CN114533727A - 抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物及其应用,该组合物包含克拉维酸钾,以及抗菌药物A或抗菌药物A的药学上可接受的盐,所述抗菌药物A为氨苄西林或头孢噻呋。该组合物对大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌等革兰氏阴性菌耐药菌具有显著的协同作用,并且能够将体外单药的MIC降低8~64倍,能够显著提高抑菌效果,用于抑制家禽养殖中的多药耐药菌的感染具有较好的市场前景。
Description
技术领域
本发明属于兽药技术领域,尤其涉及抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物及其应用。
背景技术
为了加强兽用抗菌药物管理,切实规范养殖环节兽药使用,农业部组织发布了《食品动物用兽用抗菌药物临床应用管理办法》,其中规定了在家禽养殖中可使用的合法的抗菌药物品种约有45种,而为了控制兽药在食品动物中的残留,目前在大型养殖集团中常规使用的抗菌药物约有20种。在家禽饲养和疾病治疗过程中,这些药物的广泛和过度使用导致了多重耐药菌,尤其是革兰氏阴性菌的多重耐药菌株的出现。
多重耐药菌是指细菌对常用抗菌药物主要分类的3类或3类以上耐药;随着抗生素大量使用,研究发现在家禽养殖过程中出现的常见革兰氏阴性菌中出现了一定数量的多重耐药菌。常规使用的抗菌药物包括现有农业部批准的复方抗菌药物产品均不能降低多重耐药菌的耐药。因此,在动物卫生领域开发抗生素组合物用于降低多重耐药具有十分重要的意义。
发明内容
本发明针对上述技术问题,提出抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物及其应用,该组合物对大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌等革兰氏阴性菌耐药菌具有显著的协同作用,能够显著提高抑菌效果,用于抑制家禽养殖中的多药耐药菌的感染具有较好的市场前景。
为了达到上述目的,本发明采用的技术方案为:
本发明一方面公开了一种抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物,包含克拉维酸钾,以及抗菌药物A或抗菌药物A的药学上可接受的盐,所述抗菌药物A为氨苄西林或头孢噻呋。
作为优选,所述抗菌药物A为氨苄西林,所述克拉维酸钾与氨苄西林的质量比为1∶1~4。
作为优选,所述抗菌药物A为头孢噻呋或头孢噻呋的药学上可接受的盐,所述克拉维酸钾与抗菌药物A的质量比为1~4∶1。
作为优选,所述头孢噻呋的药学上可接受的盐为头孢噻呋钠。
本发明另一方面公开了上述组合物在制备用于治疗家禽革兰氏阴性菌感染的药物中的应用。
作为优选,所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌、沙门氏菌和鸭疫里默氏杆菌中的一种或多种。
作为优选,所述药物为杀菌剂。
作为优选,所述杀菌剂为粉剂、可溶性粉剂、溶液剂、微乳剂、悬浮剂或复方注射剂。
作为优选,所述杀菌剂为可溶性粉剂,所述可溶性粉剂的原料还包括无水磷酸钠、六偏磷酸钠和无水葡萄糖。
与现有技术相比,本发明的优点和积极效果在于:提出了抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物及其应用,该组合物对大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌等革兰氏阴性菌耐药菌具有显著的协同作用,并且能够将体外单药的MIC降低8~64倍,能够显著提高抑菌效果,用于抑制家禽养殖中的多药耐药菌的感染具有较好的市场前景。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
一种抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物,包含克拉维酸钾,以及抗菌药物A或抗菌药物A的药学上可接受的盐,抗菌药物A为氨苄西林或头孢噻呋。
上述组合物可用于制备治疗家禽革兰氏阴性菌感染的药物。该组合物对大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌等革兰氏阴性菌耐药菌具有显著的协同作用,并且能够将体外单药的MIC降低8~64倍,能够显著提高抑菌效果,用于抑制家禽养殖中的多药耐药菌的感染具有较好的市场前景。
其中,若抗菌药物A为氨苄西林,所述克拉维酸钾与氨苄西林的质量比为1∶1~4;若抗菌药物A为头孢噻呋或头孢噻呋的药学上可接受的盐,所述克拉维酸钾与抗菌药物A的质量比为1~4∶1,具体的,头孢噻呋的药学上可接受的盐为头孢噻呋钠。
其中,该组合物可显著抑制的革兰氏阴性菌为大肠杆菌、沙门氏菌和鸭疫里默氏杆菌中的一种或多种。
其中,所制得的药物为杀菌剂。该杀菌剂为粉剂、可溶性粉剂、溶液剂、微乳剂、悬浮剂或复方注射剂。优选为可溶性粉剂,该可溶性粉剂的原料还包括无水磷酸钠、六偏磷酸钠和无水葡萄糖。
为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的评价方法,下面将结合具体实施例进行描述。
实施例1试验菌株耐药性测试
最低抑菌浓度MIC是评定抗生素对细菌是否敏感的标准,发明人从新希望六和家禽养殖场分离出的大肠杆菌、鸭疫里默民杆菌各30~40株中,采用CLSI(VET01-A4,2013)推荐的微量肉汤稀释法测定各个菌株对常规兽用抗菌药物MIC;根据试验结果,从其中挑选出对常规抗菌药物中3类及以上耐药的大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌各10株,将所筛选的菌株作为后续试验的试验菌株。常规抗菌药物对筛选的大肠杆菌试验菌株及大肠杆菌标准菌株(ATCC-25922)的MIC结果如表1所示,常规抗菌药物对筛选的鸭疫里默氏杆菌试验菌株及标准鸭疫里默氏杆菌标准菌株(ATCC-11845)的MIC结果如表2所示。
表1
从表1的实验结果可以看出,筛选作为试验菌株的10株大肠杆菌对常规抗菌药物体外MIC基本大于16μg/ml,呈现出多重耐药性。
表2
从表2的实验结果可以看出,筛选作为试验菌株的10株鸭疫里默氏杆菌对常规抗菌药物体外MIC基本大于16μg/ml,呈现出多重耐药性。
实施例2常规抗生素联用协同作用测试
采用实施例1筛选出的10株多重耐药的大肠杆菌试验菌株为试验对象,筛选30个兽用抗菌药物两药组合物,具体测试试验方法为:采用棋盘微量稀释法以两药对应菌种MIC值的一定浓度值在96孔反应板上分别按纵列和横列进行联合(横列浓度一般设置为1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,1/128倍MIC,纵列浓度一般设置为1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64倍MIC),接种菌量为1×106CFU/ml的菌悬液,在37℃培养箱内有氧培养18~24h后,观察结果,每组试验至少重复两次。试验结果如表3所示。
表3
从表3的试验结果可以看出,对多重耐药菌,30个两药组合联用的协同效果均不理想,有协同作用的组合共有6组,占比仅20%,但菌株的协同占比均不超过20%,协同作用不理想,因此,常规的两药联用应用对于多重耐药菌没有显著的作用效果。
实施例3氨苄西林和克拉维酸钾协同作用测试
以实施例1筛选的大肠杆菌试验菌株作为试验对象,采用棋盘微量稀释法以氨苄西林和克拉维酸钾对应菌种MIC值的一定浓度值在96孔反应板上分别按纵列和横列进行联合(横列浓度一般设置为1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,1/128倍MIC,纵列浓度一般设置为1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64倍MIC),接种菌量为1×106CFU/ml的菌悬液,在37℃培养箱内有氧培养18~24h后,观察结果,每组试验至少重复两次。实验结果如表4所示。
结果判定:以部分抑菌浓度FICI指数作为联合药敏试验的判定依据(FICI指数:<0.5协同作用,0.5~1相加作用,1~2无关作用,>2拮抗作用)。
FICI=MIC(克拉维酸钾联合使用)/MIC(克拉维酸钾单独使用)+MIC(氨苄西林联合使用)/MIC(氨苄西林单独使用)。
表4
同理,以实施例1筛选的鸭疫里默氏杆菌试验菌株作为试验对象,采用棋盘微量稀释法以氨苄西林和克拉维酸钾对应菌种MIC值的一定浓度值在96孔反应板上分别按纵列和横列进行联合(横列浓度一般设置为1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,1/128倍MIC,纵列浓度一般设置为1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64倍MIC),接种菌量为1×106CFU/ml的菌悬液,在37℃的厌氧罐内培养18~24h后,观察结果,每组试验至少重复两次。实验结果如表5所示。
表5
上述试验结果表明,克拉维酸钾和氨苄西林单独使用时对多重耐药菌体外无显著效果,但是将克拉维酸钾和氨苄西林联合使用对10株大肠杆菌(100%,10株大肠杆菌FICI均小于0.5)和10株鸭疫里默氏杆菌(80%,8株鸭疫里默氏杆菌FICI小于0.5)有协同作用。
对比例1阿莫西林和克拉维酸钾协同作用测试
采用实施例3相同的方法进行阿莫西林和克拉维酸钾协同作用测试,对大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌的测试结果分别如表6和表7所示。
表6
表7
上述试验结果表明,克拉维酸钾和阿莫西林单独使用时对多重耐药菌体外无显著效果,克拉维酸钾和阿莫西林联合使用对10株大肠杆菌和10株鸭疫里默氏杆菌没有协同作用,仅有相加作用,即克拉维酸钾不是与所有抗菌药物均有协调作用。
实施例4
以实施例1筛选的大肠杆菌试验菌株作为试验样品,采用实施例3相同的方法进行头孢噻呋钠和克拉维酸钾协同作用测试,对大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌的测试结果分别如表8所示。
表8
上述试验结果表明,克拉维酸钾和头孢噻呋钠单独使用时对多重耐药大肠杆菌体外无显著效果,但是将克拉维酸钾和头孢噻呋钠联合使用对8株大肠杆菌(80%,10株大肠杆菌中8株FICI小于0.5)有明显协同作用。
实施例5
一种杀菌剂,为可溶性粉剂,其处方组成为:
上述原料采用常规可溶性粉剂制备方法制成杀菌剂,考察本实施例的可溶性粉剂的各项质量指标,包括含量稳定性、水中稳定性、溶解性等指标,并与批准的兽药复方制剂复方阿莫西林粉剂(含量10%,批号20201202,由山东某药业有限公司生产)做对比,具体实验如下:
1)溶解性试验
实验方法:称取一定量的供试品,置100ml纳氏比色管中,加入25℃±2℃自来水,制成溶液,每隔5min振摇30s,15min后观察溶解情况,以此记为样品的溶解度,试验结果见表9。
表9
由表9可知,相对于氨苄西林原料、克拉维酸原料以及复方阿莫西林粉,本实施例的可溶性粉剂的溶解度有了较大的提高。
2)水溶液中稳定性
称取一定量的供试品,制备成浓度为2000ppm的溶液,在室温条件下放置6h,分别于0h、6h取样,样品用流动相稀释后,用液相测定其含量,计算6h后含量的降解百分率,试验结果见表10。
表10
由表10结果可以看出,采用本实施例的配方制备的可溶性粉剂在水中稳定性优于两种原料以及复方阿莫西林粉。
3)加速稳定性试验
按照《中国兽药典》2020年版一部附录9001稳定性指导原则规定方法开展加速稳定性试验,样品以铝箔袋包装,考察样品放置3个月的含量合格情况,结果见表11。
表11
由表11结果可以看出,本实施例的可溶性粉剂在加速3个月过程中含量稳定性良好,而两种原料含量降解明显,表明产品组分中的稳定剂和助溶剂可以改善产品的稳定性。
通过对本实施例的可溶性粉剂进行体外质量检测可以看出,本发明制备的可溶性粉剂剂型的杀菌剂的溶解度高,稳定性好,临床制备的溶液在使用过程中含量稳定,为动物临床使用提供了质量保证。
4)临床应用
以20日龄供试鸡40只为试验对象,随机分为4组,每组10只。第1~4组为攻毒感染组,第5组为阴性对照组,感染组注射临床分离的大肠杆菌菌液,阴性对照组注射灭菌生理盐水。各感染组试验鸡只分别胸肌注射供试菌液0.2毫升,48小时后大部分鸡只出现明显的临床症状时,统一用药治疗。3个感染组分别使用本实施例的杀菌剂、氨苄西林和兽药复方制剂复方阿莫西林粉剂,具体实验方法简述为:本实施例的杀菌剂及氨苄西林对照组给药剂量为每1L水0.6g,复方阿莫西林对照组给药剂量为每1L水0.6g,集中一次饮用,连用5天,阳性对照组不给药。用药后连续观察7天,记录每组试验鸡只的临床变化、死亡情况,计算总有效率、治愈率、死亡率疗效指标。跟踪各组的发病情况,并统计治愈率和死亡率,所得结果如表12所示。
表12
由表12的结果可以看出,本实施例的杀菌剂具有较好的治疗作用,其效果明显由于单方氨苄西林产品以及复方阿莫西林粉产品。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可以做各种改动和修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (9)
1.一种抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物,其特征在于,包含克拉维酸钾,以及抗菌药物A或抗菌药物A的药学上可接受的盐,所述抗菌药物A为氨苄西林或头孢噻呋。
2.根据权利要求1所述的抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物,其特征在于,所述抗菌药物A为氨苄西林,所述克拉维酸钾与氨苄西林的质量比为1∶1~4。
3.根据权利要求1所述的抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物,其特征在于,所述抗菌药物A为头孢噻呋或头孢噻呋的药学上可接受的盐,所述克拉维酸钾与抗菌药物A的质量比为1~4∶1。
4.根据权利要求3所述的抑制家禽革兰氏阴性菌多重耐药的组合物,其特征在于,所述头孢噻呋的药学上可接受的盐为头孢噻呋钠。
5.如权利要求1至4中任一项所述的组合物在制备用于治疗家禽革兰氏阴性菌感染的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌、沙门氏菌和鸭疫里默氏杆菌中的一种或多种。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述药物为杀菌剂。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述杀菌剂为粉剂、可溶性粉剂、溶液剂、微乳剂、悬浮剂或复方注射剂。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述杀菌剂为可溶性粉剂,所述可溶性粉剂的原料还包括无水磷酸钠、六偏磷酸钠和无水葡萄糖。
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