TW202116751A - Ｈｐｋ１抑制劑及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種如結構式(I-0)或式(II)代表之化合物：
Figure 109122604-A0202-11-0001-595
Figure 109122604-A0202-11-0001-901
或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其適用於治療可藉由抑制HPK1活性來治療之疾病(如癌症)。

Description

HPK1抑制劑及其用途 相關申請案之交叉參考文獻
本申請案主張2019年7月4日申請之國際專利申請案案號PCT/CN2019/094634之優先權。上述申請案之完整內容均以引用之方式併入本文中。
造血性前驅細胞激酶1(HPK1)，亦稱為絲裂原活化蛋白質激酶激酶激酶激酶1(Mitogen-Activated Protein Kinase Kinase Kinase Kinase 1(MAP4K1))，為一種蛋白質激酶，其作用在典型三層式MAPK途徑之上游，該等途徑包括MAP3K(MAP激酶激酶激酶(MAP Kinase Kinase Kinase))，其激活MAP2K(MAP激酶激酶(MAP Kinase Kinase))，其進而激活雙重Thr與Tyr MAPK家族成員JNK(c-Jun N-末端激酶)。原始在造血性前驅細胞中選殖之HPK1/MAP4K1主要表現在淋巴器官/組織，包括骨髓、胎兒肝臟、淋巴結、胎盤、脾臟、及胸腺(Hu等人，Gene & Dev.10(18)：2251-2264,1996；Kiefer等人，The EMBO J.15(24)：7013-7025,1996)。在細胞層級，HPK1係表現在造血性單位中所有細胞型態，包括造血性前驅細胞、T細胞、B細胞、巨噬細胞、樹突細胞、嗜中性血球、及肥大細胞(Hu，如上述文獻，Kiefer，如上述文獻)。
HPK1/MAP4K1為包括HPK1(MAP4K1)、GCK(MAP4K2)、GLK(MAP4K3)、HGK/NIK(MAP4K4)、KHS/GCKR(MAP4K5)、及MINK(MAP4K6)之六種MAP4K之其中之一。總言之，此等MAP4K為目前已判別出之約26種哺乳動物之類Ste20絲胺酸/蘇胺酸激酶之成員，其等係酵母sterile20蛋白質(Ste20p)之同源物，係一種在酵母費洛蒙訊號傳導途徑中激活MAP3K之假定存在之MAP4K。此等哺乳動物之類Ste20激酶依據功能域結構分成兩個次族群：p21-活化激酶(PAK)及胚胎中心激酶(GCK)。GCK次族群中，有數個成員可激活MAP3K激酶級聯反應，造成JNK活化。
MAP4K具有高度類似之結構，其具有N-末端激酶功能域(KD)，接著為2-4個富集脯胺酸之基序，及C-末端枸櫞同源(citron-homology)功能域(CNH)。
HPK1之激酶功能域之ATP-結合位點包括Lys-46。此殘基突變成為Met(HPK1-M46)破壞HPK1之催化性活化(Hu，如上述文獻)。
HPK1之激酶功能域內有多個保留之Ser/Thr磷酸化位點，及在其前兩個富集脯胺酸之基序之間有一個保留之Tyr磷酸化位點。HPK1激活似乎需要Tyr379(小鼠中，或在人類中之Tyr381)被LCK/ZAP70磷酸化，因為在Jurkat T細胞中，受到抗-CD3刺激時，LCK或ZAP70之缺陷破壞Tyr-379磷酸化及HPK1之激酶活性(Ling等人，JBC 276(22)：18908-18914,2001；Liou等人，Immunity 12(4)：399-408,2000；Sauer等人，JBC 276(48)：45207,45216,2001)。另一方面，Thr-355自體磷酸化調節HPK1之泛素化與降解。Thr-355為靶向PP4之脫磷酸化位點；此脫磷酸化作用防止CUL7/Fbxw8-介導之泛素化及已活化之HPK1之蛋白酶體降解(Wang等人，Cancer Res.69(3)：1063-1070,2009)，因此HPK1亦被蛋白 質磷酸酶4(PP4)穩定化及活化(Zhou等人，JBC 279(47)：49551-49561,2004)。
Tyr磷酸化位點亦鄰接凋亡蛋白酶(caspase)裂解位點(DDVD)。已顯示，全長度HPK1可在凋亡細胞中在此位點被凋亡蛋白酶-3裂解，造成N-末端HPK1片段之增強的催化活性(Chen等人，Oncogene 18：7370-7377,1999)。
HPK1之四種富集Pro之基序介導HPK1與許多含SH3功能域之蛋白質交互作用(Boomer & Tan,JCB 95(1)：34-44,2005)。
HPK1之CNH功能域可能涉及HPK1-介導之淋巴細胞吸附作用，因為另一種類Ste20激酶TNIK之枸櫞同源功能域結合Rap2，且調節肌動蛋白細胞骨架(Taira等人，JBC 279(47)：49488-49496,2004)。
MAP4K在免疫系統中扮演重要角色，尤其在淋巴細胞中，透過調節細胞訊號傳導、免疫細胞激活、細胞轉形、及細胞遷移。HPK1剔除(KO)小鼠顯示增強之T-細胞活化，增加細胞激素產生，及在KLH免疫後增加抗體產生。HPK1 KO小鼠亦更能感受EAE誘發。HPK1 KOT細胞與B細胞顯示增強的細胞活化及抗原受體訊號傳導。HPK1 KO樹突細胞顯示較高量之共同刺激分子及促炎性細胞激素(Alzabin等人，J.Immunol.182(10)：6187-6194,2009；Shui等人，Nat.Immunol.8(1)：84-91,2007)。
在細胞株(例如，HEK293與COS-1細胞，及造血性Jurkat T細胞與白血病HL-60細胞)中過度表現，證實HPK1可以透過多種MAP3K(包括TAK1、MEKK1、及MLK3)激活MAPK JNK(但不是p38或ERK MAP激酶)，其等均激活MAP2K MKK4與MKK7，進而激活JNK。
值得注意，MAP4K在免疫細胞中之調節功能似乎主要受到不依賴JNK之機轉介導。已證實IKK-NF-κB活化需要HPK1激酶活化， 且咸信HPK1係利用調節CARMA1來運作。CARMA1為在所謂CBM(CARMA1/BCL10/MALT1)複合物中之轉接蛋白質，其在Jurkat T細胞中受到抗-CD3刺激時，促進IKKβ活化。活化之IKK裂解IκB，並釋出相關之NF-κB核轉錄因子。特定言之，HPK1可被誘發與CARMA1相聯，直接在Ser-551磷酸化CARMA1，其係NF-κB活化所必需(Brenner等人，PNAS USA,196(34)：14508-14513,2009)。
T細胞中，當TCR刺激時，淋巴細胞蛋白質酪胺酸激酶(Lck)使TCR/CD3複合物之細胞溶質側之免疫受體酪胺酸活化基序(ITAM)磷酸化。Zap-70隨後募集至TCR/CD3複合物，在此進行磷酸化及活化。活化之ZAP-70使稱為SLP-76之轉接蛋白質磷酸化，其轉移至漿膜，藉由與許多蛋白質(包括HPK1)結合，促進形成多重蛋白質訊號小體複合物。此等蛋白質集體傳送TCR訊號至不同效應分子，造成T-淋巴細胞之活化、存活、及增殖。
此過程中，HPK1直接結合SLP-76之SH2功能域，主要作為TCR訊號傳導之負向調節劑。例如，在HPK1 KO原生T細胞中加強TCR訊號傳導，當於活體外連接TCR時，其等顯示過度增殖及產生IL-2(Shui，如上述文獻)。咸信HPK1可透過負向反饋機轉，在Ser-376磷酸化SLP-76轉接蛋白質，而下調TCR訊號傳導。當Ser-376被HPK1磷酸化時，SLP-76透過已磷酸化之Ser-376殘基結合至14-3-3，造成SLP-76之Lys-30(K30)殘基泛素化，隨後即成為蛋白酶體降解之標靶。HPK1亦藉由類似機轉，在其他轉接蛋白質(包括GADS)下調TCR訊號傳導(例如，藉由GADS之Thr-254之磷酸化及促進14-3-3交互作用)。
因此，HPK1似乎在JNK活化及TCR訊號傳導扮演雙重且相反角色。雖然HPK1已證實在不同過度表現系統中透過MAP3K- MAP2K-MAPK途徑直接激活JNK途徑，但HPK1-介導SLP-76活化的抑制亦造成TCR訊號傳導中之JNK活性的抑制。此點與HPK1剔除之原生T細胞顯示未受影響之JNK活性結果一致(Shui，如上述文獻)。同樣地，HPK1似乎依兩種不同且相反機轉來調節IKK活化-HPK1一方面藉由直接磷酸化CARMA1來激活IKK；另一方面HPK1亦藉由抑制SLP-76活化來負向調節IKK活化。此點似乎與HPK1扮演之雙重角色相反，咸信HPK1在TCR訊號傳導初始期促進JNK及IKK活化，但在末期阻礙TCR訊號傳導中扮演重要角色。
HPK1亦在B細胞中之BCR所誘發細胞活化及增殖扮演類似之負向調節角色。B細胞利用稱為BLNK之類SLP-76轉接蛋白質來轉導BCR訊號傳導，包括JNK及IKK活化。B細胞中，Tyr激酶Syk及Lyn促進HPK1之Tyr磷酸化與活化，及造成HPK1之pY379介導HPK1-BLNK結合作用。BLNK之HPK1的負向反饋係透過BLNK之Thr-152。pT152被14-3-3結合，造成在多重Lys殘基的BLNK泛素化，隨後BLNK的蛋白酶體降解(因此阻礙BCR訊號傳導)。
值得注意的是HPK1似乎為調節性T細胞(Treg)之壓制功能之正向調節劑(Sawasdikosol等人，J Immunol.188(supp.1)：163,2012)。HPK1缺陷小鼠Foxp3+ Tregs在壓制TCR所誘發效應子T細胞增殖出現缺陷，反而在TCR接合時，矛盾地得到製造IL-2的能力(Sawasdikosol，如上述文獻)。因此，HPK1為Treg功能及周邊自體耐受性之重要調節劑。
HPK1亦涉及PGE2所介導CD4+ T細胞活化的抑制(Ikegami等人，J Immunol.166(7)：4689-4696,2001)。US2007/0087988顯示，CD4+ T細胞曝露到PGE2之生理濃度時，透過PGE2所誘發PKA活化，可增加HPK1激酶活性。HPK1缺陷之T細胞之增殖可耐受PGE2 之壓制效應(US 2007/0087988)。因此，PGE2所介導HPK1活化可能代表一種調控免疫反應之新穎調節途徑。
不同於TCR及BCR，HPK1亦轉導TGF-R(轉化生長因子受體)(Wang等人，JBC 272(36)：22771-22775,1997)或Gs-偶聯PGE2受體(EP2及EP4)(Ikegami等人，J Immunol.166(7)：4689-4696,2001)下游之訊號。
HPK1負向調節免疫細胞附著。T細胞中，TCR活化亦誘發整合素活化，造成T-細胞附著及免疫突觸形成。此係由促進降解之轉接蛋白質(ADAP)之SLP-76結合來達成，其係TCR所誘發整合素活化所必需(Wang等人，J.Exp.Med.200(8)：1063-1074,2004)，但其組成性相關之SKAP55蛋白質使活化之小GTPase Rap1靶向漿膜，造成整合素活化(Kliche等人，MCB 26(19)：7130-7144,2006)。換言之，SLP-76/ADAP/SKAP55三元複合物接力傳達TCR訊號傳導給整合素家族之附著分子，藉以促進T-細胞附著。HPK1不僅透過下調SLP-76(如上述文獻)，而且透過與ADAP競爭SLP-76的相同SH2結合位點，而負向調節此途徑，進而阻礙ADAP下游效應子Rap1之活性(Patzak等人，Eur.J.Immunol.40(11)：3220-3225,2010)。
HPK1同樣負向調節B細胞中之整合素活化及細胞附著。其中，HPK1係與稱為SKAP-HOM之SKAP55同源物相關(Konigsberger等人，PloS One 5(9).pii：e12468,2010)，其係B-細胞附著所必需(Togni等人，MCB 25(18)：8052-8063,2005)。咸信HPK1誘發SKAP-HOM之負向磷酸化位點，進而壓制Rap1活化。
然而，在嗜中性細胞中，HPK1正向調節其附著。嗜中性細胞運送，包括緩慢滾動、緊密結合、細胞擴散、及血球滲出，係受到β2-整 合素活化之由外往內訊號傳導所控制，誘發肌動蛋白與HIP-55(55kDa之HPK1-交互作用蛋白質)間之交互作用。其強化β2-整合素之高親和性構形，有助於嗜中性細胞附著(Hepper等人，J.Immunol.188(9)：4590-4601,2012；Schymeinsky等人，Blood 114(19)：4209-4220,2009)。當β2-整合素介導附著作用時，HPK1與HIP-55及肌動蛋白共同定位在嗜中性細胞之板狀偽足(Jakob等人，Blood 121(20)：4184-4194,2013)。CXCL1所介導嗜中性細胞附著作用被活體內及活體外之HPK1缺陷或HIP-55缺陷破壞(Jakob，如上述文獻Schymeinsky，如上述文獻)。
與HPK1下調TCR及BCR功能之角色一致，HPK1負向調節後天免疫反應，並喪失HPK1所介導調節T-細胞活化，且免疫反應可能為自體免疫病源之重要機轉。在HPK1 KO小鼠中，雖然T及B細胞之發展似乎不受影響(Shui，如上述文獻)，但來自此等動物之T細胞顯示，當在活體外受到抗-CD3刺激時，TCR近端之訊號傳導及下游ERK之活化大幅增加，造成此等細胞過度增殖(Shui，如上述文獻)。來自已免疫之HPK1-缺陷小鼠之T細胞受到抗原性特異性刺激時過度反應，顯著產生較高量的發炎細胞激素，如IL-2、IFN-γ、及IL-4。此等小鼠亦產生更高量之IgM及IgG同型，表示已加強剔除HPK1之B細胞功能(Shui，如上述文獻)。
HPK1亦負向控制小鼠之自體免疫性，因為HPK1 KO小鼠對誘發實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE)之敏感性較高(Shui，如上述文獻)。HPK1衰減亦有助於異常之T-及B-細胞活化及人類患者之自體免疫力。乾癬性關節炎患者之周邊血液單核細胞或全身性紅斑性狼瘡(SLE)患者之T細胞之HPK1已下調。
HPK1之生理功能不限於淋巴細胞，HPK1亦透過未知機轉負向調節樹突狀細胞(DC)成熟及活化(Alzabin，如上述文獻)。在HPK1 KO 小鼠中，骨髓衍生之樹突狀細胞(BMDC)顯示共同刺激分子CD80/CD86之加強的含量，並增加產生促炎細胞激素(Alzabin，如上述文獻)。結果，HPK1 KO小鼠中之樹突狀細胞之抗原呈現活性更有效(Alzabin，如上述文獻)。更重要的是，由HPK1 KO BMDC所介導CTL反應腫瘤根除之效力比野生型BMDC更高(Alzabin，如上述文獻)。此外，HPK1亦可利用T-及B-淋巴細胞依賴性機轉控制抗腫瘤免疫性。已顯示HPK1缺陷T細胞之過繼移轉在控制腫瘤生長及轉移比野生型T細胞更有效(Alzabin等人，Cancer Immunol Immunother 59(3)：419-429,2010)。同樣地，來自HPK1剔除小鼠之BMDC在提供T細胞反應來根除路易士肺癌瘤(Lewis lung carcinoma)比野生型BMDC更有效(Alzabin等人，J Immunol.182(10)：6187-6194,2009)。
因此，需要HPK1抑制性化合物透過調控HPK1活性來治療疾病或疾患。
本文說明為抑制HPK1活性之式(I-0)、(I-1)、(I-2)、(I)、(II)、(II-1)、(II-2)、或(II-2’)化合物，及實例化合物(統稱為「本發明化合物」)，及其醫藥上可接受之鹽類。
一項態樣中，本發明提供一種如結構式(I-0)代表之化合物：
Figure 109122604-A0202-12-0008-600
或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中
X為CR2R3或NR3；
A為CR2或N；
R為8-10員雙環含氮雜芳基或8-10員雙環含氮雜環基，其可視需要經側氧基取代，其中由R代表之含氮雜芳基或含氮雜環基具有1至3個選自：N、O、與S之雜原子，且可視需要經1至4個Ra取代，及其中R係利用氮環原子連接嘧啶環，或R係以如下結構式代表：
Figure 109122604-A0202-12-0009-602
R1為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、苯基、5-6員雜芳基、C3-6環烷基、或3-7員雜環基，其中由R1代表或在由R1代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、雜芳基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12；或
R及R1與其等所附接之碳原子共同形成如下代表之環：
Figure 109122604-A0202-12-0009-603
 其中
Figure 109122604-A0202-12-0009-601
鍵結係連接嘧啶環；
R2之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、或S(=O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基團中之 烷基、烯基、炔基、或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12；
R3為H、C1-6烷基、C(O)C1-6烷基、C3-6環烷基、或3-7員雜環基，其中由R3代表或在由R3代表之基團中之烷基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、3-7員雜環基、及NR11R12；
R11及R12之各例分別獨立為H或C1-6烷基，其中由R11或R12代表之烷基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、及3-7員雜環基，或
R11及R12與其等所附接之氮原子或磷原子共同形成3-7員雜環基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、及C1-4鹵烷氧基；
Ra之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、C3-6環烷基、3-7員雜環基、或5-6員雜芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S (=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、及5-6員雜芳基；或
兩個Ra與其等所附接碳原子(群)共同形成C3-6環烷基或3-7員雜環基，其中環烷基或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、及C1-4鹵烷氧基；
Rb之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、C3-6環烷基、3-7員雜環基、或5-6員雜芳基，其中由Rb代表或在由Rb代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、及5-6員雜芳基；
Rc之各例分別獨立為苯基、具有1至3個選自N及O之雜原子之5-6員單環狀雜環基；具有1至3個選自N及O之雜原子之5-6員單環狀雜芳基；其中由Rc代表之苯基、雜環基、或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、及P(O)二-C1-6烷基；
Ra'為C1-6烷基，其可視需要經OH、CN、5-6員雜芳基、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12取代；
m為0、1、2、或3；
n為0、1、2、3、或4；
p為1、2、或3；
q為1、2、或3；及p+q
Figure 109122604-A0202-12-0012-149
4。
另一態樣中，本發明提供一種如結構式(II)代表之化合物：
Figure 109122604-A0202-12-0012-604
或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中
A1為CR’或N；
X為-P(=O)R3’R4’；
R’為H、氘、鹵素、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基，其中由R’代表或在由R’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
R1’之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、C3-7環烷基、或3-7員雜環基， 其中由R1’代表或在由R1’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
R2’之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、苯基、5-6員雜芳基、C3-7環烷基、或3-7員雜環基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、雜芳基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
各R3’及R4’分別獨立為H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中由R3’或R4’代表之烷基、烯基、或炔基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
R11’及R12’之各例分別獨立為H或C1-6烷基，其中由R11’或R12’代表之烷基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、及3-7員雜環基，或
R11’及R12’與其等所附接之氮原子共同形成3-7員雜環基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、或C1-4鹵烷氧基；
m’為0、1、或2；及
n’為0、1、或2。
本文提供一種醫藥組成物，其包含有效量之本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽，及醫藥上可接受之載劑。
亦提供一種組合，其包含醫療有效量之本發明化合物、或其醫藥上可接受之鹽，及一或多種醫療活性併用製劑。
本發明進一步提供一種為有此需要之個體抑制HPK1活性之方法，該方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明化合物、或其醫藥上可接受之鹽。
本發明進一步提供一種治療罹患本文所說明疾病或病症(如癌症，如乳癌、結腸直腸癌、肺癌、卵巢癌、及胰臟癌)之方法，該方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明化合物、或其醫藥上可接受之鹽。
某些具體例揭示本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽，用為醫藥，如作為HPK1抑制劑之醫藥。
本發明亦提供一種以本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽或含其等之醫藥組成物於上文所說明任何本發明方法中之用途。一具體例中，提供一種本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽或含其等之醫藥組成物，用於上文所說明任何本發明方法中。另一具體例中，提供一種以本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽或含其等之醫藥組成物於製造用於上文所說明任何本發明方法中之醫藥上之用途。
1.概述
本文說明之本發明提供一種HPK1/MAP4K1抑制劑、其醫藥上可接受之鹽類、其醫藥組成物、及使用其等調控(例如，抑制) HPK1/MAP4K1活性之方法，該方法包括對有需要之患者/個體投與本發明HPK1/MAP4K1抑制劑化合物，或其醫藥上可接受之鹽類。某些具體例中，本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽類適用於醫療性投藥，以在治療癌症時，加強、刺激及/或增加免疫力。
例如，治療與抑制HPK1交互作用有關之疾病或疾患之方法包括對有此需要之患者投與醫療有效量之本文所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽類。本發明化合物可以單獨使用、組合其他製劑或療法使用、或作為佐劑或前置佐劑使用，供治療疾病或疾患，包括癌症。
2.定義
本文所採用術語「一種」、「一個」、「該」及類似術語用於本發明內容中(尤其在申請專利範圍的內容中)係涵括單數與複數，除非本文中另有其他說明或與內文牴觸。
本文所採用「鹵基」意指鹵素，且包括氯、氟、溴、及碘。
單獨使用或作為較大部份體(如「烷氧基」或「鹵烷基」及類似基團)之一部份所使用術語「烷基」意指飽和脂系直鏈或分支單價烴基。除非另有明確說明，否則烷基通常具有1-4或1-6個碳原子，亦即(C1-C4)烷基或(C1-C6)烷基。此時，「(C1-C4)烷基」意指具有1至4個碳原子之呈直鏈或分支排列之基團。實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基等等。
術語「C1-6伸烷基」係指具有1至6個碳原子之二價完全飽和之分支或直鏈單價烴基。同樣地可解釋術語「C1-4伸烷基」、「C1-3伸烷基」及「C1-2伸烷基」。C1-6伸烷基之代表性實例包括(但不限於)：亞甲基、伸乙基、伸正丙基、伸異丙基、伸正丁基、伸第二丁基、伸異丁基、伸第三丁基、伸正戊基、伸異戊基、伸新戊基、及伸正己基。
術語「可視需要經羥基取代之C1-C6烷基」係指可經一個或多個羥基取代之如上述定義之C1-C6烷基。其實例包括(但不限於)羥基甲基、羥基乙基、1,2-二羥基乙基、2,3-二羥基-丙基等等。
本文所採用術語「二C1-6烷基胺基」係指如式-N(Ra)-Ra之部份體，其中各Ra為如上述定義之C1-6烷基，其等可相同或相異，類似術語「單C1-6烷基胺基」，係指如式-N(H)-Ra之部份體，其中Ra為如上述定義之C1-6烷基。
術語「烯基」意指含有至少一個雙鍵之分支或直鏈單價烴基。烯基可為單不飽和或多不飽和，且可呈E或Z組態。除非另有明確說明，否則烯基通常具有2-6個碳原子，亦即(C2-C6)烯基。例如，「(C2-C6)烯基」意指具有2-6個碳原子之呈直鏈或分支排列之基團。
術語「炔基」意指含有至少一個參鍵之分支或直鏈單價烴基。除非另有明確說明，否則炔基通常具有2-6個碳原子，亦即(C2-C6)炔基。例如，「(C2-C6)炔基」意指具有2-6個碳原子之呈直鏈或分支排列之基團。
術語「烷氧基」意指透過氧連接原子附接之烷基，由-O-烷基代表。例如，「C1-C6烷氧基」係指-O-C1-C6烷基，其中烷基如本文上述定義，及「(C1-C4)烷氧基」包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、及丁氧基等等。烷氧基之代表性實例包括(但不限於)甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、第三丁氧基、戊基氧基、己基氧基、環丙基氧基-、環己基氧基-及類似物。通常，烷氧基具有約1至6個碳原子、1至4個碳原子、或1至2個碳原子。
術語「鹵烷基」及「鹵烷氧基」意指可能經一個或多個鹵原子取代之烷基或烷氧基。鹵烷基實例包括(但不限於)三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基及類似物。
因此術語「可視需要經鹵素取代之C1-6烷基」係指可經一個或多個鹵素取代之如上述定義之C1-C6烷基。其實例包括(但不限於)三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基、3-溴-2-氟丙基、及1-溴甲基-2-溴乙基。
本文所採用術語「環烷基」包括具有3至14個碳且含有指定環數與碳原子數之飽和環狀、雙環狀、三環狀、或多環狀烴基(例如，C3-C14單環、C4-C14雙環、C5-C14三環、或C6-C14多環之環烷基)。有些具體例中，「環烷基」為單環狀環烷基。單環狀環烷基實例包括環戊基(C5)、環己基(C6)、環丙基(C3)、環丁基(C4)、環庚基(C7)及環辛基(C8)。有些具體例中，「環烷基」為雙環狀環烷基。雙環狀環烷基實例包括雙環[1.1.0]丁烷(C4)、雙環[1.1.1]戊烷(C5)、螺[2.2]戊烷(C5)、雙環[2.1.0]戊烷(C5)、雙環[2.1.1]己烷(C6)、雙環[3.3.3]十一碳烷(C11)、十氫萘(C10)、雙環[4.3.2]十一碳烷(C11)、螺[5.5]十一碳烷(C11)及雙環[4.3.3]十二碳烷(C12)。有些具體例中，「環烷基」為三環狀環烷基。三環狀環烷基實例包括金剛烷(C12)。除非另有其他說明，否則「環烷基」具有3至6個碳原子，且係單環。
單獨使用或作為如「芳烷基」、「芳烷氧基」或「芳基氧烷基」之較大部份體中一部份使用之術語「芳基」意指碳環系芳香環。術語「芳基」可與術語「芳基環」、「碳環系芳香環」、「芳基基團」及「碳環系芳香基」交換使用。通常，芳基為具有6-20個碳原子，通常為6-14個環碳原子之單環、雙環或三環狀芳基。此外，本文所採用術語「芳基」係指可為單一芳香環或共同稠合之多重芳香環之芳香系取代基。其實例包括苯基、萘基、蒽基、1,2-二氫萘基、1,2,3,4-四氫萘基、芴基、茚滿基、茚基及類似物。
「經取代之芳基」係取代在任何一個或多個可經取代之環原子，其為與氫鍵結之環碳原子。經取代之芳基通常經1-5個(如一個或兩個或三個)分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：羥基、硫醇基、氰基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、C1-C4烷氧基、C1-C4硫烷基、C1-C4烯基氧基、C1-C4炔基氧基、鹵素、C1-C4烷基羰基、羧基、C1-C4烷氧基羰基、胺基、C1-C4烷基胺基、二-C1-C4烷基胺基、C1-C4烷基胺基羰基、二-C1-C4烷基胺基羰基、C1-C4烷基羰基胺基、C1-C4烷基羰基、C1-C4烷基胺基、磺醯基、胺磺醯基、烷基胺磺醯基、及C1-C4烷基胺基磺醯基，其中上述各烴基(例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基殘基)在每次出現時可再經一個或多個分別獨立選自下列之殘基取代：鹵素、羥基或C1-C4烷氧基。
術語「雜環基」或「雜環系基團」意指單環狀非芳香系(包括部份飽和)環，其較佳具有3至10個組員及較佳包含1-4個環雜原子，或指多環，其環中較佳具有7至20個組員及較佳1至4個環雜原子，其中多環狀環具有一個或多個單環狀非芳香系雜環與一個或多個芳香系或雜芳香系環稠合。雜環基通常具有3至7個、3至24個、4至16個、5至10個、或5或6個環原子；其中可視需要有1至4個，尤指1或2個環原子為雜原子(因此其餘環原子為碳)。各雜原子分別獨立選自：氮、四級氮、氧化氮(例如，NO)；氧；及硫，包括亞碸與碸。雜環系基團可以附接在雜原子或碳原子上。雜環實例包括四氫呋喃(THF)、二氫呋喃、1,4-二氧雜環己烷、嗎啉、1,4-二硫雜環己烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧雜環戊烷、咪唑啶、咪唑啉、吡咯啉、吡咯啶、四氫哌喃、二氫哌喃、氧硫雜環戊烷、二硫雜環戊烷、1,3-二氧雜環己烷、1,3-二硫雜環己烷、氧硫雜環己烷、硫嗎啉及類似物。
雜環基可包括稠合或橋連環，及螺環。一具體例中，雜環基為具有單環狀非芳香系雜環與苯基稠合之雙環。多環之雜環系基團實例包括四氫異喹啉基(如1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基、2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基、1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基及2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基)、異吲哚啉基(如2-乙基異吲哚啉-5-基、2-甲基異吲哚啉-5-基)、吲哚啉基、四氫苯并[f]氧雜氮雜環庚烷基(例如，2,3,4,5-四氫苯并[f][1,4]氧雜氮雜環庚烷-7-基)。
術語「雜環」、「雜環基」、或「雜環系」不論飽和或部份飽和，亦指可視需要經取代之環。經取代之雜環基可為分別獨立經1-4個，如一個、或兩個、或三個、或四個取代基取代之雜環基。
有些具體例中，雜環基為具有環碳原子及1-4個環雜原子之3-14員非芳香環系，其中各雜原子分別獨立選自：氮、氧、及硫(「3-14員雜環基」)。
單獨使用或作為如「雜芳烷基」或「雜芳基烷氧基」之較大部份體中之一部份使用之術語「雜芳基」、「雜芳香系」、「雜芳基環」、「雜芳基基團」、「雜芳香環」、及「雜芳香基」係指具有5至14個選自碳及至少一個(通常為1至4個，更常為1或2個)雜原子(例如，氧、氮、或硫)之環原子之芳香系環基。「雜芳基」包括單環狀環及多環狀(例如，雙-或三環狀)環，其中由單環狀雜芳香系環與一個或多個其他碳環芳香系或雜芳香系環稠合。因此，「5-14員雜芳基」包括單環、雙環或三環狀環系。
單環狀5-6員雜芳基實例包括呋喃基(例如，2-呋喃基、3-呋喃基)、咪唑基(例如，N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基)、異
Figure 109122604-A0202-12-0019-150
唑基(例如，3-異
Figure 109122604-A0202-12-0019-151
唑基、4-異
Figure 109122604-A0202-12-0019-152
唑基、5-異
Figure 109122604-A0202-12-0019-153
唑基)、
Figure 109122604-A0202-12-0019-154
二唑基(例如，2-
Figure 109122604-A0202-12-0019-155
二唑基、5-
Figure 109122604-A0202-12-0019-156
二唑基)、
Figure 109122604-A0202-12-0019-157
唑基(例如，2-
Figure 109122604-A0202-12-0019-158
唑基、4-
Figure 109122604-A0202-12-0019-159
唑基、5-
Figure 109122604-A0202-12-0019-160
唑基)、吡唑 基(例如，3-吡唑基、4-吡唑基)、吡咯基(例如，1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基)、吡啶基(例如，2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基)、嘧啶基(例如，2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基)、嗒嗪基(例如，3-嗒嗪基)、噻唑基(例如，2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基)、三唑基(例如，2-三唑基、5-三唑基)、四唑基(例如，四唑基)、噻吩基(例如，2-噻吩基、3-噻吩基)、嘧啶基、吡啶基及嗒嗪基。
通常，雜芳基為5-10員環系(例如，5-6員單環或8-10員雙環)或5-6員環系。典型雜芳基包括2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-或3-吡咯基、2-、4-、或5-咪唑基、3-、4-、或5-吡唑基、2-、4-、或5-噻唑基、3-、4-、或5-異噻唑基、2-、4-、或5-
Figure 109122604-A0202-12-0020-161
唑基、3-、4-、或5-異
Figure 109122604-A0202-12-0020-162
唑基、3-或5-1,2,4-三唑基、4-或5-1,2,3-三唑基、四唑基、2-、3-、或4-吡啶基、3-或4-嗒嗪基、3-、4-、或5-吡嗪基、2-吡嗪基、及2-、4-、或5-嘧啶基。
多環狀芳香系雜芳基實例包括咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并
Figure 109122604-A0202-12-0020-163
唑基、苯并咪唑基、異喹啉基、吲哚基、異吲哚基、吖啶基、或苯并異
Figure 109122604-A0202-12-0020-164
唑基。
因此術語「雜芳基」亦指其中雜芳香環與一個或多個芳基、環脂系、或雜環基環稠合，其中該基團或附接點在雜芳香環。其非限制實例包括1-、2-、3-、5-、6-、7-、或8-吲哚嗪基、1-、3-、4-、5-、6-、或7-異吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-吲唑基、2-、4-、5-、6-、7-、或8-嘌呤基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、或9-喹嗪基、2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-異喹啉基、1-、4-、5-、6-、7-、或8-酞嗪基、2-、3-、4-、 5-、或6-萘啶基、2-、3-、5-、6-、7-、或8-喹唑啉基、3-、4-、5-、6-、7-、或8-噌啉基、2-、4-、6-、或7-蝶啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-4aH咔唑基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-咔唑基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-咔啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-、或10-吩萘啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-吖啶基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-萘嵌間二氮雜苯基、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、或10-菲繞啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、或9-吩嗪基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-、或10-吩噻嗪基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-、或10-吩
Figure 109122604-A0202-12-0021-165
嗪基、2-、3-、4-、5-、6-、或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、或10-苯并異喹啉基、2-、3-、4-、或噻吩并[2,3-b]呋喃基、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、或11-7H-吡嗪并[2,3-c]咔唑基、2-、3-、5-、6-、或7-2H-呋喃并[3,2-b]-哌喃基、2-、3-、4-、5-、7-、或8-5H-吡啶并[2,3-d]-o-
Figure 109122604-A0202-12-0021-166
嗪基、1-、3-、或5-1H-吡唑并[4,3-d]-
Figure 109122604-A0202-12-0021-167
唑基、2-、4-、或5-4H-咪唑并[4,5-d]-噻唑基、3-、5-、或8-吡嗪并[2,3-d]嗒嗪基、2-、3-、5-、或6-咪唑并[2,1-b]-噻唑基、1-、3-、6-、7-、8-、或9-呋喃并[3,4-c]噌啉基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10-、或11-4H-吡啶并[2,3-c]咔唑基、2-、3-、8-、或7-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基、7-苯并[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-、或7-苯并
Figure 109122604-A0202-12-0021-168
唑基、2-、4-、5-、6-、或7-苯并咪唑基、2-、4-、4-、5-、6-、或7-苯并噻唑基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-苯并氧雜環庚烷基、2-、4-、5-、6-、7-、或8-苯并
Figure 109122604-A0202-12-0021-169
嗪基、1-、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、或11-1H-吡咯并[1,2-b][2]苯并氮雜環庚烷基。
典型稠合雜芳基包括(但不限於)2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-異喹啉基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-苯并[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-、 或7-苯并
Figure 109122604-A0202-12-0022-170
唑基、2-、4-、5-、6-、或7-苯并咪唑基、及2-、4-、5-、6-、或7-苯并噻唑基。
本文所採用術語可視需要經羥基取代之吡啶或吡啶基(例如，2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基)係分別指羥基-吡啶或羥基-吡啶基，且可包括其互變異構型，如分別指吡啶酮或吡啶酮基。
本文所採用術語可視需要經側氧基取代之吡啶或吡啶基(例如，2-吡啶基、3-吡啶基、或4-吡啶基)係分別指吡啶酮或吡啶酮基，且可包括其互變異構型，如分別指羥基-吡啶或羥基-吡啶基，其限制條件為可得到該互變異構型。可視需要經側氧基取代之吡啶或吡啶基可進一步分別稱為吡啶-N-氧化物或吡啶基-N-氧化物。
「經取代之雜芳基」係在任何一個或多個可以取代之環原子取代，其為與氫鍵結之環碳或環氮原子。
術語「橋連雙環基」係指包括兩個環共用至少三個相鄰環原子之環系。
本文所採用許多部份體(例如，烷基、伸烷基、環烷基、芳基、雜芳基、或雜環基)係指「經取代」或「可視需要經取代」。當以此等術語其中之一修飾部份體時，係指該部份體中如習此相關技藝者已知可經取代之任何部份，包括一個或多個取代基。其中若出現超過一個取代基時，則各取代基可分別獨立選擇。此等取代方式係相關技藝習知者及/或本發明教示者。視需要選用之取代基可為任何適合附接該部份體之取代基。
若未明確指示合適取代基時，取代基實例包括(但不限於)：(C1-C5)烷基、(C1-C5)羥基烷基、(C1-C5)鹵烷基、(C1-C5)烷氧基、(C1-C5) 鹵烷氧基、鹵素、羥基、氰基、胺基、-CN、-NO2、-ORc1、-NRa1Rb1、-S(O)iRa1、-NRa1S(O)iRb1、-S(O)iNRa1Rb1、-C(=O)ORa1、-OC(=O)ORa1、-C(=S)ORa1、-O(C=S)Ra1、-C(=O)NRa1Rb1、-NRa1C(=O)Rb1、-C(=S)NRa1Rb1、-C(=O)Ra1、-C(=S)Ra1、NRa1C(=S)Rb1、-O(C=O)NRa1Rb1、-NRa1(C=S)ORb1、-O(C=S)NRa1Rb1、-NRa1(C=O)NRa1Rb1、-NRa1(C=S)NRa1Rb1、苯基、或5-6員雜芳基。各Ra1及各Rb1分別獨立選自-H及(C1-C5)烷基，其可視需要經羥基或(C1-C3)烷氧基取代；Rc1為-H、(C1-C5)鹵烷基或(C1-C5)烷基，其中(C1-C5)烷基可視需要經羥基或(C1-C3)烷氧基取代。
本文所說明化合物可能呈各種不同互變異構型。術語「互變異構物」或「互變異構性」係指兩種或更多種可以互相轉換之化合物/取代基，其係由氫原子之至少一種形式移動及至少一種價數變化所造成(例如，由單鍵變成雙鍵，由參鍵變成單鍵，或反之亦然)。互變異構化實例包括酮轉成烯醇、醯胺轉成亞醯胺、內醯胺轉成內醯亞胺、烯胺轉成亞胺、及烯胺轉成(不同烯胺)之互變異構化。本教示包括呈互變異構物型式之化合物，包括未出示結構之型式。所有此等化合物之異構型均包括在內。若化合物之互變異構物為芳香系，則此化合物為芳香系。
上文所述任一化學式之化合物均可呈一或多種異構性(例如，光學、幾何、或互變異構型)。上文所述任一化學式之化合物亦可標記同位素。此等變異係隱含在上文所定義任一化學式之化合物中，因為其等提及其結構式特色，因此均在本發明範圍內。
含有一個或多個不對稱碳原子之上文所述任一化學式之化合物可呈兩種或更多種立體異構物。若上述任一化學式之化合物含有烯基 或伸烯基時，可能出現幾何順式/反式(或Z/E)異構物。若結構式異構物可經由低能量屏障互相轉換時，可發生互變異構性(「互變異構化」)。其可在含有例如，亞胺基、酮基、或肟基之上文所述任一化學式之化合物中出現質子互變異構化形式，或在含有芳香系部份體之化合物中出現所謂之價數變異構化。因此單一化合物可能呈超過一種異構化。
具有一個或多個對掌性中心之化合物可呈各種不同立體異構型。立體異構物為僅在其空間排列上不同之化合物。立體異構物包括所有非對映異構物、對映異構物、及差向異構物型式，及其消旋物與混合物。術語「幾何異構物」係指具有至少一個雙鍵之化合物，其中雙鍵可能呈順式(亦稱為同側(syn或entgegen)(E))或反式(亦稱為反側(anti或zusammen)(Z))型式，及其混合物。當以名稱或結構式揭示之化合物未出示立體化學時，咸了解該名稱或結構式涵括一或多種可能之立體異構物、或幾何異構物、或涵括立體異構物或幾何異構物之混合物。
當以名稱或結構式說明幾何異構物時，咸了解以該名稱或結構式指示之異構物存在之程度高於另一種異構物，亦即以該名稱或結構式指示之幾何異構物之幾何異構性純度高於50%，如至少60%、70%、80%、90%、99%、或99.9%重量比純度。幾何異構性純度係由混合物中以該名稱或結構式指示之幾何異構物之重量除以混合物中所有幾何異構物總重量後決定。
消旋性混合物意指50%為一種對映異構物及50%為對應之對映異構物。當具有一個對掌性中心之化合物以名稱或結構式表示，但未出示該對掌性中心之立體化學時，咸了解該名稱或結構式涵括該化合物之 兩種可能對映異構型(例如，兩種純對映異構性、富集對映異構性或消旋性)。當具有兩個對掌性中心之化合物以名稱或結構式表示，但未出示該對掌性中心之立體化學時，咸了解該名稱或結構式涵括該化合物之所有可能非對映異構型(例如，純非對映異構性、富集非對映異構性及一或多種非對映異構物之等莫耳混合物(例如，消旋混合物))。
對映異構物及非對映異構物混合物可採用習知方法解析成其對映異構物或立體異構物組份，如對掌相氣相層析法、對掌相高效液相層析法、化合物結晶形成對掌性鹽複合物、或於對掌性溶劑中結晶化合物。亦可由純非對映異構性或純對映異構性中間物、試劑、及觸媒採用習知之不對稱合成法，製得對映異構物及非對映異構物。
當化合物係以指示單一對映異構物之名稱或結構式代表時，除非另有其他說明，否則該化合物之光學純度為至少60%、70%、80%、90%、99%或99.9%(亦稱為「純對映異構性」)。光學純度係由混合物中以該名稱或結構式指示之對映異構物之重量除以混合物中兩種對映異構物總重量而決定。
當所揭示化合物之立體化學以名稱或結構式表示及該名稱或所出示結構式涵括超過一種立體異構物(例如，呈一對非對映異構物)時，咸了解其包括所涵括其中一種立體異構物或所涵括立體異構物之任何混合物。亦咸了解，該以名稱或結構式表示之立體異構物之立體異構性純度為至少60%、70%、80%、90%、99%或99.9%重量比。此時之立體異構性純度係由該名稱或結構式所涵括立體異構物混合物總重量除以所有立體異構物之混合物總重量而決定。
上文所述任一化學式之化合物之醫藥上可接受之鹽類亦可包含光學活性之抗衡離子(例如，d-乳酸鹽或l-離胺酸)或為消旋性(例如，dl-酒石酸鹽或dl-精胺酸)。
順式/反式異構物可採用習此相關技藝者習知之技術分離，例如，層析法及分段結晶法。
常用於製備/單離個別對映異構物之技術包括由合適之純光學性前體進行對掌性合成法或由消旋物(或鹽或衍生物之消旋物)使用例如，對掌性高效液相層析法(HPLC)解析。或者，可由消旋物(或消旋性前體)與合適之光學活性化合物(例如，醇)，或若上述任一化學式之化合物包含酸性或鹼性部份體時，與鹼或酸(如1-苯基乙基胺或酒石酸)反應。所得之非對映異構物混合物可採用層析法及/或分段結晶法分離，及由一或兩種非對映異構物採用習此相關技藝者習知之方式轉化成對應之純對映異構物。上文所述任一化學式之對掌性化合物(及其對掌性前體)可採用層析法(通常為HPLC)，在不對稱樹脂上，使用由包含0至50%體積比之異丙醇(通常為2%至20%)與0至5%體積比之烷基胺(通常為0.1%二乙基胺)之烴(通常為庚烷或己烷)組成之移動相，得到富集對映異構性。取溶出液濃縮，得到富集之混合物。可採用使用低於臨界及超臨界之流體進行對掌性層析法。適用於本發明有些具體例之對掌性層析法係相關技藝已知者(參見例如，Smith,Roger M.,Loughborough University,Loughborough,UK；Chromatographic Science Series(1998),75(Supercritical Fluid Chromatography with Packed Columns),pp.223-249及其中摘錄之參考文獻)。管柱可得自Chiral Technologies,Inc,West Chester,Pa.,USA，係Daicel® Chemical Industries,Ltd.,Tokyo,Japan之子公司。
必需強調，上文所述任一化學式之化合物已以單一互變異構型繪出，本發明範圍內包括所有可能之互變異構型。
本發明亦包括上文所述任一化學式之所有醫藥上可接受之標記同位素化合物，其中一個或多個原子被具有相同原子數，但其原子質量或質量數不同於主要存在於天然界之原子質量或質量數之原子置換。
適合納入本發明化合物中之同位素實例包括氫之同位素(如2H及3H)、碳之同位素(如11C、13C及14C)、氯之同位素(如36Cl)、氟之同位素(如18F)，碘之同位素(如123I及125I)、氮之同位素(如13N及15N)、氧之同位素(如15O、17O及18O)、磷之同位素(如32P)、及硫之同位素(如35S)。
上述任一化學式之某些標記同位素化合物，例如，彼等已納入放射活性同位素之化合物，適用於藥物及/或受質組織分佈研究。放射活性同位素氚，亦即3H，及碳-14，亦即14C，特別適用於此目的，因為其等容易納入且容易檢測。
使用較重之同位素如氘，亦即2H，可能因代謝安定性較高而提供某些醫療效益，例如，延長活體半衰期或降低劑量需求。
改以發射正子之同位素如11C、18F、15O及13N取代，可用於檢測受質受體佔有率之正子發射電腦斷層掃描(Positron Emission Topography)(PET)研究。
上文所述任一化學式之標記同位素化合物通常可採用習此相關技藝者已知之常用技術製備或可採用類似隨附之實例及製法所說明彼等製程，使用適當標記同位素試劑替代先前所使用未標記之試劑製備。
根據本發明之醫藥上可接受之溶劑合物包括彼等其中結晶溶劑可經同位素取代者，例如，D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
咸了解，當本文化合物以結構式代表或以本文之化學名稱表示時，該化合物可能存在之所有其他互變異構型均涵括在該結構式內。
本文所示任何化學式亦計畫代表化合物之未標記型及標記同位素型，如2H。此外，使用氘(亦即2H或D)取代，可能因代謝安定性較高而提供某些醫療效益，例如，增加活體半衰期或降低劑量需求或改善醫療指數，此時咸了解，以氘為式(I-0)、(I-1)或(I-2)化合物之取代基。此等較重同位素，具體地為氘之濃度可由同位素富集係數界定。本文所採用術語「同位素富集係數」意指該同位素豐度與指定同位素之天然豐度之間之比值。若本發明化合物上之取代基為氘時，此等化合物針對各指定氘原子之同位素富集係數為至少3500(在各指定氘原子納入52.5%氘)、至少4000(在各指定氘原子納入60%氘)、至少4500((在各指定氘原子納入67.5%氘)、至少5000(在各指定氘原子納入75%氘)、至少5500(在各指定氘原子納入82.5%氘)、至少6000(在各指定氘原子納入90%氘)、至少6333.3(在各指定氘原子納入95%氘)、至少6466.7(在各指定氘原子納入97%氘)、至少6600(在各指定氘原子納入99%氘)、或至少6633.3(在各指定氘原子納入99.5%氘)。
本發明化合物可呈游離型用於治療，或若適當時，呈醫藥上可接受之鹽型。
本文所採用術語「鹽」或「鹽類」係指本發明化合物之酸加成鹽或鹼加成鹽。「鹽類」特別包括「醫藥上可接受之鹽類」。術語「醫藥上可接受之鹽類」係指保留本發明化合物之生物有效性及性質之鹽類，其等通常不為生物或其他方面所不期望者，許多例子中，本發明化合物可以利用所存在之胺基及/或羧基或類似基團，形成酸及/或鹼鹽類。
可與無機酸及有機酸形成醫藥上可接受之酸加成鹽類，例如，乙酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、氯茶鹼鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、十八碳烷酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、次水楊酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽及三氟乙酸鹽。
可衍生成鹽類之無機酸包括例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似物。
可衍生成鹽類之有機酸包括例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸及類似物。醫藥上可接受之鹼加成鹽類可由無機鹼及有機鹼類形成。可衍生成鹽類之無機鹼包括例如，銨鹽類及週期表第I至XII族金屬。某些具體例中，鹽類可衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅、及銅。某些具體例中，合適之鹽類包括銨、鉀、鈉、鈣、及鎂等鹽類。
可衍生成鹽類之有機鹼包括例如，一級、二級、及三級胺類、經取代之胺類，包括天然之經取代之胺類、環狀胺類、鹼性離子交換樹脂及類似物。某些有機胺類包括異丙基胺、芐乙二胺(benzatbine)、膽酸鹽、二乙醇胺、二乙基胺、離胺酸、甲基葡糖胺、哌嗪及三羥甲基甲胺。
本發明醫藥上可接受之鹽類可由鹼性或酸性部份體採用習知化學方法合成。通常，此等鹽類之製法可由此等化合物之游離酸型與化學計量之適當鹼(如Na、Ca、Mg、或K之氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽或類似物)反應，或由此等化合物之游離鹼型與化學計量之適當酸反應。此等反應通常在水中或在有機溶劑中、或此二者之混合物中進行。通常，若可行時，希望使用非水性介質，如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇、或乙腈。其他合適鹽類之列表可參見例如，第20版之「Remington’s Pharmaceutical Sciences」,Mack Publishing Company,Easton,PA,(1985)；及Stahl及Wermuth之「Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use」，(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)。
術語「組成物」及「調配物」可以交換使用。
「個體」為哺乳動物，較佳為人類，但亦可為需要獸醫治療之動物，例如，寵物動物(例如，狗、貓，及類似動物)，農場動物(例如，牛、羊、豬、馬、及類似動物)及實驗室動物(例如，大鼠、小鼠、天竺鼠、及類似動物)。
本文所採用之個體係「需要」治療，如果此等個體可因此等治療而在生物、醫學或生活品質上受益時。
術語「投與」、「投藥」或「投藥法」係指以本發明化合物或其組成物提供到個體之內或之上。此等方法包括(但不限於)經關節內(至關節內)、經靜脈內、肌內、腫瘤內、皮內、腹膜內、皮下、經口、局部表面、經鞘內、吸入、穿皮式、經直腸及類似方式。本文所說明製劑及方法可採用之投藥技術可參見例如，Goodman及Gilman之The Pharmacological Basis of Therapeutics，目前版本；Pergamon；及 Remington之Pharmaceutical Sciences(目前版本)，Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania。
本文所採用術語「抑制」、「抑制性」或「抑制法」係指降低或壓制指定病症、症狀、或疾患、或疾病，或使生物活性或過程之基線活性顯著下降。
術語「治療」、「處理」及「處理法」係指逆轉、減緩、或抑制本文所說明疾病之進程。有些具體例中，可在已發展出或觀察到疾病之一或多種癥兆或症狀之後投與治療(亦即醫療性處理)。其他具體例中，可在沒有疾病之癥兆或症狀下投與治療。例如，可在易感性個體之症狀發作之前投與治療(亦即預防性處理)(例如，依據症狀之病史及/或依據所接觸之病原菌)。亦可在症狀解除之後繼續治療，例如，延緩或預防復發。
術語「病症」、「疾病」及「疾患」可以交換使用。
通常，本文所教示化合物之有效量係依各種不同因素而異，如指定之藥物或化合物、醫藥調配物、投藥途徑、疾病或疾患型態、所治療個體或宿主之特徵、及類似因素，但照例需要由習此相關技藝者決定。本文所教示化合物之有效量很容易由習此相關技藝者採用相關技藝習知之例行方法決定。
術語「有效量」意指當投與個體可造成有利或所需結果時之用量，該等結果包括臨床結果，例如，使所治療個體病症之症狀相較於對照組受到抑制、壓制或降低。例如，有效量可呈單位劑型提供(例如，每天1mg至約50g，例如，每天1mg至約5g)。
術語本發明化合物之「醫療有效量」係指本發明化合物可誘發個體之生物或醫學反應時之量，例如，降低或抑制酵素或蛋白質活性，或緩解症狀、減輕病症、減慢或延緩疾病進程、或防止疾病等等。一項非 限制具體例中，術語「醫療有效量」係指本發明化合物當投與個體時之量可有效(1)至少部份減輕、抑制、防止及/或緩解(i)由HPK1介導、或(ii)與HPK1活性有關、或(iii)特徵在於HPK1活性(正常或異常)之病症或疾患或疾病；或(2)降低或抑制HPK1活性；或(3)降低或抑制HPK1表現；或(4)修飾HPK1之蛋白質含量。另一項非限制具體例中，術語「醫療有效量」係指本發明化合物投與細胞、或組織、或非細胞生物材料、或介質時之量可以有效至少部份降低或抑制HPK1活性；或部份或完全降低或抑制HPK1表現。
本文所說明所有方法均可依任何合適順序進行，除非本文中另有指示或其他清楚說明。使用本文所提供任何實例及其他實例，或例示性說法(例如，「如」)僅計畫更佳闡述本發明，除非另有主張，否則無意限制本發明範圍。
上述化學式所採用一般化學術語具有其一般定義。
本文所採用「h」或「hr」係指小時，「min」係指分鐘，「MCL」係指套細胞淋巴瘤，「AML」係指急性骨髓性白血病，「CML」係指慢性骨髓性白血病，「Boc」係指N-第三丁氧基羰基，「EA」係指乙酸乙酯，「DCM」係指二氯甲烷，「DMSO」係指二甲亞碸，「DMA」係指二甲基乙醯胺，「THF」係指四氫呋喃，「MtBE」係指甲基第三丁基醚，「TEA」係指三乙基胺，「FBS」係指胎牛血清，「PBS」係指磷酸鹽緩衝生理食鹽水，「BSA」係指牛血清白蛋白，「RT」係指室溫，「mpk」意指每公斤毫克數，「po」係指經口(per os)，「qd」意指一天投藥一次，「HPLC」意指高效液相層析法，「q2d」意指每2天投與單一劑量，「q2dx10」意指 每2天投與單一劑量乘以10，「VSMC」係指血管平滑肌細胞，及「XRD」係指X-射線繞射。
本文所採用術語「醫藥上可接受之載劑」包括任何及所有溶劑、勻散介質、包衣、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如，抗細菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、延緩吸收劑、鹽類、防腐劑、藥物安定劑、結合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染劑及類似物及其組合，其等彼等係習此相關技藝者已知(參見例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Printing Company,1990,pp.1289-1329)。除非任何常用之載劑無法與活性成份相容，否則其均可用在醫療或醫藥組成物中。
此外，本發明化合物，包括其鹽類，亦可製得其水合物型式，或包括其用於結晶之其他溶劑。本發明化合物可能本身即為溶劑合物或可設計與醫藥上可接受之溶劑(包括水)形成溶劑合物；因此本發明計畫包括溶劑合物與非溶劑合物兩種型式。術語「溶劑合物」係指本發明化合物(包括其醫藥上可接受之鹽類)與一個或多個溶劑分子形成之複合物。此等溶劑分子為彼等醫藥技藝上常用，且已知對接受者無害，例如，水、乙醇及類似物。術語「水合物」係指其中溶劑分子為水之複合物。
本發明化合物，包括其鹽類、水合物及溶劑合物，可能本身即為多形物或可設計形成多形物。另一態樣中，本發明提供一種包含本發明化合物及醫藥上可接受之載劑之醫藥組成物。醫藥組成物可調配供特定投藥途徑，如經口投藥、非經腸式投藥、及直腸投藥等等。此外，本發明醫藥組成物可製成固體型式(包括，但不限於膠囊、錠劑、丸劑、粒劑、粉劑、或栓劑)，或呈液體型式(包括，但不限於溶液、懸浮液或乳液)。醫藥組成物可以經過常用之醫藥操作法，如殺菌及/或可包含常用之惰性稀釋 劑、潤滑劑、或緩衝劑，及佐劑，如防腐劑、安定劑、濕化劑、乳化劑、及緩衝劑等等。
通常，醫藥組成物為錠劑或明膠囊，其包含活性成份，連同a)稀釋劑，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素及/或甘油；b)潤滑劑，例如，矽石、滑石、硬脂酸、其鎂鹽或鈣鹽、及/或聚乙二醇；及用於錠劑之c)結合劑，例如，矽酸鎂鋁、澱粉糊、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈉及/或聚乙烯吡咯啶酮；若需要時，使用d)崩解劑，例如，澱粉、洋菜、藻酸或其鈉鹽，或起泡混合物；及/或e)吸收劑、著色劑、調味劑及甜味劑。錠劑可依據相關技藝已知方法包覆膜衣或腸衣。
適合經口投藥之組成物包括有效量之本發明化合物，其係呈錠劑、含錠、水性或油性懸浮液、勻散性粉劑或粒劑、乳液、硬式或軟式膠囊、或糖漿或酏劑。計畫口服用之組成物係依據相關技藝已知用於製造醫藥組成物之任何方法製備，且此等組成物可含有一或多種選自下列各物所組成群中之製劑：甜味劑、調味劑、著色劑、及防腐劑，以便產生醫藥上美觀及適口之製劑。錠劑可含有活性成份與適合製造錠劑之無毒性醫藥上可接受之賦形劑形成混合物。此等賦形劑為例如，惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣、或磷酸鈉；造粒劑及崩解劑，例如，玉米澱粉，或藻酸；結合劑，例如，澱粉、明膠或金合歡膠；及潤滑劑，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑可以沒有包衣或可採用已知技術包覆包衣，以延緩在胃腸道中崩解及吸收，藉以提供持續長期效用。例如，可採用延時材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服用調配物可呈硬式明膠膠囊，其中活性成份係與惰性固體稀釋劑混合，例如，碳酸鈣、磷酸鈣、 或高嶺土，或軟式明膠膠囊，其中活性成份係與水或油介質混合，例如，花生油、液態石蠟或橄欖油。
某些注射組成物為水性等滲溶液或懸浮液，及栓劑宜由脂肪乳液或懸浮液製成。該等組成物可經過殺菌及/或包含佐劑，如防腐劑、安定劑、濕化劑、或乳化劑、促進溶解劑、調節滲透壓之鹽類及/或緩衝劑。此外，其等亦可含有其他具有醫療價值之物質。該等組成物係分別依據一般混合、造粒、或包衣方法製備，且含有約0.1-75%或含有約1-50%之活性成份。適合穿皮式施用之組成物包括有效量之本發明化合物與合適之載劑。適合穿皮式遞送之載劑包括可吸收之醫藥上可接受之溶劑，以促進通過宿主皮膚。例如，穿皮式裝置係呈繃帶形式，其包含背襯元件、含有化合物及視需要選用之載劑之儲積槽、視需要選用之速率控制障壁，以便依控制且預定之速率長期遞送化合物給宿主皮膚，及包含可固定該裝置在皮膚上之方式。
適合局部(例如，投藥至皮膚及眼睛)施用之組成物包括水性溶液、懸浮液、油膏、乳霜、凝膠、或噴灑調配物，例如，採用氣溶膠遞送，或類似物。此等局部表面遞送系統特別適合皮膚施用，例如，供治療皮膚癌症，例如，用在防曬乳、洗液、噴霧及類似物中之預防性用法。因此其等特別適用於局部，包括相關技藝習知之美容調配物。此等可含有溶解劑、安定劑、張力加強劑、緩衝劑及防腐劑。
本文所採用局部施用法亦有關吸入或鼻內施用法。其等適宜呈乾粉劑(單獨、呈混合物(例如，與乳糖之乾式摻合物，或與例如，磷脂形成混合組份粒子)，從乾粉吸藥器遞送，或從加壓容器、幫浦、噴瓶、霧化器或氣霧器，使用或不使用合適推進劑下，呈氣溶膠噴霧遞送。
本發明進一步提供包含本發明化合物作為活性成份之無水醫藥組成物及劑型，因為水可能促進某些化合物降解。
本發明無水醫藥組成物及劑型可使用無水或低水份含量之成份，在低水份及低濕度條件下製備。可以製備及儲存無水醫藥組成物，因此維持其無水性質。因此，無水組成物係使用已知可阻止曝露到水份之材料包裝，以便其等可容納在合適之調配套組內。合適包裝實例包括(但不限於)氣密式箔包、塑膠、單位劑量容器(例如，小瓶)、泡殼包、及長條包。
本發明進一步提供一種醫藥組成物及劑型，其包含一或多種可以降低作為活性成份之本發明化合物之降解速率之製劑。此等製劑在本文中稱為「安定劑」，包括(但不限於)抗氧化劑，如抗壞血酸、pH緩衝劑、或鹽緩衝劑等等。
3.化合物
本文揭示具有式(I-0)或(II)之一般結構式之化合物之具體例：
Figure 109122604-A0202-12-0036-605
本發明第一具體例提供一種如式(I-0)代表之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
X為CR2R3或NR3；
A為CR2或N；
R為8-10員雙環含氮雜芳基或8-10員雙環含氮雜環基，其可視需要經側氧基取代，其中由R代表之含氮雜芳基或含氮雜環基具有1至3個選 自：N、O、與S之雜原子，且可視需要經1至4個Ra取代，及其中R係利用氮環原子連接嘧啶環或R係以如下結構式代表：
Figure 109122604-A0202-12-0037-607
R1為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、苯基、5-6員雜芳基、C3-6環烷基、或3-7員雜環基，其中由R1代表或在由R1代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、雜芳基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12；或
R及R1與其等所附接之碳原子共同形成如下代表之環：
Figure 109122604-A0202-12-0037-608
 其中
Figure 109122604-A0202-12-0037-606
鍵結係連接嘧啶環；
R2之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、或S(=O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基團中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12；
R3為H、C1-6烷基、C(O)C1-6烷基、C3-6環烷基、或3-7員雜環基，其中由R3代表或在由R3代表之基團中之烷基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、3-7員雜環基、及NR11R12；
R11及R12之各例分別獨立為H或C1-6烷基，其中由R11或R12代表之烷基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、及3-7員雜環基，
R11及R12與其等所附接之氮原子或磷原子共同形成3-7員雜環基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、及C1-4鹵烷氧基：
Ra之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、C3-6環烷基、3-7員雜環基、或5-6員雜芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、及5-6員雜芳基；或
兩個Ra與其等所附接之碳原子(群)共同形成C3-6環烷基或3-7員雜環基，其中環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、及C1-4鹵烷氧基；
Rb之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、C3-6環烷基、3-7員雜環基、或5-6員雜芳基，其中由Rb代表或在由Rb代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、及5-6員雜芳基；
Rc之各例分別獨立為苯基、具有1至3個選自N及O之雜原子之5-6員單環狀雜環基；具有1至3個選自N及O之雜原子之5-6員單環狀雜芳基；其中由Rc代表之苯基、雜環基、或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、及P(O)二-C1-6烷基；
Ra'為C1-6烷基，其可視需要OH、CN、5-6員雜芳基、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12取代；
m為0、1、2、或3；
n為0、1、2、3、或4；
p為1、2、或3；
q為1、2、或3；及p+q
Figure 109122604-A0202-12-0040-171
4。
本發明第二具體例中，該化合物係由結構式(I-1)代表：
Figure 109122604-A0202-12-0040-610
或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其餘變數係如第一具體例中之定義。
本發明第三具體例中，該化合物係由結構式(I-2)代表：
Figure 109122604-A0202-12-0040-611
本發明第四具體例提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥 上接受之鹽或立體異構物，其中R為
Figure 109122604-A0202-12-0040-609
、
Figure 109122604-A0202-12-0040-612
Figure 109122604-A0202-12-0041-617
Figure 109122604-A0202-12-0041-614
、
Figure 109122604-A0202-12-0041-615
、或
Figure 109122604-A0202-12-0041-616
，其中
Figure 109122604-A0202-12-0041-613
鍵結係連接嘧啶環， 及其餘變數係如第一、第二及/或第三具體例中之定義。
第五具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中Ra之各例分別獨立為H、鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OR11、NR11C(O)C1-4烷基、NR11S(=O)2R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、P(=O)R11R12、C3-6環烷基、3-7員雜環基、或5-6員雜芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基團中之烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、及5-6員雜芳基，及其餘變數係如第一、第二、第三及/或第四具體例中之定義。
第六具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R1為H、鹵素、CN、 C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基，其中由R1代表或在由R1代表之基團中之烷基、烯基、或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四及/或第五具體例中之定義。
第七具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中各例R2分別獨立為H、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、NR11C(O)C1-4烷基、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、或S(=O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基團中之烷基或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五及/或第六具體例中之定義。
第八具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R3為H、C1-6烷基、或C(O)C1-6烷基，其中由R3代表或在由R3代表之基團中之烷基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、及/或第七具體例中之定義。
第九具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中各例Ra分別獨立為H、鹵素、OH、 CN、C1-4烷基、C3-6環烷基、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、N(R11)S(=O)2R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、P(O)R11R12、或5-6員雜芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基團中之烷基或環烷基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、及5-6員雜芳基；各例R11及R12分別獨立為H或C1-6烷基，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、及/或第八具體例中之定義。
第十具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R1為H、鹵素、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C2-4烯基、C1-4烷氧基、或C1-4鹵烷氧基，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、及/或第九具體例中之定義。
第十一具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物， 或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R為
Figure 109122604-A0202-12-0043-618
、
Figure 109122604-A0202-12-0043-619
Figure 109122604-A0202-12-0044-620
、
Figure 109122604-A0202-12-0044-621
、
Figure 109122604-A0202-12-0044-622
、或
Figure 109122604-A0202-12-0044-623
，其中
Figure 109122604-A0202-12-0044-624
鍵結係 連接嘧啶環，及n為0至4，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、及/或第十具體例中之定義。
第十二具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物， 或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R為
Figure 109122604-A0202-12-0044-625
、
Figure 109122604-A0202-12-0044-626
、
Figure 109122604-A0202-12-0044-627
、或
Figure 109122604-A0202-12-0044-628
，其中
Figure 109122604-A0202-12-0044-629
鍵結係連接嘧啶環，及 n為0至2，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、及/或第十具體例中之定義。
第十三具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物， 或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R為
Figure 109122604-A0202-12-0044-630
、
Figure 109122604-A0202-12-0044-631
、
Figure 109122604-A0202-12-0044-632
、或
Figure 109122604-A0202-12-0044-633
，其中
Figure 109122604-A0202-12-0044-634
鍵結係連接嘧啶環， 及n為0至2，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、及/或第十具體例中之定義。
第十四具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
Ra之各例分別獨立為H、鹵素、C1-4烷基、-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、 -(CHRaa)kS(=O)2R11、-(CHRaa)kC(O)NR11S(=O)2R12、-(CHRaa)kS(=O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(=O)2R12、-(CHRaa)k-5-6員雜芳基、或-(CHRaa)kP(=O)R11R12；
Raa分別獨立為H或可視需要經鹵素取代之C1-3烷基；
R11及R12分別獨立為H或C1-4烷基；及
k為0或1，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、及/或第十三具體例中之定義。
第十五具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R1為H、F、Cl、CN、或CF3，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三及/或第十四具體例中之定義。
第十六具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物， 或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R為
Figure 109122604-A0202-12-0045-635
、
Figure 109122604-A0202-12-0045-637
、
Figure 109122604-A0202-12-0045-638
、
Figure 109122604-A0202-12-0045-639
、或
Figure 109122604-A0202-12-0045-640
，其中
Figure 109122604-A0202-12-0045-636
鍵結係連接 嘧啶環，及n為0至4，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、及/或第十五具體例中之定義。
第十七具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
R is
Figure 109122604-A0202-12-0045-641
，其中
Figure 109122604-A0202-12-0045-642
鍵結係連接嘧啶環，
Ra1分別獨立為H、C1-4烷基、或C1-4羥基烷基；
Ra1 ’分別獨立為-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kS(=O)2R11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kC(O)NR11S(=O)2R12、-(CHRaa)kS(=O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(=O)2R12、-(CHRaa)k-5-6員雜芳基、或-(CHRaa)kP(=O)R11R12；
Raa分別獨立為H或可視需要經鹵素取代之C1-3烷基；
Ra分別獨立為H、F、或Cl；
R11及R12分別獨立為H或C1-4烷基；
k為0或1，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、及/或第十具體例中之定義。
第十八具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
Ra1分別獨立為H、CH3、或CH2OH；
Ra1’分別獨立為-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kS(=O)2R11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kC(O)NR11S(=O)2R12、-(CHRaa)kS(=O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(=O)2R12、-(CHRaa)k-四唑、或-(CHRaa)kP(=O)R11R12；
Raa分別獨立為H、CH3、或CF3；
R11及R12分別獨立為H或C1-2烷基；及
k為0或1，及其餘變數係如第十七具體例中之定義。
本發明第十九具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中各例Ra分別獨立為H或F，及其餘變數係如第十八具體例中之定義。
本發明第二十具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R1為Cl，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、及/或第十九具體例中之定義。
第二十一具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R及R1與其等所附接之碳原子共同形成如下代表之環：
Figure 109122604-A0202-12-0047-644
 其中
Figure 109122604-A0202-12-0047-643
鍵結係連接嘧啶環，及其餘變數係如第一、第二、及/或第三具體 例中之定義。
第二十二具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
Rb之各例分別獨立為H、鹵素、OH、CN、NH2、COOH、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C1-4羥基烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NR11OR12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、NR11(S=O)2R12、C(O)NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、5-6員雜芳基、或NR11C(O)C1-4烷基；及
Rc之各例為苯基或吡啶基，其各可視需要經一或兩個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、及P(=O)二-C1-6烷基，及其餘變數係如第一、第二、第三、及/或第二十一具體例中之定義。
第二十三具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R及R1與其等所附接之碳原子共同形成如下代表之環：
Figure 109122604-A0202-12-0048-645
、
Figure 109122604-A0202-12-0048-646
、或
Figure 109122604-A0202-12-0048-647
，其中
Figure 109122604-A0202-12-0048-648
鍵結係連接嘧啶環，及其餘 變數係如第一、第二、第三、第二十一及/或第二十二具體例中之定義。
第二十四具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
Rb之各例分別獨立為H、鹵素、CN、COOH、C1-2烷基、或C1-2鹵烷基；
Rc之各例為苯基或吡啶基，其各可視需要經一或兩個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、及P(=O)二-C1-6烷基，及
R11及R12之各例分別獨立為H或C1-6烷基，及其餘變數係如第一、第二、第三、第二十一、第二十二、及/或第二十三具體例中之定義。
第二十五具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
Rb之各例分別獨立為H、CN、或COOH；及
Rc之各例為苯基或吡啶基，其各可視需要經一或兩個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：C1-4烷基、C(O)N(CH3)2、及P(=O)(CH3)2，及其餘變數係如第一、第二、第三、第二十一、第二十二、第二十三、及/或第二十四具體例中之定義。
第二十六具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中m為0或1，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、及/或第二十五具體例中之定義。
第二十七具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物， 或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
Figure 109122604-A0202-12-0049-649
為
Figure 109122604-A0202-12-0049-650
，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第 七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、及/或第二十六具體例中之定義。
第二十八具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R2之各例為H、鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基；及R3為H、C1-6烷基、C1-6羥基烷基、或COCH2NR11R12，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、及/或第二十七具體例中之定義。
第二十九具體例中，提供一種式(I-0)、(I-1)、或(I-2)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R2之各例為H、F、Cl、或OCH3；及R3為H或C1-4烷基，及其餘變數係如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、及/或第二十八具體例中之定義。
本發明第三十具體例中，提供一種如式(II)代表之化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，
Figure 109122604-A0202-12-0050-651
，其中
A1為CR’或N；
X為-P(=O)R3’R4’；
R’為H、氘、鹵素、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基，其中由R’代表或在由R’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
R1’之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、C3-7環烷基、或3-7員雜環基，其 中由R1’代表或在由R1’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
R2’之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、苯基、5-6員雜芳基、C3-7環烷基、或3-7員雜環基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、雜芳基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
各R3’及R4’分別獨立為H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中由R3’或R4’代表之烷基、烯基、或炔基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
R11’及R12’之各例分別獨立為H或C1-6烷基，其中由R11’或R12’代表之烷基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、及3-7員雜環基，或
R11’及R12’與其等所附接之氮原子共同形成3-7員雜環基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、或C1-4鹵烷氧基；
m’為0、1、或2；及
n’為0、1、或2。
本發明第三十一具體例中，式(II)化合物係由結構式(II-1)代表：
Figure 109122604-A0202-12-0052-652
 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中R’為H、鹵素、NR11’R12’、或C1-6烷基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’，及其餘變數係如第三十具體例中之定義。
第三十二具體例中，式(II)或(II-1)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R3’及R4’分別獨立為H或C1-6烷基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’，及其餘變數係如第三十及/或第三十一具體例中之定義。
第三十三具體例中，式(II)或(II-1)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
R1’之各例分別獨立為H、鹵素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、或3-7員雜環基，其中由R1’代表之烷基、烯基、炔基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
R2’之各例分別獨立為H、鹵素、OH、NO2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1- 6烷基、5-6員雜芳基、或3-7員雜環基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基團中之烷基、烷氧基、雜芳基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’，及其餘變數係如第三十、第三十一、及/或第三十二具體例中之定義。
第三十四具體例中，式(II)或(II-1)化合物係由結構式(II-2)或(II-2’)代表：
Figure 109122604-A0202-12-0053-653
 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中R’為H、鹵素、或NH2，及其餘變數係如第三十、第三十一、第三十二、及/或第三十三具體例中之定義。
第三十五具體例中，式(II)、(II-1)、(II-2)或(II-2’)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R2’之各例分別獨立為H、鹵素、OH、C1-4烷基(其可視需要經鹵素或OH或NR11’R12’取代)、C1-4烷氧基、C(O)OC1-6烷基、C(O)NR11’R12’,NR11’R12’,NR11’C(O)C1-6烷基、5-6員雜環基、或5-6員雜芳基；及各例R1’分別獨立為H或C1-4烷基，及其餘變數係如第三十、第三十一、第三十二、第三十三、及/或第三十四具體例中之定義。
第三十六具體例中，式(II)、(II-1)、(II-2)或(II-2’)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R3’及R4’分別獨立為C1-6烷基；及各例R2’分別獨立為H、鹵素、OH、C1-4烷基(其可視需要經鹵素或OH或NR11’R12’取代)、C1-4烷氧基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NR11’R12’、NR11’R12’、 NHC(O)C1-6烷基、吡咯啶基、吡咯啶-2-酮、
Figure 109122604-A0202-12-0054-172
唑，其中R11’及R12’之各例分別獨立為H或C1-4烷基，及其餘變數係如第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、及/或第三十五具體例中之定義。
第三十七具體例中，式(II)、(II-1)、(II-2)或(II-2’)化合物，或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中X為-P(O)(CH3)2及R2’之各例分別獨立為H、F、Cl、OH、CH3、NH2、或NHCOCH3，及其餘變數係如第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、及/或第三十六具體例中之定義。
1.一種如結構式(I)代表之化合物：
Figure 109122604-A0202-12-0054-654
 或其醫藥上可接受之鹽，其中
A為CR2或N；
R為8-10員雙環含氮雜芳基或8-10員雙環含氮雜環基，其可視需要經側氧基取代，其中由R代表之含氮雜芳基或含氮雜環基具有1至3個選自：N、O、與S之雜原子，且可視需要經1至4個Ra取代；
R1為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、苯基、5-6員雜芳基、C3-6環烷基、或3-7員雜環基，其中由R1代表或在由R1代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、雜芳基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立 選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12；或
R及R1與其等所附接之碳原子共同形成如下代表之環：
Figure 109122604-A0202-12-0055-655
、
Figure 109122604-A0202-12-0055-656
、
Figure 109122604-A0202-12-0055-657
、或
Figure 109122604-A0202-12-0055-658
其中
Figure 109122604-A0202-12-0055-659
鍵結係連接嘧啶環；
R2為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、-P(=O)R11R12,-S(=O)2R11、或-S(=O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基團中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12；
R3為H、C1-6烷基、C(O)C1-6烷基、C3-6環烷基、或3-7員雜環基，其中由R3代表或在由R3代表之基團中之烷基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、3-7員雜環基、及NR11R12；
R11及R12之各例分別獨立為H或C1-6烷基，其中由R11或R12代表之烷基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、及3-7員雜環基，或
R11及R12與其等所附接之氮原子或磷原子共同形成3-7員雜環基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、或C1-4鹵烷氧基；
Ra之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、-P(=O)R11R12、-S(=O)2R11、或-S(=O)2NR11R12、C3-6環烷基、或3-7員雜環基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基團中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12；或
兩個Ra與其等所附接之碳原子共同形成C3-6環烷基或3-7員雜環基，其中環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、及C1-4鹵烷氧基；
Rb之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、或NR11C(O)C1-6烷基，其中由Rb代表或在由Rb代表之基團中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12；
Rc為苯基、具有1至3個選自N及O之雜原子之5-6員單環狀雜環基；具有1至3個選自N及O之雜原子之5-6員單環狀雜芳基；其中由Rc代表之苯基、雜環基、或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各 物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、-C(O)NR11R12、及-P(O)二-C1-6烷基；及
m為0、1、2或3。
2.如段1之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R為
Figure 109122604-A0202-12-0057-661
 其中
Figure 109122604-A0202-12-0057-660
鍵結係連接嘧啶環，及n為0至4。
3.如段1或2之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中
Ra之各例分別獨立為H、鹵素、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C1-4羥基烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、NR11C(O)C1-4烷基、-P(=O)R11R12、-S(=O)2R11、-S(=O)2NR11R12、C3-6環烷基、或3-7員雜環基，或
兩個Ra與其等所附接之碳原子共同形成C3-6環烷基或3-7員雜環基，其中環烷基或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、及C1-4鹵烷氧基。
4.如段1至3中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R1為H、鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、NR11R12、 C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基，其中 由R1代表或在由R1代表之基團中之烷基、烯基、或烷氧基可視需要經一 至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、 C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12。
5.如段1至4中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中Ra之各例分別獨立為H、鹵基、OH、C1-4烷基、COOH、C(O)NR11R12、或-P(O)R11R12，其中R11及R12之各例分別獨立為H或C1-6烷基。
6.如段1至5中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R1為H、鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C2-4烯基、C1-4烷氧基、或C1-4鹵烷氧基。
7.如段1至6中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽， 其中R為
Figure 109122604-A0202-12-0058-662
、
Figure 109122604-A0202-12-0058-663
、
Figure 109122604-A0202-12-0058-664
、
Figure 109122604-A0202-12-0058-665
Figure 109122604-A0202-12-0058-674
 其中
Figure 109122604-A0202-12-0058-666
鍵結係連接嘧啶環，及n為0至2。
8.如段1至7中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽， 其中R為
Figure 109122604-A0202-12-0058-667
、
Figure 109122604-A0202-12-0058-668
、
Figure 109122604-A0202-12-0058-669
、
Figure 109122604-A0202-12-0058-670
、
Figure 109122604-A0202-12-0058-671
、或
Figure 109122604-A0202-12-0058-672
，其中
Figure 109122604-A0202-12-0058-673
鍵結係連接嘧啶環，及n為0至2。
9.如段1至8中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中Ra之各例分別獨立為H、F、Cl、C1-4烷基、COOH、CONH2、C(O)N(CH3)2、或-P(O)(CH3)2。
10.如段1至9中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R1為H、Cl、或CF3。
11.如段1之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R及R1與其等所附接之碳原子共同形成如下代表之環：
Figure 109122604-A0202-12-0059-675
、
Figure 109122604-A0202-12-0059-676
、
Figure 109122604-A0202-12-0059-677
、或
Figure 109122604-A0202-12-0059-678
，其中
Figure 109122604-A0202-12-0059-679
鍵結係連接嘧啶環。
12.如段1或11之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中
Rb之各例分別獨立為H、鹵素、OH、NH2、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C1-4羥基烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、或NR11C(O)C1-4烷基；及
Rc之各例為苯基或吡啶基，其各可視需要經一或兩個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、-C(O)NR11R12、及-P(O)二-C1-6烷基。
13.如段1、11、及12中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中
Rb之各例分別獨立為H、鹵素、C1-2烷基、C1-2鹵烷基；及
Rc之各例為苯基或吡啶基，其各可視需要經一或兩個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、-C(O)NR11R12、及-P(O)二-C1-6烷基，及
R11及R12之各例分別獨立為H或C1-6烷基。
14.如段1及11至13中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中
Rb之各例分別獨立為H；及
Rc之各例為苯基或吡啶基，其各可視需要經一或兩個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：C1-4烷基、-C(O)N(CH3)2、及-P(O)(CH3)2。
15.如段1至14中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R2為H、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR11R12、-C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、NR11C(O)C1-4烷基、-P(=O)R11R12、-S(=O)2R11、或-S(=O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基團中之烷基或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12；及m為0或1。
16.如段1至15中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之 鹽，其中
Figure 109122604-A0202-12-0060-680
為
Figure 109122604-A0202-12-0060-681
或
Figure 109122604-A0202-12-0060-682
。
17.如段1至16中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中各例R2為H、鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、 C1-4鹵烷氧基；及R3為H、C1-6烷基、C1-6羥基烷基、或COCH2NR11R12，其中各例R11及R12分別獨立為H或C1-6烷基。
18.如段1至17中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中各例R2為H、Cl、或OCH3；及R3為H、C1-4烷基、C1-4羥基烷基、或COCH2N(CH3)2。
19.一種如結構式(II)代表之化合物：
Figure 109122604-A0202-12-0061-683
或其醫藥上可接受之鹽，其中
A1為CR’或N；
X為-P(=O)R3’R4’或-S(O)2NR5’R6’；
R’為H、氘、鹵素、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基，其中由R’或在由R’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
R1’之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、C3-7環烷基、或3-7員雜環基，其中由R1’代表或在由R1’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取 代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
R2’之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、苯基、5-6員雜芳基、C3-7環烷基、或3-7員雜環基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、雜芳基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
各R3’及R4’分別獨立為H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中由R3’或R4’代表之烷基、烯基、或炔基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；
各R5’及R6’分別獨立為H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中由R5’或R6’代表之烷基、烯基、或炔基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’；或
R5’及R6’與其等所附接之氮原子共同形成3-7員雜環基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、或C1-4鹵烷氧基；
R11’及R12’之各例分別獨立為H或C1-6烷基，其中由R11’或R12’代表之烷基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、及3-7員雜環基，或
R11’及R12’與其等所附接之氮原子共同形成3-7員雜環基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、或C1-4鹵烷氧基；
m’為0、1、或2；及
n’為0、1、或2。
20.如段19之化合物，其中該化合物係由結構式(II-1)代表：
Figure 109122604-A0202-12-0063-684
 或其醫藥上可接受之鹽，其中
A1為CR’或N；及
R’為H、鹵素、NR11’R12’、或C1-6烷基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’。
21.如段19或20之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中
X為-P(=O)R3’R4’或-S(O)2NR5’R6’；
各R3’及R4’分別獨立為H或C1-6烷基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11R12；及
各R5’及R6’分別獨立為H或C1-6烷基，或
R5’及R6’與其等所附接之氮原子共同形成3-7員雜環基，其可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、或C1-4鹵烷氧基。
22.如段19至21中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R1’之各例分別獨立為H、鹵素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、或3-7員雜環基，其中由R1’代表之烷基、烯基、炔基、環烷基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’。
23.如段19至22中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R2’之各例分別獨立為H、鹵素、OH、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、5-6員雜芳基、或3-7員雜環基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基團中之烷基、烷氧基、雜芳基、或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、-OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、及NR11’R12’。
24.如段19至23中任一者之化合物，其中該化合物係由結構式(II-2)或(II-2’)代表：
Figure 109122604-A0202-12-0064-685
 或其醫藥上可接受之鹽，其中A1為CR’或N；及R’為H、鹵素、或NH2。
25.如段19至24中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R2’之各例分別獨立為H、鹵素、OH、C1-4烷基(其可視需要經鹵素或OH或NR11’R12’取代)、C1-4烷氧基、C(O)OC1-6烷基、C(O)NR11’R12’、 NR11’R12’、NR11’C(O)C1-6烷基、5-6員雜環基(吡咯啶基或吡咯啶-2-酮)、或雜芳基(
Figure 109122604-A0202-12-0065-173
唑)。
26.如段19至25中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中
X為-P(=O)R3’R4’或-S(O)2NR5’R6’；
R3’及R4’分別獨立為C1-6烷基；及
R5’及R6’分別獨立為H或C1-6烷基。
27.如段19至26中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R1’之各例分別獨立為H或C1-4烷基。
28.如段19至27中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R2’之各例分別獨立為H、鹵素、OH、C1-4烷基(其可視需要經鹵素或OH或NR11’R12’取代)、C1-4烷氧基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NR11’R12’、NR11’R12’、NHC(O)C1-6烷基、吡咯啶基、吡咯啶-2-酮、
Figure 109122604-A0202-12-0065-174
唑，其中R11’及R12’之各例分別獨立為H或C1-4烷基。
29.如段19至28中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中X為-P(O)(CH3)2或-S(O)2NHMe。
30.如段19至29中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R2’之各例分別獨立為H、F、Cl、OH、CH3、NH2、或-NHCOCH3。
31.如段19至30中任一者之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中X為-P(=O)(CH3)2。
一具體例中，化合物或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物係選自：式(I-0)、(I-1)、(I-2)、(I)、(II)、(II-1)、(II-2)或(II-2’)化合物或實例中之化合物。
某些具體例中，HPK1抑制劑(本發明化合物)係選擇性對抗選自以下之一或多種激酶：Lck、ZAP70、JAK3、PKCθ、TBK1、及MAP4K3。某些具體例中，本發明HPK1抑制劑係選擇性對抗選自以下之一或多種激酶：Lck、ZAP70、及JAK3。某些具體例中，本發明HPK1抑制劑係選擇性對抗JAK3。
例如，該等HPK1抑制劑係選擇性對抗Lck，因此其對抗Lck之IC50比對抗HPK1之IC50較高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
某些具體例中，HPK1係選擇性對抗ZAP70，因此其對抗ZAP70之IC50比對抗HPK1之IC50較高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
某些具體例中，HPK1係選擇性對抗JAK3，因此其對抗JAK3之IC50比對抗HPK1之IC50較高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
某些具體例中，HPK1係選擇性對抗PKCθ，因此其對抗PKCθ之IC50比對抗HPK1之IC50較高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
某些具體例中，HPK1係選擇性對抗TBK1，因此其對抗TBK1之IC50比對抗HPK1之IC50較高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、 50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
某些具體例中，HPK1係選擇性對抗MAP4K3，因此其對抗MAP4K3之IC50比對抗HPK1之IC50較高至少2-、3-、5-、10-、20-、40-、50-、75-、100-、150-、200-、300-、400-、500-、600-、750-、或1000-倍。
對抗HPK1、Lck、ZAP70、PKCθ、JAK3、TBK1、及MAP4K3之活性可採用相關技藝已認可之任何方法測定(例如，測定IC50值)，如生物實例中舉例說明之程序，如生物實例1-7(其等均以引用之方式併入本文中)。
4.可治療之疾病
HPK1抑制劑、其醫藥上可接受之鹽類、其醫藥組成物可用於調控(亦即抑制)HPK1活性之方法，該方法包括對有需要之患者/個體投與本文所說明本發明HPK1抑制劑化合物，或其醫藥上可接受之鹽。
特定言之，本發明提供本發明化合物、或其立體異構物、互變異構物、N-氧化物、水合物、溶劑合物、及鹽類，特別指其醫藥上可接受之鹽類、或其等之混合物之用途，其係用於治療或預防疾病，特定言之癌症(特別指造血性及實體腫瘤)或免疫反應失調之病症或與異常MAP4K1訊號傳導相關之其他疾患。根據本發明化合物之醫藥活性至少部份可由其作為MAP4K1抑制劑之活性來解釋。
某些具體例中，本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽類適用於醫療性投與有此需要之個體，來治療疾病或適應症，包括(但不限於)良性 增生、動脈粥狀硬化疾患、敗血症、自體免疫疾患、血管疾患、病毒感染、神經退化性疾患、發炎疾患、及男性生育控制疾患。
某些具體例中，本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽類適用於醫療性投藥，以在治療癌症時，加強、刺激及/或增加免疫力。
本發明HPK1抑制劑化合物可以單獨使用或組合使用其他製劑或醫療劑，或作為治療疾病或疾患(包括癌症)之佐劑或前置佐劑。
某些具體例中，本發明方法可用於治療癌症，包括(但不限於)骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭或頸部癌症、皮膚或眼內惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門部位之癌症、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管之癌瘤、子宮內膜之癌瘤、子宮內膜癌、子宮頸之癌瘤、陰道之癌瘤、外陰之癌瘤、何杰金氏(Hodgkin’s)症、非何杰金氏(non-Hodgkin’s)淋巴瘤、食道之癌症、小腸之癌症、內分泌系統之癌症、甲狀腺之癌症、副甲狀腺之癌症、腎上腺之癌症、軟組織之肉瘤、尿道之癌症、陰莖之癌症、慢性或急性白血病(包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病)、兒童之實體腫瘤、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱之癌症、腎臟或尿道之癌症、腎盂之癌瘤、中樞神經系統(CNS)之新生贅瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管新生、脊柱腫瘤、腦幹神經膠細胞瘤、腦下垂體腺瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T-細胞淋巴瘤、環境誘發之癌症(包括彼等被石棉誘發者)，及上述癌症之組合。
有些具體例中，可使用本發明化合物治療之癌症包括黑色素瘤(例如，轉移性惡性黑色素瘤)、腎癌(例如，透明細胞癌瘤)、攝護腺癌(例如，激素頑抗性攝護腺腺癌瘤)、乳癌、三陰性乳癌、結腸癌、及肺癌(例如，非小細胞肺癌及小細胞肺癌)。此外，亦可治療可使用本發明化合物抑制其生長之頑抗性或復發性惡性病。
有些具體例中，可使用本發明化合物治療之癌症包括(但不限於)實體腫瘤(例如，攝護腺癌、結腸癌、食道癌、子宮內膜癌、卵巢癌、子宮癌、腎癌、肝癌、胰臟癌、胃癌、乳癌、肺癌、呼吸道癌症、腦癌、眼部癌症、甲狀腺及副甲狀腺癌症、皮膚癌、頭與頸之癌症、生殖器官之癌症、消化道之癌症、泌尿道之癌症、神經膠母細胞瘤、肉瘤、膀胱癌等等)、血液癌症(例如，淋巴瘤、白血病如：急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、DLBCL、套細胞淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(包括復發或頑抗性NHL及復發性濾泡)、何杰金氏淋巴瘤或多發性骨髓瘤)、肉瘤、及其遠距轉移。
有些具體例中，可使用本發明化合物可治療之疾病及適應症包括(但不限於)血液癌症、肉瘤、肺癌、胃腸癌、生殖泌尿道癌、肝臟癌症、骨癌、神經系統癌症、婦科癌症、及皮膚癌。
例示性血液癌症包括淋巴瘤及白血病，如急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、急性前髓性細胞白血病(APL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、瀰漫性大型B-細胞淋巴瘤(DLBCL)、套細胞淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(包括復發或頑抗性NHL及復發性濾泡)、何杰金氏淋巴瘤、骨髓增生性疾病(例如，原發性骨髓纖維變性(PMF)、真性多紅血球症(PV)、本態性血小板數目過高(ET)、骨髓增生不良症候群(MDS)、T-細胞急性淋巴母細胞淋巴瘤(T-ALL)、多發性骨髓瘤、皮膚T-細胞淋巴瘤、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s Macroglubulinemia)、毛細胞淋巴瘤、慢性骨髓性淋巴瘤、及伯基氏(Burkitt’s)淋巴瘤。
例示性肉瘤包括軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、血管肉瘤、纖維肉瘤、脂肉瘤、黏液瘤、橫紋肌瘤、橫紋肉瘤、纖維肌瘤、脂肪瘤、錯構瘤、及畸胎瘤。
例示性肺部癌症包括非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞肺癌、支氣管癌瘤(鱗狀細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌瘤)、肺泡(細支氣管)癌瘤、支氣管腺瘤、軟骨錯構瘤、及間皮瘤。
例示性胃腸癌症包括食道(鱗狀細胞癌瘤、腺癌瘤、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰臟(胰臟管腺癌瘤、胰島素瘤、升糖激素瘤、胃泌素瘤、類癌性腫瘤、血管活性腸肽瘤(vipoma))、小腸(腺癌瘤、淋巴瘤、類癌性腫瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經纖維肌瘤、纖維肌瘤)、大腸(腺癌瘤、管狀腺瘤、絨毛腺瘤、錯構瘤、平滑肌瘤)之癌症及結腸直腸癌。
例示性生殖泌尿道癌症包括腎臟(腺癌瘤、威爾姆氏腫瘤(Wilms’ tumor)[腎母細胞瘤])、膀胱及尿道(鱗狀細胞癌瘤、移行細胞癌瘤、腺癌瘤)、攝護腺(腺癌瘤、肉瘤)、及睪丸(精母細胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌瘤、畸胎癌、絨毛膜癌瘤、肉瘤、間質細胞癌瘤、纖維肌瘤、纖維腺瘤、類腺瘤、脂肪瘤)之癌症。
例示性肝臟癌症包括肝癌(肝細胞癌瘤)、膽管癌、肝母細胞瘤、血管肉瘤、肝細胞腺瘤、及血管瘤。
例示性骨癌包括例如，骨源性肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維性組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、惡性淋巴瘤(內質網細胞肉瘤)、多發性骨髓瘤、惡性巨細胞腫瘤原索瘤、骨外生骨 疣(骨軟骨性外生骨贅)、良性軟骨瘤、軟骨母細胞瘤、軟骨黏液性纖維肌瘤、骨樣性骨瘤、及巨細胞腫瘤。
例示性神經系統癌症包括頭骨(骨瘤、血管瘤、肉芽腫、黃脂瘤、變形性骨炎)、腦膜(腦膜瘤、腦膜肉瘤、神經膠細胞瘤病)、腦(星細胞瘤、髓母細胞瘤、神經膠細胞瘤、室管膜細胞瘤、胚細胞瘤(松果腺瘤)、神經膠母細胞瘤、多形性神經膠母細胞瘤、寡突神經膠細胞瘤、許旺細胞瘤(schwannoma)、視網膜母細胞瘤、天生性腫瘤)、及脊柱(神經纖維肌瘤、腦膜瘤、神經膠細胞瘤、肉瘤)，以及神經母細胞瘤及發育不良性節細胞瘤(Lhermitte-Duclos disease)之癌症。
例示性婦科癌症包括子宮(子宮內膜癌瘤)、子宮頸(子宮頸癌瘤、腫瘤前之子宮頸發育不良)、卵巢(卵巢癌瘤(漿液性囊狀腺癌瘤、黏液性囊狀腺癌瘤、未分類癌瘤)、粒層細胞-鞘細胞腫瘤、支持間質細胞(Sertoli-Leydig cell)腫瘤、無性細胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(鱗狀細胞癌瘤、上皮內癌瘤、腺癌瘤、纖維肉瘤、黑色素瘤)、陰道(透明細胞癌瘤、鱗狀細胞癌瘤、葡萄狀肉瘤(胚胎性橫紋肌肉瘤)、及輸卵管(癌瘤)之癌症。
例示性皮膚癌症包括黑色素瘤、基底細胞癌瘤、鱗狀細胞癌瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、默克(Merkel)細胞皮膚癌、再生不良性痣、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維肌瘤、及蟹足腫。有些具體例中，可使用本發明化合物治療之疾病及適應症包括(但不限於)鐮狀細胞疾病(例如，鐮狀細胞貧血)、三陰性乳癌(TNBC)、骨髓增生不良症候群、睪丸癌、膽道癌、食道癌、及泌尿道上皮癌瘤。
例示性頭與頸部癌症包括神經膠母細胞瘤、黑色素瘤、橫紋肉瘤、淋巴肉瘤、骨肉瘤、鱗狀細胞癌瘤、腺癌瘤、口癌、喉癌、鼻咽癌、鼻與鼻旁癌症、及甲狀腺與副甲狀腺癌症。
有些具體例中，該HPK1抑制劑可用於治療產生PGE2之腫瘤(例如，過度表現Cox-2之腫瘤)及/或腺苷之腫瘤(過度表現CD73及CD39之腫瘤)。已在許多種腫瘤中檢測到過度表現之Cox-2，如結腸直腸、乳房、胰臟及肺臟等癌症，其等與預後不佳相關。已在血液癌症模式中(如RAJI(伯基氏淋巴瘤)及U937(急性前單核細胞白血病))以及患者之芽細胞中報告過COX-2之過度表現。CD73在各種不同人類癌瘤中係上調，包括彼等結腸、肺、胰臟及卵巢之癌症。CD73之表現程度提高已與腫瘤血管新生、侵襲性、及轉移相關，並與乳癌患者存活期縮短有關。
可治療之乳癌實例包括(但不限於)三陰性乳癌、侵襲性乳管癌瘤、侵襲性乳葉癌瘤、原位乳管癌瘤、及原位乳葉癌瘤。
呼吸道癌症實例包括(但不限於)小細胞及非小細胞肺癌瘤，以及支氣管腺瘤及肋膜肺臟母細胞瘤。
可治療之腦部癌症實例包括(但不限於)腦幹及下視丘神經膠細胞瘤、小腦及大腦星細胞瘤、神經膠母細胞瘤、髓質母細胞瘤、室管膜細胞瘤，以及神經外胚層及松果體腫瘤。
可治療之男性生殖器官腫瘤實例包括(但不限於)攝護腺及睪丸之癌症。
可治療之女性生殖器官腫瘤包括(但不限於)子宮內膜、子宮頸、卵巢、陰道、及外陰之癌症，以及子宮之肉瘤。
可治療之卵巢癌症包括(但不限於)漿液性腫瘤、子宮內膜樣腫瘤、黏液性囊狀腺癌瘤、顆粒細胞腫瘤、支持間質細胞(Sertoli-Leydig cell)腫瘤及雄胚瘤。
可治療之子宮頸癌症包括(但不限於)鱗狀細胞癌瘤、腺癌瘤、腺鱗狀癌瘤、小細胞癌瘤、神經內分泌腫瘤、玻璃狀細胞癌瘤及子宮頸乳頭狀腺癌瘤。
可治療之消化道腫瘤包括(但不限於)肛門、結腸、結腸直腸、食道、膀胱、胃、胰臟、直腸、小腸、及唾液腺之癌症。
可治療之食道癌症包括(但不限於)食道細胞癌瘤及腺癌瘤，以及鱗狀細胞癌瘤、平滑肌肉瘤、惡性黑色素瘤、橫紋肌肉瘤及淋巴瘤。
可治療之胃部癌症包括(但不限於)腸道型及擴散型胃腺癌瘤。
可治療之胰臟癌症包括(但不限於)胰管腺癌瘤、腺鱗狀癌瘤及胰臟內分泌腫瘤。
可治療之尿道腫瘤包括(但不限於)膀胱、陰莖、腎臟、腎盂、輸尿管、尿道及人類乳突腎癌症。
可治療之腎臟癌症包括(但不限於)腎細胞癌瘤、泌尿道上皮細胞癌瘤、近腎小球細胞腫瘤(腎素瘤)、血管平滑肌脂肪瘤、腎腮腺嗜酸性顆粒細胞瘤、畢氏管(Bellini duct)癌瘤、腎臟之透明細胞肉瘤、中胚葉腎瘤及威爾姆氏腫瘤(Wilms’ Tumor)。
可治療之膀胱癌症包括(但不限於)移行細胞癌瘤、鱗狀細胞癌瘤、腺癌瘤、肉瘤及小細胞癌瘤。
可治療之眼部癌症包括(但不限於)眼內黑色素瘤及視網膜母細胞瘤。
可治療之肝臟癌症包括(但不限於)肝細胞癌瘤(出現或不出現纖維薄層型變異之肝臟細胞癌瘤)、膽管癌(肝內膽管癌瘤)、及混合肝細胞膽管癌。
可治療之皮膚癌症包括(但不限於)鱗狀細胞癌瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、惡性黑色素瘤、默克(Merkel)細胞皮膚癌、及非黑色素瘤皮膚癌。
可治療之頭與頸部癌症包括(但不限於)頭與頸之鱗狀細胞癌、喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌、唾液腺癌、唇及口腔癌症及鱗狀細胞。
可治療之淋巴瘤包括(但不限於)AIDS-相關淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、皮膚T-細胞淋巴瘤、伯基氏淋巴瘤、何杰金氏疾病、及中樞神經系統淋巴瘤。
可治療之肉瘤包括(但不限於)軟組織之肉瘤、骨肉瘤、惡性纖維性組織細胞瘤、淋巴肉瘤、及橫紋肌肉瘤。
可治療之白血病包括(但不限於)急性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、慢性骨髓性白血病、及毛細胞白血病。
某些具體例中，本發明化合物可用於治療涉及MAP4K1之各種不同其他疾病，如心血管與肺部疾病。
某些具體例中，本發明化合物可用為醫藥，供治療及/或預防心血管、發炎及纖維化疾患、腎疾患，特定言之急性及慢性腎功能不全，及急性及慢性腎衰竭。
本文中，術語「腎功能不全」包括腎功能不全之急性及慢性兩種癥兆，及原發或相關之腎疾患，如糖尿病及非糖尿病性腎病變、高血壓性腎病變、缺血性腎疾患、腎灌流不足、透析中低血壓、阻塞性尿路病變、腎脈管狹窄、腎小球病變、腎小球腎炎(如，例如，原發性腎小球腎炎； 微小病變型腎小球腎炎(類脂肪變性腎病)；膜性腎小球腎炎；局灶節段性腎小球硬化症(FSGS)；膜-增生性腎小球腎炎；急進性腎小球腎炎；環間膜增生性腎小球腎炎(IgA腎炎、柏格氏病(Berger’s disease))；感染後腎小球腎炎；續發性腎小球腎炎)、糖尿病、全身性紅斑狼瘡、類澱粉沉積症、古巴斯捷氏症候群(Goodpasture syndrome)、韋格納肉芽腫(Wegener’s granulomatosis)、過敏性紫斑症(Henoch-Schonlein purpura)、顯微性多血管炎、急性腎小球腎炎、腎盂腎炎(例如，因尿石症、良性攝護腺肥大、糖尿病、畸形、濫用止痛藥、克隆氏症(Crohn's disease)所致者)、腎小球硬化症、腎臟之小動脈壞死(arteriolonecrose)、腎小管間質性疾病、腎病變性疾患如原發性及先天性或後天性腎疾患、亞伯氏症候群(Alport syndrome)、腎炎、免疫性腎臟疾患如腎臟移植排斥及免疫複合體誘發之腎疾患、毒性物質誘發之腎病變、顯影劑誘發之腎病變、糖尿病及非糖尿病性腎病變、腎囊腫、腎硬化、高血壓性腎硬化及可經診斷特徵之腎病症候群，例如，肌酸酐及/或排水量異常減少、血中尿素、氮、鉀及/或肌酸酐等濃度異常升高、腎酵素活性改變(例如，麩胺酸合成酶)、尿液滲透壓或尿液體積改變、微白蛋白尿升高、巨量白蛋白尿、腎小球及小動脈損傷、腎管擴張、高磷酸鹽血症及/或需要洗腎。
某些具體例中，本發明化合物可用於治療及/或預防腎功能不全之後遺症，例如，肺水腫、心臟衰竭、尿毒症、貧血、電解質不平衡(例如，高血鈣症、低血鈉症)及骨與碳水化合物代謝障礙。
某些具體例中，本發明化合物可用於治療及/或預防腎功能不全之後遺症，例如，肺水腫、心臟衰竭、尿毒症、貧血、電解質不平衡(例如，高血鈣症、低血鈉症)及骨與碳水化合物代謝障礙。
某些具體例中，本發明化合物進一步適合治療及/或預防多囊性腎臟疾病(PCKD)及ADH分泌失調症候群(SIADH)。
某些具體例中，本發明化合物亦適合治療及/或預防代謝症候群、高血壓、頑固性高血壓、急性及慢性心臟衰竭、冠狀動脈心臟疾病、穩定性及不穩定性心絞痛、周邊及心臟血管疾患、心律不整、心房及心室心律不整及傳導功能受損，例如，第1-111級房室傳導阻滯(AB阻滯1-111)、上心室心搏過速、心房纖維性顫動、心房撲動、心室纖維性顫動、心室撲動、心室心搏過速、尖端扭轉型心搏過速、心房及心室額外收縮、AV-交界區性額外收縮、病竇症候群、昏厥、AV-結迴旋心搏過速、沃夫-巴金森-懷特症候群(Wolff-Parkinson-White syndrome)、急性冠狀動脈症候群(ACS)、自體免疫心臟疾患(心包膜炎、心內膜炎、心瓣膜炎、主動脈炎、心肌病變)、休克(如心源性休克、敗血性休克及過敏性休克)、動脈瘤、拳擊手心臟病變(心室提前收縮(PVC))；供治療及/或預防血栓栓塞性疾患及缺血症如心肌缺血、心肌梗塞、中風、心臟肥大、暫時性及缺血性發作、子癇前症、發炎性心血管疾患、冠狀動脈及周邊動脈痙孿、水腫形成(例如，肺水腫、腦水腫、腎水腫或因心臟衰竭、周邊循環不良、再灌流傷害、動脈與靜脈血栓造成之水腫)、心肌功能不全、血管內皮功能障礙；供預防術後再狹窄(例如，在血栓溶解療法、經皮經腔血管成形術(PTA)、經腔冠狀動脈血管成形術(PTCA)、心臟移植及繞道手術之後)，及微血管與大血管傷害(脈管炎)、增加纖維蛋白原及低密度脂蛋白(LDL)之濃度及增加纖維蛋白溶酶原激活物抑制劑1(PAI-1)之濃度，及供治療及/或預防勃起功能障礙及女性性功能障礙。
某些具體例中，本發明化合物亦適合治療及/或預防氣喘疾患、肺動脈高血壓(PAH)及其他肺高血壓(PH)型式，包括左邊心臟疾病、 HIV、鐮狀細胞貧血、血栓栓塞(CTEPH)、結節病、COPD或肺纖維變性相關之肺高血壓、慢性阻塞性肺病(COPD)、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、急性肺損傷(ALI)、α-1-抗胰蛋白酶缺陷(AATD)、肺纖維變性、肺氣腫(例如，因吸菸造成之肺氣腫)及囊狀纖維變性(CF)。
某些具體例中，本發明化合物亦可有效控制特徵在於NO/cGMP系統失調之中樞神經系統疾患。其等特別適合在認知力減損之後改善知覺、注意力、學習力或記憶力，如彼等特別與諸如以下狀態/疾病/症候群相關之下發生之彼等認知力減損，如輕度認知力減損、老化相關之學習及記憶力減損、老化相關之記憶力喪失、血管性失智、腦外傷、中風、中風後發生之失智(中風後失智)、創傷後腦外傷、一般專注力減損、患有學習及記憶力問題之兒童之專注力減損、阿茲海默症(Alzheimer’s disease)、路易體(Lewy body)失智、顯前葉退化之失智，包括皮克氏(Pick's)症候群、帕金森氏症(Parkinson's disaese)、皮質基底退化之漸進性失智、肌萎縮性側索硬化症(ALS)、亨丁頓氏症(Huntington’s Disease)、髓鞘脫失、多發性硬化、丘腦退化、庫賈氏(Creutzfeld-Jacob)失智症、HIV失智、患有失智之精神分裂症或柯沙科夫精神病(Korsakoff’s psychosis)。
某些具體例中，本發明化合物亦適合治療及/或預防中樞神經系統疾患，如焦慮、緊張及抑鬱的狀態、CNS-相關之性功能障礙及睡眠障礙，及供控制在攝取食物、興奮劑、及成癮物之病理性紊亂。
某些具體例中，本發明化合物進一步適合控制腦部血流，因此代表控制偏頭痛之有效製劑。
某些具體例中，本發明化合物亦適合預防及控制腦梗塞(腦中風)(如中風、腦缺血及腦外傷)之後遺症。根據本發明化合物同樣可用於控制疼痛及耳鳴狀態。
某些具體例中，本發明化合物具有抗發炎作用，因此可作為消炎劑，用於治療及/或預防敗血病(SIRS)、多重器官衰竭(MODS、MOF)、腎臟之發炎疾患、慢性腸部發炎(IBD，克隆氏症(Crohn's disease)、UC)、胰臟炎、腹膜炎、類風濕疾患、發炎皮膚疾患及眼部發炎疾患。
某些具體例中，本發明化合物亦可用於治療及/或預防自體免疫疾病。
某些具體例中，本發明化合物亦適合治療及/或預防內臟器官之纖維化疾患，例如，肺臟、心臟、腎臟、骨髓及特定言之肝臟，及皮膚纖維變性及眼部纖維化疾患。
本文所採用術語「纖維化疾患」特定言之包括下列：肝纖維變性、肝硬化、肺纖維變性、心肌纖維變性、腎病變、腎小球腎炎、間質性腎纖維變性、因糖尿病造成之纖維化傷害、骨髓纖維變性及類似之纖維化疾患、硬皮病、硬斑病、蟹足腫、增生性疤痕(亦繼手術過程之後)、痣、糖尿病視網膜病變、增生性玻璃體視網膜病變及結締組織疾患(例如，結節病)。
某些具體例中，本發明化合物亦適合控制手術後結疤，例如，因青光眼手術造成。
某些具體例中，本發明化合物亦可用於老化及角質化皮膚之美容。
某些具體例中，本發明化合物適合治療及/或預防肝炎、新生瘤、骨質疏鬆症、青光眼及胃輕癱。
某些具體例中，本發明化合物適合治療及/或預防病毒感染(例如，HIV及卡波西氏肉瘤)；發炎及自體免疫疾病(例如，結腸炎、關節炎、阿茲海默症(Alzheimer’s disease)、腎小球腎炎及傷口癒合)；細菌、真 菌、及/或寄生蟲感染；皮膚疾病(例如，乾癬)；特徵在於細胞(例如，纖維母細胞、肝細胞、骨頭與骨髓細胞、軟骨或平滑肌細胞或上皮細胞)數量增加之基於過度增生之疾病(例如，子宮內膜增生)；骨頭疾病及心血管疾病(例如，術後再狹窄及肥大)。
另一具體例中，本發明化合物亦可用於治療或預防婦女之子宮纖維瘤(子宮平滑肌瘤或子宮肌瘤)。子宮纖維瘤為子宮肌膜(係子宮的平滑肌層)之良性腫瘤。子宮纖維瘤在女人生命中慢慢生長，其生長係依賴女性性激素雌二醇及孕酮。因此，約70%及>80%的白人及非裔美國婦女的子宮纖維瘤的好發高峰分別在35歲到更年期之間，之後因激素量減少即會萎縮。約30%及45%的白人及非裔美國婦女分別因其纖維瘤而出現臨床相關症狀，其等係與月經週期相關之大量經血及疼痛(David等人，Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.199：137-140,2016)。此時的大量經血係界定在月經週期中流血超過80mL。子宮纖維瘤之黏膜下位置(例如，彼等直接位於子宮內膜下之位置)似乎對子宮流血的影響甚至更嚴重，可能造成婦女患者貧血。此外，會因此隨子宮纖維瘤的症狀，嚴重影響婦女患者的生活品質。
某些具體例中，本發明化合物適用於治療及/或預防慢性腎疾患、急性及慢性腎功能不全、糖尿病、發炎或高血壓性腎病變、纖維化疾患、心臟功能不全、心絞痛、高血壓、肺高血壓、缺血、血管疾患、血栓栓塞性疾患、動脈血管硬化、鐮狀細胞貧血、勃起功能障礙、良性攝護腺肥大、與良性攝護腺肥大相關之排尿困難、亨丁頓氏症(Huntington)、失智、阿茲海默症及庫賈氏症。
本發明提供一種方法，供治療及/或預防慢性腎疾患、急性及慢性腎功能不全、糖尿病、發炎或高血壓性腎病變、纖維化疾患、心臟功能不全、心絞痛、高血壓、肺高血壓、缺血、血管疾患、血栓栓塞性疾患、 動脈血管硬化、鐮狀細胞貧血、勃起功能障礙、良性攝護腺肥大、與良性攝護腺肥大相關之排尿困難、亨丁頓氏症(Huntington)、失智、阿茲海默症及庫賈氏症。
本發明進一步提供一種根據本發明化合物之用途，用於治療及/或預防疾患，尤指上述疾患。
本發明進一步提供一種治療及/或預防疾患，特定言之上述疾患之方法，其係使用有效量之至少一種根據本發明化合物。
因此，本發明化合物可用於藉由外因性及/或內因性配體來抑制、阻斷、減少、或降低MAP4K1活化，而降低腫瘤生長及調控失調之免疫反應，例如，在癌症及癌症免疫療法之背景下，用於阻斷免疫抑制性，及提高免疫細胞活化與浸潤。此方法包括對有此需要之哺乳動物(包括人類)投與本發明之化合物量或其醫藥上可接受之鹽、異構物、多形物、代謝物、水合物、溶劑合物或酯以治療該疾患。
本發明亦提供一種治療涉及MAP4K1之各種不同其他疾患之方法，如(但不限於)出現免疫反應失調之疾患、發炎、感染與癌症之疫苗接種、病毒感染、肥胖、及膳食誘發之肥胖、肥胖症、代謝疾患、肝脂肪變性及子宮纖維瘤。此等疾患在人體的特徵已完全了解，但亦在其他哺乳動物中具有類似病因，可藉由投與本發明醫藥組成物來治療。
5.組合療法
本發明化合物可用於併用一或多種適合治療可利用該化合物治療之疾病或適應症之其他/次要醫療劑之組合療法。
因此某些具體例中，例如，使用本發明化合物之本發明方法可包括對有此需要之個體再投與其他醫療劑。該其他醫療劑可為：(i)阻斷或抑制免疫系統檢查點之免疫調控劑，該檢查點可能是或可能不是NF-κB 途徑之組份；及/或(ii)可直接刺激免疫效應子反應之製劑，如細胞激素、或腫瘤特異性授受性轉移T細胞族群、或針對腫瘤細胞所表現蛋白質之抗體；及/或(iii)包含腫瘤抗原或其免疫原性片段之組成物；及/或(iv)化療劑。
某些具體例中，該第二醫療劑包括PI3K-AKT-mTOR途徑之抑制劑、Raf-MAPK途徑之抑制劑、JAK-STAT途徑之抑制劑、β連環蛋白(catenin)途徑之抑制劑、notch途徑之抑制劑、刺蝟信號途徑之抑制劑、Pim激酶之抑制劑、及/或伴護蛋白蛋白質與細胞循環演進之抑制劑。某些具體例中，本發明之組合療法可降低細胞族群出現抗藥性的可能性，及/或降低治療之毒性。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑化合物可以組合使用一或多種下列激酶之抑制劑，供治療癌症：Akt1、Akt2、Akt3、TGF-βPν、PKA、PKG、PKC、CaM-激酶、磷酸化激酶、MEKK、ERK、MAPK、mTOR、EGFR、HER2、HER3、HER4、INS-R、IGF-1R、IR-R、PDGFαR、PDGFβR、CSFIR、KIT、FLK-II、KDR/FLK-1、FLK-4、flt-1、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、c-Met、Ron、Sea、TRKA、TRKB、TRKC、FLT3、VEGFR/Flt2、Flt4、EphA1、EphA2、EphA3、EphB2、EphB4、Tie2、Src、Fyn、Lck、Fgr、Btk、Fak、SYK、FRK、JAK、ABL、ALK、及B-Raf。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑化合物可以組合使用一或多種下列抑制劑，供治療癌症，包括：FGFR抑制劑(FGFR1、FGFR2、FGFR3或FGFR4，例如，AZD4547、BAY 1187982、ARQ087、BGJ398、BIBF1120、TKI258、德立替尼(lucitanib)、多韋替尼(dovitinib)、TAS-120、JJ-42756493、Debio1347、INCB54828、INCB62079、及INCB63904)、JAK抑制劑(JAK1及/或JAK2，例如，魯索利替尼(ruxolitinib)、巴希替尼(baricitinib)、或抑塔替尼(itacitinib)(INCB39110))、IDO抑制劑(例如， 恩帕斯塔(epacadostat)及NLG919)、LSD1抑制劑(例如，GSK2979552、INCB59872及INCB60003)、TDO抑制劑、PI3K-δ抑制劑(例如，INCB50797及INCB50465)、PI3K-γ抑制劑(如PI3K-γ選擇性抑制劑)、CSF1R抑制劑(例如，PLX3397及LY3022855)、TAM受體酪胺酸激酶(Tyro-3、Axl、及Mer)、芳基烴受體(AhR)調控劑(如拉喹莫德(laquinimod)、胺基黄酮、CB7993113、CH223191、6,2’,4’-三甲氧基黄酮(TMF)、GNF351(N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺)、胺基黄酮、NKI150460、吲哚-3-甲醇、β-萘并黄酮及其二聚體、二吲哚基甲烷(DIM)、4-羥基泰莫西芬(tamoxifen)、來氟米特(leflunomide)、雷洛昔芬(raloxifene)、曲尼司特(tranilast)、氟他胺(flutamide)、美西律(mexiletine)、尼莫地平(nimodiphine)、奧美拉唑(omeprazole)、舒林酸(sulindac)、曲尼司特(tranilast)、及TCDD(2,3,7,8-四氯二苯并-p-戴奧辛))、血管新生抑制劑、間白素受體抑制劑、含溴與額外末端家族成員抑制劑(例如，溴功能域抑制劑或BET抑制劑，如OTX015、CPI-0610、INCB54329、及INCB57643)、及腺苷受體拮抗劑或其組合。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑化合物可以組合使用HDAC之抑制劑，如班諾斯塔(panobinostat)及菲諾斯塔(vorinostat)。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑化合物可以組合使用c-Met之抑制劑，如昂納珠單抗(onartumzumab)、替萬提尼(tivantnib)、及卡馬替尼(capmatinib)(INC-280)。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑化合物可以組合使用BTK之抑制劑，如依魯替尼(ibrutinib)。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑化合物可以組合使用mTOR之抑制劑，例如，雷帕黴素(rapamycin)、西羅莫司(sirolimus)、特羅莫司(temsirolimus)、及依維莫司(everolimus)。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑化合物可以組合使用MEK之抑制劑，如曲美替尼(trametinib)、希魯替尼(selumetinib)及GDC-0973。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑化合物可以組合使用Hsp90之抑制劑(例如，坦螺旋黴素(tanespimycin))、週期素依賴性激酶之抑制劑(例如，帕伯希利(palbociclib))、PARP之抑制劑(例如，奧拉帕尼(olaparib))及Pim激酶之抑制劑(LGH447、INCB053914、及SGI-1776)。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑化合物可以組合使用DNA感測器(c-GAS)及/或其下游轉接蛋白質STING之促效劑。
cGAS(環狀GMP-AMP合成酶)-STING(干擾素基因之刺激劑)途徑為先天免疫系統之組份，其功能在於檢測細胞溶質DNA之存在，且反應會啟動發炎基因之表現，造成衰老或激活防禦機轉。DNA從正常核位置移至細胞溶質係與腫瘤發生或病毒感染相關。已在細胞溶質中發現cGAS，且當直接結合細胞溶質DNA時，cGAS會形成二聚體，催化由ATP及GTP產生2’3’-cGAMP。所得cGAMP即具有第二信使者之作用，結合STING並啟動激活轉錄因子IRF3。活化之IRF3造成第1型IFN-β轉錄，使許多下游標靶基因開始進行多樣生物反應，如病毒反應、腫瘤偵測、自體免疫、及細胞衰老。許多腫瘤細胞中，構成性活性DNA傷害反應造成細胞質DNA累積及激活cGAS/STING途徑。已在淋巴瘤細胞中顯示， NKG2D配體Rae1會以依賴STING/IRF3之方式上調，因此有助於NK所介導之腫瘤清除。在抗原呈現細胞(如樹突狀細胞)中激活c-GAS-STING途徑已顯示加強其功能及補強抗腫瘤免疫力。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑化合物可以組合使用一或多種免疫檢查點抑制劑。
效應子T細胞活化作用通常係被MHC複合物所呈示之TCR辨識之抗原性肽啟動。然後由刺激之訊號與抑制效應子T細胞反應之訊號間之平衡來決定所達成之活化型態與程度。本文所採用「免疫系統檢查點」係指任何可改變平衡狀態而傾向抑制效應子T細胞反應之分子交互作用。亦即當發生該分子交互作用時，負向調節效應子T細胞之活化。此等交互作用可能為直接性，如配體與細胞表面受體間之交互作用傳遞抑制訊號給效應子T細胞。或其可能為間接性，如阻斷或抑制配體與細胞表面受體間之交互作用傳遞活化訊號給效應子T細胞，或該交互作用促進抑制性分子或細胞的止調，或被效應子T細胞所需要之代謝物之酵素消耗，或其任何組合。
免疫系統檢查點實例包括：a)吲哚胺2,3-二氧合酶(IDO1與其受質間之交互作用；b)PD1與PD-L1之間及/或PD1與PD-L2間之交互作用；c)CTLA-4與CD86及/或CTLA-4與CD80間之交互作用；d)B7-H3及/或B7-H4與其個別配體間之交互作用；e)HVEM與BTLA間之交互作用；f)GAL9與TIM3間之交互作用；g)I或II類MHC與LAG 3間之交互作用；及h)I或II類MHC與KIR間之交互作用；i)OX40(CD134)與OX40L(CD252)間之交互作用；j)CD40與CD40L(CD154)間之交互 作用；k)4-1BB(CD137)與配體(包括4-1BBL)間之交互作用；l)GITR與配體(包括GITRL)間之交互作用。
因此免疫檢查點抑制劑實例包括對抗以下免疫檢查點分子之抑制劑，如：CD20、CD27、CD28、CD39、CD40、CD 122、CD96、CD73、CD47、OX40、GITR、CSF1R、JAK、PI3Kδ、PI3K γ、TAM、精胺酸酶、CD137(亦已知為4-1BB)、ICOS、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、LAG3、TIM3、VISTA、PD-1、PD-L1、及PD-L2。
針對本發明目的之代表性檢查點為檢查點(b)，亦即PD1與其任一配體PD-L1及PD-L2間之交互作用。PD1係表現在效應子T細胞上。與其任一配體接合所產生之訊號下調活化作用。有些腫瘤表現該等配體。許多實體腫瘤(包括黑色素瘤)特別表現PD-L1。因此此等腫瘤透過T細胞的抑制性PD-1受體之活化來下調免疫介導之抗腫瘤效應。藉由阻斷PD1與其一或兩種配體間之交互作用，可移除免疫反應之檢查點，造成增大的抗腫瘤T細胞反應。因此，PD1及其配體即為免疫系統檢查點組份之實例，可能成為本發明方法之目標。
針對本發明目的之另一個檢查點為檢查點(c)，亦即T細胞受體CTLA-4與其配體(B7蛋白質(B7-1及B7-2))間之交互作用。T細胞表面在開始活化後，通常上調CTLA-4，且與配體結合時，抑制進一步/繼續活化。CTLA-4與亦表現在T細胞表面之受體CD28競爭結合至B7蛋白質，但上調活化作用。因此藉由阻斷與B7蛋白質之CTLA-4交互作用，但不阻斷CD28與B7蛋白質之交互作用，可移除免疫反應之其中一個正常檢查點，造成增大的抗腫瘤T細胞反應。因此，CTLA-4及其配體即為免疫系統檢查點組份之實例，可能成為本發明方法之目標。
有些具體例中，免疫檢查點分子為選自CD27、CD28、CD40、ICOS、OX40、GITR、及CD137之刺激性檢查點分子。
有些具體例中，免疫檢查點分子為選自A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、IDO、KIR、LAG3、PD-1、HM3、及VISTA之抑制性檢查點分子。
有些具體例中，本文所提供化合物可以組合使用一或多種選自以下之製劑：KIR抑制劑、TIGIT抑制劑、LAIR1抑制劑、CD 160抑制劑、2B4抑制劑及TGFR β抑制劑。
有些具體例中，本文所提供化合物可以組合使用免疫檢查點抑制劑，其等通常為小型有機分子之小分子抑制劑(SMI)。例如，某些具體例中，IDO1之抑制劑包括恩帕斯塔(Epacadostat)(INCB24360)、吲哚莫德(Indoximod)、GDC-0919(NLG919)及F001287。IDO1之其他抑制劑包括1-甲基色胺酸(1 MT)。
有些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑亦稱為「免疫調控劑」，其包括投與個體時阻斷或抑制免疫系統檢查點之作用之任何製劑，在個體中造成上調免疫效應子反應，通常為T細胞效應子反應，其可能包括抗腫瘤T細胞效應子反應。
本發明方法所使用之免疫調控劑可阻斷或抑制上述任何免疫系統檢查點。該製劑可能為抗體或可造成該阻斷或抑制作用之任何其他合適製劑。因此該製劑通常稱為該檢查點之抑制劑。
本文所採用「抗體」包括完整抗體及其任何抗原結合片段(亦即「抗原結合部份」)或單鏈。抗體可為多株抗體或單株抗體，且可能採用任何合適方法製造。術語抗體之「抗原結合部份」所涵括之結合性片段實例包括Fab片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、Fd片段、Fv片段、dAb片段， 及單離之互補決定區(CDR)。單鏈抗體(如scFv)及重鏈抗體(如VHH及駱駝抗體)亦計畫涵括在術語抗體之「抗原結合部份」內。
某些具體例中，本發明HPK1抑制劑所使用之免疫調控劑為抗-PD1抗體、抗-PD-L1抗體、或抗-CTLA-4抗體。
有些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑為PD-1之抑制劑，例如，抗-PD-1單株抗體。有些具體例中，抗-PD-1單株抗體為納武單抗(nivolumab)(MDX-1106)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)(Merck 3475或拉博利珠單抗(Lambrolizumab))、皮得利珠單抗(pidilizumab)(CT-011)、替雷利珠單抗(Tislelizumab)(BGB-A317)、卡瑞利珠單抗(Camrelizumab)(SHR-1210)、斯巴達珠單抗(spartalizumab)(PDR001)、或AMP-514(MEDI0680)。有些具體例中，抗-PD-1單株抗體為納武單抗(nivolumab)或帕博利珠單抗(pembrolizumab)。有些具體例中，抗-PD1抗體為帕博利珠單抗(pembrolizumab)。有些具體例中，抗PD-1抗體為卡瑞利珠單抗(Camrelizumab)(SHR-1210)。某些具體例中，PD-1之抑制劑為AMP-224(會與PD-1結合之PD-L2 Fc融合蛋白質)或AUNP-12(抗-PD-1肽)。
有些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑為PD-L1之抑制劑，例如，抗-PD-L1單株抗體。有些具體例中，抗-PD-L1單株抗體為BMS-935559、BMS-936559(MDX-1105)、MEDI-4736(德瓦魯單抗(durvalumab))、MPDL3280A(亦稱為RG7446)、YW243.55.S70(HPAB-0381-WJ)、或MSB0010718C。有些具體例中，抗-PD-L1單株抗體為MPDL3280A或MEDI-4736。某些具體例中，抗-PD-L1抗體包括阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)或MEDI-4736、及MPDL3280A。
有些具體例中免疫檢查點分子之抑制劑為CTLA-4之抑制劑，例如，抗-CTLA-4抗體。有些具體例中，抗-CTLA-4抗體為伊匹木單抗(ipilimumab)、曲美木單抗(tremelimumab)，或WO2014/207063所揭示之任何抗體(已以引用之方式併入本文中)。其他分子包括多肽，或可溶性突變體CD86多肽。某些具體例中，抗體為易普利單抗(Ipilumumab)。
某些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑為兩種或更多種本文所說明調控劑之組合，如靶向兩種或更多種不同標靶之組合(例如，PD-1、PD-L1及PD-L2)。例示性組合包括：α-PD-1與α-PD-L1；α-CTLA-4、α-PD-L1、與α-CD20等等。
有些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑為阻斷或抑制4-1 BB與其配體間交互作用之抗體，包括烏特魯單抗(utomilumab)。
有些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑為CSFIR之抑制劑，例如，抗-CSF1R抗體。有些具體例中，抗-CSF1R抗體為IMC-CS4或RG7155。
有些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑為LAG3之抑制劑，例如，抗-LAG3抗體。有些具體例中，抗-LAG3抗體為BMS-986016、LAG525、IMP321或GSK2831781。
有些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑為GITR之抑制劑，例如，抗-GITR抗體。有些具體例中，抗-GITR抗體為TRX518、MK-4166、MK1248、BMS-986156、MEDI1873、或GWN323。
有些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑為OX40之抑制劑，例如，抗-OX40抗體或OX40L融合蛋白質。有些具體例中，抗-OX40 抗體為MEDI0562、MEDI6469、MOXR0916、PF-04518600、或GSK3174998。有些具體例中，OX40L融合蛋白質為MEDI6383。
有些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑為TIM3之抑制劑，例如，抗-TIM3抗體。有些具體例中，抗-TIM3抗體為MBG-453。
有些具體例中，免疫檢查點分子之抑制劑為CD20之抑制劑，例如，抗-CD20抗體。有些具體例中，抗-CD20抗體為奧賓珠單抗(obinutuzumab)或利妥昔單抗(rituximab)。
有些具體例中，本發明化合物可以組合使用一或多種代謝酵素抑制劑。有些具體例中，代謝酵素抑制劑為IDO1、TDO、或精胺酸酶之抑制劑。IDO1抑制劑之實例包括恩帕斯塔(epacadostat)及NGL919。精胺酸酶抑制劑之實例為CB-1158。
有些具體例中，本發明化合物可以組合使用雙特異性抗體。有些具體例中，雙特異性抗體之其中一個功能域靶向PD-1、PD-L1、CTLA-4、GITR、OX40、TIM3、LAG3、CD137、ICOS、CD3或TGFβ受體。
有些具體例中，本發明化合物可以組合使用一或多種治療疾病(如癌症)之製劑。有些具體例中，該製劑為烷化劑、蛋白酶體抑制劑、皮質類固醇、或免疫調控劑。烷化劑實例包括苯達莫司汀(bendamustine)、氮芥、乙烯亞胺衍生物、磺酸烷基酯、硝基脲與三氮烯類、尿嘧啶氮芥、氯乙胺(chlormethine)、環磷醯胺(CytoxanTM)、異環磷醯胺(ifosfamide)、馬法蘭(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、雙溴丙基哌嗪(pipobroman)、三伸乙基-蜜胺、三伸乙基硫代磷醯胺、白消安(busulfan)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、鏈脲佐菌素(streptozocin)、 達卡巴仁(dacarbazine)、及替莫唑胺(temozolomide)。有些具體例中，蛋白酶體抑制劑為卡非佐米(carfilzomib)。有些具體例中，皮質類固醇為地塞美松(dexamethasone)(DEX)。有些具體例中，免疫調控劑為來那度胺(lenalidomide)(LEN)或泊馬度胺(pomalidomide)(POM)。
本發明化合物可以進一步組合使用其他治療癌症之方法，例如，化療法、放射療法、腫瘤標靶療法、化療前置療法、免疫療法或手術。免疫療法實例包括細胞激素治療法(例如，干擾素、GM-CSF、G-CSF、IL-2)、CRS-207免疫療法、癌症疫苗、單株抗體、過繼性T細胞轉移、溶瘤病毒療法及免疫調控小分子，包括沙利竇邁(thalidomide)或JAK1/2抑制劑及類似物。
本發明化合物可以組合投與一多種抗癌藥物，如化療劑。化療法實例包括任何：阿巴瑞克(abarelix)、阿比特龍(abiraterone)、阿法替尼(afatinib)、阿柏西普(aflibercept)、阿地白介素(aldesleukin)、阿侖單抗(alemtuzumab)、阿利維甲酸(alitretinoin)、別嘌呤醇(allopurinol)、六甲蜜胺(altretamine)、安耐曲唑(anastrozole)、三氧化二砷、天冬醯胺酶、阿西替尼(axitinib)、阿紮胞苷(azacitidine)、貝伐單抗(bevacizumab)、貝瑟羅汀(bexarotene)、巴希替尼(baricitinib)、比卡魯胺(bicalutamide)、博來黴素(bleomycin)、硼替佐必(bortezombi)、硼替佐米(bortezomib)、布立尼布(brivanib)、布帕利希(buparlisib)、白消安(busulfan)(靜脈內)、白消安(口服)、二甲睾酮(calusterone)、卡培他濱(capecitabine)、卡鉑(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、西地尼布(cediranib)、西妥昔單抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、順鉑(cisplatin)、克拉屈濱(cladribine)、克羅拉濱(clofarabine)、克唑替尼(crizotinib)、環磷醯胺、阿糖胞苷(cytarabine)、 達卡巴仁(dacarbazine)、達克替尼(dacomitinib)、更生黴素(dactinomycin)、達肝素鈉(dalteparin sodium)、達沙替尼(dasatinib)、更生黴素(dactinomycin)、唐黴素(daunorubicin)、地西他濱(decitabine)、地加瑞克(degarelix)、地尼介白素(denileukin)、地尼介白素迪夫托斯(denileukin diftitox)、脫氧柯福黴素(deoxycoformycin)、右雷佐生(dexrazoxane)、歐洲紫杉醇(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、卓羅沙吩(droloxafine)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、抑克珠單抗(eculizumab)、恩雜魯胺(enzalutamide)、表足葉草毒(epidophyllotoxin)、泛艾黴素(epirubicin)、厄洛替尼(erlotinib)、雌氮芥(estramustine)、磷酸依託泊苷(etoposide phosphate)、依託泊苷(etoposide)、依西美坦(exemestane)、檸檬酸芬太尼(fentanyl citrate)、非格司亭(filgrastim)、氟尿嘧啶脫氧核苷(floxuridine)、福達樂(fludarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟他胺(flutamide)、氟維司群(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他濱(gemcitabine)、吉妥珠單抗(gemtuzumab ozogamicin)、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、乙酸組胺瑞林(histrelin acetate)、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、伊達比星(idarubicin)、依得利斯(idelalisib)、異環磷醯胺(ifosfamide)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)、干擾素α2a、伊立替康(irinotecan)、二甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinib ditosylate)、來那度胺(lenalidomide)、來曲唑(letrozole)、若克瘤(leucovorin)、乙酸柳菩林(leuprolide acetate)、左旋咪唑(levamisole)、洛莫司汀(lomustine)、甲氮芥(meclorethamine)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、馬法蘭(melphalan)、巰基嘌呤、甲胺蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、光輝黴素(mithramycin)、絲裂黴素(mitomycin C)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、苯丙酸諾龍(nandrolone phenpropionate)、溫諾平 (navelbene)、耐昔妥珠單抗(necitumumab)、奈拉濱(nelarabine)、來那替尼(neratinib)、尼洛替尼(nilotinib)、尼魯米特(nilutamide)、若莫單抗(nofetumomab)、歐色林(oserelin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、裴米卓耐特(pamidronate)、帕尼單抗(panitumumab)、帕唑帕尼(pazopanib)、培門冬酶(pegaspargase)、培非格司亭(pegfilgrastim)、培美曲塞二鈉(pemetrexed disodium)、噴司他汀(pentostatin)、皮拉利希(pilaralisib)、雙溴丙基哌嗪(pipobroman)、普卡黴素(plicamycin)、普納替尼(ponatinib)、潑尼松(prednisone)、丙卡巴肼(procarbazine)、奎納克林(quinacrine)、樂布力斯(rasburicase)、瑞格非尼(regorafenib)、瑞羅沙吩(reloxafine)、利妥昔單抗(rituximab)、魯索利替尼(ruxolitinib)、索拉非尼(sorafenib)、鏈脲佐菌素(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、馬來酸舒尼替尼、泰莫西芬(tamoxifen)、替加氟(tegafur)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、睾內酯(testolactone)、沙利竇邁(thalidomide)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、噻替哌(thiotepa)、托普替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫單抗(tositumomab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、維甲酸(tretinoin)、曲普瑞林(triptorelin)、尿嘧啶氮芥、戊柔比星(valrubicin)、凡德他尼(vandetanib)、長春花鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、長春地辛(vindesine)、長春瑞濱(vinorelbine)、菲諾斯塔(vorinostat)、及唑來膦酸(zoledronate)。
其他抗癌劑包括抗體療法，如曲妥珠單抗(trastuzumab)(賀癌平(Herceptin))、針對共同刺激分子之抗體如CTLA-4(例如，伊匹木單抗(ipilimumab)或曲美木單抗(tremelimumab))、4-1BB、針對PD-1及PD-L1之抗體、或針對細胞激素(IL-10、TGF-β等等)之抗體。可與本發明化合物組合用於治療癌症或感染(如病毒、細菌、真菌、及寄生蟲感染)之針對PD- 1及/或PD-L1之抗體實例包括(但不限於)納武單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)、MPDL3280A、MEDI-4736、及SHR-1210。
其他抗癌劑包括與細胞增生性疾患相關之激酶之抑制劑。此等激酶包括(但不限於)Aurora-A、CDK1、CDK2、CDK3、CDK5、CDK7、CDK8、CDK9、ephrin受體激酶、CHK1、CHK2、SRC、Yes、Fyn、Lck、Fer、Fes、Syk、Itk、Bmx、GSK3、JNK、PAK1、PAK2、PAK3、PAK4、PDK1、PKA、PKC、Rsk、及SGK。
其他抗癌劑亦包括彼等阻斷免疫細胞移動之製劑，如趨化素受體(包括CCR2及CCR4)之拮抗劑。本發明化合物可進一步組合使用一或多種抗發炎劑、類固醇、免疫抑制劑、或治療性抗體。
有些具體例中，本發明化合物可以組合使用直接刺激免疫效應子反應之其他醫療性劑，如細胞激素，或針對授受性轉移T細胞族群之腫瘤、或針對腫瘤細胞所表現蛋白質之抗體。
本文所採用「直接刺激免疫效應子反應之製劑」意指任何合適製劑，但通常指細胞激素或趨化素(或刺激產生其中一種之製劑)、特異性過繼性轉移T細胞族群之腫瘤、或針對腫瘤細胞所表現蛋白質之抗體。
細胞激素可為選自以下之干擾素：IFNα、IPNβ、IFNγ及IFNA、或間白素，如IL-2。趨化素可能為發炎介質，例如，選自CXCL9、10、及11，其吸引表現CXCR3之T細胞。該刺激產生細胞激素或趨化素之製劑可能為適合投藥給人類之佐劑。一種實例為卡介苗(Bacille Calmette-Guerin)(BCG)，其通常投藥至膀胱內(亦即尿道)，供治療膀胱癌。BCG用於膀胱癌之典型劑量療程為每周一次共6週，但為了長期安全性病史，亦可無限期維持投藥。已知BCG可刺激對膀胱癌之免疫反應。BCG亦已用為佐劑，與包含腫瘤抗原之組成物(亦即使用癌症疫苗)組合使用，通常 當皮內投藥時，特別用於結腸癌。此等BCG用法亦涵括在本發明內。腫瘤特異性過繼性轉移T細胞族群直接增加個體中腫瘤特異性T細胞族群數量，且可採用任何合適方式產生。然而，該製程通常涉及從來自患者之腫瘤樣本中單離腫瘤特異性T細胞，並選擇性培養彼等細胞後，再將已擴增之腫瘤特異性T細胞族群送回患者。或者，可採用遺傳工程處理T細胞受體基因座，然後擴增已改變之細胞，產生腫瘤特異性T細胞族群。
特異性針對腫瘤細胞所表現蛋白質之抗體通常藉由與腫瘤細胞結合來刺激免疫活性，並透過抗體依賴性細胞介導細胞毒性(ADCC)促進細胞瓦解。此類抗體實例包括抗-CD20抗體如奧法木單抗(ofatumumab)或利妥昔單抗(rituximab)，及抗-CD52抗體，如阿侖單抗(alemtuzumab)。
因此某些例示性具體例中，本發明化合物可以組合使用鈣調磷酸酶(calcineurin)抑制劑，例如，環孢素A或FK 506；mTOR抑制劑，例如，雷帕黴素(rapamycin)、40-0-(2-羥基乙基)-雷帕黴素(rapamycin)、必歐莫斯(biolimus)-7或必歐莫斯(biolimus)-9；具有免疫抑制性質之子囊黴素(ascomycin)，例如，ABT-281、ASM981；皮質類固醇；環磷醯胺；硫唑嘌呤(azathioprene)；甲胺蝶呤(methotrexate)；來氟米特(leflunomide)；咪唑立賓(mizoribine)；黴酚酸或鹽；黴酚酸莫太鹽(mycophenolate mofetil)；IL-1β抑制劑。
另一具體例中，本發明化合物係與併用製劑組合使用，其係PI3激酶抑制劑。
另一具體例中，本發明化合物係與影響BTK(布魯頓氏(Bruton’s)酪胺酸激酶)之併用製劑組合使用。
供治療腫瘤疾病之本發明化合物可以組合使用B-細胞調控劑，例如，利妥昔單抗(rituximab)、BTK或Syk抑制劑；PKC、PI3激酶、PDK、PIM、JAK與mTOR及BH3擬似物之抑制劑。
有些具體例中，本發明化合物(包括其鹽類)可以組合使用另一種免疫原劑，如癌細胞、純化之腫瘤抗原(包括重組蛋白質、肽、及碳水化合物分子)、細胞、及經過編碼免疫刺激細胞激素之基因轉染之細胞。可使用之腫瘤疫苗之無限制實例包括黑色素瘤抗原之肽，如gp100之肽、MAGE抗原、Trp-2、MARTI及/或酪胺酸酶、或已轉染而表現細胞激素GM-CSF之腫瘤細胞。
有些具體例中，本發明化合物或其鹽類亦可用於與治療癌症之疫苗接種過程組合。有些具體例中，該腫瘤細胞經過轉導而表現GM-CSF。有些具體例中，腫瘤疫苗包括來自涉及人類癌症之病毒之蛋白質，如人類乳突病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV及HCV)及卡波西氏(Kaposi’s)皰疹肉瘤病毒(KHSV)。有些具體例中，本發明化合物可以組合使用腫瘤特異性抗原，如從腫瘤組織本身單離之心臟休克蛋白質。有些具體例中，本發明化合物或其鹽類可以組合使用樹突狀細胞免疫接種法，以激活強力之抗腫瘤反應。
有些具體例中，本發明化合物可以組合使用讓表現Fe α或Fe γ受體之效應子細胞靶向腫瘤細胞之雙特異性大環肽。本發明化合物亦可組合使用激活宿主免疫反應之大環肽。
有些具體例中，本發明化合物可以組合使用骨髓移植物，供治療各種不同造血來源之腫瘤。
計畫與本發明化合物組合使用之合適抗病毒劑包含核苷及核苷酸逆轉錄酶抑制劑(NRTI)、非核苷逆轉錄酶抑制劑(NNRTI)、蛋白酶 抑制劑及其他抗病毒藥物。合適NRTI之實例包括齊多夫定(zidovudine)(AZT)；地達諾新(didanosine)(ddl)；扎西他濱(zalcitabine)(ddC)；司他夫定(stavudine)(d4T)；拉米夫定(lamivudine)(3TC)；阿巴卡維(abacavir)(1592U89)；阿德福韋酯(adefovir dipivoxil)[雙(POM)-PMEA]；洛布卡韋(lobucavir)(BMS-180194)；BCH-10652；恩曲他濱(emitricitabine)[(-)-FTC]；β-L-FD4(亦稱為β-L-D4C，命名為β-L-2’,3’-二去氧-5-氟-胞苷)；DAPD((-)-β-D-2,6-二胺基-嘌呤二氧雜環戊烷)；及二去氧腺苷(lodenosine)(FddA)。典型之合適NNRTI包括奈韋拉平(nevirapine)(BI-RG-587)；地拉韋啶(delaviradine)(BHAP、U-90152)；依法韋侖(efavirenz)(DMP-266)；PNU-142721；AG-1549；MKC-442(1-(乙氧基-甲基)-5-(1-甲基乙基)-6-(苯基甲基)-(2,4(1H,3H)-嘧啶二酮)；及(+)-胡桐素(calanolide)A(NSC-675451)及B。典型之合適蛋白酶抑制劑包括沙奎那維(saquinavir)(Ro 31-8959)；利托那韋(ritonavir)(ABT-538)；茚地那韋(indinavir)(MK-639)；奈非那韋(nelfnavir)(AG-1343)；安佩那韋(amprenavir)(141W94)；拉西那韋(lasinavir)(BMS-234475)；DMP-450；BMS-2322623；ABT-378；及AG-1549。其他抗病毒劑包括羥基脲、利巴韋林(ribavirin)、IL-2、IL-12、噴他夫西(pentafuside)及億生計畫(Yissum Project)No.11607。
咸了解，本發明方法所使用許多另一種醫療劑可能為需要經靜脈內、腹膜內、或儲積式投藥之生物製劑。再一具體例中，本發明化合物係經口投藥，而另一種醫療劑則非經腸式投藥，例如，經靜脈內、經腹膜內或呈儲積物投藥。
本文說明之任何組合療法中，當對患者投與超過一種醫藥劑時，其等可同時、分開、依序、或組合投藥(例如，超過兩種藥劑時)。
一具體例中，本發明提供一種包含本發明化合物之產品(如主要化合物或其任何次族群)及至少一種其他醫療劑，成為組合製劑，供同時、分開、或依序用於療法。呈組合製劑提供之產品包括在同一個醫藥組成物中包含本發明化合物或其任何次族群及其他醫療劑(群)之組成物，或呈分開型式包含主要化合物或其任何次族群及其他醫療劑(群)之組成物，例如，呈套組型式。
一具體例中，本發明提供一種包含兩種或更多種分開醫藥組成物之套組，其中至少一種包含主要化合物，及另一種包含本文所討論之第二種醫療劑。一具體例中，套組包含用於分開收納該組成物之手段，如容器、分開的瓶子、或分開的箔包。此等套組實例為泡殼包，通常用於包裝錠劑、膠囊及類似物。本發明套組可用於在不同投藥間隔投與不同劑型，例如，經口及非經腸式，投與分開之組成物，或由分開之組成物彼此調整劑量。為了促進適應性，本發明套組通常包含投藥說明書。
6.化合物篩選/分析法
本發明化合物抑制HPK1之激酶活性，該激酶活性可直接採用許多種生化分析法分析，如實例1中說明之分析法。可依據一個抑制劑濃度範圍來決定任何化合物之IC50值。此外，化合物之抑制效力亦可採用生物分析法評估，以決定化合物對T細胞受到TCR及CD28刺激後之細胞激素分泌之影響。
例如，實例5說明此等功能分析法，用於決定HPK1抑制劑對受到刺激之Pan T細胞之IL-2 & IFN-γ釋放之影響。可採用標準ELISA分析法測定/定量所分泌之IL-2 & IFN-γ。簡言之，採用自商品購得之套組，如：MACS(Miltenyl Biotec)Pan T單離套組(目錄編號130-096-535)，自周邊血液(PB)單核細胞(MNC)、或PBMC單離出pan T細胞。原生人類 pan-T細胞包括CD4與CD8 T細胞及一些γ/δ T細胞子群。pan-T細胞可以使用陰性免疫磁性分離技術單離，不使用管柱。
單離之pan-T細胞依100,000個細胞/孔分配在96孔盤中，使用固定化抗-CD3抗體及可溶性抗-CD28抗體刺激，或使用PMA/離子黴素(Ionomycin)作為陽性對照組(或作為陰性對照組之培養基)。可添加不同濃度之試驗化合物至細胞中，在受到TCR-刺激/CD28共同刺激後，分析化合物對細胞激素分泌之影響。受刺激之細胞再培養2天後，收集各孔之上清液(包含pan-T細胞分泌之細胞激素)，供進行ELISA分析法，及定量IL-2及IFN-γ。
亦可採用其他分析法來分析任何HPK1抑制劑抑制HPK1之能力，或篩選具有HPK1抑制活性之化合物。
例如，在一種分析法中，可採用下文說明之Treg分析法(調節性T-細胞增生分析法)分析對HPK1激酶活性之抑制性。明確言之，採用合適套組，如一種來自Thermo Fisher Scientific(目錄編號11363D)之套組，從人體捐贈之周邊血液單核細胞(PBMC)中單離原生CD4+/CD25- T-細胞及CD4+/CD25+調節性T-細胞。依據供應商提供之程序，在CD4+/CD25- T-細胞上標記CFSE(Thermo Fisher Scientific,C34554)。取標記CFSE之T-細胞及CD4+/CD25+調節性T-細胞依1×106個細胞/mL之濃度再懸浮於RPMI-1640培養基中。取100μL標記CFSE之T-細胞使用或不使用50μL CD4+/CD25+調節性T-細胞混合，使用5μL抗-CD3/CD28珠(Thermo Fisher Scientific,11132D)及於50μL RPMI-1640培養基中稀釋成各種不同濃度之化合物處理。混合之細胞族群培養5天(37℃，5%CO2)，於第5天時，採用BD LSRFortessa X-20，使用FITC通道，分析標記CFSE之 T-細胞之增生。預期該主要化合物抑制HPK1，以加強Treg功能及抑制標記CFSE之原生CD4+/CD25- T-細胞之增生。
另一實例中，可以採用下文說明之p-SLP-76 S376 HTRF分析法(Cisbio)分析對HPK1激酶活性之抑制性。此基於HTRF細胞之分析法可以快速定量檢測藉由HPK1之SLP-76在絲胺酸376之磷酸化。磷-SLP-76成為一個可在上面建立關鍵性訊號傳導複合物的骨架，並作為T-淋巴細胞活化作用之標記物。根據製造商，磷-SLP-76(Ser376)分析法使用兩種標記抗體：一種使用供體螢光團，另一種使用接受體。第一種抗體特異性針對SLP-76上磷酸化S376基序之結合，及第二種係針對其辨識不依賴其磷酸化狀態之SLP-76之能力。蛋白質磷酸化可以形成涉及兩種標記抗體之免疫-複合物，並將供體螢光團帶到緊鄰接受體之附近，藉以產生FRET訊號。其強度與樣本中所含磷酸化蛋白質濃度成正相關性，並提供一種在免洗分析模式(no-wash assay format)下分析蛋白質磷酸化狀態的方式。
簡言之，收集Jurkat細胞(於含10%FBS之RPMI1640培養基中培養)及離心後，再依3×106個細胞/mL懸浮於適當培養基中。然後取Jurkat細胞(35μL)分配至384孔盤之各孔中。使用細胞培養基，依40倍稀釋度稀釋試驗化合物(添加39μL細胞培養基至1μL化合物中)。使用各種不同濃度之試驗化合物(添加5mL稀釋化合物至35μL Jurkat細胞中，從3μM開始稀釋1：3)處理多孔盤中之Jurkat細胞，於37℃及5%CO2進行1小時，然後使用抗-CD3(5μg/ml，OKT3純系)處理30min，以激活TCR及HPK1。使用4×溶胞緩衝劑(LB)製備1：25稀釋度之100×阻斷試劑(來自p-SLP76 ser376HTRF套組)，及取15μL含阻斷試劑之4×LB 緩衝劑加至各孔中，及於室溫，在溫和振盪下培養45mins。取溶胞液(16μL)加至Greiner白色盤中，使用p-SLP76 Ser376 HTRF試劑(2μL供體，2μL接受體)處理，及於4℃培養一夜。次日，在PHERAstar分析盤判讀儀上測定均相時差性螢光(HTRF)。採用GraphPad Prism 5.0軟體，由抑制百分比代入相對於抑制劑濃度之曲線，決定IC50。
上述任何分析法均可放大規模或放大高通量篩選(HTS)。可採用上述任何分析決定主要化合物之IC50。
7.醫藥組成物
本發明提供一種醫藥組成物，其包含本文所說明任一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，及一種或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
「醫藥上可接受之賦形劑」及「醫藥上可接受之載劑」係指協助調配及/或投與活性劑給個體及/或被個體吸收之物質，並可包括在本發明組成物中，不會對個體引起顯著之不良毒性副作用。醫藥上可接受之載劑及賦形劑之非限制實例包括水、NaCl、生理食鹽水溶液、乳酸化林格氏(Ringer’s)溶液、生理蔗糖溶液、生理葡萄糖溶液、結合劑、填料、崩解劑、潤滑劑、包衣劑、甜味劑、調味劑、鹽溶液(如林格氏溶液)、醇類、油類、明膠、碳水化合物(如乳糖、直鏈澱粉或澱粉)、脂肪酸酯類、羥基甲基纖維素、聚乙烯吡咯啶、與著色劑及類似物。此等製劑可經過殺菌，若需要時，再與不與本文所提供化合物之活性有不良反應或干擾性之輔劑混合，如潤滑劑、防腐劑、安定劑、濕化劑、乳化劑、影響滲透壓之鹽類、緩衝劑、著色劑及/或芳香物質及類似物。習此相關技藝者咸了解其他適合本發明化合物使用之醫藥載劑及賦形劑。
此等組成物可視需要再進一步包含一或多種額外醫療劑。或者，本發明化合物可以對有需要之患者組合投與一或多種其他醫療性療程(例如，Gleevec或其他激酶抑制劑、干擾素、骨髓移植、法呢基(farnesyl)轉移酶抑制劑、雙膦酸鹽類、沙利竇邁(thalidomide)、癌症疫苗、激素療法、抗體、放射線等等)。例如，用於與本發明化合物共同投藥或包含在醫藥組成物中之額外醫療劑可能為另一種或多種抗癌劑。
如本文所說明，本發明組成物包含本發明化合物及醫藥上可接受之載劑，如本文中所使用，其包括適合所需特定劑型之任何及所有溶劑、稀釋劑、或其他媒劑、勻散劑或懸浮助劑、界面活性劑、等滲劑、增稠劑或乳化劑、防腐劑、固體結合劑、潤滑劑及類似物。Remington’s Pharmaceutical Sciences，第十五版，E.W.Martin(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1975)揭示用於調配醫藥組成物之各種不同載劑及其製法之已知技術。除非任何習知載劑介質無法與本發明化合物相容，如會產生任何不期望之生物效應或會依有害方式與醫藥組成物中任何其他組份(群)交互作用，否則其等用法均計畫涵括在本發明範圍內。有些可作為醫藥上可接受之載劑之材料實例包括(但不限於)：糖類(如乳糖、葡萄糖及蔗糖)；澱粉(如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉)；纖維素及其引衍生物(如羧基甲基纖維素鈉、乙基纖維素及纖維素乙酸酯)；黃蓍膠粉末；麥芽；明膠；滑石；賦形劑(如可可奶油及栓劑蠟)；油類，如花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇類，如丙二醇；酯類，如油酸乙酯及月桂酸乙酯；洋菜；緩衝劑，如氫氧化鎂及氫氧化鋁；藻酸；無熱原水；等滲性生理食鹽水；林格氏溶液；乙醇，及磷酸鹽緩衝溶液，以及其他無毒之相容性潤 滑劑，如月桂基硫酸鈉及硬脂酸鎂，以及著色劑、釋離劑、包衣劑、甜味劑、調味劑及香料劑、防腐劑及抗氧化劑亦可含在組成物中。
8.調配物
本發明亦包括一類別組成物，其包含本發明活性化合物與一或多種醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或佐劑(本文中統稱為「載劑」材料)，及若需要時，與其他活性成份組合。
某些具體例中，本發明提供一種治療癌症，特定言之本文所說明癌症之醫藥調配物，其包含本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽，及醫藥上可接受之載劑。
某些具體例中，本發明提供一種治療選自下列各物所組成群中之癌症之醫藥調配物：乳癌、結腸直腸癌、肺癌、卵巢癌、及胰臟，其包含本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽，與醫藥上可接受之載劑。
本發明化合物可採用任何合適途徑投藥，較佳係呈配合此等途徑之醫藥組成物型式及可有效治療之劑量投藥。本發明化合物及組成物例如，可以經口、黏膜、局部表面、直腸、肺(如吸入式噴霧)或非經腸式(包括經血管、靜脈內、腹膜內、皮下、肌內、穿皮、眼框內、鞘內、腦室內、腫瘤內、鼻內、顱內、植入、吸入、及採用輸注技術，呈包含醫藥上可接受之載劑、佐劑、及媒劑之劑量單位調配物投藥。
典型地，醫藥組成物為錠劑或明膠膠囊，其包含活性成份及a)稀釋劑，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素及/或甘胺酸；b)潤滑劑，例如，矽石、滑石、硬脂酸、其鎂或鈣鹽、及/或聚乙二醇；用於錠劑之c)結合劑，例如，矽酸鎂鋁、澱粉糊、明膠、黃蓍膠、 甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈉、及/或聚乙烯吡咯啶酮；若需要時使用d)崩解劑，例如，澱粉、糖、藻酸或其鈉鹽，或發泡混合物；及/或e)吸附劑、著色劑、調味劑、及甜味劑。錠劑可依據相關技藝已知之技術進一步包覆膜衣或腸溶性包衣。
適合經口投藥之組成物包括有效量之本發明化合物，呈錠劑、含錠、水性或油性懸浮液、勻散性粉劑或粒劑、乳液、硬性或軟性膠囊、或糖漿或酏劑之型式。計畫口服用之組成物係依據相關技藝已知製造醫藥組成物之任何方法製備，且此等組成物可包含一或多種選自下列各物所組成群中之製劑：甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑，以產生醫藥上美觀且適口之製劑。錠劑可包含活性成份與適合製造錠劑之無毒之醫藥上可接受之賦形劑混合。此等賦形劑為例如，惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒及崩解劑，例如，玉米澱粉、或藻酸；結合劑，例如，澱粉、明膠或金合歡膠；及潤滑劑，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑可以無包衣，或可採用已知技術包覆包衣，以便在胃腸道中延緩崩解及吸收，藉以長期提供持續作用。可使用例如，緩釋性材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服用調配物可呈硬式明膠膠囊，其中活性成份與惰性固體稀釋劑(例如，碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合，或呈軟式明膠膠囊，其中活性成份與水或油介質(例如，花生油、液態石蠟或橄欖油)混合。
某些注射組成物為水性等滲性溶液或懸浮液，及栓劑宜由脂肪乳液或懸浮液製備。該等組成物可經過殺菌及/或包含佐劑，如防腐劑、安定劑、濕化劑或乳化劑、促進溶解劑、調整滲透壓之鹽類、及/或緩衝劑。此外，其等亦可包含其他具有醫療價值之物質。該組成物係分別依據常用之混合、造粒、或包覆方法製備，且包含約0.1-75%或包含約1-50%之活 性成份。適合穿皮式施用之組成物包括有效量之本發明化合物及合適載劑。適合穿皮遞送之載劑包括可吸收之醫藥上可接受之溶劑，以促進通過宿主皮膚。例如，穿皮式裝置係呈繃帶形式，其包含背襯元件、含有化合物及視需要選用之載劑之儲積槽、視需要選用之速率控制障壁，以便依控制且預定之速率長期遞送化合物給宿主皮膚，及包含可固定該裝置在皮膚上之方式。
適合局部施用(例如，投藥至皮膚及眼睛)之組成物包括水性溶液、懸浮液、油膏、乳霜、凝膠、或噴灑調配物，例如，採用氣溶膠遞送或類似物。此等局部遞送系統特別適合皮膚施用，例如，供治療皮膚癌症，例如，用在防曬乳、洗液、噴霧及類似物中之預防性用法。因此其等特別適用於局部，包括相關技藝習知之美容調配物。此等可包含溶解劑、安定劑、張力加強劑、緩衝劑及防腐劑。
本文所採用局部施用法亦有關吸入或鼻內施用法。其等適宜呈乾粉形式(單獨、呈混合物，例如，與乳糖之乾式摻合物，或與例如，磷脂形成混合組份粒子)，從乾粉吸藥器遞送，或從加壓容器、幫浦、噴瓶、霧化器或氣霧器，使用或不使用合適推進劑下呈氣溶膠噴霧遞送。
本發明進一步提供包含本發明化合物作為活性成份之無水醫藥組成物及劑型，因為水可能促使某些化合物降解。
本發明無水醫藥組成物及劑型可使用無水或低水份含量之成份，及在低水份及低濕度條件下製備。可以製備及儲存無水醫藥組成物，以保持其無水性質。因此，無水組成物係使用已知可阻止曝露到水份之材料包裝，以便其等可容納在合適之調配套組內。合適包裝實例包括(但不限於)：氣密式箔包、塑膠、單位劑量容器(例如，小瓶)、泡殼包、及長條包。
本發明進一步提供一種醫藥組成物及劑型，其包含一或多種可以降低作為活性成份之本發明化合物之降解速率之製劑。此等製劑在本文中稱為「安定劑」，包括(但不限於)抗氧化劑，如抗壞血酸、pH緩衝劑、或鹽緩衝劑等等。
本發明醫藥活性化合物可依據製藥上習知之方法製成投與患者(包括人類及其他哺乳動物)之藥劑。
使用根據本發明化合物及/或組成物治療疾病病症之化合物投藥量及劑量療程係依各種不同因素而定，包括個體之年齡、體重、性別及醫學病症、疾病型態、疾病嚴重性、投藥途徑與頻率、及所採用之特定化合物。因此，劑量療程可能有很大變化，但照例由標準方法決定。如前述，日劑量可以投藥一次或可分成2、3、4或更多次投藥。
基於醫療目的，本發明活性化合物通常與適合指定投藥途徑之一或多種佐劑、賦形劑或載劑組合。若經口投藥時，化合物可與乳糖、蔗糖、澱粉粉末、烷酸類之纖維素酯類、纖維素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸或硫酸之鈉鹽及鈣鹽、明膠、金合歡膠、藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、及/或聚乙烯醇混合，及接著壓錠或囊封，以方便投藥。此等膠囊或錠劑可包含控制釋放之調配物，因為可以讓活性化合物勻散在羥基丙基甲基纖維素中。
以皮膚狀況為例，其較佳係在患部施加局部用之本發明化合物製劑，一天2至4次。適合局部投藥之調配物包括適合滲透皮膚之液體或半液體製劑(例如，擦劑、洗液、油膏、乳霜、或糊劑)，及適合投藥至眼睛、耳朵或鼻之滴劑。供局部投藥之活性成份可佔調配物之0.001%至10%w/w，例如，1%至2%重量比，但其可能佔調配物高達10%w/w，但較佳不超過5%w/w，及更佳為0.1%至1%。
本發明化合物亦可採用穿皮式裝置投藥。較佳係利用貼布達成穿皮式投藥，貼布係呈儲積槽與多孔膜型或呈固體基質變化型。這兩例之活性劑均從儲積槽或微膠囊透過膜連續遞送至與接受者之皮膚或黏膜接觸之活性劑通透性膠黏劑中。若透過皮膚吸收活性劑，則以控制且預定之流速投與活性劑給接受者。以微膠囊為例，囊封劑亦具有作為膜之功能。本發明乳液之油相可由已知成份，依已知方式構成。
雖然該相可僅包含乳化劑，但其可能包含至少一種乳化劑與脂肪或油或脂肪與油二者之混合物。較佳地，包括親水性乳化劑與親脂性乳化劑共同作為安定劑。亦較佳係同時包括油與脂肪。總言之，乳化劑(群)使用或不使用安定劑(群)構成所謂的乳化蠟，及該蠟連同油與脂肪共同構成所謂的乳化油膏基質，形成乳霜調配物之油勻散相。適用於本發明調配物之本發明乳化劑及乳液安定劑包括Tween 60、Span 80、鯨蠟硬脂醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸鈉、二硬脂酸甘油酯單獨或併用蠟，或相關技藝上習知之其他材料。
依據要所需達成之美粧性質，來選擇適合調配物之油類或脂肪，因為活性化合物在可能用於醫藥乳液調配物中之大多數油類中之溶解度極低。因此，乳霜較佳應為不油膩、不沾黏及可以洗除之產品，具有合適之堅實度，以避免從管子或其他容器中滲漏。可使用直鏈或分支鏈之單鹼價-或二鹼價烷基酯如二-異己二酸酯、硬脂酸異鯨蠟基酯、椰子脂肪酸之丙二醇酯、肉豆蔻酸異丙基酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙基酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己基酯或分支鏈酯之混合物。此等可以依所需性質單獨使用或組合使用。
或者，可使用高熔點脂質，如白色軟石蠟及/或液態石蠟或其他礦物油。
適合局部表面投藥至眼睛之調配物亦包括滴眼液，其中活性成份已溶解或懸浮於合適載劑中，尤指活性成份之水性溶劑。
活性成份於此等調配物中之較佳濃度為0.5至20%，宜在0.5至10%，特別指約1.5%w/w。
供非經腸式投藥之調配物可呈水性或非水性等滲無菌注射溶液或懸浮液型式。此等溶液及懸浮液可由無菌粉劑或粒劑，使用一或多種上述用於調配經口投藥之載劑或稀釋劑製備，或使用其他合適勻散劑或濕化劑及懸浮劑製備。化合物可以溶於水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化鈉、黃蓍膠、及/或各種不同緩衝劑中。其他佐劑及投藥模式係醫藥技藝廣泛已知者。活性成份亦可使用合適載劑(包括生理食鹽水、右旋糖、或水，或使用環糊精(亦即Captisol)、共溶劑溶解法(亦即丙二醇)或膠束溶解法(亦即Tween 80))形成組成物，供注射投藥。
無菌注射劑亦可為含於無毒之非經腸式可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌注射溶液或懸浮液，例如，呈1,3-丁二醇之溶液。可使用之可接受之媒劑及溶劑為水、林格氏溶液、及等滲性氯化鈉溶液。此外，經常使用無菌之非揮發性油類作為溶劑或懸浮介質。基於此目的可以採用任何溫和非揮發性油類，包括合成性單酸-或二酸甘油酯。此外，脂肪酸(如油酸)可用在注射製劑中。
供肺部投藥之醫藥組成物可呈氣溶膠型式投藥或使用包含乾粉氣溶膠之吸藥器投藥。
供直腸投與藥物之栓劑製法為混合藥物與合適之無刺激性賦形劑如可可奶油及聚乙二醇，其等在常溫呈固體，但在直腸溫度即呈液態，因此將會在直腸中熔化及釋放藥物。
醫藥組成物可經過一般醫藥操作法，如殺菌，且/或包含常用之佐劑，如防腐劑、安定劑、濕化劑、乳化劑、緩衝劑等等。錠劑與丸劑可以另外使用腸溶性包衣製備。此等組成物亦可包含佐劑，如濕化劑、甜味劑、調味劑、及香料劑。本發明醫藥組成物包含本文所說明化學式之化合物。或其醫藥上可接受之鹽；選自下列之額外製劑：激酶抑制劑(小分子、多肽、抗體等等)、免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、消炎劑、抗真菌劑、抗生素、或抗血管過度增生之化合物；及任何醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒劑。
另一種本發明組成物包含本文所說明化學式之化合物。或其醫藥上可接受之鹽；及醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒劑。此等組成物可視需要包含一或多種額外醫療劑，包括例如，激酶抑制劑(小分子、多肽、抗體等等)、免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、消炎劑、抗真菌劑、抗生素、或抗血管過度增生之化合物。
術語「醫藥上可接受之載劑或佐劑」係指可本與本發明化合物共同投與患者之載劑或佐劑，及當投與足以遞送醫療量之化合物時，不會破壞其藥理活性，且無毒。本發明醫藥組成物可使用之醫藥上可接受之載劑、佐劑及媒劑包括(但不限於)離子交換劑、礬土、硬脂酸鋁、卵磷脂、自行乳化藥物遞送系統(self emulsifying drug delivery systems)(SEDDS)(如d-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸鹽)、用於醫藥劑型之界面活性劑(如Tweens或其他類似之聚合遞送母質)、血清蛋白質(如人類血清白蛋白)、緩 衝物質(如磷酸鹽)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物性脂肪酸之部份甘油酯混合物、水、鹽類或電解質(如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽類、膠體矽石、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯啶酮、基於纖維素之物質、聚乙二醇、羧基甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟類、聚乙二醇-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。亦宜使用環糊精，如u-、P-、及y-環糊精，或其化學修飾衍生物，如羥基烷基環糊精，包括2-及3-羥基丙基-環糊精，或其他可溶性衍生物，以加強遞送本文所說明化學式之化合物。
醫藥組成物可呈任何口服可接受之劑型經口投藥，包括(但不限於)膠囊、錠劑、乳液及水性懸浮液、勻散液及溶液。以口服用錠劑為例，常用之載劑包括乳糖及玉米澱粉。通常亦添加潤滑劑，如硬脂酸鎂。呈膠囊型式經口投藥時，適用之稀釋劑包括乳糖及乾燥玉米澱粉。當經口投與水性懸浮液及/或乳液時，活性成份可以懸浮或溶解於油相中，與乳化劑及/或懸浮劑組合。
若需要時，可添加某些甜味劑、調味劑及/或著色劑。醫藥組成物可包括利用脂質體或微囊封技術之調配物。其各種不同實例係相關技藝已知者。
醫藥組成物可利用鼻氣溶膠或吸入法投藥。此等組成物係依據醫藥調配物技藝習知之技術製備，並可於生理食鹽水中，使用苯甲醇或其他合適防腐劑、加強生體可用率之促進吸收劑，氟碳化物、及/或其他溶解劑或勻散劑製成溶液，其實例亦係相關技藝習知者。
9.治療套組
本發明一項態樣係有關一種方便且有效進行根據本發明方法及用途之套組。通常，醫藥包裝物或套組包含一個或多個容器，內部填 充本發明醫藥組成物之一或多種成份。此等套組尤其適於遞送口服用固體劑型，如錠劑或膠囊。此等套組較佳包括許多單位劑量，且亦可包括一張卡片，讓劑量依其計畫使用順序排列。若需要時，可提供幫助記憶的方式，例如，以數字、字母、或其他標記或插入日曆，依治療計畫標示投與劑量之日期。可視需要在此等容器加上由管理醫藥產品之製造、用法或販售的政府機關規定的說明書形式，該說明書反映該機關已核准供人類投藥之製造、用法或販售。
下列代表性實例包含在各種不同具體例及其等效物上配合操作本發明之重要的額外資訊、範例及指南。此等實例希望協助說明本發明，並無意且不應構成限制本發明。的確，除了彼等本文所示及說明者外，彼等習此相關技藝者在審查本案時，即可了解本發明各種不同修飾及其許多其他具體例，包括下列實例及本文所摘錄科學與專利文獻之參考文獻。
所摘錄參考文獻之內容已以引用之方式併入本文，以助於說明相關技藝。
此外，針對本發明目的，化學元素係依據CAS版之Handbook of Chemistry and Physics，第75版內頁的元素週期表說明。此外，一般有機化學原理及特定官能基部份體及反應性均說明於「Organic Chemistry」,Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito：1999，及「Organic Chemistry,」Morrison & Boyd(第3版)，此二者之完整內容已以引用之方式併入本文。
10.合成反應方案
本發明化合物可由習此相關技藝者依據相關技藝認可之技術及製程製備。更明確言之，本發明化合物可依下文所示反應方案、方法及實例製備。習此相關技藝者咸了解，下列反應方案的個別步驟均可以變 化，產生本發明化合物。試劑及起始物很容易由習此相關技藝者取得。除非另有明確說明，否則所有取代基均如前述定義。
實例
下列為說明書中所採用之縮寫及其等之定義：
EtOAc：乙酸乙酯
DCM：二氯甲烷
ACN：乙腈
THF：四氫呋喃
DMSO：二甲亞碸
MeOH：甲醇
EtOH：乙醇
DMF：N,N-二甲基甲醯胺
DMA：N,N-二甲基乙醯胺
DMF DMA：N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛
NCS：N-氯琥珀醯亞胺
NBS：N-溴琥珀醯亞胺
NIS：N-碘琥珀醯亞胺
Pd-C：碳載鈀
LDA：二異丙基胺化鋰
TFA：三氟乙酸
PTSA：對甲苯磺酸
DIBAL-H：二異丁基鋁氫化物
LAH：氫化鋰鋁
Py：吡啶
DPPA：二苯基磷醯基疊氮化物
CDI：1,1-羰基二咪唑
TEA：三乙基胺
DIPEA：N,N-異丙基乙基胺
DMAP：4-(二甲基胺基)吡啶
EDCI：N-(3-二甲基胺基丙基)-N-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽
HATU：(1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽
HOBT：1-羥基苯并三唑
TfOH：三氟甲烷磺酸
dppf：1,1-二茂絡鐵二基-雙(二苯基膦)
DAST：(二乙基胺基)硫三氟化物
Pd2(dba)3：參(二亞苯甲基丙酮)二鈀(0)
Boc：第三丁氧基羰基
Ac：乙醯基
TMSI：三甲基矽烷基碘化物
TBAI：四丁基銨碘化物
PPh3：三苯基膦
dba：二亞苯甲基丙酮
BINAP：2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯萘
MsCl：甲烷磺醯氯
TsCl：甲苯磺醯氯
DMAP：4-二甲基胺基吡啶
LiHMDS：雙(三甲基矽基)胺化鋰
NaHMDS：雙(三甲基矽基)胺化鈉
DMS：二甲基硫醚
DME：二甲氧基乙烷
DCE：二氯乙烷
NMR：核磁共振
LC-MS：液相層析法-質譜
ESI-MS：電噴灑電離化-質譜
GCMS：氣相層析法-質譜
TLC：薄層層析法
TCR：T細胞受體
BCR：B細胞受體
CARD：凋亡蛋白酶(caspase)活化及募集功能域
mM：毫莫耳濃度
μM：微莫耳濃度
mL：毫升
ng：奈克
nM：奈莫耳濃度
nm：奈米
IC50：一半最大抑制濃度
OD：光密度
A.生物實例
生物實例1 HPK1生化分析法
本實例使用ADP-GLOTM激酶分析法量測有潛力的HPK1抑制劑化合物對HPK1激酶活性之影響。
ADP-GLOTM激酶分析法(Promega Corp.,Madison,WI)量測激酶反應所形成之ADP。依據製造商，激酶分析法中形成之ADP首先轉化成ATP，其接著用於在螢光素酶反應中產生光。發光度與激酶活性具相關性。下文說明例示性實驗設定，但個別分析法中可能有些微調整。
材料與儀器
1.試劑：
Figure 109122604-A0202-12-0114-686
2.儀器&供應商：
Figure 109122604-A0202-12-0115-687
3.盤設定
化合物從10μM(最高濃度)連續稀釋3倍至0.508nM(最低濃度)。陽性對照組為10μM參考物+酵素+受質。陰性對照組為1%DMSO+酵素+受質。
4.製程
1.緩衝劑製備
40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT
緩衝劑儲液
Figure 109122604-A0202-12-0115-688
Figure 109122604-A0202-12-0116-689
添加20mL 1M Tris及10mL 1M MgCl2至470mL ddH2O中，得到緩衝劑儲液，儲存於室溫。
2.製備新鮮1*分析緩衝劑
Figure 109122604-A0202-12-0116-690
3.化合物製備
1)取10μL 10mM各化合物儲液，與90μL DMSO混合，稀釋化合物至1mM。
2)接著使用BRAVO稀釋化合物3倍製成10種劑量(從5μL稀釋至10μL)。最高化合物濃度為1mM(100×)，DMSO濃度為100%。
3)利用ECHO，取100nL各稀釋化合物樣本移至384孔盤(Corning-4512)
4)分析盤於1,500rpm離心1分鐘。
4.製備2×ATP-MBP混合物：20μM ATP，0.2μg/μL MBP含於激酶緩衝劑(最終濃度：10μM ATP，0.1μg/μL MBP)
Figure 109122604-A0202-12-0117-691
5.使用分析緩衝劑製備2×HPK1操作溶液HPK1最終濃度為0.6ng/μL。高效力之化合物則使用較低濃度之HPK1(0.26ng/μL-0.065ng/μL)。
6.添加5μL/孔之2×HPK1操作溶液，於1,500rpm離心1分鐘。
7.添加5μL/孔之2×ATP-受質，於1,500rpm離心1分鐘。
8.於25℃培養1小時(或針對高效力化合物則為6小時)。
9.添加5μL/孔ADP-GLOTM試劑中止激酶反應，並在1小時後消耗未用完的ATP。於1,500rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
10.添加10μL激酶檢測試劑，使ADP轉化成ATP。於1,500rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
11.於Envision判讀儀(384-CTG)記錄發光訊號。
5.數據分析
依據及相對於包含在各分析盤內之高對照組與低對照組中之訊號，計算各化合物濃度之抑制百分比(%)。高對照組孔作為0%抑制性，及未包含任何化合物但僅包含DMSO(最終濃度=0.5%)之低對照組孔則作為100%抑制性。以試驗化合物之濃度及抑制性%數值作圖，並採用三參數對數劑量反應公式決定達50%抑制性時所需之化合物濃度(IC50)。評估各 實驗中參考物肽/化合物之終點值(IC50)，作為品質控制量測值。若終點值在期望值的3倍數內，則該實驗視為可以接受。
生物實例2 PKC-θ生化分析法
本實例採用ADP-GLOTM激酶分析法量測有潛力的HPK1抑制劑化合物對PKC-θ激酶活性之影響。下文說明例示性實驗設定，但個別分析法中可能有些微調整。
材料與儀器
1.試劑：
Figure 109122604-A0202-12-0118-692
2.儀器&供應商：
Figure 109122604-A0202-12-0119-694
3.盤設定
化合物從10μM(最高濃度)連續稀釋3倍至0.508nM(最低濃度)。陽性對照組為10μM參考物+酵素+受質。陰性對照組為1%DMSO+酵素+受質。
4.製程
1.緩衝劑製備
40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT
緩衝劑儲液
Figure 109122604-A0202-12-0119-693
Figure 109122604-A0202-12-0120-695
添加20mL 1M Tris及10mL 1M MgCl2至470mL ddH2O中，得到緩衝劑儲液，及存放在室溫。
2.製備新鮮1*分析緩衝劑
Figure 109122604-A0202-12-0120-696
3.化合物製備
1)取10μL 10mM各化合物儲液，與90μL DMSO混合，稀釋化合物至1mM。
2)接著使用BRAVO稀釋化合物3倍製成10種劑量(從5μL稀釋至10μL)。最高化合物濃度為1mM(100×)，DMSO濃度為100%。
3)利用ECHO，取50nL各稀釋化合物樣本移至384孔盤(Corning-4512)。
4)分析盤於於1,500rpm離心1分鐘。
4.於激酶緩衝劑中製備2×酵素操作溶液：
Figure 109122604-A0202-12-0121-697
5.製備2×ATP-次混合物：
Figure 109122604-A0202-12-0121-698
6.添加2.5μL/孔之2×酵素操作溶液，於1,500rpm離心1分鐘。
7.添加2.5μL/孔之2×ATP-受質，於1,500rpm離心1分鐘。
8.於25℃培養60min。
9.添加5μL/孔之ADP-GLOTM試劑中止激酶反應，並在1小時後消耗未用完的ATP。於1,500rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
10.添加10μL激酶檢測試劑，使ADP轉化成ATP。於1,500rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
11.於Envision判讀儀(384-USL)記錄發光訊號。
5.數據分析
依據及相對於包含在各分析盤內之高對照組與低對照組中之訊號，計算各化合物濃度之抑制百分比(%)。高對照組孔作為0%抑制性，及未包含任何化合物但僅包含DMSO(最終濃度=0.5%)之低對照組孔則作 為100%抑制性。以試驗化合物之濃度與抑制%數值作圖，並採用三參數對數劑量反應公式決定達50%抑制性時所需之化合物濃度(IC50)。評估各實驗中參考物肽/化合物之終點值(IC50)，作為品質控制量測值。若終點值在期望值的3倍數內，則該實驗視為可以接受。
生物實例3 TBK1生化分析法
本實例採用ADP-GLOTM激酶分析法量測有潛力的HPK1抑制劑化合物對TBK1激酶活性之影響，下文說明例示性實驗設定，但個別分析法中可能有些微調整。
材料與儀器
1.試劑：
Figure 109122604-A0202-12-0122-699
2.儀器&供應商：
Figure 109122604-A0202-12-0123-700
3.盤設定
參見上文。
4.製程
1.緩衝劑製備
40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT
緩衝劑儲液
Figure 109122604-A0202-12-0123-701
Figure 109122604-A0202-12-0123-702
添加20mL 1M Tris及10mL 1M MgCl2至470mL ddH2O中，得到緩衝劑儲液，及存放在RT(室溫)。
2.製備新鮮1*分析緩衝劑
Figure 109122604-A0202-12-0124-703
3.化合物製備
1)取10μL 10mM各化合物儲液與90μL DMSO混合，稀釋化合物至1mM。
2)接著使用BRAVO稀釋化合物3倍製成10種劑量(從5μL稀釋至10μL)。最高化合物濃度為1mM(100×)，DMSO濃度為100%。
3)利用ECHO取50nL各稀釋化合物樣本移至384孔盤(Corning-4512)。
4)分析盤於1,500rpm離心1分鐘。
4.於激酶緩衝劑中製備2×酵素操作溶液：
Figure 109122604-A0202-12-0124-704
5.製備2×ATP-次混合物：
Figure 109122604-A0202-12-0125-705
6.添加2.5μL/孔之2×酵素操作溶液，於1,500rpm離心1分鐘。
7.添加2.5μL/孔之2×ATP-受質，於1,500rpm離心1分鐘。
8.於25℃培養60min。
9.添加5μL/孔之ADP-GLOTM試劑中止激酶反應，並在1小時後消耗未用完的ATP。於1,500rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
10.添加10μL激酶檢測試劑，使ADP轉化成ATP。於1,500rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
11.於Envision判讀儀(384-USL)記錄發光訊號。
5.數據分析
依據及相對於包含在各分析盤內之高對照組與低對照組中 之訊號，計算各化合物濃度之抑制百分比(%)。高對照組孔作為0%抑制性，及未包含任何化合物但僅包含DMSO(最終濃度=0.5%)之低對照組孔則作為100%抑制性。以試驗化合物之濃度與抑制%數值作圖，並採用三參數對數劑量反應公式決定達50%抑制性時所需之化合物濃度(IC50)。評估各實驗中參考物肽/化合物之終點值(IC50)，作為品質控制量測值。若終點值在期望值的3倍數內，則該實驗視為可以接受。
生物實例4 JAK3生化分析法
本實例採用ADP-GLOTM激酶分析法量測有潛力的HPK1抑制劑化合物對JAK3激酶活性之影響。下文說明例示性實驗設定，但個別分析法中可能有些微調整。
材料與儀器
1.試劑：
Figure 109122604-A0202-12-0126-706
2.儀器&供應商：
Figure 109122604-A0202-12-0127-708
3.製程
1.製備JAK3激酶緩衝劑
新鮮添加DTT及BSA至緩衝劑中(最終濃度：40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT)。
Figure 109122604-A0202-12-0127-707
2.化合物製備
試驗化合物：取5μL 10mM化合物儲液至45μL DMSO中混合，稀釋化合物至1mM。化合物溶液接著連續稀釋3倍製成10種劑量。最高化合物濃度為1mM(100×)，DMSO濃度為100%。
利用ECHO，從10種劑量之稀釋化合物各取50nL加至384孔分析盤(Corning #4512)中。
陽性對照組：利用ECHO，取50nL 1mM參考物化合物加至384孔分析盤(Corning #4512)。
陰性對照組：取50nL DMSO移至384-孔分析盤中，作為陰性對照組。
分析盤於1,500rpm離心1分鐘。
3.依據下列程序，利用ECHO轉移化合物：
參考化合物與試驗化合物1-15：從10μM連續稀釋3倍至0.508nM(10種劑量)；陰性對照組為0.78ng JAK3、4μM ATP & 0.2μg/μL poly、1%DMSO；陽性對照組為最高劑量之參考物化合物、0.78ng JAK3、0.2μg/μL Poly(E4Y1)、4μMATP、1%DMSO。
4.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2× JAK3操作溶液，於1,500rpm離心1分鐘。
5.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2× ATP-Poly(E4Y1)操作混合物，於1,500rpm離心1分鐘。
6.分析盤於25℃培養60min。
7.利用BRAVO添加5μL/孔之ADP-GLOTM試劑中止激酶反應，並在1小時後消耗未用完的ATP。於1,500rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
8.利用BRAVO添加10μL激酶檢測試劑，使ADP轉化成ATP。於1,500rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
9.於Envision判讀儀(384-USL)記錄發光訊號。
10.使用XL-fit處理數據。抑制性%=[1-(試驗孔-陰性對照組)/(陽性對照組-陰性對照組)]*100%。
5.數據分析
依據及相對於包含在各分析盤內之陰性對照組與陽性對照組中之訊號，計算各化合物濃度之抑制百分比(%)。陰性對照組孔作為0%抑制性，及陽性對照組孔則作為100%抑制性。以試驗化合物之濃度與抑制%數值作圖，並採用三參數對數劑量反應公式決定達50%抑制性時所需之化合物濃度(IC50)。評估各實驗中參考物肽/化合物之終點值(IC50)，作為品質控制量測值。若終點值在期望值的3倍數內，則該實驗視為可以接受。
生物實例5 ZAP70生化分析法
本實例採用ADP-GLOTM激酶分析法量測有潛力的HPK1抑制劑化合物對ZAP70激酶活性之影響。下文說明例示性實驗設定，但個別分析法中可能有些微調整。
材料及儀器
1.試劑：
Figure 109122604-A0202-12-0130-709
2.儀器&供應商：
Figure 109122604-A0202-12-0131-710
3.製程
1.ZAP70激酶緩衝劑製備：
新鮮添加DTT及BSA至緩衝劑中(最終濃度：40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT，2mM MnCl2)。
Figure 109122604-A0202-12-0132-711
2.化合物製備：
試驗化合物：取5μL 10mM化合物儲液至45μL DMSO中混合，稀釋化合物至1mM。化合物溶液接著稀釋3倍製成10種劑量。最高化合物濃度為1mM(100×)，DMSO濃度為100%。
利用ECHO，取50nL化合物溶液移至384孔分析盤(Corning #4512)中。
陽性對照組：利用ECHO，取50nL 1mM星孢菌素(staurosporine)移至384孔分析盤中作為陽性對照組。
陰性對照組：取50nL DMSO移至384孔分析盤中，作為陰性對照組。分析盤於1,500rpm離心1分鐘
3.依據下列程序，利用ECHO轉移化合物：
星孢菌素與試驗化合物1-15：從10μM連續稀釋3倍至0.508nM(10種劑量)；陰性對照組為6.25ng ZAP70、10μM ATP & 0.4μg/μL poly、1%DMSO；陽性對照組為10μM星孢菌素、6.25ng ZAP70、10μM ATP & 0.4μg/μL poly、1%DMSO。
4.製備2×ATP-Poly(E4Y1)混合物：20μM ATP、0.8μg/μL poly(E4Y1)含於激酶緩衝劑(最終濃度：10μM ATP、0.4μg/μL poly(E4Y1)。
5.製備2×ZAP70操作溶液：(2.5ng/μL)含於激酶緩衝劑中(最終濃度為1.25ng/μL)。
6.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2× ZAP70操作溶液，於1,500rpm離心1分鐘。
7.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2× ATP-Poly(E4Y1)操作混合物，於1,500rpm離心1分鐘。
8.分析盤於25℃培養60min。
9.利用BRAVO添加5μL/孔之ADP-GLOTM試劑中止激酶反應，並在1小時後消耗未用完的ATP。於1,500rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
10.利用BRAVO添加10μL激酶檢測試劑，使ADP轉化成ATP。於1,500rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
11.於Envision判讀儀(384-USL)記錄發光訊號。
12.使用XL-fit處理數據。抑制性%=[1-(試驗孔-陰性對照組)/(陽性對照組-陰性對照組)]*100%。
5.數據分析
依據及相對於包含在各分析盤內之陰性對照組與陽性對照組中之訊號，計算各化合物濃度之抑制百分比(%)。陰性對照組孔作為0%抑制性，及陽性對照組孔則作為100%抑制性。以試驗化合物之濃度與抑制%數值作圖，並採用三參數對數劑量反應公式決定達50%抑制性時所需之化合物濃度(IC50)。評估各實驗中參考物肽/化合物之終點值(IC50)，作為品質控制量測值。若終點值在期望值的3倍數內，則該實驗視為可以接受。
生物實例6 LCK生化分析法
本實例採用ADP-GLOTM激酶分析法量測有潛力的HPK1抑制劑化合物對Lck激酶活性之影響。下文說明例示性實驗設定，但個別分析法中可能有些微調整。
材料及儀器
1.試劑：
Figure 109122604-A0202-12-0134-712
2.儀器&供應商：
Figure 109122604-A0202-12-0135-713
3.製程
1.LCK激酶緩衝劑製備：
新鮮添加DTT及BSA至緩衝劑中(最終濃度：40mM Tris pH7.5；20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，50μM DTT，2mM MnCl2)。
Figure 109122604-A0202-12-0136-714
2.化合物製備：
試驗化合物：取5μL10mM化合物儲液於45μL DMSO中混合，先稀釋化合物至1mM。化合物溶液接著連續稀釋3倍製成10種劑量。最高化合物濃度為1mM(100×)，DMSO濃度為100%。
陽性對照組：取3μL之10mM星孢菌素(staurosporine)儲液於97μL DMSO中混合，稀釋成300μM。
採用BRAVO，取50nL化合物溶液及300μM星孢菌素移至384-孔分析盤(Corning #4512)。
陰性對照組：取50nL DMSO移至384-孔分析盤中作為陰性對照組。分析盤於1,500rpm離心1分鐘。
3.依據以下程序，利用ECHO轉移化合物：
星孢菌素與試驗化合物1-15：從10μM連續稀釋3-倍至0.508nM(10種劑量)；陰性對照組為7ng LCK、20μM ATP & 0.4μg/μL poly、1%DMSO；陽性對照組為3μM星孢菌素、7ng LCK、20μM ATP&0.4μg/μL poly、1%DMSO。
4.製備2× ATP-Poly(E4Y1)混合物：40μM ATP、0.8μg/μL poly(E4Y1)含於激酶緩衝劑(最終濃度：20μM ATP、0.4μg/μL poly(E4Y1))。
5.製備2×LCK操作溶液：(2.8ng/μL)含於激酶緩衝劑中(最終濃度為1.4ng/μL)。
6.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2× LCK操作溶液，於1,000rpm離心1分鐘。
7.使用吸管(Thermo，30μL多管型)添加2.5μL/孔之2× ATP-Poly(E4Y1)操作混合物，於1,000rpm離心1分鐘。
8.分析盤於25℃培養60min。
9.利用BRAVO添加5μL/孔之ADP-GLOTM試劑中止激酶反應，並在1小時後消耗未用完的ATP。於1,000rpm離心1分鐘。於25℃培養40min。
10.利用BRAVO添加10μL激酶檢測試劑，使ADP轉化成ATP。於1,000rpm離心1分鐘。於25℃培養30min。
11.於Envision判讀儀(384-USL)記錄發光訊號。
12.採用XL-fit處理數據。抑制性%=(陰性對照組-試驗孔)/(陰性對照組-陽性對照組)×100%。
4.數據分析
依據及相對於包含在各分析盤內之陰性對照組與陽性對照組中之訊號，計算各化合物濃度之抑制百分比(%)。陰性對照組孔作為0%抑制性，及陽性對照組孔則作為100%抑制性。以試驗化合物之濃度與抑制%數值作圖，並採用三參數對數劑量反應公式決定達50%抑制性時所需之化合物濃度(IC50)。評估各實驗中參考物肽/化合物之終點值(IC50)，作為品質控制量測值。若終點值在期望值的3倍數內，則該實驗視為可以接受。
生物實例7 MAP4K3蛋白質激酶分析法
本實例提供量測蛋白質激酶MAP4K3對肽受質之磷酸化之分析法。
簡言之，取MAP4K3、其受質、及輔因子(ATP及Mg2+)於微量分析盤之孔中組合，並於25℃培養5小時。培養結束時，添加含EDTA之緩衝劑中止反應。分開受質與產物，並採用來自Caliper Life Sciences之以微量流體為主之LabChip 3000 Drug Discovery System進行電泳法定量。
針對此分析法，MAP4K3受質為FAM-GAGRLGRDKYKTLRQIRQ-NH2(FAM為羧基螢光素)。肽受質藉由毛細管電泳之純度較佳為>98%。
典型分析設定及條件提供於下文。
1.在384孔盤之孔中添加5μL 2×酵素緩衝劑(或對照物)。
2.添加100nL 100×化合物。若需要時，酵素及化合物可在此時預先培養。
3.添加5μL 2×受質緩衝劑。
4.盤於25℃培養5小時。
5.添加40μL 1.25×中止緩衝劑中止反應。
6.使用下表提供之數值，於Caliper LabChip® 3000 Drug Discovery System作業。
12個吸液晶片之分離條件
Figure 109122604-A0202-12-0139-715
7.架好盤，開始進行電泳，使用藍色雷射(480nm)為激發光及使用綠色CCD(520nm)進行檢測(CCD2)。
依下列反應條件運轉上述分析法：共5小時；於25℃，在20mM 100%抑制劑EDTA之存在下進行。
最終分析反應混合物為：100mM HEPES，pH 7.5；0.1% BSA；0.01%Triton X-100；1mM DTT；5mM MgCl2、10μM正釩酸鈉、10μM β-甘油磷酸酯、20μM ATP；1%DMSO(來自化合物)；0.5μM FAM-GAGRLGRDKYKTLRQIRQ-NH2；0.5nM MAP4K3酵素。
應注意，MAP4K3之比活性隨每批次變化，且酵素濃度可能必需調整，使受質轉化成產物之產率為~10-20%。
使用LabChip 3000毛細管電泳儀器進行電泳法，分離存在於各樣本中之受質及產物肽。當受質及產物肽分離時，觀察到兩個螢光波 峰。以測定之受質與產物波峰之相對螢光強度變化為參數，反映酵素活性。採用HTS WELL Analyzer軟體(Caliper Life Sciences)分析毛細管電泳圖(RDA取得檔案)。由總比值(PSR)：P/(S+P)決定各樣本中之激酶活性，其中P為產物肽之波峰高度，及S為受質肽之波峰高度。
各化合物在各種不同濃度(12種化合物濃度，間隔3×稀釋度)測定酵素活性。收集四次重複之陰性對照組樣本(0%-沒有抑制劑下之抑制性)及陽性對照組樣本(100%-在20mM EDTA存在下之抑制性)，用於計算各化合物在各濃度下之抑制性%數值。
採用下列公式決定抑制性百分比(Pinh)：
Pinh=(PSR0%-PSRinh)/(PSR0%-PSR100%)*100，其中PSRinh為在抑制劑之存在下之總比值，PSR0%為沒有抑制劑時之平均產物總比值，及PSR100%為100%-抑制性對照樣本之平均產物總比值。
採用4參數S型劑量-反應模式，使用XL fit 4軟體(IBDS)，代入抑制曲線(Pinh相對於抑制劑濃度)，決定抑制劑之IC50值。
該分析法中採用之某些材料與緩衝劑列於下表中以供參考。
Figure 109122604-A0202-12-0140-716
Figure 109122604-A0202-12-0141-717
生物實例8 人類Pan T細胞所釋放IL2 & IFN-γ之化合物效力研究
本實例為一種使用pan T細胞及ELISA分析模式來決定化合物對IL2 & IFN-γ之釋放影響之分析方法。
材料及儀器
1.試劑：
Figure 109122604-A0202-12-0142-718
Figure 109122604-A0202-12-0143-719
2.儀器&供應商：
Figure 109122604-A0202-12-0144-720
3.製程
Pan T單離及試劑製備製程(第0天)：
1.細胞生長培養基：
RPMI1640：ATCC，目錄編號30-2001
10%FBS：Gibco，目錄編號10099141
1%Pen-Strep：Gibco，目錄編號15140122
1%非必需胺基：Gibco，目錄編號11140050
β-巰基乙醇：Gibco，目錄編號21985023
2.Pan T單離緩衝劑製備：
使用autoMACS®潤洗溶液稀釋MACS® BSA儲液溶液(# 130-091-376)20次，製備包含磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)(pH 7.2)、0.5%牛血清白蛋白(BSA)、及2mM EDTA之溶液。緩衝劑保持在4℃。緩衝劑在使用前先脫氣，因為氣泡會阻滯管柱。
Figure 109122604-A0202-12-0145-721
3.冷凍之PBMC之解凍
1)培養基於37℃水浴中預熱。
2)細胞於37℃水浴中快速解凍。
3)添加預溫熱之培養基至15mL試管中。將細胞移至管中。
4)於300×g離心8min.(離心提高0，下降0)。
5)使用潤洗緩衝劑洗滌PBMC。
6)PBMC於300×g離心8min，洗滌2次(離心提高9，下降1)。
7)細胞使用Pan T細胞單離緩衝劑再次懸浮，及計算細胞數。
4.Pan T細胞單離法：
使用微珠混合液染色細胞
1)準備細胞及決定細胞數。使用70μm細胞過濾器過濾細胞。
2)細胞集結塊再次懸浮，每107個總細胞數含於40μL緩衝劑中。
3)每107個總細胞數添加10μL Pan T細胞生物素-抗體混合液。
4)混合孔及於冰箱(冰)中培養10分鐘。
5)每107個總細胞數添加30μL緩衝劑。
6)每107個總細胞數添加20μL Pan T細胞微珠混合液。
7)混合孔及於冰箱(冰)中培養15分鐘。
8)接著進行磁性細胞分離法。
註：a.動作快，保持細胞低溫，及使用預冷溶液(2-8℃)。b.針對達成107總計細胞數之磁性標記體積。當使用較少細胞操作時，使用指示之相同體積。c.當使用較高細胞數操作時，隨之放大所有試劑體積及總體積。d.為了最優性能，重點在於磁性標記之前先取得單一細胞懸浮液。
隨後之手動細胞分離法：
1)取LS管柱置入合適MACS分離器之磁場中。其細節可參見各MACS管柱數據表。
2)使用3mL緩衝劑潤洗，準備管柱。
3)加載細胞懸浮液至管柱。收集流出液，代表已富集之T細胞。
4)使用5mL緩衝劑洗滌管柱。收集已通過之無標記細胞，代表已富集之T細胞。
提醒：一定要等到管柱儲槽已排空才可以繼續進行下一個步驟。
5.Pan T細胞FACS：
1)分別取出50μL PBMC及Pan T細胞加至FACS管中。
2)細胞與抗-人類CD3/CD4/CD8抗體(1μL/1μL/1μL/管)於4℃培養20min。未染色之對照組，由細胞與FACS染色緩衝劑培養。
3)使用冷的染色緩衝劑(含0.2%BSA及1mM EDTA之PBS)洗滌2次。
4)操作FACS。攔截CD3+、CD3+CD4+、及CD3+CD8+族群，分析其百分比。
5)若Pan T細胞之純度高於90%時，則使用適當體積之細胞培養基稀釋細胞懸浮液至1百萬個細胞/mL。
6)取細胞懸浮液分配至無菌之可棄式儲槽中備用。
製備化合物及抗-人類CD3/CD28之製程(第0天)：
化合物製備
化合物連續稀釋液(起始分析盤1000×)
化合物溶於100%DMSO，至濃度為10mM。然後連續稀釋3倍製成8個點之劑量。
製備4×化合物劑量(中間分析盤：Corning-3599)：
於培養基中製備4×化合物溶液。上下吸取。ZPE對照組係於培養基中製備0.4%DMSO(4×)。HPE對照組係於培養基中製備0.4μM RGT003-026(4×)。
2.抗-人類CD3(儲液濃度6.76mg/ml)：存放在4℃。
1)使用PBS稀釋抗-人類CD3至最終濃度0.5μg/mL。
2)除了陽性及陰性對照組孔以外，在各孔中添加50μL/孔之CD3。陽性及陰性對照組孔沒有CD3/CD28刺激。
3)於37℃之5%CO2培養箱中培養2小時。
4)從細胞培養盤中排除50μL抗體溶液。每次使用200μL無菌PBS潤洗各孔2次。
3.抗-人類CD28(4×)製備
使用培養基稀釋抗體，從儲液濃度11.07mg/mL稀釋成2μg/mL(4×)。
4.PMA/離子黴素製備(4×)
1)於培養基中稀釋PMA至400ng/mL(8×)。
2)於培養基中稀釋離子黴素至8μM(8×)。
3)混合等體積之PMA與離子黴素，得到4×混合物。
刺激細胞之製程(第0天)
1.取1×105個細胞/孔(100μL/孔)之細胞懸浮液移至96孔盤(細胞分析盤：greiner-655180)。
2.試驗化合物組及ZPE/HPE對照組係添加50μL/孔之抗-人類CD28。陽性或陰性對照組則分別添加50μL/孔之4x PMA/離子黴素溶液或培養基。
3.依據下文出示之分析盤地圖，添加50μL/孔之化合物至細胞分析盤中。ZPE/HPE對照組係分別添加50μL/孔之0.4%DMSO溶液或0.4μM RGT003-026(4×)。陽性或陰性對照組，則添加50μL/孔之培養基。
4.分析盤培養48小時。
IL-2 & IFN-γ ELISA之製程：
第1天：塗佈盤：
1)每孔使用100μL之IL-2 & IFN-γ捕捉抗體(於塗佈緩衝劑中稀釋)塗佈微量孔。建議之抗體塗佈稀釋液參見批次特定說明書/分析證明書。密封分析盤，於4℃培養一夜。
第2天：收集樣本：
1)於37℃與5%CO2培養箱中培養48小時後，細胞盤於1,000rpm離心10min。收集100μL/孔上清液後，進行IL-2及IFN-γ ELISA分析 法。上清液存放在-80℃，次日進行IL-2及IFN-γ ELISA分析法。上清液可能需要稀釋30至40倍，以確保分析不會超過IL-2及IFN-γ標準曲線之線性範圍。
2)添加新的培養基(包含抗-CD28、P/I及化合物)至分析盤中，100μL/孔。
3)盤地圖：
第3-4天：IL-2 & IFN-γ ELISA：
1)吸清孔及使用
Figure 109122604-A0202-12-0149-390
300μL/孔之洗滌緩衝劑洗滌3次。洗滌最後一次後，反轉分析盤，貼在吸墨紙，以排除任何殘留之緩衝劑。
2)使用
Figure 109122604-A0202-12-0149-391
200μL/孔分析稀釋劑阻斷分析盤。於室溫培養1小時。
3)如步驟2吸清/洗滌。
4)於分析稀釋劑中製備標準物。
製備IL-2標準儲液：
添加1mL去離子水至小瓶中(235ng/瓶)，儲液濃度為235ng/mL。分裝標準儲液成10μL/瓶，於-80℃冷凍。
製備IFN-γ標準儲液：
添加1mL去離子水至小瓶中(145ng/瓶)，儲液濃度為145ng/mL。分裝標準儲液成10μL/瓶，於-80℃冷凍
製作IL-2/IFNγ之標準曲線：
稀釋標準樣本至最高濃度500pg/mL。然後連續稀釋2倍製成10個點劑量(包括空白對照組)。取不同濃度之標準物移至ELISA盤中，100μL/孔。
1)吸取100μL之各標準物、樣本、及對照組至適當孔中。密封分析盤及於室溫培養2小時。
2)如步驟2吸清/洗滌，但共洗滌5次。
3)添加100μL操作檢測劑(檢測抗體+SAv-HRP試劑)至各孔中。密封分析盤及於室溫培養1小時。
4)如步驟2吸清/洗滌，但共洗滌7次。註：在這個最後洗滌步驟中，每次洗滌均讓孔浸在洗滌緩衝劑中30秒至1分鐘。
5)添加100μL受質溶液至各孔中。盤(沒有盤密封蓋)於室溫黑暗中培養30分鐘。
6)添加50μL中止反應溶液至各孔中。.
7)在中止反應30分鐘內，在450nm下讀取吸光度。OD450 nm校正至570nm之OD值。
4.數據分析
生化分析法中，依據及相對於包含在各分析盤內之HPE及ZPE孔之訊號，計算各化合物濃度之抑制百分比(%)。HPE孔視為100%效力，及不包含任何化合物但包含DMSO(最終濃度=0.1%)之ZPE孔則視為0%效力。
細胞分析法中，在各化合物濃度下計算IL-2或IFN-γ相對於DMSO對照組之反應(未出示數據)。參見表2。EC2x代表產生200%反應(2倍)時之化合物濃度，及採用GraphPad Prism計算EC50。
得自實例化合物之生化與細胞數據列於下表1及2。
Figure 109122604-A0202-12-0151-722
Figure 109122604-A0202-12-0152-723
Figure 109122604-A0202-12-0153-724
Figure 109122604-A0202-12-0154-725
Figure 109122604-A0202-12-0155-726
Figure 109122604-A0202-12-0156-727
Figure 109122604-A0202-12-0157-728
Figure 109122604-A0202-12-0158-729
Figure 109122604-A0202-12-0159-730
Figure 109122604-A0202-12-0160-731
Figure 109122604-A0202-12-0161-732
Figure 109122604-A0202-12-0162-733
Figure 109122604-A0202-12-0163-734
Figure 109122604-A0202-12-0164-735
Figure 109122604-A0202-12-0165-736
Figure 109122604-A0202-12-0166-737
Figure 109122604-A0202-12-0167-738
Figure 109122604-A0202-12-0168-739
Figure 109122604-A0202-12-0169-740
Figure 109122604-A0202-12-0170-741
Figure 109122604-A0202-12-0171-742
Figure 109122604-A0202-12-0172-743
B.合成實例
儀器說明
NMR光譜係採用Varian Mercury光度計，於400MHz(1H)、376MHz(19F)或75MHz(13C)下操作。樣本所採用之溶劑已於各化合物之實驗製程中明確說明。化學位移係以每百萬分之一(ppm，δ單位)表示。偶合常數係以赫茲單位(Hz)表示。以裂峰型態說明表觀之多峰，並以s(單峰)、d(雙峰)、t(參峰)、q(肆峰)、quint(五峰)、m(多峰)、br(寬峰)表示。
LCMS採用下列系統：Agilent 6120(二元梯度模組幫浦(Binary Gradient Module pump))，Xbridge分析管柱C18，5μm，4.6×50mm，25℃，5μL注射體積，2mL/min，依據下列時程使用乙腈於0.1%乙酸銨水溶液中之梯度：
Figure 109122604-A0202-12-0173-744
實驗製程：所有反應均在無水氮蒙氣下進行，除非另有說明。TLC板係採用紫外光目視檢測。快速層析法係指使用玻璃管柱之矽膠管柱層析法(40-60μm)。或者，使用Biotage SP1或Biotage Isolera系統進行自動化層析法，於220或254nm進行u.v.檢測，及採用Biotage正相或逆相矽石卡管。其中細節可參見相關之實驗製程。
一般方法及製法
包括彼等通式(I-0)、(I-1)、(I-2)、(I)、(II)、(II-1)、(II-2)、或(II-2’)之化合物、中間物及明確實例係透過本文說明之合成法製備。實驗製程中，除了明確述及之酸、鹼、試劑、偶合試劑、溶劑等等，對諸如溫度、溶液濃度、溶劑體積、施加之微波條件，反應歷時或其組合等反應條件之修飾均計畫成為本發明之一部份，可使用替代之合適酸、鹼、試劑、偶合試劑、溶劑等等，且均包括在本發明範圍內。所有可能之幾何異構物、立體異構物、鹽型均計畫包括在本發明範圍內。
嘧啶化合物之一般反應圖及合成製程：
Figure 109122604-A0202-12-0174-745
條件A1：於0℃，在含Int.E(或自商品取得之試劑)(1.0eq.)之DMF溶液中添加氫化鈉(60%勻散於礦物油中，1.2eq.)，混合物於0℃攪拌30分鐘。於0℃，在上述反應混合物中添加5-R1取代之2,4-二氯嘧啶(1.0-1.3eq.)，所得混合物接著在室溫攪拌1小時，冷卻至0℃，及使用冰-H2O中止反應。純化粗產物，產生4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶。
條件A2：在含5-R1取代之2,4-二氯嘧啶(1.0-1.5eq.)之DMF溶液中添加碳酸鉀(2.0eq.)及Int.E(或自商品取得之試劑)(1.0eq.)。混合物於80℃攪拌一夜，冷卻至室溫，加H2O稀釋，及使用EA萃取。純化粗產物，產生4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶。
條件A3：在含Int.E(或自商品取得之試劑)(1.0eq.)之正丁醇溶液中依序添加5-R1取代之2,4-二氯嘧啶(1.0-1.5eq.)及DIPEA(1.0- 2.0eq.)。反應混合物於100℃攪拌18小時，加水稀釋，及使用EA萃取。純化粗產物以提供4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶。
條件B1：在含Int.W(1.0-1.4eq.)之2-甲氧基乙醇溶液中添加4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶(1.0eq.)及HCl之EtOH溶液(3.0eq.)。所得混合物於120℃攪拌20小時及真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法及/或製備性-HPLC純化。
條件B2：在含4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶(1.0eq.)及Int.W(1-1.3eq.)之異丙醇溶液中添加三氟乙酸(1.0-3.0eq.)。混合物於N2及100℃攪拌20小時，冷卻至室溫，使用飽和NaHCO3水溶液鹼化至pH ~8，使用DCM萃取。有機相使用鹽水洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法及/或製備性-HPLC純化。
條件B3：在含4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶(1.0eq.)及Int.W(1-1.3eq.)之異丙醇溶液中添加TsOH．H2O(1.0-1.2eq.)。混合物於100℃攪拌一夜，冷卻至室溫，使用飽和NaHCO3水溶液鹼化pH ~8，使用DCM萃取。有機相使用鹽水洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘經矽膠快速管柱層析法及/或製備性-HPLC純化。
條件B4：在含4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶(1.0eq.)之二
Figure 109122604-A0202-12-0175-392
烷溶液中添加Int.W(1.0-1.2eq.)、Pd2(dba)3(0.2eq.)、Xantphos(0.2eq.)、及碳酸鉀(2.0eq.)。混合物於100℃及N2下攪拌12小時，冷卻至室溫，及過濾。殘質經矽膠快速管柱層析法及/或製備性-HPLC純化。
依特定實例而定，經4-R及5-R1取代之2-Cl-嘧啶在條件A與B之間另外轉化，並在條件B之後進一步轉化。
中間物
Int.W1
Figure 109122604-A0202-12-0176-746
6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
Figure 109122604-A0202-12-0176-747
步驟1：在含2-(3-甲氧基苯基)乙烷胺(20.0g,132.27mmol,19.23mL)之HCl水溶液(1N,192mL,192mmol)混合物中添加甲醛水溶液(37%w.t.,41.64g,529.08mmol)。混合物於60℃攪拌1小時，冷卻至0℃，及滴加0℃之50%NaOH水溶液(17.44g,218mmol)鹼化。所得混合物於室溫攪拌一夜，及過濾。取濾液濃縮，產生雙(6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)甲烷之白色固體(23g,100%產率)。
步驟2：於0℃，在含雙(6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)甲烷(28g,82.73mmol)之i-PrOH(200mL)懸浮液中滴加濃HCl(15.20g,182.01mmol,15.3mL)，混合物於室溫攪拌18小時。添加MTBE(70mL)至上述混合物中，懸浮液於室溫再攪拌4小時。過濾後，濾餅使用MTBE/i-PrOH混合物(100mL,1/1 v/v)洗滌及乾燥以提供6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉鹽酸鹽之白色固體，其懸浮於DCM(300mL)中。在混合物中添加飽和NaHCO3水溶液(500mL)，及混合物於室溫攪拌2小時。分離後，水層使用DCM萃取(50mL x 4)。合併之有機層經無水Na2SO4 脫水，過濾，及濃縮以提供6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉之黃色油(10g,75%產率)。LC-MS(ESI)m/z：164[M+H]+。
步驟3：於室溫，在含6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉(1.63g,9.99mmol)之MeOH(30mL)溶液中添加甲醛水溶液(37%w/w,4.8g,59.92mmol,1.67mL)。混合物於室溫攪拌15分鐘，及冷卻至0℃，在其中分批添加NaBH4(1.13g,29.96mmol)。混合物於室溫攪拌3小時，使用冰-水(10mL)中止反應，及使用DCM萃取(20mL x 5)。有機層經無水硫酸鈉脫水，過濾，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=10/1v/v)以提供6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉之黃色油(1.7g,96%產率)。LC-MS(ESI)m/z：178[M+H]+。
步驟4：於0℃，在濃硫酸之預冷卻(0℃)溶液(4mL)中依序添加6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉(2g,11.28mmol)及硝酸胍(1.17g,9.59mmol)。所得混合物於0℃攪拌30分鐘，使用冰-水(20mL)中止反應，使用NaOH水溶液(4N)鹼化至pH 10-11，及使用DCM萃取(50mL x 4)。合併之有機層經無水Na2SO4脫水，過濾，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE 100%v/v，PE/EA=1/1 v/v，EA 100%v/v，及接著DCM/MeOH=20/1，v/v)以提供6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉之黃色固體(0.9g,36%產率)。LC-MS(ESI)m/z：223[M+H]+。
步驟5：在含6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(4.2g,14.40mmol)之EA(32mL)、H2O(16mL)、及EtOH(144mL)溶液中添加Fe粉(5.5g,93.99mmol)及氯化銨(793.96mg,13.08mmol)。混合物於60℃攪拌48小時，冷卻至室溫，及過濾。使用甲醇洗滌濾餅(30mL x 3)，及取濾液濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=20/1至10/1 v/v)以提供6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺鹽酸鹽之黃色固體(4.5g,100%產率)。LC-MS(ESI)m/z：193[M+H]+。
另一種合成法：
Figure 109122604-A0202-12-0178-748
步驟1：於0℃，在含三乙基胺(13.38g,132.27mmol,18.44mL)、2-(3-甲氧基苯基)乙烷胺(10g,66.13mmol)及DMAP(807.96mg,6.61mmol)之DCM(100mL)溶液中慢慢添加BOC2O(15.88g,72.75mmol,16.70mL)。混合物接著在室溫攪拌16小時，使用冰-水(200mL)稀釋及使用EtOAc萃取(3 x 200mL)。合併之有機相使用鹽水(100mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾，及真空濃縮。殘質經快速層析法純化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯=10/1)以提供(3-甲氧基苯乙基)胺甲酸第三丁基酯(14.6g,79.06%產率，90%純度)之無色液體。LC-MS(ESI)m/z：196[M+H-56]+。
步驟2：於-78℃，在含(3-甲氧基苯乙基)胺甲酸第三丁基酯(7g,27.85mmol)及2-氯吡啶(4.74g,41.78mmol,3.92mL)之CH2Cl2(50mL)溶液中添加Tf2O(8.64g,30.64mmol,5.15mL)之CH2Cl2(5mL)溶液。20分鐘後，滴加BH3．Et2O(19.77g,139.26mmol)至上述溶液中。反應混合物隨後回升至室溫，攪拌2小時，及小心使用飽和NaHCO3溶液中 止反應。所得混合物使用CH2Cl2萃取(3 x 100mL)。合併之有機層使用鹽水(50mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾，及真空濃縮。殘質經快速層析法純化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯/甲醇=5/1/0至10/10/1)以提供6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-1(2H)-酮(3.4g,68.89%產率)之灰白色固體。LC-MS(ESI)m/z：178[M+H]+。
步驟3：於-20℃，在含6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-1(2H)-酮(3.8g,21.44mmol,9.62mL)之濃H2SO4(50mL)溶液中滴加HNO3(2.16g,22.29mmol,65%純度)。混合物於-20℃~-25℃攪拌3小時，倒至冰水(300mL)中。水層使用二氯甲烷萃取(3 x 200mL)。合併之有機層真空濃縮，及殘質經快速管柱層析法純化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯/甲醇=10/1/0~10/10/1)以提供6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氫異喹啉-1(2H)-酮(2.02g,40.78%產率)。LC-MS(ESI)m/z：223[M+H]+。
步驟4：在含6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氫異喹啉-1(2H)-酮(2.02g,9.09mmol)之THF(200mL)溶液中添加1M BH3/THF(45.46mmol,45.5mL)。混合物於回流下攪拌20小時，及小心使用甲醇(30mL)中止反應。所得溶液真空濃縮。殘質於2N HCl(50mL)中，於80℃加熱3小時，冷卻，使用氫氧化銨水溶液鹼化，及使用二氯甲烷萃取(3 x 100mL)。合併之有機層經無水硫酸鈉脫水，過濾，及濃縮以提供6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(1.89g,100.00%產率)。LC-MS(ESI)m/z：209[M+H]+。
步驟5：於室溫，在含6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(1.89g,9.08mmol,9.62mL)之甲醇(30mL)溶液中添加甲醛(1.64g,54.46 mmol,1.51mL)。混合物於室溫攪拌15分鐘及冷卻至0℃。然後分批添加NaBH4(1.03g,27.23mmol)至上述混合物中。所得混合物於室溫攪拌3小時，使用冰-水(10mL)中止反應，及使用DCM萃取(20mL x 5)。合併之有機層經無水硫酸鈉脫水，過濾，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=10/1,v/v)以提供6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(1.4g,69.40%產率)之黃色油。LC-MS(ESI)m/z：223[M+H]+。
步驟6：在含6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(1.3g,5.85mmol)之EtOAc(2mL)、H2O(1mL)、及EtOH(10mL)溶液中添加Fe(2.19g,39.19mmol)及氯化銨(284.74mg,5.32mmol)。混合物於60℃攪拌16小時，冷卻至室溫，及過濾。使用甲醇洗滌濾餅(30mL x 3)，及取濾液濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=20/1至10/1 v/v)以提供6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺鹽酸鹽之黃色固體(0.85g,75.6%產率)。LC-MS(ESI)m/z：193[M+H]+。
Int.W2
Figure 109122604-A0202-12-0180-749
2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
Figure 109122604-A0202-12-0180-750
步驟1：在含1,2,3,4-四氫異喹啉(4.8g,36.04mmol)之濃硫酸(20mL)冰冷溶液中分批添加硝酸鉀(4.01g,47.21mmol)，保持溫度低於5℃。反應混合物於室溫攪拌一夜，倒至冰(100g)中，使用NH3．H2O 調整至pH ~9，及使用CH2Cl2萃取(50mL x 3)。合併之有機層經無水硫酸鈉脫水，過濾，及濃縮。殘質於甲醇中結晶以提供7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉鹽酸鹽之黃色固體(4.2g,54%產率)。LC-MS(ESI)m/：179[M+H]+。
步驟2：在含7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉鹽酸鹽(5.0g,23.29mmol)之無水1,2-二氯乙烷(200mL)攪拌混合物中添加福馬林(37%甲醛水溶液，2.0mL,25.86mmol)，然後添加三乙醯氧基硼氫化物(19.81g,104.82mmol)。反應混合物於室溫激烈攪拌4小時，及濃縮。殘質使用EtOAc(400mL)稀釋，慢慢使用飽和NaHCO3水溶液(400mL)中止反應，及攪拌30分鐘。混合物使用EA萃取(100mL x 4)。有機層經無水硫酸鈉脫水，過濾及濃縮以提供2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉之褐色固體(3.8g,85%產率)。LC-MS(ESI)m/：193[M+H]+。
步驟3：取含2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(3.8g,19.77mmol)、Fe(5.52g,98.85mmol)、NH4Cl(15.86g,296.54mmol)之EA(10mL)、EtOH(100mL)、及H2O(20mL)懸浮液於70℃激烈攪拌24小時。過濾後，濾餅使用EA/EtOH混合溶劑(100mL,10/1,v/v)洗滌，及取濾液濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(MeOH之DCM溶液，0%至25%v/v)以提供2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺之黃色固體(1.84g,57%產率)。LC-MS(ESI)m/z：163[M+H]+。
Int.W3
Figure 109122604-A0202-12-0181-751
6-氯-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
Figure 109122604-A0202-12-0182-752
步驟1：於室溫，在含6-氯異喹啉(2.0g,12.22mmol)之MeCN(15mL)溶液中添加MeI(5.21g,36.67mmol)。混合物於50℃之密封管中攪拌2天。冷卻至室溫後，過濾收集固體，乾燥以提供6-氯-2-甲基異喹啉-2-鎓碘化物之黃色固體(3.2g,86%產率)。LC-MS(ESI)m/z：178[M]+。
步驟2：於0℃，在含6-氯-2-甲基異喹啉-2-鎓碘化物(200mg,0.65mmol)之MeOH(8mL)溶液中分批添加NaBH4(127.06mg,3.36mmol)。混合物於室溫攪拌3小時，使用飽和NaHCO3水溶液調整至pH ~9，及使用DCM萃取(30mL x 3)。有機層經無水硫酸鈉脫水，過濾及濃縮。殘質經製備性-TLC純化(DCM/MeOH=20/1,v/v)以提供6-氯-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉之黃色固體(90mg,44%產率)。LC-MS(ESI)m/z：182[M+H]+。
步驟3&4：依Int.W1 步驟4&5之相同製程，使用6-氯-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉替代6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉。LC-MS(ESI)m/z：197[M+H]+。
Int.W4
Figure 109122604-A0202-12-0182-753
2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶-3-胺
Figure 109122604-A0202-12-0183-754
步驟1：取含1-甲基-3,5-二硝基-吡啶-2-酮(4.5g,22.60mmol)及1-甲基哌啶-4-酮(2.81g,24.86mmol)之NH3/MeOH溶液(7N,50mL)於密封管中，在50℃攪拌一夜。冷卻至室溫後，混合物濃縮，及殘質分溶於DCM(100mL)與飽和NaHCO3水溶液(50mL)之間。分層，及水層使用DCM萃取(50mL x 2)。合併之有機層經無水Na2SO4脫水，過濾，及濃縮以提供6-甲基-3-硝基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶之紅色固體(2.84g,65%產率)。LC-MS(ESI)m/z：194[M+H]+。
步驟2：在含6-甲基-3-硝基-7,8-二氫-5H-1,6-萘啶(1.3g,6.73mmol)之乙醇(35mL)及THF(35mL)溶液中添加10%Pd/C(817.20mg)，混合物於H2(1atm)下攪拌2小時。過濾後，濾餅使用EtOH(5mL x 2)洗滌，及取濾液濃縮以提供6-甲基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶-3-胺之黃色固體(1.1g,100%產率)。LC-MS(ESI)m/z：164[M+H]+。
步驟3：於室溫，在含6-甲基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶-3-胺(1.2g,7.35mmol)及AcONa(1.21g,14.70mmol)之乙酸(25mL)溶液中添加溴(1.17g,7.35mmol)，混合物於室溫攪拌1小時。混合物於DCM(100mL)及水(30mL)中稀釋，使用NaHCO3慢慢調整至pH ~9。有機層經無水Na2SO4脫水，過濾，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH =20/1,v/v)以提供2-溴-6-甲基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶-3-胺之黃色固體(570mg,32%)。LC-MS(ESI)m/z：242[M+H]。
步驟4：在含2-溴-6-甲基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶-3-胺(250mg,1.03mmol)、碳酸銫(672.86mg,2.07mmol)及MeONa(83.67mg,1.55mmol)之MeOH(2mL)混合物中添加CuI(19.67mg,103.26umol)及1,10-鄰二氮菲單水合物(40.94mg,206.51umol)。混合物於N2保護之微波條件下，在120℃攪拌2小時。冷卻至室溫後，殘質經製備性-TLC純化(DCM/MeOH=15/1,v/v)以提供2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶-3-胺之黃色固體(74mg,37%產率)。LC-MS(ESI)m/z：194[M+H]+。
Int.W5
Figure 109122604-A0202-12-0184-755
2-異丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
Figure 109122604-A0202-12-0184-756
步驟1：於室溫，在含6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉(340mg,2.08mmol)之MeOH(10mL)混合物中滴加丙酮(725.93mg,12.50mmol,917.74uL)，混合物於室溫攪拌30分鐘。然後於0℃，分批添加NaBH(AcO)3(6.25mmol)至上述混合物中，所得混合物於室溫攪拌3小時，於0℃使用飽和NaHCO3水溶液(10mL)中止反應，及濃縮。殘質使用DCM萃取(50mL x 2)，合併之有機層使用鹽水(20mL x 2)洗滌，經無水Na2SO4脫水， 過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=20/1,v/v)以提供2-異丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉之白色固體(150mg,35%產率)。LC-MS(ESI)m/z：206[M+H]+。
步驟2：依Int.W1 步驟4之相同製程，使用2-異丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉替代6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉。LC-MS(ESI)m/z：251[M+H]+。
步驟3：取含2-異丙基-6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(200mg,799.06umol)及10%碳載鈀(30mg,799.06umol)之EA(6mL)混合物於室溫及H2(1atm)下攪拌16小時，及過濾。取濾液濃縮，殘質經製備性-TLC純化(DCM/MeOH=10/1,v/v)以提供2-異丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺之白色固體(50mg,28%產率)。LC-MS(ESI)m/z：221[M+H]+。
Int.W6
Figure 109122604-A0202-12-0185-757
7-胺基-6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-羧酸第三丁基酯
Figure 109122604-A0202-12-0185-758
步驟1：於-10℃，在含濃H2SO4(5mL)之冷溶液中添加6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉(1.0g,1.84mmol)。於-10℃，分批添加硝酸胍(758mg,6.13mmol)至上述混合物中。混合物於-10℃攪拌30分鐘，倒至 冷水(20mL)中，使用NaOH水溶液(4N)調整至pH ~8，及使用EA萃取(40mL x 4)。合併之有機層經無水硫酸鈉脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM 100%v/v，及接著DCM/MeOH=10/1，v/v)以提供6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉之黃色固體(200mg,16%產率)。LC-MS(ESI)m/z：209[M+H]+。
步驟2：取含6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(100mg,0.48mmol)、Boc2O(157mg,0.72mmol)、及Et3N(97mg,0.96mmol)之DCM(5mL)混合物於室溫攪拌4小時，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM 100%v/v，及接著DCM/MeOH=10/1，v/v)以提供6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-羧酸第三丁基酯之黃色油(150mg,100%產率)。LC-MS(ESI)m/z：209[M-100+1]+。
步驟3：取含6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-羧酸第三丁基酯(150mg,0.48mmol)及10%Pd/C(50mg)之EtOH(5mL)混合物於H2(1atm)及室溫攪拌16小時，及過濾。取濾液濃縮，以提供7-胺基-6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-羧酸第三丁基酯之黃色固體(110mg,81%產率)。LC-MS(ESI)m/z：223[M-55]+。
Int.W7
Figure 109122604-A0202-12-0186-759
6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
Figure 109122604-A0202-12-0187-760
步驟1：於0℃，在含6-氟-3,4-二氫-2H-異喹啉-1-酮(900mg,5.45mmol)之H2SO4(9mL)溶液中分批添加硝酸鉀(578.47mg,5.72mmol)。所得混合物於0℃攪拌2小時，及倒至冰-水中。有白色固體沉澱，過濾收集，及真空乾燥以提供6-氟-7-硝基-3,4-二氫-2H-異喹啉-1-酮(1.04g,86%產率)。LC-MS(ESI)m/z：211[M+H]+。
步驟2&3&4：依Int.W1之另一種之合成法之步驟4&5&6之相同製程，使用6-氟-7-硝基-3,4-二氫-2H-異喹啉-1-酮替代6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氫-2H-異喹啉-1-酮。LC-MS(ESI)m/z：181[M+H]+。
Int.W8
Figure 109122604-A0202-12-0187-761
2-乙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
Figure 109122604-A0202-12-0187-762
步驟1：在含6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(300mg,1.44mmol)之CH3CN(10mL)溶液中添加碘乙烷(224.72mg,1.44mmol,115.83uL)及K2CO3(796.52mg,5.76mmol)。反應混合物於20℃攪拌16小時，及分溶於乙酸乙酯(100mL)及水(100mL)之間。分離有機層，經無 水硫酸鎂脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(0-20%甲醇之二氯甲烷溶液，含氫氧化銨水溶液)以提供2-乙基-6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(136mg,40%產率)。LC-MS(ESI)m/z：237[M+H]+。
步驟2：依Int.W1之另一種之合成法之步驟6相同製程，使用2-乙基-6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉替代2-甲基-6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉。LC-MS(ESI)m/z：207[M+H]+。
Int.W9
Figure 109122604-A0202-12-0188-763
6-甲氧基-2-甲基異吲哚啉-5-胺
Figure 109122604-A0202-12-0188-764
步驟1：依Int.W7 步驟1之相同製程，使用5-甲氧基異吲哚啉-1-酮替代6-氟-3,4-二氫異喹啉-1(2H)-酮。LC-MS(ESI)m/z：209[M+H]+。
步驟2&3&4：依Int.W1之另一種之合成法之步驟4&5&6之相同製程，使用5-甲氧基-6-硝基異吲哚啉-1-酮替代6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氫-2H-異喹啉-1-酮。LC-MS(ESI)m/z：179[M+H]+。
Int.W10
Figure 109122604-A0202-12-0189-765
6-異丙氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
Figure 109122604-A0202-12-0189-766
步驟1：在含6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(50mg,224.98umol)之水(5mL)溶液中添加1M溴化氫(1mL)。混合物於回流下攪拌16小時，使用飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化至pH 8，及使用二氯甲烷/甲醇(v/v,10/1,20mL x 3)萃取。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供粗產物2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-醇(46.84mg,90%產率)。LC-MS(ESI)m/z：209[M+H]+。
步驟2：在含2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-醇(230mg,1.10mmol)及2-碘丙烷(187.78mg,1.10mmol,110.46uL)之DMF(2mL)溶液中添加碳酸鉀(229.00mg,1.66mmol)。混合物於室溫攪拌16小時，及使用鹽水(10mL)稀釋。分離水相，及使用乙酸乙酯萃取(20mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE：10~50%)以提供6-異丙氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(240mg,87%產率)。LC-MS(ESI)m/z：251[M+H]+。
步驟3：依Int.W1之另一種合成法之步驟6之相同製程，使用6-異丙氧基-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉替代6-甲氧基-2-甲基 -7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉5-甲氧基-6-硝基異吲哚啉-1-酮。LC-MS(ESI)m/z：221[M+H]+。
Int.W11
Figure 109122604-A0202-12-0190-767
1-(7-胺基-6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮
Figure 109122604-A0202-12-0190-768
步驟1：於0℃，在含6-甲氧基-7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉(908mg,4.14mmol)之二氯甲烷(15mL)溶液中添加三乙基胺(838.43mg,8.29mmol,1.15mL)，接著添加三氟乙酸酐(1.04g,4.97mmol,700.78uL)。反應混合物於室溫攪拌3小時，使用飽和NaHCO3水溶液鹼化至pH 8，及使用二氯甲烷萃取(10mL x 3)。合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供粗產物2,2,2-三氟-1-(6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮之黃色固體(1.26g,95%產率)。LC-MS(ESI)m/z：305[M+H]+。
步驟2：取含2,2,2-三氟-1-(6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(1.33g,4.14mmol)及10%碳載鈀(400mg,3.76mmol)之甲醇(30mL)混合物於25℃與H2蒙氣下攪拌16小時，及通過矽藻土(celite)過濾。使用甲醇洗滌濾餅(30mL x 3)，取濾液真空濃縮以提供1-(7-胺基-6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮之淡黃色固體(1.14g,95%產率)。LC-MS(ESI)m/z：275[M+H]+。
Int.E1
Figure 109122604-A0202-12-0191-769
(1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物
Figure 109122604-A0202-12-0191-770
步驟1：於0℃，在含1H-吲哚(2.34g,19.97mmol)及KOH(1.34g,23.97mmol)之DMF(40mL)混合物中滴加含I2(5.08g,19.97mmol)之DMF(10mL)溶液。所得混合物於0℃攪拌30分鐘，加冷水(200mL)稀釋，再攪拌30分鐘。過濾收集固體，使用H2O(30mL x 3)洗滌，及真空乾燥以提供3-碘-1H-吲哚之黃色固體(2.58g,53%產率)。
步驟2：在含3-碘-1H-吲哚(2.4g,9.87mmol)之DCM(15mL)溶液中添加三乙基胺(3.00g,4.13mL,29.62mmol)、BocO(4.31g,19.75mmol)、及DMAP(120.64mg,0.99mmol)。混合物於室溫攪拌1小時及真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=20/1,v/v)以提供3-碘-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之褐色油(4.6g,100%產率)。
步驟3：取3-碘吲哚-1-羧酸第三丁基酯(1.0g,2.91mmol)、二甲基膦氧化物(250.19mg,3.21mmol)、Pd(OAc)2(65.42mg,0.29mmol)、Xantphos(168.61mg,0.29mmol)、及K3PO4(680.40mg,3.21 mmol)之DMF(8mL)混合物於N2保護之微波條件下，在80℃攪拌5小時。冷卻至室溫後，混合物濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM 100%v/v，及接著DCM/MeOH=20/1 v/v)以提供第3-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-1-羧酸三丁基酯之褐色油(1g,100%產率)。LC-MS(ESI)m/z：294[M+H]+。
步驟4：於0℃，在含3-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(1.0g,3.41mmol)之DCM(6mL)溶液中添加TFA(3mL)。混合物於室溫攪拌一夜，及真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=20/1,v/v)以提供(1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物之白色固體(460mg,70%產率)。LC-MS(ESI)m/z：194[M+H]+。
Int.E2
Figure 109122604-A0202-12-0192-771
N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧醯胺
Figure 109122604-A0202-12-0192-772
於0℃，在含1H-吲哚-3-羧酸(1.0g,6.21mmol)、HATU(4.72g,12.41mmol)、及二甲基胺鹽酸鹽(1.01g,12.41mmol)之DMF(15mL)溶液中滴加三乙基胺(2.51g,3.46mL,24.82mmol)。混合物於室溫攪拌14小時，使用H2O(100mL)稀釋，及使用乙酸乙酯萃取(100mL x 3)。合併之有機層使用鹽水(100mL x 5)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取 濾液真空濃縮以提供N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧醯胺之白色固體(650mg,56%產率)。LC-SM(ESI)m/z：189[M+H]+。
Int.E3
Figure 109122604-A0202-12-0193-773
3-氟-1H-吲哚
Figure 109122604-A0202-12-0193-774
步驟1：於0℃，在含3,3-二氟吲哚啉-2-酮(300mg,1.77mmol)之THF(5mL)溶液中滴加BH3/S(CH3)2(2M)(6.21mmol,3mL)。混合物於室溫攪拌2小時，於0℃使用10%檸檬酸水溶液中止反應，及加水稀釋。所得混合物使用乙酸乙酯萃取(50mL x 3)，及取有機相使用鹽水(100mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供3-氟-1H-吲哚(220mg,91.78%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：136.1[M+H]+。
Int.E4
Figure 109122604-A0202-12-0193-775
N,N-二甲基-1H-吲哚-2-羧醯胺
依Int.E2之相同製程，使用1H-吲哚-2-羧酸替代1H-吲哚-3-羧酸。LC-MS(ESI)m/z：189[M+H]+。
Int.E5
Figure 109122604-A0202-12-0194-776
2,3-二氫咪唑并[1,2-a]吡啶-5(1H)-酮
Figure 109122604-A0202-12-0194-777
步驟1：取含2,6-二氟吡啶(2.3g,19.99mmol,1.81mL)及2-胺基乙醇(12.21g,199.86mmol,12.09mL)之乙醇(40mL)混合物於90℃攪拌16小時，加水(50mL)中止反應，及使用EtOAc萃取(3×100mL)。合併之有機相使用鹽水(50mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水及過濾，及真空濃縮。殘質經快速層析法純化(SiO2，乙酸乙酯100%)以提供2-((6-氟吡啶-2-基)胺基)乙烷-1-醇(3g,93.24%產率，97%純度)之無色液體。LC-MS(ESI)m/z：157.2[M+H]+。
步驟2：取含2-((6-氟吡啶-2-基)胺基)乙烷-1-醇(500mg,3.20mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2,2,2-三氟乙醯基)酯(1.68g,8.00mmol,1.13mL)之MeCN(1mL)混合物於55℃，在密封管中攪拌16小時，及真空濃縮。殘質未純化即用於下一個步驟。
步驟3：取一份粗產物5-氟-2,3-二氫-1H-咪唑并[1,2-a]吡啶-4-鎓(500mg,3.59mmol)溶於水(25mL)，及含於236.18uL水中之NaOH(503.05mg,12.58mmol)。混合物於室溫攪拌30小時，使用濃HCl中和，及真空濃縮。所得固體懸浮於DCM中，通過矽藻土墊過濾，及使用EtOAc洗滌。合併之有機相真空濃縮，及殘質經矽膠層析法純化(DCM/MeOH= 20/1)以提供2,3-二氫咪唑并[1,2-a]吡啶-5(1H)-酮(100mg,10.22%產率，50%純度)。LC-MS(ESI)m/z：137.1[M+H]+。
Int.E6
Figure 109122604-A0202-12-0195-778
吲哚啉-3-基甲醇
Figure 109122604-A0202-12-0195-779
步驟1：於-10℃，在含1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(1.75g,9.99mmol)之TFA(30mL)溶液中分批添加NaBH3CN(6.28g,99.90mmol)。然後於相同溫度再攪拌混合物一小時，使用NaOH水溶液(10%,100mL)中止反應。所得混合物使用二氯甲烷萃取(3 x 100mL)。合併之有機層經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供吲哚啉-3-羧酸甲基酯(0.54g,1.52mmol,50%純度)。LC-MS(ESI)m/z：178[M+H]+。
步驟2：取含吲哚啉-3-羧酸甲基酯(0.2g,1.13mmol)之THF(10mL)溶液使用1.0M LiAlH4(94.24mg,2.48mmol)之THF溶液處理，及於回流下攪拌2小時。在混合物中小心添加甲醇(10mL)中止反應。所得溶液真空濃縮。所得殘質經矽膠快速管柱層析法純化(MeOH/DCM=0~10%)以提供吲哚啉-3-基甲醇之無色油(90mg,53%產率)。LC-MS(ESI)m/z：150[M+H]+。
Int.E7
Figure 109122604-A0202-12-0196-780
吲哚啉-3-基二甲基膦氧化物
Figure 109122604-A0202-12-0196-781
步驟1：於0℃，在含吲哚(2g,17.07mmol)之THF(20mL)溶液中添加NaH(819.40mg,20.49mmol,60%礦物油中)。混合物於0℃攪拌30分鐘，及添加苯磺醯氯(3.62g,20.49mmol)至上述混合物中。所得混合物於室溫攪拌一小時，冷卻至0℃，使用冰-水(100mL)中止反應。混合物使用乙酸乙酯萃取(3 x 50mL)，及合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=9/1)以提供1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚之無色油(3.8g,87%產率)。LC-MS(ESI)m/z：258[M+H]+。
步驟2：取含1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚(500mg,1.94mmol)及AgNO3(330.34mg,1.94mmol)之CH3CN(30mL)混合物於N2蒙氣及室溫攪拌2小時，接著添加二甲基膦氧化物(455.00mg,5.83mmol)。混合物於100℃攪拌16小時，及通過矽膠過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=10/1)以提供(1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物之黃色油(150mg,13%產率)。LC-MS(ESI)m/z：194[M+H]+。
步驟3：於-5℃，在含(1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物(175mg,905.88umol)之TFA(5mL)溶液中分批添加NaBH3CN(570.71mg,9.06mmol)。反應混合物於室溫攪拌一夜，使用2N NaOH溶液調整至pH 9-10，及使用二氯甲烷/甲醇(10/1)稀釋。水相使用二氯甲烷/甲醇(10/1,20mL x 3)萃取。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，產生吲哚啉-3-基二甲基膦氧化物之無色油(40mg,14%產率)。LC-MS(ESI)m/z：196[M+H]+。
Int.E8
Figure 109122604-A0202-12-0197-782
3-(甲基磺醯基)-1H-吲哚
Figure 109122604-A0202-12-0197-783
在含吲哚(1g,8.54mmol)之THF(20mL)溶液中添加2-甲基丙烷-2-醇鉀(1.05g,9.39mmol)。反應混合物於25℃攪拌30分鐘，接著依序添加三乙基甲硼烷(920.15mg,9.39mmol)及甲烷磺醯氯(1.08g,9.39mmol,726.77uL)。反應混合物於-15℃攪拌16小時，使用飽和氯化銨溶液(50mL)中止反應，及使用乙酸乙酯萃取(30mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=5/1)以提供3-甲基磺醯基-1H-吲哚之淡黃色固體(810mg,46%產率)。LC-MS(ESI)m/z：196[M+H]+。
Int.E9
Figure 109122604-A0202-12-0197-784
3-(甲基磺醯基)吲哚啉
Figure 109122604-A0202-12-0198-785
步驟1：於0℃，在含3-甲基磺醯基-1H-吲哚(546mg,2.8mmol)之THF(5mL)溶液中慢慢添加NaH(172mg,4.3mmol,60%礦物油中)。反應混合物於0℃攪拌30分鐘，接著添加Boc2O(934mg,4.3mmol)。反應混合物於25℃攪拌16小時，使用飽和氯化銨溶液(10mL)中止反應，及使用乙酸乙酯萃取(10mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，殘質經過矽膠管柱層析法純化(PE/EA=5/1)以提供3-(甲基磺醯基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之黃色固體(530mg,64%產率)。LC-MS(ESI)m/z：296[M+H]+。
步驟2：在含3-(甲基磺醯基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(530mg,1.70mmol)之二氯甲烷(14mL)及甲醇(52mL)攪拌溶液中慢慢添加鎂(207.mg,8.52mmol)。反應混合物於25℃攪拌16小時，使用飽和氯化銨溶液(60mL)稀釋，及使用二氯甲烷萃取(60mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質通過矽膠快速管柱層析法純化(使用含10%至20%乙酸乙酯之石油醚溶離)以提供3-(甲基磺醯基)吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(260mg,49%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：298[M+H]+。
步驟3：於0℃，在含3-(甲基磺醯基)吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(260mg,0.831mmol)之二氯甲烷(4mL)溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(2mL)。所得溶液於25℃攪拌2小時及真空濃縮，產生粗產物3(-甲基磺醯基)吲哚啉，其未進一步純化即使用。LC-MS(ESI)m/z：198[M+H]+。
Int.E10
Figure 109122604-A0202-12-0199-786
4-甲氧基吲哚啉
Figure 109122604-A0202-12-0199-787
在含4-甲氧基-1H-吲哚(500mg,3.40mmol)之AcOH(5mL)溶液中，以10分鐘時間分批添加氰基硼氫化鈉(895.00mg,13.59mmol)。混合物於室溫攪拌30分鐘，加水(40mL)稀釋及真空濃縮。殘質使用乙酸乙酯萃取(25mL x 3)。合併之有機相使用飽和NaHCO3水溶液(50mL)及鹽水(50mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，產生粗產物4-甲氧基吲哚啉(500mg,79%產率)，其未進一步純化立即使用。LC-MS(ESI)m/z：150[M+H]+。
Int.E11
Figure 109122604-A0202-12-0199-788
3-((甲基磺醯基)甲基)-1H-吲哚
Figure 109122604-A0202-12-0199-789
步驟1：在含1-(1H-吲哚-3-基)-N,N-二甲基甲胺(1g,5.74mmol)之水(15mL)懸浮液中添加20%甲硫醇鈉之水溶液(402.25mg,5.74mmol,5mL)。反應混合物於105℃攪拌16小時，冷卻至室溫，使用氯甲烷萃取(50mL x 3)。有機相使用0.5M HCl水溶液(40mL)、飽和碳酸氫 鈉水溶液(50mL)、及鹽水(50mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1)以提供3-((甲基硫)甲基)-1H-吲哚之白色固體(594mg,55%產率)。LC-MS(ESI)m/z：178[M+H]+。
步驟2：3-((甲基磺醯基)甲基)-1H-吲哚。在含3-((甲基硫)甲基)-1H-吲哚(250mg,1.34mmol)之甲醇(0.5mL)溶液中添加過硫酸氫鉀複合鹽(oxone)(904.90mg,1.47mmol)。反應混合物於25℃攪拌16小時，使用飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化至pH 8，及使用乙酸乙酯萃取(10mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1)以提供3-(甲基磺醯基甲基)-1H-吲哚之白色固體(139mg,47%產率)。LC-MS(ESI)m/z：210[M+H]+。
Int.E12
Figure 109122604-A0202-12-0200-790
5-(二氟甲基)吲哚啉
Figure 109122604-A0202-12-0200-791
步驟1：取含DMAP(896.50mg,7.34mmol)、1H-吲哚-5-甲醛(986.30mg,6.79mmol)及二碳酸二-第三丁基酯(1.63g,7.47mmol)之THF(15mL)混合物於室溫攪拌16小時，添加10mL水中止反應，及使用乙酸乙酯萃取(3 x 50mL)。有機層經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液 真空濃縮以提供5-甲醯基-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(1.4g,84%產率)。LC-MS(ESI)m/z：246[M+H]+。
步驟2：於0℃，在含5-甲醯基-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(500mg,2.04mmol)之DCM(20mL)溶液中添加N-乙基-N-(三氟-硫烷基)乙烷胺(1.64g,10.19mmol,1.35mL)。然後於室溫攪拌混合物16小時，使用飽和NaHCO3水溶液鹼化至pH 8，及使用二氯甲烷萃取(50mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE,1/9)以提供5-(二氟甲基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之白色固體(336mg,62%產率)。
步驟3：取含5-(二氟甲基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(200mg,748.30umol)及鈀(79.63mg,748.30umol)之MeOH(5mL)混合物於25℃及N2蒙氣下攪拌一小時，及過濾。取濾液真空濃縮，產生粗產物5-(二氟甲基)吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯之黃色油(200mg,99%產率)。
步驟4：取含5-(二氟甲基)吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(200mg,742.70umol)之HCl-EA(568.67mg,15.60mmol,710.84uL)溶液於0℃攪拌2小時，及真空濃縮，產生5-(二氟甲基)吲哚啉之白色固體(126.59mg,81%產率)。LC-MS(ESI)m/z：170[M+H]+。
Int.E13
Figure 109122604-A0202-12-0201-792
6-(二氟甲基)吲哚啉
依Int.E12之相同製程，使用1H-吲哚-6-甲醛替代1H-吲哚-5-甲醛。LC-MS(ESI)m/z：170[M+H]+。
Int.E14
Figure 109122604-A0202-12-0202-793
4-(二氟甲基)吲哚啉鹽酸鹽
依Int.E12之相同製程，使用1H-吲哚-4-甲醛替代1H-吲哚-5-甲醛。LC-MS(ESI)m/z：170[M+H]+。
Int.E15
Figure 109122604-A0202-12-0202-794
((1H-吲哚-3-基)磺醯基)胺甲酸第三丁基酯
Figure 109122604-A0202-12-0202-795
步驟1：於0℃，在含1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚(1g,3.89mmol)之無水CH3CN(10mL)溶液中小心添加氯磺酸(1.36g,11.66mmol,776.33uL)。然後讓反應混合物歷時4小時回升至室溫，攪拌一夜，倒至冰水(50mL)中，及使用二氯甲烷萃取(30mL x 2)。合併之有機層使用飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL x 2)及鹽水(50mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚-3-磺醯氯之白色固體(868mg,63%產率)。
步驟2：於0℃，在含1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚-3-磺醯氯(800mg,2.25mmol)之CH2Cl2(16mL)溶液中慢慢添加NH3/MeOH(960.00mg,56.47mmol,8mL)。然後於室溫攪拌混合物一夜，加水稀釋(20mL)，及使用CH2Cl2萃取(20mL x 3)。合併之有機層依序使用1M HCl(20mL)、水(20mL)及鹽水(20mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚-3-磺醯胺之白色固體(639mg,84%產率)。LC-MS(ESI)m/z：359[M+Na]+。
步驟3：於0℃，在含1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚-3-磺醯胺(1.03g,3.06mmol)之THF(10mL)溶液中添加NaH(612mg,15.31mmol,60%懸浮於礦物油中)。混合物於0℃攪拌30分鐘，接著添加Boc2O(2.67g,12.25mmol)。所得混合物於室溫攪拌16小時及倒至冰-水中。分離兩相，水相使用二氯甲烷/甲醇萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=9/1)以提供((1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚-3-基)磺醯基)胺甲酸第三丁基酯(438mg,31%產率)之灰白色固體。LC-MS(ESI)m/z：381[M+H-56]+。
步驟4：取含((1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚-3-基)磺醯基)胺甲酸第三丁基酯(438mg,1.00mmol)及K2CO3(553.90mg,4.01mmol)之甲醇(8mL)及H2O(2mL)混合物於室溫攪拌一夜，使用乙酸酸化至pH 5，及分層。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經逆相層析法純化(H2O/甲醇)以提供((1H-吲哚-3-基)磺醯基)胺甲酸第三丁基酯之白色固體(200mg,67%產率)。LC-MS(ESI)m/z：319[M+Na]+。
Int.E16
Figure 109122604-A0202-12-0204-796
3-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)氧雜環丁烷-3-基)-1H-吲哚
Figure 109122604-A0202-12-0204-797
步驟1：在含1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚(2g,7.38mmol)之DCM(60mL)溶液中滴加溴(1.18g,7.38mmol,378.23uL)。該紅色反應混合物接著在25℃攪拌4.5小時，倒至飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)中，及分層。有機層使用飽和硫代硫酸鈉水溶液(50mL)、水(50mL)、及鹽水(50mL)洗滌，經無水MgSO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(20%EA/PE)，產生3-溴-1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚之白色固體(1.5g,57%產率)。LC-MS(ESI)m/z：336[M+H]+。
步驟2：於-78℃，在含3-溴-1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚(200mg,0.595mmol)之THF(5mL)溶液中添加2.5M丁基鋰(0.36mL,0.892mmol)。反應混合物於-78℃攪拌30分鐘，接著於-78℃添加氧雜環丁烷-3-酮(85.74mg,1.19mmol,76.55uL)。於-78℃30分鐘後，反應混合物於25℃攪拌16小時，倒至飽和氯化銨水溶液(30mL)中，及分層。有機層使用鹽水(50mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘 質經矽膠快速管柱層析法純化(10%EA/PE)以提供3-(1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚-3-基)氧雜環丁烷-3-醇之淡黃色固體(110mg,53%產率)。LC-MS(ESI)m/z：276[M+H]+。
步驟3：取含3-(1-(苯基磺醯基)-1H-吲哚-3-基)氧雜環丁烷-3-醇(383mg,1.16mmol)之2MNaOH溶液(5mL)及甲醇(5mL)混合溶劑之溶液於85℃攪拌16小時，加水(20mL)稀釋，及分層。有機層使用鹽水(20mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(10%-100%EA/PE)以提供3-(1H-吲哚-3-基)氧雜環丁烷-3-醇之淡黃色固體(182mg,79%產率)。LC-MS(ESI)m/z：190[M+H]+。
步驟4：於0℃，在含3-(1H-吲哚-3-基)氧雜環丁烷-3-醇(600mg,3.01mmol)之DMF(6mL)溶液中添加第三丁基氯二甲基矽烷(1.14g,7.53mmol,1.40mL)及咪唑(615.25mg,9.04mmol)。反應混合物於25℃攪拌16小時，加水(20mL)稀釋，使用飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化至pH 8，及使用乙酸乙酯萃取(10mL x 3)。有機層使用鹽水(20mL x 3)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經過矽膠快速管柱層析法純化(10%-100%EA/PE)，產生3-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)氧雜環丁烷-3-基)-1H-吲哚之淡黃色固體(890mg,92%產率)。LC-MS(ESI)m/z：304[M+H]+。
Int.E17
Figure 109122604-A0202-12-0205-798
吲哚啉-3-羧酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0206-799
步驟1：於0℃，在含1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(5g,28.54mmol)之THF(50mL)溶液中慢慢添加NaH(1.71g,42.81mmol,60%礦物油中)。反應混合物於0℃攪拌30分鐘，接著添加Boc2O(9.34g,42.81mmol)。反應混合物於25℃攪拌16小時，使用飽和氯化銨溶液(100mL)中止反應，及使用乙酸乙酯萃取(100mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=5/1)以提供1H-吲哚-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯之黃色固體(5.3g,64%產率)。LC-MS(ESI)m/z：276[M+H]+。
步驟2：在含1H-吲哚-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(2g,6.90mmol)之二氯甲烷(60mL)及甲醇(211mL)之攪拌溶液中慢慢添加鎂(838.72mg,34.51mmol)。反應混合物於25℃攪拌16小時，使用飽和氯化銨溶液(100mL)稀釋，及使用二氯甲烷萃取(100mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE：10-20%)以提供吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯之淡黃色油(1.1g,55%產率)。LC-MS(ESI)m/z：222[M+H-56]+。
步驟3：在含吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(500mg,1.71mmol)之DCM(5mL)溶液中添加三氟乙酸(1.25mL)。所得混合物於室溫攪拌2小時及真空濃縮。殘質溶於DCM(100mL)及使用飽 和NaHCO3水溶液洗滌(30mL x 3)。有機相經無水Na2SO4脫水及過濾。取濾液真空濃縮以提供吲哚啉-3-羧酸甲基酯(308mg,94%產率)，其未進一步純化即使用。LC-MS(ESI)m/z：178[M+H]+。
Int.E18
Figure 109122604-A0202-12-0207-800
3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0207-801
步驟1：於25℃，在含吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(320mg,1.15mmol)及碘甲烷(491.36mg,3.46mmol)之DMF(8mL)溶液中添加氫化鈉(50.77mg,1.27mmol,60%礦物油中)。混合物於25℃攪拌2小時，使用EA(200mL)稀釋，及接著使用水(20mL x 3)及鹽水(30mL)洗滌。取有機層經無水Na2SO4脫水及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE：15%)以提供3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯之淡黃色油(244mg,70%產率)。LC-MS(ESI)m/z：236[M+H-56]+。
步驟2：於25℃，在含3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(240mg,0.824mmol)之二氯甲烷(4mL)溶液中添加三氟乙酸(1mL)。混合物於室溫攪拌2小時及真空濃縮以提供粗產物3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯，未進一步純化。LC-MS(ESI)m/z：192[M+H]+。
Int.E19
Figure 109122604-A0202-12-0208-802
3-甲基吲哚啉-3-羧醯胺
Figure 109122604-A0202-12-0208-803
步驟1：在含3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(500mg,1.63mmol)之THF(10mL)溶液中滴加LiOH水溶液(2N,5mL)。反應混合物於25℃攪拌16小時，使用0℃之1M HCl溶液(10mL)調整至pH~4，及真空濃縮。殘質使用EA萃取(10mL x 3)。有機相使用鹽水(20mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供1-第三丁氧基羰基-3-甲基-吲哚啉-3-羧酸(452mg)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：278[M+H]+。
步驟2：在含1-第三丁氧基羰基-3-甲基-吲哚啉-3-羧酸(452mg,1.55mmol)之DMF(5mL)溶液中依序添加氯化銨(414.1mg,7.74mmol)、DIEA(600.4mg,4.65mmol)及HATU(765.4mg,2.01mmol)。反應混合物於25℃攪拌16小時，使用飽和氯化銨溶液(15mL)稀釋，及使用EA萃取(10mL x 3)。有機相使用鹽水(15mL x 3)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1)以提供3-胺甲醯基-3-甲基-吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯之白色固體(420mg,93%產率)。LC-MS(ESI)m/z：277[M+H]+。
步驟3：依Int.18 步驟3之相同製程，使用3-胺甲醯基-3-甲基-吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯替代3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯。LC-MS(ESI)m/z：177[M+H]+。
Int.E20
Figure 109122604-A0202-12-0209-804
N,3-二甲基吲哚啉-3-羧醯胺
依Int.E19 步驟2&3之相同製程，使用甲基胺鹽酸鹽替代氯化銨。LC-MS(ESI)m/z：191[M+H]+。
Int.E21
Figure 109122604-A0202-12-0209-805
(3甲基吲哚啉-3-基)甲醇
Figure 109122604-A0202-12-0209-806
於室溫，在含3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(150mg,0.515mmol)之THF(10mL)溶液中添加1.0M LiAlH4之THF溶液(1mL,1.13mmol)。反應混合物於回流下攪拌2小時，及於室溫小心添加甲醇(10mL)中止反應。所得混合物真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(MeOH/DCM=0~10%)，產生(3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇(60mg,71%產率)。LC-MS(ESI)m/z：164[M+H]+。
Int.E22
Figure 109122604-A0202-12-0210-807
5-氟吲哚啉-3-羧酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0210-808
步驟1&2：依Int.E17 步驟1&2之相同製程，使用5-氟-1H-吲哚-3-羧酸酯替代1H-吲哚-3-羧酸酯。LC-MS(ESI)m/z：318[M+Na]+。
步驟3：取含5-氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(176mg,0.596mmol)之HCl/EA(4M,3mL)溶液於室溫攪拌1小時，及真空濃縮，得到5-氟吲哚啉-3-羧酸甲基酯(110mg,94.6%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：196[M+H]+。
Int.E23
Figure 109122604-A0202-12-0210-809
6-氟吲哚啉-3-羧酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0210-810
步驟1：在含6-氟-1H-吲哚-3-羧酸(600mg,3.35mmol)之乙醇(50mL)溶液中添加濃硫酸(0.1mL)。反應混合物於85℃攪拌16小 時，冷卻至室溫，及使用飽和碳酸氫鈉水溶液中和，及使用EA萃取(10mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1)，產生6-氟-1H-吲哚-3-羧酸乙基酯(646mg,94.9%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：208[M+H]+。
步驟2&3：依Int.E17之步驟1&2之相同製程，使用6-氟-1H-吲哚-3-羧酸乙基酯替代1H-吲哚-3-羧酸乙基酯(使用MeOH轉酯化)。LC-MS(ESI)m/z：296[M+H]+。
步驟4：依Int.E22之 步驟3之相同製程，使用6-氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-乙基酯替代5-氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯。LC-MS(ESI)m/z：196[M+H]+。
Int.E24
Figure 109122604-A0202-12-0211-811
5-甲氧基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
依Int.E17之相同製程，使用5-甲氧基-1H-吲哚-3-羧酸酯替代1H-吲哚-3-羧酸酯。LC-MS(ESI)m/z：208[M+H]+。
Int.E25
Figure 109122604-A0202-12-0211-812
6-甲氧基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
依Int.E23之相同製程，使用6-甲氧基-1H-吲哚-3-羧酸替代6-氟-1H-吲哚-3-羧酸。LC-MS(ESI)m/z：208[M+H]+。
Int.E26
Figure 109122604-A0202-12-0212-813
4-甲氧基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0212-814
步驟1：於0℃，在含4-甲氧基-1H-吲哚(1.4g,9.51mmol)及吡啶(3.76g,47.56mmol,3.85mL)之DCM(10mL)溶液中滴加含2,2,2-三氯乙醯氯(8.65g,47.56mmol)之DCM(10mL)。於0℃攪拌1.5小時後，混合物真空濃縮。殘質溶於甲醇(20ml)，以20分鐘時間，加至含甲醇鈉(1.54g,28.54mmol,1.59mL)之甲醇(50mL)攪拌懸浮液中。混合物於室溫攪拌一小時，冷卻至0℃，加水(50mL)稀釋，及使用DCM萃取(30mL x 3)。有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(MeOH/DCM=1%-10%)以提供4-甲氧基-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(800mg,38%產率)。LC-MS(ESI)m/z：206[M+H]+。
步驟2&3&4：依Int.E22之相同製程，使用4-甲氧基-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯替代5-氟-1H-吲哚-3-羧酸酯。LC-MS(ESI)m/z：208[M+H]+。
Int.E27
Figure 109122604-A0202-12-0213-815
5-氟-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
依Int.E18，於步驟1中使用5-氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯替代吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯；於步驟2中，依Int.22步驟3之HCl/EA脫除保護基條件。LC-MS(ESI)m/z：210[M+H]+。
Int.E28
Figure 109122604-A0202-12-0213-816
6-氟-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
依Int.E18之相同製程，於步驟1中使用5-氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯替代吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯；於步驟2中，依Int.22步驟3之HCl/EA脫除保護基條件。LC-MS(ESI)m/z：210[M+H]+。
Int.E29
Figure 109122604-A0202-12-0213-817
2-(吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0213-818
於0℃，在含2-(1H-吲哚-3-基)乙酸甲基酯(500mg,2.64mmol)之二氯甲烷(16mL)及TFA(3mL)溶液中添加硼氫化鈉(199.95mg,5.29mmol)。混合物於0℃攪拌2小時，使用DCM(200mL)稀釋，及使用飽和NaHCO3水溶液(10mL)中止反應。分離有機相，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供2-吲哚啉-3-基乙酸甲基酯之褐色油(477mg,85%產率)。LC-MS(ESI)m/z：196[M+H]+。
Int.E30
Figure 109122604-A0202-12-0214-819
2-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0214-820
步驟1：於氬蒙及室溫，在含2-(1H-吲哚-3-基)乙酸甲基酯(1g,5.29mmol)之DCM(10mL)溶液中添加三乙基胺(2.14g,21.14mmol)、DMAP(129.13mg,1.06mmol)及碳酸二-第三丁基酯(1.73g,7.93mmol)。攪拌5小時後，反應混合物使用飽和NH4Cl水溶液(20mL)稀釋，及使用DCM萃取(20mL x 2)。有機相使用鹽水(20mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(0~20%EA/PE)以提供3-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之淡黃色油(1.46g,95%產率)。LC-MS(ESI)m/z：307[M+18]+。
步驟2：於-20℃及N2下，以30分鐘時間，在含3-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯(300mg,1.04mmol)之無水 THF(10mL)溶液中滴加KHMDS(227.53mg,1.14mmol)。然後於-78℃再攪拌溶液40分鐘，接著於-78℃滴加碘甲烷(147.18mg,1.04mmol)。於相同溫度攪拌1.5小時後，反應混合物使用飽和NH4Cl水溶液(20mL)中止反應及分層。水層使用EtOAc萃取(20mL x 3)，及合併之有機相使用鹽水(20mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(0~20%EA/PE)，產生3-(1-甲氧基-1-側氧基丙烷-2-基)-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之無色油(105mg,30%產率)。LC-MS(ESI)m/z：326[M+Na]+。
步驟3：取含3-(2-甲氧基-1-甲基-2-側氧基-乙基)吲哚-1-羧酸第三丁基酯(550mg,1.81mmol)之鹽酸/二
Figure 109122604-A0202-12-0215-393
烷(4N,15mL)溶液於25℃攪拌48小時及真空濃縮。殘質經逆相層析法純化(0.01%TFA/甲醇)以提供2-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲基酯(110mg,51%純度)之無色油。LC-MS(ESI)m/z：204[M+H]+。
Int.E31
Figure 109122604-A0202-12-0215-821
1-(1H-吲哚-3-基)環丙烷-1-羧酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0215-822
步驟1：於-78℃，在含3-(2-甲氧基-2-側氧基-乙基)吲哚-1-羧酸第三丁基酯(100mg,0.346mmol)之THF/HMPA(v/v,10/1)(5.5mL)溶液中添加LDA(81.5mg,0.760mmol),30分鐘後，接著添加1,2-二溴 乙烷(97.4mg,0.518mmol)。然後反應混合物於室溫攪拌一夜，添加冰-水中止反應及分層。水相使用二氯甲烷/甲醇(v/v,10/1,20mL x 3)萃取。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/9)以提供3-(1-甲氧基羰基)環丙基-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯之黃色油(120mg,78%產率)。LC-MS(ESI)m/z：338[M+Na]+。
步驟2：依Int.E30 步驟3之相同製程，使用3-(1-甲氧基羰基)環丙基-1H-吲哚-1-羧酸第三丁基酯替代3-(2-甲氧基-1-甲基-2-側氧基-乙基)吲哚-1-羧酸第三丁基酯。LC-MS(ESI)m/z：238[M+Na]+。
Int.E32
Figure 109122604-A0202-12-0216-823
3,3,3-三氟-2-(1H-吲哚-3-基)丙酸
Figure 109122604-A0202-12-0216-824
步驟1：在激烈攪拌下，在3,3,3-三氟-2-側氧基-丙酸甲基酯(4.68g,29.96mmol)中添加吲哚(117mg,0.999mmol)。混合物於約1分鐘內固化，溶於DMF(40mL)中，及冷卻至0℃，接著滴加SOCl2(8.91g,74.91mmol)。所得混合物於相同溫度攪拌，直到LCMS監測到已轉化為止。在其中慢慢分批添加NaBH4(3.40g,89.89mmol)。混合物接著於0℃攪拌3小時，及在攪拌下倒至100mL飽和NH4Cl水溶液中。濾出所得固體，及濾液使用乙酸乙酯萃取(50mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水， 及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=0~20%)以提供3,3,3-三氟-2-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲基酯之黃色固體(6.5g,84%產率)。LC-MS(ESI)m/z：258[M+H]+。
步驟2：取含3,3,3-三氟-2-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲基酯(2.0g,7.78mmol)之濃HCl(12mL)與AcOH(60mL)混合溶劑溶液於激烈回流下攪拌16小時，冷卻至室溫，及真空濃縮。殘質經逆相層析法純化(H2O/MeOH=100/0~50/50)以提供3,3,3-三氟-2-(1H-吲哚-3-基)丙酸之灰白色粉末(1g,50%產率)。LC-MS(ESI)m/z：244[M+H]+。
Int.E33
Figure 109122604-A0202-12-0217-825
2-(3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0217-826
步驟1：在含3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(730mg,2.51mmol)之THF(20mL)溶液中添加含氫氧化鈉(3.01g,75.17mmol)之水(1.41mL)溶液。混合物於室溫攪拌16小時，使用1M HCl水溶液酸化，及使用EtOAc萃取(100mL x 3)。有機相使用鹽水(50mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供粗產物1-第三丁氧基羰基-3-甲基吲哚啉-3-羧酸之黃色油(620mg,85%產率)。LC-MS(ESI)m/z：222[M+H-56]+。
步驟2：於0℃在含1-第三丁氧基羰基-3-甲基吲哚啉-3-羧酸(630mg,2.27mmol)之DCM(15mL)混合物中慢慢添加草醯二氯(865.1mg,6.82mmol)，及添加N,N-二甲基甲醯胺(8.3mg,0.114mmol)。混合物於室溫攪拌16小時及真空濃縮。殘質(670mg,1.13mmol)溶於THF(10mL)及MeCN(5.00mL)，慢慢添加重氮甲基(三甲基)矽烷(258.75mg,2.27mmol)(2M乙醚溶液)至上述溶液中。反應混合物於N2下攪拌2小時，使用10%檸檬酸(10mL)中止反應，及分溶於DCM(50mL)與水(50mL)之間。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=0-10%)以提供3-(2-重氮乙醯基)-3-甲基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯之黃色油(200mg,56%產率)。
步驟3：在含3-(2-重氮乙醯基)-3-甲基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(200mg,0.664mmol)之甲醇(5mL)溶液中添加苯甲酸銀(76.0mg,0.332mmol)。反應混合物於室溫與N2下攪拌1.5小時，使用DCM(50mL)及水(50mL)稀釋。分離有機層，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=0-15%)以提供3-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)-3-甲基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯之無色油(100mg,42%產率)。LC-MS(ESI)m/z：250[M+H-56]+。
步驟4：取含3-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)-3-甲基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(100mg,0.278mmol)及HCl/EA(4M,1.5mL)之DCM(3mL)混合物於室溫攪拌2小時，及真空濃縮以提供粗產物2-(3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯，未進一步純化。LC-MS(ESI)m/z：206[M+H]+。
另一種合成法：
Figure 109122604-A0202-12-0219-827
步驟1：於0℃，以30分鐘時間，在含3-甲基吲哚啉-2-酮(20g,135.89mmol)之THF(200mL)溶液中添加NaH(6.52g,163.09mmol,60%懸浮於礦物油中)。反應混合物於0℃攪拌30分鐘，接著滴加二碳酸二-第三丁基酯(29.07g,133.18mmol)之THF(50mL)溶液。反應混合物再攪拌一小時，使用飽和NH4Cl水溶液(50mL)稀釋，及使用CH2Cl2萃取(100mL x 2)。合併之有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=9/1)以提供3-甲基-2-側氧基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(30g,74%產率)之黃色油。LC-MS(ESI)m/z：192[M+H]+。
步驟2：於0℃，以30分鐘時間，在含3-甲基-2-側氧基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(30g,103.12mmol)之THF(300mL)溶液中添加NaH(4.95g,123.74mmol,60%礦物油中)。反應混合物於0℃攪拌30分鐘，接著滴加2-溴乙酸甲基酯(18.93g,123.74mmol)。反應混合物攪拌一小時，使用飽和NH4Cl水溶液(100mL)中止反應，及使用CH2Cl2萃取(200mL x 2)。合併之有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=8/2)以提供3-(2-甲氧基-2-側 氧基乙基)-3-甲基-2-側氧基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(28g,83%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：264[M+H-56]+。
步驟3：取含4M HCl之1,4-二
Figure 109122604-A0202-12-0220-394
烷(35mL)與3-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)-3-甲基-2-側氧基吲哚啉-1-羧酸第三丁基酯(28g,87.68mmol)之CH2Cl2(200mL)混合物於室溫攪拌2小時及真空濃縮。殘質分溶於CH2Cl2(200mL)與飽和NaHCO3水溶液(50mL)之間。分離之水層使用CH2Cl2萃取(50mL x 3)，合併之有機層經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供2-(3-甲基-2-側氧基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(17.6g,82%產率)。LC-MS(ESI)m/z：220[M+H]+。
步驟4：取含2-(3-甲基-2-側氧基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(15.6g,71.16mmol)及勞森試劑(Lawesson’s Rreagent)(14.71g,36.38mmol)之甲苯(220mL)混合物於130℃攪拌1.5小時及真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=80：20)以提供2-(3-甲基-2-硫酮基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(15.5g,74%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：236[M+H]+。
步驟5：於0℃，以1小時時間，在含2-(3-甲基-硫酮基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(9.5g,40.37mmol)及氯化鎳(10.46g,80.75mmol)之混合THF(70mL)與甲醇(70mL)混合物中分批添加NaBH4(9.16g,242.24mmol)。所得混合物攪拌10分鐘，及通過矽藻土墊過濾。固體濾餅使用MeOH(100mL)洗滌，取濾液真空濃縮。殘質溶於EA(200mL)，使用水(60mL x 3)洗滌。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(CH2Cl2：甲醇=95：5)以提供2-(3- 甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(6.5g,75%產率)之黃色油。LC-MS(ESI)m/z：206[M+H]+。
Int.E34
Figure 109122604-A0202-12-0221-828
2-(5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
依Int.E33之相同製程，使用5-氟-3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯替代3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯。LC-MS(ESI)m/z：224[M+H]+。
Int.E35
Figure 109122604-A0202-12-0221-829
2-(6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
依Int.E33之相同製程，使用6-氟-3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯替代3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯。LC-MS(ESI)m/z：224[M+H]+。
Int.E36
Figure 109122604-A0202-12-0221-830
2-(5,6-二氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0222-831
步驟1&2&3：依Int.E26 步驟1&2&3之相同製程，使用5,6-二氟-1H-吲哚替代4-甲氧基-1H-吲哚。LC-MS(ESI)m/z：258[M+H-56]+。
步驟4：於-78℃，以20分鐘時間，在含5,6-二氟吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(910mg,2.90mmol)之無水THF(60mL)溶液中添加碘甲烷(494.7mg,3.49mmol)，及於-78℃，以45分鐘時間，在N2保護下，添加1M KHMDS(3.2mL)。反應混合物於-78℃攪拌2小時，使用飽和NH4Cl水溶液(50mL)中止反應及分層。水層使用EA萃取(50mL x 3)，及合併之有機層使用鹽水(40mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(10~20%EA/PE)以提供5,6-二氟-3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯之無色油(810mg,82%產率)。LC-MS(ESI)m/z：272[M+H-56]+。
步驟5&6&7&8：依Int.E33之相同製程，使用5-氟-3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯替代3-甲基吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯。LC-MS(ESI)m/z：242[M+H]+。
Int.E37
Figure 109122604-A0202-12-0223-832
3-(羥基甲基)吲哚啉-3-羧酸乙基酯
Figure 109122604-A0202-12-0223-833
步驟1：在含吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-甲基酯(300mg,1.08mmol)之乙醇(5mL)溶液中添加多聚甲醛(48.72mg,1.62mmol)及K2CO3(448.53mg,3.25mmol)。反應混合物於室溫攪拌16小時及過濾。取濾液真空濃縮以提供粗產物3-(羥基甲基)吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-乙基酯(330mg,99%產率)。LC-MS(ESI)m/z：222[M+H-100]+。
步驟2：於0℃，在含吲哚啉-1,3-二羧酸1-(第三丁基)酯3-乙基酯(300mg,1.08mmol)之DCM(5mL)溶液中添加4M HCl之二
Figure 109122604-A0202-12-0223-395
烷溶液(3mL)。反應混合物於室溫攪拌16小時，使用飽和NaHCO3水溶液(5mL)中和至pH ~ 8，及使用DCM/MeOH(v/v,10/1,20mL x 3)萃取。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供粗產物3-(羥基甲基)吲哚啉-3-羧酸乙基酯(239mg,89.9%產率)。LC-MS(ESI)m/z：222[M+H]+。
Int.E38
Figure 109122604-A0202-12-0223-834
2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯
Figure 109122604-A0202-12-0224-835
步驟1：取含2-亞環己基乙酸乙基酯(5g,29.72mmol)、N-(甲氧基甲基)-1-苯基-N-(三甲基矽基甲基)甲胺(14.11g,59.44mmol)及氟化鋰(2.31g,89.16mmol)之MeCN(50mL)混合物於60℃攪拌48小時及真空濃縮。殘質溶於EA(100mL)，使用預冷之K2CO3水溶液(10%,100mL x 2)、飽和CuSO4水溶液(100mL x 3)及鹽水(100mL)洗滌。有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經逆相層析法純化(0.03%NH4HCO3/MeOH)以提供2-苯甲基-2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯(5.55g,52.7%產率，85%純度)之淡黃色油。LC-MS(ESI)m/z：302[M+H]+。
步驟2：在含2-苯甲基-2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯(2.65g,8.79mmol)之甲醇(30mL)溶液中添加二羥基鈀(679.1mg,4.84mmol)。混合物於40℃與氫蒙氣(14psi)下攪拌24小時及過濾。取濾液真空濃縮以提供粗產物2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯。LC-MS(ESI)m/z：212[M+H]+。
Int.E39
Figure 109122604-A0202-12-0224-836
8-氧雜-2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯
依Int.E38之相同製程，使用2-四氫哌喃-4-亞基乙酸乙基酯替代2-環亞己基乙酸乙基酯。LC-MS(ESI)m/z：214[M+H]+。
Int.E40
Figure 109122604-A0202-12-0225-837
2-氮雜螺[4.4]壬烷-4-羧酸乙基酯
Figure 109122604-A0202-12-0225-838
步驟1：於0℃，在含氫化鈉(2.08g,52.04mmol,60%勻散礦物油中)之乙醚(120mL)攪拌懸浮液中添加2-二乙氧基磷醯基乙酸乙基酯(11.64g,51.94mmol)。所得混合物攪拌5分鐘，接著添加環戊酮(4.25g,50.53mmol)之乙醚(10mL)溶液。反應混合物於25℃攪拌4小時，於0℃使用飽和氯化銨水溶液(30mL)中止反應，加水(100mL)稀釋，及使用乙醚萃取(50mL x 3)。合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(石油醚/乙醚=10/1)以提供2-亞環戊基乙酸乙基酯之淡黃色油(6.0g,73%產率)。LC-MS(ESI)m/z：155[M+H]+。
步驟2&3：依Int.E38之相同製程，使用2-亞環戊基乙酸乙基酯替代2-亞環己基乙酸乙基酯。LC-MS(ESI)m/z：198[M+H]+。
中間物12
Figure 109122604-A0202-12-0225-839
3-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
Figure 109122604-A0202-12-0226-840
步驟1：在N2下，在含無水AlCl3(3.40g,25.50mmol)之無水DCM(50mL)懸浮液中添加5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.01g,5.10mmol)。混合物於室溫攪拌1小時，及滴加AcCl(2.00g,25.50mmol,1.8mL)。所得混合物攪拌30分鐘，冷卻至0℃，小心添加MeOH中止反應，直到溶液轉呈清澈為止。混合物濃縮，及殘質使用H2O(30mL)稀釋，使用NaOH水溶液(1N)調整至pH ~4，及使用乙酸乙酯萃取(30mL x 3)。合併之有機層使用鹽水(30mL x 2)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾及濃縮。殘質於EA中音波處理及過濾以提供1-(5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙烷-1-酮之淡黃色固體(0.87g,71%產率)。LC-MS(ESI)m/z：239[M+H]+。
步驟2：於0℃，在含1-(5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙烷-1-酮(200mg,0.84mmol)之異丙基醇(7mL)攪拌溶液中分批添加NaBH4(158.24mg,4.18mmol)。反應混合物於83℃回流24小時，冷卻至0℃，及加水稀釋(15mL)。所得混合物使用乙酸乙酯萃取(30mL x 3)。有機層使用鹽水(20mL x 2)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾，及濃縮。 殘質經製備性-TLC純化(PE/EA=3/2 v/v)以提供5-溴-3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶之灰白色固體(70mg,33%產率)。LC-MS(ESI)m/z：225[M+H]+。
步驟3：在含5-溴-3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(200mg,888.55umol)及4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-聯(1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷)(270.77mg,1.07mmol)之1,4-二
Figure 109122604-A0202-12-0227-396
烷(6mL)溶液中添加CH3COOK(174.41mg,1.78mmol)及Pd(dppf)Cl2．CH2Cl2(72.56mg,88.86umol)。混合物於110℃及氮蒙氣下攪拌一夜，冷卻至室溫，及過濾。取濾液濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=2/1 v/v)，進一步於PE(10mL)中音波處理以提供3-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶之白色固體(40mg,9%產率)。LC-MS(ESI)m/z：273[M+H]+。
中間物13
Figure 109122604-A0202-12-0227-841
(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure 109122604-A0202-12-0227-842
步驟1：取含4-溴-2-碘-苯胺(2.0g,6.71mmol)、二甲基膦氧化物(628.76mg,8.06mmol)、Pd(OAc)2(150.71mg,671.33umol)、 Xantphos(776.86mg,1.34mmol)、及K3PO4(2.85g,13.41mmol)之DMF(20mL)混合物於N2及60℃攪拌一夜。冷卻至室溫後，混合物過濾，及使用EA(40mL)洗滌。濾液使用H2O(40mL)稀釋，及使用EA萃取(50mL x 30)。有機層使用鹽水(40mL x 3)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，過濾，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=60/1 v/v)以提供(2-胺基-5-溴苯基)二甲基膦氧化物之黃色固體(1.6g,96%產率)。LC-MS(ESI)m/z：248[M+H]+。
步驟2：取含(2-胺基-5-溴苯基)二甲基膦氧化物(1.53g,6.17mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(1.88g,7.41mmol)、Pd(dppf)Cl2 -CH2Cl2(503.70mg,616.80umol)、及KOAc(1.21g,12.34mmol)之二
Figure 109122604-A0202-12-0228-397
烷(20mL)混合物於N2與100℃攪拌5小時。冷卻至室溫後，混合物過濾，及使用EA(150mL)洗滌。有機層濃縮，及經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=20/1 v/v)以提供(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯基)二甲基膦氧化物之黑色油(1.16g,64%產率)。LC-MS(ESI)m/z：296[M+H]+。
中間物14
Figure 109122604-A0202-12-0228-843
2-氯-3-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
Figure 109122604-A0202-12-0229-844
取含5-溴-2-氯-3-乙基-2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(50mg,0.19mmol)、4,4,6,6-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼雜環己烷(73mg,0.27mmol)、無水AcOK(56mg,0.58mmol)、及Pd(dppf)Cl2．DCM(15mg,0.02mmol)之無水二
Figure 109122604-A0202-12-0229-398
烷(1.5mL)混合物於氮氣保護之微波條件下，於100℃攪拌3小時。冷卻至室溫後，混合物過濾，及取濾液濃縮以提供粗產物2-氯-3-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(50mg)，未進一步純化即用於下一個步驟。LC-MS(ESI)m/z：307[M+H]+。
中間物15
Figure 109122604-A0202-12-0229-845
6-溴-2-碘吡啶-3-胺
Figure 109122604-A0202-12-0229-846
在含6-溴吡啶-3-胺(1g,5.68mmol)及硫酸銀(1.77g,5.68mmol)之乙醇(20mL)懸浮液中添加碘(1.44g,5.68mmol)，及反應混合物於室溫攪拌一夜，使用PE(20mL)稀釋，及過濾。取濾液濃縮，及殘質於EA(30mL)中音波處理。過濾收集固體及乾燥以提供6-溴-2-碘-吡啶-3-胺之褐色固體(380mg,22%產率)。LC-MS(ESI)m/z：299[M+H]+。
中間物16
Figure 109122604-A0202-12-0230-847
(2-溴-4-碘苯基)(甲基)胺甲酸第三丁基酯
Figure 109122604-A0202-12-0230-848
步驟1：在含2-溴-4-碘-苯胺(1g,3.36mmol)之DCM(10mL)溶液中添加TEA(339.66mg,467.85uL)、DMAP(410.08mg,3.36mmol)、及Boc2O(732.58mg,3.36mmol)。混合物於室溫攪拌5小時，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1 v/v)以提供N-(2-溴-4-碘-苯基)-N-第三丁氧基羰基-胺甲酸第三丁基酯之白色固體(732.58mg,43%產率)。
步驟2：在含N-(2-溴-4-碘-苯基)-N-第三丁氧基羰基-胺甲酸第三丁基酯(800mg,1.61mmol)之甲醇(20mL)溶液中添加碳酸鉀(665.87mg,4.82mmol)。混合物於70℃攪拌2小時，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1 v/v)以提供N-(2-溴-4-碘-苯基)胺甲酸第三丁基酯之白色固體(462mg,72%產率)。
步驟3：在含N-(2-溴-4-碘-苯基)胺甲酸第三丁基酯(400mg,1.00mmol)之DMF(10mL)溶液中添加碳酸鉀(277.79mg,2.01mmol)及碘甲烷(213.96mg,1.51mmol)。混合物於40℃攪拌一夜。冷卻至室溫後，混合物使用H2O(30mL)稀釋，及使用EA萃取(30mL x 3)。有機層使用鹽水(20mL x 3)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1 v/v)以提供N-(2-溴-4-碘-苯基)-N-甲 基-胺甲酸第三丁基酯之黃色固體(400mg,96%產率)。LC-MS(ESI)m/z：356[M+H-55]+。
中間物17
Figure 109122604-A0202-12-0231-849
N-(2-溴-4-碘苯基)乙醯胺
Figure 109122604-A0202-12-0231-850
在含2-溴-4-碘-苯胺(1.0g,3.36mmol)之DCM(10mL)攪拌溶液中添加三乙基胺(680.00mg,6.72mmol,0.94mL)，接著添加乙酸酐(411.63mg,4.03mmol,381.14uL)。混合物於室溫攪拌一夜，於40℃加熱4小時。冷卻至室溫後，混合物濃縮以提供N-(2-溴-4-碘-苯基)乙醯胺之灰色固體(1.1g,96%產率)。LC-MS(ESI)m/z：340[M+H]+。
中間物18
Figure 109122604-A0202-12-0231-851
1-(2-溴-4-碘苯基)吡咯啶
Figure 109122604-A0202-12-0231-852
取含2-溴-4-碘-苯胺(1.0g,3.36mmol)、1,4-二溴丁烷(869.69mg,4.03mmol)、及碳酸鉀(927.84mg,6.71mmol)之DMF(20mL)混合物於100℃攪拌一夜。冷卻至室溫後，混合物倒至水(40mL)中，及使用EA萃取(50mL x 3)。有機層使用鹽水(30mL x 3)洗滌，及經無水 硫酸鈉脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE,100%v/v)以提供1-(2-溴-4-碘-苯基)吡咯啶之黃色油(200mg,17%產率)。LC-MS(ESI)m/z：352[M+H]+。
中間物19
Figure 109122604-A0202-12-0232-853
2-溴-3-氟-6-碘苯胺
Figure 109122604-A0202-12-0232-854
於室溫，在含2-溴-3-氟-苯胺(200mg,1.05mmol)之DMF(2mL)溶液中滴加含NIS(236.81mg,1.05mmol)之DMF(2mL)溶液。反應混合物於室溫攪拌3小時，使用EA(30mL)稀釋，及使用鹽水(20mL x 2)洗滌。有機層經無水Na2SO4脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=20/1 v/v)以提供2-溴-3-氟-6-碘-苯胺之褐色固體(330mg,99%產率)。LC-MS(ESI)m/z：316[M+H]+。
中間物20
Figure 109122604-A0202-12-0232-855
2-溴-4-碘苯甲酸甲基酯
Figure 109122604-A0202-12-0232-856
在含2-溴-4-碘-苯甲酸(1g,3.06mmol)、碳酸鉀(845.55mg,6.12mmol)之DMF(15mL)溶液中添加碘甲烷(651.27mg,4.59 mmol)。反應混合物於室溫攪拌一夜，使用H2O(50mL)中止反應，及使用EA萃取(25mL x 2)。合併之有機層使用鹽水(30mL x 3)洗滌，經無水硫酸鈉脫水脫水，過濾，及濃縮以提供2-溴-4-碘-苯甲酸甲基酯之褐色油(1g,95%產率)。LC-MS(ESI)m/z：341[M+H]+。
中間物21
Figure 109122604-A0202-12-0233-857
2-溴-1-(二氟甲基)-4-碘苯
Figure 109122604-A0202-12-0233-858
於0℃，在含2-溴-4-碘苯甲醛(200mg,0.64mmol)之DCM(6mL)溶液中添加BAST(284mg,1.29mmol)。混合物於室溫攪拌2小時，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=20/1 v/v)以提供2-溴-1-(二氟甲基)-4-碘苯之白色固體(180mg,84%產率)。
中間物22
Figure 109122604-A0202-12-0233-859
2-溴-3-氟-4-碘-1-甲基苯
Figure 109122604-A0202-12-0233-860
於N2及-70℃，以10分鐘時間，在含2-溴-1-氟-3-甲基-苯(500mg,2.65mmol)之無水THF(5mL)溶液中滴加LDA(2N THF溶液，2mL,4.0mmol)，混合物於-70℃攪拌30分鐘。取含I2(2.01g,7.94mmol) 之無水THF(2mL)溶液滴加至上述-70℃混合物中，所得混合物於-70℃攪拌3小時。回升至室溫後，混合物倒至飽和NH4Cl水溶液(20mL)中，使用EA萃取(20mL x 2)。合併之有機層使用鹽水(30mL x 2)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾及濃縮。殘質經製備性-TLC純化(PE,100%v/v)以提供3-溴-2-氟-1-碘-4-甲基-苯之無色油(110mg,13%產率)。
中間物24
Figure 109122604-A0202-12-0234-861
2,6-二溴-3-甲基吡啶
於-5℃，在含6-溴-5-甲基-吡啶-2-胺(100mg,0.535mmol)之48%氫溴酸水溶液(3mL)中滴加溴(69.2mg,0.855mmol)。取含亞硝酸鈉(99.6mg,1.44mmol)之水(2mL)溶液於5℃滴加至上述混合物中。所得混合物於室溫攪拌3小時，冷卻至-5℃，使用KOH(100mg)之水溶液(5mL)中止反應，及使用EA萃取(20mL x 2)。合併之有機層使用鹽水(20mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-TLC純化(PE/EA=10/1 v/v)以提供2,6-二溴-3-甲基-吡啶之白色固體(20mg,15%產率)。LC-MS(ESI)m/z：250[M+H]+。
中間物25
Figure 109122604-A0202-12-0234-862
2-(2-溴-4-碘苯基)
Figure 109122604-A0202-12-0234-399
唑
Figure 109122604-A0202-12-0234-863
步驟1：在含2-溴-4-碘-苯甲酸(1g,3.06mmol)之DMF(10mL)之攪拌溶液中添加HATU(1.74g,4.59mmol)及DIPEA(1.19g,9.18mmol,1.60mL)。攪拌10分鐘後，添加2,2-二甲氧基乙胺(418.08mg,3.98mmol,433.25uL)至上述混合物中。混合物攪拌一夜，使用EA(20mL)稀釋，及使用NaHCO3水溶液(30mL x 2)洗滌。有機層經無水硫酸鈉脫水，過濾，及真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1 v/v)以提供2-溴-N-(2,2-二甲氧基乙基)-4-碘-苯甲醯胺之黃色固體(1g,2.42mmol)。LC-MS(ESI)m/z：382[M-MeO]+。
步驟2：取含2-溴-N-(2,2-二甲氧基乙基)-4-碘-苯甲醯胺(1g,2.42mmol)之伊頓試劑(Eaton，sreagent)(10mL)溶液於130℃攪拌一夜。冷卻至室溫後，溶液倒至冰-水(60mL)中。所得懸浮液過濾及乾燥以提供2-(2-溴-4-碘-苯基)
Figure 109122604-A0202-12-0235-400
唑之灰色固體(840mg,2.40mmol,99%產率)。LC-MS(ESI)m/z：350[M+H]+。
中間物26
Figure 109122604-A0202-12-0235-864
1-(2-溴-4-碘苯基)-N,N-二甲基甲胺
Figure 109122604-A0202-12-0235-865
取含2-溴-4-碘苯甲醛(300mg,0.94mmol)、二甲基胺(2M THF溶液，0.58mL,1.16mmol)、及AcOH(5滴)之MeOH(8mL)混合物於N2及室溫攪拌1小時。然後添加NaBH3CN(90mg,1.45mmol)至上述 混合物中，所得混合物於40℃攪拌16小時。冷卻至室溫後，混合物濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE 100%v/v，及接著PE/EA=5/1，v/v)以提供1-(2-溴-4-碘苯基)-N,N-二甲基甲胺之黃色油(10mg,29%產率)。LC-MS(ESI)m/z：340[M+H]+。
中間物27
Figure 109122604-A0202-12-0236-866
1-(2-溴-4-碘苯基)吡咯啶-2-酮
Figure 109122604-A0202-12-0236-867
步驟1：於-20℃，在含2-溴-4-碘苯胺(600mg,2.0mmol)之DCM(10mL)混合物中滴加吡啶(175mg,2.2mmol)及4-氯丁醯氯(312mg,2.2mmol)。反應混合物於-20℃攪拌3小時，加水(20mL)稀釋，使用HCl水溶液(2N)洗滌，及使用EA萃取(30mL x 3)。有機層經無水Na2SO4脫水，過濾，及濃縮以提供N-(2-溴-4-碘苯基)-4-氯丁醯胺之黑色固體(700mg,86%產率)。LC-MS(ESI)m/z：402[M+H]+。
步驟2：於0℃，在含N-(2-溴-4-碘苯基)-4-氯丁醯胺(700mg,1.74mmol)之無水THF(10mL)溶液中添加NaH(60%懸浮於油中，138mg,3.48mmol)。混合物於N2及室溫攪拌2小時，使用冷水(20mL)稀釋，及使用EA萃取(30mL x 3)。有機層使用鹽水(20mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE 100%v/v， 及接著PE/EA=5/1，v/v)以提供1-(2-溴-4-碘苯基)吡咯啶-2-酮之白色固體(500mg,78%產率)。LC-MS(ESI)m/z：366[M+H]+。
中間物28
Figure 109122604-A0202-12-0237-868
2-溴-4-碘苯甲醯胺
Figure 109122604-A0202-12-0237-869
取含2-溴-4-碘-苯甲酸甲酯(500mg,1.47mmol)之28%氫氧化銨(5mL)混合物於100℃，於密封管中攪拌5小時，冷卻至室溫，及過濾。取濾液濃縮以提供2-溴-4-碘-苯甲醯胺之白色固體(400mg,84%產率)。LC-MS(ESI)m/z：326[M+H]+。
中間物29
Figure 109122604-A0202-12-0237-870
N-(3,5-二溴苯基)乙醯胺
Figure 109122604-A0202-12-0237-871
於0℃，在含3,5-二溴苯胺(200mg,797.07umol)之DCM(5mL)溶液中添加TEA(241.97mg,2.39mmol,333.29uL)及乙醯氯(93.85mg,1.20mmol,72.75uL)。混合物於室溫攪拌2小時，使用H2O(20mL)稀釋，及使用DCM萃取(30mL x 3)。合併之萃液經無水Na2SO4脫水，過濾，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1 v/v)以 提供N-(3,5-二溴苯基)乙醯胺之黃色固體(185mg,79%產率)。LC-MS(ESI)m/z：292[M+H]+。
中間物30
Figure 109122604-A0202-12-0238-872
N-(4-溴-2-碘苯基)氧雜環丁烷-3-胺
Figure 109122604-A0202-12-0238-873
步驟1：取含4-溴苯胺(4g,23.25mmol)、氧雜環丁烷-3-酮(2.18g,30.23mmol,1.94mL)、無水Na2SO4(3.30g,23.25mmol)之THF(20mL)混合物於室溫攪拌1小時。然後於室溫添加NaBH(OAc)3(7.39g,34.88mmol)至上述混合物中。混合物於室溫攪拌16小時，加水稀釋(50mL)，及使用EA萃取(100mL x 2)。合併之有機層使用飽和NaHCO3水溶液(30mL x 3)及鹽水(20mL x 2)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=2/1 v/v)以提供N-(4-溴苯基)氧雜環丁烷-3-胺之白色固體(3.4g,64%產率)。LC-MS(ESI)m/z：228[M+H]+。
步驟2：於室溫，在含N-(4-溴苯基)氧雜環丁烷-3-胺(1.5g,6.58mmol)之DMF(8mL)溶液中滴加NIS(1.48g,6.58mmol)之DMF(3mL)溶液。混合物於室溫攪拌3小時，使用飽和NaHSO3水溶液(10mL)中止反應，及使用EA萃取(60mL x 2)。合併之有機層使用鹽水(20mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化 (EA/PE=4/1 v/v)以提供粗產物N-(4-溴-2-碘-苯基)氧雜環丁烷-3-胺之黃色固體(630mg,30%產率，50%純度)。LC-MS(ESI)m/z：354[M+H]+。
實例化合物
實例1
Figure 109122604-A0202-12-0239-874
(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物
步驟1：於0℃，在含Int.E1(200mg,1.04mmol)之DMF(5mL)溶液中添加氫化鈉(60%勻散礦物油中，50mg,1.24mmol)，混合物於0℃攪拌30分鐘。在上述反應混合物中添加0℃之2,4,5-三氯嘧啶(227.9mg,1.24mmol)，所得混合物接著在室溫攪拌1小時，冷卻至0℃，使用冰-H2O(20mL)中止反應，及使用EA萃取(30mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%HCOOH)以提供(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物之白色固體(110mg,31%產率)。LC-MS(ESI)m/z：340[M+H]+。
步驟2：在含Int.W1(25.4mg,0.13mmol)之2-甲氧基乙醇(3mL)溶液中添加(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物(30mg,0.09mmol)及HCl之EtOH溶液(2N,0.2mL)。所得混合物於120℃攪拌20小時及真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法(DCM/MeOH =15/1 v/v)及製備性-HPLC(MeCN/0.1%HCOOH)純化以提供(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)二甲基膦氧化物之黃色固體(8.3mg,19%產率)。LC-MS(ESI)m/z：496[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 1.92(s,3H),1.95(s,3H),2.54(s,3H),2.90-2.97(m,4H),3.59(s,2H),3.91(s,3H),6.83(s,1H),7.35-7.40(m,2H),7.86-7.88(m,1H),7.91-7.94(m,1H),7.97(s,1H),8.22(d,J=4.8Hz,1H),8.65(s,1H)。
實例2
Figure 109122604-A0202-12-0240-875
N-(5-氯-4-(1H-吲哚-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例1之相同製程，於步驟1中使用吲哚替代Int.E1。LC-MS(ESI)m/z：420[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.79(s,3H),3.07-3.10(m,2H),3.26-3.27(m,2H),3.94(s,5H),6.75(d,J=3.6Hz,1H),6.89(s,1H),7.21-7.30(m,2H),7.65(d,J=8.4Hz,1H),7.83(d,J=3.6Hz,1H),7.81(d,J=8.4Hz,1H),8.13(s,1H),8.60(s,1H)。
實例3
Figure 109122604-A0202-12-0240-876
N-(4-(1H-吲哚-1-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例1之相同製程，於步驟1中使用吲哚啉及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶替代Int.E1及2,4,5-三氯嘧啶。LC-MS(ESI)m/z：420[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.55(s,3H),2.92-2.96(m,4H),3.19(t,J=8.0Hz,2H),3.45(s,2H),3.88(s,3H),4.16(t,J=8.0Hz,2H),6.78(s,1H),7.02-7.07(m,1H),7.17(d,J=7.2Hz,1H),7.31(d,J=7.2Hz,1H),7.55(d,J=8.0Hz,1H),7.90(s,1H),8.49(s,1H)。
實例4
Figure 109122604-A0202-12-0241-877
N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
步驟1：在含2,4,5-三氯嘧啶(1g,5.45mmol)之DMF(20mL)溶液中添加碳酸鉀(1.51g,10.90mmol)及吲哚啉(649.7mg,5.45mmol)。混合物於80℃攪拌一夜，冷卻至室溫，使用H2O(50mL)稀釋，及使用EA萃取(50mL x 2)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/30,v/v)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉之白色固體(900mg,61%產率)。LC-MS(ESI)m/z：266[M+H]+。
步驟2：依條件B1(如實例1 步驟2舉例說明)，使用Int.W1(30mg,0.16mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(41.5mg,0.16 mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=10/1)後以提供N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺之黃色固體(35mg,53%產率)。LC-MS(ESI)m/z：422[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 2.33(s,3H),2.59(t,J=5.2Hz,2H),2.78(t,J=5.2Hz,2H),3.13(t,J=8.0Hz,2H),3.31(s,2H),3.78(s,3H),4.27(t,J=8.4Hz,2H),6.75(s,1H),6.93(t,J=7.6Hz,1H),7.08(t,J=7.6Hz,1H),7.25(d,J=6.8Hz,1H),7.35(d,J=8.0Hz,1H),7.56(s,1H),7.96(s,1H),8.24(s,2H)。
實例5
Figure 109122604-A0202-12-0242-878
N-(5-氯-4-(3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例4之相同製程，於步驟1中使用1,2,3,4-四氫異喹啉替代吲哚啉。C-MS(ESI)m/z：436[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.66(s,3H),2.99-3.05(m,6H),3.84(s,2H),3.89(s,3H),4.00(t,J=6.0Hz,2H),4.87(s,2H),6.79(s,1H),7.19(s,4H),7.99(s,1H),8.10(s,1H)。
實例6
Figure 109122604-A0202-12-0242-879
N-(5-氯-4-(3,4-二氫喹啉-1(2H)-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例4之相同製程，於步驟1中使用1,2,3,4-四氫喹啉替代吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：436[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 1.99-2.06(m,2H),2.51(s,3H),2.80-2.86(m,4H),2.91(t,J=6.0Hz,2H),3.44(s,2H),3.87-3.90(m,5H),6.73(s,1H),6.85(d,J=8.0Hz,1H),6.99-7.03(m,1H),7.06-7.10(m,1H),7.19(d,J=8.0Hz,1H),7.87(s,1H),8.14(s,1H)。
實例7
Figure 109122604-A0202-12-0243-880
N-(5-氯-4-(2,3-二氫-4H-苯并[b][1,4]
Figure 109122604-A0202-12-0243-401
嗪-4-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例4之相同製程，於步驟1中使用3,4-二氫-2H-苯并[b][1,4]
Figure 109122604-A0202-12-0243-402
嗪替代吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：438[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ (ppm)2.48(s,3H),2.77(t,J=6.0Hz,2H),2.88(t,J=6.0Hz,2H),3.31(s,2H),3.87(s,3H),3.96(t,J=4.4Hz,2H),4.28(t,J=4.4Hz,2H),6.71(s,1H),6.83-6.87(m,1H),6.92-7.03(m,3H),7.79(s,1H),8.24(s,1H)。
實例8
Figure 109122604-A0202-12-0244-881
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧醯胺
步驟1：依條件A2(如實例4 步驟1舉例說明)，使用Int.E2(200mg,1.06mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(194.90mg,1.06mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/1,v/v)後以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧醯胺之白色固體(165mg,46%產率)。LC-MS(ESI)m/z：335[M+H]+。
步驟2：在含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧醯胺(52mg,0.16mmol)及Int.W1(29.8mg,0.16mmol)之異丙醇(2mL)溶液中添加三氟乙酸(53.1mg,0.48mmol)。混合物於N2及100℃攪拌20小時，冷卻至室溫，及經製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%HCOOH)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-3-羧醯胺之黃色固體(7.0mg,9%產率)。LC-MS(ESI)m/z：491[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ(ppm)2.63(s,3H),3.01-3.05(m,4H),3.22(s,6H),3.71(s,2H),3.91(s,3H),6.85(s,1H),7.31-7.36(m,2H),7.78-7.81(m,2H),8.02(s,1H),8.12(s,1H),8.63(s,1H)。
實例9
Figure 109122604-A0202-12-0245-882
N-(4-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例8之相同製程，於步驟1中使用1H-苯并[d]咪唑替代Int.E2。LC-MS(ESI)m/z：421[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.87(s,3H),3.12(t,J=6.8Hz,2H),3.38(t,J=6.8Hz,2H),3.93(s,3H),4.06(s,2H),6.91(s,1H),7.41-7.44(m,2H),7.78-7.81(m,1H),7.85-7.88(m,1H),8.03(s,1H),8.69(s,1H),8.79(s,1H)。
實例10
Figure 109122604-A0202-12-0245-883
N-(4-(1H-吲哚-1-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
步驟1：依條件A1(如實例1 步驟1舉例說明)，使用1H-吲哚(349.9mg,3.0mmol)及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(650.9mg,3.0mmol)，經製備性-HPLC純化後以提供1-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚之黃色固體(88mg,7%產率)。LC-MS(ESI)m/z：298[M+H]+。
步驟2：在含1-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚(20mg,0.067mmol)及Int.W1(15.4mg,0.067mmol)之異丙醇(3mL)溶液中添加TsOH．H2O(11.6mg,0.067mmol)。混合物於100℃攪拌一夜，冷 卻至室溫，使用飽和NaHCO3水溶液鹼化至pH ~8，使用DCM萃取(10mL x 3)。有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=10/1 v/v)以提供N-(4-(1H-吲哚-1-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺之白色固體(17mg,55%產率)。LC-MS(ESI)m/z：454[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.56(s,3H),2.96-2.99(m,4H),3.60(brs,2H),3.91(s,3H),6.73(d,J=3.6Hz,1H),6.85(s,1H),7.20-7.28(m,2H),7.48(d,J=2.8Hz,1H),7.63(d,J=8.4Hz,1H),7.89(d,J=8.0Hz,1H),7.97(s,1H),8.83(s,1H)。
實例11
Figure 109122604-A0202-12-0246-884
N-(5-氯-4-(3-氟-1H-吲哚-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例10之相同製程，於步驟1中使用Int.E3及2,4,5-三氯嘧啶替代1H-吲哚及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。LC-MS(ESI)m/z：438[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.79(s,1H),8.63(s,1H),7.91(d,J=2.4Hz,1H),7.83(d,J=6.8Hz,1H),7.64(dd,J=6.0,2.4Hz,1H),7.37(s,1H),7.33-7.17(m,2H),6.73(d,J=55.3Hz,1H),3.96-3.68(m,3H),3.33(s,2H),2.79(t,J=5.6Hz,2H),2.55(t,J=5.9Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例80
Figure 109122604-A0202-12-0247-885
N-(5-氯-4-(3-(甲基磺醯基)-1H-吲哚-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例10之相同製程，於步驟1中使用Int.E8及2,4,5-三氯嘧啶替代1H-吲哚及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。LC-MS(ESI)m/z：498[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.00(s,1H),8.74(s,1H),8.42(s,1H),7.94-7.85(m,1H),7.79-7.72(m,1H),7.41(dd,J=6.1,3.1Hz,2H),7.33(s,1H),6.79(s,1H),3.79(s,3H),3.34(s,2H),3.30(s,3H),2.77(d,J=5.8Hz,2H),2.54(d,J=5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例81
Figure 109122604-A0202-12-0247-886
N-(5-氯-4-(3-(甲基磺醯基)吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例10之相同製程，於步驟1中使用Int.E9及2,4,5-三氯嘧啶替代1H-吲哚及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。LC-MS(ESI)m/z：500[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.31(s,1H),8.12(s,1H),7.49(d,J=6.9Hz,2H),7.41(d,J=8.1Hz,1H),7.27(t,J=7.7Hz,1H),7.06(t,J=7.3Hz,1H),6.75(s,1H),5.06(d,J=7.5Hz,1H),4.72(dd,J=12.4,9.5Hz,1H),4.58(dd,J=12.5,2.6Hz,1H),3.77(s,3H),3.28- 3.21(m,2H),2.89(s,3H),2.77(d,J=5.5Hz,2H),2.55(t,J=5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例82
Figure 109122604-A0202-12-0248-887
N-(5-氯-4-(3-((甲基磺醯基)甲基)-1H-吲哚-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例10之相同製程，於步驟1中使用Int.E11及2,4,5-三氯嘧啶替代1H-吲哚及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。LC-MS(ESI)m/z：512[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.78(s,1H),8.66(s,1H),7.98(s,1H),7.80(s,2H),7.42(s,1H),7.25(dd,J=6.0,3.1Hz,2H),6.80(s,1H),4.71(s,2H),3.79(s,3H),3.33(s,2H),2.95(s,3H),2.78(s,2H),2.55(d,J=5.6Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例83
Figure 109122604-A0202-12-0248-888
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-磺醯胺
依實例10之相同製程，於步驟1中使用Int.E15及2,4,5-三氯嘧啶替代1H-吲哚及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。LC-MS(ESI)m/z：499[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.69(d,J=20.3Hz,1H), 8.47(s,1H),7.96(s,1H),7.71(dd,J=5.7,3.1Hz,1H),7.53(dd,J=6.1,3.1Hz,1H),7.16(s,2H),7.12(dd,J=6.8,3.7Hz,3H),6.56(s,1H),3.55(s,3H),3.24(s,2H),2.54(s,2H),2.31(d,J=5.7Hz,2H),2.07(d,J=14.9Hz,3H)。
實例14
Figure 109122604-A0202-12-0249-889
N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依條件B3，使用Int.W2(36.58mg,0.23mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(60mg,0.23mmol)，經製備性-HPLC純化後以提供N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺之黃色固體(10.4mg,12%產率)。LC-MS(ESI)m/z：392[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.51(s,3H),2.83-2.93(m,4H),3.17(t,J=8.0Hz,2H),3.57(s,2H),4.33(t,J=8.0Hz,2H),6.93-7.02(m,2H),7.12(t,J=3.6Hz,1H),7.24-7.32(m,2H),7.42(d,J=8.0Hz,1H),7.52(d,J=8.0Hz,1H),8.14(s,1H)。
實例15
Figure 109122604-A0202-12-0249-890
6-氯-N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依條件B3，使用Int.W3(50mg,0.25mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(67.66mg,0.25mmol)，經製備性-HPLC純化後以提供6-氯-N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺之黃色固體(11.6mg,11%產率)。LC-MS(ESI)m/z：426[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.54(s,3H),2.89-2.96(m,4H),3.18(t,J=8.0Hz,2H),3.54(s,2H),4.36(t,J=8.0Hz,2H),6.96-7.00(m,1H),7.11(t,J=8.0Hz,1H),7.24-7.28(m,2H),7.40(d,J=8.0Hz,1H),7.93(s,1H),8.19(s,1H)。
實例19
Figure 109122604-A0202-12-0250-891
N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶-3-胺
依條件B3，使用Int.W4(30mg,155.24umol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(41.31mg,155.24umol)(微波處理2小時)，經快速管柱層析法(DCM/MeOH=10/1,v/v)及製備性-HPLC(MeCN/0.05%TFA)純化後以提供N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶-3-胺(TFA鹽)之黃色固體(6.6mg,10%產率)。LC-MS(ESI)m/z：423[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 3.03(s,3H),3.08-3.22(m,4H),3.44-3.56(m,1H),3.73-3.83(m,1H),4.02(s,3H),4.16(d,J=6.4Hz,2H),4.38(t,J=8.0Hz,2H),7.06(t,J=7.6Hz,1H), 7.20(t,J=7.4Hz,1H),7.31(d,J=8.0Hz,1H),7.42(d,J=8.0Hz,1H),8.25(s,1H),8.34(s,1H)。
實例22
Figure 109122604-A0202-12-0251-892
N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-異丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依條件B3，使用Int.W5(50mg,0.227mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(60mg,0.227mmol)(微波處理2小時)，經快速管柱層析法(DCM/MeOH=10/1,v/v)純化後以提供N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-2-異丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺之黃色固體(2.5mg,2%產率)。LC-MS(ESI)m/z：450[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 1.17(d,J=6.4Hz,6H),2.86-2.92(m,5H),3.19(t,J=8.4Hz,2H),3.49(s,2H),3.88(s,3H),4.36(t,J=8.4Hz,2H),6.73(s,1H),6.99(t,J=6.8Hz,1H),7.17(t,J=7.6Hz,1H),7.29(d,J=7.2Hz,1H),7.50(d,J=8.0Hz,1H),7.99(s,1H),8.16(s,1H)。
實例23
Figure 109122604-A0202-12-0251-893
N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依條件B3，使用Int.W6(110mg,0.39mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(105mg,0.39mmol)(微波處理2小時)以提供N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(1.0 TsOH鹽)之黃色固體(130mg,58%產率)。過濾收集固體。LC-MS(ESI)m/z：408[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 2.29(s,3H),2.98(t,J=6.4Hz,2H),3.16(t,J=8.0Hz,2H),3.28-3.40(m,2H),3.82(s,3H),4.04(d,J=4.6Hz,2H),4.37(t,J=8.0Hz,2H),6.95(s,1H),7.02(dd,J=7.4,1.0Hz,1H),7.07-7.20(m,3H),7.30(dd,J=7.4,1.0Hz,1H),7.46-7.48(m,3H),7.65(s,1H),8.34(s,1H),8.72(s,1H),9.26(s,2H)。
實例26
Figure 109122604-A0202-12-0252-894
1-(7-((5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)胺基)-6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)-2-(二甲基胺基)乙烷-1-酮
於0℃，在含2-(二甲基胺基)乙酸(5.06mg,49.03umol)、N-(5-氯-4-吲哚啉-1-基-嘧啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺甲苯磺酸鹽(20mg,34.48umol)、及HATU(18.64mg,49.03umol)之無水CH2Cl2(3mL)溶液中滴加DIPEA(19.01mg,147.10umol,25.62uL)。反應混合物於室溫攪拌3小時及真空濃縮。殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%HCOOH)以提供1-(7-((5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)胺基)-6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)-2-(二甲基胺基)乙烷-1-酮之白色固體(13.5 mg,56%產率)。LC-MS(ESI)m/z：493[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.57(s,3H),2.62(s,3H),2.75(t,J=6.4Hz,1H),2.86(t,J=6.4Hz,1H),3.14(t,J=8.4Hz,2H),3.54(s,1H),3.64-3.69(m,2H),3.71(s,1H),3.88(d,J=6.4Hz,3H),4.30(s,1H),4.32-4.36(m,2H),4.42(s,1H),6.75(s,1H),6.98-7.04(m,1H),7.16(t,J=8.0Hz,1H),7.24-7.29(m,1H),7.39-7.46(m,1H),8.01(d,J=17.2Hz,1H),8.15(d,J=9.6Hz,1H)。
實例27
Figure 109122604-A0202-12-0253-895
2-(7-((5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)胺基)-6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-醇
取含N-(5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺甲苯磺酸鹽(30mg,0.073mmol)、2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧)乙醛(13mg,0.073mmol)、及AcOH(2滴)之MeOH(4mL)混合物於N2下攪拌1小時。然後添加NaBH(OAc)3(24mg,011mmol)至上述混合物中，混合物於室溫攪拌16小時，及真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM 100%v/v，及接著DCM/MeOH=5/1 v/v)以提供2-(7-((5-氯-4-(吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)胺基)-6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-醇之黃色固體(6.4mg,20%產率)。LC-MS(ESI)m/z：452[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.72(t,J=6.4Hz,2H),2.86-2.91(m,4H),3.19(t,J=8.4Hz,2H),3.47(s,2H),3.77(t,J=6.4Hz, 2H),3.88(s,3H),4.35(t,J=8.4Hz,2H),6.73(s,1H),7.02(t,J=7.6Hz,1H),7.18(t,J=8.0Hz,1H),7.29(d,J=7.6Hz,1H),7.46(d,J=8.0Hz,1H),7.96(s,1H),8.16(s,1H)。
實例28
Figure 109122604-A0202-12-0254-896
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-2-羧醯胺
步驟1：依條件A1(如實例1 步驟1中舉例說明)，使用Int.E4(673mg,3.58mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(787mg,4.29mmol)，經矽膠快速管柱層析法(EA/PE=1/3,v/v)及製備性-HPLC純化後以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-吲哚-2-羧醯胺之白色固體(160mg,22%產率)。LC-MS(ESI)m/z：335.[M+H]+。
步驟2：在含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-吲哚-2-羧醯胺(50mg,0.15mmol)之二
Figure 109122604-A0202-12-0254-403
烷(4mL)溶液中添加Int.W1(28.7mg,0.15mmol)、Pd2(dba)3(27.3mg,0.03mmol)、Xantphos(17.3mg,0.03mmol)、及碳酸鉀(41.2mg,0.3mmol)。混合物於100℃及N2下攪拌12小時，冷卻至室溫，及過濾。濾液濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%HCOOH)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-1H-吲哚-2-羧醯胺之黃色固體(2.4mg,3%產率)[HCOOH鹽]。LC-MS(ESI)m/z：491[M+H]+。1H NMR (400MHz,CD3OD)：δ 2.71(s,3H),2.99(s,3H),3.02-3.05(m,2H),3.14-3.17(m,2H),3.30(s,3H),3.88(s,2H),3.91(s,3H),6.85(s,1H),7.10(s,1H),7.26(t,J=8.0Hz,1H),7.35(t,J=8.0Hz,1H),7.49(d,J=8.0Hz,1H),7.73(d,J=8.0Hz,1H),8.02(s,1H),8.50(brs,1H),8.57(s,1H)。
實例12
Figure 109122604-A0202-12-0255-897
N-(5-氯-4-(4-氯吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
步驟1：依條件A2(如實例4 步驟1中舉例說明)，使用4-氯吲哚啉(111mg,1.06mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(200mg,1.09mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=20/1,v/v)後以提供4-氯-1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉之白色固體(160mg,59%產率)。LC-MS(ESI)m/z：300[M+H]+。
步驟2：依條件B3(如實例10 步驟2舉例說明)，使用Int.W1(68.5mg,299.43umol)及4-氯-1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉(90mg,299.43umol)以提供N-(5-氯-4-(4-氯吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(TsOH鹽)之黃色固體(115mg,84%產率)。過濾收集固體。LC-MS(ESI)m/z：456[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.35(s,3H),3.02(s,3H),3.05-3.16(m,1H),3.16-3.30(m,3H),3.41-3.45(m,1H),3.74-3.77(m,1H),3.87(s,3H),4.13-4.17(m, 1H),4.32-4.35(m,1H),4.67(t,J=8.4Hz,2H),7.04(s,1H),7.13-7.21(m,4H),7.49(s,1H),7.65-7.67(m,3H),8.21(s,1H)。
實例13
Figure 109122604-A0202-12-0256-898
N-(5-氯-4-(5-氯吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例12之相同製程，於步驟1中使用5-氯吲哚啉及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：456[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.35(s,3H),3.04(s,3H),3.17-3.29(m,4H),3.41-3.48(m,1H),3.75-3.79(m,1H),3.88(s,3H),4.13-4.16(m,1H),4.27-4.31(m,1H),4.64(t,J=8.0Hz,2H),7.04(s,1H),7.16-7.21(m,3H),7.38(brs,1H),7.53(s,1H),7.65-7.72(m,3H),8.20(s,1H)。
實例18
Figure 109122604-A0202-12-0256-899
N-(5-氯-4-(6-氯吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例12之相同製程，於步驟1中使用6-氯吲哚啉及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：456[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.35(s,0.45H),3.01(s,3H),3.13-3.20(m,4H),3.35-3.40(m,1H), 3.73-3.77(m,1H),3.90(s,3H),4.10-4.14(m,1H),4.31-4.35(m,1H),4.59(t,J=8.4Hz,2H),7.02(s,1H),7.09-7.12(m,1H),7.21(d,J=8.0Hz,0.3H),7.29(d,J=8.0Hz,1H),7.6-7.69(m,2.3H),8.24(s,1H)。
實例16
Figure 109122604-A0202-12-0257-390
N-(5-氯-4-(2,3-二氫-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例12之相同製程，於步驟1中使用2,3-二氫-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶鹽酸鹽及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：423[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 2.39(s,3H),2.67(brs,2H),2.81-2.84(m,2H),3.21(t,J=8.4Hz,2H),3.41(s,2H),3.76(s,3H),4.36(t,J=8.4Hz,2H),6.79(s,1H),6.99-7.02(m,1H),7.41(s,1H),7.65(d,J=8.0Hz,1H),8.03(dd,J=5.2,1.2Hz,1H),8.17(s,1H),8.25(s,1H)。
實例29
Figure 109122604-A0202-12-0257-391
N-(5-氯-4-(2,3-二氫-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)嘧啶-2-基)-2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶-3-胺
依實例28 步驟2之相同製程，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2,3-二氫吡咯并[3,2-b]吡啶及Int.W4替代1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,N-二 甲基-吲哚-2-羧醯胺及Int.W1。LC-MS(ESI)m/z：424[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.51(s,3H),2.89-2.92(m,4H),3.27-3.34(m,2H),3.47(s,2H),3.97(s,3H),4.45(t,J=8.8Hz,2H),7.16-7.19(m,1H),7.76(dd,J=8.0,0.8Hz,1H),8.05(dd,J=4.8,1.2Hz,1H),8.09(s,1H),8.25(s,1H),8.51(br,1H)。
實例17
Figure 109122604-A0202-12-0258-392
N-(5-氯-4-(2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例12之相同製程，於步驟1中使用2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：423[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.44(s,3H),2.71-2.74(m,2H),2.87-2.91(m,2H),3.21(t,J=8.0Hz,2H),3.47(s,2H),3.87(s,3H),4.25(t,J=8.4Hz,2H),6.73(s,1H),6.89-6.92(m,1H),7.61(dd,J=7.2,1.6Hz,1H),8.00(s,2H),8.30(s,1H)。
實例20
Figure 109122604-A0202-12-0258-393
N-(5-氯-4-(5-氟吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例12之相同製程，於步驟1中使用5-氟吲哚啉及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：440[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.35(s,1.5H),2.79(s,3H),3.06(t,J=6.0Hz,2H),3.19(t,J=8.4Hz,2H),3.25(t,J=6.0Hz,2H),3.84(s,2H),3.90(s,3H),4.38(t,J=8.4Hz,2H),6.82(s,1H),6.90-6.95(m,1H),7.06(dd,J=8.4,2.4Hz,1H),7.20(d,J=8.4Hz,1H),7.38-7.41(m,1H),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.98(s,1H),8.18(s,1H)。
實例21
Figure 109122604-A0202-12-0259-394
N-(5-氯-4-(6-氟吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例12之相同製程，於步驟1中使用6-氟吲哚啉及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：440[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.35(s,0.24H),3.04(s,3H),3.20(m,3H),3.35-3.45(m,2H),3.75-3.80(m,1H),3.87(s,3H),4.17(d,J=14.8Hz,1H),4.42(d,J=14.8Hz,1H),4.70(t,J=7.6Hz,2H),6.87-6.92(m,1H),7.06(s,1H),7.21(d,J=8.0Hz,0.2H),7.28-7.32(m,1H),7.42(s,1H),7.42-7.46(m,1H),7.67(d,J=8.4Hz,0.16H),8.22(s,1H)。
實例24
Figure 109122604-A0202-12-0260-395
N-(5-氯-4-(1H-吲唑-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例12之相同製程，於步驟1中使用1H-吲唑及替代4-氯吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：421[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.88(s,1H),8.61(s,1H),8.50(s,1H),8.23(s,1H),8.07(d,J=7.9Hz,1H),7.89(d,J=7.9Hz,1H),7.48-7.39(m,1H),7.35(dd,J=8.9,5.9Hz,2H),6.84(s,1H),3.77(s,3H),3.37-3.37(m,2H),2.83(t,J=5.8Hz,2H),2.59(t,J=5.7Hz,2H),2.30(d,J=13.4Hz,3H)。
實例25
Figure 109122604-A0202-12-0260-396
N-(5-氯-4-(3,3-二甲基吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
步驟1：在含3,3-二甲基吲哚啉(200mg,1.36mmol)之正丁醇(2mL)溶液中依序添加2,4,5-三氯嘧啶(250mg,1.36mmol)及DIPEA(175.6mg,1.36mmol)。反應混合物於100℃攪拌18小時，加水(5mL)稀釋，及使用EA萃取(10mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/10,v/v)以 提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3,3-二甲基-吲哚啉(385mg,94.41%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：296[M+H]+。
步驟2：依條件B3(依實例10 步驟2舉例說明)，使用Int.W1(86mg,0.323mmol)及1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3,3-二甲基-吲哚啉(100mg,0.323mmol)，經過製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025%NH3.H2O)後以提供N-(5-氯-4-(3,3-二甲基吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(85.5mg,58.84%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：450[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),7.98(s,1H),7.56(s,1H),7.33(d,J=7.9Hz,1H),7.24(d,J=6.5Hz,1H),7.14-7.05(m,1H),6.98(dd,J=7.8,7.0Hz,1H),6.74(s,1H),4.00(s,2H),3.77(s,3H),3.28(s,2H),2.77(t,J=5.7Hz,2H),2.55(t,J=5.8Hz,2H),2.30(s,3H),1.29(s,6H)。
實例84
Figure 109122604-A0202-12-0261-397
N-(5-氯-4-(螺[環丙烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例25之相同製程，於步驟1中使用3,3-螺[環丙烷-1,3'-吲哚啉]鹽酸鹽替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：440[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.24(s,1H),8.01(s,1H),7.51(s,1H),7.41(d,J=8.0Hz,1H),7.08-6.97(m,1H),6.94-6.86(m,1H),6.85-6.68(m,2H),4.28(s,2H),3.78(s,3H),3.27(s,2H),2.77(t,J=5.7Hz,2H), 2.55(t,J=5.9Hz,2H),2.30(s,3H),1.15-1.06(m,2H),1.03(dd,J=6.6,4.5Hz,2H)。
實例85
Figure 109122604-A0202-12-0262-399
N-(4-(5-溴吲哚啉-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例25之相同製程，於步驟1中使用5-溴吲哚啉替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：502[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.26(s,1H),8.00(s,1H),7.52(s,1H),7.43(s,1H),7.30(d,J=8.6Hz,1H),7.21(s,1H),6.76(s,1H),4.28(d,J=7.7Hz,2H),3.78(s,3H),3.24(s,2H),3.15(s,2H),2.77(s,2H),2.55(s,2H),2.33(s,3H)。
實例86
Figure 109122604-A0202-12-0262-400
(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-5-基)二甲基膦氧化物
取含N-(4-(5-溴吲哚啉-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(110mg,208.66umol)、二甲基膦氧化物(26.65mg,341.44umol)、Pd2(dba)3(10.42mg,11.38umol)、Xantphos(6.59mg,11.38umol)、及三乙基胺(69.10mg,682.88umol,95.18uL)之 二
Figure 109122604-A0202-12-0263-589
烷(2mL)混合物經過氮氣吹掃，及於110℃攪拌16小時。反應混合物經製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3)以提供(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-5-基)二甲基膦氧化物之白色固體(57.3mg,55%產率)。LC-MS(ESI)m/z：498[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.29(s,1H),8.09(s,1H),7.61(d,J=10.9Hz,1H),7.53-7.36(m,3H),6.77(s,1H),4.31(t,J=8.2Hz,2H),3.78(s,3H),3.29(s,2H),3.18(t,J=7.8Hz,2H),2.77(s,2H),2.55(s,2H),2.31(s,3H),1.62(d,J=13.2Hz,6H)。
實例87
Figure 109122604-A0202-12-0263-401
(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-基)甲醇
依實例25之相同製程，於步驟1中使用Int.E6替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：502[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 10.00(s,1H),8.28(s,1H),8.16(s,1H),7.70(d,J=4.0Hz,1H),7.41(d,J=8.0Hz,1H),7.31(d,J=7.3Hz,1H),7.18(t,J=7.7Hz,1H),6.98(t,J=7.3Hz,1H),6.93(s,1H),4.38-4.33(m,1H),4.26(s,1H),4.16(s,2H),3.82(s,3H),3.66(d,J=5.6Hz,2H),3.54-3.38(m,2H),3.30(s,1H),3.14-2.95(m,2H),2.92(d,J=3.6Hz,3H)。
實例88
Figure 109122604-A0202-12-0264-402
(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-基)二甲基膦氧化物
依實例25之相同製程，於步驟1中使用Int.E7替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：502[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.30(s,1H),8.02(s,1H),7.59(s,1H),7.37(d,J=7.4Hz,1H),7.27(d,J=8.0Hz,1H),7.16(t,J=7.7Hz,1H),6.99(t,J=7.5Hz,1H),6.74(s,1H),4.70-4.48(m,1H),4.35(ddd,J=18.3,11.1,3.6Hz,1H),3.85(d,J=9.9Hz,1H),3.84-3.67(m,3H),3.27-3.15(m,2H),2.76(t,J=5.6Hz,2H),2.55(d,J=5.7Hz,1H),2.29(s,3H),1.31(dt,J=33.1,16.5Hz,6H)。
實例89
Figure 109122604-A0202-12-0264-403
N-(5-氯-4-(4-甲氧基吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例25之相同製程，於步驟1中使用Int.E10替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：452[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.23(s,1H),7.93(s,1H),7.56(s,1H),7.02(dd,J=19.1,8.0Hz,2H),6.74(s,1H),6.61(d,J=8.0Hz,1H),4.27(t,J=8.3Hz, 2H),3.80(s,3H),3.78(s,3H),3.27(s,2H),3.01(t,J=8.2Hz,2H),2.77(t,J=5.6Hz,2H),2.55(t,J=5.8Hz,2H),2.31(s,3H)。
實例90
Figure 109122604-A0202-12-0265-404
N-(5-氯-4-(5-(二氟甲基)吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例25之相同製程，於步驟1中使用Int.E12替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：472[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.29(s,1H),8.04(s,1H),7.55(s,1H),7.49-7.39(m,2H),7.29(d,J=8.2Hz,1H),6.95(t,J=56.3Hz,1H),6.76(s,1H),4.31(t,J=8.3Hz,2H),3.79(s,3H),3.27(s,2H),3.19(t,J=8.2Hz,2H),2.78(s,2H),2.56(br,2H),2.31(s,3H)。
實例91
Figure 109122604-A0202-12-0265-405
N-(5-氯-4-(6-(二氟甲基)吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例25之相同製程，於步驟1中使用Int.E13替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：472[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.29(s,1H),8.03(s,1H),7.52(s,1H),7.43-7.32(m,2H), 7.13(d,J=7.6Hz,1H),6.91(s,1H),6.80(s,1H),6.75(s,1H),6.69(s,1H),4.30(t,J=8.3Hz,2H),3.79(d,J=19.8Hz,3H),3.25(s,2H),3.18(t,J=8.1Hz,2H),2.77(t,J=5.6Hz,2H),2.54(t,J=5.9Hz,2H),2.28(s,3H)。
實例92
Figure 109122604-A0202-12-0266-406
N-(5-氯-4-(4-(二氟甲基)吲哚啉-1-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例25之相同製程，於步驟1中使用Int.E14替代3,3-二甲基吲哚啉。LC-MS(ESI)m/z：472[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.30(s,1H),8.27(s,1H),8.05(s,1H),7.93(s,1H),7.48(s,1H),7.19(dd,J=13.6,5.6Hz,1H),7.13-7.04(m,1H),6.75(d,J=5.8Hz,1H),4.32(t,J=8.3Hz,2H),3.78(d,J=9.6Hz,3H),3.32-3.20(m,4H),2.77(s,2H),2.55(t,J=5.8Hz,2H),2.31(s,3H)。
實例31
Figure 109122604-A0202-12-0266-407
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2,3-二氫咪唑并[1,2-a]吡啶-5(1H)-酮
步驟1：取含Int.E5(65mg,0.239mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(53mg,0.286mmol)、NaOtBu(45.9mg,0.477mmol)、BINAP(3.9mg,0.006mmol)及乙酸鈀(II)(1.3mg,0.006mmol)之DMF/二
Figure 109122604-A0202-12-0267-590
烷(2mL/2mL)混合物於70℃與N2下攪拌16小時，使用冰-冷水(10mL)中止反應，及使用EA萃取(20mL x 3)。有機相使用鹽水洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。濾液真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=10/1)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2,3-二氫咪唑并[1,2-a]吡啶-5-酮(45mg,26.63%產率，40%純度)。LC-MS(ESI)m/z：283.0[M+H]+。
步驟2：依條件B3(依實例10 步驟2舉例說明)，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2,3-二氫咪唑并[1,2-a]吡啶-5-酮(40mg,0.056mmol)及Int.W1(10.9mg,0.056mmol)，經過製備性-HPLC(MeCN/0.1%HCOOH)純化後以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2,3-二氫咪唑并[1,2-a]吡啶-5(1H)-酮之黃色固體(2.5mg,9.73%產率)。LC-MS(ESI)m/z：439.0[M+H]+。
實例48
Figure 109122604-A0202-12-0267-408
N-(5-氯-4-(異喹啉-4-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
步驟1：在含4-異喹啉基硼酸(100mg,578.12umol)之DME/H2O(3mL/1mL)溶液中添加碳酸鉀(159.8mg,1156umol)、1,1'-雙 (二苯基膦基)二茂絡鐵]二氯鈀(II)(42.3mg,57.82umol)、及2,4,5-三氯嘧啶(106.0mg,578.12umol)。混合物於100℃及N2蒙氣下攪拌一夜，冷卻至室溫，及使用EA(10mL)稀釋。過濾後，濾液真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=4/1 v/v)以提供4-(2,5-二氯嘧啶-4-基)異喹啉之黃色固體(50mg,63%產率)。LC-MS(ESI)m/z：276[M+H]+。
步驟2：依條件B3(依實例10 步驟2舉例說明)，使用4-(2,5-二氯嘧啶-4-基)異喹啉(50mg,0.181mmol)及Int.W1(41.4mg,0.181mmol)，經過製備性-HPLC純化(MeCN/0.05%TFA)後以提供N-(5-氯-4-(異喹啉-4-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺之黃色固體(12mg,12%產率)，。LC-MS(ESI)m/z：432[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.98(s,3H),3.06-3.25(m,3H),3.65-3.73(m,1H),3.93(s,3H),4.12-4.16(m,1H),4.34-4.30(m,1H),6.91(s,1H),7.85-7.89(m,2H),7.93-7.97(m,1H),8.12(s,1H),8.35(d,J=7.6Hz,1H),8.61(s,1H),8.68(s,1H),9.52(s,1H)。
實例49
Figure 109122604-A0202-12-0268-409
N-(5-氯-4-(喹啉-4-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例48之相同製程，於步驟1中使用4-喹啉基硼酸替代4-異喹啉基硼酸。LC-MS(ESI)m/z：432[M+H]+。1H NMR(400MHz, CD3OD)：δ 2.36(s,1.8H),2.54(s,3H),2.90-2.95(m,4H),3.61(s,2H),3.88(s,3H),6.79(s,1H),7.22(d,J=8.0Hz,1.2H),7.61(d,J=4.4Hz,1H),7.62-7.66(m,1H),7.69(d,J=8.0Hz,1.2H),7.78(d,J=8.4Hz,1H),7.82-7.87(m,1H),7.96(s,1H),8.16(d,J=8.4Hz,1H),8.63(s,1H),9.00(d,J=4.4Hz,1H)。
實例93
Figure 109122604-A0202-12-0269-410
3-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)氧雜環丁烷-3-醇
步驟1：依條件A1，使用Int.E16(440mg,1.45mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(293mg,1.59mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1)後以提供3-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)氧雜環丁烷-3-基)-1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚(400mg,58%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：450[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用3-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)氧雜環丁烷-3-基)-1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚(200mg,0.444mmol)及Int.W1(142mg,0.533mmol)，經矽膠快速管柱層析法(PE/EA=10/1)純化後以提供N-(4-(3-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)氧雜環丁烷-3-基)-1H-吲哚-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(170mg,73%產率)之紅色固體。LC-MS(ESI)m/z：606[M+H]+。
步驟3：在含N-(4-(3-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)氧雜環丁烷-3-基)-1H-吲哚-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(80mg,131.96umol)之THF(2mL)與水(0.3mL)混合溶劑之溶液中添加甲酸(1mL)。反應混合物於80℃攪拌3小時，及經製備性-HPLC純化(10mM NH4HCO3&0.025%NH3．H2O/乙腈)以提供3-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)氧雜環丁烷-3-醇之黃色固體(2.0mg,3%產率)。LC-MS(ESI)m/z：492[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 12.46(s,1H),8.19(s,1H),8.08(s,1H),7.93(d,J=8.0Hz,1H),7.57(d,J=8,0Hz,1H),7.26(t,J=7.5Hz,1H),7.19(t,J=8.1Hz,1H),6.60(s,1H),6.43(s,1H),6.04(s,1H),5.33(s,1H),4.39(d,J=14.9Hz,1H),4.11(d,J=14.8Hz,1H),3.83(d,J=30.4Hz,2H),3.62(s,3H),3.36(s,2H),2.76(s,2H),2.58(s,2H),2.33(s,3H)。
實例94
Figure 109122604-A0202-12-0270-411
N-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)甲磺醯胺
步驟1：依條件A1，使用3-硝基-1H-吲哚(100mg,0.617mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(125mg,0.678mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1)後以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-硝基-1H-吲哚(78mg,30%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：309[M+H]+。
步驟2：於0℃，在含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-硝基-1H-吲哚(78mg,252.34umol)之1,4-二
Figure 109122604-A0202-12-0271-591
烷(0.5mL)與水(0.2mL)混合溶劑之溶液中依序添加鋅(5.42mg,82.89umol)及NH4Cl(5.2mg,97.05umol)。反應混合物於室溫攪拌一小時，及通過矽藻土(celite)過濾。濾液使用乙酸乙酯(10mL)稀釋，使用水(5mL)及鹽水(5mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-胺之褐色固體(60mg,85%產率)。LC-MS(ESI)m/z：279[M+H]+。
步驟3：於0℃，在含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-胺(60mg,214.96umol)之無水DCM(2mL)懸浮液中添加MsCl(138.09mg,214.96umol)。於0℃攪拌4小時後，混合物分溶於5%檸檬酸水溶液(20mL)與DCM(20mL)之間。合併之有機相使用水(10mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=1/10~1/5)以提供N-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)甲磺醯胺之黃色固體(75mg,97%產率)。LC-MS(ESI)m/z：357[M+H]+。
步驟4：依條件B3，使用N-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)甲磺醯胺(75mg,0.210mmol)及Int.W1(49mg,0.252mmol)，經過製備性-HPLC(MeCN/0.1%HCOOH)純化後以提供N-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)甲磺醯胺(5.2mg,5%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：513[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.75(s,1H),8.62(s,1H),8.28(s,1H),7.86-7.72(m,2H),7.47(d,J=8.0Hz,1H),7.40(s,1H),7.28-7.20(m, 2H),7.11(d,J=7.9Hz,1H),6.80(s,1H),3.79(s,3H),2.99(s,3H),2.79(t,J=5.8Hz,2H),2.56(t,J=5.8Hz,2H),2.31(s,3H),2.29(s,2H)。
實例32
Figure 109122604-A0202-12-0272-412
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
實例115
Figure 109122604-A0202-12-0272-413
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯
步驟1：取含2,4,5-三氯嘧啶(220mg,1.20mmol)及吲哚啉-3-羧酸(163mg,0.999mmol)之NMP(0.6mL)混合物於150℃攪拌15分鐘，經逆相層析法(0-80%甲醇之水溶液)純化以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(160mg,48.55%產率，94%純度)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：310.0[M+H]+。
步驟2：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(30mg,0.097mmol)及Int.W1(19mg,0.097mmol)及TsOH．H2O(18.4mg,0.097mmol)之i-PrOH(2.5mL)混合物於85℃攪拌5小時，及經製備性-HPLC(10mM NH4HCO3&0.025%NH3．H2O/乙腈)純化以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基- 2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(1.8mg,4%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：466[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),8.03(s,1H),7.51(s,1H),7.40(dd,J=7.7,3.9Hz,2H),7.12(t,J=7.6Hz,1H),6.97(t,J=7.3Hz,1H),6.76(s,1H),4.56(dd,J=10.6,6.4Hz,1H),4.38(t,J=10.1Hz,1H),4.23(s,1H),3.77(s,3H),2.78(d,J=5.6Hz,2H),2.67(s,1H),2.60-2.55(m,3H),2.32(s,3H)。
另一種合成法：
步驟1：取含Int.E17(300mg,1.59mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(292mg,1.59mmol)及DIPEA(411.4mg,3.18mmol)之n-BuOH(5mL)混合物於100℃攪拌16小時，使用冰-冷水(20mL)中止反應，及使用EA萃取(30mL x 3)。有機相使用鹽水(30mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。濾液真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(MeOH/DCM：0-15%)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯(556mg,95%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：324[M+H]+。
步驟2：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯(250mg,0.678mmol)、Int.W1(155mg,0.678mmol)及TsOH．H2O(129.1mg,0.679mmol)之i-PrOH(10mL)混合物於100℃攪拌16小時，使用飽和NaHCO3水溶液(10mL)中止反應，及使用DCM/MeOH萃取(10/1,30mL x 3)。有機相使用鹽水(30mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。濾液真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(MeOH/DCM：0-15%)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基) 吲哚啉-3-羧酸甲基酯與1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸異丙基酯之混合物(530mg)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：480(甲基酯)，508(異丙基酯)[M+H]+。
取少量混合物進一步經製備性-HPLC純化以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.28(s,1H),8.09(s,1H),7.48(s,1H),7.37(dd,J=15.3,7.7Hz,2H),7.16(t,J=7.4Hz,1H),6.99(t,J=7.2Hz,1H),6.76(s,1H),4.54(q,J=10.8Hz,1H),4.50-4.38(m,2H),3.79(d,J=15.6Hz,3H),3.71(s,3H),3.29(s,2H),2.78(t,J=5.7Hz,2H),2.56(t,J=5.9Hz,2H),2.31(s,3H)。
步驟3：取含1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯與1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸異丙基酯混合物(530mg)與LiOH水溶液(2N,4mL)之THF(5mL)混合物於室溫攪拌16小時，使用甲酸調整至pH~5，及使用DCM萃取(30mL x 3)。合併之有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(10mM NH4HCO3&0.025%NH3．H2O/乙腈)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(158mg,84%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：466[M+H]+。
實例95 & 96
Figure 109122604-A0202-12-0275-414
(S)-1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸&(R)-1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
在消旋性1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(20mg)經過對掌性-分離後合成。未確認立體化學，因此自由指定兩種產物(分別為4.5mg，5.1mg)。
LC-MS(ESI)m/z：466[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.27(s,1H),8.05(s,1H),7.51(s,1H),7.40(d,J=7.9Hz,2H),7.15(t,J=7.8Hz,1H),6.98(t,J=7.5Hz,1H),6.77(s,1H),4.54(dd,J=10.6,6.1Hz,1H),4.40(t,J=10.0Hz,1H),4.31-4.27(m,1H),3.77(s,3H),3.26-3.24(m,2H),2.80(d,J=5.6Hz,2H),2.65(d,J=6.5Hz,2H),2.37(s,3H)。對掌性-HPLC滯留時間：1.285min；ee值：>99%。
LC-MS(ESI)m/z：466[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.26(s,1H),8.03(s,1H),7.51(s,1H),7.39(d,J=8.0Hz,2H),7.15(d,J=7.7Hz,1H),6.99(d,J=7.5Hz,1H),6.76(s,1H),4.54(dd,J=10.5,6.2Hz,1H),4.39(t,J=10.1Hz,1H),4.28(d,J=6.1Hz,1H),3.77(s,3H),3.34(s,2H),2.79(t,J=5.5Hz,2H),2.61(t,J=5.7Hz,2H),2.34(s,3H)。對掌性-HPLC滯留時間：2.078min；ee值：>99%。
SFC分離條件：
儀器：SFC-150(Thar,Waters)
管柱：IG 20*250mm,10um(Daicel)
管柱溫度：35℃
移動相：CO2/EtOH(0.2%甲醇/氨)=50/50
流速：120g/min
背壓：100bar
檢測波長：214nm
循環時間：8min
實例33
Figure 109122604-A0202-12-0276-415
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧醯胺
步驟1：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(60mg,193.46umol)、氯化銨(51.74mg,967.32umol)、HATU(110.34mg,290.20umol)及三乙基胺(58.73mg,580.39umol,80.90uL)之DMF(1mL)混合物於室溫攪拌3小時，使用冰-冷水(15mL)中止反應，及使用EtOAc萃取(20mL x x 3)。合併之有機相使用鹽水(15mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。濾液真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=0-100%)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧醯胺(5mg,50.16%產率，100%純度)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：309[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧醯胺(45mg,0.146mmol)及Int.W1(28mg,0.146mmol)，經過製備性-HPLC純化(10mM NH4HCO3&0.025%NH3．H2O/乙腈)後以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧醯胺(26.9mg,55%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：465[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.24(s,1H),8.00(s,1H),7.80(s,1H),7.50(s,1H),7.39(dd,J=31.8,7.8Hz,2H),7.22(s,1H),7.10(t,J=7.7Hz,1H),6.97(t,J=7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.54(dd,J=10.3,6.3Hz,1H),4.36(t,J=9.9Hz,1H),4.15(dd,J=9.3,6.5Hz,1H),3.77(s,3H),3.28(d,J=12.2Hz,2H),2.77(t,J=5.6Hz,2H),2.55(t,J=5.9Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例97
Figure 109122604-A0202-12-0277-416
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-甲基吲哚啉-3-羧醯胺
依實例33之相同製程，於步驟1中使用甲基胺鹽酸鹽替代氯化銨。LC-MS(ESI)m/z：479[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.31-8.26(m,1H),8.24(s,1H),8.02(s,1H),7.49(s,1H),7.42(d,J=8.3Hz,1H),7.28(d,J=7.5Hz,1H),7.10(t,J=7.7Hz,1H),6.95(t,J=7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.54(dd,J=10.4,6.5Hz,1H),4.37(t,J=10.0 Hz,1H),4.22-4.05(m,1H),3.77(s,3H),3.28(s,2H),2.77(d,J=5.7Hz,2H),2.66(d,J=4.6Hz,3H),2.56(d,J=5.8Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例98
Figure 109122604-A0202-12-0278-417
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-(甲基磺醯基)吲哚啉-3-羧醯胺
步驟1：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(60mg,0.193mmol)及CDI(31.47mg,0.193mmol)之DCM(5mL)混合物於室溫攪拌一小時，接著添加甲磺醯胺(27.6mg,0.290mmol)。再攪拌混合物一小時，添加DBU(29.5mg,0.193mmol)至混合物中。反應混合物接著於室溫攪拌16小時，使用HCl水溶液(1N,20mL)中止反應，及使用EtOAc萃取(20mL x 3)。合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(MeOH/DCM=0-15%)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N-甲基磺醯基-吲哚啉-3-羧醯胺之黃色油(45mg,37%產率，62%純度)。LC-MS(ESI)m/z：387[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N-甲基磺醯基-吲哚啉-3-羧醯胺(45mg,0.072mmol)及Int.W1(13.9mg,0.072mmol)，經過製備性-HPLC純化(0.1%FA/乙腈)後以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-(甲基磺醯基)吲哚啉-3-羧醯胺(29mg,74.1%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：543 [M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),8.05(s,1H),7.66(s,1H),7.47(d,J=7.0Hz,1H),7.33(d,J=8.4Hz,1H),7.11(t,J=7.9Hz,1H),6.94(t,J=7.4Hz,1H),6.85(s,1H),4.64-4.56(m,1H),4.28(t,J=9.8Hz,1H),4.00(d,J=7.8Hz,1H),3.81(s,3H),3.09(s,2H),2.93(s,2H),2.82(s,3H),2.67(s,2H),2.52(s,3H)。
實例99
Figure 109122604-A0202-12-0279-418
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈
步驟1：於0℃，在含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧醯胺(100mg,0.210mmol)及吡啶(67mg,0.841mmol)之DCM(5mL)溶液中慢慢添加含三氟乙酸酐(88.3mg,0.421mmol)之DCM(1mL)。混合物於0℃攪拌一小時，及於室溫攪拌6小時，使用1N HCl(10mL)中止反應。所得混合物使用DCM萃取(20mL x 3)，取有機相使用鹽水(15mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供粗產物1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈(60mg,40.2%產率，40%純度)。LC-MS(ESI)m/z：291[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈(60mg,40%純度)及Int.W1(10.8mg,0.056mmol)，經過製備性-HPLC純化(10mM NH4HCO3&0.025%NH3．H2O/乙腈)後以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3- 甲腈(19.7mg,77.7%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：447[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.32(s,1H),8.22(s,1H),8.15(s,1H),7.52-7.42(m,2H),7.33(d,J=7.7Hz,1H),7.24(t,J=7.5Hz,1H),7.07(t,J=7.4Hz,1H),6.76(s,1H),4.89-4.80(m,1H),4.58(t,J=10.0Hz,1H),4.44(dd,J=10.7,6.8Hz,1H),3.77(s,3H),3.29(s,2H),2.77(d,J=5.8Hz,2H),2.57-2.54(m,2H),2.31(s,3H)。
實例100
Figure 109122604-A0202-12-0280-419
N-(4-(3-(2H-四唑-5-基)吲哚啉-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
取含1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈(45mg,0.101mmol)、疊氮化鈉(9.8mg,0.151mmol)及乙酸銨(11.6mg,0.151mmol)之DMF(1.5mL)混合物於120℃攪拌5小時，冷卻至室溫，使用HCl水溶液(1N,5mL)稀釋，再攪拌30分鐘。混合物使用EA萃取(20mL x 3)。有機相使用鹽水(15mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%甲酸)以提供N-(4-(3-(2H-四唑-5-基)吲哚啉-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺之白色固體(13.4mg,27%產率)。LC-MS(ESI)m/z：490[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.29(s,1H),8.15(s,1H),8.06(s,1H),7.72(s,1H),7.32(d, J=7.7Hz,1H),7.21-7.08(m,2H),6.93(t,J=7.5Hz,1H),6.83(s,1H),4.89(t,J=9.1Hz,1H),4.72(s,1H),4.56(s,1H),3.81(s,3H),3.77(s,2H),3.01(s,2H),2.90(d,J=5.5Hz,2H),2.63(s,3H)。
實例101
Figure 109122604-A0202-12-0281-420
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-羥基吲哚啉-3-羧醯胺
步驟1：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸(150mg,0.484mmol)、草醯氯(61.4mg,0.484mmol)及N,N-二甲基甲醯胺(1.8mg,0.024mmol)之DCM(5mL)混合物於室溫攪拌2小時及真空濃縮以提供粗產物1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羰基氯，其未進一步純化即用於下一個步驟。
步驟2：於0℃，在含羥基胺鹽酸鹽(79.3mg,1.14mmol)之MeOH(3mL)懸浮液中慢慢添加KOH(63.8mg,1.14mmol)。反應混合物於N2下攪拌10分鐘，於0℃，在其中添加含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羰基氯(75mg,0.228mmol)之甲醇(5mL)溶液。所得混合物接著攪拌16小時，使用冰-冷水(10mL)中止反應，及使用EtOAc萃取(20mL x 3)。有機相使用鹽水(5mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(MeOH/DCM=0-10/1)以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N-羥基吲哚啉-3-羧醯胺之白色固體(50mg,43%產率，64%純度)。LC-MS(ESI)m/z：325[M+H]+。
步驟3：依條件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N-羥基吲哚啉-3-羧醯胺(50mg,64%純度)及Int.W1(18.9mg,0.098mmol)，經過製備性-HPLC純化(10mM NH4HCO3&0.025%NH3．H2O/乙腈)後以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-羥基吲哚啉-3-羧醯胺(12.6mg,25.4%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：481[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 10.94(s,1H),9.04(s,1H),8.25(s,1H),8.03(s,1H),7.50-7.34(m,2H),7.25(d,J=7.1Hz,1H),7.11(t,J=7.6Hz,1H),6.97(t,J=7.7Hz,1H),6.75(s,1H),4.51(dd,J=10.3,6.7Hz,1H),4.39(t,J=10.0Hz,1H),4.08-3.99(m,1H),3.77(s,3H),3.27(s,2H),2.77(d,J=5.8Hz,2H),2.56(d,J=5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例102
Figure 109122604-A0202-12-0282-421
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-羥基-N-甲基吲哚啉-3-羧醯胺
依實例101之相同製程，於步驟2中使用N-甲基羥基胺替代羥基胺鹽酸鹽。LC-MS(ESI)m/z：495[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 10.28(s,1H),8.25(s,1H),8.01(s,1H),7.51(s,1H),7.38(dd,J=19.3,7.6Hz,2H),7.11(t,J=7.5Hz,1H),6.95(t,J=7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.90-4.79(m,1H),4.51(dd,J=10.4,6.4Hz,1H),4.38 (t,J=9.9Hz,1H),3.77(s,3H),3.28(s,2H),3.18(s,3H),2.76(d,J=5.7Hz,2H),2.56(d,J=5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例103
Figure 109122604-A0202-12-0283-422
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N-甲氧基吲哚啉-3-羧醯胺
依實例101之相同製程，於步驟2中使用O-甲基羥基胺鹽酸鹽替代羥基胺鹽酸鹽。LC-MS(ESI)m/z：495[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.60(s,1H),8.25(s,1H),8.05(s,1H),7.50-7.39(m,2H),7.26(d,J=7.5Hz,1H),7.12(t,J=7.8Hz,1H),6.97(t,J=7.1Hz,1H),6.75(s,1H),4.51(dd,J=10.4,6.7Hz,1H),4.39(t,J=10.0Hz,1H),4.04-3.96(m,1H),3.77(s,3H),3.64(s,3H),3.28(s,2H),2.78(s,2H),2.56(d,J=5.9Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例163
Figure 109122604-A0202-12-0283-423
1-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
步驟1：取含1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯與及1-(5-氯-2-((6-甲氧 基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸異丙基酯(100mg)及Pd/C(18.2mg,0.171mmol)混合物之甲醇(10mL)混合物於室溫及H2下攪拌16小時，並通過矽藻土墊過濾。使用EA(20mL)洗滌濾餅固體，及取濾液真空濃縮以提供1-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯與1-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸異丙基酯之粗產物混合物，其未純化即用於下一個步驟。LC-MS(ESI)m/z：446(甲基酯)，474(異丙基酯)[M+H]+。
步驟2：依實例32之另一種合成法步驟3之相同製程，使用1-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯與1-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸異丙基酯之混合物替代1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯與1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸異丙基酯之混合物。LC-MS(ESI)m/z：432[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.29(s,1H),8.14(dd,J=16.9,6.9Hz,2H),7.82(s,1H),7.62(s,1H),7.43(d,J=7.3Hz,1H),7.08(t,J=7.7Hz,1H),6.92(t,J=7.3Hz,1H),6.80(s,1H),6.27(d,J=5.8Hz,1H),4.32(dd,J=9.8,5.0Hz,1H),4.17-4.03(m,2H),3.80(d,J=9.1Hz,3H),3.28(m,2H),2.84(t,J=5.6Hz,2H),2.66(t,J=5.7Hz,2H),2.36(s,3H)。
實例104
Figure 109122604-A0202-12-0285-424
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟吲哚啉-3-羧酸
依實例32之 另一種合成法之相同製程，於步驟1中使用Int.E22替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z：484[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.23(s,2H),8.02(s,1H),7.49(s,1H),7.40(dd,J=8.6,4.7Hz,1H),7.21(d,J=6.7Hz,1H),6.92(dd,J=8.9,6.8Hz,1H),6.78(s,1H),4.60(dd,J=10.5,6.2Hz,1H),4.39(t,J=10.1Hz,1H),4.22-4.10(m,1H),3.77(s,3H),3.42(s,2H),2.82(d,J=5.5Hz,2H),2.69(t,J=19.4Hz,2H),2.40(s,3H)。
實例105
Figure 109122604-A0202-12-0285-425
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟吲哚啉-3-羧酸
依實例32之另一種合成法之相同製程，於步驟1中使用Int.E23替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z：484[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.33-8.25(m,1H),8.20(d,J=6.6Hz,1H),7.42(s,1H),7.36(dd,J=14.4,6.5Hz,1H),7.20(d,J=10.7Hz,1H),6.85-6.65(m,2H),4.61(dd,J=10.4,6.1Hz,1H),4.42(t,J=10.0Hz,1H),4.21-4.12 (m,1H),3.79(d,J=3.1Hz,1H),3.75(d,J=10.4Hz,3H),3.36-3.33(m,1H),2.79(t,J=5.5Hz,2H),2.63(t,J=5.1Hz,2H),2.31(d,J=20.7Hz,3H)。
實例106
Figure 109122604-A0202-12-0286-426
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-甲氧基吲哚啉-3-羧酸
依實例32之另一種合成法之相同製程，於步驟1中使用Int.E24替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z：496[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.20(s,1H),7.96(s,1H),7.50(s,1H),7.39(d,J=8.8Hz,1H),6.96(d,J=2.0Hz,1H),6.83-6.58(m,1H),4.69-4.50(m,1H),4.40(s,1H),4.25(d,J=6.2Hz,1H),3.76(d,J=11.4Hz,6H),3.41(s,1H),2.79(d,J=5.6Hz,2H),2.64(d,J=5.4Hz,2H),2.35(s,3H)。
實例107
Figure 109122604-A0202-12-0286-427
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-甲氧基吲哚啉-3-羧酸
依實例32之另一種合成法之相同製程，於步驟1中使用Int.E25替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z：496[M+H]+。1H NMR(500MHz, DMSO-d 6)δ 8.45(s,1H),8.14(s,1H),7.51(d,J=11.9Hz,1H),7.39(dd,J=8.3,2.3Hz,1H),7.19(d,J=9.4Hz,1H),7.03(s,1H),6.76(d,J=8.4Hz,1H),4.69(d,J=2.6Hz,1H),4.62(t,J=10.0Hz,1H),4.36-4.22(m,2H),4.10(d,J=11.4Hz,1H),3.85(d,J=1.7Hz,3H),3.70(d,J=3.6Hz,4H),3.33(s,1H),3.14(s,1H),3.07(d,J=17.0Hz,1H),2.94(s,3H)。
實例108
Figure 109122604-A0202-12-0287-428
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-4-甲氧基吲哚啉-3-羧酸
依實例32之另一種合成法之相同製程，於步驟1中使用Int.E26替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z：496[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.24(s,1H),8.00(s,1H),7.52(s,1H),7.11(t,J=8.1Hz,1H),7.03(d,J=8.0Hz,1H),6.75(s,1H),6.63(d,J=8.1Hz,1H),4.51(t,J=10.2Hz,1H),4.32(dd,J=10.6,4.8Hz,1H),4.10(dd,J=9.7,4.7Hz,1H),3.77(s,7H),2.78(t,J=5.6Hz,2H),2.58(t,J=5.7Hz,2H),2.49-2.48(m,1H),2.33(s,3H)。
實例109
Figure 109122604-A0202-12-0287-429
1-(5-氟-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
依實例32之另一種合成法之相同製程，於步驟1中使用2,4-二氯-5-氟嘧啶替代2,4,5-三氯嘧啶。LC-MS(ESI)m/z：450[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.19(d,J=5.8Hz,1H),7.90(d,J=19.6Hz,1H),7.85(d,J=8.2Hz,1H),7.50(s,1H),7.40(d,J=7.4Hz,1H),7.10(t,J=7.6Hz,1H),6.98(t,J=7.4Hz,1H),6.78(s,1H),4.53(dt,J=10.5,5.3Hz,1H),4.41-4.31(m,1H),4.27(dd,J=9.8,5.7Hz,1H),3.77(s,3H),3.41(s,2H),2.82(t,J=5.5Hz,2H),2.64(t,J=5.9Hz,2H),2.35(s,3H)。
實例110
Figure 109122604-A0202-12-0288-430
1-(5-氰基-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
依實例32之 另一種合成法之相同製程，於步驟1中使用2,4-二氯嘧啶-5-甲腈替代2,4,5-三氯嘧啶。LC-MS(ESI)m/z：457[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.13(s,1H),8.54(s,1H),7.41(d,J=65.9Hz,2H),6.98(d,J=75.7Hz,3H),4.45(s,1H),4.20(s,2H),3.70(s,3H),3.16-3.08(m,2H),2.91(s,2H),2.65(s,2H),2.35(s,3H)。
實例111
Figure 109122604-A0202-12-0289-431
1-(5-氯-2-((6-異丙氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸
依實例32之 另一種合成法之相同製程，於步驟2中使用Int.W9替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z：494[M+H]+。
實例112
Figure 109122604-A0202-12-0289-432
1-(5-(二氟甲基)-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯
步驟1：於0℃，在含2,4-二氯嘧啶-5-甲醛(300mg,1.70mmol)之DCM(5mL)溶液中滴加N-乙基-N-(三氟-硫烷基)乙烷胺(1.37g,8.48mmol)。反應混合物於25℃攪拌16小時，冷卻至0℃，使用飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化至pH~8，及使用二氯甲烷萃取(5mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供2,4-二氯-5-(二氟甲基)嘧啶之淡黃色油(303mg,85%產率)。LC-MS(ESI)m/z：335[M+H]+。
步驟2：依條件A3，使用Int.E17(115.8mg,0.653mmol)及2,4-二氯-5-(二氟甲基)嘧啶(130mg,0.653mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1)後以提供1-(2-氯-5-(二氟甲基)嘧啶-4-基)吲哚啉 -3-羧酸甲基酯(160mg,68.5%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：340[M+H]+。
步驟3：依條件B3，使用1-(2-氯-5-(二氟甲基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯(159mg,0.445mmol)及Int.W1(102.6mg,0.534mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1)後以提供1-(5-(二氟甲基)-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸甲基酯(30mg,10.9%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：496[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.44(s,1H),8.39(s,1H),7.58(s,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J=7.4Hz,1H),7.12(d,J=8.6Hz,1H),7.00(t,J=7.3Hz,1H),6.84(d,J=10.3Hz,1H),4.47-4.39(m,2H),4.34(t,J=9.6Hz,1H),3.76(s,3H),3.69(s,3H),3.56(s,2H),2.88(m,4H),2.49-2.46(s,3H)。
實例113
Figure 109122604-A0202-12-0290-433
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-3-羧酸
依實例32之另一種合成法之相同製程，於步驟1中使用1H-吲唑-3-羧酸甲基酯替代Int.E17。LC-MS(ESI)m/z：465[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.87(s,1H),8.63(s,1H),8.38-8.22(m,2H),7.99(d,J=8.1Hz,1H),7.55-7.28(m,3H),6.83(s,1H),3.77(s, 3H),3.39-3.38(m,2H),2.82(d,J=5.3Hz,2H),2.61(t,J=5.7Hz,2H),2.33(s,3H)。
實例34
Figure 109122604-A0202-12-0291-434
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧醯胺
步驟1：依條件A1，使用1H-吲哚-3-羧酸(500mg,3.10mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(625.99mg,3.41mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH,50/1)後以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚-3-羧酸(200mg,19.88%產率，95%純度)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：308.1[M+H]+。
步驟2&3：依實例33 步驟1&2之條件之相同製程，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚-3-羧酸替代1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧酸。LC-MS(ESI)m/z：463.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.87(s,1H),8.71(s,1H),8.49(s,1H),8.29-8.15(m,1H),7.78-7.64(m,2H),7.39(s,1H),7.31-7.21(m,2H),7.11(s,1H),6.79(s,1H),3.79(s,3H),3.33(d,J=5.8Hz,2H),2.85-2.70(m,2H),2.54(t,J=5.9Hz,2H),2.29(s,3H)。
實例114
Figure 109122604-A0202-12-0291-435
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯
實例35
Figure 109122604-A0202-12-0292-436
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸
步驟1：依條件A1，使用1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(1g,5.71mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(1.15g,6.28mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=100/1)後以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(800mg,43.5%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：322[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(200mg,0.621mmol)及Int.W1(143.2mg,0.745mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=100/1)後以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(138mg,44.2%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：478[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.95(s,1H),8.72(s,1H),8.48(s,1H),8.09(dd,J=6.4,2.3Hz,1H),7.76(dd,J=6.6,2.1Hz,1H),7.47-7.24(m,3H),6.79(s,1H),3.87(s,3H),3.78(s,3H),3.33(s,2H),2.78(t,J=5.7Hz,2H),2.55(d,J=5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
步驟3：取含1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(454mg,0.950mmol)、 AcOH(456mg,7.60mmol)及HCl水溶液(6N,36mL)混合物於50℃攪拌16小時，經製備性-HPLC純化(MeCN/0.04%甲酸)後以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-羧酸(33.1mg,7.5%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：464.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.88(s,1H),8.69(s,1H),8.33(d,J=20.1Hz,2H),8.18(s,1H),7.75(d,J=7.8Hz,1H),7.37(s,1H),7.28(s,2H),6.80(s,1H),3.79(s,3H),3.34-3.33(m,2H),2.78(s,2H),2.55(s,2H),2.30(s,3H)。
實例116
Figure 109122604-A0202-12-0293-437
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯
實例117
Figure 109122604-A0202-12-0293-438
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸
步驟1：取含Int.E18(158mg,0.826mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(197.0mg,1.07mmol)及DIPEA(427.2mg,3.30mmol)之正丁醇(4mL)混合物於100℃攪拌12小時，冷卻至室溫，及使用DCM/MeOH(10/1, 100mL)與水(30mL)稀釋。分離水相，及使用DCM/MeOH萃取(10/1,30mL x 3)。合併之有機相使用鹽水(40mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE：30%)。經矽膠快速管柱層析法純化後(EA/PE：30%)後以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯(257mg,89.2%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：338[M+H]+。
步驟2：取含1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯(50mg,0.148mmol)、Int.W1(40.6mg,0.177mmol)及TsOH．H2O(28.1mg,0.148mmol)之異丙醇(3mL)混合物於120℃攪拌12小時，冷卻至室溫，使用飽和NaHCO3水溶液(4mL)中和，及使用DCM萃取(20mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025%NH3‧H2O)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯(20mg,27.4%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：494[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.27(s,1H),8.08(s,1H),7.49(s,1H),7.35(dd,J=12.7,7.8Hz,2H),7.16(t,J=7.8Hz,1H),7.00(t,J=7.5Hz,1H),6.75(s,1H),4.75(d,J=10.8Hz,1H),4.09(d,J=10.8Hz,1H),3.76(s,3H),3.63(s,3H),3.29(s,2H),2.77(t,J=5.5Hz,2H),2.56(d,J=5.8Hz,2H),2.31(s,3H),1.56(s,3H)。
步驟3：取含1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯(20mg,0.040mmol)及氫氧化鋰水溶液(2N,0.1mL)之THF(2.5mL)混合物於室溫攪拌 3小時，使用甲酸調整至pH~5，及使用DCM萃取(15mL x 3)。合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%甲酸)以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸之白色固體(10.7mg,55%產率)。LC-MS(ESI)m/z：480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.26(s,1H),8.04(s,1H),7.52(s,1H),7.36(t,J=8.0Hz,2H),7.15(t,J=7.7Hz,1H),6.99(t,J=7.4Hz,1H),6.76(s,1H),4.76(d,J=10.6Hz,1H),4.04(d,J=10.6Hz,1H),3.35(s,2H),2.79(t,J=5.5Hz,2H),2.61(t,J=5.7Hz,2H),2.34(s,3H),1.53(s,3H)。
實例118 & 119
Figure 109122604-A0202-12-0295-439
(R)-1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸&(S)-1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸
由消旋性1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸經過對掌性-分離後合成。未確認立體化學，因此自由指定兩種產物。
LC-MS(ESI)m/z：480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),8.00(s,1H),7.52(s,1H),7.37(t,J=7.3Hz,2H),7.13(t,J=7.7Hz,1H),6.99(t,J=7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.77(d,J=10.7Hz,1H),4.02(d,J=10.7Hz,1H),3.77(s,3H),3.11-3.01(m,2H),2.77 (d,J=5.9Hz,2H),2.57(t,J=5.7Hz,2H),2.32(s,3H),1.52(s,3H)。對掌性-HPLC滯留時間：1.079min；ee值：>99%。
LC-MS(ESI)m/z：480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.26(s,1H),8.02(s,1H),7.53(s,1H),7.37(t,J=7.4Hz,2H),7.14(t,J=8.0Hz,1H),7.00(t,J=7.5Hz,1H),6.76(s,1H),4.77(d,J=10.7Hz,1H),4.04(d,J=10.5Hz,1H),3.77(s,3H),3.07-2.97(m,2H),2.79(s,2H),2.59(d,J=5.9Hz,2H),2.33(s,3H),1.53(s,3H)。對掌性-HPLC滯留時間：1.501min；ee值：>99%。
SFC分離條件：
儀器：SFC-150(Thar,Waters)
管柱：IG 20*250mm,10um(Daicel)
管柱溫度：35℃
移動相：CO2/EtOH(0.5%甲醇/氨)=45/55
流速：120g/min
背壓：100bar
檢測波長：214nm
循環時間：3min
實例120
Figure 109122604-A0202-12-0296-441
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧醯胺
步驟1：依條件A3，使用Int.E19(148mg,0.798mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(146.4mg,0.798mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE：1/5)後以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧醯胺(199mg,69.5%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：323[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧醯胺(199mg,0.585mmol)及Int.W1(135.0mg,0.702mmol)，經過製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3)後以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧醯胺(82.5mg,28.3%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：479[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),7.99(s,1H),7.52(s,1H),7.46(d,J=7.5Hz,1H),7.37(d,J=8.1Hz,1H),7.28(s,1H),7.18(s,1H),7.13(t,J=7.7Hz,1H),7.00(t,J=7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.81(d,J=10.4Hz,1H),3.97(d,J=10.4Hz,1H),3.77(s,3H),3.29(d,J=5.1Hz,2H),2.77(t,J=5.7Hz,2H),2.55(t,J=5.8Hz,2H),2.31(s,3H),1.53(s,3H)。
實例121
Figure 109122604-A0202-12-0297-442
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-甲腈
依實例99之相同製程，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧醯胺替代1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吲哚啉-3-羧醯胺。LC-MS (ESI)m/z：461[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.33(s,1H),8.16(s,1H),7.60-7.43(m,2H),7.33(d,J=8.0Hz,1H),7.26(t,J=7.7Hz,1H),7.09(t,J=7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.65(d,J=10.9Hz,1H),4.27(d,J=10.9Hz,1H),3.77(d,J=5.8Hz,3H),3.29(s,2H),2.77(t,J=5.7Hz,2H),2.55(t,J=5.8Hz,2H),2.31(s,3H),1.73(s,3H)。
實例122
Figure 109122604-A0202-12-0298-443
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,3-二甲基吲哚啉-3-羧醯胺
步驟1：依條件A3，使用Int.E20(68mg,0.357mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(72.1mg,0.393mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH：10/1)後以提供1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,3-二甲基吲哚啉-3-羧醯胺(72mg,59.7%產率)之無色油。LC-MS(ESI)m/z：337[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N,3-二甲基吲哚啉-3-羧醯胺(72mg,0.214mmol)及Int.W1(41.1mg,0.214mmol)，經過製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%FA)後以提供1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-N,3-二甲基吲哚啉-3-羧醯胺(45.6mg,43.3%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：493[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.29(d,J=32.1Hz,1H),8.02(s,1H),7.70(s,1H),7.51(s,1H),7.38(t,J=7.2Hz,2H),7.14(t,J=7.1Hz,1H),7.01(d,J=6.7Hz,1H),6.75(s,1H),4.81(d,J=10.3Hz, 1H),3.99(d,J=10.3Hz,1H),3.77(s,3H),3.31(s,2H),2.78(s,2H),2.58(s,5H),2.32(s,3H),1.61(d,J=64.4Hz,3H)。
實例123
Figure 109122604-A0202-12-0299-444
(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇
步驟1：依條件A3，使用Int.E21(60mg,0.382mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(70mg,0.382mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH：10/1)後以提供(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇(85mg,64.6%產率)之黃色油。LC-MS(ESI)m/z：310[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇(85mg,0.273mmol)及Int.W1(62.9mg,0.327mmol)，經過製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%FA)後以提供(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇(22.4mg,17.6%)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：466[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.23(s,1H),7.97(s,1H),7.54(s,1H),7.37(d,J=8.1Hz,1H),7.21(d,J=7.0Hz,1H),7.10(s,1H),6.97(d,J=7.4Hz,1H),6.75(s,1H),5.01(t,J=5.3Hz,1H),4.26(d,J=10.5Hz,1H),3.87(d,J=10.5Hz,1H),3.77(s,3H),3.39-3.35(m,2H),3.30-3.28(m,2H),2.80-2.75(m,2H),2.58-2.54(m,2H),2.31(s,3H),1.29(s,3H)。
實例124
Figure 109122604-A0202-12-0300-445
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-(羥基甲基)吲哚啉-3-羧酸
依實例117之相同製程，於步驟1中使用Int.E37替代Int.E18。LC-MS(ESI)m/z：498[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),8.21(s,1H),8.00(d,J=9.3Hz,1H),7.51(s,1H),7.39(t,J=8.0Hz,2H),7.12(t,J=7.7Hz,1H),6.95(t,J=7.4Hz,1H),6.76(s,1H),4.75(d,J=10.7Hz,1H),4.24(d,J=10.7Hz,1H),3.86(d,J=10.4Hz,2H),3.77(s,3H),3.49(br,1H),3.33(br,2H),2.78(t,J=5.5Hz,2H),2.59(t,J=5.7Hz,2H),2.33(s,3H)。
實例125
Figure 109122604-A0202-12-0300-446
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-羧酸
依實例117之相同製程，於步驟1中使用Int.E27替代Int.E18。LC-MS(ESI)m/z：498[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.24(s,1H),8.05(s,1H),7.47(s,1H),7.39(dd,J=8.8,4.7Hz,1H),7.18(dd,J=8.5,2.7Hz,1H),6.95(td,J=9.0,2.7Hz,1H),6.77(s,1H),4.78(d,J=10.7Hz,1H),4.06(d,J=10.7Hz,1H),3.76(s,4H),2.80(d, J=5.7Hz,2H),2.67(t,J=5.8Hz,2H),2.51(s,1H),2.36(d,J=12.7Hz,3H),1.52(s,3H)。
實例126
Figure 109122604-A0202-12-0301-447
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-羧酸
依實例117之相同製程，於步驟1中使用Int.E28替代Int.E18。LC-MS(ESI)m/z：498[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.27(s,1H),8.20(s,1H),7.41(s,1H),7.37-7.27(m,1H),7.18(d,J=10.4Hz,1H),6.75(s,2H),4.81(d,J=10.3Hz,1H),4.08(d,J=10.4Hz,1H),3.76(s,3H),3.35(s,2H),2.78(s,2H),2.60(s,2H),2.33(s,3H),1.50(s,3H)。
實例127
Figure 109122604-A0202-12-0301-448
1-(5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸
依實例117之相同製程，於步驟2中使用Int.W11替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z：466[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.47(s,1H),8.14(s,1H),7.60(s,1H),7.48(s,1H),7.46(d,J=6.8Hz, 1H),7.24(t,J=7.6Hz,1H),7.17(t,J=7.2Hz,1H),7.03(s,1H),5.01(d,J=11.0Hz,1H),4.30(d,J=11.0Hz,1H),4.14(d,J=6.3Hz,2H),3.82(s,3H),3.42(t,J=6.3Hz,2H),3.04(t,J=6.1Hz,2H),1.60(s,3H)。
實例128
Figure 109122604-A0202-12-0302-449
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-基)乙酸
依實例117之相同製程，於步驟1中使用Int.E29替代Int.E18。LC-MS(ESI)m/z：480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.26(d,J=21.1Hz,1H),7.98(s,1H),7.55(s,1H),7.30(dd,J=22.6,7.7Hz,2H),7.10(t,J=7.7Hz,1H),6.94(t,J=7.4Hz,1H),6.74(s,1H),4.56-4.36(m,1H),3.98(dd,J=10.6,7.0Hz,1H),3.77(s,3H),3.69(s,2H),3.29(s,2H),2.84-2.70(m,3H),2.56(t,J=5.8Hz,2H),2.31(s,3H)。
實例129
Figure 109122604-A0202-12-0302-450
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸
實例130
Figure 109122604-A0202-12-0303-452
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸異丙基酯
實例131
Figure 109122604-A0202-12-0303-453
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸2-乙基丁基酯
步驟1：依條件A1，使用2-(1H-吲哚-3-基)乙酸(300mg,1.71mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(314.1mg,1.71mmol)，經逆相層析法純化後以提供2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(93mg,16.0%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：322[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(93mg,0.274mmol)及Int.W1(66.6mg,0.329mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=10/1)後以提供2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸異丙基酯(120mg,80.0%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：520[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)88.70(s,1H),8.62(s,1H),7.86-7.77(m,2H),7.57(dd,J=6.0,2.8Hz,1H),7.43(s,1H),7.21(dd,J= 6.0,3.1Hz,2H),6.80(s,1H),4.94(dt,J=12.5,6.3Hz,1H),3.80(s,2H),3.79(s,3H),3.32(s,2H),2.78(t,J=5.5Hz,2H),2.55(t,J=5.9Hz,2H),2.30(s,3H),1.21(d,J=6.3Hz,6H)。
於步驟2中，使用2-乙基丁烷-1-醇作為溶劑，得到2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸2-乙基丁基酯。LC-MS(ESI)m/z：562[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.69(s,1H),8.63(s,1H),8.36(s,1H),7.85-7.74(m,2H),7.60-7.52(m,1H),7.45(s,1H),7.28-7.14(m,2H),6.78(d,J=12.8Hz,1H),3.99(d,J=5.8Hz,2H),3.85(s,2H),3.79(s,3H),3.31(s,2H),2.78(t,J=5.6Hz,2H),2.55(t,J=5.8Hz,2H),2.30(d,J=8.2Hz,3H),1.45(dd,J=12.4,6.2Hz,1H),1.29-1.23(m,4H),0.80(t,J=7.4Hz,6H)。
步驟3：依實例117 步驟3之相同條件，使用2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸異丙基酯(142mg,0.273mmol)，經過製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3)後以提供2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸之白色固體(57.9mg,44.4%產率)。LC-MS(ESI)m/z：480[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.79(s,1H),8.64(s,1H),7.80(d,J=6.8Hz,2H),7.55(s,1H),7.26(d,J=7.7Hz,1H),7.22(d,J=7.6Hz,1H),6.91(s,1H),3.92(s,2H),3.83(s,3H),3.75(s,2H),3.17(s,2H),2.98(s,2H),2.69(s,3H)。
實例132
Figure 109122604-A0202-12-0305-454
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙基酯
在含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(60mg,0.126mmol)之乙醇(1mL)溶液中滴加SOCl2(29.9mg,0.251mmol)。反應混合物於85℃攪拌3小時，冷卻至室溫，使用飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化至pH 8，及使用乙酸乙酯萃取(10mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(10mM NH4HCO3&0.025%NH3．H2O/乙腈)以提供2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙基酯之淡黃色固體(7.8mg,12%產率)。LC-MS(ESI)m/z：506[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.70(s,1H),8.62(s,1H),7.83(s,1H),7.82-7.76(m,1H),7.64-7.53(m,1H),7.43(s,1H),7.28-7.16(m,2H),6.80(s,1H),4.11(q,J=7.1Hz,2H),3.84(s,2H),3.79(s,3H),3.33(s,2H),2.78(t,J=5.5Hz,2H),2.55(t,J=5.8Hz,2H),2.30(s,3H),1.20(t,J=7.1Hz,3H)。
實例133
Figure 109122604-A0202-12-0305-455
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙醯胺
在含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(30mg,0.060mmol)、氯化銨(31.9mg,0.596mmol)、及HATU(34.0mg,0.089mmol)之DMF(1mL)混合物中添加DIPEA(115.6mg,0.894mmol)。反應混合物於25℃攪拌16小時，經製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025%NH3‧H2O)，產生2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙醯胺(9.1mg,32.0%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：477[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.67(s,1H),8.61(s,1H),7.81(dd,J=6.3,3.0Hz,1H),7.77(s,1H),7.62(dd,J=5.5,3.3Hz,1H),7.51(s,1H),7.45(s,1H),7.20(dd,J=6.0,3.1Hz,2H),6.94(s,1H),6.80(s,1H),3.79(s,3H),3.54(s,2H),3.30(s,1H),2.78(d,J=5.6Hz,2H),2.56(d,J=5.8Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例134
Figure 109122604-A0202-12-0306-456
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙腈
於0℃，在含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙醯胺(50mg,0.105mmol) 及吡啶(33.2mg,0.419mmol)之DCM(2mL)溶液中滴加三氟乙酸酐(44.0mg,0.210mmol)。混合物於0℃攪拌一小時及於室溫攪拌6小時，使用HCl水溶液(1N,10mL)中止反應，及使用DCM萃取(20mL x 3)。有機相使用鹽水(15mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(0.1%FA/MeCN)以提供2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙腈(19.3mg,39.7%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：459[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.76(s,1H),8.65(s,1H),8.35(s,2H),7.89(s,1H),7.81(dd,J=6.3,2.9Hz,1H),7.69(dd,J=6.1,2.8Hz,1H),7.42(s,1H),7.28(dd,J=6.1,3.2Hz,2H),6.80(s,1H),4.18(s,2H),3.79(s,3H),3.33(s,2H),2.78(t,J=5.6Hz,2H),2.55(t,J=5.8Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例135
Figure 109122604-A0202-12-0307-457
N-(4-(3-((2H-四唑-5-基)甲基)-1H-吲哚-1-基)-5-氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例100之相同製程，使用2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙腈替代1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)吲哚啉-3-甲腈。LC-MS(ESI)m/z：502[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.76(s,1H),8.63(s,1H),8.15(s,1H),7.75(d,J=4.8Hz,2H), 7.56(d,J=7.6Hz,1H),7.47(s,1H),7.25-7.16(m,2H),6.84(s,1H),4.37(s,2H),3.80(s,3H),3.64(s,2H),2.87(s,4H),2.52(s,3H)。
實例136
Figure 109122604-A0202-12-0308-458
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)-N-甲基乙醯胺
依實例133之相同製程，使用甲基胺替代氯化銨。LC-MS(ESI)m/z：491[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.68(s,1H),8.62(s,1H),7.97(s,1H),7.80(dd,J=6.2,3.0Hz,1H),7.76(s,1H),7.61(dd,J=5.6,3.1Hz,1H),7.44(s,1H),7.20(dd,J=6.0,3.1Hz,2H),6.79(s,1H),3.79(s,3H),3.56(s,2H),3.30(s,2H),2.78(d,J=5.1Hz,2H),2.59(d,J=4.6Hz,3H),2.56(d,J=5.7Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例137
Figure 109122604-A0202-12-0308-459
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)-N-(氰基甲基)乙醯胺
依實例133之相同製程，使用2-胺基乙腈硫酸替代氯化銨。LC-MS(ESI)m/z：516[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.75(s,1H),8.69(s,1H),8.62(s,1H),7.84-7.78(m,2H),7.63-7.53(m,1H),7.43 (s,1H),7.25-7.15(m,2H),6.80(s,1H),4.15(d,J=5.5Hz,2H),3.79(s,3H),3.67(s,2H),3.30(s,2H),2.79(s,2H),2.56(d,J=5.5Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例138
Figure 109122604-A0202-12-0309-460
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-1H-吲哚-3-基)乙酸
依實例129之相同製程，使用2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙酸替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z：496[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.77(d,J=28.9Hz,1H),8.61(s,1H),7.90(s,1H),7.81(dd,J=9.0,4.5Hz,1H),7.46-7.24(m,2H),7.04(td,J=9.1,2.4Hz,1H),6.81(s,1H),3.79(s,3H),3.72(s,2H),3.35(s,2H),2.80(d,J=5.4Hz,2H),2.59(t,J=5.7Hz,2H),2.32(s,3H)。
實例139
Figure 109122604-A0202-12-0309-461
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-1H-吲哚-3-基)乙酸
依實例129之相同製程，使用2-(6-氟-1H-吲哚-3-基)乙酸替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z：496[M+H]+。1H NMR (400MHz,DMSO-d 6)δ 8.79(s,1H),8.61(s,1H),8.24(d,J=10.5Hz,1H),7.82(s,1H),7.67-7.52(m,2H),7.38(s,1H),7.08(td,J=9.3,2.4Hz,1H),6.79(s,1H),3.79(s,3H),3.71(s,2H),3.34(s,2H),2.79(t,J=5.6Hz,2H),2.56(t,J=5.8Hz,2H),2.30(s,3H)。
實例140
Figure 109122604-A0202-12-0310-462
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5,6-二氟-1H-吲哚-3-基)乙酸
依實例129之相同製程，使用2-(5,6-二氟-1H-吲哚-3-基)乙酸替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z：514[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.84(s,1H),8.61(s,1H),8.23(s,1H),7.92(s,1H),7.88-7.79(m,1H),7.61(dd,J=10.8,8.0Hz,1H),7.35(s,1H),6.79(d,J=17.2Hz,1H),3.78(s,3H),3.72(s,2H),3.35(s,2H),2.80(t,J=5.3Hz,2H),2.57(s,2H),2.32(d,J=13.1Hz,3H)。
實例141
Figure 109122604-A0202-12-0310-463
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)乙酸
依實例129之相同製程，使用2-(1H-吲唑-3-基)乙酸替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z：479[M+H]+。
實例142
Figure 109122604-A0202-12-0311-464
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)丙酸
依實例129之相同製程，使用Int.E30替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z：492[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.69(s,1H),8.62(s,1H),8.26(s,1H),7.80-7.74(m,1H),7.72(s,1H),7.65(d,J=8.6Hz,1H),7.44(s,1H),7.24-7.15(m,2H),6.79(s,1H),3.93(d,J=7.1Hz,1H),3.78(s,3H),3.34(s,2H),2.77(d,J=5.5Hz,2H),2.56(t,J=5.8Hz,2H),2.30(s,3H),1.49(d,J=7.1Hz,3H)。
實例143
Figure 109122604-A0202-12-0311-465
1-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)環丙烷-1-羧酸
依實例129之相同製程，使用Int.E31替代2-(1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z：504[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.68(s,1H),8.62(s,1H),8.27(s,1H),7.81-7.75(m,1H),7.72(s,1H), 7.59-7.53(m,1H),7.44(s,1H),7.23-7.18(m,2H),6.79(s,1H),3.79(s,3H),3.35(s,2H),2.78(t,J=5.5Hz,2H),2.56(t,J=5.7Hz,2H),2.31(s,3H),1.49(d,J=2.7Hz,2H),1.13(d,J=2.1Hz,2H)。
實例144
Figure 109122604-A0202-12-0312-466
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)-3,3,3-三氟丙酸
步驟1：依條件A1，使用Int.E32(200mg,0.822mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(226.3mg,1.23mmol)，經逆相層析法純化(MeCN/0.03%TFA)後以提供2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)-3,3,3-三氟丙酸(190mg,47.4%產率，80%純度)。LC-MS(ESI)m/z：390[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用Int.W1(112.4mg,0.584mmol)及2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)-3,3,3-三氟丙酸(190mg,0.487mmol)，經過製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%HCOOH)後以提供1-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)環丙烷-1-羧酸之白色固體(9.3mg,3.4%產率)。LC-MS(ESI)m/z：546[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.82(s,1H),8.65(s,1H),8.17(s,1H),7.82(s,1H),7.73(d,J=7.6Hz,1H),7.63(d,J=7.7Hz,1H),7.45(s,1H),7.25-7.19(m,2H),6.82(s,1H),4.63(d,J=9.0Hz,1H),3.77(s,3H),3.63(br,2H),2.88(br,5H),2.56(br,2H)。
實例145
Figure 109122604-A0202-12-0313-467
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯
實例146
Figure 109122604-A0202-12-0313-468
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
步驟1：在含Int.E33(67mg,0.248mmol)之n-BuOH(3mL)混合物中慢慢添加2,4,5-三氯嘧啶(45.5mg,0.248mmol)及DIPEA(96.19mg,0.744mmol)。混合物於100℃攪拌16小時，使用冰-冷水(20mL)中止反應，及使用EA萃取(30mL x 3)。有機相使用鹽水(20mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/PE=0-100%)，給予2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(80mg,83.3%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：352[M+H]+。
步驟2：在含2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(80mg,0.227mmol)之i-PrOH(5mL)混合物中慢慢添加Int.W1(51.5mg,0.227mmol)與TsOH‧H2O(43.2mg,0.227mmol)。混合 物於100℃攪拌16小時，使用飽和NaHCO3水溶液(10mL)中止反應，及使用DCM/MeOH萃取(v/v=10/1,30mL x 3)。有機相使用鹽水(30mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=0-15%)，給予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(70mg,42.5%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：508[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.26(s,1H),7.98(s,1H),7.59(s,1H),7.30(t,J=8.8Hz,2H),7.12(s,1H),6.98(s,1H),6.74(s,1H),4.38(d,J=10.7Hz,1H),4.05(d,J=10.7Hz,1H),3.78(s,3H),3.50(s,3H),3.27(s,2H),2.78(dd,J=10.3,4.8Hz,3H),2.68(s,1H),2.55(t,J=5.7Hz,2H),2.30(s,3H),1.36(s,3H)。
步驟3：取含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(70mg,0.096mmol)及LiOH水溶液(2N,1mL)之THF(5mL)混合物於室溫攪拌16小時，使用甲酸調整至pH~5，及使用DCM萃取(30mL x 3)。合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025%NH3．H2O)純化，給予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(23.0mg,46.2%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：494[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),7.99(s,1H),7.57(s,1H),7.29(dd,J=17.2,7.6Hz,2H),7.11(t,J=7.3Hz,1H),6.98(d,J=7.3Hz,1H),6.75(s,1H),4.42(d,J=10.7Hz,1H),4.02(d,J=10.6 Hz,1H),3.78(s,3H),3.30(s,2H),2.78(s,2H),2.69(d,J=15.4Hz,1H),2.58(d,J=6.1Hz,3H),2.32(s,3H),1.34(s,3H)。
實例147 & 148
Figure 109122604-A0202-12-0315-469
(R)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸&(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
方法1：
步驟1：由2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(157mg)經過SFC對掌性分離以提供(R)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯及(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(分別為67mg,63mg)。未確認立體化學，因此自由指定兩種產物。
LC-MS(ESI)m/z：508[M+H]+。對掌性-HPLC滯留時間：1.829min；ee值：98.3%。
LC-MS(ESI)m/z：508[M+H]+。對掌性-HPLC滯留時間：3.427min；ee值：>99%。
SFC分離條件：
儀器：SFC-80(Thar,Waters)
管柱：AD-H 20*250mm,10um(Daieel)
管柱溫度：35℃
移動相：CO2/EtOH(0.2%甲醇/氨)=50/50
流速：80g/min
背壓：100bar
檢測波長：214nm
循環時間：6.9min
步驟2：依實例146 步驟3之相同條件，分別水解(R)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯及(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯以提供(R)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸及(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(分別為17.6mg，33.8mg)。未確認立體化學，因此自由指定兩種產物。
LC-MS(ESI)m/z：494[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),8.00(s,1H),7.57(s,1H),7.30(dd,J=13.7,7.7Hz,2H),7.11(t,J=7.6Hz,1H),6.97(t,J=7.3Hz,1H),6.75(s,1H),4.42(d,J=10.7Hz,1H),4.02(d,J=10.8Hz,1H),3.78(s,3H),3.30(s,2H),2.78(s,2H),2.69(d,J=15.4Hz,1H),2.62-2.54(m,3H),2.32(s,3H),1.34(s,3H)。對掌性-HPLC滯留時間：1.384min；ee值：>99%。
LC-MS(ESI)m/z：494[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),8.00(s,1H),7.56(s,1H),7.29(dd,J=13.6,7.4Hz,2H),7.10(t,J=7.1Hz,1H),6.97(t,J=7.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.41(d,J=10.8Hz,1H),4.02(d,J=10.8Hz,1H),3.77(s,3H),3.29(s,2H),2.77(t,J=5.6Hz,2H),2.69(d,J=15.4Hz,1H),2.57(dd,J=13.1,7.1Hz,3H),2.30(d,J=11.1Hz,3H),1.34(s,2H)。對掌性-HPLC滯留時間：1.132min；ee值：>99%。
方法2：
步驟1：由2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯經過SFC對掌性分離以提供(R)-2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯及(S)-2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯。未確認立體化學，因此自由指定兩種產物。
LC-MS(ESI)m/z：352[M+H]+。對掌性-HPLC滯留時間：1.191min；ee值：>99%。
LC-MS(ESI)m/z：352[M+H]+。對掌性-HPLC滯留時間：1.519min；ee值：>99%。
SFC分離條件：
儀器：SFC-80(Thar,Waters)
管柱：AD-H 20*250mm,10um(Daicel)
管柱溫度：35℃
移動相：CO2/異丙醇(0.2%甲醇/氨)=87/13
流速：80g/min
背壓：100bar
檢測波長：214nm
循環時間：2.8min
(以其中一種立體異構物作為步驟2&3之代表性實例)
步驟2：取含Int.W1(1.36g,5.96mmol)、(S)-2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(2.1g,5.96mmol)及TsOH．H2O(1.13g,5.96mmol)之第三丁醇(25mL)混合物於100℃攪拌12小時，冷卻至室溫，及倒至飽和NaHCO3水溶液(10mL)中，及使用EA萃取(30mL x 3)。有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=20：1)以提供(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(1.8g,56.3%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：508[M+H]+。
步驟3：取含氫氧化鋰水合物(264mg,6.3mmol)之水(5mL)溶液及(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(1.6g,3.15mmol)之MeOH(5mL)混合物於室溫攪拌16小時，及使用乙酸酸化至pH~3。所得混合物經製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3)以提供(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(839.3mg,53.9%產率)之淺黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：494[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.30(s,1H),8.02(s,1H),7.63(s,1H),7.37(d,J=8.0Hz,1H),7.33(d,J=8.0Hz,1H),7.16(t,J =8.0Hz,1H),7.02(t,J=8.0Hz,1H),6.80(s,1H),4.48(d,J=10.8Hz,1H),4.08(d,J=10.8Hz,1H),3.83(s,3H),2.83(t,J=5.6Hz,2H),2.74(d,J=15.2Hz,1H),2.66-2.59(m,3H),2.37(s,3H),1.40(s,3H)。對掌性-HPLC滯留時間：1.132min；ee值：>99%。
實例149
Figure 109122604-A0202-12-0319-470
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸乙基酯
依實例132之相同製程，使用2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸替代2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸。LC-MS(ESI)m/z：522[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),7.97(s,1H),7.57(s,1H),7.36-7.24(m,2H),7.12(dd,J=11.1,4.3Hz,1H),6.98(s,1H),6.74(s,1H),4.41(d,J=10.8Hz,1H),4.05(d,J=10.7Hz,1H),3.96(dd,J=7.1,1.5Hz,2H),3.77(d,J=3.3Hz,3H),3.27(s,2H),2.75(dd,J=10.1,7.2Hz,3H),2.65(s,1H),2.55(d,J=5.7Hz,2H),2.30(s,3H),1.35(s,3H),1.06(t,J=7.1Hz,3H)。
實例150
Figure 109122604-A0202-12-0320-471
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
步驟1：取含Int.E34(295mg,1.32mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(266.6mg,1.45mmol)及DIPEA(170.5mg,1.32mmol)之n-BuOH(2mL)溶液於100℃攪拌2小時，冷卻至室溫，倒至水中，使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/4)，給予2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(416mg,85.0%產率)之灰白色固體。LC-MS(ESI)m/z：370[M+H]+。
步驟2：取含2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(100mg,0.270mmol)、Int.W1(62.3mg,0.324mmol)及TsOH．H2O(51.3mg,0.270mmol)之i-PrOH(2mL)溶液於100℃攪拌16小時，冷卻至室溫，及使用飽和NaHCO3水溶液中和至pH~8。混合物使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/4)，給予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(186mg,80.7%產率，60%純度)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：526[M+H]+。
步驟3：取含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(186mg,0.354mmol)及LiOH水溶液(2N,3.5mL)之THF(8mL)混合物於室溫攪拌一夜，使用甲酸調整至pH~5，及使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,10mL x 3)。合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025%NH3‧H2O)，給予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(57.6mg,31.8%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：512[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.23(s,1H),8.02(s,1H),7.51(s,1H),7.34(dd,J=8.7,4.7Hz,1H),7.20(dd,J=8.6,2.7Hz,1H),6.89(td,J=9.0,2.7Hz,1H),6.75(s,1H),4.44(d,J=10.9Hz,1H),4.06(d,J=10.8Hz,1H),3.77(s,3H),3.28(s,2H),2.78(t,J=5.7Hz,2H),2.71(d,J=15.6Hz,1H),2.62(s,1H),2.59-2.55(m,2H),2.31(s,3H),1.33(s,3H)。
實例151
Figure 109122604-A0202-12-0321-472
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
步驟1：取含Int.E35(78mg,0.349mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(64.1mg,0.349mmol)及DIPEA(135.2mg,1.05mmol)之n-BuOH(2mL)溶液於100℃攪拌16小時，冷卻至室溫，倒至水中，及使用DCM/MeOH 萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/10)，給予2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(100mg,73.4%產率)之淡黃色油。LC-MS(ESI)m/z：370[M+H]+。
步驟2：取含2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(82.7mg,0.232mmol)、Int.W1(63.8mg,0.279mmol)及TsOH．H2O(53.0mg,0.279mmol)之i-PrOH(2mL)溶液於120℃攪拌16小時，冷卻至室溫，及使用飽和NaHCO3水溶液中和至pH~8。混合物使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=10/1)，給予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(81mg,62.9%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：526[M+H]+。
步驟3：取含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(81mg,0.154mmol)及LiOH水溶液(1N,4mL)之二
Figure 109122604-A0202-12-0322-592
烷(4mL)混合物於室溫攪拌一夜，使用甲酸調整至pH~5，及使用EA萃取(30mL x 3)。合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025%NH3．H2O)，給予2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(29.8mg,37.8%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：512[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.26(s,1H),8.17(s,1H), 7.46(s,1H),7.31-7.23(m,1H),7.14(d,J=10.0Hz,1H),6.75(s,2H),4.46(d,J=10.7Hz,1H),4.07(d,J=10.6Hz,1H),3.77(s,3H),3.31(s,2H),2.77(s,2H),2.69(d,J=15.6Hz,1H),2.58(d,J=14.8Hz,3H),2.31(s,3H),1.33(s,3H)。
實例152 & 153
Figure 109122604-A0202-12-0323-473
(S)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸&(R)-2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
取消旋性2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-6-氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸經過對掌性-分離後合成。未確認立體化學，因此自由指定兩種產物。
LC-MS(ESI)m/z：512[M+H]+。對掌性-HPLC滯留時間：11.913min；ee值：80.4%。
LC-MS(ESI)m/z：512[M+H]+。對掌性-HPLC滯留時間：16.631min；ee值：98.9%。
SFC分離條件：
儀器：Gilson-281
管柱：IG 20*250mm,10um
移動相：正己烷(0.1%二甲基胺)/EtOH(0.1%二乙基胺)=65：35
流速：40mL/min
循環時間：22min
實例154
Figure 109122604-A0202-12-0324-474
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-5,6-二氟-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
依實例146之相同製程，使用Int.E36替代Int.E33。LC-MS(ESI)m/z：530[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.24(s,1H),8.20(s,1H),7.45-7.36(m,3H),6.75(s,1H),4.46(d,J=10.8Hz,1H),4.08(d,J=10.7Hz,1H),3.76(s,3H),3.27(s,2H),2.77(t,J=5.5Hz,2H),2.70(d,J=15.6Hz,1H),2.61(s,1H),2.56(dd,J=12.0,6.2Hz,2H),2.29(s,3H),1.31(s,3H)。
實例155
Figure 109122604-A0202-12-0324-475
2-(1-(5-氯-2-((2-甲氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶-3-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
依實例146之相同製程，於步驟2中使用Int.W4替代Int.W1，及省略步驟3，因為甲基酯已於步驟2中水解。LC-MS(ESI)m/z：495[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 11.87(s,1H),8.37(s,1H), 7.99(s,1H),7.87(s,1H),7.35(t,J=8.6Hz,2H),7.23(t,J=7.7Hz,1H),7.03(t,J=7.3Hz,1H),4.39(d,J=10.7Hz,1H),4.07(d,J=10.7Hz,1H),3.47(s,3H),3.31(s,1H),3.09(s,2H),2.80(d,J=15.0Hz,1H),2.71-2.63(m,1H),2.56(s,1H),2.54(s,2H),2.31(s,3H),1.37(s,3H)。
實例156
Figure 109122604-A0202-12-0325-476
2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
步驟1：取含2-(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯(195.4mg,0.555mmol)、Int.W7(100mg,0.555mmol)及TsOH．H2O(105.5mg,0.555mmol)之i-PrOH(4mL)溶液於120℃攪拌16小時，冷卻至室溫，及使用飽和NaHCO3水溶液中和至pH~8。混合物使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=10/1)，給予2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯與2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸異丙基酯之混合物(440mg)之淡黃色固體，其未進一步純化即用於下一個步驟。LC-MS(ESI)m/z：496(甲基酯)，524(異丙基酯)[M+H]+。
步驟3：取含2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲基酯與2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸異丙基酯之混合物(220mg)及LiOH水溶液(2N,4mL)之THF(4mL)混合物於室溫攪拌5小時及於50℃攪拌16小時，使用甲酸調整至pH~5，及使用DCM/MeOH萃取(10/1,20mL x 3)。合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3)，給予2-(1-(5-氯-2-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(26.5mg,12.4%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：482[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.93(s,1H),8.22(s,1H),7.35-7.24(m,3H),7.07-6.92(m,3H),4.41(d,J=10.7Hz,1H),4.03(d,J=10.8Hz,1H),3.36(s,2H),2.78(d,J=5.4Hz,2H),2.68(d,J=15.5Hz,1H),2.60-2.54(m,3H),2.32(s,3H),1.33(s,3H)。
實例157
Figure 109122604-A0202-12-0326-478
2-(1-(5-氯-2-((2-乙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
依實例146之相同製程，於步驟2中使用Int.W8替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z：508[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.25(s,1H),7.97(s,1H),7.61(s,1H),7.31(dd,J=21.0,7.7Hz,2H),7.12(t,J=7.5Hz,1H),6.96(t,J=7.2Hz,1H),6.74(s,1H),4.42(d,J=10.7Hz,1H),4.02(d,J=10.7Hz,1H),3.78(s,3H),3.34(s,2H),2.76(s,2H),2.66-2.55(m,4H),2.50-2.45(d,J=6.8Hz,2H),1.34(s,3H),1.08(t,J=7.0Hz,3H)。
實例158
Figure 109122604-A0202-12-0327-479
2-(1-(5-氯-2-((2-異丙基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
依實例146之相同製程，於步驟2中使用Int.W5替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z：522[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.26(s,1H),8.22(s,1H),7.97(s,1H),7.63(s,1H),7.34(d,J=8.0Hz,1H),7.28(d,J=6.9Hz,1H),7.17-7.05(m,1H),6.96(t,J=7.4Hz,1H),6.73(s,1H),4.42(d,J=10.8Hz,1H),4.02(d,J=10.8Hz,1H),3.78(s,3H),3.47(s,2H),2.93-2.81(m,1H),2.77-2.68(m,4H),2.66-2.54(m,2H),1.34(s,3H),1.06(d,J=6.5Hz,6H)。
實例159
Figure 109122604-A0202-12-0327-480
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基異吲哚啉-5-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸
依實例146之相同製程，於步驟2中使用Int.W9替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z：480[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.26(s,1H),8.02(s,1H),7.77(s,1H),7.34(d,J=8.0Hz,1H),7.28(d,J=7.1Hz,1H),7.11(t,J=7.3Hz,1H),6.98(t,J=7.2Hz,1H),6.94(s,1H),4.41(d,J=10.8Hz,1H),4.02(d,J=10.7Hz,1H),3.80(s,5H),3.70(s,2H),2.69(d,J=15.5Hz,1H),2.57(d,J=15.4Hz,1H),2.47(s,3H),1.34(s,3H)。
實例160
Figure 109122604-A0202-12-0328-481
2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲磺酸
依實例146之相同製程，於步驟2中使用Int.W11替代Int.W1。LC-MS(ESI)m/z：480[M+H]+。
在含2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸(40mg,0.083mmol)之乙腈(20mL)溶液中添加甲磺酸(8.0mg,0.083mmol)。反應混合物於25℃攪拌30分鐘，及真空濃縮。殘質加水(15mL)稀釋，及凍乾為2-(1-(5-氯-2-((6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸之甲磺酸鹽(39.4mg,81.3%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：480 [M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 7.97(d,J=14.2Hz,2H),7.56(s,1H),6.74(s,1H),4.00(s,2H),3.88(d,J=11.4Hz,1H),3.82(s,3H),3.55(s,1H),3.42(s,2H),2.86(t,J=7.5Hz,1H),2.77(s,2H),2.58(s,2H),2.32(s,3H),1.76-1.24(m,10H)。
實例161
Figure 109122604-A0202-12-0329-482
2-(3-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸
步驟1：於0℃，在含吲哚(600.0mg,5.12mmol)之無水THF(10mL)溶液中添加甲基鎂化溴之THF溶液(1M,5mL)，10分鐘後接著添加2,4,5-三氯嘧啶(466mg,2.54mmol)。反應混合物於60℃攪拌3小時，冷卻至室溫，及真空濃縮。殘質分溶於水(10mL)與DCM(20mL x 3)之間。有機相使用鹽水(30mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法(5-10%EA/PE)純化以提供3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚之黃色固體(160mg,12%產率)。LC-MS(ESI)m/z：264[M+H]+。
步驟2：於25℃，在含3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚(160mg,0.606mmol)及2-溴乙酸乙基酯(303.5mg,1.82mmol,201.00uL)之DMF(5mL)溶液中添加碳酸氫鈉(254.5mg,3.03mmol)。混合物於80℃攪拌16小時，冷卻至室溫，加水(20mL)稀釋，及使用EA萃取(20mL x 3)。合併之有機相使用鹽水(30mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。 取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(20-30%EA/PE)以提供2-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸乙基酯之淡黃色油(220mg,93%產率)。LC-MS(ESI)m/z：315[M+H]+。
步驟3：依條件B3，使用2-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸乙基酯(100mg,0.286mmol)及Int.W1(78.4mg,0.343mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(30-60%MeOH/DCM)後以提供2-(3-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸異丙基酯(238mg,72.9%產率)之淡黃色油。LC-MS(ESI)m/z：520[M+H]+。
步驟4：在含2-(3-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸異丙基酯(238mg,0.412mmol)之THF(6mL)及水(3mL)溶液中添加LiOH．H2O(480.1mg,11.44mmol)。混合物於25℃攪拌2小時，使用甲酸酸化至pH~5，經製備性-HPLC純化(0.1%甲酸/乙腈)，給予2-(3-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸(124.9mg,63.4%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：478[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.56(s,1H),8.47-8.30(m,2H),8.23(d,J=32.9Hz,1H),7.62(s,1H),7.42(d,J=8.1Hz,1H),7.21(t,J=7.5Hz,1H),7.07(t,J=7.4Hz,1H),6.84(s,1H),5.01(s,2H),3.79(s,3H),3.51(s,2H),2.88(s,2H),2.74(s,2H),2.39(s,3H)。
實例162
Figure 109122604-A0202-12-0331-483
2-(3-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸
步驟1：於0℃，在含3-碘-1H-吲唑(500mg,2.05mmol)之THF(15mL)溶液中分小份添加第三丁醇鉀(344.9mg,3.07mmol)，1小時後接著滴加2-溴乙酸乙基酯(684.3mg,4.10mmol)。混合物於25℃攪拌16小時及真空濃縮。殘質分溶於EA(20mL)與水(20mL)之間。分離有機相，及水相使用EA萃取(20mL x 3)。合併之有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(15-20%EA/PE)以提供2-(3-碘-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯之無色油(549mg,81%產率)。LC-MS(ESI)m/z：331[M+H]+。
步驟2：取含2-(3-碘-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯(520mg,1.58mmol)、1,1,1,2,2,2-六甲基二錫烷(1.03g,3.15mmol)及Pd(PPh3)4(182.1mg,0.158mmol)之二
Figure 109122604-A0202-12-0331-593
烷(10mL)混合物使用N2吹掃，於100℃攪拌16小時，冷卻至0℃，及使用1M KF溶液(10mL)中止反應。所得混合物於室溫攪拌30分鐘，加水(30mL)稀釋，及使用二氯甲烷/甲醇萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。
合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/4)以提供2-(3-(三甲基錫烷 基)-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯之無色油(145mg,25%產率)。LC-MS(ESI)m/z：369[M+H]+。
步驟3：取含2-(3-(三甲基錫烷基)-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯(145mg,0.395mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(72.5mg,0.395mmol)及Pd(PPh3)4(45.7mg,0.040mmol)之二
Figure 109122604-A0202-12-0332-594
烷(5mL)混合物使用N2吹掃，於100℃攪拌16小時，及真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/4)以提供2-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯之白色固體(68mg,49%產率)。LC-MS(ESI)m/z：351[M+H]+。
步驟4&5：依實例161 步驟3&4之相同製程，使用2-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)乙酸乙基酯替代2-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1-基)乙酸酯。LC-MS(ESI)m/z：479[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.57(d,J=13.2Hz,2H),8.18(d,J=7.8Hz,1H),7.67(d,J=8.5Hz,1H),7.58(s,1H),7.51-7.35(m,1H),7.27-7.13(m,1H),6.88(s,1H),5.23(s,2H),3.79(s,3H),3.62(s,2H),2.91(d,J=5.2Hz,2H),2.85(d,J=5.0Hz,2H),2.47(s,3H)。
實例167
Figure 109122604-A0202-12-0332-484
2-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸
步驟1：於0℃，在含Int.E38(500mg,2.37mmol)及2,4,5-三氯嘧啶(434.0mg,2.37mmol)之DCM(5mL)溶液中滴加DIPEA(917.5 mg,7.10mmol)。混合物於25℃攪拌2小時，使用冰冷飽和NH4Cl水溶液(30mL)中止反應，及使用EA萃取(50mL x 3)。有機相使用鹽水(20mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=5-15%)，給予2-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯(798mg,94.1%產率)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：358[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用2-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯(100mg,0.279mmol)及Int.W1(63.8mg,0.279mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(MeOH/DCM=5-10%)後以提供2-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯(116mg,70.3%產率，87%純度)之淡黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：514[M+H]+。
步驟3：依實例117 步驟3之相同製程，使用2-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸乙基酯替代1-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基吲哚啉-3-羧酸甲基酯。LC-MS(ESI)m/z：486[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 7.97(d,J=14.2Hz,2H),7.56(s,1H),6.74(s,1H),4.00(s,2H),3.88(d,J=11.4Hz,1H),3.82(s,3H),3.55(s,1H),3.42(s,2H),2.86(t,J=7.5Hz,1H),2.77(s,2H),2.58(s,2H),2.32(s,3H),1.76-1.24(m,10H)。
實例168
Figure 109122604-A0202-12-0334-485
2-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-8-氧雜-2-氮雜螺[4.5]癸烷-4-羧酸
依實例167之相同製程，使用Int.E39替代Int.E38。LC-MS(ESI)m/z：488[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 7.97(d,J=7.8Hz,2H),7.57(s,1H),6.75(s,1H),3.99(t,J=10.3Hz,3H),3.82(s,3H),3.77(d,J=11.1Hz,2H),3.66(d,J=10.6Hz,1H),3.50(s,2H),3.46(s,2H),2.95(t,J=7.2Hz,1H),2.78(s,2H),2.62(s,2H),2.34(s,3H),1.98(s,1H),1.56-1.44(m,3H)。
實例169
Figure 109122604-A0202-12-0334-486
2-(5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4-基)-2-氮雜螺[4.4]壬烷-4-羧酸
依實例167之相同製程，使用Int.E40替代Int.E38。LC-MS(ESI)m/z：472[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 7.96(s,1H),7.94(s,1H),7.54(s,1H),6.73(s,1H),3.95(d,J=5.9Hz,2H),3.81(s,3H),3.72(d,J=10.5Hz,1H),3.57(d,J=10.1Hz,1H),3.41(s,2H),2.98(t,J=7.1Hz,1H),2.75(d,J=5.5Hz,2H),2.58(t,J=5.7Hz,2H),2.32(s,3H),1.89(s,1H),1.69-1.54(m,6H),1.49(s,1H)。
實例170
Figure 109122604-A0202-12-0335-487
N-(5-氯-4-(2-氧雜-6-氮雜螺[3.4]辛烷-6-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
步驟1：取含2,4,5-三氯嘧啶(1g,5.45mmol)及氫氧化鈉水溶液(1N,1mL)之THF(3mL)混合物於室溫攪拌3小時，使用1N HCl酸化至pH~6，及使用CH2Cl2萃取(50mL x 3)。合併之有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質於20%CH2Cl2/石油醚中再結晶純化以提供2,5-二氯嘧啶-4(3H)-酮(374mg,29%產率)。LC-MS(ESI)m/z：165[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用2,5-二氯嘧啶-4(3H)-酮(351mg,1.38mmol)及Int.W1(347.9mg,1.52mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=4/1)後以提供5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4(3H)-酮(419mg,78.4%產率)。LC-MS(ESI)m/z：321[M+H]+。
步驟3：取含5-氯-2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)嘧啶-4(3H)-酮(150mg,0.388mmol)之磷醯三氯(1mL)溶液於95℃攪拌18小時冷卻至室溫，倒至飽和NaHCO3水溶液(50mL)中，及使用二氯甲烷萃取(20mL x 3)。合併之有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供粗產物N-(4,5-二氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基- 1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(160mg,36%產率，30%純度)。LC-MS(ESI)m/z：339[M+H]+。
步驟4：依條件A3，使用N-(4,5-二氯嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(140mg,0.124mmol,30%純度)及2-氧雜-7-氮雜螺[3.4]辛烷(16.8mg,0.149mmol)，經過製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025%NH3‧H2O)後以提供N-(5-氯-4-(2-氧雜-6-氮雜螺[3.4]辛烷-6-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(11.8mg,22.9%產率)。LC-MS(ESI)m/z：415[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.08(s,1H),7.91(s,1H),7.40(s,1H),6.59(s,1H),4.72(d,J=6.2Hz,2H),4.64(d,J=6.2Hz,2H),4.06(s,2H),3.87-3.83(m,2H),3.85(s,3H),3.55(s,2H),2.87(t,J=5.8Hz,2H),2.68(t,J=5.9Hz,2H),2.47(s,3H),2.25(t,J=7.0Hz,2H)。
實例36
Figure 109122604-A0202-12-0336-488
6-甲氧基-2-甲基-N-(7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
步驟1：取含2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(153mg,1.0mmol)、1-溴-2-碘-苯(422.78mg,1.50mmol)、碳酸鉀(413.09mg,3.0mmol)、CuI(379.49mg,2.0mmol)、及(1S,2S)-N 1,N 2-二甲基環己烷-1,2-二胺(282.95mg,2.0mmol)之DMF(8mL)混合物於N2與120℃攪拌18小時。冷卻至室溫後，混合物過濾，及使用乙酸乙酯(100mL)洗滌。濾液使 用H2O(100mL)稀釋及分層。水相使用乙酸乙酯萃取(100mL x 2)。合併之有機層使用鹽水(100mL x 4)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，及過濾。濾液真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/15 v/v)以提供2-氯-7-苯基-吡咯并[2,3-d]嘧啶之黃色固體(40mg,17%產率)。LC-MS(ESI)m/z：230[M+H]+。
步驟2：依條件B4(如實例28 步驟2舉例說明)，使用2-氯-7-苯基-吡咯并[2,3-d]嘧啶(60mg,0.26mmol)及Int.W1(60.3mg,0.31mmol)，經過製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%FA)後以提供6-甲氧基-2-甲基-N-(7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(21.4mg,21%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：386[M+H]+。1H NMR(400Mhz,CD3OD)：δ(ppm)2.73(s,3H),2.98-3.01(m,2H),3.08-3.12(m,2H),3.83(s,2H),3.91(s,3H),6.65(d,J=4.0Hz,1H),6.77(s,1H),7.41-7.45(m,1H),7.47(d,J=4.0Hz,1H),7.57-7.62(m,2H),7.82(d,J=8.0Hz,2H),8.38(s,1H),8.68(s,1H)。
實例37
Figure 109122604-A0202-12-0337-489
6-甲氧基-2-甲基-N-(7-(吡啶-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例36之相同製程，於步驟1中使用2-溴吡啶替代1-溴-2-碘-苯。LC-MS(ESI)m/z：387[M+H].1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ (ppm)2.99(s,3H),3.11-3.14(m,2H),3.44-3.47(m,2H),3.23(s,3H),4.23(s,2H),6.63(d,J=4.0Hz,1H),6.83(s,1H),7.31-7.35(m,1H),7.99-8.04(m,2H),8.28(s,1H),8.50-8.51(m,1H),8.58(d,J=8.0Hz,1H),8.65(s,1H)。
實例38
Figure 109122604-A0202-12-0338-490
2-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-N,N-二甲基苯甲醯胺
依實例36之相同製程，於步驟1中使用溴-N,N-二甲基苯甲醯胺替代1-溴-2-碘-苯。LC-MS(ESI)m/z：457[M+H].1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ(ppm)2.56(s,3H),2.77(s,3H),2.83(s,3H),3.01(t,J=7.6Hz,2H),3.16(t,J=7.6Hz,2H),3.82(s,2H),3.91(s,3H),6.65(d,J=3.6Hz,1H),6.78(s,1H),7.20(d,J=3.6Hz,1H),7.57-7.59(m,1H),7.61-7.66(m,1H),7.72-7.79(m,2H),8.72(s,1H),8.50(brs,1H),8.72(s,1H)。
實例39
Figure 109122604-A0202-12-0338-491
(2-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)苯基)二甲基膦氧化物
步驟1：於室溫，在含2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(153mg,996.29umol)、(2-溴苯基)硼酸(600.25mg,2.99mmol)、及Cu(OAc)2(361.9mg,1.99mmol)之無水DCM(12mL)混合物中添加NEt3(403.3mg,3.99mmol)。混合物於室溫攪拌4天及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/5 v/v)以提供7-(2-溴苯基)-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶之白色固體(36mg,12%產率)。LC-MS(ESI)m/z：308[M+H]+。
步驟2：依條件B3，使用7-(2-溴苯基)-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶(100mg,0.324mmol)、及Int.W1(62.3mg,0.324mmol)，經製備性-TLC純化(DCM/MeOH=15/1)後以提供N-(7-(2-溴苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺之黃色固體(94mg,62%產率)。LC-MS(ESI)m/z：464[M+H]+。
步驟3：依Int.E1 步驟3之相同製程，使用N-(7-(2-溴苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺替代3-碘吲哚-1-羧酸第三丁基酯。LC-MS(ESI)m/z：462[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ(ppm)1.43(s,3H),1.46(s,3H),2.78(s,3H),3.00(t,J=2.0Hz,2H),3.18(t,J=2.0Hz,2H),3.67(s,2H),3.89(s,3H),6.73(d,J=3.6Hz,1H),6.77(s,1H),7.39(d,J=3.6Hz,1H),7.48-7.51(m,1H),7.64-7.70(m,1H),7.80-7.89(m,1H),8.04(s,1H),8.13-8.20(m,1H),8.76(s,1H)。
實例40
Figure 109122604-A0202-12-0340-492
6-甲氧基-2-甲基-N-(7-(吡啶-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
步驟1：取含2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.500g,3.26mmol)、3-吡啶基二羥硼酸(1.000g,8.14mmol)及二乙酸銅(0.887g,4.88mmol)混合物於吡啶(12.5mL)中，於O2及60℃攪拌16小時，真空濃縮，加水(100mL)稀釋，及使用EA萃取(50mL x 2)。合併之有機相經無水硫酸鈉脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/5)以提供2-氯-7-(吡啶-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(520mg,62.3%產率，90%純度)。LC-MS(ESI)m/z：231.1[M+H]+。
步驟2：依條件B4，使用2-氯-7-(3-吡啶基)吡咯并[2,3-d]嘧啶(100mg,0.434mmol)及Int.W1(100mg,0.520mmol)，經過製備性-HPLC純化(10mM NH4HCO3,0.025%NH3．H2O/MeCN)後以提供甲氧基-2-甲基-N-(7-(吡啶-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(40.9mg,24.4%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：387[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.17(d,J=1.9Hz,1H),8.81(s,1H),8.61(d,J=4.2Hz,1H),8.36(d,J=8.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.90(s,1H),7.77(d,J=3.6Hz,1H),7.61(dd,J=8.1,4.7Hz,1H),6.75(d,J=3.7Hz,2H),3.83(s,3H),3.43(s,2H),2.77(s,2H),2.57(t,J=5.5Hz,2H),2.28(d,J=66.6Hz,3H)。
實例41
Figure 109122604-A0202-12-0341-493
6-甲氧基-2-甲基-N-(7-(2-甲基吡啶-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
依實例40之相同製程，於步驟1中使用(2-甲基吡啶-3-基)二羥硼酸替代3-吡啶基二羥硼酸。LC-MS(ESI)m/z：401[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.80(s,1H),8.62(d,J=4.7Hz,1H),7.89(d,J=7.9Hz,2H),7.75(s,1H),7.59-7.35(m,2H),6.71(d,J=4.7Hz,2H),3.80(s,3H),3.20(s,2H),2.72(t,J=5.6Hz,2H),2.54(d,J=5.8Hz,2H),2.32(s,6H)。
實例164
Figure 109122604-A0202-12-0341-494
2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈
步驟1：於室溫，在含5-溴-2-氯-N-苯基-嘧啶-4-胺(1.5g,5.27mmol)及1,1’-雙(二苯基膦基)二茂絡鐵]二氯鈀(II)(192.87mg,263.58umol)之THF(30mL)攪拌混合物中依序添加三乙基胺(800.16mg,7.91mmol,1.10mL)及3,3-二乙基丙-1-炔(1.01g,7.91mmol,1.13mL)。混合物使用N2吹掃，於室溫攪拌10分鐘，接著添加CuI(50.20mg,263.58umol)。反應混合物再度使用N2吹掃，於60℃攪拌48小時，冷卻至室溫， 使用EtOAc(100mL)稀釋，及過濾。濾液加水(50mL)稀釋及分層。水相使用EtOAc萃取(30mL×3)，及合併之有機層經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(5%EtOAc/石油醚至20%EtOAc/石油醚)以提供2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)-N-苯基-嘧啶-4-胺之黃色固體(1.18g,67%產率)。LC-MS(ESI)m/z：332[M+H]+。
步驟2：於室溫，在含2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)-N-苯基-嘧啶-4-胺(400mg,1.21mmol)之THF(2mL)攪拌溶液中添加1N TBAF之THF溶液(6.03mmol,6mL)。反應混合物於60℃攪拌2小時，冷卻至室溫，及使用H2O(50mL)及二氯甲烷(50mL)稀釋。分相，水層使用二氯甲烷萃取(20mL×3)。合併之有機層經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(10%EtOAc/石油醚至30%EtOAc/石油醚)以提供2-氯-6-(二乙氧基甲基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶之灰色固體(280mg,70%產率)。LC-MS(ESI)m/z：332[M+H]+。
步驟3：依條件B4，使用2-氯-6-(二乙氧基甲基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(100mg,0.3mmol)及Int.W1(57.8mg,0.3mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(MeOH/DCM：5-10%)後以提供N-(6-(二乙氧基甲基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(60mg,40.9%產率)之灰白色固體。LC-MS(ESI)m/z：488[M+H]+。
步驟4：於室溫，在含N-(6-(二乙氧基甲基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(60mg,0.123mmol)之二
Figure 109122604-A0202-12-0342-588
烷(1mL)攪拌溶液中添加12N HCl(0.2mL)。反應混 合物攪拌30分鐘，使用2N NaOH鹼化至pH 8，及使用EtOAc萃取(5mL x 3)。合併之有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醛之灰色固體(50mg,98%產率)。LC-MS(ESI)m/z：414[M+H]+。
步驟5：於室溫，在含2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醛(50mg,0.121mmol)及吡嗪(19.7mg,0.246mmol)之乙醇(1mL)攪拌溶液中添加羥基胺鹽酸鹽(10.3mg,0.148mmol)。反應混合物於90℃攪拌2小時及真空濃縮。殘質加水稀釋(10mL)，及使用EtOAc萃取(10mL x 3)。合併之有機相使用鹽水(10mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮以提供2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醛肟之黃色固體(52mg,99%產率)。LC-MS(ESI)m/z：429[M+H]+。
步驟6：在含2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醛肟(52mg,0.121mmol)之TEA(2mL)攪拌溶液中添加乙酸酐(24.78mg,0.243mmol)。反應混合物於90℃攪拌2小時，冷卻至室溫及真空濃縮。殘質經製備性-HPLC純化(0.1%甲酸/MeCN)以提供2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈之黃色固體(3.1mg,6%產率)。LC-MS(ESI)m/z：411[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.98(s,1H),8.37(s,1H),8.24(br,1H),7.87(s,1H),7.78-7.63(m,5H),7.61- 7.59(m,1H)),6.74(s,1H),3.80(s,3H),3.28(s,2H),2.75(s,2H),2.55(s,2H),2.35(s,3H)。
實例165
Figure 109122604-A0202-12-0344-495
2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸
在含2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醛(30mg,0.073mmol)之水(3mL)與乙醇(3mL)混合溶劑之溶液中添加氫氧化鈉(14.5mg,0.363mmol)及氧化銀(33.6mg,0.145mmol)。反應混合物於80℃攪拌16小時，冷卻至室溫，加水(20mL)稀釋，及酸化至pH 3-4。混合物使用DCM萃取(20mL x 3)，及取有機相經無水硫酸鈉脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化，產生2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸(4.4mg,14.1%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：430[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.88(s,1H),7.92(s,1H),7.89(s,1H),7.53-7.51(m,2H),7.47-7.42(m,3H),7.25(s,1H),6.71(s,1H),3.81(s,3H),3.26(s,2H),2.74-2.73(m,2H),2.61-2.59(m,2H),2.39(s,3H)。
實例43
Figure 109122604-A0202-12-0345-496
6-甲氧基-2-甲基-N-(9-苯基-9H-嘌呤-2-基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺
步驟1：於室溫，在含2,4-二氯-5-硝基-嘧啶(1g,5.16mmol)之二
Figure 109122604-A0202-12-0345-587
烷(20mL)溶液中慢慢添加苯胺(0.96mg,10.31mmol)。混合物接著在室溫攪拌1小時及過濾。取濾液濃縮以提供2-氯-5-硝基-N-苯基-嘧啶-4-胺之黃色固體(800mg,62%產率)。LC-SM(ESI)m/z：251[M+H]+。
步驟2：於室溫，在含2-氯-5-硝基-N-苯基-嘧啶-4-胺(500mg,1.99mmol)之乙酸乙酯/EtOH/H2O(6mL/27mL/3mL)混合物中添加Fe(557.1mg,9.97mmol)及NH4Cl(74.7mg,1.40mmol)。混合物於60℃攪拌2小時。冷卻至室溫後，混合物過濾，及使用甲醇(30mL)洗滌。取濾液濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(DCM/MeOH=20/1 v/v)以提供2-氯-N 4-苯基-嘧啶-4,5-二胺之淺黃色固體(350mg,79%產率)。LC-MS(ESI)m/z：221[M+H]+。
步驟3：在含2-氯-N 4-苯基-嘧啶-4,5-二胺(300mg,1.36mmol)之正甲酸三乙酯(10mL)及DMF(5mL)溶液中添加濃HCl(0.6mL)。反應混合物於室溫攪拌2小時，使用H2O(20mL)稀釋，及使用EA萃取(20mL x 2)。合併之有機層經無水Na2SO4脫水，過濾，及濃縮至乾。殘質經矽膠快速管柱層析法純化管柱(EA/PE=1/2 v/v)以提供2-氯-9-苯基-嘌呤之黃色固體(220mg,70%產率)。LC-MS(ESI)m/z：231[M+H]+。
步驟4：依條件B4，使用2-氯-9-苯基-嘌呤(30mg,0.13mmol)及Int.W1(25mg,0.13mmol)，經過製備性-HPLC純化(0.05%TFA/MeCN)後以提供6-甲氧基-2-甲基-N-(9-苯基-9H-嘌呤-2-基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-胺(8mg)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：387[M+H].1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 3.07(s,3H),3.12-3.13(m,1H),3.19-3.27(m,1H),3.39-3.48(m,1H),3.74-3.75(m,1H),3.95(s,3H),4.25-4.41(m,2H),6.91(s,1H),7.53-7.57(m,1H),7.66-7.89(m,2H),7.91(d,J=1.2Hz,2H),8.40(s,1H),8.57(s,1H),8.67(s,1H)。
實例44
Figure 109122604-A0202-12-0346-497
2-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-N,N-二甲基苯甲醯胺
依實例43之相同製程，於步驟1中使用2-胺基-N,N-二甲基苯甲醯胺替代苯胺。LC-MS(ESI)m/z：458[M+H]。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 2.73(s,3H),2.77(s,3H),2.84(s,3H),3.03(t,J=6.0Hz,2H),3.18(t,J=6.0Hz,2H),3.88(s,2H),3.90(s,3H),6.81(s,1H),7.61-7.64(m,1H),7.68-7.76(m,1H),7.76-7.78(m,2H),8.18(s,1H),8.19(s,1H),8.45(brs,1H),8.83(s,1H)。
實例45
Figure 109122604-A0202-12-0347-498
(2-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)苯基)二甲基膦氧化物
依實例43之相同製程，於步驟1中使用(2-胺基苯基)二甲基膦氧化物替代苯胺。LC-MS(ESI)m/z：463[M+H].1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 1.62(s,3H),1.65(s,3H),2.87(s,3H),3.07(t,J=6.0Hz,2H),3.33(t,J=6.0Hz,2H),3.89(s,3H),3.94(s,2H),6.82(s,1H),7.60-7.63(m,1H),7.81-7.91(m,2H),8.01-8.07(m,1H),8.12(s,1H),8.35(s,1H),8.45(brs,1H),8.85(s,1H)。
實例166
Figure 109122604-A0202-12-0347-499
2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-甲基-9-苯基-7,9-二氫-8H-嘌呤-8-酮
步驟1：在含2-氯-N 4-苯基-嘧啶-4,5-二胺(410mg,1.86mmol)之二氯甲烷(30mL)溶液中添加CDI(301.29mg,1.86mmol)。混合物於25℃攪拌16小時，使用飽和NaHCO3水溶液(20mL)稀釋，及分層。水相使用DCM/MeOH萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。合併之有機相經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純 化(80-100%EtOAc/己烷)以提供2-氯-9-苯基-7,9-二氫-8H-嘌呤-8-酮之淡黃色固體(264mg,58%產率)。LC-MS(ESI)m/z：247[M+H]+。
步驟2：於0℃，在含2-氯-9-苯基-7,9-二氫-8H-嘌呤-8-酮(230mg,932.49umol)及碘甲烷(463.3mg,3.26mmol)之THF(10mL)溶液中添加氫化鈉(111.9mg,2.80mmol,60%勻散於礦物油中)。混合物於0-25℃攪拌6小時，加水(10mL)中止反應，及分層。水相使用二氯甲烷/甲醇萃取(v/v,10/1,20mL x 3)。合併之有機層經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經過矽膠快速管柱層析法純化(30-40%EtOAc之石油醚溶液)以提供2-氯-7-甲基-9-苯基-7,9-二氫-8H-嘌呤-8-酮之淡黃色固體(80mg,24%產率)。LC-MS(ESI)m/z：261[M+H]+。
步驟3：依條件B3，使用2-氯-7-甲基-9-苯基-7,9-二氫-8H-嘌呤-8-酮(70mg,0.268mmol)及Int.W1(21.4mg,0.268mmol)，經過製備性-HPLC純化(0.1%FA/MeCN)後以提供2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-7-甲基-9-苯基-7,9-二氫-8H-嘌呤-8-酮(44.2mg,39.5%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：417[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.29(s,1H),8.25(s,1H),7.88(s,1H),7.67(s,2H),7.58(t,J=7.7Hz,2H),7.47(t,J=7.3Hz,1H),6.71(s,1H),3.79(s,3H),3.40(s,3H),3.28-3.20(m,2H),2.74(s,2H),2.55(s,2H),2.34(s,3H)。
實例46
Figure 109122604-A0202-12-0349-500
N-(6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)-8-苯基-7,8-二氫-6H-嘧啶并[5,4-b][1,4]
Figure 109122604-A0202-12-0349-585
嗪-2-胺
步驟1：在含2,4-二氯-5-甲氧基-嘧啶(1.00g,5.59mmol)之二
Figure 109122604-A0202-12-0349-586
烷(15mL)溶液中添加DIPEA(1.44g,11.17mmol,1.95mL)及苯胺(0.520mg,5.59mmol)。混合物於120℃及N2蒙氣下攪拌一夜，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=2/1 v/v)以提供2-氯-5-甲氧基-N-苯基-嘧啶-4-胺之黃色固體(950mg,72%產率)。LC-MS(ESI)m/z：236[M+H]+。
步驟2：於0℃，在含2-氯-5-甲氧基-N-苯基-嘧啶-4-胺(100mg,0.424mmol)之DCM(5mL)溶液中添加三溴化硼(1.06g,4.24mmol)。混合物於氮及室溫攪拌3天，倒至0℃之MeOH(30mL)中，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=1/1 v/v，及接著DCM/MeOH=10/1 v/v)以提供4-苯胺基-2-氯-嘧啶-5-醇之白色固體(94mg,100%產率)。LC-MS(ESI)m/z：222[M+H]+。
步驟3：在含4-苯胺基-2-氯-嘧啶-5-醇(94mg,0.424mmol)之DMF(5mL)溶液中添加碳酸鉀(175.85mg,1.27mmol)及1-溴-2-氯-乙烷(91.2mg,0.636mmol)。混合物於室溫攪拌16小時，使用H2O(20mL)稀釋，及使用EA萃取(20mL x 3)。取有機層經無水Na2SO4脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=2/1)以提供2-氯-8-苯基- 6,7-二氫嘧啶并[5,4-b][1,4]
Figure 109122604-A0202-12-0350-581
嗪之白色固體(60mg,57%產率)。LC-MS(ESI)m/z：248[M+H]+。
步驟4：依條件B3，使用2-氯-8-苯基-6,7-二氫嘧啶并[5,4-b][1,4]
Figure 109122604-A0202-12-0350-582
嗪(50mg,0.202mmol)及Int.W1(46.2mg,0.202mmol)，經過濾收集以提供N-(6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)-8-苯基-7,8-二氫-6H-嘧啶并[5,4-b][1,4]
Figure 109122604-A0202-12-0350-583
嗪-2-胺(48mg,59%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：404[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 3.03(s,3H),3.06-3.10(m,1H),3.12-3.28(m,2H),3.68-3.71(m,1H),3.80-3.81(m,2H),3.90(s,3H),4.09(t,J=4.0Hz,2H),4.44(t,J=4.0Hz,2H),6.89(s,1H),7.36(s,1H),7.52-7.54(m,2H),7.56-7.60(m,1H),7.63-7.67(m,2H),7.72(s,1H)。
實例47
Figure 109122604-A0202-12-0350-501
(2-(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-6H-嘧啶并[5,4-b][1,4]
Figure 109122604-A0202-12-0350-584
嗪-8(7H)-基)苯基)二甲基膦氧化物
依實例46之相同製程，於步驟1中使用2-二甲基磷醯基苯胺替代苯胺。LC-MS(ESI)m/z：480[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 1.63(d,J=13.2Hz,3H),1.80(d,J=13.6Hz,3H),2.88(s,3H),2.98(t,J=6.0Hz,2H),3.26(t,J=6.4Hz,2H),3.46-3.55(m,2H),3.84(s,3H),3.87-3.94(m,2H),4.38-4.45(m,2H),6.70(s,1H),7.31(s,1H), 7.54-7.58(m,1H),7.71-7.76(m,2H),7.85(t,J=8.0Hz,1H),7.98-8.04(m,1H),8.46(brs,1H)。
實例171
Figure 109122604-A0202-12-0351-502
2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-8-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮
步驟1：於0℃，在含5-溴-2,4-二氯-嘧啶(1.2g,5.27mmol)之MeCN(20mL)溶液中添加三乙基胺(639.45mg,6.32mmol,880.78uL)及苯胺(529.64mg,5.69mmol)。反應混合物於25℃攪拌16小時，及真空濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EtOAc=0-50%)以提供5-溴-2-氯-N-苯基嘧啶-4-胺之黃色固體(1.2g,76%產率)。LC-MS(ESI)m/z：284[M+H]+。
步驟2：在含5-溴-2-氯-N-苯基嘧啶-4-胺(283mg,994.59umol)、丙烯酸(358.4mg,4.97mmol)及DIPEA(1.29g,9.95mmol)之THF(4mL)溶液中添加雙(苯甲腈)鈀(II)氯化物(19.07mg,49.73umol)及參-鄰甲苯基膦烷(15.14mg,0.050mmol)。混合物於70℃與N2蒙氣下攪拌24小時。反應混合物未經過任何純化即用於下一個步驟。LC-MS(ESI)m/z：276[M+H]+。
步驟3：在上述反應混合物中添加乙酸酐(540.00mg,5.29mmol)。混合物接著於80℃攪拌24小時，及真空濃縮。殘質使用DCM(50 mL)及水(50mL)稀釋，及分層。有機相使用1N HCl(10mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，及過濾。取濾液真空濃縮，及殘質經過矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=0-60%)以提供2-氯-8-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮之黃色固體(88mg,34%產率)。LC-MS(ESI)m/z：258[M+H]+。
步驟4：依條件B3，使用2-氯-8-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(40mg,0.155mmol)及Int.W1(35.5mg,0.155mmol)，經過製備性-HPLC純化(10mM NH4HCO3,0.025%NH3．H2O/MeCN)後以提供2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)-8-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(17.1mg,26.6%產率)之白色固體。LC-MS(ESI)m/z：414[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 8.81(s,1H),8.11(s,1H),7.94(d,J=9.4Hz,1H),7.61(s,2H),7.53(t,J=7.4Hz,1H),7.34(d,J=7.2Hz,2H),7.14(s,1H),6.68(s,1H),6.49(d,J=9.4Hz,1H),3.79(s,3H),2.91(s,2H),2.68(s,2H),2.47(s,2H),2.35(s,3H)。
實例172
Figure 109122604-A0202-12-0352-503
(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)喹唑啉-7-基)二甲基膦氧化物
步驟1：依條件B3，使用7-溴-2-氯喹唑啉(100mg,0.411mmol)及Int.W1(94.8mg,0.493mmol)，經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA：5/1)後以提供7-溴-N-(6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基) 喹唑啉-2-胺(90mg,52.1%產率)之黃色固體。LC-MS(ESI)m/z：401[M+H]+。
步驟2：取含7-溴-N-(6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)喹唑啉-2-胺(80mg,200.36umol)、二甲基膦氧化物(23.5mg,300.54umol)、Pd2(dba)3(9.2mg,10.02umol)、Xantphos(5.8mg,10.02umol)、及三乙基胺(60.8mg,601.08umol)之二
Figure 109122604-A0202-12-0353-579
烷(1mL)混合物使用氮氣吹掃，及於110℃攪拌16小時。反應混合物經製備性-HPLC純化(MeCN/10mM NH4HCO3,0.025%NH3‧H2O)以提供(2-((6-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)胺基)喹唑啉-7-基)二甲基膦氧化物之黃色固體(2.9mg,3.6%產率)。LC-MS(ESI)m/z：496[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.35(s,1H),8.34(s,1H),8.28(s,1H),8.09(s,1H),8.03(dd,J=12.7,7.7Hz,2H),7.69(t,J=9.0Hz,1H),6.81(s,1H),3.83(s,3H),3.52(s,2H),2.81(d,J=5.5Hz,2H),2.61(t,J=5.7Hz,2H),2.37(s,3H),1.75(d,J=13.4Hz,6H)。
實例50
Figure 109122604-A0202-12-0353-504
(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基苯基)二甲基膦氧化物
步驟1：取含中間物12(200mg,734.89umol)、2-溴-4-碘-1-甲基苯(181.84mg,612.41umol)、Pd(dppf)Cl2‧CH2Cl2(50.01mg,61.24umol)、及K2CO3(253.92mg,1.84mmol)之1,4-二
Figure 109122604-A0202-12-0353-580
烷(6mL)及H2O(0.6mL)混合物於80℃及氮蒙氣下攪拌3小時，冷卻至室溫，及過濾。取濾液濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化(PE/EA=1/9 v/v)以提供 5-(3-溴-4-甲基苯基)-3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶之淡黃色粉末(100mg,49%產率)。LC-MS(ESI)m/z：315[M+H]+)。
步驟2：取含5-(3-溴-4-甲基苯基)-3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(49mg,154.48umol)、二甲基膦氧化物(14.47mg,185.38umol)、Pd(OAc)2(1.73mg,7.72umol)、Xantphos(4.47mg,7.72umol)、及K3PO4(36.07mg,169.93umol)之DMF(4mL)混合物於氮蒙氣保護之微波條件下，於140℃攪拌2小時。冷卻至室溫後，混合物使用H2O(20mL)稀釋，及使用EA萃取(20mL x 3)。合併之有機層使用鹽水(20mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾及濃縮。殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/0.1% HCOOH)以提供(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基苯基)二甲基膦氧化物之白色固體(14.6mg,30%產率)。LC-MS(ESI)m/z：313[M+H]+。
實例51
Figure 109122604-A0202-12-0354-505
(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用2-溴-1-氟-4-碘苯替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：317[M+H]+。
實例52
Figure 109122604-A0202-12-0354-506
(2-氯-5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
實例53
Figure 109122604-A0202-12-0355-507
(3-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用2-溴-1-氯-4-碘苯替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。於步驟2中得到副產物實例53。
(2-氯-5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物：LC-MS(ESI)m/z：333[M+H]+。
(3-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物：LC-MS(ESI)m/z：299[M+H]+。
實例54
Figure 109122604-A0202-12-0355-508
(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用2-溴-4-碘-1-甲氧基苯替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：329[M+H]+。
實例55
Figure 109122604-A0202-12-0355-509
(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-羥基苯基)二甲基膦氧化物
於室溫，在含實例54(28mg,85.28umol)之無水DCM(5mL)攪拌溶液中滴加三溴化硼(68.67mg,274.10umol,0.2mL)。反應混合 物於室溫攪拌2小時，及小心添加MeOH中止反應。所得混合物濃縮，及殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%HCOOH)以提供(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-羥基苯基)二甲基膦氧化物之白色固體(21mg,78%產率)。LC-MS(ESI)m/z：315[M+H]+。
實例56
Figure 109122604-A0202-12-0356-511
(3-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-甲基苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用1,3-二溴-5-甲基-苯替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：313[M+H]+。
實例57
Figure 109122604-A0202-12-0356-513
(3-胺基-5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用3,5-二溴苯胺替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：314[M+H]+。
實例58
Figure 109122604-A0202-12-0356-514
N-(2-(二甲基磷醯基)-4-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)乙醯胺
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物17替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：356[M+H]+。
實例59
Figure 109122604-A0202-12-0357-515
N-(2-溴-4-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)乙醯胺
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物18替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：368[M+H]+。
實例60
Figure 109122604-A0202-12-0357-516
(2-胺基-3-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-6-氟苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物19替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：332[M+H]+。
實例61
Figure 109122604-A0202-12-0357-518
(2-(二氟甲基)-5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物21替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：349[M+H]+。
實例62
Figure 109122604-A0202-12-0358-520
(3-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟-6-甲基苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物22替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：331[M+H]+。
實例63
Figure 109122604-A0202-12-0358-521
(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(
Figure 109122604-A0202-12-0358-578
唑-2-基)苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物25替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：366[M+H]+。
實例64
Figure 109122604-A0202-12-0358-522
(6-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-3-甲基吡啶-2-基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物24替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：314[M+H]+。
實例65
Figure 109122604-A0202-12-0359-523
(2-((二甲基胺基)甲基)-5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物26替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：356[M+H]+。
實例66
Figure 109122604-A0202-12-0359-524
1-(2-(二甲基磷醯基)-4-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)吡咯啶-2-酮
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物27替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：382[M+H]+。
實例67
Figure 109122604-A0202-12-0359-526
2-(二甲基磷醯基)-4-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲醯胺
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物28替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：342[M+H]+。
實例68
Figure 109122604-A0202-12-0360-527
N-(3-(二甲基磷醯基)-5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)乙醯胺
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物29替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：356[M+H]+。
實例69
Figure 109122604-A0202-12-0360-528
(2-胺基-5-(2-氯-3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
實例70
Figure 109122604-A0202-12-0360-529
(2-胺基-5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
依實例50之相同製程，於步驟1中使用2-溴-4-碘苯胺及中間物14替代2-溴-4-碘-1-甲基苯及中間物12。
(2-胺基-5-(2-氯-3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物：[HCOOH鹽]LC-MS(ESI)m/z：348[M+H]。
(2-胺基-5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物：[HCOOH鹽]為步驟2得到之副產物。LC-MS(ESI)m/z：314[M+H]+。
實例71
Figure 109122604-A0202-12-0361-530
(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(甲基胺基)苯基)二甲基膦氧化物
步驟1&2：依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物16替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：428[M+H]+。
步驟3：於0℃，在含(2-(二甲基磷醯基)-4-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)(甲基)胺甲酸第三丁基酯(25mg,58.48umol)之DCM(5mL)溶液中添加TFA(1.48g,12.98mmol,1mL)。混合物於室溫攪拌2小時。蒸發後，殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/0.1% HCOOH)以提供(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(甲基胺基)苯基)二甲基膦氧化物之黃色固體(18mg,94%產率)。LC-MS(ESI)m/z：328[M+H]+。
實例72
Figure 109122604-A0202-12-0361-531
2-(二甲基磷醯基)-4-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲基酯
依實例50之相同製程，於步驟1中使用中間物20替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：357[M+H]+。
實例73
Figure 109122604-A0202-12-0361-532
(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(羥基甲基)苯基)二甲基膦氧化物
於0℃，在含2-二甲基磷醯基-4-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲基酯(139.61mg,391.78umol)之無水THF(5mL)溶液中滴加四氫化鋰鋁(26.58mg,783.56umol)。混合物於室溫攪拌1小時，倒至冰水(10mL)中，及使用DCM萃取(10mL x 3)。有機層使用鹽水(10mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，過濾，及濃縮。殘質經逆相層析法純化(MeOH/0.1%三氟乙酸)以提供(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(羥基甲基)苯基)二甲基膦氧化物之白色固體(100mg,78%產率)。LC-MS(ESI)m/z：329[M+H]+。
實例74
Figure 109122604-A0202-12-0362-535
(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(氟甲基)苯基)二甲基膦氧化物
於0℃，在含(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(羥基甲基)苯基)二甲基膦氧化物(200mg,609.12umol)之DCM(5mL)溶液中滴加DAST(117.82mg,730.94umol)。混合物於室溫攪拌2小時，及濃縮。殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/0.05%三氟乙酸)以提供(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(氟甲基)苯基)二甲基膦氧化物之白色固體(2.5mg,1.5%產率)。LC-MS(ESI)m/z：331[M+H]+。
實例75
Figure 109122604-A0202-12-0363-537
(3-胺基-6-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)吡啶-2-基)二甲基膦氧化物
步驟1：取含中間物15(330mg,1.10mmol)、二甲基膦氧化物(103.40mg,1.32mmol)、乙酸鈀(II)(24.79mg,110.40umol)、Xantphos(127.76mg,220.80umol)、及磷酸鉀(468.70mg,2.21mmol)之DMF(15mL)混合物於氮氣及50℃攪拌4小時。冷卻至室溫後，混合物過濾，及濾液使用H2O(20mL)稀釋。所得混合物使用EA萃取(30mL x 3)。有機層使用鹽水(30mL x 3)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，過濾及濃縮。殘質經逆相管柱層析法純化(MeOH之H2O溶液，0%至100%v/v)，給予6-溴-2-二甲基磷醯基-吡啶-3-胺之白色固體(180mg,60%產率)。LC-MS(ESI)m/z：249[M+H]+。
步驟2：取含6-溴-2-二甲基磷醯基-吡啶-3-胺(100mg,401.53umol)、中間物12(131.13mg,481.84umol)、Pd(dppf)Cl2．DCM(29.38mg,40.15umol)、及碳酸鉀(110.99mg,803.07umol)之二
Figure 109122604-A0202-12-0363-577
烷(5mL)及H2O(0.5mL)混合物於氮氣與90℃攪拌一夜。冷卻至室溫後，混合物過濾，及取濾液濃縮。殘質使用EA(50mL)稀釋，使用H2O(20mL)及鹽水(20mL)洗滌，經無水Na2SO4脫水，過濾及濃縮。殘質經製備性-TLC純化(DCM/MeOH=10/1 v/v)以提供(3-胺基-6-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)吡啶-2-基)二甲基膦氧化物之黃色固體(2mg)。LC-MS(ESI)m/z：315[M+H]+。
實例76
Figure 109122604-A0202-12-0364-539
(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(氧雜環丁烷-3-基胺基)苯基)二甲基膦氧化物
依實例75之相同製程，於步驟1中使用中間物30替代中間物15。LC-MS(ESI)m/z：370[M+H]+。
實例77
Figure 109122604-A0202-12-0364-540
(2-胺基-5-(3-異丙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物
步驟1：於0℃，在含1-(5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酮(590mg,2.47mmol)之無水THF(25mL)溶液中分批添加氫化鈉(60%懸浮於油中，71.99mg,3mmol)，混合物於0℃攪拌1小時。於0℃，分批添加TsCl(714.90mg,3.75mmol)至上述混合物中。混合物於室溫攪拌2小時，使用H2O(20mL)中止反應，及使用EA萃取(30mL x 3)。有機層使用鹽水(30mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=2/3 v/v)以提供1-(5-溴-1-甲苯磺醯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙烷-1-酮之黃色固體(800mg,83%產率)。LC-MS(ESI)m/z：393[M+H]+。
步驟2：於0℃，在含1-(5-溴-1-甲苯磺醯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙烷-1-酮(1.62g,4.12mmol)之無水THF(20mL)溶液中滴加甲基鎂化溴(3M醚溶液，6.87mL,20.6mmol)。混合物於0℃攪拌2小時，倒至冰-水(50mL)中，及使用乙酸乙酯萃取(100mL x 3)。有機層使用鹽水(50mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA/PE=1/4 v/v)以提供2-(5-溴-1-甲苯磺醯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙烷-2-醇之黃色固體(900mg,76%產率)。LC-MS(ESI)m/z：409[M+H]+。
步驟3：於0℃，在含2-(5-溴-1-甲苯磺醯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙烷-2-醇(900mg,2.20mmol)之無水DCM(10mL)溶液中添加Et3SiH(1.28g,10.99mmol,1.76mL)及三氟乙酸(1.25g,10.99mmol,847.02uL)。混合物於室溫攪拌一夜，倒至冰-水(20mL)中，使用飽和NaHCO3水溶液鹼化至pH 4~5，及使用DCM萃取(30mL x 3)。有機層使用鹽水(30mL)洗滌，經無水硫酸鈉脫水，過濾及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化(EA之PE溶液，3%至10%v/v)以提供5-溴-3-異丙基-1-甲苯磺醯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶之白色固體(570mg,66%產率)。LC-MS(ESI)m/z：393[M+H]+。
步驟4：取含5-溴-3-異丙基-1-甲苯磺醯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(200mg,508.52umol)、中間物13(225.11mg,762.78umol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(41.53mg,50.85umol)、及K2CO3(210.85mg,1.53mmol)之二
Figure 109122604-A0202-12-0365-576
烷(3mL)及H2O(0.43mL)混合物於N2與100℃攪拌一夜。冷卻至室溫後，混合物濃縮，及殘質經矽膠快速管柱層析法純化 (DCM/MeOH=20/1 v/v)以提供(2-胺基-5-(3-異丙基-1-甲苯磺醯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物之褐色油(290mg,100%產率)。LC-MS(ESI)m/z：482[M+H]+。
步驟5：於室溫，在含(2-胺基-5-(3-異丙基-1-甲苯磺醯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物(100mg,207.66umol)之甲醇(5mL)溶液中添加NaOH水溶液(3N,3mL,9mmol)。混合物回流2小時，及濃縮。殘質使用H2O(10mL)稀釋，使用稀HCl溶液(1N)調整至pH~5，及使用DCM萃取(20mL x 3)。有機層經無水硫酸鈉脫水，過濾，及濃縮。.殘質經製備性-HPLC純化(MeCN/0.1%HCOOH)以提供(2-胺基-5-(3-異丙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)苯基)二甲基膦氧化物之白色固體(10.8mg,16%產率)。LC-MS(ESI)m/z：328[M+H]+。
實例78
Figure 109122604-A0202-12-0366-541
(5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基)二甲基膦氧化物
步驟1：依實例50 步驟1之相同製程，使用5-溴-2-(三氟甲基)苯胺替代2-溴-4-碘-1-甲基苯。LC-MS(ESI)m/z：306[M+H]+。
步驟2：於-78℃，在含5-(3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯胺(50mg,163.77umol)之THF(5mL)溶液中添加氟化硼乙醚合物(92.98mg,655.10umol,82.28uL)及亞硝酸第三丁基酯(59.11 mg,573.21umol,68.18uL)。混合物於此溫度攪拌10分鐘，回升至室溫，及攪拌30分鐘。混合物使用Et2O(10mL)稀釋，及過濾排除固體。取濾液濃縮(低於20℃)，取所得重氮鎓鹽加至0℃之含KI(40.78mg,245.66umol)及碘(14.66mg,114.64umol)之丙酮(5mL)混合物中。所得混合物於室溫攪拌一夜，及濃縮。殘質經矽膠快速管柱層析法純化以提供3-乙基-5-(3-碘-4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶之黃色固體(30mg,44%產率)。LC-MS(ESI)m/z：417[M+H]+。
步驟3：依實例50 步驟2之相同製程，使用3-乙基-5-(3-碘-4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶替代5-(3-溴-4-甲基苯基)-3-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶。LC-MS(ESI)m/z：367[M+H]+。
Figure 109122604-A0202-11-0002-599

Claims (45)

  1. 一種如結構式(I-0)代表之化合物或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，
    Figure 109122604-A0202-13-0001-192
    其中
    X為CR2R3或NR3；
    A為CR2或N；
    R為8-10員雙環含氮雜芳基或8-10員雙環含氮雜環基，其可視需要經側氧基取代，其中由R代表之含氮雜芳基或含氮雜環基具有1至3個選自：N、O、與S之雜原子，且可視需要經1至4個Ra取代，及其中R係利用氮環原子連接嘧啶環或R係以如下結構式代表：
    Figure 109122604-A0202-13-0001-193
    R1為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、苯基、5-6員雜芳基、C3-6環烷基或3-7員雜環基，其中由R1代表或在由R1代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、雜芳基、環烷基或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自下列各物所組成群中之取代基取代：鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基及NR11R12；或
    R及R1與其等所附接之碳原子共同形成如下代表之環：
    Figure 109122604-A0202-13-0002-902
     其中
    Figure 109122604-A0202-13-0002-195
    鍵結係連接嘧啶環；
    R2之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基、P(=O)R11R12、S(=O)2R11或S(=O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基團中之烷基、烯基、炔基或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11R12所組成群組之取代基所取代；
    R3為H、C1-6烷基、C(O)C1-6烷基、C3-6環烷基或3-7員雜環基，其中由R3代表或在由R3代表之基團中之烷基、環烷基或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、3-7員雜環基及NR11R12所組成群組之取代基所取代；
    R11及R12之各例分別獨立為H或C1-6烷基，其中由R11或R12代表之烷基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基及3-7員雜環基所組成群組之取代基所取代，或
    R11及R12與其等所附接之氮原子或磷原子共同形成3-7員雜環基，其可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基及C1-4鹵烷氧基所組成群組之取代基所取代；
    Ra之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、C3-6環烷基、3-7員雜環基或5-6員雜芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12及5-6員雜芳基所組成群組之取代基所取代；或
    兩個Ra與其等所附接碳原子(群)共同形成C3-6環烷基或3-7員雜環基，其中環烷基或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基及C1-4鹵烷氧基所組成群組之取代基所取代；
    Rb之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、COOH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OR11、NR11C(O)R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、C3-6環烷基、3-7員雜環基或5-6員雜芳基，其中由Rb代表或在由Rb代表 之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12及5-6員雜芳基所組成群組之取代基所取代；
    Rc之各例分別獨立為苯基、具有1至3個選自N及O之雜原子之5-6員單環狀雜環基；具有1至3個選自N及O之雜原子之5-6員單環狀雜芳基；其中，由Rc代表之苯基、雜環基或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12及P(O)二-C1-6烷基所組成群組之取代基所取代；
    Ra'為C1-6烷基，其可視需要經OH、CN、5-6員雜芳基、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12取代；
    m為0、1、2或3；
    n為0、1、2、3或4；
    p為1、2或3；
    q為1、2或3；及p+q
    Figure 109122604-A0202-13-0004-575
    4。
  2. 如請求項1所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中該化合物係由結構式(I-1)代表：
    Figure 109122604-A0202-13-0005-196
  3. 如請求項1或2所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中該化合物係由結構式(I-2)代表：
    Figure 109122604-A0202-13-0005-197
  4. 如請求項1至3中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之 鹽或立體異構物，其中R為
    Figure 109122604-A0202-13-0005-199
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0005-200
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0005-201
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0005-198
    Figure 109122604-A0202-13-0006-203
    Figure 109122604-A0202-13-0006-204
    或
    Figure 109122604-A0202-13-0006-205
    ，其中
    Figure 109122604-A0202-13-0006-207
    鍵結連接嘧啶環。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
    Ra之各例分別獨立為H、鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OR11、NR11C(O)C1-4烷基、NR11S(=O)2R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、P(=O)R11R12、C3-6環烷基、3-7員雜環基或5-6員雜芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基團中之烷基、烷氧基、環烷基、雜環基或雜芳基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12及5-6員雜芳基所組成群組之取代基所取代。
  6. 如請求項1至5中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R1為H、鹵素、CN、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11C(O)C1-6烷基，其中由R1代表或在由R1代表之基團中之烷基、烯基或烷氧基 可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基及NR11R12所組成群組之取代基所取代。
  7. 如請求項1至6中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R2之各例分別獨立為H、鹵素、OH、CN、NH2、NO2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、NR11C(O)C1-4烷基、P(=O)R11R12、S(=O)2R11或S(=O)2NR11R12，其中由R2代表或在由R2代表之基團中之烷基或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11R12所組成群組之取代基所取代。
  8. 如請求項1至7中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R3為H、C1-6烷基或C(O)C1-6烷基，其中由R3代表或在由R3代表之基團中之烷基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11R12所組成群組之取代基所取代。
  9. 如請求項1至8中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
    Ra之各例分別獨立為H、鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C3-6環烷基、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S(=O)2R12、C(O)OR11、N(R11)S(=O)2R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、P(O)R11R12或5-6員雜芳基，其中由Ra代表或在由Ra代表之基團中之烷基或環烷基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)NR11OR12、C(O)NR11S (=O)2R12、C(O)OR11、NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12及5-6員雜芳基所組成群組之取代基所取代；
    R11及R12之各例分別獨立為H或C1-6烷基。
  10. 如請求項1至9中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R1為H、鹵素、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C2-4烯基、C1-4烷氧基或C1-4鹵烷氧基。
  11. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其醫藥上接受 之鹽或立體異構物，其中R為
    Figure 109122604-A0202-13-0008-555
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0008-556
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0008-557
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0008-558
    Figure 109122604-A0202-13-0008-543
    或
    Figure 109122604-A0202-13-0008-544
    ，其中
    Figure 109122604-A0202-13-0008-545
    鍵結係連接嘧啶環，及n為0至4。
  12. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其醫藥上接受 之鹽或立體異構物，其中R為
    Figure 109122604-A0202-13-0008-546
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0008-547
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0008-548
    、 或
    Figure 109122604-A0202-13-0008-552
    ，其中
    Figure 109122604-A0202-13-0008-553
    鍵結係連接嘧啶環，及n為0至2。
  13. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其醫藥上接受 之鹽或立體異構物，其中R為
    Figure 109122604-A0202-13-0008-549
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0008-550
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0008-551
    、 或
    Figure 109122604-A0202-13-0009-559
    ，其中
    Figure 109122604-A0202-13-0009-560
    鍵結係連接嘧啶環，及n為0至2。
  14. 如請求項1至13中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
    Ra之各例分別獨立為H、鹵素、C1-4烷基、-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kC(O)NR11S(=O)2R12、-(CHRaa)kS(=O)2R11、-(CHRaa)kS(=O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(=O)2R12、-(CHRaa)k-5-6員雜芳基或-(CHRaa)kP(=O)R11R12；
    Raa分別獨立為H或可視需要經鹵素取代之C1-3烷基；
    R11及R12分別獨立為H或C1-4烷基；及
    k為0或1。
  15. 如請求項1至14中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R1為H、F、Cl、CN或CF3。
  16. 如請求項1至15中任一項所述之化合物或其醫藥上接受 之鹽或立體異構物，其中R為
    Figure 109122604-A0202-13-0009-567
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0009-568
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0009-569
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0009-561
    或
    Figure 109122604-A0202-13-0009-563
    ，其中
    Figure 109122604-A0202-13-0009-565
    鍵結係連接嘧啶環，及n為0至4。
  17. 如請求項1至10中任一項所述之化合物或其醫藥上接受 之鹽或立體異構物，其中R為
    Figure 109122604-A0202-13-0009-573
    ，其中
    Figure 109122604-A0202-13-0009-572
    鍵結係連接嘧啶環，
    Ra1分別獨立為H、C1-4烷基或C1-4羥基烷基；
    Ra1’分別獨立為-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kC(O)NR11S(=O)2R12、-(CHRaa)kS(=O)2R11、-(CHRaa)kS(=O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(=O)2R12、-(CHRaa)k-5-6員雜芳基或-(CHRaa)kP(=O)R11R12；
    Raa分別獨立為H或可視需要經鹵素取代之C1-3烷基；
    Ra分別獨立為H、F或Cl；
    R11及R12分別獨立為H或C1-4烷基；
    k為0或1。
  18. 如請求項17所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
    Ra1分別獨立為H、CH3或CH2OH；
    Ra1’分別獨立為-(CHRaa)kOH、-(CHRaa)kCN、-(CHRaa)kC(O)OR11、-(CHRaa)kC(O)NR11R12、-(CHRaa)kC(O)NR11OR12、-(CHRaa)kC(O)NR11S(=O)2R12、-(CHRaa)kS(=O)2R11、-(CHRaa)kS(=O)2NR11R12、-(CHRaa)kNR11S(=O)2R12、-(CHRaa)k-四唑或-(CHRaa)kP(=O)R11R12；
    Raa分別獨立為H、CH3或CF3；
    R11及R12分別獨立為H或C1-2烷基；及
    k為0或1。
  19. 如請求項18所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中Ra之各例分別獨立為H或F。
  20. 如請求項1至19中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R1為Cl。
  21. 如請求項1至3中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R及R1與其等所附接之碳原子共同形成如下代表之環：
    Figure 109122604-A0202-13-0011-208
     其中
    Figure 109122604-A0202-13-0011-209
    鍵結係連接嘧啶環。
  22. 如請求項1至3及21中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
    Rb之各例分別獨立為H、鹵素、OH、CN、NH2、COOH、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C1-4羥基烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12、C(O)C1-4烷基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NR11OR12、S(=O)2R11、S(=O)2NR11R12、NR11(S=O)2R12、C(O)NR11S(=O)2R12、P(=O)R11R12、5-6員雜芳基或NR11C(O)C1-4烷基；及
    Rc之各例為苯基或吡啶基，其各可視需要經一或兩個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12及P(=O)二-C1-6烷基所組成群組之取代基所取代。
  23. 如請求項1至3、21及22中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R及R1與其等所附接之碳原子共同形成如下代表之環：
    Figure 109122604-A0202-13-0012-211
    、
    Figure 109122604-A0202-13-0012-212
    或
    Figure 109122604-A0202-13-0012-213
    ，其中
    Figure 109122604-A0202-13-0012-214
    鍵結係連接嘧啶環。
  24. 如請求項1至3及21至23中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
    Rb之各例分別獨立為H、鹵素、CN、COOH、C1-2烷基或C1-2鹵烷基；
    Rc之各例為苯基或吡啶基，其各可視需要經一或兩個分別獨立選自由鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、NR11R12、C(O)NR11R12及P(=O)二-C1-6烷基所組成群組之取代基所取代，及
    R11及R12之各例分別獨立為H或C1-6烷基。
  25. 如請求項1至3及21至24中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
    Rb之各例分別獨立為H、CN或COOH；及
    Rc之各例為苯基或吡啶基，其各可視需要經一或兩個分別獨立選自由C1-4烷基、C(O)N(CH3)2及P(=O)(CH3)2所組成群組之取代基所取代。
  26. 如請求項1至25中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中m為0或1。
  27. 如請求項1至26中任一項所述之化合物或其醫藥上接受 之鹽或立體異構物，其中
    Figure 109122604-A0202-13-0012-215
    為
    Figure 109122604-A0202-13-0012-216
    。
  28. 如請求項1至27中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R2之各例為H、鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、 C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基；及R3為H、C1-6烷基、C1-6羥基烷基或COCH2NR11R12。
  29. 如請求項1至28中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R2之各例為H、F、Cl或OCH3；及R3為H或C1-4烷基。
  30. 一種如結構式(II)代表之化合物或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，
    Figure 109122604-A0202-13-0013-217
    其中
    A1為CR’或N；
    X為-P(=O)R3’R4’；
    R’為H、氘、鹵素、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基，其中由R’代表或在由R’代表之基團中之烷基、烯基、炔基或烷氧基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11’R12’所組成群組之取代基所取代；
    R1’之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、C3-7環烷基或3-7員雜環基， 其中由R1’代表或在由R1’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11’R12’所組成群組之取代基所取代；
    R2’之各例分別獨立為H、氘、鹵素、OH、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、苯基、5-6員雜芳基、C3-7環烷基或3-7員雜環基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基團中之烷基、烯基、炔基、烷氧基、苯基、雜芳基、環烷基或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11’R12’所組成群組之取代基所取代；
    各R3’及R4’分別獨立為H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中由R3’或R4’代表之烷基、烯基或炔基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11’R12’所組成群組之取代基所取代；
    R11’及R12’之各例分別獨立為H或C1-6烷基，其中由R11’或R12’代表之烷基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基及3-7員雜環基所組成群組之取代基所取代，或
    R11’及R12’與其等所附接之氮原子共同形成3-7員雜環基，其可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基或C1-4鹵烷氧基所組成群組之取代基所取代；
    m’為0、1或2；及
    n’為0、1或2。
  31. 如請求項30所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中該化合物係由結構式(II-1)代表：
    Figure 109122604-A0202-13-0015-218
    其中該R’為H、鹵素、NR11’R12’或C1-6烷基，其可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11’R12’所組成群組之取代基所取代。
  32. 如請求項30或31所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中R3’及R4’分別獨立為H或C1-6烷基，其可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11’R12’所組成群組之取代基所取代。
  33. 如請求項30至32中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
    R1’之各例分別獨立為H、鹵素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基或3-7員雜環基，其中由R1’代表之烷基、烯基、炔基、環烷基或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11’R12’所組成群組之取代基所取代；
    R2’之各例分別獨立為H、鹵素、OH、NO2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NR11’R12’、C(O)NR11’R12’、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、NR11’C(O)C1-6烷基、5-6員雜芳基或3-7員雜環基，其中由R2’代表或在由R2’代表之基團中之烷基、烷氧基、雜芳基或雜環基可視需要經一至三個分別獨立選自由鹵素、OH、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基及NR11’R12’所組成群組之取代基所取代。
  34. 如請求項30至33中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中該化合物係由結構式(II-2)或(II-2’)代表：
    Figure 109122604-A0202-13-0016-219
    其中R’為H、鹵素或NH2。
  35. 如請求項30至34中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
    R2’之各例分別獨立為H、鹵素、OH、可視需要經鹵素或OH或NR11’R12’取代之C1-4烷基、C1-4烷氧基、C(O)OC1-6烷基、C(O)NR11’R12’、NR11’R12’、NR11’C(O)C1-6烷基、5-6員雜環基或5-6員雜芳基；及
    R1’之各例分別獨立為H或C1-4烷基。
  36. 如請求項30至35中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中
    R3’及R4’分別獨立為C1-6烷基；及
    R2’之各例分別獨立為H、鹵素、OH、可視需要經鹵素或OH或NR11’R12’取代之C1-4烷基、C1-4烷氧基、C(O)OC1-4烷基、C(O)NR11’R12’、NR11’R12’、NHC(O)C1-6烷基、吡咯啶基、吡咯啶-2-酮、
    Figure 109122604-A0202-13-0017-574
    唑，其中R11’及R12’之各例分別獨立為H或C1-4烷基。
  37. 如請求項30至36中任一項所述之化合物或其醫藥上接受之鹽或立體異構物，其中X為-P(O)(CH3)2，及R2’之各例分別獨立為H、F、Cl、OH、CH3、NH2或NHCOCH3。
  38. 一種醫藥組成物，其包含醫療有效量之如請求項1至37中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，及醫藥上可接受之載劑。
  39. 一種組合，其包含醫療有效量之如請求項1至37中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，及一或多種醫療活性併用製劑。
  40. 一種治療罹患癌症之個體之方法，其包括對該個體投與有效量之如請求項1至37中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物。
  41. 如請求項40所述之方法，其中該癌症係選自乳癌、結腸直腸癌、肺癌、卵巢癌及胰臟癌。
  42. 一種於有此需要之個體抑制HPK1活性之方法，該方法包括對該個體投與有效量之如請求項1至37中任一項所述之化合物，或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物。
  43. 如請求項42所述之方法，其中該個體患有癌症，且其中該癌症係經治療的。
  44. 如請求項43所述之方法，其中該癌症係選自乳癌、結腸直腸癌、肺癌、卵巢癌及胰臟癌。
  45. 一種如請求項1至37中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽或其立體異構物，其用於作為藥品之用途，如用於作為HPK1抑制劑的藥品。
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