ESI)m/z:276[M+H]+。
步骤2：依条件B3(依实例10步骤2举例说明)，使用4-(2,5-二氯嘧啶-4-基)异喹啉(50mg,0.181mmol)及Int.W1(41.4mg,0.181mmol)，经过制备性-HPLC纯化(MeCN/0.05％TFA)后以提供N-(5-氯-4-(异喹啉-4-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺之黄色固体(12mg,12％产率)，。LC-MS(ESI)m/z:432[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.98(s,3H),3.06-3.25(m,3H),3.65-3.73(m,1H),3.93(s,3H),4.12-4.16(m,1H),4.34-4.30(m,1H),6.91(s,1H),7.85-7.89(m,2H),7.93-7.97(m,1H),8.12(s,1H),8.35(d,J＝7.6Hz,1H),8.61(s,1H),8.68(s,1H),9.52(s,1H)。
实例49
Figure BDA0003506712340002841
N-(5-氯-4-(喹啉-4-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例48之相同制程，于步骤1中使用4-喹啉基硼酸替代4-异喹啉基硼酸。LC-MS(ESI)m/z:432[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.36(s,1.8H),2.54(s,3H),2.90-2.95(m,4H),3.61(s,2H),3.88(s,3H),6.79(s,1H),7.22(d,J＝8.0Hz,1.2H),7.61(d,J＝4.4Hz,1H),7.62-7.66(m,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1.2H),7.78(d,J＝8.4Hz,1H),7.82-7.87(m,1H),7.96(s,1H),8.16(d,J＝8.4Hz,1H),8.63(s,1H),9.00(d,J＝4.4Hz,1H)。
实例93
Figure BDA0003506712340002851
3-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)氧杂环丁烷-3-醇
步骤1：依条件A1，使用Int.E16(440mg,1.45mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(293mg,1.59mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1)后以提供3-(3-((第三丁基二甲基硅烷基)氧基)氧杂环丁烷-3-基)-1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚(400mg,58％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:450[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用3-(3-((第三丁基二甲基硅烷基)氧基)氧杂环丁烷-3-基)-1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚(200mg,0.444mmol)及Int.W1(142mg,0.533mmol)，经硅胶快速管柱层析法(PE/EA＝10/1)纯化后以提供N-(4-(3-(3-((第三丁基二甲基硅烷基)氧基)氧杂环丁烷-3-基)-1H-吲哚-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(170mg,73％产率)之红色固体。LC-MS(ESI)m/z:606[M+H]+。
步骤3：在含N-(4-(3-(3-((第三丁基二甲基硅烷基)氧基)氧杂环丁烷-3-基)-1H-吲哚-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(80mg,131.96umol)之THF(2mL)与水(0.3mL)混合溶剂之溶液中添加甲酸(1mL)。反应混合物于80℃搅拌3小时，及经制备性-HPLC纯化(10mM NH4HCO3&0.025％NH3·H2O/乙腈)以提供3-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)氧杂环丁烷-3-醇之黄色固体(2.0mg,3％产率)。LC-MS(ESI)m/z:492[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.46(s,1H),8.19(s,1H),8.08(s,1H),7.93(d,J＝8.0Hz,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.26(t,J＝7.5Hz,1H),7.19(t,J＝8.1Hz,1H),6.60(s,1H),6.43(s,1H),6.04(s,1H),5.33(s,1H),4.39(d,J＝14.9Hz,1H),4.11(d,J＝14.8Hz,1H),3.83(d,J＝30.4Hz,2H),3.62(s,3H),3.36(s,2H),2.76(s,2H),2.58(s,2H),2.33(s,3H)。
实例94
Figure BDA0003506712340002861
N-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)甲磺酰胺
步骤1：依条件A1，使用3-硝基-1H-吲哚(100mg,0.617mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(125mg,0.678mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1)后以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-硝基-1H-吲哚(78mg,30％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:309[M+H]+。
步骤2：于0℃，在含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-硝基-1H-吲哚(78mg,252.34umol)之1,4-二
Figure BDA0003506712340002871
烷(0.5mL)与水(0.2mL)混合溶剂之溶液中依序添加锌(5.42mg,82.89umol)及NH4Cl(5.2mg,97.05umol)。反应混合物于室温搅拌一小时，及通过硅藻土(celite)过滤。滤液使用乙酸乙酯(10mL)稀释，使用水(5mL)及盐水(5mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-胺之褐色固体(60mg,85％产率)。LC-MS(ESI)m/z:279[M+H]+。
步骤3：于0℃，在含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-胺(60mg,214.96umol)之无水DCM(2mL)悬浮液中添加MsCl(138.09mg,214.96umol)。于0℃搅拌4小时后，混合物分溶于5％柠檬酸水溶液(20mL)与DCM(20mL)之间。合幷之有机相使用水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝1/10～1/5)以提供N-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)甲磺酰胺之黄色固体(75mg,97％产率)。LC-MS(ESI)m/z:357[M+H]+。
步骤4：依条件B3，使用N-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)甲磺酰胺(75mg,0.210mmol)及Int.W1(49mg,0.252mmol)，经过制备性-HPLC(MeCN/0.1％HCOOH)纯化后以提供N-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)甲磺酰胺(5.2mg,5％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:513[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,1H),8.62(s,1H),8.28(s,1H),7.86-7.72(m,2H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),7.40(s,1H),7.28-7.20(m,2H),7.11(d,J＝7.9Hz,1H),6.80(s,1H),3.79(s,3H),2.99(s,3H),2.79(t,J＝5.8Hz,2H),2.56(t,J＝5.8Hz,2H),2.31(s,3H),2.29(s,2H)。
实例32
Figure BDA0003506712340002881
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
实例115
Figure BDA0003506712340002882
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯
步骤1：取含2,4,5-三氯嘧啶(220mg,1.20mmol)及吲哚啉-3-羧酸(163mg,0.999mmol)之NMP(0.6mL)混合物于150℃搅拌15分钟，经逆相层析法(0-80％甲醇之水溶液)纯化以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(160mg,48.55％产率，94％纯度)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:310.0[M+H]+。
步骤2：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(30mg,0.097mmol)及Int.W1(19mg,0.097mmol)及TsOH.H2O(18.4mg,0.097mmol)之i-PrOH(2.5mL)混合物于85℃搅拌5小时，及经制备性-HPLC(10mM NH4HCO3&0.025％NH3·H2O/乙腈)纯化以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(1.8mg,4％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:466[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.03(s,1H),7.51(s,1H),7.40(dd,J＝7.7,3.9Hz,2H),7.12(t,J＝7.6Hz,1H),6.97(t,J＝7.3Hz,1H),6.76(s,1H),4.56(dd,J＝10.6,6.4Hz,1H),4.38(t,J＝10.1Hz,1H),4.23(s,1H),3.77(s,3H),2.78(d,J＝5.6Hz,2H),2.67(s,1H),2.60-2.55(m,3H),2.32(s,3H)。
另一种合成法：
步骤1：取含Int.E17(300mg,1.59mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(292mg,1.59mmol)及DIPEA(411.4mg,3.18mmol)之n-BuOH(5mL)混合物于100℃搅拌16小时，使用冰-冷水(20mL)中止反应，及使用EA萃取(30mL x 3)。有机相使用盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。滤液真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(MeOH/DCM:0-15％)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯(556mg,95％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:324[M+H]+。
步骤2：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯(250mg,0.678mmol)、Int.W1(155mg,0.678mmol)及TsOH.H2O(129.1mg,0.679mmol)之i-PrOH(10mL)混合物于100℃搅拌16小时，使用饱和NaHCO3水溶液(10mL)中止反应，及使用DCM/MeOH萃取(10/1,30mLx 3)。有机相使用盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。滤液真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(MeOH/DCM：0-15％)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯与1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸异丙基酯之混合物(530mg)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:480(甲基酯),508(异丙基酯)[M+H]+。
取少量混合物进一步经制备性-HPLC纯化以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.09(s,1H),7.48(s,1H),7.37(dd,J＝15.3,7.7Hz,2H),7.16(t,J＝7.4Hz,1H),6.99(t,J＝7.2Hz,1H),6.76(s,1H),4.54(q,J＝10.8Hz,1H),4.50-4.38(m,2H),3.79(d,J＝15.6Hz,3H),3.71(s,3H),3.29(s,2H),2.78(t,J＝5.7Hz,2H),2.56(t,J＝5.9Hz,2H),2.31(s,3H)。
步骤3：取含1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯与1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸异丙基酯混合物(530mg)与LiOH水溶液(2N,4mL)之THF(5mL)混合物于室温搅拌16小时，使用甲酸调整至pH～5，及使用DCM萃取(30mL x 3)。合幷之有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(10mMNH4HCO3&0.025％NH3·H2O/乙腈)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(158mg,84％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:466[M+H]+。
实例95&96
Figure BDA0003506712340002911
(S)-1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸&(R)-1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
在消旋性1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(20mg)经过对掌性-分离后合成。未确认立体化学，因此自由指定两种产物(分别为4.5mg，5.1mg)。LC-MS(ESI)m/z:466[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.05(s,1H),7.51(s,1H),7.40(d,J＝7.9Hz,2H),7.15(t,J＝7.8Hz,1H),6.98(t,J＝7.5Hz,1H),6.77(s,1H),4.54(dd,J＝10.6,6.1Hz,1H),4.40(t,J＝10.0Hz,1H),4.31-4.27(m,1H),3.77(s,3H),3.26-3.24(m,2H),2.80(d,J＝5.6Hz,2H),2.65(d,J＝6.5Hz,2H),2.37(s,3H)。对掌性-HPLC滞留时间：1.285min；ee值：>99％。
LC-MS(ESI)m/z:466[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.03(s,1H),7.51(s,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,2H),7.15(d,J＝7.7Hz,1H),6.99(d,J＝7.5Hz,1H),6.76(s,1H),4.54(dd,J＝10.5,6.2Hz,1H),4.39(t,J＝10.1Hz,1H),4.28(d,J＝6.1Hz,1H),3.77(s,3H),3.34(s,2H),2.79(t,J＝5.5Hz,2H),2.61(t,J＝5.7Hz,2H),2.34(s,3H)。对掌性-HPLC滞留时间：2.078min；ee值：>99％。
SFC分离条件：
仪器：SFC-150(Thar,Waters)
管柱：IG 20*250mm,10um(Daicel)
管柱温度：35℃
移动相：CO2/EtOH(0.2％甲醇/氨)＝50/50
流速：120g/min
背压：100bar
检测波长：214nm
循环时间：8min
实例33
Figure BDA0003506712340002921
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酰胺
步骤1：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(60mg,193.46umol)、氯化铵(51.74mg,967.32umol)、HATU(110.34mg,290.20umol)及三乙基胺(58.73mg,580.39umol,80.90uL)之DMF(1mL)混合物于室温搅拌3小时，使用冰-冷水(15mL)中止反应，及使用EtOAc萃取(20mL x x 3)。合幷之有机相使用盐水(15mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。滤液真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝0-100％)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酰胺(15mg,50.16％产率，100％纯度)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:309[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酰胺(45mg,0.146mmol)及Int.W1(28mg,0.146mmol)，经过制备性-HPLC纯化(10mM NH4HCO3&0.025％NH3·H2O/乙腈)后以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酰胺(26.9mg,55％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:465[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.00(s,1H),7.80(s,1H),7.50(s,1H),7.39(dd,J＝31.8,7.8Hz,2H),7.22(s,1H),7.10(t,J＝7.7Hz,1H),6.97(t,J＝7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.54(dd,J＝10.3,6.3Hz,1H),4.36(t,J＝9.9Hz,1H),4.15(dd,J＝9.3,6.5Hz,1H),3.77(s,3H),3.28(d,J＝12.2Hz,2H),2.77(t,J＝5.6Hz,2H),2.55(t,J＝5.9Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例97
Figure BDA0003506712340002931
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-甲基吲哚啉-3-羧酰胺
依实例33之相同制程，于步骤1中使用甲基胺盐酸盐替代氯化铵。LC-MS(ESI)m/z:479[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31-8.26(m,1H),8.24(s,1H),8.02(s,1H),7.49(s,1H),7.42(d,J＝8.3Hz,1H),7.28(d,J＝7.5Hz,1H),7.10(t,J＝7.7Hz,1H),6.95(t,J＝7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.54(dd,J＝10.4,6.5Hz,1H),4.37(t,J＝10.0Hz,1H),4.22-4.05(m,1H),3.77(s,3H),3.28(s,2H),2.77(d,J＝5.7Hz,2H),2.66(d,J＝4.6Hz,3H),2.56(d,J＝5.8Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例98
Figure BDA0003506712340002941
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-(甲基磺酰基)吲哚啉-3-羧酰胺
步骤1：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(60mg,0.193mmol)及CDI(31.47mg,0.193mmol)之DCM(5mL)混合物于室温搅拌一小时，接着添加甲磺酰胺(27.6mg,0.290mmol)。再搅拌混合物一小时，添加DBU(29.5mg,0.193mmol)至混合物中。反应混合物接着于室温搅拌16小时，使用HCl水溶液(1N,20mL)中止反应，及使用EtOAc萃取(20mL x3)。合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(MeOH/DCM＝0-15％)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N-甲基磺酰基-吲哚啉-3-羧酰胺之黄色油(45mg,37％产率，62％纯度)。LC-MS(ESI)m/z:387[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N-甲基磺酰基-吲哚啉-3-羧酰胺(45mg,0.072mmol)及Int.W1(13.9mg,0.072mmol)，经过制备性-HPLC纯化(0.1％FA/乙腈)后以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-(甲基磺酰基)吲哚啉-3-羧酰胺(29mg,74.1％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:543[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.05(s,1H),7.66(s,1H),7.47(d,J＝7.0Hz,1H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),7.11(t,J＝7.9Hz,1H),6.94(t,J＝7.4Hz,1H),6.85(s,1H),4.64-4.56(m,1H),4.28(t,J＝9.8Hz,1H),4.00(d,J＝7.8Hz,1H),3.81(s,3H),3.09(s,2H),2.93(s,2H),2.82(s,3H),2.67(s,2H),2.52(s,3H)。
实例99
Figure BDA0003506712340002951
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈
步骤1：于0℃，在含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酰胺(100mg,0.210mmol)及吡啶(67mg,0.841mmol)之DCM(5mL)溶液中慢慢添加含三氟乙酸酐(88.3mg,0.421mmol)之DCM(1mL)。混合物于0℃搅拌一小时，及于室温搅拌6小时，使用1N HCl(10mL)中止反应。所得混合物使用DCM萃取(20mL x 3)，取有机相使用盐水(15mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供粗产物1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈(60mg,40.2％产率，40％纯度)。LC-MS(ESI)m/z:291[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈(60mg,40％纯度)及Int.W1(10.8mg,0.056mmol)，经过制备性-HPLC纯化(10mM NH4HCO3&0.025％NH3·H2O/乙腈)后以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈(19.7mg,77.7％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:447[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.22(s,1H),8.15(s,1H),7.52-7.42(m,2H),7.33(d,J＝7.7Hz,1H),7.24(t,J＝7.5Hz,1H),7.07(t,J＝7.4Hz,1H),6.76(s,1H),4.89-4.80(m,1H),4.58(t,J＝10.0Hz,1H),4.44(dd,J＝10.7,6.8Hz,1H),3.77(s,3H),3.29(s,2H),2.77(d,J＝5.8Hz,2H),2.57-2.54(m,2H),2.31(s,3H)。
实例100
Figure BDA0003506712340002961
N-(4-(3-(2H-四唑-5-基)吲哚啉-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
取含1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈(45mg,0.101mmol)、迭氮化钠(9.8mg,0.151mmol)及乙酸铵(11.6mg,0.151mmol)之DMF(1.5mL)混合物于120℃搅拌5小时，冷却至室温，使用HCl水溶液(1N,5mL)稀释，再搅拌30分钟。混合物使用EA萃取(20mL x 3)。有机相使用盐水(15mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％甲酸)以提供N-(4-(3-(2H-四唑-5-基)吲哚啉-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺之白色固体(13.4mg,27％产率)。LC-MS(ESI)m/z:490[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.15(s,1H),8.06(s,1H),7.72(s,1H),7.32(d,J＝7.7Hz,1H),7.21-7.08(m,2H),6.93(t,J＝7.5Hz,1H),6.83(s,1H),4.89(t,J＝9.1Hz,1H),4.72(s,1H),4.56(s,1H),3.81(s,3H),3.77(s,2H),3.01(s,2H),2.90(d,J＝5.5Hz,2H),2.63(s,3H)。
实例101
Figure BDA0003506712340002971
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-羟基吲哚啉-3-羧酰胺
步骤1：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(150mg,0.484mmol)、草酰氯(61.4mg,0.484mmol)及N,N-二甲基甲酰胺(1.8mg,0.024mmol)之DCM(5mL)混合物于室温搅拌2小时及真空浓缩以提供粗产物1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羰基氯，其未进一步纯化即用于下一个步骤。
步骤2：于0℃，在含羟基胺盐酸盐(79.3mg,1.14mmol)之MeOH(3mL)悬浮液中慢慢添加KOH(63.8mg,1.14mmol)。反应混合物于N2下搅拌10分钟，于0℃，在其中添加含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羰基氯(75mg,0.228mmol)之甲醇(5mL)溶液。所得混合物接着搅拌16小时，使用冰-冷水(10mL)中止反应，及使用EtOAc萃取(20mL x 3)。有机相使用盐水(5mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(MeOH/DCM＝0-10/1)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N-羟基吲哚啉-3-羧酰胺之白色固体(50mg,43％产率，64％纯度)。LC-MS(ESI)m/z:325[M+H]+。
步骤3：依条件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N-羟基吲哚啉-3-羧酰胺(50mg,64％纯度)及Int.W1(18.9mg,0.098mmol)，经过制备性-HPLC纯化(10mM NH4HCO3&0.025％NH3·H2O/乙腈)后以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-羟基吲哚啉-3-羧酰胺(12.6mg,25.4％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:481[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.94(s,1H),9.04(s,1H),8.25(s,1H),8.03(s,1H),7.50-7.34(m,2H),7.25(d,J＝7.1Hz,1H),7.11(t,J＝7.6Hz,1H),6.97(t,J＝7.7Hz,1H),6.75(s,1H),4.51(dd,J＝10.3,6.7Hz,1H),4.39(t,J＝10.0Hz,1H),4.08-3.99(m,1H),3.77(s,3H),3.27(s,2H),2.77(d,J＝5.8Hz,2H),2.56(d,J＝5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例102
Figure BDA0003506712340002981
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-羟基-N-甲基吲哚啉-3-羧酰胺
依实例101之相同制程，于步骤2中使用N-甲基羟基胺替代羟基胺盐酸盐。LC-MS(ESI)m/z:495[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.28(s,1H),8.25(s,1H),8.01(s,1H),7.51(s,1H),7.38(dd,J＝19.3,7.6Hz,2H),7.11(t,J＝7.5Hz,1H),6.95(t,J＝7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.90-4.79(m,1H),4.51(dd,J＝10.4,6.4Hz,1H),4.38(t,J＝9.9Hz,1H),3.77(s,3H),3.28(s,2H),3.18(s,3H),2.76(d,J＝5.7Hz,2H),2.56(d,J＝5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例103
Figure BDA0003506712340002982
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-甲氧基吲哚啉-3-羧酰胺
依实例101之相同制程，于步骤2中使用O-甲基羟基胺盐酸盐替代羟基胺盐酸盐。LC-MS(ESI)m/z:495[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.60(s,1H),8.25(s,1H),8.05(s,1H),7.50-7.39(m,2H),7.26(d,J＝7.5Hz,1H),7.12(t,J＝7.8Hz,1H),6.97(t,J＝7.1Hz,1H),6.75(s,1H),4.51(dd,J＝10.4,6.7Hz,1H),4.39(t,J＝10.0Hz,1H),4.04-3.96(m,1H),3.77(s,3H),3.64(s,3H),3.28(s,2H),2.78(s,2H),2.56(d,J＝5.9Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例163
Figure BDA0003506712340002991
1-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
步骤1：取含1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯与及1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸异丙基酯(100mg)及Pd/C(18.2mg,0.171mmol)混合物之甲醇(10mL)混合物于室温及H2下搅拌16小时，并通过硅藻土垫过滤。使用EA(20mL)洗涤滤饼固体，及取滤液真空浓缩以提供1-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯与1-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸异丙基酯之粗产物混合物，其未纯化即用于下一个步骤。LC-MS(ESI)m/z:446(甲基酯)，474(异丙基酯)[M+H]+。
步骤2：依实例32之另一种合成法步骤3之相同制程，使用1-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯与1-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸异丙基酯之混合物替代1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯与1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸异丙基酯之混合物。LC-MS(ESI)m/z:432[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.14(dd,J＝16.9,6.9Hz,2H),7.82(s,1H),7.62(s,1H),7.43(d,J＝7.3Hz,1H),7.08(t,J＝7.7Hz,1H),6.92(t,J＝7.3Hz,1H),6.80(s,1H),6.27(d,J＝5.8Hz,1H),4.32(dd,J＝9.8,5.0Hz,1H),4.17-4.03(m,2H),3.80(d,J＝9.1Hz,3H),3.28(m,2H),2.84(t,J＝5.6Hz,2H),2.66(t,J＝5.7Hz,2H),2.36(s,3H)。
实例104
Figure BDA0003506712340003001
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟吲哚啉-3-羧酸
依实例32之另一种合成法之相同制程，于步骤1中使用Int.E22替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z:484[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,2H),8.02(s,1H),7.49(s,1H),7.40(dd,J＝8.6,4.7Hz,1H),7.21(d,J＝6.7Hz,1H),6.92(dd,J＝8.9,6.8Hz,1H),6.78(s,1H),4.60(dd,J＝10.5,6.2Hz,1H),4.39(t,J＝10.1Hz,1H),4.22-4.10(m,1H),3.77(s,3H),3.42(s,2H),2.82(d,J＝5.5Hz,2H),2.69(t,J＝19.4Hz,2H),2.40(s,3H)。
实例105
Figure BDA0003506712340003011
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟吲哚啉-3-羧酸
依实例32之另一种合成法之相同制程，于步骤1中使用Int.E23替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z:484[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33-8.25(m,1H),8.20(d,J＝6.6Hz,1H),7.42(s,1H),7.36(dd,J＝14.4,6.5Hz,1H),7.20(d,J＝10.7Hz,1H),6.85-6.65(m,2H),4.61(dd,J＝10.4,6.1Hz,1H),4.42(t,J＝10.0Hz,1H),4.21-4.12(m,1H),3.79(d,J＝3.1Hz,1H),3.75(d,J＝10.4Hz,3H),3.36-3.33(m,1H),2.79(t,J＝5.5Hz,2H),2.63(t,J＝5.1Hz,2H),2.31(d,J＝20.7Hz,3H)。
实例106
Figure BDA0003506712340003012
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-甲氧基吲哚啉-3-羧酸
依实例32之另一种合成法之相同制程，于步骤1中使用Int.E24替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z:496[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),7.96(s,1H),7.50(s,1H),7.39(d,J＝8.8Hz,1H),6.96(d,J＝2.0Hz,1H),6.83-6.58(m,1H),4.69-4.50(m,1H),4.40(s,1H),4.25(d,J＝6.2Hz,1H),3.76(d,J＝11.4Hz,6H),3.41(s,1H),2.79(d,J＝5.6Hz,2H),2.64(d,J＝5.4Hz,2H),2.35(s,3H)。
实例107
Figure BDA0003506712340003021
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-甲氧基吲哚啉-3-羧酸
依实例32之另一种合成法之相同制程，于步骤1中使用Int.E25替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z:496[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.45(s,1H),8.14(s,1H),7.51(d,J＝11.9Hz,1H),7.39(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),7.19(d,J＝9.4Hz,1H),7.03(s,1H),6.76(d,J＝8.4Hz,1H),4.69(d,J＝2.6Hz,1H),4.62(t,J＝10.0Hz,1H),4.36-4.22(m,2H),4.10(d,J＝11.4Hz,1H),3.85(d,J＝1.7Hz,3H),3.70(d,J＝3.6Hz,4H),3.33(s,1H),3.14(s,1H),3.07(d,J＝17.0Hz,1H),2.94(s,3H)。
实例108
Figure BDA0003506712340003031
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-4-甲氧基吲哚啉-3-羧酸
依实例32之另一种合成法之相同制程，于步骤1中使用Int.E26替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z:496[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.00(s,1H),7.52(s,1H),7.11(t,J＝8.1Hz,1H),7.03(d,J＝8.0Hz,1H),6.75(s,1H),6.63(d,J＝8.1Hz,1H),4.51(t,J＝10.2Hz,1H),4.32(dd,J＝10.6,4.8Hz,1H),4.10(dd,J＝9.7,4.7Hz,1H),3.77(s,7H),2.78(t,J＝5.6Hz,2H),2.58(t,J＝5.7Hz,2H),2.49-2.48(m,1H),2.33(s,3H)。
实例109
Figure BDA0003506712340003032
1-(5-氟-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
依实例32之另一种合成法之相同制程，于步骤1中使用2,4-二氯-5-氟嘧啶替代2,4,5-三氯嘧啶。LC-MS(ESI)m/z:450[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(d,J＝5.8Hz,1H),7.90(d,J＝19.6Hz,1H),7.85(d,J＝8.2Hz,1H),7.50(s,1H),7.40(d,J＝7.4Hz,1H),7.10(t,J＝7.6Hz,1H),6.98(t,J＝7.4Hz,1H),6.78(s,1H),4.53(dt,J＝10.5,5.3Hz,1H),4.41-4.31(m,1H),4.27(dd,J＝9.8,5.7Hz,1H),3.77(s,3H),3.41(s,2H),2.82(t,J＝5.5Hz,2H),2.64(t,J＝5.9Hz,2H),2.35(s,3H)。
实例110
Figure BDA0003506712340003041
1-(5-氰基-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
依实例32之另一种合成法之相同制程，于步骤1中使用2,4-二氯嘧啶-5-甲腈替代2,4,5-三氯嘧啶。LC-MS(ESI)m/z:457[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.13(s,1H),8.54(s,1H),7.41(d,J＝65.9Hz,2H),6.98(d,J＝75.7Hz,3H),4.45(s,1H),4.20(s,2H),3.70(s,3H),3.16-3.08(m,2H),2.91(s,2H),2.65(s,2H),2.35(s,3H)。
实例111
Figure BDA0003506712340003042
1-(5-氯-2-((6-异丙氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
依实例32之另一种合成法之相同制程，于步骤2中使用Int.W9替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z:494[M+H]+。
实例112
Figure BDA0003506712340003051
1-(5-(二氟甲基)-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯
步骤1：于0℃，在含2,4-二氯嘧啶-5-甲醛(300mg,1.70mmol)之DCM(5mL)溶液中滴加N-乙基-N-(三氟-硫烷基)乙烷胺(1.37g,8.48mmol)。反应混合物于25℃搅拌16小时，冷却至0℃，使用饱和碳酸氢钠水溶液碱化至pH～8，及使用二氯甲烷萃取(5mL x3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供2,4-二氯-5-(二氟甲基)嘧啶之淡黄色油(303mg,85％产率)。LC-MS(ESI)m/z:335[M+H]+。
步骤2：依条件A3，使用Int.E17(115.8mg,0.653mmol)及2,4-二氯-5-(二氟甲基)嘧啶(130mg,0.653mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1)后以提供1-(2-氯-5-(二氟甲基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯(160mg,68.5％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:340[M+H]+。
步骤3：依条件B3，使用1-(2-氯-5-(二氟甲基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯(159mg,0.445mmol)及Int.W1(102.6mg,0.534mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1)后以提供1-(5-(二氟甲基)-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯(30mg,10.9％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:496[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.44(s,1H),8.39(s,1H),7.58(s,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J＝7.4Hz,1H),7.12(d,J＝8.6Hz,1H),7.00(t,J＝7.3Hz,1H),6.84(d,J＝10.3Hz,1H),4.47-4.39(m,2H),4.34(t,J＝9.6Hz,1H),3.76(s,3H),3.69(s,3H),3.56(s,2H),2.88(m,4H),2.49-2.46(s,3H)。
实例113
Figure BDA0003506712340003061
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-3-羧酸
依实例32之另一种合成法之相同制程，于步骤1中使用1H-吲唑-3-羧酸甲基酯替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z:465[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),8.63(s,1H),8.38-8.22(m,2H),7.99(d,J＝8.1Hz,1H),7.55-7.28(m,3H),6.83(s,1H),3.77(s,3H),3.39-3.38(m,2H),2.82(d,J＝5.3Hz,2H),2.61(t,J＝5.7Hz,2H),2.33(s,3H)。
实例34
Figure BDA0003506712340003062
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酰胺
步骤1：依条件A1，使用1H-吲哚-3-羧酸(500mg,3.10mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(625.99mg,3.41mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH,50/1)后以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚-3-羧酸(200mg,19.88％产率，95％纯度)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:308.1[M+H]+。
步骤2&3：依实例33步骤1&2之条件之相同制程，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚-3-羧酸替代1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸。LC-MS(ESI)m/z:463.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),8.71(s,1H),8.49(s,1H),8.29-8.15(m,1H),7.78-7.64(m,2H),7.39(s,1H),7.31-7.21(m,2H),7.11(s,1H),6.79(s,1H),3.79(s,3H),3.33(d,J＝5.8Hz,2H),2.85-2.70(m,2H),2.54(t,J＝5.9Hz,2H),2.29(s,3H)。
实例114
Figure BDA0003506712340003071
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯
实例35
Figure BDA0003506712340003072
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸
步骤1：依条件A1，使用1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(1g,5.71mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(1.15g,6.28mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝100/1)后以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(800mg,43.5％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:322[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(200mg,0.621mmol)及Int.W1(143.2mg,0.745mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝100/1)后以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(138mg,44.2％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:478[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.95(s,1H),8.72(s,1H),8.48(s,1H),8.09(dd,J＝6.4,2.3Hz,1H),7.76(dd,J＝6.6,2.1Hz,1H),7.47-7.24(m,3H),6.79(s,1H),3.87(s,3H),3.78(s,3H),3.33(s,2H),2.78(t,J＝5.7Hz,2H),2.55(d,J＝5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
步骤3：取含1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(454mg,0.950mmol)、AcOH(456mg,7.60mmol)及HCl水溶液(6N,36mL)混合物于50℃搅拌16小时，经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.04％甲酸)后以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸(33.1mg,7.5％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:464.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,1H),8.69(s,1H),8.33(d,J＝20.1Hz,2H),8.18(s,1H),7.75(d,J＝7.8Hz,1H),7.37(s,1H),7.28(s,2H),6.80(s,1H),3.79(s,3H),3.34-3.33(m,2H),2.78(s,2H),2.55(s,2H),2.30(s,3H)。
实例116
Figure BDA0003506712340003091
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
实例117
Figure BDA0003506712340003092
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸
步骤1：取含Int.E18(158mg,0.826mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(197.0mg,1.07mmol)及DIPEA(427.2mg,3.30mmol)之正丁醇(4mL)混合物于100℃搅拌12小时，冷却至室温，及使用DCM/MeOH(10/1,100mL)与水(30mL)稀释。分离水相，及使用DCM/MeOH萃取(10/1,30mL x3)。合幷之有机相使用盐水(40mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE：30％)。经硅胶快速管柱层析法纯化后(EA/PE：30％)后以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯(257mg,89.2％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:338[M+H]+。
步骤2：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯(50mg,0.148mmol)、Int.W1(40.6mg,0.177mmol)及TsOH.H2O(28.1mg,0.148mmol)之异丙醇(3mL)混合物于120℃搅拌12小时，冷却至室温，使用饱和NaHCO3水溶液(4mL)中和，及使用DCM萃取(20mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025％NH3·H2O)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯(20mg,27.4％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:494[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.08(s,1H),7.49(s,1H),7.35(dd,J＝12.7,7.8Hz,2H),7.16(t,J＝7.8Hz,1H),7.00(t,J＝7.5Hz,1H),6.75(s,1H),4.75(d,J＝10.8Hz,1H),4.09(d,J＝10.8Hz,1H),3.76(s,3H),3.63(s,3H),3.29(s,2H),2.77(t,J＝5.5Hz,2H),2.56(d,J＝5.8Hz,2H),2.31(s,3H),1.56(s,3H)。
步骤3：取含1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯(20mg,0.040mmol)及氢氧化锂水溶液(2N,0.1mL)之THF(2.5mL)混合物于室温搅拌3小时，使用甲酸调整至pH～5，及使用DCM萃取(15mL x3)。合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％甲酸)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸之白色固体(10.7mg,55％产率)。LC-MS(ESI)m/z:480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.04(s,1H),7.52(s,1H),7.36(t,J＝8.0Hz,2H),7.15(t,J＝7.7Hz,1H),6.99(t,J＝7.4Hz,1H),6.76(s,1H),4.76(d,J＝10.6Hz,1H),4.04(d,J＝10.6Hz,1H),3.35(s,2H),2.79(t,J＝5.5Hz,2H),2.61(t,J＝5.7Hz,2H),2.34(s,3H),1.53(s,3H)。
实例118&119
Figure BDA0003506712340003111
(R)-1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸&(S)-1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸
由消旋性1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸经过对掌性-分离后合成。未确认立体化学，因此自由指定两种产物。
LC-MS(ESI)m/z:480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.00(s,1H),7.52(s,1H),7.37(t,J＝7.3Hz,2H),7.13(t,J＝7.7Hz,1H),6.99(t,J＝7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.77(d,J＝10.7Hz,1H),4.02(d,J＝10.7Hz,1H),3.77(s,3H),3.11-3.01(m,2H),2.77(d,J＝5.9Hz,2H),2.57(t,J＝5.7Hz,2H),2.32(s,3H),1.52(s,3H)。对掌性-HPLC滞留时间：1.079min；ee值：>99％。
LC-MS(ESI)m/z:480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.02(s,1H),7.53(s,1H),7.37(t,J＝7.4Hz,2H),7.14(t,J＝8.0Hz,1H),7.00(t,J＝7.5Hz,1H),6.76(s,1H),4.77(d,J＝10.7Hz,1H),4.04(d,J＝10.5Hz,1H),3.77(s,3H),3.07-2.97(m,2H),2.79(s,2H),2.59(d,J＝5.9Hz,2H),2.33(s,3H),1.53(s,3H)。对掌性-HPLC滞留时间：1.501min；ee值：>99％。
SFC分离条件：
仪器：SFC-150(Thar,Waters)
管柱：IG 20*250mm,10um(Daicel)
管柱温度：35℃
移动相：CO2/EtOH(0.5％甲醇/氨)＝45/55
流速：120g/min
背压：100bar
检测波长：214nm
循环时间：3min
实例120
Figure BDA0003506712340003121
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酰胺
步骤1：依条件A3，使用Int.E19(148mg,0.798mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(146.4mg,0.798mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE:1/5)后以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酰胺(199mg,69.5％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:323[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酰胺(199mg,0.585mmol)及Int.W1(135.0mg,0.702mmol)，经过制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3)后以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酰胺(82.5mg,28.3％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:479[M+H]+。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),7.99(s,1H),7.52(s,1H),7.46(d,J＝7.5Hz,1H),7.37(d,J＝8.1Hz,1H),7.28(s,1H),7.18(s,1H),7.13(t,J＝7.7Hz,1H),7.00(t,J＝7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.81(d,J＝10.4Hz,1H),3.97(d,J＝10.4Hz,1H),3.77(s,3H),3.29(d,J＝5.1Hz,2H),2.77(t,J＝5.7Hz,2H),2.55(t,J＝5.8Hz,2H),2.31(s,3H),1.53(s,3H)。
实例121
Figure BDA0003506712340003131
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-甲腈
依实例99之相同制程，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酰胺替代1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酰胺。LC-MS(ESI)m/z:461[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.33(s,1H),8.16(s,1H),7.60-7.43(m,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.26(t,J＝7.7Hz,1H),7.09(t,J＝7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.65(d,J＝10.9Hz,1H),4.27(d,J＝10.9Hz,1H),3.77(d,J＝5.8Hz,3H),3.29(s,2H),2.77(t,J＝5.7Hz,2H),2.55(t,J＝5.8Hz,2H),2.31(s,3H),1.73(s,3H)。
实例122
Figure BDA0003506712340003132
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,3-二甲基吲哚啉-3-羧酰胺
步骤1：依条件A3，使用Int.E20(68mg,0.357mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(72.1mg,0.393mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH:10/1)后以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,3-二甲基吲哚啉-3-羧酰胺(72mg,59.7％产率)之无色油。LC-MS(ESI)m/z:337[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,3-二甲基吲哚啉-3-羧酰胺(72mg,0.214mmol)及Int.W1(41.1mg,0.214mmol)，经过制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％FA)后以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,3-二甲基吲哚啉-3-羧酰胺(45.6mg,43.3％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:493[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(d,J＝32.1Hz,1H),8.02(s,1H),7.70(s,1H),7.51(s,1H),7.38(t,J＝7.2Hz,2H),7.14(t,J＝7.1Hz,1H),7.01(d,J＝6.7Hz,1H),6.75(s,1H),4.81(d,J＝10.3Hz,1H),3.99(d,J＝10.3Hz,1H),3.77(s,3H),3.31(s,2H),2.78(s,2H),2.58(s,5H),2.32(s,3H),1.61(d,J＝64.4Hz,3H)。
实例123
Figure BDA0003506712340003141
(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇
步骤1：依条件A3，使用Int.E21(60mg,0.382mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(70mg,0.382mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH:10/1)后以提供(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇(85mg,64.6％产率)之黄色油。LC-MS(ESI)m/z:310[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇(85mg,0.273mmol)及Int.W1(62.9mg,0.327mmol)，经过制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％FA)后以提供(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇(22.4mg,17.6％)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:466[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.97(s,1H),7.54(s,1H),7.37(d,J＝8.1Hz,1H),7.21(d,J＝7.0Hz,1H),7.10(s,1H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.75(s,1H),5.01(t,J＝5.3Hz,1H),4.26(d,J＝10.5Hz,1H),3.87(d,J＝10.5Hz,1H),3.77(s,3H),3.39-3.35(m,2H),3.30-3.28(m,2H),2.80-2.75(m,2H),2.58-2.54(m,2H),2.31(s,3H),1.29(s,3H)。
实例124
Figure BDA0003506712340003151
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-(羟基甲基)吲哚啉-3-羧酸
依实例117之相同制程，于步骤1中使用Int.E37替代Int.E18。LC-MS(ESI)m/z:498[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.21(s,1H),8.00(d,J＝9.3Hz,1H),7.51(s,1H),7.39(t,J＝8.0Hz,2H),7.12(t,J＝7.7Hz,1H),6.95(t,J＝7.4Hz,1H),6.76(s,1H),4.75(d,J＝10.7Hz,1H),4.24(d,J＝10.7Hz,1H),3.86(d,J＝10.4Hz,2H),3.77(s,3H),3.49(br,1H),3.33(br,2H),2.78(t,J＝5.5Hz,2H),2.59(t,J＝5.7Hz,2H),2.33(s,3H)。
实例125
Figure BDA0003506712340003161
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-羧酸
依实例117之相同制程，于步骤1中使用Int.E27替代Int.E18。LC-MS(ESI)m/z:498[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.05(s,1H),7.47(s,1H),7.39(dd,J＝8.8,4.7Hz,1H),7.18(dd,J＝8.5,2.7Hz,1H),6.95(td,J＝9.0,2.7Hz,1H),6.77(s,1H),4.78(d,J＝10.7Hz,1H),4.06(d,J＝10.7Hz,1H),3.76(s,4H),2.80(d,J＝5.7Hz,2H),2.67(t,J＝5.8Hz,2H),2.51(s,1H),2.36(d,J＝12.7Hz,3H),1.52(s,3H)。
实例126
Figure BDA0003506712340003162
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-羧酸
依实例117之相同制程，于步骤1中使用Int.E28替代Int.E18。LC-MS(ESI)m/z:498[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.20(s,1H),7.41(s,1H),7.37-7.27(m,1H),7.18(d,J＝10.4Hz,1H),6.75(s,2H),4.81(d,J＝10.3Hz,1H),4.08(d,J＝10.4Hz,1H),3.76(s,3H),3.35(s,2H),2.78(s,2H),2.60(s,2H),2.33(s,3H),1.50(s,3H)。
实例127
Figure BDA0003506712340003171
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸
依实例117之相同制程，于步骤2中使用Int.W11替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z:466[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,1H),8.14(s,1H),7.60(s,1H),7.48(s,1H),7.46(d,J＝6.8Hz,1H),7.24(t,J＝7.6Hz,1H),7.17(t,J＝7.2Hz,1H),7.03(s,1H),5.01(d,J＝11.0Hz,1H),4.30(d,J＝11.0Hz,1H),4.14(d,J＝6.3Hz,2H),3.82(s,3H),3.42(t,J＝6.3Hz,2H),3.04(t,J＝6.1Hz,2H),1.60(s,3H)。
实例128
Figure BDA0003506712340003172
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-基)乙酸
依实例117之相同制程，于步骤1中使用Int.E29替代Int.E18。LC-MS(ESI)m/z:480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝21.1Hz,1H),7.98(s,1H),7.55(s,1H),7.30(dd,J＝22.6,7.7Hz,2H),7.10(t,J＝7.7Hz,1H),6.94(t,J＝7.4Hz,1H),6.74(s,1H),4.56-4.36(m,1H),3.98(dd,J＝10.6,7.0Hz,1H),3.77(s,3H),3.69(s,2H),3.29(s,2H),2.84-2.70(m,3H),2.56(t,J＝5.8Hz,2H),2.31(s,3H)。
实例129
Figure BDA0003506712340003181
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸
实例130
Figure BDA0003506712340003182
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸异丙基酯
实例131
Figure BDA0003506712340003183
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸2-乙基丁基酯
步骤1：依条件A1，使用2-(1H-吲哚-3-基)乙酸(300mg,1.71mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(314.1mg,1.71mmol)，经逆相层析法纯化后以提供2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(93mg,16.0％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:322[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(93mg,0.274mmol)及Int.W1(66.6mg,0.329mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝10/1)后以提供2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸异丙基酯(120mg,80.0％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:520[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),8.62(s,1H),7.86-7.77(m,2H),7.57(dd,J＝6.0,2.8Hz,1H),7.43(s,1H),7.21(dd,J＝6.0,3.1Hz,2H),6.80(s,1H),4.94(dt,J＝12.5,6.3Hz,1H),3.80(s,2H),3.79(s,3H),3.32(s,2H),2.78(t,J＝5.5Hz,2H),2.55(t,J＝5.9Hz,2H),2.30(s,3H),1.21(d,J＝6.3Hz,6H)。
于步骤2中，使用2-乙基丁烷-1-醇作为溶剂，得到2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸2-乙基丁基酯。LC-MS(ESI)m/z:562[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,1H),8.63(s,1H),8.36(s,1H),7.85-7.74(m,2H),7.60-7.52(m,1H),7.45(s,1H),7.28-7.14(m,2H),6.78(d,J＝12.8Hz,1H),3.99(d,J＝5.8Hz,2H),3.85(s,2H),3.79(s,3H),3.31(s,2H),2.78(t,J＝5.6Hz,2H),2.55(t,J＝5.8Hz,2H),2.30(d,J＝8.2Hz,3H),1.45(dd,J＝12.4,6.2Hz,1H),1.29-1.23(m,4H),0.80(t,J＝7.4Hz,6H)。
步骤3：依实例117步骤3之相同条件，使用2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸异丙基酯(142mg,0.273mmol)，经过制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3)后以提供2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸之白色固体(57.9mg,44.4％产率)。LC-MS(ESI)m/z:480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H),8.64(s,1H),7.80(d,J＝6.8Hz,2H),7.55(s,1H),7.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.22(d,J＝7.6Hz,1H),6.91(s,1H),3.92(s,2H),3.83(s,3H),3.75(s,2H),3.17(s,2H),2.98(s,2H),2.69(s,3H)。
实例132
Figure BDA0003506712340003201
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙基酯
在含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(60mg,0.126mmol)之乙醇(1mL)溶液中滴加SOCl2(29.9mg,0.251mmol)。反应混合物于85℃搅拌3小时，冷却至室温，使用饱和碳酸氢钠水溶液碱化至pH 8，及使用乙酸乙酯萃取(10mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(10mM NH4HCO3&0.025％NH3·H2O/乙腈)以提供2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙基酯之淡黄色固体(7.8mg,12％产率)。LC-MS(ESI)m/z:506[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),8.62(s,1H),7.83(s,1H),7.82-7.76(m,1H),7.64-7.53(m,1H),7.43(s,1H),7.28-7.16(m,2H),6.80(s,1H),4.11(q,J＝7.1Hz,2H),3.84(s,2H),3.79(s,3H),3.33(s,2H),2.78(t,J＝5.5Hz,2H),2.55(t,J＝5.8Hz,2H),2.30(s,3H),1.20(t,J＝7.1Hz,3H)。
实例133
Figure BDA0003506712340003211
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰胺
在含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(30mg,0.060mmol)、氯化铵(31.9mg,0.596mmol)、及HATU(34.0mg,0.089mmol)之DMF(1mL)混合物中添加DIPEA(115.6mg,0.894mmol)。反应混合物于25℃搅拌16小时，经制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025％NH3·H2O)，产生2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰胺(9.1mg,32.0％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:477[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.61(s,1H),7.81(dd,J＝6.3,3.0Hz,1H),7.77(s,1H),7.62(dd,J＝5.5,3.3Hz,1H),7.51(s,1H),7.45(s,1H),7.20(dd,J＝6.0,3.1Hz,2H),6.94(s,1H),6.80(s,1H),3.79(s,3H),3.54(s,2H),3.30(s,1H),2.78(d,J＝5.6Hz,2H),2.56(d,J＝5.8Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例134
Figure BDA0003506712340003221
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙腈
于0℃，在含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰胺(50mg,0.105mmol)及吡啶(33.2mg,0.419mmol)之DCM(2mL)溶液中滴加三氟乙酸酐(44.0mg,0.210mmol)。混合物于0℃搅拌一小时及于室温搅拌6小时，使用HCl水溶液(1N,10mL)中止反应，及使用DCM萃取(20mL x 3)。有机相使用盐水(15mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(0.1％FA/MeCN)以提供2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙腈(19.3mg,39.7％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:459[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,1H),8.65(s,1H),8.35(s,2H),7.89(s,1H),7.81(dd,J＝6.3,2.9Hz,1H),7.69(dd,J＝6.1,2.8Hz,1H),7.42(s,1H),7.28(dd,J＝6.1,3.2Hz,2H),6.80(s,1H),4.18(s,2H),3.79(s,3H),3.33(s,2H),2.78(t,J＝5.6Hz,2H),2.55(t,J＝5.8Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例135
Figure BDA0003506712340003222
N-(4-(3-((2H-四唑-5-基)甲基)-1H-吲哚-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例100之相同制程，使用2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙腈替代1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈。LC-MS(ESI)m/z:502[M+H]+。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,1H),8.63(s,1H),8.15(s,1H),7.75(d,J＝4.8Hz,2H),7.56(d,J＝7.6Hz,1H),7.47(s,1H),7.25-7.16(m,2H),6.84(s,1H),4.37(s,2H),3.80(s,3H),3.64(s,2H),2.87(s,4H),2.52(s,3H)。
实例136
Figure BDA0003506712340003231
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)-N-甲基乙酰胺
依实例133之相同制程，使用甲基胺替代氯化铵。LC-MS(ESI)m/z:491[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.68(s,1H),8.62(s,1H),7.97(s,1H),7.80(dd,J＝6.2,3.0Hz,1H),7.76(s,1H),7.61(dd,J＝5.6,3.1Hz,1H),7.44(s,1H),7.20(dd,J＝6.0,3.1Hz,2H),6.79(s,1H),3.79(s,3H),3.56(s,2H),3.30(s,2H),2.78(d,J＝5.1Hz,2H),2.59(d,J＝4.6Hz,3H),2.56(d,J＝5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例137
Figure BDA0003506712340003241
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)-N-(氰基甲基)乙酰胺
依实例133之相同制程，使用2-胺基乙腈硫酸替代氯化铵。LC-MS(ESI)m/z:516[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,1H),8.69(s,1H),8.62(s,1H),7.84-7.78(m,2H),7.63-7.53(m,1H),7.43(s,1H),7.25-7.15(m,2H),6.80(s,1H),4.15(d,J＝5.5Hz,2H),3.79(s,3H),3.67(s,2H),3.30(s,2H),2.79(s,2H),2.56(d,J＝5.5Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例138
Figure BDA0003506712340003242
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-1H-吲哚-3-基)乙酸
依实例129之相同制程，使用2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙酸替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z:496[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(d,J＝28.9Hz,1H),8.61(s,1H),7.90(s,1H),7.81(dd,J＝9.0,4.5Hz,1H),7.46-7.24(m,2H),7.04(td,J＝9.1,2.4Hz,1H),6.81(s,1H),3.79(s,3H),3.72(s,2H),3.35(s,2H),2.80(d,J＝5.4Hz,2H),2.59(t,J＝5.7Hz,2H),2.32(s,3H)。
实例139
Figure BDA0003506712340003251
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-1H-吲哚-3-基)乙酸
依实例129之相同制程，使用2-(6-氟-1H-吲哚-3-基)乙酸替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z:496[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H),8.61(s,1H),8.24(d,J＝10.5Hz,1H),7.82(s,1H),7.67-7.52(m,2H),7.38(s,1H),7.08(td,J＝9.3,2.4Hz,1H),6.79(s,1H),3.79(s,3H),3.71(s,2H),3.34(s,2H),2.79(t,J＝5.6Hz,2H),2.56(t,J＝5.8Hz,2H),2.30(s,3H)。
实例140
Figure BDA0003506712340003252
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5,6-二氟-1H-吲哚-3-基)乙酸
依实例129之相同制程，使用2-(5,6-二氟-1H-吲哚-3-基)乙酸替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z:514[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.84(s,1H),8.61(s,1H),8.23(s,1H),7.92(s,1H),7.88-7.79(m,1H),7.61(dd,J＝10.8,8.0Hz,1H),7.35(s,1H),6.79(d,J＝17.2Hz,1H),3.78(s,3H),3.72(s,2H),3.35(s,2H),2.80(t,J＝5.3Hz,2H),2.57(s,2H),2.32(d,J＝13.1Hz,3H)。
实例141
Figure BDA0003506712340003261
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)乙酸
依实例129之相同制程，使用2-(1H-吲唑-3-基)乙酸替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z:479[M+H]+。
实例142
Figure BDA0003506712340003262
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)丙酸
依实例129之相同制程，使用Int.E30替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z:492[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,1H),8.62(s,1H),8.26(s,1H),7.80-7.74(m,1H),7.72(s,1H),7.65(d,J＝8.6Hz,1H),7.44(s,1H),7.24-7.15(m,2H),6.79(s,1H),3.93(d,J＝7.1Hz,1H),3.78(s,3H),3.34(s,2H),2.77(d,J＝5.5Hz,2H),2.56(t,J＝5.8Hz,2H),2.30(s,3H),1.49(d,J＝7.1Hz,3H)。
实例143
Figure BDA0003506712340003263
1-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)环丙烷-1-羧酸
依实例129之相同制程，使用Int.E31替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z:504[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.68(s,1H),8.62(s,1H),8.27(s,1H),7.81-7.75(m,1H),7.72(s,1H),7.59-7.53(m,1H),7.44(s,1H),7.23-7.18(m,2H),6.79(s,1H),3.79(s,3H),3.35(s,2H),2.78(t,J＝5.5Hz,2H),2.56(t,J＝5.7Hz,2H),2.31(s,3H),1.49(d,J＝2.7Hz,2H),1.13(d,J＝2.1Hz,2H)。
实例144
Figure BDA0003506712340003271
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)-3,3,3-三氟丙酸
步骤1：依条件A1，使用Int.E32(200mg,0.822mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(226.3mg,1.23mmol)，经逆相层析法纯化(MeCN/0.03％TFA)后以提供2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)-3,3,3-三氟丙酸(190mg,47.4％产率，80％纯度)。LC-MS(ESI)m/z:390[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用Int.W1(112.4mg,0.584mmol)及2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)-3,3,3-三氟丙酸(190mg,0.487mmol)，经过制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％HCOOH)后以提供1-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)环丙烷-1-羧酸之白色固体(9.3mg,3.4％产率)。LC-MS(ESI)m/z:546[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82(s,1H),8.65(s,1H),8.17(s,1H),7.82(s,1H),7.73(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(d,J＝7.7Hz,1H),7.45(s,1H),7.25-7.19(m,2H),6.82(s,1H),4.63(d,J＝9.0Hz,1H),3.77(s,3H),3.63(br,2H),2.88(br,5H),2.56(br,2H)。
实例145
Figure BDA0003506712340003281
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯实例146
Figure BDA0003506712340003282
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
步骤1：在含Int.E33(67mg,0.248mmol)之n-BuOH(3mL)混合物中慢慢添加2,4,5-三氯嘧啶(45.5mg,0.248mmol)及DIPEA(96.19mg,0.744mmol)。混合物于100℃搅拌16小时，使用冰-冷水(20mL)中止反应，及使用EA萃取(30mL x 3)。有机相使用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/PE＝0-100％)，给予2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(80mg,83.3％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:352[M+H]+。
步骤2：在含2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(80mg,0.227mmol)之i-PrOH(5mL)混合物中慢慢添加Int.W1(51.5mg,0.227mmol)与TsOH·H2O(43.2mg,0.227mmol)。混合物于100℃搅拌16小时，使用饱和NaHCO3水溶液(10mL)中止反应，及使用DCM/MeOH萃取(v/v＝10/1,30mL x 3)。有机相使用盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝0-15％)，给予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(70mg,42.5％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:508[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),7.98(s,1H),7.59(s,1H),7.30(t,J＝8.8Hz,2H),7.12(s,1H),6.98(s,1H),6.74(s,1H),4.38(d,J＝10.7Hz,1H),4.05(d,J＝10.7Hz,1H),3.78(s,3H),3.50(s,3H),3.27(s,2H),2.78(dd,J＝10.3,4.8Hz,3H),2.68(s,1H),2.55(t,J＝5.7Hz,2H),2.30(s,3H),1.36(s,3H)。
步骤3：取含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(70mg,0.096mmol)及LiOH水溶液(2N,1mL)之THF(5mL)混合物于室温搅拌16小时，使用甲酸调整至pH～5，及使用DCM萃取(30mLx3)。合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025％NH3.H2O)纯化，给予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(23.0mg,46.2％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:494[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),7.99(s,1H),7.57(s,1H),7.29(dd,J＝17.2,7.6Hz,2H),7.11(t,J＝7.3Hz,1H),6.98(d,J＝7.3Hz,1H),6.75(s,1H),4.42(d,J＝10.7Hz,1H),4.02(d,J＝10.6Hz,1H),3.78(s,3H),3.30(s,2H),2.78(s,2H),2.69(d,J＝15.4Hz,1H),2.58(d,J＝6.1Hz,3H),2.32(s,3H),1.34(s,3H)。
实例147&148
Figure BDA0003506712340003301
(R)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸&(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
方法1：
步骤1：由2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(157mg)经过SFC对掌性分离以提供(R)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯及(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(分别为67mg,63mg)。未确认立体化学，因此自由指定两种产物。
LC-MS(ESI)m/z:508[M+H]+。对掌性-HPLC滞留时间：1.829min；
ee值：98.3％。
LC-MS(ESI)m/z:508[M+H]+。对掌性-HPLC滞留时间：3.427min；
ee值：>99％。
SFC分离条件：
仪器：SFC-80(Thar,Waters)
管柱：AD-H 20*250mm,10um(Daicel)
管柱温度：35℃
移动相：CO2/EtOH(0.2％甲醇/氨)＝50/50
流速：80g/min
背压：100bar
检测波长：214nm
循环时间：6.9min
步骤2：依实例146步骤3之相同条件，分别水解(R)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯及(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯以提供(R)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸及(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(分别为17.6mg，33.8mg)。未确认立体化学，因此自由指定两种产物。
LC-MS(ESI)m/z:494[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.00(s,1H),7.57(s,1H),7.30(dd,J＝13.7,7.7Hz,2H),7.11(t,J＝7.6Hz,1H),6.97(t,J＝7.3Hz,1H),6.75(s,1H),4.42(d,J＝10.7Hz,1H),4.02(d,J＝10.8Hz,1H),3.78(s,3H),3.30(s,2H),2.78(s,2H),2.69(d,J＝15.4Hz,1H),2.62-2.54(m,3H),2.32(s,3H),1.34(s,3H)。对掌性-HPLC滞留时间：1.384min；ee值：>99％。LC-MS(ESI)m/z:494[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.00(s,1H),7.56(s,1H),7.29(dd,J＝13.6,7.4Hz,2H),7.10(t,J＝7.1Hz,1H),6.97(t,J＝7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.41(d,J＝10.8Hz,1H),4.02(d,J＝10.8Hz,1H),3.77(s,3H),3.29(s,2H),2.77(t,J＝5.6Hz,2H),2.69(d,J＝15.4Hz,1H),2.57(dd,J＝13.1,7.1Hz,3H),2.30(d,J＝11.1Hz,3H),1.34(s,2H)。对掌性-HPLC滞留时间：1.132min；ee值：>99％。
方法2：
步骤1：由2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯经过SFC对掌性分离以提供(R)-2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯及(S)-2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯。未确认立体化学，因此自由指定两种产物。
LC-MS(ESI)m/z:352[M+H]+。对掌性-HPLC滞留时间：1.191min；
ee值：>99％。
LC-MS(ESI)m/z:352[M+H]+。对掌性-HPLC滞留时间：1.519min；
ee值：>99％。
SFC分离条件：
仪器：SFC-80(Thar,Waters)
管柱：AD-H 20*250mm,10um(Daicel)
管柱温度：35℃
移动相：CO2/异丙醇(0.2％甲醇/氨)＝87/13
流速：80g/min
背压：100bar
检测波长：214nm
循环时间：2.8min
(以其中一种立体异构物作为步骤2&3之代表性实例)
步骤2：取含Int.W1(1.36g,5.96mmol)、(S)-2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(2.1g,5.96mmol)及TsOH.H2O(1.13g,5.96mmol)之第三丁醇(25mL)混合物于100℃搅拌12小时，冷却至室温，及倒至饱和NaHCO3水溶液(10mL)中，及使用EA萃取(30mL x 3)。有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝20:1)以提供(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(1.8g,56.3％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:508[M+H]+。
步骤3：取含氢氧化锂水合物(264mg,6.3mmol)之水(5mL)溶液及(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(1.6g,3.15mmol)之MeOH(5mL)混合物于室温搅拌16小时，及使用乙酸酸化至pH～3。所得混合物经制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3)以提供(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(839.3mg,53.9％产率)之浅黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:494[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.02(s,1H),7.63(s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.16(t,J＝8.0Hz,1H),7.02(t,J＝8.0Hz,1H),6.80(s,1H),4.48(d,J＝10.8Hz,1H),4.08(d,J＝10.8Hz,1H),3.83(s,3H),2.83(t,J＝5.6Hz,2H),2.74(d,J＝15.2Hz,1H),2.66–2.59(m,3H),2.37(s,3H),1.40(s,3H)。对掌性-HPLC滞留时间：1.132min；ee值：>99％。
实例149
Figure BDA0003506712340003341
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸乙基酯
依实例132之相同制程，使用2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸替代2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z:522[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),7.97(s,1H),7.57(s,1H),7.36-7.24(m,2H),7.12(dd,J＝11.1,4.3Hz,1H),6.98(s,1H),6.74(s,1H),4.41(d,J＝10.8Hz,1H),4.05(d,J＝10.7Hz,1H),3.96(dd,J＝7.1,1.5Hz,2H),3.77(d,J＝3.3Hz,3H),3.27(s,2H),2.75(dd,J＝10.1,7.2Hz,3H),2.65(s,1H),2.55(d,J＝5.7Hz,2H),2.30(s,3H),1.35(s,3H),1.06(t,J＝7.1Hz,3H)。
实例150
Figure BDA0003506712340003342
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
步骤1：取含Int.E34(295mg,1.32mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(266.6mg,1.45mmol)及DIPEA(170.5mg,1.32mmol)之n-BuOH(2mL)溶液于100℃搅拌2小时，冷却至室温，倒至水中，使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/4)，给予2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(416mg,85.0％产率)之灰白色固体。LC-MS(ESI)m/z:370[M+H]+。
步骤2：取含2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(100mg,0.270mmol)、Int.W1(62.3mg,0.324mmol)及TsOH.H2O(51.3mg,0.270mmol)之i-PrOH(2mL)溶液于100℃搅拌16小时，冷却至室温，及使用饱和NaHCO3水溶液中和至pH～8。混合物使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/4)，给予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(186mg,80.7％产率，60％纯度)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:526[M+H]+。
步骤3：取含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(186mg,0.354mmol)及LiOH水溶液(2N,3.5mL)之THF(8mL)混合物于室温搅拌一夜，使用甲酸调整至pH～5，及使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,10mL x 3)。合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025％NH3·H2O)，给予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(57.6mg,31.8％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:512[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.02(s,1H),7.51(s,1H),7.34(dd,J＝8.7,4.7Hz,1H),7.20(dd,J＝8.6,2.7Hz,1H),6.89(td,J＝9.0,2.7Hz,1H),6.75(s,1H),4.44(d,J＝10.9Hz,1H),4.06(d,J＝10.8Hz,1H),3.77(s,3H),3.28(s,2H),2.78(t,J＝5.7Hz,2H),2.71(d,J＝15.6Hz,1H),2.62(s,1H),2.59-2.55(m,2H),2.31(s,3H),1.33(s,3H)。
实例151
Figure BDA0003506712340003361
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
步骤1：取含Int.E35(78mg,0.349mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(64.1mg,0.349mmol)及DIPEA(135.2mg,1.05mmol)之n-BuOH(2mL)溶液于100℃搅拌16小时，冷却至室温，倒至水中，及使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/10)，给予2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(100mg,73.4％产率)之淡黄色油。LC-MS(ESI)m/z:370[M+H]+。
步骤2：取含2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(82.7mg,0.232mmol)、Int.W1(63.8mg,0.279mmol)及TsOH.H2O(53.0mg,0.279mmol)之i-PrOH(2mL)溶液于120℃搅拌16小时，冷却至室温，及使用饱和NaHCO3水溶液中和至pH～8。混合物使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝10/1)，给予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(81mg,62.9％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:526[M+H]+。
步骤3：取含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(81mg,0.154mmol)及LiOH水溶液(1N,4mL)之二
Figure BDA0003506712340003371
烷(4mL)混合物于室温搅拌一夜，使用甲酸调整至pH～5，及使用EA萃取(30mL x 3)。合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025％NH3.H2O)，给予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(29.8mg,37.8％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:512[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.17(s,1H),7.46(s,1H),7.31-7.23(m,1H),7.14(d,J＝10.0Hz,1H),6.75(s,2H),4.46(d,J＝10.7Hz,1H),4.07(d,J＝10.6Hz,1H),3.77(s,3H),3.31(s,2H),2.77(s,2H),2.69(d,J＝15.6Hz,1H),2.58(d,J＝14.8Hz,3H),2.31(s,3H),1.33(s,3H)。
实例152&153
Figure BDA0003506712340003381
(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸&(R)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
取消旋性2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸经过对掌性-分离后合成。未确认立体化学，因此自由指定两种产物。
LC-MS(ESI)m/z:512[M+H]+。对掌性-HPLC滞留时间：11.913min；
ee值：80.4％。
LC-MS(ESI)m/z:512[M+H]+。对掌性-HPLC滞留时间：16.631min；
ee值：98.9％。
SFC分离条件：
仪器：Gilson-281
管柱：IG 20*250mm,10um
移动相：正己烷(0.1％二甲基胺)/EtOH(0.1％二乙基胺)＝65:35
流速：40mL/min
循环时间：22min
实例154
Figure BDA0003506712340003382
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5,6-二氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
依实例146之相同制程，使用Int.E36替代Int.E33。LC-MS(ESI)m/z:530[M+H]+。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.20(s,1H),7.45-7.36(m,3H),6.75(s,1H),4.46(d,J＝10.8Hz,1H),4.08(d,J＝10.7Hz,1H),3.76(s,3H),3.27(s,2H),2.77(t,J＝5.5Hz,2H),2.70(d,J＝15.6Hz,1H),2.61(s,1H),2.56(dd,J＝12.0,6.2Hz,2H),2.29(s,3H),1.31(s,3H)。
实例155
Figure BDA0003506712340003391
2-(1-(5-氯-2-((2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-3-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
依实例146之相同制程，于步骤2中使用Int.W4替代Int.W1，及省略步骤3，因为甲基酯已于步骤2中水解。LC-MS(ESI)m/z:495[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.87(s,1H),8.37(s,1H),7.99(s,1H),7.87(s,1H),7.35(t,J＝8.6Hz,2H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.03(t,J＝7.3Hz,1H),4.39(d,J＝10.7Hz,1H),4.07(d,J＝10.7Hz,1H),3.47(s,3H),3.31(s,1H),3.09(s,2H),2.80(d,J＝15.0Hz,1H),2.71-2.63(m,1H),2.56(s,1H),2.54(s,2H),2.31(s,3H),1.37(s,3H)。
实例156
Figure BDA0003506712340003401
2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
步骤1：取含2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(195.4mg,0.555mmol)、Int.W7(100mg,0.555mmol)及TsOH.H2O(105.5mg,0.555mmol)之i-PrOH(4mL)溶液于120℃搅拌16小时，冷却至室温，及使用饱和NaHCO3水溶液中和至pH～8。混合物使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝10/1)，给予2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯与2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸异丙基酯之混合物(440mg)之淡黄色固体，其未进一步纯化即用于下一个步骤。LC-MS(ESI)m/z:496(甲基酯),524(异丙基酯)[M+H]+。
步骤3：取含2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯与2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸异丙基酯之混合物(220mg)及LiOH水溶液(2N,4mL)之THF(4mL)混合物于室温搅拌5小时及于50℃搅拌16小时，使用甲酸调整至pH～5，及使用DCM/MeOH萃取(10/1,20mL x 3)。合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3)，给予2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(26.5mg,12.4％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:482[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(s,1H),8.22(s,1H),7.35-7.24(m,3H),7.07-6.92(m,3H),4.41(d,J＝10.7Hz,1H),4.03(d,J＝10.8Hz,1H),3.36(s,2H),2.78(d,J＝5.4Hz,2H),2.68(d,J＝15.5Hz,1H),2.60-2.54(m,3H),2.32(s,3H),1.33(s,3H)。
实例157
Figure BDA0003506712340003411
2-(1-(5-氯-2-((2-乙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
依实例146之相同制程，于步骤2中使用Int.W8替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z:508[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),7.97(s,1H),7.61(s,1H),7.31(dd,J＝21.0,7.7Hz,2H),7.12(t,J＝7.5Hz,1H),6.96(t,J＝7.2Hz,1H),6.74(s,1H),4.42(d,J＝10.7Hz,1H),4.02(d,J＝10.7Hz,1H),3.78(s,3H),3.34(s,2H),2.76(s,2H),2.66-2.55(m,4H),2.50-2.45(d,J＝6.8Hz,2H),1.34(s,3H),1.08(t,J＝7.0Hz,3H)。
实例158
Figure BDA0003506712340003421
2-(1-(5-氯-2-((2-异丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
依实例146之相同制程，于步骤2中使用Int.W5替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z:522[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.22(s,1H),7.97(s,1H),7.63(s,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(d,J＝6.9Hz,1H),7.17-7.05(m,1H),6.96(t,J＝7.4Hz,1H),6.73(s,1H),4.42(d,J＝10.8Hz,1H),4.02(d,J＝10.8Hz,1H),3.78(s,3H),3.47(s,2H),2.93-2.81(m,1H),2.77-2.68(m,4H),2.66-2.54(m,2H),1.34(s,3H),1.06(d,J＝6.5Hz,6H)。
实例159
Figure BDA0003506712340003422
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基异吲哚啉-5-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
依实例146之相同制程，于步骤2中使用Int.W9替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z:480[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.02(s,1H),7.77(s,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(d,J＝7.1Hz,1H),7.11(t,J＝7.3Hz,1H),6.98(t,J＝7.2Hz,1H),6.94(s,1H),4.41(d,J＝10.8Hz,1H),4.02(d,J＝10.7Hz,1H),3.80(s,5H),3.70(s,2H),2.69(d,J＝15.5Hz,1H),2.57(d,J＝15.4Hz,1H),2.47(s,3H),1.34(s,3H)。
实例160
Figure BDA0003506712340003431
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲磺酸
依实例146之相同制程，于步骤2中使用Int.W11替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z:480[M+H]+。
在含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(40mg,0.083mmol)之乙腈(20mL)溶液中添加甲磺酸(8.0mg,0.083mmol)。反应混合物于25℃搅拌30分钟，及真空浓缩。残质加水(15mL)稀释，及冻干为2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸之甲磺酸盐(39.4mg,81.3％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:480[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.97(d,J＝14.2Hz,2H),7.56(s,1H),6.74(s,1H),4.00(s,2H),3.88(d,J＝11.4Hz,1H),3.82(s,3H),3.55(s,1H),3.42(s,2H),2.86(t,J＝7.5Hz,1H),2.77(s,2H),2.58(s,2H),2.32(s,3H),1.76-1.24(m,10H)。
实例161
Figure BDA0003506712340003441
2-(3-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸
步骤1：于0℃，在含吲哚(600.0mg,5.12mmol)之无水THF(10mL)溶液中添加甲基镁化溴之THF溶液(1M,5mL)，10分钟后接着添加2,4,5-三氯嘧啶(466mg,2.54mmol)。反应混合物于60℃搅拌3小时，冷却至室温，及真空浓缩。残质分溶于水(10mL)与DCM(20mL x 3)之间。有机相使用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法(5-10％EA/PE)纯化以提供3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚之黄色固体(160mg,12％产率)。LC-MS(ESI)m/z:264[M+H]+。
步骤2：于25℃，在含3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚(160mg,0.606mmol)及2-溴乙酸乙基酯(303.5mg,1.82mmol,201.00uL)之DMF(5mL)溶液中添加碳酸氢钠(254.5mg,3.03mmol)。混合物于80℃搅拌16小时，冷却至室温，加水(20mL)稀释，及使用EA萃取(20mLx 3)。合幷之有机相使用盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(20-30％EA/PE)以提供2-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸乙基酯之淡黄色油(220mg,93％产率)。LC-MS(ESI)m/z:315[M+H]+。
步骤3：依条件B3，使用2-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸乙基酯(100mg,0.286mmol)及Int.W1(78.4mg,0.343mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(30-60％MeOH/DCM)后以提供2-(3-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸异丙基酯(238mg,72.9％产率)之淡黄色油。LC-MS(ESI)m/z:520[M+H]+。
步骤4：在含2-(3-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸异丙基酯(238mg,0.412mmol)之THF(6mL)及水(3mL)溶液中添加LiOH.H2O(480.1mg,11.44mmol)。混合物于25℃搅拌2小时，使用甲酸酸化至pH～5，经制备性-HPLC纯化(0.1％甲酸/乙腈)，给予2-(3-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸(124.9mg,63.4％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:478[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),8.47-8.30(m,2H),8.23(d,J＝32.9Hz,1H),7.62(s,1H),7.42(d,J＝8.1Hz,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),7.07(t,J＝7.4Hz,1H),6.84(s,1H),5.01(s,2H),3.79(s,3H),3.51(s,2H),2.88(s,2H),2.74(s,2H),2.39(s,3H)。
实例162
Figure BDA0003506712340003451
2-(3-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸
步骤1：于0℃，在含3-碘-1H-吲唑(500mg,2.05mmol)之THF(15mL)溶液中分小份添加第三丁醇钾(344.9mg,3.07mmol)，1小时后接着滴加2-溴乙酸乙基酯(684.3mg,4.10mmol)。混合物于25℃搅拌16小时及真空浓缩。残质分溶于EA(20mL)与水(20mL)之间。分离有机相，及水相使用EA萃取(20mL x 3)。合幷之有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(15-20％EA/PE)以提供2-(3-碘-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯之无色油(549mg,81％产率)。LC-MS(ESI)m/z:331[M+H]+。
步骤2：取含2-(3-碘-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯(520mg,1.58mmol)、1,1,1,2,2,2-六甲基二锡烷(1.03g,3.15mmol)及Pd(PPh3)4(182.1mg,0.158mmol)之二
Figure BDA0003506712340003461
烷(10mL)混合物使用N2吹扫，于100℃搅拌16小时，冷却至0℃，及使用1M KF溶液(10mL)中止反应。所得混合物于室温搅拌30分钟，加水(30mL)稀释，及使用二氯甲烷/甲醇萃取(v/v,10/1,20mL x3)。
合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/4)以提供2-(3-(三甲基锡烷基)-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯之无色油(145mg,25％产率)。LC-MS(ESI)m/z:369[M+H]+。
步骤3：取含2-(3-(三甲基锡烷基)-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯(145mg,0.395mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(72.5mg,0.395mmol)及Pd(PPh3)4(45.7mg,0.040mmol)之二
Figure BDA0003506712340003462
烷(5mL)混合物使用N2吹扫，于100℃搅拌16小时，及真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/4)以提供2-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯之白色固体(68mg,49％产率)。LC-MS(ESI)m/z:351[M+H]+。
步骤4&5：依实例161步骤3&4之相同制程，使用2-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯替代2-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸酯。LC-MS(ESI)m/z:479[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(d,J＝13.2Hz,2H),8.18(d,J＝7.8Hz,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.58(s,1H),7.51-7.35(m,1H),7.27-7.13(m,1H),6.88(s,1H),5.23(s,2H),3.79(s,3H),3.62(s,2H),2.91(d,J＝5.2Hz,2H),2.85(d,J＝5.0Hz,2H),2.47(s,3H)。
实例167
Figure BDA0003506712340003471
2-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸
步骤1：于0℃，在含Int.E38(500mg,2.37mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(434.0mg,2.37mmol)之DCM(5mL)溶液中滴加DIPEA(917.5mg,7.10mmol)。混合物于25℃搅拌2小时，使用冰冷饱和NH4Cl水溶液(30mL)中止反应，及使用EA萃取(50mL x 3)。有机相使用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝5-15％)，给予2-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯(798mg,94.1％产率)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:358[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用2-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯(100mg,0.279mmol)及Int.W1(63.8mg,0.279mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(MeOH/DCM＝5-10％)后以提供2-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯(116mg,70.3％产率，87％纯度)之淡黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:514[M+H]+。
步骤3：依实例117步骤3之相同制程，使用2-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯替代1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯。LC-MS(ESI)m/z:486[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.97(d,J＝14.2Hz,2H),7.56(s,1H),6.74(s,1H),4.00(s,2H),3.88(d,J＝11.4Hz,1H),3.82(s,3H),3.55(s,1H),3.42(s,2H),2.86(t,J＝7.5Hz,1H),2.77(s,2H),2.58(s,2H),2.32(s,3H),1.76-1.24(m,10H)。
实例168
Figure BDA0003506712340003481
2-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-8-氧杂-2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-羧酸
依实例167之相同制程，使用Int.E39替代Int.E38。LC-MS(ESI)m/z:488[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.97(d,J＝7.8Hz,2H),7.57(s,1H),6.75(s,1H),3.99(t,J＝10.3Hz,3H),3.82(s,3H),3.77(d,J＝11.1Hz,2H),3.66(d,J＝10.6Hz,1H),3.50(s,2H),3.46(s,2H),2.95(t,J＝7.2Hz,1H),2.78(s,2H),2.62(s,2H),2.34(s,3H),1.98(s,1H),1.56-1.44(m,3H)。
实例169
Figure BDA0003506712340003491
2-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-4-羧酸
依实例167之相同制程，使用Int.E40替代Int.E38。LC-MS(ESI)m/z:472[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.96(s,1H),7.94(s,1H),7.54(s,1H),6.73(s,1H),3.95(d,J＝5.9Hz,2H),3.81(s,3H),3.72(d,J＝10.5Hz,1H),3.57(d,J＝10.1Hz,1H),3.41(s,2H),2.98(t,J＝7.1Hz,1H),2.75(d,J＝5.5Hz,2H),2.58(t,J＝5.7Hz,2H),2.32(s,3H),1.89(s,1H),1.69-1.54(m,6H),1.49(s,1H)。
实例170
Figure BDA0003506712340003492
N-(5-氯-4-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：取含2,4,5-三氯嘧啶(1g,5.45mmol)及氢氧化钠水溶液(1N,1mL)之THF(3mL)混合物于室温搅拌3小时，使用1N HCl酸化至pH～6，及使用CH2Cl2萃取(50mL x 3)。合幷之有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质于20％CH2Cl2/石油醚中再结晶纯化以提供2,5-二氯嘧啶-4(3H)-酮(374mg,29％产率)。LC-MS(ESI)m/z:165[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用2,5-二氯嘧啶-4(3H)-酮(351mg,1.38mmol)及Int.W1(347.9mg,1.52mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝4/1)后以提供5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4(3H)-酮(419mg,78.4％产率)。LC-MS(ESI)m/z:321[M+H]+。
步骤3：取含5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4(3H)-酮(150mg,0.388mmol)之磷酰三氯(1mL)溶液于95℃搅拌18小时冷却至室温，倒至饱和NaHCO3水溶液(50mL)中，及使用二氯甲烷萃取(20mL x 3)。合幷之有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供粗产物N-(4,5-二氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(160mg,36％产率，30％纯度)。LC-MS(ESI)m/z:339[M+H]+。
步骤4：依条件A3，使用N-(4,5-二氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(140mg,0.124mmol,30％纯度)及2-氧杂-7-氮杂螺[3.4]辛烷(16.8mg,0.149mmol)，经过制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025％NH3·H2O)后以提供N-(5-氯-4-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(11.8mg,22.9％产率)。LC-MS(ESI)m/z:415[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(s,1H),7.91(s,1H),7.40(s,1H),6.59(s,1H),4.72(d,J＝6.2Hz,2H),4.64(d,J＝6.2Hz,2H),4.06(s,2H),3.87-3.83(m,2H),3.85(s,3H),3.55(s,2H),2.87(t,J＝5.8Hz,2H),2.68(t,J＝5.9Hz,2H),2.47(s,3H),2.25(t,J＝7.0Hz,2H)。
实例36
Figure BDA0003506712340003511
6-甲氧基-2-甲基-N-(7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：取含2-氯-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶(153mg,1.0mmol)、1-溴-2-碘-苯(422.78mg,1.50mmol)、碳酸钾(413.09mg,3.0mmol)、CuI(379.49mg,2.0mmol)、及(1S,2S)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(282.95mg,2.0mmol)之DMF(8mL)混合物于N2与120℃搅拌18小时。冷却至室温后，混合物过滤，及使用乙酸乙酯(100mL)洗涤。滤液使用H2O(100mL)稀释及分层。水相使用乙酸乙酯萃取(100mL x 2)。合幷之有机层使用盐水(100mL x 4)洗涤，经无水硫酸钠脱水，及过滤。滤液真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/15v/v)以提供2-氯-7-苯基-吡咯幷[2,3-d]嘧啶之黄色固体(40mg,17％产率)。LC-MS(ESI)m/z:230[M+H]+。
步骤2：依条件B4(如实例28步骤2举例说明)，使用2-氯-7-苯基-吡咯幷[2,3-d]嘧啶(60mg,0.26mmol)及Int.W1(60.3mg,0.31mmol)，经过制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％FA)后以提供6-甲氧基-2-甲基-N-(7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(21.4mg,21％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:386[M+H]+。1H NMR(400Mhz,CD3OD):δ(ppm)2.73(s,3H),2.98-3.01(m,2H),3.08-3.12(m,2H),3.83(s,2H),3.91(s,3H),6.65(d,J＝4.0Hz,1H),6.77(s,1H),7.41-7.45(m,1H),7.47(d,J＝4.0Hz,1H),7.57-7.62(m,2H),7.82(d,J＝8.0Hz,2H),8.38(s,1H),8.68(s,1H)。
实例37
Figure BDA0003506712340003521
6-甲氧基-2-甲基-N-(7-(吡啶-2-基)-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例36之相同制程，于步骤1中使用2-溴吡啶替代1-溴-2-碘-苯。LC-MS(ESI)m/z:387[M+H].1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)2.99(s,3H),3.11-3.14(m,2H),3.44-3.47(m,2H),3.23(s,3H),4.23(s,2H),6.63(d,J＝4.0Hz,1H),6.83(s,1H),7.31-7.35(m,1H),7.99-8.04(m,2H),8.28(s,1H),8.50-8.51(m,1H),8.58(d,J＝8.0Hz,1H),8.65(s,1H)。
实例38
Figure BDA0003506712340003522
2-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-7-基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
依实例36之相同制程，于步骤1中使用溴-N,N-二甲基苯甲酰胺替代1-溴-2-碘-苯。LC-MS(ESI)m/z:457[M+H].1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)2.56(s,3H),2.77(s,3H),2.83(s,3H),3.01(t,J＝7.6Hz,2H),3.16(t,J＝7.6Hz,2H),3.82(s,2H),3.91(s,3H),6.65(d,J＝3.6Hz,1H),6.78(s,1H),7.20(d,J＝3.6Hz,1H),7.57-7.59(m,1H),7.61-7.66(m,1H),7.72-7.79(m,2H),8.72(s,1H),8.50(brs,1H),8.72(s,1H)。
实例39
Figure BDA0003506712340003531
(2-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-7-基)苯基)二甲基膦氧化物
步骤1：于室温，在含2-氯-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶(153mg,996.29umol)、(2-溴苯基)硼酸(600.25mg,2.99mmol)、及Cu(OAc)2(361.9mg,1.99mmol)之无水DCM(12mL)混合物中添加NEt3(403.3mg,3.99mmol)。混合物于室温搅拌4天及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/5v/v)以提供7-(2-溴苯基)-2-氯-吡咯幷[2,3-d]嘧啶之白色固体(36mg,12％产率)。LC-MS(ESI)m/z:308[M+H]+。
步骤2：依条件B3，使用7-(2-溴苯基)-2-氯-吡咯幷[2,3-d]嘧啶(100mg,0.324mmol)、及Int.W1(62.3mg,0.324mmol)，经制备性-TLC纯化(DCM/MeOH＝15/1)后以提供N-(7-(2-溴苯基)-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺之黄色固体(94mg,62％产率)。LC-MS(ESI)m/z:464[M+H]+。
步骤3：依Int.E1步骤3之相同制程，使用N-(7-(2-溴苯基)-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺替代3-碘吲哚-1-羧酸第三丁基酯。LC-MS(ESI)m/z:462[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)1.43(s,3H),1.46(s,3H),2.78(s,3H),3.00(t,J＝2.0Hz,2H),3.18(t,J＝2.0Hz,2H),3.67(s,2H),3.89(s,3H),6.73(d,J＝3.6Hz,1H),6.77(s,1H),7.39(d,J＝3.6Hz,1H),7.48-7.51(m,1H),7.64-7.70(m,1H),7.80-7.89(m,1H),8.04(s,1H),8.13-8.20(m,1H),8.76(s,1H)。
实例40
Figure BDA0003506712340003541
6-甲氧基-2-甲基-N-(7-(吡啶-3-基)-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：取含2-氯-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶(0.500g,3.26mmol)、3-吡啶基二羟硼酸(1.000g,8.14mmol)及二乙酸铜(0.887g,4.88mmol)混合物于吡啶(12.5mL)中，于O2及60℃搅拌16小时，真空浓缩，加水(100mL)稀释，及使用EA萃取(50mL x 2)。合幷之有机相经无水硫酸钠脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/5)以提供2-氯-7-(吡啶-3-基)-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶(520mg,62.3％产率，90％纯度)。LC-MS(ESI)m/z:231.1[M+H]+。
步骤2：依条件B4，使用2-氯-7-(3-吡啶基)吡咯幷[2,3-d]嘧啶(100mg,0.434mmol)及Int.W1(100mg,0.520mmol)，经过制备性-HPLC纯化(10mM NH4HCO3,0.025％NH3.H2O/MeCN)后以提供甲氧基-2-甲基-N-(7-(吡啶-3-基)-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(40.9mg,24.4％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:387[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.17(d,J＝1.9Hz,1H),8.81(s,1H),8.61(d,J＝4.2Hz,1H),8.36(d,J＝8.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.90(s,1H),7.77(d,J＝3.6Hz,1H),7.61(dd,J＝8.1,4.7Hz,1H),6.75(d,J＝3.7Hz,2H),3.83(s,3H),3.43(s,2H),2.77(s,2H),2.57(t,J＝5.5Hz,2H),2.28(d,J＝66.6Hz,3H)。
实例41
Figure BDA0003506712340003551
6-甲氧基-2-甲基-N-(7-(2-甲基吡啶-3-基)-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
依实例40之相同制程，于步骤1中使用(2-甲基吡啶-3-基)二羟硼酸替代3-吡啶基二羟硼酸。LC-MS(ESI)m/z:401[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,1H),8.62(d,J＝4.7Hz,1H),7.89(d,J＝7.9Hz,2H),7.75(s,1H),7.59-7.35(m,2H),6.71(d,J＝4.7Hz,2H),3.80(s,3H),3.20(s,2H),2.72(t,J＝5.6Hz,2H),2.54(d,J＝5.8Hz,2H),2.32(s,6H)。
实例164
Figure BDA0003506712340003552
2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-6-甲腈
步骤1：于室温，在含5-溴-2-氯-N-苯基-嘧啶-4-胺(1.5g,5.27mmol)及1,1’-双(二苯基膦基)二茂络铁]二氯钯(II)(192.87mg,263.58umol)之THF(30mL)搅拌混合物中依序添加三乙基胺(800.16mg,7.91mmol,1.10mL)及3,3-二乙基丙-1-炔(1.01g,7.91mmol,1.13mL)。混合物使用N2吹扫，于室温搅拌10分钟，接着添加CuI(50.20mg,263.58umol)。反应混合物再度使用N2吹扫，于60℃搅拌48小时，冷却至室温，使用EtOAc(100mL)稀释，及过滤。滤液加水(50mL)稀释及分层。水相使用EtOAc萃取(30mL×3)，及合幷之有机层经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(5％EtOAc/石油醚至20％EtOAc/石油醚)以提供2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)-N-苯基-嘧啶-4-胺之黄色固体(1.18g,67％产率)。LC-MS(ESI)m/z:332[M+H]+。
步骤2：于室温，在含2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)-N-苯基-嘧啶-4-胺(400mg,1.21mmol)之THF(2mL)搅拌溶液中添加1N TBAF之THF溶液(6.03mmol,6mL)。反应混合物于60℃搅拌2小时，冷却至室温，及使用H2O(50mL)及二氯甲烷(50mL)稀释。分相，水层使用二氯甲烷萃取(20mL×3)。合幷之有机层经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(10％EtOAc/石油醚至30％EtOAc/石油醚)以提供2-氯-6-(二乙氧基甲基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶之灰色固体(280mg,70％产率)。LC-MS(ESI)m/z:332[M+H]+。
步骤3：依条件B4，使用2-氯-6-(二乙氧基甲基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶(100mg,0.3mmol)及Int.W1(57.8mg,0.3mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(MeOH/DCM:5-10％)后以提供N-(6-(二乙氧基甲基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(60mg,40.9％产率)之灰白色固体。LC-MS(ESI)m/z:488[M+H]+。
步骤4：于室温，在含N-(6-(二乙氧基甲基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(60mg,0.123mmol)之二
Figure BDA0003506712340003571
烷(1mL)搅拌溶液中添加12N HCl(0.2mL)。反应混合物搅拌30分钟，使用2N NaOH碱化至pH 8，及使用EtOAc萃取(5mL x 3)。合幷之有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-6-甲醛之灰色固体(50mg,98％产率)。LC-MS(ESI)m/z:414[M+H]+。
步骤5：于室温，在含2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-6-甲醛(50mg,0.121mmol)及吡嗪(19.7mg,0.246mmol)之乙醇(1mL)搅拌溶液中添加羟基胺盐酸盐(10.3mg,0.148mmol)。反应混合物于90℃搅拌2小时及真空浓缩。残质加水稀释(10mL)，及使用EtOAc萃取(10mL x3)。合幷之有机相使用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩以提供2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-6-甲醛肟之黄色固体(52mg,99％产率)。LC-MS(ESI)m/z:429[M+H]+。
步骤6：在含2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-6-甲醛肟(52mg,0.121mmol)之TEA(2mL)搅拌溶液中添加乙酸酐(24.78mg,0.243mmol)。反应混合物于90℃搅拌2小时，冷却至室温及真空浓缩。残质经制备性-HPLC纯化(0.1％甲酸/MeCN)以提供2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-6-甲腈之黄色固体(3.1mg,6％产率)。LC-MS(ESI)m/z:411[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,1H),8.37(s,1H),8.24(br,1H),7.87(s,1H),7.78-7.63(m,5H),7.61-7.59(m,1H)),6.74(s,1H),3.80(s,3H),3.28(s,2H),2.75(s,2H),2.55(s,2H),2.35(s,3H)。
实例165
Figure BDA0003506712340003581
2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-6-羧酸
在含2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-6-甲醛(30mg,0.073mmol)之水(3mL)与乙醇(3mL)混合溶剂之溶液中添加氢氧化钠(14.5mg,0.363mmol)及氧化银(33.6mg,0.145mmol)。反应混合物于80℃搅拌16小时，冷却至室温，加水(20mL)稀释，及酸化至pH 3-4。混合物使用DCM萃取(20mL x 3)，及取有机相经无水硫酸钠脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化，产生2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯幷[2,3-d]嘧啶-6-羧酸(4.4mg,14.1％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:430[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,1H),7.92(s,1H),7.89(s,1H),7.53-7.51(m,2H),7.47-7.42(m,3H),7.25(s,1H),6.71(s,1H),3.81(s,3H),3.26(s,2H),2.74-2.73(m,2H),2.61-2.59(m,2H),2.39(s,3H)。
实例43
Figure BDA0003506712340003591
6-甲氧基-2-甲基-N-(9-苯基-9H-嘌呤-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺
步骤1：于室温，在含2,4-二氯-5-硝基-嘧啶(1g,5.16mmol)之二
Figure BDA0003506712340003592
烷(20mL)溶液中慢慢添加苯胺(0.96mg,10.31mmol)。混合物接着在室温搅拌1小时及过滤。取滤液浓缩以提供2-氯-5-硝基-N-苯基-嘧啶-4-胺之黄色固体(800mg,62％产率)。LC-SM(ESI)m/z:251[M+H]+。
步骤2：于室温，在含2-氯-5-硝基-N-苯基-嘧啶-4-胺(500mg,1.99mmol)之乙酸乙酯/EtOH/H2O(6mL/27mL/3mL)混合物中添加Fe(557.1mg,9.97mmol)及NH4Cl(74.7mg,1.40mmol)。混合物于60℃搅拌2小时。冷却至室温后，混合物过滤，及使用甲醇(30mL)洗涤。取滤液浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝20/1v/v)以提供2-氯-N4-苯基-嘧啶-4,5-二胺之浅黄色固体(350mg,79％产率)。LC-MS(ESI)m/z:221[M+H]+。
步骤3：在含2-氯-N4-苯基-嘧啶-4,5-二胺(300mg,1.36mmol)之正甲酸三乙酯(10mL)及DMF(5mL)溶液中添加浓HCl(0.6mL)。反应混合物于室温搅拌2小时，使用H2O(20mL)稀释，及使用EA萃取(20mL x 2)。合幷之有机层经无水Na2SO4脱水，过滤，及浓缩至干。残质经硅胶快速管柱层析法纯化管柱(EA/PE＝1/2v/v)以提供2-氯-9-苯基-嘌呤之黄色固体(220mg,70％产率)。LC-MS(ESI)m/z:231[M+H]+。
步骤4：依条件B4，使用2-氯-9-苯基-嘌呤(30mg,0.13mmol)及Int.W1(25mg,0.13mmol)，经过制备性-HPLC纯化(0.05％TFA/MeCN)后以提供6-甲氧基-2-甲基-N-(9-苯基-9H-嘌呤-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(8mg)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:387[M+H].1H NMR(400MHz,CD3OD):δ3.07(s,3H),3.12-3.13(m,1H),3.19-3.27(m,1H),3.39-3.48(m,1H),3.74-3.75(m,1H),3.95(s,3H),4.25-4.41(m,2H),6.91(s,1H),7.53-7.57(m,1H),7.66-7.89(m,2H),7.91(d,J＝1.2Hz,2H),8.40(s,1H),8.57(s,1H),8.67(s,1H)。
实例44
Figure BDA0003506712340003601
2-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
依实例43之相同制程，于步骤1中使用2-胺基-N,N-二甲基苯甲酰胺替代苯胺。LC-MS(ESI)m/z:458[M+H]。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.73(s,3H),2.77(s,3H),2.84(s,3H),3.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.18(t,J＝6.0Hz,2H),3.88(s,2H),3.90(s,3H),6.81(s,1H),7.61-7.64(m,1H),7.68-7.76(m,1H),7.76-7.78(m,2H),8.18(s,1H),8.19(s,1H),8.45(brs,1H),8.83(s,1H)。
实例45
Figure BDA0003506712340003611
(2-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)苯基)二甲基膦氧化物
依实例43之相同制程，于步骤1中使用(2-胺基苯基)二甲基膦氧化物替代苯胺。LC-MS(ESI)m/z:463[M+H].1H NMR(400MHz,CD3OD):δ1.62(s,3H),1.65(s,3H),2.87(s,3H),3.07(t,J＝6.0Hz,2H),3.33(t,J＝6.0Hz,2H),3.89(s,3H),3.94(s,2H),6.82(s,1H),7.60-7.63(m,1H),7.81-7.91(m,2H),8.01-8.07(m,1H),8.12(s,1H),8.35(s,1H),8.45(brs,1H),8.85(s,1H)。
实例166
Figure BDA0003506712340003612
2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-甲基-9-苯基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮
步骤1：在含2-氯-N4-苯基-嘧啶-4,5-二胺(410mg,1.86mmol)之二氯甲烷(30mL)溶液中添加CDI(301.29mg,1.86mmol)。混合物于25℃搅拌16小时，使用饱和NaHCO3水溶液(20mL)稀释，及分层。水相使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。合幷之有机相经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(80-100％EtOAc/己烷)以提供2-氯-9-苯基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮之淡黄色固体(264mg,58％产率)。LC-MS(ESI)m/z:247[M+H]+。
步骤2：于0℃，在含2-氯-9-苯基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(230mg,932.49umol)及碘甲烷(463.3mg,3.26mmol)之THF(10mL)溶液中添加氢化钠(111.9mg,2.80mmol,60％匀散于矿物油中)。混合物于0-25℃搅拌6小时，加水(10mL)中止反应，及分层。水相使用二氯甲烷/甲醇萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。合幷之有机层经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经过硅胶快速管柱层析法纯化(30-40％EtOAc之石油醚溶液)以提供2-氯-7-甲基-9-苯基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮之淡黄色固体(80mg,24％产率)。LC-MS(ESI)m/z:261[M+H]+。
步骤3：依条件B3，使用2-氯-7-甲基-9-苯基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(70mg,0.268mmol)及Int.W1(21.4mg,0.268mmol)，经过制备性-HPLC纯化(0.1％FA/MeCN)后以提供2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-7-甲基-9-苯基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(44.2mg,39.5％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:417[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.25(s,1H),7.88(s,1H),7.67(s,2H),7.58(t,J＝7.7Hz,2H),7.47(t,J＝7.3Hz,1H),6.71(s,1H),3.79(s,3H),3.40(s,3H),3.28-3.20(m,2H),2.74(s,2H),2.55(s,2H),2.34(s,3H)。
实例46
Figure BDA0003506712340003621
N-(6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-8-苯基-7,8-二氢-6H-嘧啶幷[5,4-b][1,4]
Figure BDA0003506712340003633
嗪-2-胺
步骤1：在含2,4-二氯-5-甲氧基-嘧啶(1.00g,5.59mmol)之二
Figure BDA0003506712340003634
烷(15mL)溶液中添加DIPEA(1.44g,11.17mmol,1.95mL)及苯胺(0.520mg,5.59mmol)。混合物于120℃及N2蒙气下搅拌一夜，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝2/1v/v)以提供2-氯-5-甲氧基-N-苯基-嘧啶-4-胺之黄色固体(950mg,72％产率)。LC-MS(ESI)m/z:236[M+H]+。
步骤2：于0℃，在含2-氯-5-甲氧基-N-苯基-嘧啶-4-胺(100mg,0.424mmol)之DCM(5mL)溶液中添加三溴化硼(1.06g,4.24mmol)。混合物于氮及室温搅拌3天，倒至0℃之MeOH(30mL)中，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝1/1v/v，及接着DCM/MeOH＝10/1v/v)以提供4-苯胺基-2-氯-嘧啶-5-醇之白色固体(94mg,100％产率)。LC-MS(ESI)m/z:222[M+H]+。
步骤3：在含4-苯胺基-2-氯-嘧啶-5-醇(94mg,0.424mmol)之DMF(5mL)溶液中添加碳酸钾(175.85mg,1.27mmol)及1-溴-2-氯-乙烷(91.2mg,0.636mmol)。混合物于室温搅拌16小时，使用H2O(20mL)稀释，及使用EA萃取(20mL x 3)。取有机层经无水Na2SO4脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝2/1)以提供2-氯-8-苯基-6,7-二氢嘧啶幷[5,4-b][1,4]
Figure BDA0003506712340003631
嗪之白色固体(60mg,57％产率)。LC-MS(ESI)m/z:248[M+H]+。
步骤4：依条件B3，使用2-氯-8-苯基-6,7-二氢嘧啶幷[5,4-b][1,4]
Figure BDA0003506712340003632
嗪(50mg,0.202mmol)及Int.W1(46.2mg,0.202mmol)，经过滤收集以提供N-(6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-8-苯基-7,8-二氢-6H-嘧啶幷[5,4-b][1,4]
Figure BDA0003506712340003641
嗪-2-胺(48mg,59％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:404[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ3.03(s,3H),3.06-3.10(m,1H),3.12-3.28(m,2H),3.68-3.71(m,1H),3.80-3.81(m,2H),3.90(s,3H),4.09(t,J＝4.0Hz,2H),4.44(t,J＝4.0Hz,2H),6.89(s,1H),7.36(s,1H),7.52-7.54(m,2H),7.56-7.60(m,1H),7.63-7.67(m,2H),7.72(s,1H)。
实例47
Figure BDA0003506712340003642
(2-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-6H-嘧啶幷[5,4-b][1,4]
Figure BDA0003506712340003643
嗪-8(7H)-基)苯基)二甲基膦氧化物
依实例46之相同制程，于步骤1中使用2-二甲基磷酰基苯胺替代苯胺。LC-MS(ESI)m/z:480[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ1.63(d,J＝13.2Hz,3H),1.80(d,J＝13.6Hz,3H),2.88(s,3H),2.98(t,J＝6.0Hz,2H),3.26(t,J＝6.4Hz,2H),3.46-3.55(m,2H),3.84(s,3H),3.87-3.94(m,2H),4.38-4.45(m,2H),6.70(s,1H),7.31(s,1H),7.54-7.58(m,1H),7.71-7.76(m,2H),7.85(t,J＝8.0Hz,1H),7.98-8.04(m,1H),8.46(brs,1H)。
实例171
Figure BDA0003506712340003644
2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-8-苯基吡啶幷[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮
步骤1：于0℃，在含5-溴-2,4-二氯-嘧啶(1.2g,5.27mmol)之MeCN(20mL)溶液中添加三乙基胺(639.45mg,6.32mmol,880.78uL)及苯胺(529.64mg,5.69mmol)。反应混合物于25℃搅拌16小时，及真空浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EtOAc＝0-50％)以提供5-溴-2-氯-N-苯基嘧啶-4-胺之黄色固体(1.2g,76％产率)。LC-MS(ESI)m/z:284[M+H]+。
步骤2：在含5-溴-2-氯-N-苯基嘧啶-4-胺(283mg,994.59umol)、丙烯酸(358.4mg,4.97mmol)及DIPEA(1.29g,9.95mmol)之THF(4mL)溶液中添加双(苯甲腈)钯(II)氯化物(19.07mg,49.73umol)及参-邻甲苯基膦烷(15.14mg,0.050mmol)。混合物于70℃与N2蒙气下搅拌24小时。反应混合物未经过任何纯化即用于下一个步骤。LC-MS(ESI)m/z:276[M+H]+。
步骤3：在上述反应混合物中添加乙酸酐(540.00mg,5.29mmol)。混合物接着于80℃搅拌24小时，及真空浓缩。残质使用DCM(50mL)及水(50mL)稀释，及分层。有机相使用1NHCl(10mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，及过滤。取滤液真空浓缩，及残质经过硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝0-60％)以提供2-氯-8-苯基吡啶幷[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮之黄色固体(88mg,34％产率)。LC-MS(ESI)m/z:258[M+H]+。
步骤4：依条件B3，使用2-氯-8-苯基吡啶幷[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(40mg,0.155mmol)及Int.W1(35.5mg,0.155mmol)，经过制备性-HPLC纯化(10mM NH4HCO3,0.025％NH3.H2O/MeCN)后以提供2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)-8-苯基吡啶幷[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(17.1mg,26.6％产率)之白色固体。LC-MS(ESI)m/z:414[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,1H),8.11(s,1H),7.94(d,J＝9.4Hz,1H),7.61(s,2H),7.53(t,J＝7.4Hz,1H),7.34(d,J＝7.2Hz,2H),7.14(s,1H),6.68(s,1H),6.49(d,J＝9.4Hz,1H),3.79(s,3H),2.91(s,2H),2.68(s,2H),2.47(s,2H),2.35(s,3H)。
实例172
Figure BDA0003506712340003661
(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)喹唑啉-7-基)二甲基膦氧化物
步骤1：依条件B3，使用7-溴-2-氯喹唑啉(100mg,0.411mmol)及Int.W1(94.8mg,0.493mmol)，经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA：5/1)后以提供7-溴-N-(6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)喹唑啉-2-胺(90mg,52.1％产率)之黄色固体。LC-MS(ESI)m/z:401[M+H]+。
步骤2：取含7-溴-N-(6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)喹唑啉-2-胺(80mg,200.36umol)、二甲基膦氧化物(23.5mg,300.54umol)、Pd2(dba)3(9.2mg,10.02umol)、Xantphos(5.8mg,10.02umol)、及三乙基胺(60.8mg,601.08umol)之二
Figure BDA0003506712340003662
烷(1mL)混合物使用氮气吹扫，及于110℃搅拌16小时。反应混合物经制备性-HPLC纯化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025％NH3·H2O)以提供(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)胺基)喹唑啉-7-基)二甲基膦氧化物之黄色固体(2.9mg,3.6％产率)。LC-MS(ESI)m/z:496[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,1H),8.34(s,1H),8.28(s,1H),8.09(s,1H),8.03(dd,J＝12.7,7.7Hz,2H),7.69(t,J＝9.0Hz,1H),6.81(s,1H),3.83(s,3H),3.52(s,2H),2.81(d,J＝5.5Hz,2H),2.61(t,J＝5.7Hz,2H),2.37(s,3H),1.75(d,J＝13.4Hz,6H)。
实例50
Figure BDA0003506712340003671
(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基苯基)二甲基膦氧化物
步骤1：取含中间物12(200mg,734.89umol)、2-溴-4-碘-1-甲基苯(181.84mg,612.41umol)、Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(50.01mg,61.24umol)、及K2CO3(253.92mg,1.84mmol)之1,4-二
Figure BDA0003506712340003672
烷(6mL)及H2O(0.6mL)混合物于80℃及氮蒙气下搅拌3小时，冷却至室温，及过滤。取滤液浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(PE/EA＝1/9v/v)以提供5-(3-溴-4-甲基苯基)-3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶之淡黄色粉末(100mg,49％产率)。LC-MS(ESI)m/z:315[M+H]+)。
步骤2：取含5-(3-溴-4-甲基苯基)-3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶(49mg,154.48umol)、二甲基膦氧化物(14.47mg,185.38umol)、Pd(OAc)2(1.73mg,7.72umol)、Xantphos(4.47mg,7.72umol)、及K3PO4(36.07mg,169.93umol)之DMF(4mL)混合物于氮蒙气保护之微波条件下，于140℃搅拌2小时。冷却至室温后，混合物使用H2O(20mL)稀释，及使用EA萃取(20mL x 3)。合幷之有机层使用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤及浓缩。残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％HCOOH)以提供(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基苯基)二甲基膦氧化物之白色固体(14.6mg,30％产率)。LC-MS(ESI)m/z:313[M+H]+。
实例51
Figure BDA0003506712340003681
(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用2-溴-1-氟-4-碘苯替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:317[M+H]+。
实例52
Figure BDA0003506712340003682
(2-氯-5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物实例53
Figure BDA0003506712340003683
(3-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用2-溴-1-氯-4-碘苯替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。于步骤2中得到副产物实例53。
(2-氯-5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物：LC-MS(ESI)m/z:333[M+H]+。
(3-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物：LC-MS(ESI)m/z:299[M+H]+。
实例54
Figure BDA0003506712340003691
(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用2-溴-4-碘-1-甲氧基苯替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:329[M+H]+。
实例55
Figure BDA0003506712340003692
(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-羟基苯基)二甲基膦氧化物
于室温，在含实例54(28mg,85.28umol)之无水DCM(5mL)搅拌溶液中滴加三溴化硼(68.67mg,274.10umol,0.2mL)。反应混合物于室温搅拌2小时，及小心添加MeOH中止反应。所得混合物浓缩，及残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％HCOOH)以提供(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-羟基苯基)二甲基膦氧化物之白色固体(21mg,78％产率)。LC-MS(ESI)m/z:315[M+H]+。
实例56
Figure BDA0003506712340003693
(3-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-5-甲基苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用1,3-二溴-5-甲基-苯替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:313[M+H]+。
实例57
Figure BDA0003506712340003701
(3-胺基-5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用3,5-二溴苯胺替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:314[M+H]+。
实例58
Figure BDA0003506712340003702
N-(2-(二甲基磷酰基)-4-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)乙酰胺
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物17替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:356[M+H]+。
实例59
Figure BDA0003506712340003703
N-(2-溴-4-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)乙酰胺
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物18替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:368[M+H]+。
实例60
Figure BDA0003506712340003711
(2-胺基-3-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-6-氟苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物19替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:332[M+H]+。
实例61
Figure BDA0003506712340003712
(2-(二氟甲基)-5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物21替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:349[M+H]+。
实例62
Figure BDA0003506712340003713
(3-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟-6-甲基苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物22替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:331[M+H]+。
实例63
Figure BDA0003506712340003714
(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(
Figure BDA0003506712340003715
唑-2-基)苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物25替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:366[M+H]+。
实例64
Figure BDA0003506712340003721
(6-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-3-甲基吡啶-2-基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物24替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:314[M+H]+。
实例65
Figure BDA0003506712340003722
(2-((二甲基胺基)甲基)-5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物26替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:356[M+H]+。
实例66
Figure BDA0003506712340003723
1-(2-(二甲基磷酰基)-4-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)吡咯啶-2-酮
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物27替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:382[M+H]+。
实例67
Figure BDA0003506712340003731
2-(二甲基磷酰基)-4-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酰胺
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物28替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:342[M+H]+。
实例68
Figure BDA0003506712340003732
N-(3-(二甲基磷酰基)-5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)乙酰胺
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物29替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:356[M+H]+。
实例69
Figure BDA0003506712340003733
(2-胺基-5-(2-氯-3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
实例70
Figure BDA0003506712340003734
(2-胺基-5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
依实例50之相同制程，于步骤1中使用2-溴-4-碘苯胺及中间物14替代2-溴-4-碘-1-甲基苯及中间物12。
(2-胺基-5-(2-氯-3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物：[HCOOH盐]LC-MS(ESI)m/z:348[M+H]。
(2-胺基-5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物：[HCOOH盐]为步骤2得到之副产物。LC-MS(ESI)m/z:314[M+H]+。
实例71
Figure BDA0003506712340003741
(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(甲基胺基)苯基)二甲基膦氧化物
步骤1&2：依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物16替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:428[M+H]+。
步骤3：于0℃，在含(2-(二甲基磷酰基)-4-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)(甲基)胺甲酸第三丁基酯(25mg,58.48umol)之DCM(5mL)溶液中添加TFA(1.48g,12.98mmol,1mL)。混合物于室温搅拌2小时。蒸发后，残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％HCOOH)以提供(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(甲基胺基)苯基)二甲基膦氧化物之黄色固体(18mg,94％产率)。LC-MS(ESI)m/z:328[M+H]+。
实例72
Figure BDA0003506712340003751
2-(二甲基磷酰基)-4-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲基酯
依实例50之相同制程，于步骤1中使用中间物20替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:357[M+H]+。
实例73
Figure BDA0003506712340003752
(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(羟基甲基)苯基)二甲基膦氧化物
于0℃，在含2-二甲基磷酰基-4-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲基酯(139.61mg,391.78umol)之无水THF(5mL)溶液中滴加四氢化锂铝(26.58mg,783.56umol)。混合物于室温搅拌1小时，倒至冰水(10mL)中，及使用DCM萃取(10mL x 3)。有机层使用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，过滤，及浓缩。残质经逆相层析法纯化(MeOH/0.1％三氟乙酸)以提供(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(羟基甲基)苯基)二甲基膦氧化物之白色固体(100mg,78％产率)。LC-MS(ESI)m/z:329[M+H]+。
实例74
Figure BDA0003506712340003753
(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(氟甲基)苯基)二甲基膦氧化物
于0℃，在含(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(羟基甲基)苯基)二甲基膦氧化物(200mg,609.12umol)之DCM(5mL)溶液中滴加DAST(117.82mg,730.94umol)。混合物于室温搅拌2小时，及浓缩。残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.05％三氟乙酸)以提供(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(氟甲基)苯基)二甲基膦氧化物之白色固体(2.5mg,1.5％产率)。LC-MS(ESI)m/z:331[M+H]+。
实例75
Figure BDA0003506712340003761
(3-胺基-6-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)吡啶-2-基)二甲基膦氧化物
步骤1：取含中间物15(330mg,1.10mmol)、二甲基膦氧化物(103.40mg,1.32mmol)、乙酸钯(II)(24.79mg,110.40umol)、Xantphos(127.76mg,220.80umol)、及磷酸钾(468.70mg,2.21mmol)之DMF(15mL)混合物于氮气及50℃搅拌4小时。冷却至室温后，混合物过滤，及滤液使用H2O(20mL)稀释。所得混合物使用EA萃取(30mL x 3)。有机层使用盐水(30mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠脱水，过滤及浓缩。残质经逆相管柱层析法纯化(MeOH之H2O溶液，0％至100％v/v)，给予6-溴-2-二甲基磷酰基-吡啶-3-胺之白色固体(180mg,60％产率)。LC-MS(ESI)m/z:249[M+H]+。
步骤2：取含6-溴-2-二甲基磷酰基-吡啶-3-胺(100mg,401.53umol)、中间物12(131.13mg,481.84umol)、Pd(dppf)Cl2.DCM(29.38mg,40.15umol)、及碳酸钾(110.99mg,803.07umol)之二
Figure BDA0003506712340003762
烷(5mL)及H2O(0.5mL)混合物于氮气与90℃搅拌一夜。冷却至室温后，混合物过滤，及取滤液浓缩。残质使用EA(50mL)稀释，使用H2O(20mL)及盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，过滤及浓缩。残质经制备性-TLC纯化(DCM/MeOH＝10/1v/v)以提供(3-胺基-6-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)吡啶-2-基)二甲基膦氧化物之黄色固体(2mg)。LC-MS(ESI)m/z:315[M+H]+。
实例76
Figure BDA0003506712340003771
(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(氧杂环丁烷-3-基胺基)苯基)二甲基膦氧化物
依实例75之相同制程，于步骤1中使用中间物30替代中间物15。LC-MS(ESI)m/z:370[M+H]+。
实例77
Figure BDA0003506712340003772
(2-胺基-5-(3-异丙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
步骤1：于0℃，在含1-(5-溴-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-3-基)乙酮(590mg,2.47mmol)之无水THF(25mL)溶液中分批添加氢化钠(60％悬浮于油中，71.99mg,3mmol)，混合物于0℃搅拌1小时。于0℃，分批添加TsCl(714.90mg,3.75mmol)至上述混合物中。混合物于室温搅拌2小时，使用H2O(20mL)中止反应，及使用EA萃取(30mL x 3)。有机层使用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝2/3v/v)以提供1-(5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-3-基)乙烷-1-酮之黄色固体(800mg,83％产率)。LC-MS(ESI)m/z:393[M+H]+。
步骤2：于0℃，在含1-(5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-3-基)乙烷-1-酮(1.62g,4.12mmol)之无水THF(20mL)溶液中滴加甲基镁化溴(3M醚溶液，6.87mL,20.6mmol)。混合物于0℃搅拌2小时，倒至冰-水(50mL)中，及使用乙酸乙酯萃取(100mLx3)。有机层使用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA/PE＝1/4v/v)以提供2-(5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-3-基)丙烷-2-醇之黄色固体(900mg,76％产率)。LC-MS(ESI)m/z:409[M+H]+。
步骤3：于0℃，在含2-(5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-3-基)丙烷-2-醇(900mg,2.20mmol)之无水DCM(10mL)溶液中添加Et3SiH(1.28g,10.99mmol,1.76mL)及三氟乙酸(1.25g,10.99mmol,847.02uL)。混合物于室温搅拌一夜，倒至冰-水(20mL)中，使用饱和NaHCO3水溶液碱化至pH 4～5，及使用DCM萃取(30mL x 3)。有机层使用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠脱水，过滤及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化(EA之PE溶液，3％至10％v/v)以提供5-溴-3-异丙基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶之白色固体(570mg,66％产率)。LC-MS(ESI)m/z:393[M+H]+。
步骤4：取含5-溴-3-异丙基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶(200mg,508.52umol)、中间物13(225.11mg,762.78umol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(41.53mg,50.85umol)、及K2CO3(210.85mg,1.53mmol)之二
Figure BDA0003506712340003791
烷(3mL)及H2O(0.43mL)混合物于N2与100℃搅拌一夜。冷却至室温后，混合物浓缩，及残质经硅胶快速管柱层析法纯化(DCM/MeOH＝20/1v/v)以提供(2-胺基-5-(3-异丙基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物之褐色油(290mg,100％产率)。LC-MS(ESI)m/z:482[M+H]+。
步骤5：于室温，在含(2-胺基-5-(3-异丙基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物(100mg,207.66umol)之甲醇(5mL)溶液中添加NaOH水溶液(3N,3mL,9mmol)。混合物回流2小时，及浓缩。残质使用H2O(10mL)稀释，使用稀HCl溶液(1N)调整至pH～5，及使用DCM萃取(20mL x 3)。有机层经无水硫酸钠脱水，过滤，及浓缩。.残质经制备性-HPLC纯化(MeCN/0.1％HCOOH)以提供(2-胺基-5-(3-异丙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物之白色固体(10.8mg,16％产率)。LC-MS(ESI)m/z:328[M+H]+。
实例78
Figure BDA0003506712340003792
(5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基)二甲基膦氧化物
步骤1：依实例50步骤1之相同制程，使用5-溴-2-(三氟甲基)苯胺替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z:306[M+H]+。
步骤2：于-78℃，在含5-(3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯胺(50mg,163.77umol)之THF(5mL)溶液中添加氟化硼乙醚合物(92.98mg,655.10umol,82.28uL)及亚硝酸第三丁基酯(59.11mg,573.21umol,68.18uL)。混合物于此温度搅拌10分钟，回升至室温，及搅拌30分钟。混合物使用Et2O(10mL)稀释，及过滤排除固体。取滤液浓缩(低于20℃)，取所得重氮鎓盐加至0℃之含KI(40.78mg,245.66umol)及碘(14.66mg,114.64umol)之丙酮(5mL)混合物中。所得混合物于室温搅拌一夜，及浓缩。残质经硅胶快速管柱层析法纯化以提供3-乙基-5-(3-碘-4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶之黄色固体(30mg,44％产率)。LC-MS(ESI)m/z:417[M+H]+。
步骤3：依实例50步骤2之相同制程，使用3-乙基-5-(3-碘-4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶替代5-(3-溴-4-甲基苯基)-3-乙基-1H-吡咯幷[2,3-b]吡啶。LC-MS(ESI)m/z:367[M+H]+。

Claims (45)

1.一种如结构式(I-0)代表之化合物或其医药上可接受之盐或立体异构物，
Figure FDA0003506712330000011
其中
X为CR2R3或NR3；
A为CR2或N；
R为8-10员双环含氮杂芳基或8-10员双环含氮杂环基，其可视需要经侧氧基取代，其中由R代表之含氮杂芳基或含氮杂环基具有1至3个选自：N、O、与S之杂原子，且可视需要经1至4个Ra取代，及其中R系利用氮环原子连接嘧啶环或R系以如下结构式代表：
Figure FDA0003506712330000012
R1为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、苯基、5-6员杂芳基、C3-6环烷基或3-7员杂环基，其中由R1代表或在由R1代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、杂芳基、环烷基或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自下列各物所组成群中之取代基取代：卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷基、C1-4卤烷氧基及NR11R12；或
R及R1与其等所附接之碳原子共同形成如下代表之环：
Figure FDA0003506712330000021
其中
Figure FDA0003506712330000022
键结系连接嘧啶环；
R2之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11或S(＝O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基团中之烷基、烯基、炔基或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11R12所组成群组之取代基所取代；
R3为H、C1-6烷基、C(O)C1-6烷基、C3-6环烷基或3-7员杂环基，其中由R3代表或在由R3代表之基团中之烷基、环烷基或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基、3-7员杂环基及NR11R12所组成群组之取代基所取代；
R11及R12之各例分别独立为H或C1-6烷基，其中由R11或R12代表之烷基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基及3-7员杂环基所组成群组之取代基所取代，或
R11及R12与其等所附接之氮原子或磷原子共同形成3-7员杂环基，其可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基及C1-4卤烷氧基所组成群组之取代基所取代；
Ra之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、C3-6环烷基、3-7员杂环基或5-6员杂芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12及5-6员杂芳基所组成群组之取代基所取代；或
两个Ra与其等所附接碳原子(群)共同形成C3-6环烷基或3-7员杂环基，其中环烷基或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基及C1-4卤烷氧基所组成群组之取代基所取代；
Rb之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、C3-6环烷基、3-7员杂环基或5-6员杂芳基，其中由Rb代表或在由Rb代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12及5-6员杂芳基所组成群组之取代基所取代；
Rc之各例分别独立为苯基、具有1至3个选自N及O之杂原子之5-6员单环状杂环基；具有1至3个选自N及O之杂原子之5-6员单环状杂芳基；其中，由Rc代表之苯基、杂环基或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12及P(O)二-C1-6烷基所组成群组之取代基所取代；
Ra'为C1-6烷基，其可视需要经OH、CN、5-6员杂芳基、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12取代；
m为0、1、2或3；
n为0、1、2、3或4；
p为1、2或3；
q为1、2或3；及p+q≤4。
2.如权利要求1所述之化合物或其医药上可接受之盐或立体异构物，其中该化合物系由结构式(I-1)代表：
Figure FDA0003506712330000051
3.如权利要求1或2所述之化合物或其医药上可接受之盐或立体异构物，其中该化合物系由结构式(I-2)代表：
Figure FDA0003506712330000052
4.如权利要求1至3中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure FDA0003506712330000053
Figure FDA0003506712330000054
Figure FDA0003506712330000061
其中
Figure FDA0003506712330000062
键结连接嘧啶环。
5.如权利要求1至4中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Ra之各例分别独立为H、卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OR11、NR11C(O)C1-4烷基、NR11S(＝O)2R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、P(＝O)R11R12、C3-6环烷基、3-7员杂环基或5-6员杂芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基团中之烷基、烷氧基、环烷基、杂环基或杂芳基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12及5-6员杂芳基所组成群组之取代基所取代。
6.如权利要求1至5中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R1为H、卤素、CN、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基，其中由R1代表或在由R1代表之基团中之烷基、烯基或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷基、C1-4卤烷氧基及NR11R12所组成群组之取代基所取代。
7.如权利要求1至6中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R2之各例分别独立为H、卤素、OH、CN、NH2、NO2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、NR11C(O)C1-4烷基、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11或S(＝O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基团中之烷基或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11R12所组成群组之取代基所取代。
8.如权利要求1至7中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R3为H、C1-6烷基或C(O)C1-6烷基，其中由R3代表或在由R3代表之基团中之烷基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11R12所组成群组之取代基所取代。
9.如权利要求1至8中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Ra之各例分别独立为H、卤素、OH、CN、C1-4烷基、C3-6环烷基、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、N(R11)S(＝O)2R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、P(O)R11R12或5-6员杂芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基团中之烷基或环烷基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(＝O)2R12、C(O)OR11、NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12及5-6员杂芳基所组成群组之取代基所取代；
R11及R12之各例分别独立为H或C1-6烷基。
10.如权利要求1至9中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R1为H、卤素、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C2-4烯基、C1-4烷氧基或C1-4卤烷氧基。
11.如权利要求1至10中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure FDA0003506712330000081
Figure FDA0003506712330000082
Figure FDA0003506712330000083
其中
Figure FDA0003506712330000084
键结系连接嘧啶环，及n为0至4。
12.如权利要求1至10中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure FDA0003506712330000085
Figure FDA0003506712330000086
其中
Figure FDA0003506712330000087
键结系连接嘧啶环，及n为0至2。
13.如权利要求1至10中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure FDA0003506712330000088
Figure FDA0003506712330000089
其中
Figure FDA00035067123300000810
键结系连接嘧啶环，及n为0至2。
14.如权利要求1至13中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Ra之各例分别独立为H、卤素、C1-4烷基、-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kC(O)NR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)kS(＝O)2R11、-(CHRaa)kS(＝O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)k-5-6员杂芳基或-(CHRaa)kP(＝O)R11R12；
Raa分别独立为H或可视需要经卤素取代之C1-3烷基；
R11及R12分别独立为H或C1-4烷基；及
k为0或1。
15.如权利要求1至14中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R1为H、F、Cl、CN或CF3。
16.如权利要求1至15中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure FDA0003506712330000091
Figure FDA0003506712330000092
其中
Figure FDA0003506712330000093
键结系连接嘧啶环，及n为0至4。
17.如权利要求1至10中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R为
Figure FDA0003506712330000094
其中
Figure FDA0003506712330000095
键结系连接嘧啶环，
Ra1分别独立为H、C1-4烷基或C1-4羟基烷基；
Ra1’分别独立为-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kC(O)NR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)kS(＝O)2R11、-(CHRaa)kS(＝O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)k-5-6员杂芳基或-(CHRaa)kP(＝O)R11R12；
Raa分别独立为H或可视需要经卤素取代之C1-3烷基；
Ra分别独立为H、F或Cl；
R11及R12分别独立为H或C1-4烷基；
k为0或1。
18.如权利要求17所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Ra1分别独立为H、CH3或CH2OH；
Ra1’分别独立为-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kC(O)NR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)kS(＝O)2R11、-(CHRaa)kS(＝O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(＝O)2R12、-(CHRaa)k-四唑或-(CHRaa)kP(＝O)R11R12；
Raa分别独立为H、CH3或CF3；
R11及R12分别独立为H或C1-2烷基；及
k为0或1。
19.如权利要求18所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中Ra之各例分别独立为H或F。
20.如权利要求1至19中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R1为Cl。
21.如权利要求1至3中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R及R1与其等所附接之碳原子共同形成如下代表之环：
Figure FDA0003506712330000111
其中
Figure FDA0003506712330000112
键结系连接嘧啶环。
22.如权利要求1至3及21中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Rb之各例分别独立为H、卤素、OH、CN、NH2、COOH、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4羟基烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C1-4羟基烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NR11OR12、S(＝O)2R11、S(＝O)2NR11R12、NR11(S＝O)2R12、C(O)NR11S(＝O)2R12、P(＝O)R11R12、5-6员杂芳基或NR11C(O)C1-4烷基；及
Rc之各例为苯基或吡啶基，其各可视需要经一或两个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12及P(＝O)二-C1-6烷基所组成群组之取代基所取代。
23.如权利要求1至3、21及22中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R及R1与其等所附接之碳原子共同形成如下代表之环：
Figure FDA0003506712330000113
其中
Figure FDA0003506712330000114
键结系连接嘧啶环。
24.如权利要求1至3及21至23中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Rb之各例分别独立为H、卤素、CN、COOH、C1-2烷基或C1-2卤烷基；
Rc之各例为苯基或吡啶基，其各可视需要经一或两个分别独立选自由卤素、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12及P(＝O)二-C1-6烷基所组成群组之取代基所取代，及
R11及R12之各例分别独立为H或C1-6烷基。
25.如权利要求1至3及21至24中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Rb之各例分别独立为H、CN或COOH；及
Rc之各例为苯基或吡啶基，其各可视需要经一或两个分别独立选自由C1-4烷基、C(O)N(CH3)2及P(＝O)(CH3)2所组成群组之取代基所取代。
26.如权利要求1至25中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中m为0或1。
27.如权利要求1至26中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
Figure FDA0003506712330000121
为
Figure FDA0003506712330000122
28.如权利要求1至27中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R2之各例为H、卤素、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基；及R3为H、C1-6烷基、C1-6羟基烷基或COCH2NR11R12。
29.如权利要求1至28中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R2之各例为H、F、Cl或OCH3；及R3为H或C1-4烷基。
30.一种如结构式(II)代表之化合物或其医药上可接受之盐或立体异构物，
Figure FDA0003506712330000131
其中
A1为CR’或N；
X为–P(＝O)R3’R4’；
R’为H、氘、卤素、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基，其中由R’代表或在由R’代表之基团中之烷基、烯基、炔基或烷氧基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11’R12’所组成群组之取代基所取代；
R1’之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、C3-7环烷基或3-7员杂环基，其中由R1’代表或在由R1’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11’R12’所组成群组之取代基所取代；
R2’之各例分别独立为H、氘、卤素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、苯基、5-6员杂芳基、C3-7环烷基或3-7员杂环基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基团中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、杂芳基、环烷基或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11’R12’所组成群组之取代基所取代；
各R3’及R4’分别独立为H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中由R3’或R4’代表之烷基、烯基或炔基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11’R12’所组成群组之取代基所取代；
R11’及R12’之各例分别独立为H或C1-6烷基，其中由R11’或R12’代表之烷基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、
C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基、C3-6环烷基及3-7员杂环基所组成群组之取代基所取代，或
R11’及R12’与其等所附接之氮原子共同形成3-7员杂环基，其可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基或C1-4卤烷氧基所组成群组之取代基所取代；
m’为0、1或2；及
n’为0、1或2。
31.如权利要求30所述之化合物或其医药上可接受之盐或立体异构物，其中该化合物系由结构式(II-1)代表：
Figure FDA0003506712330000151
其中该R’为H、卤素、NR11’R12’或C1-6烷基，其可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11’R12’所组成群组之取代基所取代。
32.如权利要求30或31所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中R3’及R4’分别独立为H或C1-6烷基，其可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11’R12’所组成群组之取代基所取代。
33.如权利要求30至32中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
R1’之各例分别独立为H、卤素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基或3-7员杂环基，其中由R1’代表之烷基、烯基、炔基、环烷基或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11’R12’所组成群组之取代基所取代；
R2’之各例分别独立为H、卤素、OH、NO2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、5-6员杂芳基或3-7员杂环基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基团中之烷基、烷氧基、杂芳基或杂环基可视需要经一至三个分别独立选自由卤素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤烷氧基及NR11’R12’所组成群组之取代基所取代。
34.如权利要求30至33中任一项所述之化合物或其医药上可接受之盐或立体异构物，其中该化合物系由结构式(II-2)或(II-2’)代表：
Figure FDA0003506712330000161
其中R’为H、卤素或NH2。
35.如权利要求30至34中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
R2’之各例分别独立为H、卤素、OH、可视需要经卤素或OH或NR11’R12’取代之C1-4烷基、C1-4烷氧基、C(O)OC1-6烷基、C(O)NR11’R12’、NR11’R12’、NR11’C(O)C1-6烷基、5-6员杂环基或5-6员杂芳基；及
R1’之各例分别独立为H或C1-4烷基。
36.如权利要求30至35中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中
R3’及R4’分别独立为C1-6烷基；及
R2’之各例分别独立为H、卤素、OH、可视需要经卤素或OH或NR11’R12’取代之C1-4烷基、C1-4烷氧基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NR11’R12’、NR11’R12’、NHC(O)C1-6烷基、吡咯啶基、吡咯啶-2-酮、
Figure FDA0003506712330000162
唑，其中R11’及R12’之各例分别独立为H或C1-4烷基。
37.如权利要求30至36中任一项所述之化合物或其医药上接受之盐或立体异构物，其中X为-P(O)(CH3)2，及R2’之各例分别独立为H、F、Cl、OH、CH3、NH2或NHCOCH3。
38.一种医药组成物，其包含医疗有效量之如权利要求1至37中任一项所述之化合物或其医药上可接受之盐或立体异构物，及医药上可接受之载剂。
39.一种组合，其包含医疗有效量之如权利要求1至37中任一项所述之化合物或其医药上可接受之盐或立体异构物，及一或多种医疗活性并用制剂。
40.一种治疗罹患癌症之个体之方法，其包括对该个体投与有效量之如权利要求1至37中任一项所述之化合物或其医药上可接受之盐或立体异构物。
41.如权利要求40所述之方法，其中该癌症系选自乳癌、结肠直肠癌、肺癌、卵巢癌及胰脏癌。
42.一种于有此需要之个体抑制HPK1活性之方法，该方法包括对该个体投与有效量之如权利要求1至37中任一项所述之化合物，或其医药上可接受之盐或立体异构物。
43.如权利要求42所述之方法，其中该个体患有癌症，且其中该癌症系经治疗的。
44.如权利要求43所述之方法，其中该癌症系选自乳癌、结肠直肠癌、肺癌、卵巢癌及胰脏癌。
45.一种如权利要求1至37中任一项所述之化合物或其医药上可接受之盐或其立体异构物，其用于作为药品之用途，如用于作为HPK1抑制剂的药品。
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