CN114507296A - 地衣多糖及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有抗凝血活性地衣多糖的制备方法，该方法以地衣为原料，采用微波水浸提法提取其粗多糖，并采用大孔树脂吸附等层析法进行富集、分离和纯化，获得了一种精制地衣多糖，并进而采取硫酸酯化对其进行结构修饰获得一种具有新型分子结构的硫酸酯化地衣多糖。本发明的地衣多糖及其硫酸酯化衍生物具有抗凝血功能，在相关保健品或药物方面具有开发潜力；其制取工艺操作简便、能耗低、得率高、不破坏多糖活性和安全性高等特点，适合工业化生产，从而可提高地衣的利用价值，为其深加工和相关功能因子的开发和应用奠定生产基础。

Description

地衣多糖及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种地衣多糖及其制备方法与应用。
背景技术
地衣(lichen)是一类单独的固定共生复合体，它是地球生物圈中地衣真菌的一种，与相应的藻类和蓝藻形成的一类细胞外共生生态群落。地衣具有较高的医药价值，可入药，常被认为是治疗肺结核的有效材料。在我国民间医学书籍《本草纲目》中有记载，地衣具有退烧解毒、清肝明目、降血压等用途。在生物活性方面，地衣具有抑菌、抗炎症、抗辐射、抗氧化、降血脂和抗肿瘤等作用。其有效成分包括地衣酸类和多糖类，地衣多糖主要包括地衣类多糖、异地衣类多糖和石耳类多糖等，也包括少量的葡聚糖和甘露聚糖等。由于地衣多糖具备多种生物活性，使得地衣在医药和食品领域有着广阔的研究前景。
目前，国内外研究者对地衣的研究主要集中在化学成分组成、群落结构特征、生物活性物质的初提等方面。早在古埃及时代，地衣便被人们采集用作治疗疾病的药物；最早，在我国南北朝时期医书上开始有记载，地衣具有“明目益精气”的作用(牛东玲,王立松,张颖君,等.地衣次生代谢产物及其生物活性研究进展[J].天然产物研究与开发,2007(6):1079-1086)。研究发现地衣所含有的地衣酸类和多糖类具有显著的对人体有益的生物活性物质，并已经开始将地衣提取物作为制剂添加进行入药，用来治疗烧伤，溃疡及伤风等症。唐蓉以传统分类学方法为基础，并结合分子生物学方法对赤星衣属及其相关属地衣进行了初步发育学研究，并对所鉴定地衣物种的形态、解剖、化学以及地理分布做出了详细研究，增加了赤星衣属地衣的分子数据(唐蓉.中国西南部地区赤星衣属及其相关属地衣的分类学研究.山东师范大学学位论文,2019)。魏鑫丽等对2164种地衣进行了评估，评估结果显示，地衣受威胁物种共28种，无危657种，而数据不足的物种达1473种(魏鑫丽,邓红,魏江春.中国地衣的濒危等级评估.生物多样性,2020,28(01):54-65)。王卫东等通过单因素实验设计和正交实验设计探究了源自湖北大别山石耳的多糖热水浸提法工艺，其最佳提取工艺为：加热温度80℃，时间是4h，液料比10：1mL/g。Kim等研究发现，石耳提取物黑色素的生成和糖苷酶都有一定的抑制活性，具有调节免疫细胞功能(Kim H S,Shin B R,Lee H K,etal.Dendritic cell activation by polysaccharide isolated from Angelicadahurica.Food and Chemical Toxicology,2013,55:241-247)。不同种类、不同来源的地衣，其多糖的组分和结构差异往往较大，生物活性具有多样性，而且毒性小，具有广阔的市场应用价值。
上述相关报道与研究均是对地衣多糖进行初步提取，所得的地衣多糖的纯度较低，实验室的研究结果更关注小试条件下的功能研究，对于可大规模生产的地衣多糖工艺并未报道，且未见报道地衣多糖具有抗凝血活性。
发明内容
发明目的：针对上述现有技术中存在的技术问题，本发明提供了一种地衣多糖及其制备方法与应用。
技术方案：本发明所述地衣多糖的制备方法，步骤主要如下：
(1)取地衣子实体鲜品除杂、清洗、干燥后粉碎过筛备用；
(2)微波水浸提步骤(1)粉碎过筛后的地衣子实体，浸提后离心收集上清液，下层沉淀加水重提，重复1～4次；
(3)合并步骤(2)收集的上清液，旋蒸浓缩后加入乙醇，静置沉淀；
(4)过滤步骤(3)静置所得的溶液，得到的沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次洗涤1～4次，然后真空冷冻干燥，获得地衣粗多糖；
(5)将步骤(4)所得地衣粗多糖加水溶解，然后过大孔吸附树脂进一步富集和分离其中的地衣多糖；
(6)将经由步骤(5)富集和分离后的溶液，利用层析法进一步纯化、旋蒸浓缩和真空冷冻干燥得到精制地衣多糖。
其中，步骤(1)中，干燥是指在40～80℃干燥2～24h，粉粹过筛是指粉粹过100～300目筛。
优选的，步骤(1)中，干燥温度为80℃，干燥时间12h，粉粹过筛为200目。
步骤(2)中，微波水浸提时，地衣子实体粉末与水的质量比1:10～70，提取功率为200～500w，提取时间为100～500s；离心所得下层沉淀再加入等量水重提。
优选的，步骤(2)中，地衣子实体粉末与水的质量比1:30、提取功率为350w、提取时间为380s、提取1次，得到的多糖提取率最大，为20％。
步骤(2)中，离心机离心力为1000～5000×g，离心时间5～30min。
步骤(3)中，旋蒸浓缩是指在40～60℃旋转蒸发浓缩至原总体积的1/5～1/3；加入乙醇静置沉淀是指向浓缩液中加入2～6倍体积的95％工业乙醇(v/v)，静置沉淀5～20h。
步骤(4)中，真空冷冻干燥温度为-60～-30℃，干燥时间为24～60h。
步骤(5)中，所述大孔吸附树脂富集和分离地衣多糖时，动态吸附条件为：上样溶液浓度为0.5～2.5mg/mL，上样速度为0.1～1.0BV/h，上样体积为0.1～5.0BV；动态解吸条件为：洗脱液为浓度50％～100％的乙醇(v/v)，洗脱速度为0.1～2.5BV/h，洗脱液体积为0.1～2.5BV。
步骤(5)中，所述大孔吸附树脂为HPD600、D941、AB-8、HPD100、D301、D101、S-8或X-5。
优选的，步骤(5)中，AB-8为优选大孔吸附树脂。
优选的，步骤(5)中，所述大孔吸附树脂富集地衣多糖时，动态吸附条件为：上样溶液浓度为2.0mg/mL，上样速度为0.4BV/h，上样体积为0.5BV时，能够达到最大的多糖吸附率88％；动态解吸条件为：洗脱液为浓度100％的乙醇(v/v)，洗脱速度为0.5BV/h，洗脱液体积为1.5BV时，能够达到最大的多糖洗脱率98％。
步骤(6)中，层析采用离子交换柱，上样浓度5.0～50.0mg/mL，依次采用去离子水以及0.1～0.5mol/L浓度梯度的NaCl洗脱，洗脱流速为0.1～1.0BV/h。
步骤(6)中，所述离子交换柱为DEAE-cellulos-52。
步骤(6)中，旋蒸浓缩是指在40～60℃旋转蒸发浓缩至原总体积的1/5～1/3；冷冻干燥温度为-60～-30℃，干燥时间为24～60h。
优选的，步骤(6)中，离子交换柱纯化时，上样浓度10.0mg/mL，依次采用去离子水、0.1mol/L浓度梯度的NaCl洗脱，洗脱流速0.25BV/h。
本发明还公开了将经由步骤(6)所得的精制地衣多糖，利用氯磺酸-吡啶法进行结构修饰获得其硫酸酯化衍生物。
其中，酯化剂由吡啶和氯磺酸(体积比1～8：1)在冰盐浴下制取获得；步骤(6)所得高纯度的地衣多糖溶于二甲基甲酰胺得浓度为0.5～10.0mg/mL溶液，与酯化剂水浴条件(50～80℃)下反应1～5h，室温下倒入冰水，中和至pH＝7，加入1～6倍体积的95％工业乙醇(v/v)，静置6～20h，过滤得沉淀、复溶于水、去离子、旋蒸浓缩和真空冷冻干燥得到硫酸酯化地衣多糖。
其中，旋蒸浓缩是指在40～60℃旋转蒸发浓缩至原总体积的1/5～1/3；真空冷冻干燥温度为-60～-30℃，干燥时间为24～60h。
优选的，酯化剂中吡啶和氯磺酸体积比为4:1，溶于二甲基甲酰胺的地衣多糖溶液浓度为4.0mg/mL，80℃水浴条件下反应2h，3倍体积的95％工业乙醇。
上述制备过程中溶液可回收乙醇以循环利用，洗涤和纯化产生的废液也可进行回收而环保处理。
根据上述制备方法得到的地衣多糖及其硫酸酯化衍生物也在本发明的保护范围内。
该地衣多糖由4种单糖组成，为吡喃糖构型，葡萄糖残基主要以(1→6)β-D-Glcp、(1→4)β-D-Glcp两种形式存在，甘露糖残基主要以(1→3，6)β-D-manp形式存在，半乳糖残基主要以(1→6)β-D-Glcp形式存在，鼠李残基主要以(1→3)β-D-Rhap形式存在；其中，单糖组成摩尔比为甘露糖：鼠李糖：葡萄糖：半乳糖＝0.59:3.12:93.09:3.03；其硫酸酯化衍生物的取代度为0.1～1.0。
本发明所得地衣多糖及其硫酸酯化衍生物在制备具有抗凝血功效的相关保健品或药物中的应用也在本发明的保护范围内。
由上述可见，本发明针对地衣多糖的提取、分离和纯化，采用微波水提法在特定的工艺条件下初步提取其粗多糖，并采用易于工业化的大孔吸附树脂法进行富集和分离，最终获得纯度高达95.0％以上的地衣多糖，扩展了多糖的地衣来源，提升了地衣多糖的价值，为地衣多糖的开发和应用奠定了生产基础。
有益效果：本发明所述制备方法采用微波水提法和大孔吸附树脂法，操作简单、条件温和、效率高、能耗低、安全性高，且不破坏地衣多糖的活性；制备工艺中的溶剂只需要水和乙醇，无污染环境的废液废渣产生，且水、乙醇以及大孔吸附树脂均可循环反复利用；其工艺及硫酸酯化工艺均可实现连续化操作，设备简单、成本少、投资小。制备所得的一种地衣多糖及其硫酸酯化衍生物为新型结构，且表现出较好的抗凝血活性，可为其在保健品或药物领域的进一步应用提供了依据。
附图说明
图1为一种地衣多糖及其硫酸酯化衍生物的制备工艺流程图；
图2为一种地衣多糖液相色谱图(a.单糖标准样品的HPLC色谱图；b.地衣多糖的HPLC色谱图)；其中，1-甘露糖、2-核糖、3-鼠李糖、4-葡萄糖醛酸、5-半乳糖醛酸、6-葡萄糖、7-半乳糖、8-木糖、9-阿拉伯糖、10-岩藻糖；
图3为一种地衣多糖的红外光谱图；
图4为一种地衣多糖的电镜扫描图；
图5为一种地衣多糖的核磁共振谱(a.1H NMR谱图；b.13C NMR谱图)；
图6为一种地衣多糖硫酸酯化衍生物的红外光谱图；
图7为一种地衣多糖硫酸酯化衍生物的紫外光谱图。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
一种地衣多糖及其硫酸酯化衍生物的制备工艺流程图如图1所示，制备方法包括以下步骤：
1、取地衣子实体若干用水清洗干净，80℃干燥12h，粉粹成末过筛200目，取500g粉末；
2、加入15000g去离子水，混合均匀后放入微波化学反应器进行微波提取，提取功率为350w，浸提380s后，离心得上清液；
3、滤液在60℃下旋转蒸发浓缩至原总体积的1/5，向浓缩液中加入3倍体积的95％工业乙醇(v/v)，静置沉淀12h；
4、过滤得到的沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次顺序洗涤2次，抽真空冷冻干燥，得地衣粗多糖89.5g；
5、将上述地衣粗多糖用900g去离子水溶解，选取AB-8大孔吸附树脂对溶液进行动态吸附和动态解吸以富集和分离其中的地衣多糖，得含地衣多糖的乙醇溶液，60℃下旋转浓缩、真空冷冻干燥得74.6g地衣多糖固体；其中，动态吸附操作条件：上样溶液浓度为2.0mg/mL，上样速度为0.4BV/h，上样体积为0.5BV时；动态解吸操作条件：洗脱液为浓度100％的乙醇(v/v)，洗脱速度为0.5BV/h，洗脱液体积为1.5BV；
6、采用DEAE纤维素-52离子交换层析柱对上述地衣多糖进一步纯化、60℃下旋转浓缩、真空冷冻干燥得59.3g精制地衣多糖固体；层析柱纯化时，上样浓度10.0mg/mL，依次采用去离子水、0.1mol/L浓度梯度的NaCl洗脱，洗脱流速0.25BV/h；
7、地衣多糖硫酸酯化衍生物的制备：利用氯磺酸-吡啶法，酯化剂由吡啶和氯磺酸(体积比4)在冰盐浴下制取获得；取上述精制地衣多糖溶于二甲基甲酰胺得浓度为4.0mg/mL溶液，与酯化剂80℃水浴条件下反应2h，室温下倒入冰水，中和至pH＝7，加入3倍体积的95％工业乙醇(v/v)，静置12h，过滤得沉淀、复溶于水、去离子、旋蒸浓缩和真空冷冻干燥得到硫酸酯化地衣多糖；
8、上述制备过程中可回收乙醇以循环利用，洗涤和纯化产生的废液也进行回收以环保处理；
9、该地衣多糖及其硫酸酯化衍生物的结构表征。
经高效液相色谱分析，此地衣多糖的单糖组成摩尔比为甘露糖：鼠李糖：葡萄糖：半乳糖＝0.59:3.12:93.09:3.03(图2)。
此地衣多糖经红外光谱仪扫描，在4000～400cm-1波数范围内有多糖典型吸收峰，且具有羧基和硫酸基基团吸引峰，是一种酸性多糖(图3)。
此地衣多糖经扫描电镜观察，折叠弯曲呈片状，表面光滑，多糖分子间的交联紧密，彼此间的相互作用较强(图4)。
此地衣多糖经核磁分析，其为吡喃糖构型，葡萄糖残基主要以(1→6)β-D-Glcp、(1→4)β-D-Glcp两种形式存在，甘露糖残基主要以(1→3，6)β-D-manp形式存在，半乳糖残基主要以(1→6)β-D-Glcp形式存在，鼠李残基主要以(1→3)β-D-Rhap形式存在(图5)。
此地衣多糖硫酸酯化衍生物经紫外光谱仪扫描，与该地衣多糖的吻合而无差异，表明硫酸酯化修饰并不会使多糖结构发生降解(图6)。
此地衣多糖硫酸酯化衍生物经红外光谱仪扫描，在4000～400cm-1波数范围内除了多糖的典型特征吸收峰外，还存在1250cm-1的吸收峰，该峰代表非对称的S＝O键伸缩振动，同时分别在816cm-1、819cm-1附近得到的较明显的吸收峰，该峰由对称的C－O－S拉伸振动引起，这两个特征吸收峰是硫酸酯的吸收峰，表明其硫酸酯化修饰成功(图7)。
10、该地衣多糖及其硫酸酯化衍生物的抗凝血活性评价。
以正常人血浆(270μL)加入生理盐水(30μL)作为阴性对照；血浆中(270μL)加入低分子肝素(30μL)作为阳性对照；以正常人血浆(270μL)加入不同浓度的精制地衣多糖和硫酸酯化衍生物(30μL)作为测量组，采用全自动血凝分析仪测量各APTT、TT、PT值，评价其抗凝血活性。结果如表1所示：
表1
Figure BDA0003520546700000061
注：*表示结果与阴性对照组相比具有显著差异性(p<0.05)。阴性对照组：正常人血浆，加入枸橼酸钠离心得贫血小板血浆；阳性对照组：低分子肝素抗凝血浆，正常人血浆中加入低分子肝素。
表1结果表明：该地衣多糖及其硫酸酯化衍生物均具有好的抗凝血活性。随着其浓度的增加，凝血指标PT、APTT和TT都呈现升高的趋势，其中APTT和TT两凝血指标随着浓度的增加幅度较高，当浓度为5mg/L后，其结果与对照组的结果差异较显著(p<0.05)，而凝血指标PT结果与其对照组的结果差异不显著。对于具有抗凝血活性的该地衣多糖，其经过硫酸酯化后的抗凝血活性得到进一步提高。
实施例2
1、取地衣子实体若干用水清洗干净，40℃干燥24h，粉粹成末过筛300目，取500g粉末；
2、加入30000g去离子水，混合均匀后放入微波化学反应器进行微波提取，提取功率为500w，浸提100s后，离心得上清液；
3、滤液在50℃下旋转蒸发浓缩至原总体积的1/3，向浓缩液中加入6倍体积的95％工业乙醇(v/v)，静置沉淀20h；
4、过滤得到的沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次顺序洗涤3次，真空冷冻干燥，得地衣粗多糖81.7g；
5、将上述地衣粗多糖用800g去离子水溶解，选取AB-8大孔吸附树脂对溶液进行动态吸附和动态解吸以富集和分离其中的地衣多糖，得含地衣多糖的乙醇溶液，50℃下旋转浓缩、真空冷冻干燥得68.3g地衣多糖固体。其中，动态吸附操作条件：上样溶液浓度为1.0mg/mL，上样速度为1.0BV/h，上样体积为1.0BV；动态解吸操作条件：洗脱液为浓度70％的乙醇(v/v)，洗脱速度为0.1BV/h，洗脱液体积为2.5BV。
6、采用DEAE纤维素-52离子交换层析柱对上述地衣多糖进一步纯化、50℃下旋转浓缩、真冷冻干燥得48.6g精制地衣多糖固体。层析柱纯化时，上样浓度20.0mg/mL，依次采用去离子水、0.5mol/L浓度梯度的NaCl洗脱，洗脱流速0.5BV/h。
7、地衣多糖硫酸酯化衍生物的制备。利用氯磺酸-吡啶法，酯化剂由吡啶和氯磺酸(体积比6)在冰盐浴下制取获得；取上述精制地衣多糖溶于二甲基甲酰胺得浓度为8.0mg/mL溶液，与酯化剂60℃水浴条件下反应4h，室温下倒入冰水，中和至pH＝7，加入5倍体积的95％工业乙醇(v/v)，静置20h，过滤得沉淀、复溶于水、去离子、旋蒸浓缩和真空冷冻干燥得到硫酸酯化地衣多糖。
8、上述制备过程中可回收乙醇以循环利用，洗涤和纯化产生的废液也进行回收以环保处理。
9、该地衣多糖及其硫酸酯化衍生物的结构表征同实施例1。
10、该地衣多糖及其硫酸酯化衍生物的抗凝血活性评价同实施例1。
实施例3
1、取地衣子实体若干用水清洗干净，60℃干燥18h，粉粹成末过筛200目，取500g粉末；
2、加入25000g去离子水，混合均匀后放入微波化学反应器进行微波提取，提取功率为400w，浸提450s后，离心得上清液；
3、滤液在55℃下旋转蒸发浓缩至原总体积的1/4，向浓缩液中加入5倍体积的95％工业乙醇(v/v)，静置沉淀18h；
4、过滤得到的沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次顺序洗涤4次，真空冷冻干燥，得地衣粗多糖76.8g；
5、将上述地衣粗多糖用750g去离子水溶解，选取D101大孔吸附树脂对溶液进行动态吸附和动态解吸以富集和分离其中的地衣多糖，得含地衣多糖的乙醇溶液，60℃下旋转浓缩、真空冷冻干燥得56.2g地衣多糖固体。其中，动态吸附操作条件：上样溶液浓度为1.5mg/mL，上样速度为0.8BV/h，上样体积为2.0BV；动态解吸操作条件：洗脱液为浓度80％的乙醇(v/v)，洗脱速度为1.0BV/h，洗脱液体积为2.0BV。
6、采用DEAE纤维素-52离子交换层析柱对上述地衣多糖进一步纯化、60℃下旋转浓缩、真冷冻干燥得40.3g精制地衣多糖固体。层析柱纯化时，上样浓度10.0mg/mL，依次采用去离子水、0.3mol/L浓度梯度的NaCl洗脱，洗脱流速0.8BV/h。
7、地衣多糖硫酸酯化衍生物的制备。利用氯磺酸-吡啶法，酯化剂由吡啶和氯磺酸(体积比7)在冰盐浴下制取获得；取上述精制地衣多糖溶于二甲基甲酰胺得浓度为6.0mg/mL溶液，与酯化剂50℃水浴条件下反应5h，室温下倒入冰水，中和至pH＝7，加入4倍体积的95％工业乙醇(v/v)，静置16h，过滤得沉淀、复溶于水、去离子、旋蒸浓缩和真空冷冻干燥得到硫酸酯化地衣多糖。
8、上述制备过程中可回收乙醇以循环利用，洗涤和纯化产生的废液也进行回收以环保处理。
9、该地衣多糖及其硫酸酯化衍生物的结构表征同实施例1。
10、该地衣多糖及其硫酸酯化衍生物的抗凝血活性评价同实施例1。

Claims (10)

1.一种地衣多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取地衣子实体鲜品，除杂、清洗、干燥后粉碎过筛备用；
(2)微波水浸提步骤(1)粉碎过筛后的地衣子实体，浸提后离心收集上清液，下层沉淀加水重提，重复1～4次；
(3)合并步骤(2)收集的上清液，旋蒸浓缩后加入乙醇，静置沉淀；
(4)过滤步骤(3)静置所得的溶液，得到的沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次洗涤1～4次，然后真空冷冻干燥，获得地衣粗多糖；
(5)将步骤(4)所得地衣粗多糖加水溶解，然后过大孔吸附树脂进一步富集和分离其中的地衣多糖；
(6)将经由步骤(5)富集和分离后的溶液，利用层析法进一步纯化、旋蒸浓缩和真空冷冻干燥得到精制地衣多糖。
2.根据权利要求1所述的地衣多糖的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，微波水浸提时，地衣子实体粉末与水的质量比1:10～70。
3.根据权利要求1所述的地衣多糖的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，旋蒸浓缩是指在40～60℃旋转蒸发浓缩至原总体积的1/5～1/3；加入乙醇静置沉淀是指向浓缩液中加入2～6倍体积的95％工业乙醇，静置沉淀5～20h。
4.根据权利要求1所述的地衣多糖的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述大孔吸附树脂富集和分离地衣多糖时，动态吸附条件为：上样溶液浓度为0.5～2.5mg/mL，上样速度为0.1～1.0BV/h，上样体积为0.1～5.0BV；动态解吸条件为：洗脱液为浓度50％～100％的乙醇，洗脱速度为0.1～2.5BV/h，洗脱液体积为0.1～2.5BV。
5.根据权利要求1所述的地衣多糖的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述大孔吸附树脂为HPD600、D941、AB-8、HPD100、D301、D101、S-8或X-5。
6.根据权利要求1所述的地衣多糖的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，层析采用离子交换柱，上样浓度5.0～50.0mg/mL，依次采用去离子水以及0.1～0.5mol/L浓度梯度的NaCl洗脱，洗脱流速为0.1～1.0BV/h。
7.权利要求1-6中任一制备方法制备所得地衣多糖，其特征在于，由4种单糖组成，为吡喃糖构型，葡萄糖残基主要以(1→6)β-D-Glcp、(1→4)β-D-Glcp两种形式存在，甘露糖残基主要以(1→3，6)β-D-manp形式存在，半乳糖残基主要以(1→6)β-D-Glcp形式存在，鼠李残基主要以(1→3)β-D-Rhap形式存在。
8.一种地衣多糖硫酸酯化衍生物，其特征在于，将经由权利要求1制备所得的精制地衣多糖，利用氯磺酸-吡啶法进行结构修饰获得。
9.根据权利要求8所述地衣多糖硫酸酯化衍生物，其特征在于，酯化剂由体积比1～8：1的吡啶和氯磺酸在冰盐浴下制取获得；将地衣多糖溶于二甲基甲酰胺得浓度为0.5～10.0mg/mL溶液，与酯化剂50～80℃反应1～5h，室温下倒入冰水，加入1～6倍体积的95％工业乙醇，静置6～20h，过滤得沉淀、复溶于水、去离子、旋蒸浓缩和真空冷冻干燥得到硫酸酯化地衣多糖。
10.权利要求7所述地衣多糖或权利要求8所述地衣多糖硫酸酯化衍生物在制备抗凝血保健品或药物中的应用。
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