CN114502725A - 转基因哺乳动物及使用方法 - Google Patents

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Abstract

本文描述了表达基于犬科动物的免疫球蛋白的转基因哺乳动物，包括表达用于开发犬科动物治疗性抗体的基于犬科动物的免疫球蛋白的转基因啮齿动物。

Description

转基因哺乳动物及使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年7月1日提交的美国临时申请第62/869,435号的优先权，该美国临时申请的公开内容通过引用并入本文。
序列表
本申请包括序列表，所述序列表已经以ASCII格式电子地提交并且在此通过引用以其整体并入。于2020年6月24日生成的所述ASCII副本被命名为0133-0006WO1_SL.txt并且大小为219,066字节。
发明领域
本发明涉及免疫球蛋白分子的产生，包括用于产生能够产生用于产生单克隆抗体的犬科动物抗原特异性抗体分泌细胞的转基因哺乳动物的方法。
背景
在以下讨论中，出于背景和介绍的目的描述某些文章和方法。本文包含的任何内容不被解释为对现有技术的“承认”。本申请人明确地保留根据情况证明根据可适用的法定条文由本文引用的文章和方法不构成现有技术的权利。
抗体已经成为重要的生物药物，因为它们(i)表现出可以靶向不同分子形式的抗原的精准结合特性，(ii)是具有使其在治疗的人类和动物中良好耐受的期望药代动力学的生理分子，并且(iii)与天然抵御感染原(infectious agent)的强大免疫特性关联。此外，存在已建立的用于从实验动物快速分离抗体的技术，所述技术可以容易地针对任何事实上不天然存在于身体中的外来物质产生特异性抗体反应。
在抗体的最基本形式中，抗体包括各自与相同的轻(L)链配对的两条相同的重(H)链。H链和L链二者的N-末端包括可变结构域(分别地，VH和VL)，所述可变结构域一起为配对的H-L链提供独特的抗原结合特异性。
编码抗体VH和VL结构域的外显子不存在于种系DNA中。而是，每一个VH外显子由存在于免疫球蛋白H链基因座(IGH)中的随机选择的VH、D和JH基因区段的重组产生；同样，单独VL外显子由轻链基因座中随机选择的VL和JL基因区段的染色体重排产生。
犬科动物基因组包含可以表达H链的两个等位基因(一个等位基因来自各自亲本)、可以表达kappa(κ)L链的两个等位基因和可以表达lambda(λ)L链的两个等位基因。在H链基因座处存在多个VH、D和JH基因区段，以及在免疫球蛋白κ (IGK)和免疫球蛋白λ(IGL)L链基因座二者处存在多个VL和JL基因区段(Collins和Watson(2018)Immunoglobulin LightChain Gene Rearrangements,Receptor Editing and the Development of a Self-Tolerant Antibody Repertoire.Front.Immunol.9:2249.(doi:10.3389/fimmu.2018.02249))。
在典型的免疫球蛋白重链可变区基因座中，VH基因区段位于JH基因区段的上游(5’)，其中D基因区段位于VH与JH基因区段之间。IGH基因座的JH基因区段的下游(3’)是编码抗体恒定区(CH)的外显子簇。每一个CH外显子簇编码不同的抗体类别(同种型)。小鼠中存在八种抗体类别：IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2a(或IgG2c)、IgG2b、IgE和IgA(在核酸水平，它们分别被称为：μ、δ、γ3、γ1、γ2a/c、γ2b、ε和α)。在犬科动物(例如，家犬和狼)中，推定的同种型是IgM、IgD、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE和IgA(图12A)。
在大多数哺乳动物物种的IGK基因座处，一簇Vκ基因区段位于少量Jκ基因区段的上游，其中Jκ基因区段簇位于单个Cκ基因的上游。κ基因座的这种组织可以表示为(Vκ)a...(Jκ)b...Cκ，其中a和b独立地是1或更大的整数。犬κ基因座的不同寻常之处在于，一半Vκ基因位于Jκ和Cκ基因区段的上游，并且一半位于Jκ和Cκ基因区段的下游(参见图1C中小鼠IGK基因座和图12C中犬IGK基因座的示意图)。
大多数物种的IGL基因座包括位于可变数量的J-C串联盒5’的一组Vλ基因区段，每一个串联盒由一个Jλ基因区段和一个Cλ基因区段构成(参见图12B中的犬科动物IGL基因座的示意图)。λ基因座的组织可以表示为(Vλ)a...(Jλ-Cλ)b，其中a和b独立地是1或更大的整数。小鼠IGL基因座的不寻常之处在于，它包含两个单元的(Vλ)a...(Jλ-Cλ)b。
在B细胞发育期间，基因重排首先发生在包含H链可变基因区段的两条同源染色体中的一条上。然后，所得VH外显子在RNA水平剪接至Cμ外显子，用于IgM H链表达。随后，VL-JL重排每一次发生在一个L链等位基因上，直到产生功能性L链，之后L链多肽可以与IgM H链同源二聚体缔合以形成针对抗原的完全功能性B细胞受体(BCR)。在小鼠和人类中，随着B细胞继续成熟，IgD以可变剪接的形式与IgM共表达，其中IgD以比主要B细胞群体中的IgM高10倍的水平表达。这与犬中的B细胞发育形成相反，在犬中的B细胞发育中，Cδ外显子可能是非功能性的。
本领域的专家普遍认为，在小鼠和人类中，VL-JL重排首先发生在两条染色体上的IGK基因座处，然后任一条染色体上的IGL轻链基因座变得接受VL-JL重组。这得到了以下观察的支持：在表达κ轻链的小鼠B细胞中，两条染色体上的λ基因座通常因无效重排(non-productive rearrangement)而失活。这可以解释小鼠中>90％κ且<10％λ的主要κL链使用。
然而，犬免疫系统中的免疫球蛋白以λ轻链使用为主，据估计，轻链使用为至少90％λ至<10％κ。在犬科动物中，Vκ-Jκ重排是否相比于Vλ-Jλ重排首先优先发生，这在机制上是未知的。
在遇到抗原后，B细胞可以在IGH基因座处经历另一轮DNA重组，以去除Cμ和Cδ外显子，有效地将CH区转换为下游同种型之一(这一过程被称为类别转换)。在犬中，虽然已经分离出了被鉴定为编码犬科动物IgG1-IgG4的cDNA克隆(Tang，等人(2001)Cloning andcharacterization of cDNAs encoding four different canine immunoglobulinγchains.Vet.Immunol.and Immunopath.80:259PMID 11457479)，仅IgG2恒定区基因被物理定位(mapping)至犬科动物8号染色体上的IGH基因座(Martin，等人(2018)Comprehensiveannotation and evolutionary insights into the canine(Canis lupus familiaris)antigen receptor loci.Immunogenet.70:223doi:10.1007/s00251-017-1028-0)。
编码各种犬科动物和小鼠免疫球蛋白的基因已经被广泛表征。Priat等人在Genomics，54:361-78(1998)中描述了犬基因组的全基因组辐射定位(whole-genomeradition mapping)，并且Bao等人在Veterinary Immunology and Immunopathology,137:64-75(2010)中描述了犬科(Canis familiaris)中VH库(repertoire)的分子表征。Martin等人提供了犬科动物(家犬(Canis lupus familiaris))免疫球蛋白κ和λ(IGK、IGL)基因座的注释，以及在Immunogenetics,70(4):223-236(2018)中对IGH基因座注释的更新。
Blankenstein和Krawinkel在Eur.J.Immunol.,17:1351-1357(1987)中描述了小鼠可变重链区基因座。转基因动物例常地用于各种研究和开发应用。例如，包含免疫球蛋白基因的转基因小鼠的产生描述于国际申请WO 90/10077和WO 90/04036中。WO 90/04036描述了具有整合的人类免疫球蛋白“微(mini)”基因座的转基因小鼠。WO 90/10077描述了用于在产生转基因动物中使用的包含免疫球蛋白显性控制区的载体。
已经开发了用于用例如人类免疫球蛋白序列修饰小鼠内源免疫球蛋白可变区基因座以产生用于药物发现目的的部分或完全人类抗体的许多方法。这样的小鼠的实例包括以下中描述的那些：例如，美国专利第7,145,056号；第7,064,244号；第7,041,871号；第6,673,986号；第6,596,541号；第6,570,061号；第6,162,963号；第6,130,364号；第6,091,001号；第6,023,010号；第5,593,598号；第5,877,397号；第5,874,299号；第5,814,318号；第5,789,650号；第5,661,016号；第5,612,205号；和第5,591,669号。然而，许多完全人源化免疫球蛋白转基因小鼠表现出次优的抗体产生，因为这些小鼠中的B细胞发育受到低效率的V(D)J重组以及受到完全人类抗体/BCR不能与小鼠信号传导蛋白一起发挥最佳功能的严重阻碍。由于用同线(syntenic)人类对应序列取代单独小鼠外显子的方法，因此其中小鼠编码序列已经与人类序列“交换”的其他人源化免疫球蛋白转基因小鼠是非常耗时且昂贵的。
发挥作为药物的功能的抗体的使用不限于人类疾病的预防或疗法。伴侣动物诸如犬罹患一些与人类相同的病症(affliction)，例如癌症、特应性皮炎和慢性疼痛。分别靶向IL31、CD20、IgE和神经生长因子的单克隆抗体已经在兽医学用途中作为用于这些状况的治疗。然而，在临床使用之前，这些在小鼠中制备的单克隆抗体必须被犬科动物化(caninized)，即它们的氨基酸序列必须从小鼠向犬改变以防止在接受犬中的免疫反应。重要的是，由于免疫耐受性，针对犬科动物蛋白的犬科动物抗体不能在犬中容易产生。基于前述，清楚的是，对于产生用于治疗犬中疾病的犬科动物抗体的有效且有成本效益的方法存在需求。更特别地，本领域对于能够产生抗原特异性犬科动物免疫球蛋白的小型、快速繁殖的非犬科动物哺乳动物存在需求。这样的非犬科动物哺乳动物可用于产生能够大规模产生犬科动物单克隆抗体的杂交瘤。
PCT公布第2018/189520号描述了具有被工程化为表达来自伴侣动物诸如犬、猫、马、鸟、兔、山羊、爬行动物、鱼和两栖动物的外源动物免疫球蛋白可变区基因的基因组的啮齿动物和细胞。
然而，对于用于产生能够产生具有犬科动物V区的抗体的转基因非人类动物的改进方法仍然存在需求。
概述
提供本概述是为了以简化的形式介绍概念选择，所述概念在下文的详述中进一步描述。本概述既不意图确定所要求保护的主题的关键或基本特征，也不意图用于限制所要求保护的主题的范围。从以下撰写的详述，包括附图中阐明的和所附的权利要求书中限定的那些方面，所要求保护的主题的其他特征、细节、效用和优点将是明显的。
本文描述了具有包含外源引入的部分犬科动物免疫球蛋白基因座的基因组的非犬科动物哺乳动物细胞和非犬科动物哺乳动物，其中引入的基因座包含犬科动物免疫球蛋白可变区基因区段的编码序列和基于非犬科动物哺乳动物宿主的内源免疫球蛋白可变区基因座的非编码序列。因此，非犬科动物哺乳动物细胞或哺乳动物能够表达嵌合B细胞受体(BCR)或抗体，所述嵌合B细胞受体(BCR)或抗体包含与非犬科动物哺乳动物宿主细胞或哺乳动物天然的各自恒定区结合的为完全犬科动物的H链和L链可变区。优选地，转基因细胞和动物具有其中部分或全部内源免疫球蛋白可变区基因座被去除的基因组。
至少，在非犬科动物哺乳动物宿主中产生嵌合犬科动物单克隆抗体要求宿主具有表达嵌合犬科动物免疫球蛋白H链或L链的至少一个基因座。在大多数方面，存在分别表达嵌合犬科动物免疫球蛋白H链和L链的一个重链基因座和两个轻链基因座。
在一些方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物VH编码序列和存在于非犬科动物哺乳动物宿主的内源VH基因座中的非编码调控或支架序列。在这些方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座还包含与存在于非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组的内源D和JH基因区段邻近处的非编码调控或支架序列结合的犬科动物D和JH基因区段编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含在存在于非犬科动物哺乳动物宿主的内源免疫球蛋白重链基因座中的非编码调控或支架序列中嵌入的犬科动物VH、D和JH基因区段编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含在存在于啮齿类动物诸如小鼠的内源免疫球蛋白重链基因座中的非编码调控或支架序列中嵌入的犬科动物VH、D和JH基因区段编码序列。在其他方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物VL编码序列和存在于非犬科动物哺乳动物宿主的内源VL基因座中的非编码调控或支架序列。在一方面，包含犬科动物VL编码序列的外源引入的部分犬科动物免疫球蛋白基因座还包含犬科动物L链J基因区段编码序列和存在于非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组的内源L链J基因区段邻近处的非编码调控或支架序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含在非犬科动物哺乳动物宿主细胞中的免疫球蛋白轻链基因座的非编码调控或支架序列中嵌入的犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含嵌入非犬科动物哺乳动物宿主的免疫球蛋白基因座中的非编码调控或支架序列中的犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列。在一方面，非犬科动物哺乳动物宿主的内源κ基因座是失活的或被编码犬科动物λ链的序列取代，以相比于犬科动物κ链增加犬科动物λ免疫球蛋白轻链的产生。在一方面，非犬科动物哺乳动物宿主的内源κ基因座是失活的，但未被编码犬科动物λ链的序列取代。
在某些方面，非犬科动物哺乳动物是啮齿动物，例如，小鼠或大鼠。
在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包括含有一个或更多个犬科动物λ可变区基因区段编码序列的部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座是含有一个或更多个犬科动物κ可变区基因区段编码序列的部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞具有包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的基因组。在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞具有包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座的基因组。在一方面，啮齿动物或啮齿动物细胞的部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座包含一个或更多个犬科动物免疫球蛋白λ可变区基因区段编码序列。在一方面，啮齿动物或啮齿动物细胞的部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座包含一个或更多个犬科动物免疫球蛋白κ可变区基因区段编码序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座能够表达包含犬科动物可变结构域的免疫球蛋白。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物，所述转基因啮齿动物产生的包含λ轻链的免疫球蛋白比包含κ轻链的免疫球蛋白更多。在一方面，转基因啮齿动物产生至少约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％以及高达约100％的λ轻链免疫球蛋白。在一方面，转基因啮齿动物产生至少约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％以及高达约100％的包含犬科动物可变结构域的λ轻链免疫球蛋白。在一方面，从转基因啮齿动物分离出产生λ轻链的细胞的可能性比分离出产生κ轻链的细胞更大。在一方面，从转基因啮齿动物分离出产生具有犬科动物可变结构域的λ轻链的细胞的可能性比分离出产生具有犬科动物可变结构域的κ轻链的细胞更大。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物细胞产生包含λ轻链的免疫球蛋白的可能性比产生包含κ轻链的免疫球蛋白更大。在一方面，啮齿动物细胞从本文描述的转基因啮齿动物分离出。在一方面，啮齿动物细胞如本文描述地通过重组产生。在一方面，转基因啮齿动物细胞或其后代具有至少约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％以及高达约100％的概率产生λ轻链免疫球蛋白。在一方面，转基因啮齿动物细胞或其后代具有至少约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％以及高达约100％的概率产生具有犬科动物可变结构域的λ轻链免疫球蛋白。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vλ基因区段编码序列和Jλ基因区段编码序列以及啮齿动物免疫球蛋白轻链可变区基因座的非编码序列诸如调控或支架序列。
在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中的犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的非编码调控或支架序列中的犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列和Jλ基因区段编码序列以及一个或更多个啮齿动物免疫球蛋白λ恒定区编码序列。
在一方面，工程化免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列和一个或更多个J-C单元，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ区编码序列。在一方面，工程化免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列和一个或更多个J-C单元，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ区编码序列和非编码序列。在一方面，啮齿动物Cλ区编码序列选自啮齿动物Cλ1、Cλ2或Cλ3编码序列。在一方面，一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列位于一个或更多个J-C单元的上游，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ基因区段编码序列。在一方面，一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列位于一个或更多个J-C单元的上游，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ非编码序列。在一方面，J-C单元包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座的非编码调控或支架序列中的犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ区编码序列。
在一方面，提供了具有工程化免疫球蛋白基因座的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述工程化免疫球蛋白基因座包含啮齿动物免疫球蛋白κ基因座，其中一个或更多个啮齿动物Vκ基因区段编码序列和一个或更多个啮齿动物Jκ基因区段编码序列已经缺失并且分别被一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列和一个或更多个Jλ基因区段编码序列取代，并且其中该基因座中的啮齿动物Cκ编码序列已经被一个或更多个啮齿动物Cλ1、Cλ2或Cλ3编码序列取代。
在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含位于一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列上游并且与该一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列在相同转录方向的一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列，所述一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列位于一个或更多个啮齿动物Cλ编码序列上游。
在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含位于一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列上游并且与该一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列在相对转录方向的一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列，所述一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列位于一个或更多个啮齿动物Cλ编码序列上游。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中内源啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座因以下中的一种或更多种而缺失、失活或成为非功能性的：
a.缺失或突变全部内源啮齿动物Vκ基因区段编码序列；
b.缺失或突变全部内源啮齿动物Jκ基因区段编码序列；
c.缺失或突变内源啮齿动物Cκ编码序列；
d.缺失或突变Jκ基因区段与Cκ外显子之间的内含子中的剪接供体位点、嘧啶区(pyrimidine tract)或剪接受体位点；和
e.缺失、突变或破坏内源内含子κ增强子(iEκ)、3’增强子序列(3'Eκ)或其组合。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中内源啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变结构域的表达因以下中的一种或更多种而受抑制或失活：
a.缺失或突变全部内源啮齿动物Vλ基因区段；
b.缺失或突变全部内源啮齿动物Jλ基因区段；
c.缺失或突变全部内源啮齿动物Cλ编码序列；和
d.缺失或突变Jλ基因区段与Cλ外显子之间的内含子中的剪接供体位点、嘧啶区或剪接受体位点，或其组合。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中工程化免疫球蛋白基因座表达包含犬科动物可变结构域和啮齿动物恒定结构域的免疫球蛋白轻链。在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中工程化免疫球蛋白基因座表达包含犬科动物λ可变结构域和啮齿动物λ恒定结构域的免疫球蛋白轻链。在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中工程化免疫球蛋白基因座表达包含犬科动物κ可变结构域和啮齿动物κ恒定结构域的免疫球蛋白轻链。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中转基因啮齿动物或啮齿动物细胞的基因组包含含有犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列的工程化免疫球蛋白基因座。在一方面，犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列插入到啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座中。在一方面，犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中。在一方面，犬科动物Vκ和Jκ编码序列插入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链恒定区编码序列的上游。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中转基因啮齿动物或啮齿动物细胞的基因组包含工程化免疫球蛋白基因座，该工程化免疫球蛋白基因座包含插入到啮齿动物免疫球蛋白λ轻链基因座中的犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列。在一方面，犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列嵌入啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中。在一方面，转基因啮齿动物或啮齿动物细胞的基因组包含插入在犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列下游的啮齿动物免疫球蛋白κ轻链恒定区编码序列。在一方面，啮齿动物免疫球蛋白κ轻链恒定区插入在内源啮齿动物Cλ编码序列的上游。在一方面，啮齿动物免疫球蛋白κ轻链恒定区插入在内源啮齿动物Cλ2编码序列的上游。在一方面，内源啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变结构域的表达因以下中的一种或更多种而受抑制或失活：
a.缺失或突变全部内源啮齿动物Vλ基因区段编码序列；
b.缺失或突变全部内源啮齿动物Jλ基因区段编码序列；
c.缺失或突变全部内源Cλ编码序列；和
d.缺失或突变Jλ基因区段与Cλ外显子之间的内含子中的剪接供体位点、嘧啶区或剪接受体位点。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座包含啮齿动物内含子κ增强子(iEκ)和3’κ增强子(3'Eκ)调控序列。
在一方面，转基因啮齿动物或啮齿动物细胞还包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座，所述工程化部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座包含犬科动物免疫球蛋白重链可变区基因区段编码序列和啮齿动物免疫球蛋白重链基因座的非编码调控和支架序列。在一方面，工程化犬科动物免疫球蛋白重链基因座包含犬科动物VH、D和JH基因区段编码序列。在一方面，每个犬科动物/啮齿动物嵌合VH、D或JH基因区段包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白重链基因座的非编码调控和支架序列中的VH、D或JH编码序列。在一方面，重链支架序列被一个或两个功能性ADAM6基因间隔开。
在一方面，啮齿动物调控和支架序列包含一个或更多个增强子、启动子、剪接位点、内含子、重组信号序列或其组合。
在一方面，转基因啮齿动物或啮齿动物细胞的内源啮齿动物免疫球蛋白基因座已经失活。在一方面，转基因啮齿动物或啮齿动物细胞的内源啮齿动物免疫球蛋白基因座已经缺失并且被工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代。
在一方面，啮齿动物是小鼠或大鼠。在一方面，啮齿动物细胞是胚胎干(ES)细胞或早期胚胎的细胞。在一方面，啮齿动物细胞是小鼠或大鼠胚胎干(ES)细胞或者小鼠或大鼠早期胚胎的细胞。
在一方面，提供了从本文描述的转基因啮齿动物获得的B淋巴细胞谱系细胞，其中B细胞表达或能够表达包含犬科动物可变区和啮齿动物免疫球蛋白恒定区的嵌合免疫球蛋白重链或轻链。在一方面，提供了来源于从本文描述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞获得的B淋巴细胞谱系细胞的杂交瘤细胞或永生化细胞系。
在一方面，提供了由来自本文描述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞的细胞产生的抗体或其抗原结合部分。
在一方面，提供了来源于由本文描述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞产生的免疫球蛋白的VH、D或JH或VL或JL基因区段编码序列的核酸序列。在一方面，提供了一种用于产生包含部分犬科动物免疫球蛋白基因座的非犬科动物哺乳动物细胞的方法，所述方法包括：a)将两个或更多个重组酶靶向位点引入到非犬科动物哺乳动物宿主细胞的基因组中，并且将至少一个位点整合在包含内源免疫球蛋白可变区基因的基因组区域的上游并且将至少一个位点整合在下游，其中内源免疫球蛋白可变基因包含VH、D和JH基因区段，或者Vκ和Jκ基因区段，或者Vλ和Jλ基因区段，或者Vλ、Jλ和Cλ基因区段；和b)经由重组酶介导的盒交换(RMCE)将工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变基因座引入到非犬科动物哺乳动物宿主细胞中，所述工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变基因座包含犬科动物免疫球蛋白可变区基因编码序列和非编码调控或支架序列，所述非编码调控或支架序列对应于存在于非犬科动物哺乳动物宿主的内源免疫球蛋白可变区基因座中的非编码调控或支架序列。
在另一方面，方法还包括在步骤b之前使侧翼为两个外源引入的重组酶靶向位点的基因组区缺失。
在该方法的特定方面，提供了外源引入的工程化部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座，所述外源引入的工程化部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座包含犬科动物VH基因区段编码序列，并且还包含i)犬科动物D和JH基因区段编码序列和ii)犬科动物D基因区段上游的非编码调控或支架序列(前D序列，图1A)，该非编码调控或支架序列对应于存在于非犬科动物哺乳动物宿主的基因组中内源D基因区段上游的序列。在一方面，这些上游支架序列被非免疫球蛋白基因间隔开，所述非免疫球蛋白基因诸如雄性生育力所需的ADAM6A或ADAM6B(图1A)(Nishimura等人Developmental Biol.233(1):204-213(2011))。使用先前已经被引入到同一染色体上内源免疫球蛋白VH基因座的上游和内源JH基因座的下游的重组酶靶向位点将部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座引入到宿主细胞中。在其他方面，非编码调控或支架序列(至少部分地)来源于其他来源，例如，它们可以是合理设计的人工序列或其他未知功能的保守序列、为犬科动物和人工或其他设计序列的组合的序列，或者来自其他物种的序列。如本文使用的，“人工序列”是指不来源于遗传基因座处自然存在的序列的核酸序列。在一方面，非编码调控或支架序列来源于啮齿动物免疫球蛋白重链可变区基因座的非编码调控或支架序列。在一方面，非编码调控或支架序列与啮齿动物免疫球蛋白重链可变区基因座的非编码调控或支架序列具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或100％的序列同一性。在另一方面，非编码调控或支架序列是啮齿动物免疫球蛋白重链可变区非编码或支架序列。
在方法的又另一特定方面，引入的工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物免疫球蛋白VL基因区段编码序列，并且还包含i)犬科动物L链J基因区段编码序列和ii)非编码调控或支架序列，该非编码调控或支架序列对应于存在于非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组的内源L链基因座中的非编码调控或支架序列。在一方面，使用先前已经被引入到同一染色体上内源免疫球蛋白VL基因座的上游和内源J基因座的下游的重组酶靶向位点将工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座引入到宿主细胞中。
在该方法的一个更特定方面，提供了一种外源引入的工程化部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座，所述外源引入的工程化部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座包含犬科动物Vλ基因区段编码序列和犬科动物Jλ基因区段编码序列。在一方面，使用先前已经被引入到同一染色体上内源免疫球蛋白Vλ基因座的上游和内源Jλ基因座的下游的重组酶靶向位点将部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座引入到宿主细胞中。
在一方面，外源引入的工程化部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座包含犬科动物Vκ基因区段编码序列和犬科动物Jκ基因区段编码序列。在一方面，使用先前已经被引入到同一染色体上内源免疫球蛋白Vκ基因座的上游和内源Jκ基因座的下游的重组酶靶向位点将部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座引入到宿主细胞中。
在一方面，非编码调控或支架序列来源于啮齿动物λ免疫球蛋白轻链可变区基因座的非编码调控或支架序列。在一方面，非编码调控或支架序列与啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座的非编码调控或支架序列具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或100％的序列同一性。在另一方面，非编码调控或支架序列是啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区非编码或支架序列。
在一方面，非编码调控或支架序列来源于啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的非编码调控或支架序列。在一方面，非编码调控或支架序列与啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的非编码调控或支架序列具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或100％的序列同一性。在另一方面，非编码调控或支架序列是啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区非编码或支架序列。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座作为单个核酸合成，并且作为单个核酸区域引入到非犬科动物哺乳动物宿主细胞中。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座在两个或更多个连续区段中合成，并且作为离散区段引入至哺乳动物宿主细胞。在另一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座使用重组方法来产生，并且分离，然后引入到非犬科动物哺乳动物宿主细胞中。
在另一方面，提供了用于产生包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的非犬科动物哺乳动物细胞的方法，所述方法包括：a)将不能彼此重组的两个或更多个序列特异性重组位点引入到非犬科动物哺乳动物宿主细胞的基因组中，其中至少一个重组位点被引入内源免疫球蛋白可变区基因座的上游，而至少一个重组位点被引入同一染色体上内源免疫球蛋白可变区基因座的下游；b)提供包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的载体，该工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座具有i)犬科动物免疫球蛋白可变区基因编码序列和ii)基于宿主细胞基因组的内源免疫球蛋白可变区基因座的非编码调控或支架序列，其中部分犬科动物免疫球蛋白基因座侧翼为与位于a)的宿主细胞的内源免疫球蛋白可变区基因座侧翼相同的两个序列特异性重组位点；c)将步骤b)的载体和能够识别两个重组酶位点的位点特异性重组酶引入到宿主细胞中；d)允许a)的细胞的基因组与工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座之间发生重组事件，导致用工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座取代内源免疫球蛋白可变区基因座。
在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含VH免疫球蛋白基因区段编码序列，并且还包含i)犬科动物D和JH基因区段编码序列，ii)在内源地存在于非犬科动物哺乳动物宿主的基因组中的单独VH、D和JH基因区段的密码子周围的非编码调控或支架序列，以及iii)基于非犬科动物哺乳动物宿主细胞的内源基因组的前D序列。重组酶靶向位点被引入内源免疫球蛋白VH基因座的上游以及内源D和JH基因座的下游。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物，所述转基因啮齿动物具有缺失了啮齿动物内源免疫球蛋白可变基因座的基因组，并且其中缺失的啮齿动物内源免疫球蛋白可变基因座已经被工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代，该工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物免疫球蛋白可变基因编码序列和基于啮齿动物内源免疫球蛋白可变基因座的非编码调控或支架序列，其中转基因啮齿动物的工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座是功能性的并且表达具有犬科动物可变结构域和啮齿动物恒定结构域的免疫球蛋白链。在一些方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物VH、D和JH编码序列，并且在一些方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物VL和JL编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vλ和Jλ编码序列。在另一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vκ和Jκ编码序列。
一些方面提供了来自转基因啮齿动物的B淋巴细胞谱系细胞、包含从B淋巴细胞谱系细胞获得的犬科动物可变结构域和啮齿动物恒定结构域的部分或整个免疫球蛋白分子、来源于B淋巴细胞谱系细胞的杂交瘤细胞、包含从杂交瘤细胞获得的犬科动物可变结构域和啮齿动物恒定结构域的部分或整个免疫球蛋白分子、包含从杂交瘤细胞获得的免疫球蛋白分子来源的犬科动物可变结构域的部分或整个免疫球蛋白分子、来源于B淋巴细胞谱系细胞的永生化细胞、包含从永生化细胞获得的犬科动物可变结构域和啮齿动物恒定结构域的部分或整个免疫球蛋白分子、包含从永生化细胞获得的免疫球蛋白分子来源的犬科动物可变结构域的部分或整个免疫球蛋白分子。
在一方面，提供了其中工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物VL和JL编码序列的转基因啮齿动物，以及其中工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物VH、D和JH或VL和JL编码序列的转基因啮齿动物。在一些方面，啮齿动物是小鼠。在一些方面，非编码调控序列包括以下内源宿主来源的序列：每个V基因区段编码序列之前的启动子、内含子、剪接位点和用于V(D)J重组的重组信号序列；在其他方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座还包含以下内源宿主来源的序列中的一个或更多个：ADAM6A或ADAM6B基因、Pax-5活化的基因间重复(PAIR)元件或来自重链基因间控制区1的CTCF结合位点。
在一方面，用于在以上每种方法中使用的非犬科动物哺乳动物细胞是哺乳动物细胞，例如哺乳动物胚胎干(ES)细胞。在一方面，哺乳动物细胞是早期胚胎的细胞。在一方面，非犬科动物哺乳动物细胞是啮齿动物细胞。在一方面，非犬科动物哺乳动物细胞是小鼠细胞。
在细胞已经经历内源免疫球蛋白可变区基因座被引入的部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座取代后，就可以选择和分离细胞。在一方面，细胞是非犬科动物哺乳动物ES细胞，例如，啮齿动物ES细胞，并且然后利用至少一个分离的ES细胞克隆来产生表达工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座的转基因非犬科动物哺乳动物。
在一方面，提供了一种用于产生转基因啮齿动物的方法，所述方法包括：a)将用于位点特异性重组酶的至少一个靶位点整合在啮齿动物细胞的基因组中内源免疫球蛋白可变基因座上游并且将用于位点特异性重组酶的至少一个靶位点整合在内源免疫球蛋白可变基因座下游，其中内源免疫球蛋白可变基因座包含VH、D和JH基因区段，或者Vκ和Jκ基因区段，或者Vλ和Jλ基因区段，或者Vλ、Jλ和Cλ基因区段；b)提供包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的载体，所述工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含嵌合犬科动物免疫球蛋白基因区段，其中每个部分犬科动物免疫球蛋白基因区段包含犬科动物免疫球蛋白可变基因编码序列和啮齿动物非编码调控或支架序列，其中部分犬科动物免疫球蛋白可变基因座侧翼为用于位点特异性重组酶的靶位点，其中靶位点能够与引入到啮齿动物细胞中的靶位点重组；c)将载体和能够识别靶位点的位点特异性重组酶引入到细胞中；d)允许细胞基因组与工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座之间发生重组事件，导致内源免疫球蛋白可变基因座被工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代；e)选择包含步骤d)中产生的工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变基因座的细胞；并且利用细胞产生包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变基因座的转基因啮齿动物。在一些方面，细胞是啮齿动物胚胎干(ES)细胞，并且在一些方面，细胞是小鼠胚胎干(ES)细胞。该方法的一些方面还包括在步骤a)之后和步骤b)之前，通过引入识别第一组靶位点的重组酶来使内源免疫球蛋白可变基因座缺失的步骤，其中缺失步骤在啮齿动物细胞基因组中原位(in place)留下不能彼此重组的至少一组靶位点。在一些方面，载体包含犬科动物VH、D和JH编码序列，并且在一些方面，载体包含犬科动物VL和JL编码序列。在一些方面，载体还包含啮齿动物启动子、内含子、剪接位点和可变区基因区段的重组信号序列。
在另一方面，提供了一种用于产生包含外源引入的工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座的转基因非犬科动物哺乳动物的方法，所述方法包括：a)将一个或更多个序列特异性重组位点引入到非犬科动物哺乳动物宿主细胞的基因组中，该一个或更多个序列特异性重组位点位于内源免疫球蛋白可变区基因座的侧翼并且不能彼此重组；b)提供包含部分犬科动物免疫球蛋白基因座的载体，该部分犬科动物免疫球蛋白基因座具有i)犬科动物可变区基因编码序列和ii)基于内源宿主免疫球蛋白可变区基因座的非编码调控或支架序列，其中编码和非编码调控或支架序列的侧翼为与引入a)的宿主细胞基因组的那些相同的序列特异性重组位点；c)将步骤b)的载体和能够识别一组重组酶位点的位点特异性重组酶引入到细胞中；d)允许a)的细胞的基因组与工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座之间发生重组事件，导致内源免疫球蛋白可变区基因座被部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代；e)选择包含部分犬科动物免疫球蛋白基因座的细胞；并且f)利用细胞产生包含部分犬科动物免疫球蛋白基因座的转基因动物。
在特定方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物VH、D和JH基因区段编码序列以及存在于非犬科动物哺乳动物宿主的内源基因组中的非编码调控和支架前D序列(包括实现生育力的基因(fertility-enabling gene))。在一方面，然后将序列特异性重组位点引入内源免疫球蛋白VH基因区段的上游和内源JH基因区段的下游。
在一方面，提供了一种用于产生包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的转基因非犬科动物动物的方法，所述方法包括：a)提供具有包含两组序列特异性重组位点的基因组的非犬科动物哺乳动物细胞，所述两组序列特异性重组位点不能彼此重组并且位于宿主基因组的内源免疫球蛋白可变区基因座的一部分的侧翼；b)通过引入识别第一组序列特异性重组位点的重组酶来使宿主基因组的内源免疫球蛋白基因座的一部分缺失，其中基因组中的这样的缺失保留第二组序列特异性重组位点；c)提供包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座的载体，该工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座具有犬科动物编码序列和基于内源免疫球蛋白可变区基因座的非编码调控或支架序列，其中编码和非编码调控或支架序列的侧翼为第二组序列特异性重组位点；d)将步骤c)的载体和能够识别第二组序列特异性重组位点的位点特异性重组酶引入到细胞中；e)允许细胞基因组与部分犬科动物免疫球蛋白基因座之间发生重组事件，导致内源免疫球蛋白基因座被工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变基因座取代；f)选择包含部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座的细胞；并且g)利用细胞产生包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座的转基因动物。
在一方面，提供了一种用于产生包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的转基因非犬科动物哺乳动物的方法，所述方法包括：a)提供具有包含两个序列特异性重组位点的基因组的非犬科动物哺乳动物胚胎干ES细胞，所述两个序列特异性重组位点不能彼此重组并且位于内源免疫球蛋白可变区基因座的侧翼；b)提供包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的载体，所述工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物免疫球蛋白可变基因编码序列和基于内源免疫球蛋白可变区基因座的非编码调控或支架序列，其中部分犬科动物免疫球蛋白基因座的侧翼为位于ES细胞中内源免疫球蛋白可变区基因座侧翼的相同的两个序列特异性重组位点；c)使ES细胞和载体与能够在适当条件下识别两个重组酶位点的位点特异性重组酶接触，以促进重组事件，该重组事件导致在ES细胞中内源免疫球蛋白可变区基因座被工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座取代；d)选择包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的ES细胞；并且e)利用细胞产生包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的转基因动物。
在一个方面，转基因非犬科动物哺乳动物是啮齿动物，例如，小鼠或大鼠。
在一方面，提供了表达引入的免疫球蛋白可变区基因座的非犬科动物哺乳动物细胞和非犬科动物转基因哺乳动物，，该免疫球蛋白可变区基因座具有犬科动物可变区基因编码序列和基于宿主基因组的内源非犬科动物免疫球蛋白基因座的非编码调控或支架序列，其中非犬科动物哺乳动物细胞和转基因动物表达具有与其各自的非犬科动物哺乳动物细胞或动物天然的恒定区结合的完全犬科动物H链或L链可变结构域的嵌合抗体。
此外，提供了来自转基因动物的B细胞，所述B细胞能够表达具有完全犬科动物可变序列的部分犬科动物抗体，其中这样的B细胞是永生化的，以提供对特定抗原有特异性的单克隆抗体的来源。在一方面，提供了来自转基因动物的B淋巴细胞谱系细胞，所述B淋巴细胞谱系细胞能够表达包含犬科动物可变区和啮齿动物恒定区的部分犬科动物重链或轻链抗体。
在一方面，提供了从B细胞克隆的犬科动物免疫球蛋白可变区基因序列，用于在产生或优化用于诊断、预防和治疗用途的抗体中使用。
在一方面，提供了杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞能够产生具有完全犬科动物免疫球蛋白可变区序列的部分犬科动物单克隆抗体。在一方面，提供了B淋巴细胞谱系的杂交瘤或永生化细胞系。
在另一方面，提供了由本文描述的转基因动物或细胞产生的抗体或其抗原结合部分。在另一方面，提供了包含来源于由本文描述的转基因动物或细胞产生的抗体的可变重链或可变轻链序列的抗体或其抗原结合部分。
在一方面，提供了用于确定来自产生单克隆抗体的杂交瘤或原代浆细胞或B细胞的H链和L链免疫球蛋白可变结构域的序列并且将VH和VL序列与犬科动物恒定区组合的方法，用于产生在注射到犬中时无免疫原性的完全犬科动物抗体。
下文更详细地描述这些以及其他方面、目的和特征。
附图简述
图1A是位于12号染色体端粒末端处的内源小鼠IGH基因座的示意图。
图1B是位于16号染色体上的内源小鼠IGL基因座的示意图。
图1C是位于6号染色体上的内源小鼠IGK基因座的示意图。
图2是图示通过同源重组将第一组序列特异性重组位点引入到非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组中的H链可变区基因座上游区域中的靶向策略的示意图。
图3是图示通过同源重组将第一组序列特异性重组位点引入到非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组中的H链可变区基因座上游区域中的靶向策略的另一示意图。
图4是图示经由同源靶向载体将第二组序列特异性重组位点引入到非犬科动物哺乳动物细胞基因组中的H链可变区基因座下游区域中的示意图。
图5是图示使内源免疫球蛋白H链可变区基因座从非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组中缺失的示意图。
图6是图示RMCE策略的示意图，该RMCE策略将工程化部分犬科动物免疫球蛋白H链基因座引入到先前已经被修饰为缺失内源免疫球蛋白H链可变区基因座的非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组中。
图7是图示RMCE策略的示意图，该RMCE策略将包含另外的调控序列的工程化部分犬科动物免疫球蛋白H链基因座引入到先前已经被修饰为缺失内源免疫球蛋白H链可变区基因的非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组中。
图8是图示将工程化部分犬科动物免疫球蛋白H链可变区基因座引入到小鼠基因组的内源免疫球蛋白H链基因座的示意图。
图9是图示将工程化部分犬科动物免疫球蛋白κL链可变区基因座引入到小鼠基因组的内源免疫球蛋白κL链基因座的示意图。
图10是图示将工程化部分犬科动物免疫球蛋白λL链可变区基因座引入到小鼠基因组的内源免疫球蛋白λL链基因座的示意图。
图11是图示经由RMCE引入包含犬科动物VH微基因座(minilocus)的工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的示意图。
图12A是位于8号染色体上的内源犬科动物IGH基因座的示意图，显示了整个Igh基因座(1201)和IGHC区(1202)的展开图。
图12B是位于26号染色体上的内源犬科动物IGL基因座的示意图。
图12C是位于17号染色体上的内源犬科动物IGK基因座的示意图。箭头指示Vκ基因区段的转录方向。在天然犬科动物IGK基因座(1220)中，一些Vκ基因区段位于Cκ外显子的下游。在本文描述的部分犬科动物Igκ基因座(1221)中，全部Vκ基因区段编码序列位于Cκ外显子的上游，并且与Cκ外显子处于相同的转录方向(参见实施例4)。
图13是图示工程化部分犬科动物免疫球蛋白轻链可变区基因座的示意图，其中一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列插入到一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列上游的啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座中，所述一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列位于一个或更多个啮齿动物Cλ区编码序列的上游。
图14是图示引入工程化部分犬科动物轻链可变区基因座的示意图，其中一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列插入到Jλ-Cλ串联盒阵列上游的啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座中，其中Jλ来自犬科动物来源，并且Cλ来自小鼠来源，为Cλ1、Cλ2或Cλ3。
图15示出了用编码人类CD4(hCD4)、犬科动物IGHV3-5-小鼠Cμ膜形式IgMb同种异型以及附接至小鼠Cκ和Cλ的各种组合的犬科动物IGLV3-28/Jλ6(1501)或附接至小鼠Cκ和Cλ的各种组合的犬科动物IGKV2-5/Jκ1(1502)的表达载体转染的293T/17细胞的流式细胞术谱。已经对细胞的细胞表面hCD4(1509)或小鼠IgMb(1510)染色。
图16示出了用编码人类CD4(hCD4)、犬科动物IGHV3-5-小鼠Cμ膜形式IgMb同种异型以及附接至小鼠Cκ和Cλ的各种组合的犬科动物IGLV3-28/Jλ6(1601)或附接至小鼠Cκ和Cλ的各种组合的犬科动物IGKV2-5/Jκ1(1602)的表达载体转染的293T/17细胞的流式细胞术谱。已经对细胞的细胞表面小鼠λLC(1601)或小鼠κLC(1602)染色。
图17示出了用编码人类CD4(hCD4)、犬科动物IGHV4-1-小鼠Cμ膜形式IgMb同种异型以及附接至小鼠Cκ和Cλ的各种组合的犬科动物IGLV3-28/Jλ6(1701)或附接至小鼠Cκ和Cλ的各种组合的犬科动物IGKV2-5/Jκ1(1702)的表达载体转染的293T/17细胞的流式细胞术谱。已经对细胞的细胞表面hCD4(1709)或小鼠IgMb(1710)染色。
图18示出了用编码人类CD4(hCD4)、犬科动物IGHV3-19-小鼠Cμ膜形式IgMb同种异型以及附接至小鼠Cκ和Cλ的各种组合的犬科动物IGLV3-28/Jλ6(1801)或附接至小鼠Cκ和Cλ的各种组合的犬科动物IGKV2-5/Jκ1(1802)的表达载体转染的293T/17细胞的流式细胞术谱。已经对细胞的细胞表面hCD4(1809)或小鼠IgMb(1810)染色。
图19A示出了培养物上清液的蛋白印迹，并且图19B示出了用编码附接至小鼠Cγ2α的犬科动物IGHV3-5(1901)、附接至小鼠Cγ2α的IGHV3-19(1902)或附接至小鼠Cγ2α的IGHV4-1(1903)和附接至小鼠Cκ(1907)和Cλ(1908-1910)的各种组合的犬科动物IGLV3-28/Jλ6的表达载体转染的393T/17细胞的细胞裂解物的蛋白印迹。将样品在还原条件下电泳，并且将印迹用抗小鼠IgG2a抗体探测。
图20A示出了装载对照Myc的用于来自图18的细胞裂解物的蛋白印迹，并且图20B示出了装载对照GAPDH的用于来自图18的细胞裂解物的蛋白印迹。
图21A示出了培养物上清液(非还原条件)的蛋白印迹，并且图21B示出了用编码附接至小鼠Cκ(2102)和Cλ(2103,2104)的各种组合的犬科动物IGHV3-5小鼠Cγ2α和犬科动物IGLV3-28/Jλ6的表达载体转染或用编码附接至小鼠Cκ(2105)和Cλ(2106,2107)的各种组合的犬科动物IGHV3-5-小鼠Cγ2α和犬科动物IGKV2-5/Jκ1的表达载体转染的393T/17细胞的细胞裂解物(还原条件)的蛋白印迹。将图21A中的印迹用针对小鼠IgG2a的抗体探测，并且将图21B中的印迹用针对小鼠κLC的抗体探测。
图22示出了用编码人类CD4(hCD4)、附接至小鼠Cδ膜形式的犬科动物IGHV3-5和附接至小鼠Cκ(2201)的犬科动物IGKV2-5/Jκ1或附接至小鼠Cλ1、Cλ2或Cλ3(2202-2204)的犬科动物IGLV3-28/Jλ6的表达载体转染的293T/17细胞的流式细胞术谱。已经对细胞的细胞表面hCD4(2205)、小鼠CD79b(2206)、小鼠IgD(2207)、小鼠κLC(2208)或小鼠λLC(2209)染色。
图23示出了用编码人类CD4(hCD4)、附接至小鼠Cδ膜形式的犬科动物IGHV3-19和附接至小鼠Cκ(2301)的犬科动物IGKV2-5/Jκ1或附接至小鼠Cλ1、Cλ2或Cλ3(2302-2304)的犬科动物IGLV3-28/Jλ6的表达载体转染的293T/17细胞的流式细胞术谱。已经对细胞的细胞表面hCD4(2205)、小鼠CD79b(2206)、小鼠IgD(2207)、小鼠κLC(2208)或小鼠λLC(2209)染色。
图24示出了用编码人类CD4(hCD4)、附接至小鼠Cδ膜形式的犬科动物IGHV4-1和附接至小鼠Cκ(2401)的犬科动物IGKV2-5/Jκ1或附接至小鼠Cλ1、Cλ2或Cλ3(2402-2404)的犬科动物IGLV3-28/Jλ6的表达载体转染的293T/17细胞的流式细胞术谱。已经对细胞的细胞表面hCD4(2405)、小鼠CD79b(2406)、小鼠IgD(2407)、小鼠κLC(2408)或小鼠λLC(2409)染色。
定义
本文使用的术语意在具有如由本领域普通技术人员理解的平白且普通的含义。以下定义意图帮助读者理解本发明，但并不意图改变或以其他方式限制这样的术语的含义，除非特别地指示。
如本文使用的术语“基因座”是指分别内源地存在于基因组中或外源地(或即将)引入到基因组中的染色体区段或核酸序列。例如，免疫球蛋白基因座可以包括支持免疫球蛋白H链或L链多肽的表达的部分或全部基因(即V、D、J基因区段以及恒定区基因)和间插序列(即内含子、增强子等)。因此，基因座(例如，免疫球蛋白重链可变区基因座)可以指更大基因座的特定部分(例如，包括VH、DH和JH基因区段的免疫球蛋白H链基因座的一部分)。类似地，免疫球蛋白轻链可变区基因座可以指更大基因座的特定部分(例如，包括VL和JL基因区段的免疫球蛋白L链基因座的一部分)。如本文使用的术语“免疫球蛋白可变区基因”是指编码免疫球蛋白H链或L链可变结构域的一部分的V、D或J基因区段。如本文使用的术语“免疫球蛋白可变区基因座”是指包含V、D或J基因区段簇的染色体区段或核酸链的一部分或整体，并且可以包括非编码调控序列或支架序列。
如本文使用的术语“基因区段”是指编码免疫球蛋白分子的重链或轻链可变结构域的一部分的核酸序列。基因区段可以包括编码序列和非编码序列。基因区段的编码序列是可以翻译为多肽诸如前导肽和重链或轻链可变结构域的N-末端部分的核酸序列。基因区段的非编码序列是位于编码序列侧翼的序列，其可能包括启动子、5’非翻译序列、间插前导肽编码序列的内含子、一个或更多个重组信号序列(RSS)和剪接位点。免疫球蛋白重链(IGH)基因座中的基因区段包括VH、D和JH基因区段(也分别称为IGHV、IGHD和IGHJ)。免疫球蛋白κ和λ轻链基因座中的轻链可变区基因区段可以称为VL和JL基因区段。在κ轻链中，VL和JL基因区段可以称为Vκ和Jκ基因区段或IGKV和IGKJ。类似地，在λ轻链中，VL和JL基因区段可以称为Vλ和Jλ基因区段或IGLV和IGLJ。
重链恒定区可以称为CH或IGHC。编码IgM、IgD、IgG1-4、IgE或IgA的CH区外显子可以分别称为Cμ、Cδ、Cγ1-4、Cε或Cα。类似地，免疫球蛋白κ或λ恒定区可以分别称为Cκ或Cλ区，以及IGKC或IGLC。
如本文使用的“部分犬科动物”是指包含与犬科动物和非犬科动物哺乳动物宿主二者的给定基因座中发现的序列对应的序列的核酸链，或其表达的蛋白和RNA产物。如本文使用的“部分犬科动物”还指包含来自犬科动物和非犬科动物哺乳动物(例如啮齿动物)二者的核酸序列的动物。在一方面，部分犬科动物核酸具有犬科动物免疫球蛋白H链或L链可变区基因区段的编码序列和基于非犬科动物哺乳动物的内源免疫球蛋白基因座的非编码调控或支架序列的序列。
在提及来自非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组的内源非编码调控或支架序列使用时，术语“基于”是指存在于对应的哺乳动物宿主细胞基因组内源基因座中的非编码调控或支架序列。在一方面，术语“基于”意指存在于部分犬科动物免疫球蛋白基因座中的非编码调控或支架序列与宿主哺乳动物内源基因座的非编码调控或支架序列共有相对高度的同源性。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座中的非编码序列与宿主哺乳动物内源基因座中发现的对应非编码序列共有至少约80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同源性。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座中的非编码序列从宿主哺乳动物的免疫球蛋白基因座保留。在一方面，犬科动物编码序列嵌入到宿主哺乳动物免疫球蛋白基因座的非调控序列或支架序列中。在一方面，宿主哺乳动物是啮齿动物，诸如大鼠或小鼠。
“非编码调控序列”是指已知对于以下至关重要的序列：(i)V(D)J重组、(ii)同种型转换、(iii)V(D)J重组后全长免疫球蛋白H链或L链的正确表达以及(iv)可变剪接以产生例如免疫球蛋白H链的膜和分泌形式。“非编码调控序列”可以还包括以下内源来源的序列：增强子和基因座控制元件，诸如CTCF和PAIR序列(Proudhon，等人，Adv.Immunol.128:123-182(2015))；每个内源V基因区段之前的启动子；剪接位点；内含子；位于每个V、D或J基因区段侧翼的重组信号序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座的“非编码调控序列”与非犬科动物哺乳动物宿主细胞的靶向内源免疫球蛋白基因座中发现的对应非编码序列共有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以及高达100％的同源性。
“支架序列”是指间插存在于宿主细胞基因组内源免疫球蛋白基因座中的基因区段的序列。在某些方面，支架序列被对于功能性非免疫球蛋白基因表达至关重要的序列，例如，ADAM6A或ADAM6B间隔开。在某些方面，支架序列来源于(至少部分地来源于)其他来源，-例如，它们可以是合理设计的或人工的序列、存在于犬科动物基因组免疫球蛋白基因座中的序列、存在于另一物种免疫球蛋白基因座中的序列或其组合。应当理解，措辞“非编码调控序列或支架序列”在含义上是包括性的(即，指存在于给定基因座中的非编码调控序列和支架序列二者)。
术语“同源性靶向载体”是指用于通过同源重组修饰哺乳动物宿主细胞内源基因组的核酸序列；这样的核酸序列可以包括(i)与位于存在于非犬科动物哺乳动物宿主基因组中的待修饰基因座侧翼的对应内源序列具有显著同源性的靶向序列，(ii)至少一个序列特异性重组位点，(iii)非编码调控或支架序列，和(iv)任选地一个或更多个选择性标志物基因。因此，同源性靶向载体可以用于将序列特异性重组位点引入到宿主细胞基因组的特定区域。
“位点特异性重组”或“序列特异性重组”是指两个相容重组序列(也称为“序列特异性重组位点”或“位点特异性重组序列”)之间的DNA重排过程，包括以下三种事件中的任何一种：a)侧翼为重组位点的预选核酸的缺失；b)侧翼为重组位点的预选核酸的核苷酸序列的倒位，和c)位于不同核酸链上的重组位点附近的核酸序列的相互交换。应当理解，核酸区段的这种相互交换可以用作将外源核酸序列引入到宿主细胞基因组中的靶向策略。
术语“靶向序列”是指与细胞基因组中的位于待修饰的免疫球蛋白基因座区域的侧翼或与之相邻的DNA序列同源的序列。侧翼或相邻序列可以位于基因座本身中，或者在宿主细胞基因组中的编码序列的上游或下游。将靶向序列插入到用于转染例如ES细胞的重组DNA载体中，使得被插入到宿主细胞基因组中的序列(诸如重组位点的序列)的侧翼为载体的靶向序列。
如本文使用的术语“位点特异性靶向载体”是指包含编码序列特异性重组位点、工程化部分犬科动物基因座和任选地选择性标志物基因的核酸的载体，该载体用于使用重组酶介导的位点特异性重组来修饰宿主中的内源免疫球蛋白基因座。靶向载体的重组位点适用于与已经被插入到宿主细胞的基因组序列中(例如，经由同源靶向载体)与待修饰的免疫球蛋白基因座相邻的另一个对应的重组位点进行位点特异性重组。将工程化部分犬科动物序列整合到免疫球蛋白基因座中的重组位点导致内源基因座被外源引入的部分犬科动物区域取代。
本文中使用术语“转基因”来描述已经或将要被人工插入到细胞的基因组并且特别地哺乳动物宿主动物的细胞的基因组中的遗传物质。如本文使用的术语“转基因”是指部分犬科动物核酸，例如，工程化表达构建体或靶向载体形式的部分犬科动物核酸。
“转基因动物”是指具有作为染色体外元件存在于其细胞的一部分中或稳定整合到其种系DNA中(即，在其大部分或全部细胞的基因组序列中)的外源核酸序列的非犬科动物的动物，通常为哺乳动物。在一方面，根据本领域熟知的方法，通过对例如宿主动物的胚胎或胚胎干细胞的遗传操纵，将部分犬科动物核酸引入到这样的转基因动物的种系中。
“载体”包括无论是否自我复制，均可以用于转化或转染细胞的质粒和病毒以及任何DNA或RNA分子。
注意，除非上下文另外清楚指示，如本文和所附的权利要求书中使用的，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”包括复数指代物。因此，例如，提及“基因座”指一个或更多个基因座，并且提及“方法”包括提及本领域技术人员已知的等同步骤和方法，等等。
如本文使用的，术语“或”可以意指“和/或”，除非明确指示仅指替代方案或者替代方案是互斥的。术语“包括/包含(including)”、“包括/包含(includes)”和“包括/包含(included)”不是限制性的。
除非另外定义，本文使用的全部技术和科学术语具有与本发明所属领域内的普通技术人员通常理解的相同含义。本文提及的全部出版物出于描述和公开可以与本文描述的发明结合使用的装置、制剂和方法的目的通过引用并入。
在提供值的范围情况下，应理解，在该范围的上限值和下限值之间的每一个中间值和该规定的范围内的任何其他规定的值或中间值被包括在本发明内。这些较小的范围的上限值和下限值可以独立地被包括在较小的范围内，并且也被包括在本发明内，受限于规定的范围内的任何特定地排除的限值。在规定的范围包含限值中的一个或两个时，排除那些所包括的限值中的一个或两个的范围也被包括在本发明内。
除非另外指出，本文描述的技术的实践可以采用有机化学、聚合物技术、分子生物学(包含重组技术)、细胞生物学、生物化学和测序技术的常规技术和描述，这些都在本领域的技术人员的技术内。这样常规的技术包括聚合物阵列合成、多核苷酸的杂交和连接、聚合酶链式反应和使用标记物的杂交检测。合适的技术的具体说明可以通过参考本文的实施例获得。然而，当然，也可以使用其他等同的常规程序。这样的常规技术和描述可以见于标准实验室手册诸如以下：Green，等人编著(1999),Genome Analysis:A Laboratory ManualSeries(卷I-IV)；Weiner,Gabriel,Stephens，编著(2007),Genetic Variation:ALaboratory Manual；Dieffenbach和Veksler，编著(2007),PCR Primer:A LaboratoryManual；Bowtell和Sambrook(2003),DNA Microarrays:A Molecular Cloning Manual；Mount(2004),Bioinformatics:Sequence and Genome Analysis；Sambrook和Russell(2006),Condensed Protocols from Molecular Cloning:ALaboratory Manual；以及Sambrook和Russell(2002),Molecular Cloning:A Laboratory Manual(全部来自ColdSpring Harbor Laboratory Press)；Stryer,L.(1995)Biochemistry(第4版)W.H.Freeman,New York N.Y.；Gait,"Oligonucleotide Synthesis:APracticalApproach"1984,IRL Press,London；Nelson和Cox(2000),Lehninger,Principles ofBiochemistry，第3版,W.H.Freeman Pub.,New York,N.Y.；以及Berg等人(2002)Biochemistry,第5版,W.H.Freeman Pub.,New York,N.Y.，全部这些文献出于全部目的通过引用以其整体并入本文。
详细描述
在以下的描述中，阐述了许多具体细节，以提供对本发明的更充分理解。然而，对本领域技术人员将明显的是，可以在没有一个或更多个这些具体细节的情况下，实践本发明。在其他情况下，为了避免使本发明含混不清，没有描述本领域技术人员熟知的特征和熟知的程序。
本文描述了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞具有包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白重链或轻链基因座的基因组。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座包含一个或更多个犬科动物免疫球蛋白重链可变区基因区段。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座包含一个或更多个犬科动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因区段。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座包含一个或更多个犬科动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因区段。
在一方面，提供了非犬科动物哺乳动物细胞，所述非犬科动物哺乳动物细胞包含外源引入的工程化部分犬科动物核酸序列，该外源引入的工程化部分犬科动物核酸序列包含犬科动物可变区的编码序列和存在于哺乳动物宿主基因组免疫球蛋白基因座中的非编码调控或支架序列，例如在宿主哺乳动物是小鼠时为小鼠基因组非编码序列。在一方面，犬科动物可变区基因区段的一个或更多个编码序列嵌入对应于哺乳动物宿主基因组中免疫球蛋白基因座的那些序列的非编码调控或支架序列中。在一方面，犬科动物可变区基因区段的编码序列嵌入啮齿动物或小鼠免疫球蛋白基因座的非编码调控或支架序列中。
在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座是合成的，并且包含处于内源宿主调控元件控制下的犬科动物VH、D或JH或者VL或JL基因区段编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含嵌入对应于哺乳动物宿主基因组中免疫球蛋白基因座的那些序列的非编码调控或支架序列中的犬科动物VH、D或JH或者VL或JL基因区段编码序列。
还提供了用于产生转基因啮齿动物或啮齿动物ES细胞的方法，所述转基因啮齿动物或啮齿动物ES细胞包含外源引入的工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座，其中所得转基因啮齿动物能够产生的包含λ轻链的免疫球蛋白比包含κ轻链的免疫球蛋白更多。
在产生能够产生抗原特异性犬科动物抗体的非犬科动物哺乳动物诸如转基因小鼠或大鼠时，存在许多挑战，这些挑战通过本文描述的构建体和方法得以解决，包括但不限于：
1.如何在优先使用90％κ轻链的生物体诸如小鼠或大鼠中获得90:10的λ:κ轻链使用比例；
2.在小鼠λ基因座仅包含3个功能性Vλ基因区段时，小鼠B细胞是否能够表达大量的犬Vλ基因区段(犬λ基因座包含至少70个功能性、独特的Vλ基因区段)；
3.鉴于小鼠与犬的λ轻链基因座之间结构的差异，如何改进犬科动物Vλ在非犬科动物哺乳动物(诸如小鼠)中的表达和使用。
a.小鼠λ轻链基因座包含2簇Vλ基因区段、Jλ基因区段和Cλ外显子：
i.Vλ2 -Vλ3 -Jλ2 -cλ2
ii.Vλ1 -Jλ3 -Cλ3 -Jλ1 -Cλ1 ；和
b.犬λ基因座在Jλ-Cλ簇上游包含串联Vλ基因区段。
4.鉴于犬科动物IgD是非功能性的并且IgM和IgD在小鼠和大鼠B细胞中以可变剪接形式共表达的事实，如果小鼠IgD与犬VH表达，那么小鼠B细胞是否能够正常发育。
小鼠和犬中的免疫球蛋白基因座
在体液免疫系统中，各异抗体的库通过称为V(D)J重组的过程，由IGH链和IGL链基因座的组合和连接多样性产生。在正发育的B细胞中，发生的第一重组事件是在重链基因座的一个D与一个JH基因区段之间，并且这两个基因区段之间的DNA缺失。这种D-JH重组之后是来自新形成的DJH复合物上游区域的一个VH基因区段的连接，形成重排的VHDJH外显子。新产生的VHDJH外显子的的经重组的VH与D基因区段之间的全部其他序列都从个体B细胞的基因组缺失。该重排的外显子最终在B细胞表面上表达为H链多肽的可变区，该H链多肽的可变区与L链多肽缔合以形成B细胞受体(BCR)。
小鼠中的轻链库被认为由基因重排的顺序形成(shaped)。两条染色体上的IGK轻链基因座被认为首先经历Vκ-Jκ重排，然后任一条染色体上的IGL轻链基因座变得接受Vλ-Jλ重组。如果最初的κ重排是非有效的，可以在被称为受体编辑的过程中进行另外轮的二次重排(Collins和Watson.(2018)Immunoglobulin light chain gene rearrangements,receptor editing and the development of a self-tolerant antibodyrepertoire.Front.Immunol.9:2249)。κ链基因座的连续重排过程可以在一条染色体上继续，直到重组的全部可能性都耗尽。然后重组会在第二条κ染色体上进行。在多轮重排之后未能在第二条染色体上产生有效重排之后，将是在λ基因座上的重排(Collins和Watson(2018)Immunoglobulin light chain gene rearrangements,receptor editing and thedevelopment of a self-tolerant antibody repertoire.Front.Immunol.9:2249)。
这种轻链重排的优先顺序被认为在小鼠中产生>90％κ和<10％λ的轻链库。然而，犬免疫系统中的免疫球蛋白以λ轻链使用为主，据估计，其为至少90％λ至<10％κ(Arun等人(1996)Immunohistochemical examination of light-chain expression(λ/κratio)incanine,feline,equine,bovine and porcine plasma cells.Zentralbl VeterinarmedA.43(9):573-6)。
鼠和犬科动物Ig基因座在它们包含的特征数量以及它们的编码区如何通过V(D)J重排而多样化方面高度复杂；然而，这种复杂性并没有扩展至每个可变区基因区段结构的基本细节。V、D和J基因区段在其组成和组织方面高度均匀。例如，V基因区段具有在免疫球蛋白基因座中以基本上不变的顺序方式排列的以下特征：短转录启动子区(长度<600bp)，编码5’UTR和抗体链的大部分信号肽的外显子；内含子；编码抗体链信号肽的一小部分和抗体可变结构域的大部分的外显子，以及V(D)J重排所必需的3’重组信号序列。类似地，D基因区段具有以下必要且不变的特征：5’重组信号序列、编码区和3’重组信号序列。J基因区段具有以下必要且不变的特征：5’重组信号序列、编码区和3’剪接供体序列。
犬科动物基因组VH区包括定位至犬科动物8号染色体的1.46Mb区的大约39个功能性VH、6个功能性D和5个功能性JH基因区段。还存在许多VH假基因和一个JH基因区段(IGHJ1)和一个D基因区段(IGHD5)，它们因为其RSS中的非典型七聚体被认为是非功能的。(这样的基因区段被称为开放阅读框(ORF))。图12A提供了内源犬科动物IGH基因座(1201)的示意图以及IGHC区域(1202)的展开视图。包括VH(1203)、D(1204)和JH(1205)基因区段的犬科动物免疫球蛋白重链可变区基因座具有与恒定区基因(1206)在相同转录方向的全部功能性基因，其中两个假基因(IGHV3-4和IGHV1-4-1)处于反向转录方向(未示出)。转录增强子(1207)和μ转换区(1208)位于JH-Cμ内含子中。参见，Martin等人(2018)Comprehensiveannotation and evolutionary insights into the canine(Canis lupus familiaris)antigen receptor loci.Immunogenetics.70:223-236。在IGHC基因中，Cδ(1210)被认为是非功能性的。此外，尽管已分离出被鉴定为编码犬科动物IgG1(1212)、IgG2(1213)、IgG3(1211)和IgG4(1214)的cDNA克隆(Tang等人(2001)Cloning and characterization ofcDNAs encoding four different canine immunoglobulinγchains.Vet.Immunol.andImmunopath.80:259PMID 11457479)，仅IgG2恒定区基因被物理定位至8号染色体上的犬科动物IGHC基因座。Cμ(1209)、Cε(1215)和Cα(1216)的功能性形式也在本文进行了物理定位。
犬科动物IGHC的序列在表4中。
犬科动物IGL基因座定位至犬科动物26号染色体，而犬科动物IGK编码区定位至犬科动物17号染色体。图12B和图12C分别提供了内源犬科动物IGL和IGK基因座的示意图。
犬科动物IGKC和IGLC的序列在表4中。
犬科动物λ基因座(1217)是大的(2.6Mbp)，具有162个Vλ基因(1218)，其中至少76个是功能性的。犬科动物λ基因座还包括9个串联盒或J-C单元，每个包含一个Jλ基因区段和一个Cλ外显子(1219)。参见，Martin等人(2018)Comprehensive annotation andevolutionary insights into the canine(Canis lupus familiaris)antigen receptorloci.Immunogenetics.70:223-236。
犬科动物κ基因座(1220)是小的(400Kbp)，并且具有不寻常的结构，其中八个功能性Vκ基因区段位于Jκ(1223)基因区段和Cκ(1224)外显子的上游(1222)并且五个位于下游(1226)。犬科动物上游Vκ区具有与Jκ基因区段和Cκ外显子在相同转录方向的全部功能性基因区段，其中两个假基因(IGKV3-3和IGKV7-2)和一个ORF(IGKV4-1)处于反向转录方向(未示出)。犬科动物下游Vκ区具有与Jκ基因区段和Cκ外显子在相对的转录方向的全部功能性基因区段，并且包括6个假基因。核糖5-磷酸异构酶A(RPIA)基因(1225)也在下游的Vκ区在Cκ与IGKV2S19之间发现。参见，Martin等人(2018)Comprehensive annotation andevolutionary insights into the canine(Canis lupus familiaris)antigen receptorloci.Immunogenetics.70:223-236。
小鼠免疫球蛋白κ基因座位于6号染色体上。图1B提供了内源小鼠IGK基因座的示意图。IGK基因座(112)跨越3300Kbp，并且包括位于5个连接(Jκ)基因区段(114)和一个恒定(Cκ)基因(115)上游的多于100个可变Vκ基因区段(113)。小鼠κ基因座包括位于Jκ与Cκ之间的内含子增强子(iEκ，116)，该内含子增强子(iEκ，116)活化κ重排并有助于维持κ相比于λ更早或更有效的重排(Inlay等人(2004)Important Roles for E Protein Binding Siteswithin the Immunoglobulinκchain intronic enhancer in activating VκJκrearrangement.J.Exp.Med.200(9):1205-1211)。另一个增强子为3’增强子(3’Eκ，117)位于Cκ外显子下游9.1Kb，并且也参与κ重排和转录；缺乏iEκ和3’Eκ二者的突变体小鼠在κ基因座没有VκJκ重排(Inlay等人(2002)Essential roles of the kappa light chainintronic enhancer and 3’enhancer in kappa rearrangement anddemethylation.Nature Immunol.3(5):463-468)。然而，例如通过插入新霉素抗性基因来破坏iEκ也足以消除大多数VκJκ重排(Xu等人(1996)Deletion of the IgκLight ChainIntronic Enhancer/Matrix Attachment Region Impairs but Does Not Abolish VκJκRearrangement)。
小鼠免疫球蛋白λ基因座位于16号染色体上。图1C提供了内源小鼠IGL基因座(118)的示意图。小鼠免疫球蛋白λ基因座的组织不同于小鼠免疫球蛋白κ基因座。基因座跨越240kb，具有包含3个功能性可变(Vλ)基因区段(IGLV2，119；IGLV3，120和IGLV1，123)的两个簇和λ连接(Jλ)基因区段和恒定(Cλ)基因区段(IGLJ2，121；IGLC2，122；IGLJ3，124:IGLC3，125；IGLJ1，126；IGLC1，127)的3个串联盒，其中Vλ基因区段位于可变数量的J-C串联盒的上游(5’)。基因座还包含三个转录增强子(Eλ2-4，128；Eλ，129；Eλ3-1，130)。
本文描述的部分犬科动物核酸序列允许转基因动物产生包含犬科动物VH或VL区域的重链或轻链库，同时保留可以在宿主基因组(例如啮齿动物的)的间插序列内发现的有助于促进宿主中有效抗体产生和抗原识别的调控序列和其他元件。
在一方面，合成的或通过重组产生的部分犬科动物核酸被工程化为包含免疫球蛋白VH、Vλ或Vκ基因座(或者在一些方面，其组合)的犬科动物编码序列和非犬科动物非编码调控或支架序列二者。
在一方面，表达具有犬科动物可变区的免疫球蛋白的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞可以通过将一个或更多个犬科动物VH基因区段编码序列插入到啮齿动物重链免疫球蛋白基因座的VH基因座中来产生。在另一方面，表达具有犬科动物可变区的免疫球蛋白的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞可以通过将一个或更多个犬科动物VL基因区段编码序列插入到啮齿动物轻链免疫球蛋白基因座的VL基因座中来产生。
两个轻链基因座(κ和λ)的存在意味着各种轻链插入组合对于产生表达具有犬科动物可变区的免疫球蛋白的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞是可能的，所述轻链插入组合包括但不限于：将一个或更多个犬科动物Vλ或Jλ基因区段编码序列插入到啮齿动物Vλ基因座中，将一个或更多个犬科动物Vκ或Jκ基因区段编码序列插入到啮齿动物Vκ基因座中，将一个或更多个犬科动物Vλ或Jλ基因区段编码序列插入到啮齿动物Vκ基因座中，以及将一个或更多个犬科动物Vκ或Jκ基因区段编码序列插入啮齿动物Vλ基因座中。
表达部分犬科动物免疫球蛋白的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞的选择和开发由于以下事实而变得复杂：由小鼠产生的多于90％的轻链是κ，并且少于10％的轻链是λ，而由犬产生的多于90％的轻链是λ，并且少于10％的轻链是κ的事实，以及犬科动物免疫球蛋白λ基因座是大的并包括超过100个Vλ基因区段，而小鼠免疫球蛋白λ仅包括3个功能性Vλ基因片段的事实。
由于小鼠主要产生含κLC的抗体，增加由转基因啮齿动物产生含λLC的部分犬科动物免疫球蛋白的一种合理方法是将一个或更多个犬科动物Vλ或Jλ基因区段编码序列插入到啮齿动物κ基因座中。然而，如下文实施例9中示出的，将犬科动物Vλ区外显子与啮齿类动物Cκ区外显子偶联导致部分犬科动物免疫球蛋白在体外的次优表达。
本文提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞能够表达包含犬科动物可变结构域的免疫球蛋白，其中转基因啮齿动物产生的包含λ轻链的免疫球蛋白比包含κ轻链的免疫球蛋白更多，或者产生包含λ轻链的免疫球蛋白的可能性比产生包含κ轻链的免疫球蛋白更大。虽然不希望受理论束缚，但认为产生包含λ轻链的免疫球蛋白更多的或更可能产生包含λ轻链的免疫球蛋白的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞产生用于开发治疗的更完整抗体库。
本文提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞具有包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座的基因组。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座包含犬科动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因区段。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座能够表达包含犬科动物可变结构域的免疫球蛋白。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座能够表达包含犬科动物λ可变结构域的免疫球蛋白。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座能够表达包含犬科动物κ可变结构域的免疫球蛋白。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座表达包含犬科动物可变结构域和啮齿动物恒定结构域的免疫球蛋白轻链。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座表达包含犬科动物λ可变结构域和啮齿动物λ恒定结构域的免疫球蛋白轻链。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座表达包含犬科动物κ可变结构域和啮齿动物κ恒定结构域的免疫球蛋白轻链。
在一方面，转基因啮齿动物或啮齿动物细胞产生的包含λ轻链的免疫球蛋白比包含κ轻链的免疫球蛋白更多或者产生包含λ轻链的免疫球蛋白的可能性比产生包含κ轻链的免疫球蛋白更大。在一方面，提供了一种转基因啮齿动物，其中从啮齿动物分离出产生λ轻链的细胞的可能性比分离出产生κ轻链的细胞更大。在一方面，提供了一种转基因啮齿动物，所述转基因啮齿动物产生至少约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％以及高达约100％的包含λ轻链的免疫球蛋白。在一方面，提供了一种转基因啮齿动物细胞或其后代，所述转基因啮齿动物细胞或其后代产生具有λ轻链的免疫球蛋白的可能性比产生具有κ轻链的免疫球蛋白更大。在一方面，转基因啮齿动物细胞或其后代具有至少约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％以及高达约100％的概率产生包含λ轻链的免疫球蛋白。在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中内源啮齿动物轻链免疫球蛋白基因座已经缺失并且被工程化部分犬科动物轻链免疫球蛋白基因座取代。在一方面，转基因啮齿动物是小鼠。
免疫球蛋白轻链基因座
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞具有包含通过重组产生的部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座的基因组。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座是轻链可变区(VL)基因座。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列或者一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vκ基因区段编码序列或者一个或更多个犬科动物Jκ基因区段编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个啮齿动物恒定结构域基因或编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个啮齿动物Cλ基因或编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个啮齿动物Cκ基因或编码序列。在一方面，内源啮齿动物轻链免疫球蛋白基因座已经失活。在一方面，内源啮齿动物轻链免疫球蛋白基因座已经缺失并且被工程化部分犬科动物轻链免疫球蛋白基因座取代。
在一方面，工程化免疫球蛋白基因座表达包含犬科动物λ可变结构域和啮齿动物λ恒定结构域的免疫球蛋白轻链。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座表达包含犬科动物κ可变结构域和啮齿动物κ恒定结构域的免疫球蛋白轻链。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有来自犬科动物基因组的大部分或全部Vλ基因区段编码序列的VL基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有至少20个、30个、40个、50个、60个、70个以及高达76个犬科动物Vλ基因区段编码序列的VL基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有来自犬科动物基因组的至少约50％、60％、70％、80％、90％以及高达100％的Vλ基因区段编码序列的VL基因座。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有在犬科动物基因组中发现的大部分或全部Jλ基因区段编码序列的VL基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个犬科动物Jλ基因区段编码序列的VL基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有在犬科动物基因组中发现的至少约50％、75％以及高达100％的Jλ基因区段编码序列的VL基因座。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有来自犬科动物基因组的大部分或全部Vλ和Jλ基因区段编码序列的VL基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有来自犬科动物基因组的至少约50％、60％、70％、80％、90％以及高达100％的Vλ和Jλ基因区段编码序列的VL基因座。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有来自犬科动物基因组的大部分或全部Vκ基因区段编码序列的VL基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有至少4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个以及高达14个犬科动物Vκ基因区段编码序列的VL基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有来自犬科动物基因组的至少约50％、60％、70％、80％、90％以及高达100％的Vκ基因区段编码序列的VL基因座。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有在犬科动物基因组中发现的大部分或全部Jκ基因区段编码序列的VL基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有至少1个、2个、3个、4个或5个犬科动物Jκ基因区段编码序列的VL基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有在犬科动物基因组中发现的至少约50％、75％以及高达100％的Jκ基因区段编码序列的VL基因座。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有来自犬科动物基因组的大部分或全部Vκ和Jκ基因区段编码序列的VL基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有来自犬科动物基因组的至少约50％、60％、70％、80％、90％以及高达100％的Vκ和Jκ基因区段编码序列的VL基因座。
在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含犬科动物VL基因区段编码序列和来自啮齿动物免疫球蛋白轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vλ或Jλ基因区段编码序列和来自啮齿动物免疫球蛋白轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列。在一方面，啮齿动物非编码调控或支架序列来自啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座。在一方面，啮齿动物非编码调控或支架序列来自啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列和来自啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含一个或更多个啮齿动物免疫球蛋白λ恒定区(Cλ)编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列和一个或更多个啮齿动物免疫球蛋白Cλ编码序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中的犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列和一个或更多个啮齿动物Cλ编码序列。
在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vλ或Jλ基因区段编码序列和来自啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中的犬科动物Vλ或Jλ基因区段编码序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列和来自啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的一个或更多个啮齿动物免疫球蛋白Cλ编码序列和啮齿动物非编码调控或支架序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中的犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列和一个或更多个啮齿动物免疫球蛋白Cλ编码序列。
在一方面，一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列位于一个或更多个Jλ基因区段编码序列的上游，该一个或更多个Jλ基因区段编码序列位于一个或更多个啮齿动物Cλ基因的上游。在一方面，一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列位于一个或更多个Jλ基因区段编码序列的上游并且与一个或更多个Jλ基因区段编码序列在相同的转录方向，该一个或更多个Jλ基因区段编码序列位于一个或更多个啮齿动物λCλ基因的上游。
在一方面，工程化免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列、一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列和一个或更多个啮齿动物Cλ基因。在一方面，工程化免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列、一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列和一个或多个啮齿动物Cλ区基因，其中Vλ和Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ区基因插入到啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座中。在一方面，工程化免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列、一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列和一个或更多个啮齿动物Cλ基因，其中Vλ和Jλ基因区段编码序列和啮齿动物(Cλ)区基因嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座的非编码调控或支架序列中。
在一方面，一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列位于一个或更多个Jλ基因区段编码序列的上游，该一个或更多个Jλ基因区段编码序列位于一个或更多个啮齿动物Cλ基因的上游，其中Vλ和Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ基因插入到啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座中。在一方面，一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列位于一个或更多个Jλ基因区段编码序列的上游，该一个或更多个Jλ基因区段编码序列位于一个或更多个啮齿动物Cλ基因的上游，其中Vλ和Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ基因嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座的非编码调控或支架序列中。
在一方面，啮齿动物Cλ编码序列选自啮齿动物Cλ1、Cλ2或Cλ3编码序列。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中工程化免疫球蛋白基因座包含啮齿动物免疫球蛋白κ基因座，其中一个或更多个啮齿动物Vκ基因区段编码序列和一个或更多个啮齿动物Jκ基因区段编码序列已经缺失并且分别被一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列和一个或更多个Jλ基因区段编码序列取代，并且其中基因座中的啮齿动物Cκ编码序列已经被啮齿动物Cλ1、Cλ2或Cλ3编码序列取代。
在一方面，工程化免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列和一个或更多个J-C单元，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ基因。在一方面，工程化免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列和一个或更多个J-C单元，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ区编码序列，其中Vλ基因区段编码序列和J-C单元插入到啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座中。在一方面，工程化免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列和一个或更多个J-C单元，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ编码序列，其中Vλ基因区段编码序列和J-C单元嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座的非编码调控或支架序列中。
在一方面，一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列位于一个或更多个J-C单元的上游并且与一个或更多个J-C单元在相同的转录方向，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ基因。在一方面，一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列位于一个或更多个J-C单元的上游并且与一个或更多个J-C单元在相同的转录方向，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ编码序列。在一方面，工程化免疫球蛋白可变区基因座包含位于一个或更多个J-C单元上游的一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ编码序列，其中Vλ基因区段编码序列和J-C单元插入到啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座中。在一方面，工程化免疫球蛋白可变区基因座包含处于一个或更多个J-C单元上游并且与一个或更多个J-C单元在相同的转录方向的一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ编码序列，其中Vλ基因区段编码序列和J-C单元嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座的非编码调控或支架序列中。在一方面，啮齿动物Cλ编码序列选自啮齿动物Cλ1、Cλ2或Cλ3编码序列。
在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vκ编码序列和来自啮齿动物免疫球蛋白轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vκ或Jκ基因区段编码序列和来自啮齿动物免疫球蛋白轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列。在一方面，啮齿动物非编码调控或支架序列来自啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座。在一方面，啮齿动物非编码调控或支架序列来自啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列和来自啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列和来自啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含一个啮齿动物免疫球蛋白Cκ编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含一个或更多个啮齿动物免疫球蛋白Cλ编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含一个或更多个犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列和一个啮齿动物免疫球蛋白Cκ编码序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含嵌入啮齿动物κ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中的犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列和一个啮齿动物免疫球蛋白Cκ编码序列。在一方面，工程化免疫球蛋白基因座包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中的犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列和一个啮齿动物免疫球蛋白Cλ编码序列。
虽然不希望受理论束缚，但认为使内源啮齿动物κ轻链基因座失活或赋予其非功能性可以增加来自部分犬科动物免疫球蛋白基因座的λ轻链免疫球蛋白的表达。这已被证明在其中κ轻链基因座在种系中已经失活的其他常规小鼠中是这种情况(Zon，等人(1995)Subtle differences in antibody responses and hypermutation ofλlight chains inmice with a disruptedκconstant region.Eur.J.Immunol.25:2154-2162)。在一方面，使内源啮齿动物κ轻链基因座失活或赋予其非功能性可以相对于由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞产生的包含κ轻链的免疫球蛋白的量增加包含λ轻链的免疫球蛋白的相对量。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中内源啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座是缺失、失活的或成为非功能性的。在一方面，内源啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座因以下中的一种或更多种而失活或成为非功能性的：缺失或突变全部内源啮齿动物Vκ基因区段编码序列；缺失或突变全部内源啮齿动物Jκ基因区段编码序列；缺失或突变内源啮齿动物Cκ编码序列；缺失、突变或破坏内源内含子κ增强子(iEκ)和3’增强子序列(3'Eκ)；或其组合。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中内源啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变结构域是缺失、失活的或成为非功能性的。在一方面，内源啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变结构域因以下中的一种或更多种而失活或成为非功能性的：缺失或突变全部内源啮齿动物Vκ基因区段；缺失或突变全部内源啮齿动物Jλ基因区段；缺失或突变全部内源啮齿动物Cλ编码序列；或其组合。
在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含啮齿动物调控或支架序列，包括但不限于增强子、启动子、剪接位点、内含子、重组信号序列及其组合。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含啮齿动物λ调控或支架序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含啮齿动物κ调控或支架序列。
在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包括驱动基因表达的启动子。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包括κV区启动子。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包括λV区启动子。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含驱动在Vλ至Jλ基因区段重排之后产生的一个或更多个λLC基因编码序列的表达的λV区启动子。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含驱动在Vκ至Jκ基因区段重排之后产生的一个或更多个κLC基因编码序列的表达的λV区启动子。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含驱动在Vλ至Jλ基因区段重排之后产生的一个或更多个λLC基因编码序列的表达的κV区启动子。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含驱动在Vκ至Jκ基因区段重排之后产生的一个或更多个κLC基因编码序列的表达的κV区启动子。
在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含一个或更多个增强子。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含小鼠κiEκ或3’Eκ增强子。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含一个或更多个Vλ或Jλ基因区段编码序列和小鼠κiEκ或3’Eκ增强子。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含一个或更多个Vκ或Jκ基因区段编码序列和κiEκ或3’Eκ增强子。
免疫球蛋白重链基因座
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞具有包含通过重组产生的部分犬科动物免疫球蛋白重链可变区(VH)基因座的基因组。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物VH、D或JH基因区段编码序列。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白重链可变区基因座包含一个或更多个啮齿动物恒定结构域(CH)基因或编码序列。在一方面，内源啮齿动物重链免疫球蛋白基因座已经失活。在一方面，内源啮齿动物重链免疫球蛋白基因座已经缺失并且被工程化部分犬科动物重链免疫球蛋白基因座取代。
在一方面，合成的H链DNA区段包含雄性生育力所需的ADAM6A或ADAM6B基因、参与Igh基因座收缩(Igh locus contraction)的Pax-5-活化的基因间重复(PAIR)元件和参与调控正常VDJ重排的来自重链基因间控制区1的CTCF结合位点((Proudhon，等人，Adv.Immunol.,128:123-182(2015))或其各种组合。这些内源非编码调控和支架序列在小鼠IGH基因座中的位置描绘于图1中，图1从左到右图示了：～100个功能性重链可变区基因区段(101)；参与VDJ重组的IGH基因座收缩的Pax-5活化的基因间重复序列PAIR(102)；雄性生育力所需的解整联蛋白和金属肽酶结构域6A基因ADAM6A或ADAM6B(103)；最远端DH基因区段上游的21609bp区段前D区IGHD-5D(104)；包含调控VH基因区段使用的CTCF绝缘子位点的基因间控制区1(IGCR1)(106)；多样性基因区段D(10-15个，取决于小鼠品系)(105)；四个连接JH基因区段(107)；参与VDJ重组的内含子增强子Eμ(108)；用于同种型转换的μ转换区域Sμ(109)；八个重链恒定区基因：Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1、Cγ2b、C2γa/c、Cε和Cα(110)；控制同种型转换和体细胞突变的3’调控区(3’RR)(111)。图1A根据取自Proudhon等人Adv.Immunol.,128:123-182(2015)的图修改。
在一方面，待整合到哺乳动物宿主细胞中的工程化部分犬科动物区域包含全部或大量的已知犬科动物VH基因区段。然而，在一些情况下，使用这样的VH基因区段的子集可能是合意的，并且在特定情况下，甚至可以将少至一个犬科动物VH编码序列引入到细胞或动物中。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有来自犬科动物基因组的大部分或全部VH基因区段编码序列的VH基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有至少20个、30个以及高达39个功能性犬科动物VH基因区段编码序列的VH基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有来自犬科动物基因组的至少约50％、60％、70％、80％、90％以及高达100％的VH基因区段编码序列的VH基因座。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有来自犬科动物基因组的大部分或全部VH基因区段编码序列的VH基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有至少20个、30个、40个、50个、60个、70个以及高达80个犬科动物VH基因区段编码序列的VH基因座。在这方面，例如通过将符合框的终止密码子突变为功能性密码子使用本领域熟知的方法来恢复VH基因区段假基因以恢复其功能性。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有来自犬科动物基因组的至少约50％、60％、70％、80％、90％以及高达100％的VH基因区段编码序列的VH基因座。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有在犬科动物基因组中发现的大部分或全部D基因区段编码序列的VH基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有至少1个、2个、3个、4个、5个以及高达6个犬科动物D基因区段编码序列的VH基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有在犬科动物基因组中发现的至少约50％、60％、70％、80％、90％以及高达100％的D基因区段编码序列的VH基因座。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有在犬科动物基因组中发现的大部分或全部JH基因区段编码序列的VH基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有至少1个、2个、3个、4个、5个以及高达6个犬科动物JH基因区段编码序列的VH基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有在犬科动物基因组中发现的至少约50％、75％以及高达100％的JH基因区段编码序列的VH基因座。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区包含含有来自犬科动物基因组的大部分或全部VH、D和JH基因区段编码序列的VH基因座。在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座包含含有来自犬科动物基因组的至少约50％、60％、70％、80％、90％以及高达100％的VH、D和JH基因区段编码序列的VH基因座。
在一方面，提供了一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座，所述工程化部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座包含犬科动物免疫球蛋白重链可变区基因编码序列和啮齿动物免疫球蛋白重链基因座的非编码调控或支架序列。在一方面，工程化犬科动物免疫球蛋白重链基因座包含犬科动物VH、D或JH基因区段编码序列。在一方面，工程化犬科动物免疫球蛋白重链基因座包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白重链基因座的非编码调控或支架序列中的犬科动物VH、D或JH基因区段编码序列。
在一方面，提供了包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的非犬科动物哺乳动物和哺乳动物细胞，所述工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物VH、犬科动物D和犬科动物JH基因的编码序列，所述工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座还包含基于非犬科动物哺乳动物宿主的内源IGH基因座的非编码调控和支架序列，包括前D序列。在某些方面，外源引入的工程化部分犬科动物区域可以包含完全重组的V(D)J外显子。
在一方面，转基因非犬科动物哺乳动物是包含外源引入的工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的啮齿动物，例如小鼠，该外源引入的工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含多个犬科动物VH、犬科动物D和犬科动物JH基因的密码子，具有基于啮齿动物中的间插(非编码调控或支架)序列的间插序列，包括前D区。在一方面，转基因啮齿动物还包含部分犬科动物IGL基因座，所述部分犬科动物IGL基因座分别包含与其存在于啮齿动物IGL基因座中的免疫球蛋白间插序列对应的间插(非编码调控或支架)序列结合的犬科动物Vκ或Vλ基因和Jκ或Jλ基因的编码序列。
在示例性实施方案中，如实施例部分中更详细阐述的，小鼠基因组的整个内源VH免疫球蛋白基因座是缺失的并且随后被包含39个犬科动物VH基因区段的部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代，该39个犬科动物VH基因区段包含与小鼠基因组的J558 VH基因座的非编码序列对应的间隔开的非编码序列。完整的外源引入的工程化免疫球蛋白基因座还包含犬科动物D和JH基因区段，以及小鼠前D区。因此，犬科动物VH、D和JH密码子序列嵌入啮齿动物基因间序列和内含子序列中。
部分犬科动物免疫球蛋白基因座的制备
在一方面，使用位点特异性重组酶使包含VH、D和JH或者VL和JL基因区段的非犬科动物哺乳动物(诸如啮齿动物，例如大鼠或小鼠)的内源免疫球蛋白基因座可变区缺失并且被工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代。在一方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座作为单个核酸或盒插入到宿主动物的基因组中。因为包含部分犬科动物免疫球蛋白基因座的盒被用来取代内源免疫球蛋白基因座可变区，犬科动物编码序列可以在单个插入步骤中插入到宿主基因组中，从而提供用于获得转基因动物的快速且直接的方法。
在一方面，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座可变区通过使鼠VH、D和JH或者VL和JL编码序列从小鼠免疫球蛋白基因座可变区缺失并且用犬科动物编码序列取代鼠编码序列来制备。在一方面，包括调控序列和其他元件的鼠免疫球蛋白基因座的非编码侧翼序列保持完整。
在一方面，用于工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的核苷酸序列进行计算机制备，并且该基因座使用用于基因合成的已知技术合成。在一方面，来自犬科动物免疫球蛋白可变区基因座的编码序列和宿主动物免疫球蛋白基因座的序列使用诸如BLAST(基本局部比对搜索工具)的搜索工具来鉴定。在获得宿主免疫球蛋白基因座的基因组序列和犬科动物免疫球蛋白可变区基因座的编码序列之后，宿主编码序列可以使用已知的计算方法用犬科动物编码序列进行计算机取代，以定位内源宿主动物免疫球蛋白编码区段和使之缺失，并且该编码序列被犬科动物编码序列取代，保持内源调控序列和侧翼序列完整。
同源重组
在一方面，使用同源重组和位点特异性重组的组合来产生本文描述的细胞和动物。在一些实施方案中，首先使用同源性靶向载体将序列特异性重组位点引入到哺乳动物宿主细胞基因组中内源免疫球蛋白基因座中的期望位置处。在一方面，在重组酶蛋白不存在的情况下，通过同源重组插入到哺乳动物宿主细胞基因组中的序列特异性重组位点不影响哺乳动物宿主细胞中任何基因的表达和氨基酸密码子。这种方法维持在插入重组位点以及任选地任何另外的序列诸如选择性标志物基因之后产生期望抗体的免疫球蛋白基因的正确转录和翻译。然而，在一些情况下，将重组酶位点和其他序列插入到免疫球蛋白基因座序列中使得抗体分子的氨基酸序列通过插入而改变，但抗体仍保留用于所期望目的的足够功能是可能的。这样的改变密码子的同源重组的实例可以包括将多态性引入内源基因座中并改变恒定区外显子，使得由内源基因座表达不同的同种型。在一方面，免疫球蛋白基因座包括一个或更多个这样的插入。
在一方面，同源性靶向载体可以用于取代内源基因组内的某些序列，以及将某些序列特异性重组位点和一个或更多个选择性标志物基因插入到宿主细胞基因组中。本领域普通技术人员应当理解，如本文使用的选择性标志物基因可以用于清除尚未经历同源重组的单独细胞和携带随机整合的靶向载体的细胞。
用于同源重组的示例性方法描述于以下中：美国专利第6,689,610号；第6,204,061号；第5,631,153号；第5,627,059号；第5,487,992号；和第5,464,764号，所述专利中的每一个都通过引用以其整体并入本文。
位点/序列特异性重组
位点/序列特异性重组与一般的同源重组的差异在于由重组酶识别所要求的短特异性DNA序列是重组发生处的唯一位点。根据特定DNA链或染色体上这些位点的方向，识别这些特定序列的专门重组酶可以催化i)DNA切离或ii)DNA倒位或旋转。如果这些位点不存在于同一条染色体上，位点特异性重组也可以发生在两条DNA链之间。许多噬菌体和酵母来源的位点特异性重组系统(各自都包含重组酶和特定的同源位点)，已经被证明在真核细胞中工作，并且因此适用于与本文描述的方法结合使用，并且这些系统包括噬菌体P1 Cre/lox、酵母FLP-FRT系统和位点特异性重组酶的酪氨酸家族的Dre系统。这样的系统和使用方法描述于以下中：例如，美国专利第7,422,889号；第7,112,715号；第6,956,146号；第6,774,279号；第5,677,177号；第5,885,836号；第5,654,182号；和第4,959,317号，所述专利中的每一个都通过引用并入本文，以教导使用这样的重组酶的方法。
已知位点特异性重组酶的酪氨酸家族的其他系统诸如噬菌体λ整合酶、HK2022整合酶以及属于重组酶的单独丝氨酸家族的另外系统诸如噬菌体phiC31、R4Tp901整合酶，使用它们各自的重组位点在哺乳动物细胞中工作，并且也适用于在本文描述的方法中使用。
由于位点特异性重组可以发生在两条不同的DNA链之间，位点特异性重组的发生可以用作通过称为重组酶介导的盒交换(RMCE)的过程将外源基因座引入到宿主细胞基因组中的机制。RMCE过程可以通过组合使用用于相同重组酶蛋白的野生型和突变体序列特异性重组位点与阴性选择一起来利用。例如，待靶向的染色体基因座的一个末端上的侧翼可以是野生型LoxP位点，并且另一个末端上的侧翼可以是突变体LoxP位点。同样，类似地，包含被插入到宿主细胞基因组中的序列的外源载体的一个末端上的侧翼可以是野生型LoxP位点，并且另一个末端上的侧翼可以是突变体LoxP位点。在这种外源载体在存在Cre重组酶的情况下被转染到宿主细胞中时，Cre重组酶催化两条DNA链之间的RMCE，而不是同一条DNA链上的切离反应，因为每条DNA链上的野生型LoxP和突变体LoxP位点对于彼此重组是不相容的。因此，一条DNA链上的LoxP位点会与另一条DNA链上的LoxP位点重组；类似地，一条DNA链上的突变的LoxP位点会仅与另一条DNA链上同样突变的LoxP位点重组。
在一方面，使用被用于RMCE的相同重组酶识别的序列特异性重组位点的组合变体。这样的序列特异性重组位点变体的实例包括包含反向重复序列的组合的那些变体或包含具有突变体间隔区序列的重组位点的那些变体。例如，两类变体重组酶位点可用于工程化稳定的Cre-loxP整合重组。二者都利用了Cre识别序列中的在8bp间隔区内或在13bp反向重复序列内的序列突变。间隔区突变体诸如lox511(Hoess，等人，Nucleic Acids Res,14:2287-2300(1986))、lox5171和lox2272(Lee和Saito,Gene,216:55-65(1998))、m2、m3、m7和m11(Langer，等人，Nucleic Acids Res,30:3067-3077(2002))容易地与自身重组，但与野生型位点具有显著降低的重组率。这类突变体已经使用非相互作用的Cre-Lox重组位点和非相互作用的FLP重组位点通过RMCE被利用于DNA插入(Baer和Bode,Curr OpinBiotechnol,12:473-480(2001)；Albert，等人，Plant J,7:649-659(1995)；Seibler和Bode,Biochemistry,36:1740-1747(1997)；Schlake和Bode,Biochemistry,33:12746-12751(1994))。
反向重复序列突变体表示第二类变体重组酶位点。例如，LoxP位点可以在左侧反向重复序列(LE突变体)或右侧反向重复序列(RE突变体)中包含改变的碱基。LE突变体lox71在左反向重复序列的5’末端上具有从野生型序列改变为TACCG的5bp(Araki，等人，Nucleic Acids Res,25:868-872(1997))。类似地，RE突变体lox66具有改变为CGGTA的5个最3’碱基。使用反向重复序列突变体将质粒插入物(plasmid inserts)整合到染色体DNA中，其中LE突变体被指定为“供体”RE突变体重组到其中的“靶”染色体loxP位点。重组后，loxP位点位于插入区段的顺式侧翼。重组的机制使得，重组后一个loxP位点是双突变体(包含LE和RE反向重复序列突变二者)，并且另一个是野生型(Lee和Sadowski,Prog NucleicAcid Res Mol Biol,80:1-42(2005)；Lee和Sadowski,J Mol Biol,326:397-412(2003))。双突变体与野生型位点有足够的差异，因为双突变体不能被Cre重组酶识别，并且插入的区段不能被切离。
在某些方面，与编码核酸区域或调控序列相反，序列特异性重组位点可以被引入到内含子中。这避免在将序列特异性重组位点插入动物细胞基因组中后无意中破坏适当抗体表达所需的任何调控序列或编码区。
序列特异性重组位点的引入可以通过常规同源重组技术实现。这样的技术描述于参考文献中，诸如，例如Sambrook和Russell(2001)(Molecular cloning:a laboratorymanual第3版(Cold Spring Harbor,N.Y.:Cold Spring Harbor Laboratory Press)和Nagy,A.(2003).(Manipulating the mouse embryo:a laboratory manual，第3版(ColdSpring Harbor,N.Y.:Cold Spring Harbor Laboratory Press)。Renault和Duchateau，编著(2013)(Site-directed insertion of transgenes.Topics in Current Genetics23.Springer)。Tsubouchi,H.Ed.(2011)(DNA recombination,Methods andProtocols.Humana Press)。
特异性重组到基因组中可以使用如本领域已知的设计用于阳性或阴性选择的载体来促进。为了促进鉴定已经经历取代反应的细胞，可以使用适当的遗传标志物系统，并且细胞通过例如使用选择组织培养基来选择。然而，为了确保基因组序列在取代区间的两个末端点处或附近大体上没有外来核酸序列，标志物系统/基因可以期望地在包含取代的核酸的细胞的选择之后去除。
在一方面，在暴露于毒素或药物后，对内源免疫球蛋白基因座的全部或一部分已经发生取代的细胞进行阴性选择。例如，保留HSV-TK表达的细胞可以通过使用核苷类似物诸如更昔洛韦来选择。在另一方面，包含内源免疫球蛋白基因座缺失的细胞可以通过使用标志物基因而被阳性选择，该标志物基因可以任选地在重组事件之后或作为重组事件的结果从细胞去除。可以使用的阳性选择系统基于对标志物基因诸如HPRT的两个非功能性部分(它们通过重组事件聚集在一起)的使用。这两个部分在进行成功的取代反应后发生功能性缔合，并且其中功能地重构的标志物基因在任一侧的侧翼是另外的序列特异性重组位点(其不同于取代反应中使用的序列特异性重组位点)，使得标志物基因可以使用适当的位点特异性重组酶从基因组切离。
重组酶可以作为纯化的蛋白提供，或者作为从瞬时转染到宿主细胞中或稳定整合到宿主细胞基因组中的载体构建体表达的蛋白提供。可选地，细胞可以首先用于产生转基因动物，然后该转基因动物可以与表达所述重组酶的动物杂交。
因为本文描述的方法可以利用工程化基因组内的两组或更多组序列特异性重组位点，所以可以利用多轮RMCE将部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因插入到非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组中。
尽管尚未常规用于插入大的DNA区段，但CRISPR-Cas技术是引入嵌合犬科动物Ig基因座的另一种方法。
转基因动物的产生
在一方面，提供了用于产生包含引入的部分犬科动物免疫球蛋白基因座的转基因动物，例如啮齿动物，诸如小鼠的方法。
在一方面，用于取代内源免疫球蛋白基因的宿主细胞是胚胎干(ES)细胞，所述胚胎干(ES)细胞然后可以用于产生转基因哺乳动物。在一方面，宿主细胞是早期胚胎的细胞。在一方面，宿主细胞是原核期胚胎或合子。因此，根据一方面，本文描述的方法还包括：分离包含引入的部分犬科动物免疫球蛋白基因座的胚胎干细胞或早期时期胚胎的细胞，诸如原核期胚胎或合子，并且使用所述ES细胞产生包含取代的部分犬科动物免疫球蛋白基因座的转基因动物。
使用方法
在一方面，提供了一种产生包含犬科动物可变区的抗体的方法。在一方面，方法包括提供本文描述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，并且分离包含由转基因啮齿动物表达的犬科动物可变区的抗体。在一方面，提供了一种产生包含犬科动物可变区的单克隆抗体的方法。在一方面，方法包括提供来自本文描述的转基因啮齿动物或细胞的B细胞，使B细胞永生化；并且分离包含由永生化B细胞表达的犬科动物可变结构域的抗体。
在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含犬科动物HC可变结构域。在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含小鼠HC恒定结构域。这些可以是任何同种型IgM、IgD、IgG1、IgG2a/c、IgG2b、IgG3、IgE或IgA。
在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含犬科动物HC可变结构域和小鼠HC恒定结构域。在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含犬科动物LC可变结构域和小鼠LC恒定结构域。在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含犬科动物HC可变结构域和犬科动物LC可变结构域以及小鼠HC恒定结构域和小鼠LC恒定结构域。
在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含犬科动物λLC可变结构域。在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含小鼠λ恒定结构域。在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含犬科动物λLC可变结构域和小鼠λ恒定结构域。在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含犬科动物κLC可变结构域。在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含小鼠κ恒定结构域。在一方面，由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体包含犬科动物κLC可变结构域和小鼠κ恒定结构域。
在一方面，提供了一种产生包含犬科动物可变区的抗体或抗原结合片段的方法。在一方面，方法包括提供本文描述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，并且分离包含由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的犬科动物可变区的抗体。在一方面，对由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体的可变区进行测序。包含从由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体获得的犬科动物可变区的抗体可以使用已知方法通过重组产生。
在一方面，提供了一种产生对感兴趣的抗原有特异性的免疫球蛋白的方法。在一方面，方法包括用抗原免疫如本文描述的转基因啮齿动物，并且分离对由转基因啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗原有特异性的免疫球蛋白。在一方面，对由啮齿动物或啮齿动物细胞表达的抗体的可变结构域进行测序，并且使用已知方法通过重组产生包含与感兴趣的抗原特异性结合的犬科动物可变区的抗体。在一方面，通过重组产生的抗体或抗原结合片段包含犬科动物HC和LC、κ或λ恒定结构域。
通过引用并入
本文引用的全部参考文献，包括专利、专利申请、文章、教科书等，以及其中引用的参考文献，在它们尚未被引用的程度，为了全部目的，在此通过引用以其整体并入本文。
实施例
提出以下实施例，以便为本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的完整公开内容和描述，且以下实施例并不意在限制本发明人视作其发明的范围，它们也不意在代表或隐含下文的实验是所进行的全部实验或仅有实验。本领域技术人员将理解，可以对如具体实施方案中示出的发明作出许多变化或改变而不脱离如所广泛描述的本发明的精神或范围。因此，本实施方案在全部方面都被认为是说明性的而非限制性的。
已经作出了努力以确保关于使用的术语和数字(例如，载体、量、温度，等)的准确性，但应该考虑一定实验误差和偏差。除非另外指示，份数为重量份数，分子量为加权平均分子量，温度以摄氏度计，且压力处于大气压或临近大气压。
实施例说明了通过5’载体和3’载体二者进行的位于重组位点侧翼的靶向，以及合成DNA的引入。对于本领域技术人员，在阅读本说明书后将明显的是，5’载体靶向可以首先发生，随后是3’，或者3’载体靶向可以首先发生，随后是5’载体。在一些情况下，靶向可以与双重检测机制同时进行。
实施例1：将工程化部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座引入到非犬科动物哺 乳动物宿主细胞基因组的免疫球蛋白H链可变区基因座
图2-图6中更详细地说明了一种示例性方法，该方法说明了将工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座引入到非哺乳动物ES细胞的基因组基因座中。在图2中，提供了同源靶向载体(201)，该同源靶向载体(201)包含嘌呤霉素磷酸转移酶-胸苷激酶融合蛋白(puro-TK)(203)，该融合蛋白的侧翼是两个不同的重组酶识别位点(例如，分别针对Flp和Cre的FRT(207)和loxP(205))和两个不同的突变体位点(例如，修饰的突变体FRT(209)和突变loxP(211))，该突变体位点缺乏与它们各自的野生型对应物/位点(即野生型FRT(207)和野生型loxP(205))重组的能力。靶向载体包含白喉毒素受体(DTR)cDNA(217)，用于在未来步骤中对包含引入的构建体的细胞的阴性选择中使用。靶向载体还任选地包含可视标志物，诸如绿色荧光蛋白(GFP)(未示出)。区域213和215分别与内源非犬科动物基因座中的邻接区域(229)的5’和3’部分同源，该邻接区域(229)处于包含内源非犬科动物VH基因区段(219)的基因组区域的5’。同源靶向载体(201)被引入(202)到ES细胞中，该同源靶向载体(201)具有免疫球蛋白基因座(231)，该免疫球蛋白基因座(231)包含内源VH基因区段(219)、前D区(221)、D基因区段(223)、JH基因区段(225)和免疫球蛋白恒定区基因(227)。来自同源靶向载体(201)的位点特异性重组序列和DTR cDNA被整合(204)到非犬科动物基因组中内源小鼠VH基因座5’的位点处，产生233处所示的基因组结构。没有外源载体(201)整合到其基因组中的ES细胞可以通过在培养培养基中包含嘌呤霉素而被选择(杀死)；仅已经将外源载体(201)稳定整合到其基因组中并组成型表达puro-TK基因的ES细胞对嘌呤霉素是抗性的。
图3有效地图示了与图2相同的方法，除了添加一组另外的序列特异性重组位点，例如Rox位点(331)和修饰的Rox位点(335)用于与Dre重组酶一起使用。在图3中，提供了同源靶向载体(301)，该同源靶向载体(301)包含puro-TK融合蛋白(303)，所述融合蛋白的侧翼是针对FRT(307)、loxP(305)和Rox(331)的野生型重组酶识别位点以及针对分别缺乏与野生型位点307、305和331重组的能力的FRT(309)、loxP(311)和Rox(335)重组酶的突变位点。靶向载体还包含白喉毒素受体(DTR)cDNA(317)。区域313和315分别与内源非犬科动物基因座中处于包含内源小鼠VH基因区段(319)的基因组区域的5’的邻接区域(329)的5’和3’部分同源。同源靶向被引入(302)到小鼠免疫球蛋白基因座(339)中，该小鼠免疫球蛋白基因座(339)包含内源VH基因区段(319)、前D区(321)、D基因区段(323)、JH(325)基因区段和Igh基因座的恒定区基因(327)。同源靶向载体(301)中的位点特异性重组序列和DTR cDNA(317)被整合(304)到小鼠基因组中内源小鼠VH基因座5’的位点处，产生333处所示的基因组结构。
如图4中图示的，提供了第二同源靶向载体(401)，该第二同源靶向载体(401)包含任选的次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)基因(435)(该基因可以用于HPRT缺陷型ES细胞中的阳性选择)；新霉素抗性基因(437)；分别针对Flp和Cre的重组酶识别位点FRT(407)和loxP(405)，其具有与先前从第一同源靶向载体整合到小鼠基因组的FRT(407)和loxP(405)位点重组的能力。先前的同源靶向载体还包含突变体FRT位点(409)、突变体loxP位点(411)、puro-TK融合蛋白(403)和位于内源小鼠VH基因座的5’的位点处的DTR cDNA(419)。区域429和439分别与位于内源JH基因区段(425)下游和恒定区基因(427)上游的内源小鼠非犬科动物基因座中的邻接区域(441)的5’和3’部分同源。同源靶向载体被引入(402)到修饰的小鼠免疫球蛋白基因座(431)中，该修饰的小鼠免疫球蛋白基因座(431)包含内源VH基因区段(419)、前D区(421)、D基因区段(423)、JH基因区段(425)和恒定区基因(427)。同源靶向载体的位点特异性重组序列(407，405)、HPRT基因(435)和新霉素抗性基因(437)被整合(404)到内源小鼠恒定区基因(427)上游的小鼠基因组中，产生433处所示的基因组结构。
在重组位点被整合到哺乳动物宿主细胞基因组中后，然后免疫球蛋白结构域的内源区域经历通过引入对应于整合到基因组中的序列特异性重组位点例如Flp或Cre的重组酶之一进行的重组。图5中图示了包含两个整合的DNA片段的哺乳动物宿主细胞基因组的修饰的Igh基因座。包含突变体FRT位点(509)、突变体LoxP位点(511)、puro-TK基因(503)、野生型FRT位点(507)和野生型LoxP位点(505)和DTR cDNA(517)的一个片段被整合在VH基因座(519)的上游。包含HPRT基因(535)、新霉素抗性基因(537)、野生型FRT位点(507)和野生型LoxP位点(505)的另一个DNA片段被整合在前D(521)、D(523)和JH(525)基因座的下游，但在恒定区基因(527)的上游。在Flp或Cre(502)存在的情况下，野生型FRT或野生型LoxP位点之间的全部间插序列，包括DTR基因(517)、内源IGH可变区基因座(519、521、525)以及HPRT(535)和新霉素抗性(537)基因在内，是缺失的，产生539处所示的基因组结构。程序依赖于已经发生在同一染色体上的第二靶向而不是依赖于其同源物(即顺式而不是反式)。如果靶向按预期以顺式发生，细胞在Cre-或Flp-介导的重组之后通过引入到培养基中的白喉毒素对阴性选择不敏感，因为引起啮齿动物中对白喉毒素的敏感性的DTR基因应该在宿主细胞基因组中不存在(缺失)。同样，携带随机整合的第一或第二靶向载体的ES细胞由于未缺失的DTR基因的存在而被赋予对白喉毒素的敏感性。
然后筛选对白喉毒素不敏感的ES细胞的内源可变区基因座的缺失。缺失的内源免疫球蛋白基因座的初级筛选方法可以通过DNA印迹进行，或者通过聚合酶链式反应(PCR)进行，随后是用二级筛选技术诸如DNA印迹进行确认。
图6图示了将工程化部分犬科动物序列引入到非犬科动物基因组中，该非犬科动物基因组先前被修饰以使编码重链可变区结构域的部分内源Igh基因座(VH、D和JH)以及VH与JH基因座之间的全部间插序列缺失。将位点特异性靶向载体(629)引入(602)到宿主细胞中，该位点特异性靶向载体(629)包含部分犬科动物VH基因座(619)、内源非犬科动物前D基因区(621)、部分犬科动物D基因座(623)、部分犬科动物JH基因座(625)以及在侧翼的突变体FRT(609)、突变体LoxP(611)、野生型FRT(607)和野生型LoxP(605)位点。特别地，部分犬科动物VH基因座(619)包含与基于内源非犬科动物基因组序列的间插序列结合的39个功能性犬科动物VH编码序列；前D区(621)包含与内源犬科动物IGH基因座的对应区域具有显著同源性的21.6kb小鼠序列；D基因座(623)包含嵌入内源非犬科动物D基因区段周围的间插序列中的6个D基因区段的密码子；并且JH基因座(625)包含嵌入基于内源非犬科动物基因组的间插序列中的6个犬科动物JH基因区段的密码子。宿主细胞基因组的IGH基因座(601)先前已经被修饰以缺失全部VH、D和JH基因区段，包括如图5中描述的间插序列。作为这种修饰的结果，内源非犬科动物宿主细胞Igh基因座(601)留有puro-TK融合基因(603)，该puro-TK融合基因(603)侧翼是上游的突变体FRT位点(609)和突变体LoxP位点(611)以及下游的野生型FRT(607)和野生型LoxP(605)。引入适当的重组酶(604)后，部分犬科动物免疫球蛋白基因座被整合到内源非犬科动物恒定区基因(627)上游的基因组中，产生631处所示的基因组结构。
犬科动物VH、D和JH基因区段编码区的序列在表1中。
用于引入部分犬科动物免疫球蛋白基因座的初级筛选程序可以通过DNA印迹进行，或者通过PCR进行，随后用二级筛选方法诸如DNA印迹进行确认。筛选方法旨在检测插入的VH、D和JH基因座以及全部间插序列的存在。
实施例2：将包含另外的非编码调控或支架序列的工程化部分犬科动物免疫球蛋 白可变区基因座引入到非犬科动物哺乳动物宿主细胞基因组的免疫球蛋白H链可变区基因 座中
在某些方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含如实施例1中描述的元件，但是具有另外的非编码调控或支架序列，例如策略性地添加以进行以下的序列：引入另外的调控序列，确保引入的免疫球蛋白基因座中的期望间隔(spacing)，确保某些编码序列与其他的与被取代的免疫球蛋白基因座相邻的序列充分并列，等等。图7图示了将第二个示例性工程化部分犬科动物序列引入到如图2-图5中产生并在以上实施例1中描述的修饰的非犬科动物基因组中。
图7图示了将工程化部分犬科动物序列引入到小鼠基因组中，该小鼠基因组先前被修饰以使编码重链可变区结构域的部分内源非犬科动物IGH基因座(VH、D和JH)以及内源VH与JH基因座之间的全部间插序列缺失。将位点特异性靶向载体(731)引入(702)到基因组区域(701)中，该位点特异性靶向载体(731)包含待插入到非犬科动物宿主基因组中的工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座。将位点特异性靶向载体(731)引入(702)到宿主细胞中，该位点特异性靶向载体(731)包含部分犬科动物VH基因座(719)、小鼠前D区(721)、部分犬科动物D基因座(723)、部分犬科动物JH基因座(725)、PAIR元件(741)以及在侧翼的突变体FRT(709)、突变体LoxP(711)、野生型FRT(707)和野生型LoxP(705)位点。特别地，工程化部分犬科动物VH基因座(719)包含与基于内源非犬科动物基因组序列的间插序列结合的80个犬科动物VH基因区段编码区；前D区(721)包含存在于内源非犬科动物基因组上游的21.6kb非犬科动物序列；D区(723)包含嵌入内源非犬科动物D基因区段周围的间插序列中的6个犬科动物D基因区段的密码子；并且JH基因座(725)包含嵌入基于内源非犬科动物基因组序列的间插序列中的6个犬科动物JH基因区段的密码子。宿主细胞基因组的IGH基因座(701)先前已经被修饰以缺失全部VH、D和JH基因区段，包括如关于图5描述的间插序列。作为这种修饰的结果，内源非犬科动物Igh基因座(701)留有puro-TK融合基因(703)，该puro-TK融合基因(603)的侧翼是上游的突变体FRT位点(709)和突变体LoxP位点(711)以及下游的野生型FRT(707)和野生型LoxP(705)。引入适当的重组酶(704)后，工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座被整合到内源小鼠恒定区基因(727)上游的基因组中，产生729处所示的基因组结构。
引入工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的初级筛选程序可以通过DNA印迹进行，或者通过PCR进行，其中用二级筛选方法诸如DNA印迹进行确认。筛选方法旨在检测插入的PAIR元件、VH、D和JH基因座以及全部间插序列的存在。
实施例3：将工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座引入到小鼠基因组的免疫球 蛋白重链基因座中
图8图示了用工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代小鼠基因组的一部分的方法。该方法利用了将第一位点特异性重组酶识别序列引入到小鼠基因组中，随后将第二位点特异性重组酶识别序列引入到小鼠基因组中。这两个位点位于小鼠内源VH、D和JH区基因区段的整个簇的侧翼。如本文描述的，使用相关的位点特异性重组酶使有侧翼的区域(flanked region)缺失。
用于在野生型小鼠免疫球蛋白基因座(801)中的VH(815)、D(817)和JH(819)基因区段簇的任一侧和恒定区基因(821)的上游引入位点特异性重组酶序列的靶向载体(803、805)包含另外的位点特异性重组序列，该另外的位点特异性重组序列已经被修饰使得它仍然被重组酶有效识别，但是不与未修饰的位点重组。该修饰的突变体位点(例如lox5171)位于靶向载体中，使得在内源VH、DH和JH基因区段缺失(802)之后，该修饰的突变体位点可以用于其中非天然的DNA片段被RMCE移入修饰的IGH基因座中的第二位点特异性重组事件。在本实施例中，非天然的DNA是包含犬科动物和非犬科动物序列二者的合成核酸(809)。
构建两个基因靶向载体来完成刚刚概述的方法。载体之一(803)包含取自最远端VH基因区段上游的Igh基因座5’末端的小鼠基因组DNA。另一个载体(805)包含取自JH基因区段下游的基因座内的小鼠基因组DNA。
5’载体(803)从5’至3’顺序的关键特征如下：在与来自多瘤病毒的两个突变体转录增强子偶联的修饰的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因启动子的转录控制下编码白喉毒素A(DTA)亚基的基因(823)；在Igh基因座中最远端的VH基因区段上游定位的4.5Kb小鼠基因组DNA(825)；用于Flp重组酶的FRT识别序列(827)；包含小鼠Polr2a基因启动子的基因组DNA片段(829)；翻译起始序列(嵌入“Kozak”共有序列中的甲硫氨酸密码子835))；用于Cre重组酶的突变loxP识别序列(lox5171)(831)；转录终止/多腺苷酸化序列(pA.833)；用于Cre重组酶的loxP识别序列(837)；在来自小鼠磷酸甘油酸激酶1基因的启动子的转录控制下编码融合蛋白的基因(839)，所述融合蛋白具有与胸苷激酶的截短形式融合的赋予嘌呤霉素抗性的蛋白(pu-TK)；以及在存在于载体5’末端附近并以天然相对方向排列的4.5Kb小鼠基因组DNA序列附近定位的3Kb小鼠基因组DNA(841)。
3’载体(805)从5’至3’顺序的关键特征如下：在JH与CH基因座之间的内含子中定位的3.7Kb小鼠基因组DNA(843)；在小鼠Polr2a基因启动子转录控制下的HPRT基因(845)；小鼠磷酸甘油酸激酶1基因启动子控制下的新霉素抗性基因(847)；Cre重组酶的loxP识别序列(837)；在紧邻存在于载体5’末端附近并且以天然相对方向排列的3.7Kb小鼠基因组DNA片段的下游定位的2.1Kb小鼠基因组DNA(849)；以及在与来自多瘤病毒的两个突变体转录增强子偶联的修饰的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因启动子的转录控制下编码DTA亚基的基因(823)。
根据广泛使用的程序，将小鼠胚胎干(ES)细胞(来源于C57B1/6NTac小鼠)通过电穿孔用3’载体(805)转染。在电穿孔之前，将载体DNA用稀有切割限制酶线性化，该稀有切割限制酶仅切割原核质粒序列或与其关联的多接头(polylinker)。将转染的细胞铺板，并且在～24小时之后，将其置于通过使用新霉素类似物药物G418对已经将3’载体整合到其DNA中的细胞进行的阳性选择下。也存在阴性选择用于已经将载体整合到其DNA中但不是通过同源重组进行整合的细胞。非同源重组导致DTA基因(823)的保留，在基因表达时DTA基因(823)杀死细胞，而DTA基因因为位于与小鼠IGH基因座的载体同源性区域之外而通过同源重组缺失。约一周之后，在药物抗性ES细胞的集落变成裸眼可见之后，将药物抗性ES细胞的集落从其板上物理提取。这些挑选的集落被分解，再铺板于微孔板中，并且培养数天。此后，每个细胞克隆被分配，使得一些细胞可以被冷冻作为存档材料(archive)，并且其余的用于DNA的分离而用于分析目的。
来自ES细胞克隆的DNA通过PCR使用广泛实践的基因靶向测定设计进行筛选。对于该测定，一种PCR寡核苷酸引物序列定位在3’载体(805)与基因组DNA之间共有同一性的区域之外，而另一种PCR寡核苷酸引物序列定位在载体中有基因组同一性的两条臂之间的新DNA中，即HPRT(845)或新霉素抗性(847)基因中。根据标准设计，这些测定检测仅存在于来源于转染细胞的ES细胞克隆中的DNA片段，所述转染细胞经历3’靶向载体与内源小鼠IGH基因座之间完全正常(fully legitimate)的同源重组。两次单独的转染用3’载体(805)进行。选择来自两次转染的PCR阳性克隆进行扩增，随后使用DNA印迹测定进一步分析。
DNA印迹测定根据广泛使用的程序使用三种探针和用选择的多种限制酶消化的基因组DNA进行，使得使探针和消化物的组合允许克隆中靶向基因座的结构被鉴定为通过同源重组适当修饰。探针之一定位至位于3’靶向载体与基因组DNA之间共有同一性的区域5’侧的侧翼的DNA序列；第二探针定位在同一性区域之外，但在3’侧；并且第三探针定位在载体中有基因组同一性的两个臂之间的新DNA中，即在HPRT(845)或新霉素抗性(847)基因中。DNA印迹鉴定预期限制酶产生的DNA片段的存在，所述DNA片段对应于由一种外部探针和由新霉素或HPRT探针检测到的经正确突变(即通过使用3’Igh靶向载体的同源重组)的IGH基因座的一部分。外部探针检测突变体片段和也检测来自同源染色体上免疫球蛋白Igh基因座的非突变体拷贝的野生型片段。
ES细胞的PCR阳性克隆和DNA印迹阳性克隆的核型使用被设计为区分小鼠ES细胞中出现的最常出现的染色体畸变的原位荧光杂交程序进行分析。具有这样的畸变的克隆被排除在进一步使用之外。基于DNA印迹数据判断具有预期的正确基因组结构并且基于核型分析也没有可检测到的染色体畸变的ES细胞克隆被选择用于进一步使用。
然后可接受的克隆用5’载体(803)使用以下程序和筛选测定进行修饰：所述程序和筛选测定在设计上类似于与3’载体(805)一起使用的那些程序和筛选测定，不同之处在于使用嘌呤霉素选择替代G418/新霉素进行选择。PCR测定、探针和消化物也被定制以匹配被5’载体(805)修饰的基因组区域。
在载体靶向和分析之后分离出已经通过3’载体和5’载体二者以预期方式突变的ES细胞克隆，即携带两种工程化突变的双重靶向细胞。与同源染色体相反，克隆必须在同一条染色体上经历基因靶向(即通过靶向载体产生的工程化突变必须在同一条DNA链上呈顺式，而不是在分开的同源DNA链上呈反式)。将具有顺式排列的克隆与具有反式排列的克隆通过分析程序诸如使用探针的中期涂片(metaphase spreads)的荧光原位杂交区分开，所述探针与存在于两个基因靶向载体(803和805)的其有基因组同一性的臂之间的新DNA杂交。两种类型的克隆也可以通过以下来彼此区分开：用表达Cre重组酶的载体(如果靶向载体已经以顺式整合，则该载体使pu-TK(839)、HPRT(845)和新霉素抗性(847)基因缺失)转染它们，并且然后将针对通过5’载体(803)引入的胸苷激酶基因进行更昔洛韦选择而存活的集落数进行比较，并且通过“亲缘种选择(sibling selection)”筛选程序(其中测试了来自克隆的一些细胞对嘌呤霉素或G418/新霉素的抗性)分析存活克隆的药物抗性表型。具有顺式突变排列的细胞预期比具有反式排列的细胞产生大约多103个更昔洛韦抗性克隆。大多数所得的顺式来源的更昔洛韦抗性克隆也对嘌呤霉素和G418/新霉素二者都敏感，相比之下，反式来源的更昔洛韦抗性克隆应该对这两种药物都保留抗性。选择重链基因座中具有工程化突变的顺式排列的双重靶向细胞克隆用于进一步使用。
将双重靶向细胞克隆用表达Cre重组酶的载体瞬时转染，并且随后将转染的细胞置于更昔洛韦选择下，如在以上总结的分析实验中的那样。分离出更昔洛韦抗性的细胞克隆，并且通过PCR和DNA印迹分析由5’(803)和3’(805)靶向载体产生的两个工程化突变之间的预期缺失的存在。在这些克隆中，Cre重组酶引起由两个载体引入到重链基因座中的loxP位点(837)之间发生重组(802)，以产生807处所示的基因组DNA构型。因为loxP位点在两个载体中以相同相对方向排列，重组导致包含两个loxP位点之间整个基因组区间(genomicinterval)的DNA圈(a circle of DNA)被切下。该圈不包含复制起点，并且因此在有丝分裂期间不被复制，并且因此在细胞经历增殖时从细胞中损失。所得的克隆携带最初位于两个loxP位点之间的缺失。选择具有预期缺失的克隆用于进一步使用。
在其免疫球蛋白重链基因座的两个同源拷贝之一中携带序列缺失的ES细胞克隆用Cre重组酶表达载体与包含部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座的DNA片段(809)一起再转染(804)，所述部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座包含犬科动物VH、D和JH区基因编码区序列，侧翼是小鼠调控和侧翼序列。该合成DNA片段(809)的关键特征如下：lox5171位点(831)；新霉素抗性基因开放阅读框(847)，该开放阅读框缺乏起始甲硫氨酸密码子，但符合框(in-frame)并与lox5171位点中的不间断开放阅读框邻接；FRT位点(827)；39个功能性犬科动物VH重链可变区基因的阵列(851)，每个基因具有嵌入小鼠非编码序列中的犬科动物编码序列；任选地，来自小鼠重链基因座的21.6kb前D区(未示出)；包含6个犬科动物DH基因区段(853)和6个犬科动物JH基因区段(855)的58Kb DNA片段，其中犬科动物VH、D和JH编码序列嵌入小鼠非编码序列中；与lox5171位点(831)在相反的相对方向的loxP位点(837)。
将转染的克隆置于G418选择下，这富集了已经经历RMCE的细胞克隆，其中工程化部分犬科动物供体免疫球蛋白基因座(809)以其整体被整合到lox5171(831)与loxP(837)位点之间缺失的内源免疫球蛋白重链基因座中，以产生811处所示的DNA区域。仅已经适当地经历RMCE的细胞才具有表达新霉素抗性基因(847)的能力，因为其表达所要求的启动子(829)和起始甲硫氨酸密码子(835)不存在于载体(809)中，但已经预先存在于宿主细胞IGH基因座(807)中。来自5’载体(803)中的剩余元件经由Flp介导的体外或体内重组(806)去除，产生如813处所示的最终基于犬科动物的基因座。
G418抗性ES细胞克隆通过PCR和DNA印迹分析，以确定它们是否已经经历预期的RMCE过程而没有不想要的重排或缺失。选择具有预期基因组结构的克隆用于进一步使用。
根据标准程序，将小鼠重链基因座中携带部分犬科动物免疫球蛋白重链DNA(813)的ES细胞克隆显微注射到来自品系DBA/2的小鼠胚泡中，以产生部分ES细胞来源的嵌合小鼠。选择对其皮毛具有最高的ES细胞来源贡献水平的雄性嵌合小鼠与雌性小鼠交配。这里选择的雌性小鼠是C57B1/6NTac品系，并且还携带编码在其种系中表达的Flp重组酶的转基因。分析来自这些交配的后代的部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座的存在，以及在RMCE步骤中产生的侧翼为FRT的新霉素抗性基因的损失。携带部分犬科动物基因座的小鼠用于建立小鼠的集落。
实施例4：将工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座引入到小鼠基因组的免疫球 蛋白κ链基因座中
图9图示了用部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代小鼠基因组的一部分的另一种方法。该方法包括将第一位点特异性重组酶识别序列引入到小鼠基因组中，随后将第二位点特异性重组酶识别序列引入到小鼠基因组中，该第一位点特异性重组酶识别序列可以被引入小鼠基因组的内源Vκ(915)和Jκ(919)区基因区段簇的5’或3’，与第一序列特异性重组位点组合的该第二位点特异性重组酶识别序列位于包含恒定区基因(921)上游的Vκ和Jκ基因区段簇的整个基因座的侧翼。有侧翼的区域缺失，并且然后使用相关的位点特异性重组酶用部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代，如本文描述的。
用于在Vκ(915)和Jκ(919)基因区段的任一侧引入位点特异性重组序列的靶向载体也包含另外的位点特异性重组序列，该另外的位点特异性重组序列已经被修饰使得它仍然被重组酶有效识别，但是不与未修饰的位点重组。该位点位于靶向载体中，使得在Vκ和Jκ基因区段簇缺失之后，它可以用于其中非天然的DNA片段经由RMCE移入到修饰的Vκ基因座中的第二位点特异性重组事件。在本实施例中，非天然的DNA是包含嵌入在小鼠调控和侧翼序列中的犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列的合成核酸。
构建两个基因靶向载体来完成刚刚概述的方法。载体之一(903)包含取自最远端Vκ基因区段上游的基因座的5’末端的小鼠基因组DNA。另一个载体(905)包含取自Jκ基因区段(919)下游(3’)和恒定区基因(921)上游的基因座内的小鼠基因组DNA。
5’载体(903)的关键特征如下：在与来自多瘤病毒的两个突变体转录增强子偶联的修饰的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因启动子的转录控制下编码白喉毒素A(DTA)亚基的基因(923)；在κ链基因座中最远端可变区基因的上游定位的6Kb小鼠基因组DNA(925)；用于Flp重组酶的FRT识别序列(927)；包含小鼠Polr2a基因启动子的基因组DNA片段(929)；翻译起始序列(935，嵌入“Kozak”共有序列中的甲硫氨酸密码子)；用于Cre重组酶的突变loxP识别序列(lox5171)(931)；转录终止/多腺苷酸化序列(933)；用于Cre重组酶的loxP识别序列(937)；在来自小鼠磷酸甘油酸激酶1基因的启动子的转录控制下编码融合蛋白的基因(939)，所述融合蛋白具有与胸苷激酶的截短形式融合的赋予嘌呤霉素抗性的蛋白(pu-TK)；在载体中5’末端并以天然相对方向排列的6Kb序列附近定位的2.5Kb小鼠基因组DNA(941)。
3’载体(905)的主要特征如下：在Jκ(919)与Cκ(921)基因座之间的内含子中定位的6Kb小鼠基因组DNA(943)；在小鼠Polr2a基因启动子的转录控制下编码人类次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)的基因(945)；在小鼠磷酸甘油酸激酶1基因启动子控制下的新霉素抗性基因(947)；用于Cre重组酶的loxP识别序列(937)；在紧邻载体5’末端处包含的6Kb DNA片段的基因组下游定位的3.6Kb小鼠基因组DNA(949)，其中两个片段以与小鼠基因组相同的相对方式取向；在与来自多瘤病毒的两个突变体转录增强子偶联的修饰的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因启动子的转录控制下编码白喉毒素A(DTA)亚基的基因(923)。
根据广泛使用的程序，将来源于C57B1/6NTac小鼠的小鼠胚胎干(ES)细胞通过电穿孔用3’载体(905)转染。在电穿孔之前，将载体DNA用稀有切割限制酶线性化，该稀有切割限制酶仅切割原核质粒序列或与其关联的多接头。将转染的细胞铺板，并且在～24小时之后，将其置于通过使用新霉素类似物药物G418对已经将3’载体整合到其DNA中的细胞进行的阳性选择下。也存在阴性选择用于已经将载体整合到其DNA中但不是通过同源重组进行整合的细胞。非同源重组导致DTA基因的保留，在基因表达时DTA基因杀死细胞，而DTA基因因为位于与小鼠Igκ基因座的载体同源性区域之外而通过同源重组缺失。约一周之后，在药物抗性ES细胞的集落变成裸眼可见之后，将药物抗性ES细胞的集落从其板上物理提取。这些挑选的集落被分解，再铺板于微孔板中，并且培养数天。此后，每个细胞克隆被分配，使得一些细胞可以被冷冻作为存档材料，并且其余的用于DNA的分离而用于分析目的。
来自ES细胞克隆的DNA通过PCR使用广泛使用的基因靶向测定设计进行筛选。对于该测定，一种PCR寡核苷酸引物序列定位在3’载体(905)与基因组DNA(901)之间共有同一性的区域之外，而另一种PCR寡核苷酸引物序列定位在载体中有基因组同一性的两条臂之间的新DNA中，即HPRT(945)或新霉素抗性(947)基因中。根据标准设计，这些测定检测仅存在于来源于转染细胞的ES细胞克隆中的DNA片段，所述转染细胞已经经历3’载体(905)与内源小鼠Igκ基因座之间完全正常的同源重组。两次单独的转染用3’载体(905)进行。选择来自两次转染的PCR阳性克隆进行扩增，随后使用DNA印迹测定进一步分析。
DNA印迹测定根据广泛使用的程序进行；DNA印迹包括三种探针和用所选的多种限制酶消化的基因组DNA，使得探针和消化物的组合允许得出关于以下的结论：克隆中靶向的基因座的结构以及其是否通过同源重组被适当修饰。探针之一定位至位于3’κ靶向载体(905)与基因组DNA之间共有同一性的区域5’侧的侧翼的DNA序列；第二探针还定位在同一性区域之外，但在3’侧；第三探针定位在载体中有基因组同一性的两个臂之间的新DNA中，即在HPRT(945)或新霉素抗性(947)基因中。DNA印迹鉴定预期限制酶产生的DNA片段的存在，所述DNA片段对应于由一种外部探针和由新霉素抗性或HPRT基因探针检测到的经正确突变(即通过用3’κ靶向载体(905)的同源重组)的κ基因座的一部分。外部探针检测突变体片段和也检测来自同源染色体上免疫球蛋白κ基因座的非突变体拷贝的野生型片段。
ES细胞的PCR阳性克隆和DNA印迹阳性克隆的核型使用被设计为区分小鼠ES细胞中出现的最常出现的染色体畸变的原位荧光杂交程序进行分析。具有这样的畸变的克隆被排除在进一步使用之外。选择基于DNA印迹数据被判断为具有预期的正确基因组结构的核型正常克隆(karyoptypically normal clones)用于进一步使用。
然后可接受的克隆用5’载体(903)使用以下程序和筛选测定进行修饰：所述程序和筛选测定在设计上类似于与3’载体(905)一起使用的那些程序和筛选测定，不同之处在于使用嘌呤霉素选择替代G418/新霉素选择，并且定制方案以匹配由5’载体(903)修饰的基因组区域。5’载体(903)转染实验的目标是分离出已经被3’载体(905)和5’载体(903)二者以预期方式突变的ES细胞克隆，即携带两种工程化突变的双重靶向细胞。在这些克隆中，Cre重组酶引起由两个载体引入到κ基因座中的loxP位点之间发生重组(902)，产生907处所示的基因组DNA构型。
此外，与同源染色体相反，克隆必须在同一条染色体上经历基因靶向；即通过靶向载体产生的工程化突变必须在同一条DNA链上呈顺式，而不是在分开的同源DNA链上呈反式。将具有顺式排列的克隆与具有反式排列的克隆通过分析程序诸如使用探针的中期涂片的荧光原位杂交区分开，所述探针与存在于两个基因靶向载体(903和905)的其有基因组同一性的臂之间的新DNA杂交。两种类型的克隆也可以通过以下来彼此区分开：用表达Cre重组酶的载体(如果靶向载体已经以顺式整合，则该载体使pu-TK(939)、HPRT(945)和新霉素抗性(947)基因缺失)转染它们，并且将针对通过5’载体(903)引入的胸苷激酶基因进行更昔洛韦选择而存活的集落数进行比较，并且通过“亲缘种选择”筛选程序(其中测试了来自克隆的一些细胞对嘌呤霉素或G418/新霉素的抗性)分析存活克隆的药物抗性表型。具有顺式突变排列的细胞预期比具有反式排列的细胞产生大约多103个更昔洛韦抗性克隆。大多数所得的顺式来源的更昔洛韦抗性克隆应该也对嘌呤霉素和G418/新霉素二者都敏感，相比之下，反式来源的更昔洛韦抗性克隆应该对这两种药物都保留抗性。选择κ链基因座中具有工程化突变的顺式排列的细胞克隆用于进一步使用。
将双重靶向细胞克隆用表达Cre重组酶的载体瞬时转染(902)，并且随后将转染的细胞置于更昔洛韦选择下，如在以上总结的分析实验中的那样。分离出更昔洛韦抗性的细胞克隆，并且通过PCR和DNA印迹分析由5’载体(903)和3’载体(905)产生的两个工程化突变之间的预期缺失(907)的存在。在这些克隆中，Cre重组酶已经引起由两个载体引入到κ链基因座中的loxP位点(937)之间发生重组。因为loxP位点在两个载体中以相同的相对方向排列，重组导致包含两个loxP位点之间整个基因组区间的DNA圈被切下。该圈不包含复制起点，并且因此在有丝分裂期间不被复制，并且因此在细胞经历克隆增殖时从细胞克隆中损失。所得的克隆携带最初位于两个loxP位点之间的缺失。选择具有预期缺失的克隆用于进一步使用。
在其免疫球蛋白κ链基因座的两个同源拷贝之一中携带序列缺失的ES细胞克隆用Cre重组酶表达载体与包含部分犬科动物免疫球蛋白κ链基因座的DNA片段(909)一起再转染(904)，所述部分犬科动物免疫球蛋白κ链基因座包含Vκ(951)和Jκ(955)基因区段编码序列。该DNA片段(称为“K-K”)的关键特征如下：lox5171位点(931)；新霉素抗性基因开放阅读框(947，缺乏起始甲硫氨酸密码子，但符合框并与lox5171位点(931)中的不间断开放阅读框邻接)；FRT位点(927)；14个犬科动物Vκ基因区段的阵列(951)，每个区段具有嵌入小鼠非编码序列中的犬科动物编码序列；任选地，来自紧邻小鼠κ链基因座(未示出)中的Jκ区基因区段簇上游的13.5Kb基因组DNA片段；包含嵌入小鼠非编码DNA中的5个犬科动物Jκ区基因区段的2Kb DNA片段(955)；与lox5171位点(931)在相反的相对方向的loxP位点(937)。
犬科动物Vκ和Jκ基因编码区的序列在表2中。
在第二个独立的实验中，使用替代的部分犬科动物DNA片段(909)代替K-K DNA。该DNA(称为“L-K”)的关键特征如下：lox5171位点(931)；新霉素抗性基因开放阅读框(947)，该开放阅读框缺乏起始甲硫氨酸密码子，但符合框并与lox5171位点(931)中的不间断开放阅读框邻接；FRT位点(927)；76个功能性犬科动物Vλ可变区基因区段的阵列(951)，每个区段具有嵌入小鼠非编码调控或支架序列中的犬科动物编码序列；任选地，来自紧邻小鼠κ链基因座中的Jκ区基因区段簇上游的13.5Kb基因组DNA片段(未示出)；包含嵌入小鼠非编码DNA中的7个犬科动物Jλ区基因区段的2Kb DNA片段(955)；与lox5171位点(931)在相反的相对方向的loxP位点(937)。(犬具有9个功能性Jλ区基因区段，然而，Jλ4和Jλ9以及Jλ7和Jλ8的编码蛋白序列是相同的，并且因此仅包括7个Jλ基因区段。)
将来自K-K和L-K转染实验的转染克隆置于G418选择下，这富集了已经经历RMCE的细胞克隆，其中部分犬科动物供体DNA(909)以其整体被整合到分别由5’(903)和3’(905)载体置于其处的lox5171(931)与loxP(937)位点之间缺失的免疫球蛋白κ链基因座中。仅已经适当地经历RMCE的细胞才具有表达新霉素抗性基因(947)的能力，因为其表达所要求的启动子(929)和起始甲硫氨酸密码子(935)不存在于载体(909)中，并且已经预先存在于宿主细胞Igh基因座(907)中。使用K-K序列产生的DNA区域在911处示出。来自5’载体(903)中的剩余元件经由Flp介导的重组(906)在体外或体内去除，产生如913处所示的最终基于犬科动物的轻链基因座。
G418抗性ES细胞克隆通过PCR和DNA印迹分析，以确定它们是否已经经历预期的RMCE过程而没有不想要的重排或缺失。选择具有预期基因组结构的K-K和L-K克隆二者用于进一步使用。
根据标准程序，将小鼠κ链基因座中携带部分犬科动物免疫球蛋白DNA(913)的K-KES细胞克隆和L-K ES细胞克隆显微注射到来自品系DBA/2的小鼠胚泡中，以产生部分ES细胞来源的嵌合小鼠。选择对其皮毛具有最高的ES细胞来源贡献水平的雄性嵌合小鼠与雌性小鼠交配。选择用于在交配中使用的雌性小鼠是C57B1/6NTac品系，并且还携带编码在其种系中表达的Flp重组酶的转基因。分析来自这些交配的后代的部分犬科动物免疫球蛋白κ或λ轻链基因座的存在，以及在RMCE步骤中产生的侧翼为FRT的新霉素抗性基因的损失。携带部分犬科动物基因座的小鼠用于建立K-K和L-K小鼠的集落。
如实施例3中描述地产生的携带部分犬科动物重链基因座的小鼠可以与携带基于犬科动物的κ链基因座的小鼠一起育种。继而将它们的后代在一个方案中一起育种，最终产生的小鼠的两个基于犬科动物的基因座(即，基于犬科动物的重链和κ)均是纯合的。这样的小鼠产生具有犬科动物可变结构域和小鼠恒定结构域的部分犬科动物重链。这样的小鼠还从其κ基因座产生具有犬科动物κ可变结构域和小鼠κ恒定结构域的部分犬科动物κ蛋白。从这些小鼠中回收的单克隆抗体具有与犬科动物κ可变结构域配对的犬科动物重链可变结构域。
育种方案的一种变化形式包括产生这样的小鼠，所述小鼠的基于犬科动物的重链基因座是纯合的，但在κ基因座处是杂合的，使得在一条染色体上它们具有K-K基于犬科动物的基因座，并且在另一条染色体上它们具有L-K基于犬科动物的基因座。这样的小鼠产生具有犬科动物可变结构域和小鼠恒定结构域的部分犬科动物重链。这样的小鼠还从其κ基因座之一产生具有犬科动物κ可变结构域和小鼠κ恒定结构域的部分犬科动物κ蛋白。从另一个κ基因座，这样的小鼠产生具有犬科动物λ可变结构域、小鼠κ恒定结构域的部分犬科动物λ蛋白。从这些小鼠中回收的单克隆抗体具有在一些情况下与犬科动物κ可变结构域配对并且在其他情况下与犬科动物λ可变结构域配对的犬科动物可变结构域。
实施例5：将工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座引入到小鼠基因组的免疫球 蛋白λ链基因座中
图10图示了用工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代小鼠基因组的一部分的另一种方法。该方法包括通过同源重组方法从野生型小鼠免疫球蛋白λ基因座(1001)中缺失大约194Kb的DNA，所述野生型小鼠免疫球蛋白λ基因座(1001)包含Vλx/Vλ2基因区段(1013)、Jλ2/Cλ2基因簇(1015)和Vλ1基因区段(1017)，所述同源重组方法涉及与Vλx/Vλ2基因区段(1013)上游和Vλ1基因区段(1017)下游紧邻Jλ3、Cλ3、Jλ1和Cλ1λ基因簇(1023)二者的基因座共有同一性的靶向载体(1003)。该载体用被设计为允许随后的位点特异性重组的元件取代194Kb的DNA，在位点特异性重组中非天然的DNA片段经由RMCE(1004)移动到修饰的Vλ基因座中。在本实施例中，非天然的DNA是包含犬科动物和小鼠序列二者的合成核酸。
用于完成194Kb缺失的基因靶向载体(1003)的关键特征如下：阴性选择基因，诸如编码白喉毒素A亚基(DTA，1059)的基因或单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(未示出)；来自λ基因座中小鼠Vλx/Vλ2可变区基因区段的5’的4Kb基因组DNA(1025)；FRT位点(1027)；包含小鼠Polr2a基因启动子的基因组DNA片段(1029)；翻译起始序列(嵌入“Kozak”共有序列中的甲硫氨酸密码子)(1035)；用于Cre重组酶的突变loxP识别序列(lox5171)(1031)；转录终止/多腺苷酸化序列(1033)；编码赋予对嘌呤霉素抗性的蛋白的开放阅读框(1037)，而该开放阅读框位于相对于Polr2a启动子及紧邻其的翻译起始序列的反义链上，并且随后是其自身的转录终止/多腺苷酸化序列(1033)；用于Cre重组酶的loxP识别序列(1039)；在与嘌呤霉素抗性基因开放阅读框相同的反义链上的翻译起始序列(嵌入“Kozak”共有序列中的甲硫氨酸密码子)(1035)；鸡β肌动蛋白启动子和被定向为使得其指导嘌呤霉素抗性开放阅读框的转录的巨细胞病毒早期增强子元件(1041)，其中翻译起始于loxP位点下游的起始密码子处，并且继续通过loxP位点回到嘌呤霉素开放阅读框，全部这些都在相对于Polr2a启动子及紧邻其的翻译起始序列的反义链上；用于Flp重组酶的突变识别位点，称为“F3”位点(1043)；在Jλ3、Cλ3、Jλ1和Cλ1基因区段上游的基因组DNA片段(1045)。
根据广泛使用的程序，将来源于C57B1/6NTac小鼠的小鼠胚胎干(ES)细胞通过电穿孔用靶向载体(1003)转染(1002)。同源重组用196Kb区域中来自靶向载体(1003)的序列取代天然DNA，产生1005处描绘的基因组DNA构型。
在电穿孔之前，将载体DNA用稀有切割限制酶线性化，该稀有切割限制酶仅切割原核质粒序列或与其关联的多接头。将转染的细胞铺板，并且在～24小时之后，将其置于使用嘌呤霉素的阳性药物选择下。也存在阴性选择用于已经将载体整合到其DNA中但不是通过同源重组进行整合的细胞。非同源重组导致DTA基因的保留，在基因表达时DTA基因杀死细胞，而DTA基因因为位于与小鼠IGL基因座的载体同源性区域之外而通过同源重组缺失。约一周之后，在药物抗性ES细胞的集落变成裸眼可见之后，将药物抗性ES细胞的集落从其板上物理提取。这些挑选的集落被分解，再铺板于微孔板中，并且培养数天。此后，每个细胞克隆被分配，使得一些细胞被冷冻作为存档材料，并且其余的用于DNA的分离而用于分析目的。
来自ES细胞克隆的DNA通过PCR使用广泛使用的基因靶向测定设计进行筛选。对于这些测定，一种PCR寡核苷酸引物序列定位在靶向载体与基因组DNA之间共有同一性的区域之外，而另一种PCR寡核苷酸引物序列定位在载体中有基因组同一性的两条臂之间的新DNA中，例如puro基因(1037)中。根据标准设计，这些测定检测仅存在于来源于转染细胞的细胞克隆中的DNA片段，所述转染细胞已经经历靶向载体(1003)与天然DNA(1001)之间完全正常的同源重组。
选择来自转染(1002)的6个PCR阳性克隆进行扩增，随后使用DNA印迹测定进一步分析。DNA印迹包括三种探针和来自已经用所选的多种限制酶消化的克隆的基因组DNA，使得探针和消化物的组合允许鉴定ES细胞DNA是否已经通过同源重组被适当修饰。
ES细胞的6个PCR阳性克隆和DNA印迹阳性克隆的核型使用被设计为区分小鼠ES细胞中出现的最常见的染色体畸变的原位荧光杂交程序进行分析。显示畸变迹象的克隆被排除在进一步使用之外。选择基于DNA印迹数据被判断为具有预期的正确基因组结构的核型正常克隆用于进一步使用。
在其免疫球蛋白λ链基因座的两个同源拷贝之一中携带缺失的ES细胞克隆用Cre重组酶表达载体与包含部分犬科动物免疫球蛋白λ链基因座的DNA片段(1007)一起再转染(1004)，所述部分犬科动物免疫球蛋白λ链基因座包含Vλ、Jλ和Cλ区基因区段。该DNA片段(1007)的关键特征如下：lox5171位点(1031)；新霉素抗性基因开放阅读框(1047)，该开放阅读框缺乏起始甲硫氨酸密码子，但符合框并与lox5171位点中的不间断开放阅读框同框邻接；FRT位点(1027)；76个功能性犬科动物λ区基因区段的阵列(1051)，每个区段具有嵌入小鼠λ非编码序列中的犬科动物λ编码序列；J-C单元的阵列(1055)，其中每个单元具有嵌入来自小鼠λ基因座的非编码序列中的犬科动物Jλ基因区段和小鼠λ恒定结构域基因区段(犬科动物Jλ基因区段是编码Jλ1、Jλ2、Jλ3、Jλ4、Jλ5、Jλ6和Jλ7的那些基因区段，而小鼠λ恒定结构域基因区段是Cλ1或Cλ2或Cλ3)；用于Flp重组酶的突变识别位点，称为“F3”位点(1043)；赋予潮霉素抗性的开放阅读框(1057)，其位于相对于构建体中免疫球蛋白基因区段编码信息的反义链上；与lox5171位点在相反的相对方向的loxP位点(1039)。
犬科动物Vλ和Jλ基因编码区的序列在表3中。
将转染的克隆置于G418或潮霉素选择下，这富集了已经经历RMCE过程的细胞克隆，其中部分犬科动物供体DNA以其整体被整合到由基因靶向载体置于其处的lox5171与loxP位点之间缺失的免疫球蛋白λ链基因座中。来自靶向载体(1003)中的剩余元件经由FLP介导的重组(1006)在体外或体内去除，产生如1011处所示的最终犬科动物化的基因座。
G418/潮霉素抗性ES细胞克隆通过PCR和DNA印迹分析，以确定它们是否已经经历预期的重组酶介导的盒交换过程而没有不想要的重排或缺失。选择具有预期基因组结构的克隆用于进一步使用。
根据标准程序，将小鼠λ链基因座中携带部分犬科动物免疫球蛋白DNA(1011)的ES细胞克隆显微注射到来自品系DBA/2的小鼠胚泡中，以产生部分ES细胞来源的嵌合小鼠。选择对其皮毛具有最高的ES细胞来源贡献水平的雄性嵌合小鼠与雌性小鼠交配。这里选择的雌性小鼠是C57B1/6NTac品系，该C57B1/6NTac品系携带编码在其种系中表达的Flp重组酶的转基因。分析来自这些交配的后代的部分犬科动物免疫球蛋白λ链基因座的存在，以及在RMCE步骤中产生的侧翼为FRT的新霉素抗性基因和侧翼为F3的潮霉素抗性基因的损失。携带部分犬科动物基因座的小鼠用于建立小鼠的集落。
在一些方面，包含基于犬科动物的重链和κ基因座的小鼠(如实施例3和4中描述的)被育种为携带基于犬科动物的λ基因座的小鼠。从这种类型的育种方案产生的小鼠的基于犬科动物的重链基因座是纯合的，并且K-K基于犬科动物的基因座或L-K基于犬科动物的基因座可以是纯合的。可选地，它们可以在κ基因座处是杂合的，在一条染色体上携带K-K基因座，并且在另一条染色体上携带L-K基因座。这些小鼠品系中的每一个的基于犬科动物的λ基因座都是纯合的。从这些小鼠中回收的单克隆抗体具有在一些情况下与犬科动物κ可变结构域配对并且在其他情况下与犬科动物λ可变结构域配对的犬科动物重链可变结构域。λ可变结构域来源于基于犬科动物的L-K基因座或基于犬科动物的λ基因座。
实施例6：将工程化部分犬科动物免疫球蛋白微基因座引入到小鼠基因组中
在某些其他方面，部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含犬科动物可变结构域微基因座，诸如图11中图示的。这里，不是部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含全部或大体上全部犬科动物VH基因区段编码序列，而是小鼠免疫球蛋白基因座被包含更少嵌合犬科动物VH基因区段(例如，1-39个犬科动物VH基因区段被确定为是功能性的；也就是说，不是假基因)的微基因座(1119)取代。
将包含待整合到哺乳动物宿主基因组中的部分犬科动物免疫球蛋白基因座的位点特异性靶向载体(1131)引入(1102)到基因组区域(1101)中，其中缺失的内源免疫球蛋白基因座包含puro-TK基因(1105)和以下在侧翼的序列特异性重组位点：突变体FRT位点(1109)、突变体LoxP位点(1111)、野生型FRT位点(1107)和野生型LoxP位点(1105)。位点特异性靶向载体包含i)任选的PAIR元件的阵列(1141)；ii)包含例如1-39个功能性犬科动物VH编码区和基于小鼠基因组内源序列的间插序列的VH基因座(1119)；iii)包含小鼠序列的21.6kb前D区(1121)；iv)包含6个D和6个JH犬科动物编码序列和基于小鼠基因组内源序列的间插序列的D基因座(1123)和JH基因座(1125)。部分犬科动物免疫球蛋白基因座的侧翼是允许与修饰的内源基因座重组的重组位点：突变体FRT(1109)、突变体LoxP(1111)、野生型FRT(1107)和野生型loxP(1105)。在引入适当的重组酶，例如Cre(1104)后，部分犬科动物免疫球蛋白基因座被整合到恒定基因区(1127)上游的基因组中，如1129处所示。
如实施例1中描述的，引入部分犬科动物免疫球蛋白可变区基因座的初级筛选通过次级DNA印迹测定支持的初级PCR筛选进行。作为重组事件的一部分，puro-TK基因(1105)的缺失允许使用更昔洛韦阴性选择来鉴定没有经历重组事件的细胞。
实施例7：引入具有嵌入κ免疫球蛋白非编码序列中的犬科动物λ可变区编码序列 与小鼠λ恒定区序列的工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座
犬抗体大多包含λ轻链，而小鼠抗体大多包含κ轻链。为了增加包含λLC的抗体的产生，将内源小鼠Vκ和Jκ用部分犬科动物基因座取代，该部分犬科动物基因座包含嵌入小鼠Vκ区侧翼和调控序列的Vλ和Jλ基因区段编码序列，即实施例4的L-K小鼠。在这样的小鼠中，促进高水平κ基因座重排和表达的内源调控序列被预测为对异位λ基因座具有等同效果。然而，体外研究展示出，犬科动物Vλ结构域对小鼠的Cκ没有良好地发挥功能(参见实施例9)。因此，L-K小鼠中包含λLC的抗体的预期增加可能不会发生。作为一种替代策略，将内源小鼠Vκ和Jκ用部分犬科动物基因座取代，该部分犬科动物基因座包含嵌入小鼠Vκ区侧翼和调控序列中的Vλ和Jλ基因区段编码序列，并且将小鼠Cκ用小鼠Cλ取代。
图13是图示引入工程化部分犬科动物轻链可变区基因座的示意图，其中一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列被插入到一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列上游的啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座中，所述一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列位于一个或更多个啮齿动物Cλ区编码序列的上游。
图13图示了用部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代小鼠基因组的一部分的方法。该方法包括将第一位点特异性重组酶识别序列引入到小鼠基因组中，随后将第二位点特异性重组酶识别序列引入到小鼠基因组中，该第一位点特异性重组酶识别序列可以被引入小鼠基因组的内源Vκ(1315)和Jκ(1319)区基因区段和Cκ(1321)外显子的簇的5’或3’，与第一序列特异性重组位点组合的该第二位点特异性重组酶识别序列位于包含Vκ和Jκ基因区段和Cκ外显子的簇的整个基因座的侧翼。有侧翼的区域缺失，并且然后使用相关的位点特异性重组酶用部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代，如本文描述的。
用于在Vκ(1315)基因区段和Cκ外显子(1321)的任一侧引入位点特异性重组序列的靶向载体也包含另外的位点特异性重组序列，该另外的位点特异性重组序列已经被修饰使得它仍然被重组酶有效识别，但是不与未修饰的位点重组。该位点位于靶向载体中，使得在Vκ和Jκ基因区段簇和Cκ外显子缺失之后，它可以用于其中非天然的DNA片段经由RMCE移入到修饰的Vκ基因座中的第二位点特异性重组事件。在本实施例中，非天然的DNA是包含嵌入在小鼠IGK调控和侧翼序列中的犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列和一个或更多个小鼠Cλ外显子的合成核酸。
构建两个基因靶向载体来完成刚刚概述的方法。载体之一(1303)包含取自最远端Vκ基因区段上游的基因座的5’末端的小鼠基因组DNA。另一个载体(1305)包含取自跨越Cκ外显子(1321)上游(5’)和下游(3’)的区域中的基因座内的小鼠基因组DNA。
5’载体(1303)的关键特征如下：在与来自多瘤病毒的两个突变体转录增强子偶联的修饰的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因启动子的转录控制下编码白喉毒素A(DTA)亚基的基因(1323)；在κ链基因座中最远端可变区基因的上游定位的6Kb小鼠基因组DNA(1325)；用于Flp重组酶的FRT识别序列(1327)；包含小鼠Polr2a基因启动子的基因组DNA片段(1329)；翻译起始序列(1335，嵌入“Kozak”共有序列中的甲硫氨酸密码子)；用于Cre重组酶的突变loxP识别序列(lox5171)(1331)；转录终止/多腺苷酸化序列(1333)；用于Cre重组酶的loxP识别序列(1337)；在来自小鼠磷酸甘油酸激酶1基因的启动子的转录控制下编码融合蛋白的基因(1339)，所述融合蛋白具有与胸苷激酶的截短形式融合的赋予嘌呤霉素抗性的蛋白(pu-TK)；在载体中5’末端并以天然的相对方向排列的6Kb序列附近定位的2.5Kb小鼠基因组DNA(1341)。
3’载体(1305)的主要特征如下：在跨越Cκ外显子上游(5’)和下游(3')的区域中的基因座内定位的6Kb小鼠基因组DNA(1343)；在小鼠Polr2a基因启动子的转录控制下编码人类次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)的基因(1345)；在小鼠磷酸甘油酸激酶1基因启动子控制下的新霉素抗性基因(1347)；用于Cre重组酶的loxP识别序列(1337)；在紧邻载体5’末端处包含的6Kb DNA片段的基因组下游定位的3.6Kb小鼠基因组DNA(1349)，其中两个片段以与小鼠基因组相同的相对方式取向；在与来自多瘤病毒的两个突变体转录增强子偶联的修饰的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因启动子的转录控制下编码白喉毒素A(DTA)亚基的基因(1323)。
使内源小鼠IGK基因座缺失的一种策略是将3’载体(1305)插入小鼠Cκ外显子(1321)下游的侧翼区。然而，需要保留在修饰基因座中的3'κ增强子位于Cκ外显子下游9.1Kb，这太短不能容纳3’载体的上游和下游同源臂(总计9.6Kb)。因此，同源性上游区域被扩展。
根据广泛使用的程序，将来源于C57B1/6NTac小鼠的小鼠胚胎干(ES)细胞通过电穿孔用3’载体(1305)转染。在电穿孔之前，将载体DNA用稀有切割限制酶线性化，该稀有切割限制酶仅切割原核质粒序列或与其关联的多接头。将转染的细胞铺板，并且在～24小时之后，将其置于使用新霉素类似物药物G418对已经将3’载体整合到其DNA中的细胞进行的阳性选择下。也存在阴性选择用于已经将载体整合到其DNA中但不是通过同源重组进行整合的细胞。非同源重组保留DTA基因，在基因表达时DTA基因杀死细胞，但DTA基因因为位于与小鼠Igκ基因座的载体同源性区域之外而通过同源重组缺失。约一周之后，在药物抗性ES细胞的集落为裸眼可见之后，将药物抗性ES细胞的集落从其板上物理提取。这些集落被分解，再铺板于微孔板中，并且培养数天。此后，每个细胞克隆被分配，一些细胞被冷冻作为存档材料，并且其余的用于DNA的分离而用于分析目的。
来自ES细胞克隆的DNA通过PCR使用广泛使用的基因靶向测定设计进行筛选。对于该测定，一种PCR寡核苷酸引物序列定位在3’载体(1305)与基因组DNA(1301)之间共有同一性的区域之外，而另一种PCR寡核苷酸引物序列定位在载体中有基因组同一性的两条臂之间的新DNA中，即HPRT(1345)或新霉素抗性(1347)基因中。根据标准设计，这些测定检测仅存在于来源于转染细胞的ES细胞克隆中的DNA片段，所述转染细胞已经经历3’载体(1305)与内源小鼠Igκ基因座之间完全正常的同源重组。两次单独的转染用3’载体(1305)进行。选择来自两次转染的PCR阳性克隆进行扩增，随后使用DNA印迹测定进一步分析。
DNA印迹测定根据广泛使用的程序使用三种探针和用所选的多种限制酶消化的基因组DNA进行，使得探针和消化物的组合允许得出关于以下的结论：克隆中靶向的基因座的结构以及其是否通过同源重组被适当修饰。第一探针定位至位于3’κ靶向载体(1305)与基因组DNA之间共有同一性的区域5’侧的侧翼的DNA序列；第二探针还定位在同一性区域之外，但在3’侧；第三探针定位在载体中有基因组同一性的两个臂之间的新DNA中，即在HPRT(1345)或新霉素抗性(1347)基因中。DNA印迹鉴定预期限制酶产生的DNA片段的存在，所述DNA片段对应于由一种外部探针和由新霉素抗性或HPRT基因探针检测到的经正确突变(即通过使用3’κ靶向载体(1305)的同源重组)的κ基因座的一部分。外部探针检测突变体片段和也检测来自同源染色体上免疫球蛋白κ基因座的非突变体拷贝的野生型片段。
ES细胞的PCR阳性克隆和DNA印迹阳性克隆的核型使用被设计为区分小鼠ES细胞中出现的最常出现的染色体畸变的原位荧光杂交程序进行分析。具有这样的畸变的克隆被排除在进一步使用之外。选择基于DNA印迹数据被判断为具有预期的正确基因组结构的核型正常克隆用于进一步使用。
然后可接受的克隆用5’载体(1303)使用以下程序和筛选测定进行修饰：所述程序和筛选测定在设计上类似于与3’载体(1305)一起使用的那些程序和筛选测定，不同之处在于使用嘌呤霉素选择替代G418/新霉素选择，并且定制方案以匹配由5’载体(1303)修饰的基因组区域。5’载体(1303)转染实验的目标是分离出已经被3’载体(1305)和5’载体(1303)二者以预期方式突变的ES细胞克隆，即携带两种工程化突变的双重靶向细胞。在这些克隆中，Cre重组酶引起由两个载体引入到κ基因座中的loxP位点之间发生重组(1302)，产生1307处所示的基因组DNA构型。
此外，与同源染色体相反，克隆必须在同一条染色体上经历基因靶向；即通过靶向载体产生的工程化突变必须在同一条DNA链上呈顺式，而不是在分开的同源DNA链上呈反式。将具有顺式排列的克隆与具有反式排列的克隆通过分析程序诸如使用探针的中期涂片的荧光原位杂交区分开，所述探针与存在于两个基因靶向载体(1303和1305)的其有基因组同一性的臂之间的新DNA杂交。两种类型的克隆也可以通过以下来彼此区分开：用表达Cre重组酶的载体(如果靶向载体已经以顺式整合，则该载体使pu-TK(1339)、HPRT(1345)和新霉素抗性(1347)基因缺失)转染它们，并且将针对通过5’载体(1303)引入的胸苷激酶基因进行更昔洛韦选择而存活的集落数进行比较，并且通过“亲缘种选择”筛选程序(其中测试了来自克隆的一些细胞对嘌呤霉素或G418/新霉素的抗性)分析存活克隆的药物抗性表型。具有顺式突变排列的细胞预期比具有反式排列的细胞产生大约多103个更昔洛韦抗性克隆。大多数所得的顺式来源的更昔洛韦抗性克隆应该也对嘌呤霉素和G418/新霉素二者都敏感，相比之下，反式来源的更昔洛韦抗性克隆应该对这两种药物都保留抗性。选择κ链基因座中具有工程化突变的顺式排列的细胞克隆用于进一步使用。
将双重靶向细胞克隆用表达Cre重组酶的载体瞬时转染(1302)，并且随后将转染的细胞置于更昔洛韦选择下，如在以上总结的分析实验中的那样。分离出更昔洛韦抗性的细胞克隆，并且通过PCR和DNA印迹分析由5’载体(1303)和3’载体(1305)产生的两个工程化突变之间的预期缺失(1307)的存在。在这些克隆中，Cre重组酶引起由两个载体引入到κ链基因座中的loxP位点(1337)之间发生重组。因为loxP位点在两个载体中以相同的相对方向排列，重组导致包含两个loxP位点之间整个基因组区间的DNA圈被切下。该圈不包含复制起点，并且因此在有丝分裂期间不被复制，并且因此在细胞经历克隆增殖时从细胞克隆中损失。所得的克隆携带最初位于两个loxP位点之间的DNA缺失，并且具有1307处示出的基因组结构。选择具有预期缺失的克隆用于进一步使用。
在其免疫球蛋白κ链基因座的两个同源拷贝之一中携带序列缺失的ES细胞克隆用Cre重组酶表达载体与包含部分犬科动物免疫球蛋白λ链基因座的DNA片段(1309)一起再转染(1304)，所述部分犬科动物免疫球蛋白λ链基因座包含Vλ(1351)和Jλ(1355)基因区段编码序列和一个或更多个小鼠Cλ外显子(1357)。该DNA片段的关键特征如下：lox5171位点(1331)；新霉素抗性基因开放阅读框(1347，缺乏起始甲硫氨酸密码子，但符合框并与lox5171位点(1331)中的不间断开放阅读框邻接)；FRT位点(1327)；1-76个功能性犬科动物Vλ可变区基因区段的阵列(1351)，每个区段具有嵌入小鼠非编码调控或支架序列中的犬科动物编码序列；任选地，来自紧邻小鼠κ链基因座中的Jκ区基因区段簇上游的13.5Kb基因组DNA片段(未示出)；包含嵌入小鼠非编码DNA(1355)和一个或更多个小鼠Cλ外显子(1357)中的1-7个犬科动物Jλ区基因区段的2Kb DNA片段；与lox5171位点(1331)在相反的相对方向的loxP位点(1337)。该DNA片段还包含缺失的iEκ(未示出)。
犬科动物Vλ和Jλ基因编码区的序列在表3中。
将转染的细胞置于G418选择下，这富集了已经经历RMCE的细胞克隆，其中部分犬科动物供体DNA(1309)以其整体被整合到分别由5’(1303)和3’(1305)载体置于其处的lox5171(1331)与loxP(1337)位点之间缺失的免疫球蛋白κ链基因座中。仅已经适当地经历RMCE的细胞才具有表达新霉素抗性基因(1347)的能力，因为其表达所要求的启动子(1329)和起始甲硫氨酸密码子(1335)不存在于载体(1309)中，并且已经预先存在于宿主细胞IGK基因座(1307)中。由RMCE产生的DNA区域在1311处示出。来自5’载体(1303)中的剩余元件经由Flp介导的重组(1306)在体外或体内去除，产生如1313处所示的最终基于犬科动物的轻链基因座。
G418抗性ES细胞克隆通过PCR和DNA印迹分析，以确定它们是否已经经历预期的RMCE过程而没有不想要的重排或缺失。选择具有预期基因组结构的克隆用于进一步使用。
根据标准程序，将小鼠κ链基因座(1313)中携带部分犬科动物免疫球蛋白DNA的克隆显微注射到来自品系DBA/2的小鼠胚泡中，以产生部分ES细胞来源的嵌合小鼠。选择对其皮毛具有最高的ES细胞来源贡献水平的雄性嵌合小鼠与雌性小鼠交配。选择用于在交配中使用的雌性小鼠是C57B1/6NTac品系，并且还携带编码在其种系中表达的Flp重组酶的转基因。分析来自这些交配的后代的部分犬科动物免疫球蛋白λ轻链基因座的存在，以及在RMCE步骤中产生的侧翼为FRT的新霉素抗性基因的损失。携带部分犬科动物基因座的小鼠用于建立小鼠的集落。
如实施例3中描述地产生的携带部分犬科动物重链基因座的小鼠可以与携带基于犬科动物λ的κ链基因座的小鼠一起育种。继而将它们的后代在一个方案中一起育种，最终产生的小鼠的两个基于犬科动物的基因座(即，基于犬科动物的重链和基于λ的λ)均是纯合的。这样的小鼠产生具有犬科动物可变结构域和小鼠恒定结构域的部分犬科动物重链。这样的小鼠还从其κ基因座产生具有犬科动物λ可变结构域和小鼠λ恒定结构域的部分犬科动物λ蛋白。从这些小鼠中回收的单克隆抗体具有与犬科动物λ可变结构域配对的犬科动物重链可变结构域。
育种方案的一种变化形式包括产生这样的小鼠，所述小鼠的基于犬科动物的重链基因座是纯合的，但在κ基因座处是杂合的，使得在一条染色体上它们具有实施例4中描述的K-K基于犬科动物的基因座，并且在另一条染色体上它们具有本实施例中描述的基于部分犬科动物λ的κ基因座。这样的小鼠产生具有犬科动物可变结构域和小鼠恒定结构域的部分犬科动物重链。这样的小鼠还从其κ基因座之一产生具有犬科动物κ可变结构域和小鼠κ恒定结构域的部分犬科动物κ蛋白。从另一个κ基因座，产生包含犬科动物λ可变结构域和小鼠λ恒定结构域的部分犬科动物λ蛋白。从这些小鼠中回收的单克隆抗体包括在一些情况下与犬科动物κ可变结构域配对并且在其他情况下与犬科动物λ可变结构域配对的犬科动物可变结构域。
实施例8.引入具有嵌入小鼠κ免疫球蛋白非编码序列的犬科动物λ可变区编码序 列与小鼠λ恒定区序列的工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座
本实施例描述了实施例7的一种替代策略，其中将内源小鼠Vκ和Jκ用部分犬科动物基因座取代，该部分犬科动物基因座包含嵌入小鼠Vκ区侧翼和调控序列的犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列，并且将小鼠Cκ用小鼠Cλ取代。然而，在本实施例中，包含部分犬科动物基因座的靶向载体的结构是不同的。犬科动物V基因座编码序列包含处于距离1个至76个功能性Vλ基因区段编码序列的任何地方的阵列，随后是Jλ-Cλ串联盒阵列，其中Jλ是犬科动物来源的，并且Cλ是小鼠来源的，例如Cλ1、Cλ2或Cλ3。盒的数量范围为一个至七个独特功能性犬科动物Jλ基因区段的数量。本实施例中部分犬科动物λ基因座的整体结构类似于内源小鼠λ基因座，而实施例7中基因座的结构类似于内源小鼠κ基因座，该内源小鼠κ基因座在本实施例中被部分犬科动物λ基因座取代。
图14是图示了引入工程化部分犬科动物轻链可变区基因座的示意图，其中一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列被插入到Jλ-Cλ串联盒阵列上游的啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座中，其中Jλ来自犬科动物来源的，并且Cλ来自小鼠来源的，例如，Cλ1、Cλ2或Cλ3。
图14图示了用部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代小鼠基因组的一部分的方法。该方法提供了将第一位点特异性重组酶识别序列引入到小鼠基因组中，随后将第二位点特异性重组酶识别序列引入到小鼠基因组中，该第一位点特异性重组酶识别序列可以被引入小鼠基因组的内源Vκ(1415)和Jκ(1419)区基因区段和Cκ(1421)外显子的簇的5’或3’，与第一序列特异性重组位点组合的该第二位点特异性重组酶识别序列位于包含Vκ和Jκ基因区段和Cκ外显子的簇的整个基因座的侧翼。有侧翼的区域缺失，并且然后使用相关的位点特异性重组酶用部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代，如本文描述的。
用于在Vκ(1415)基因区段和Cκ外显子(1421)的任一侧引入位点特异性重组序列的靶向载体也包含另外的位点特异性重组序列，该另外的位点特异性重组序列已经被修饰使得它仍然被重组酶有效识别，但是不与未修饰的位点重组。该位点位于靶向载体中，使得在Vκ和Jκ基因区段簇和Cκ外显子缺失之后，它可以用于其中非天然的DNA片段经由RMCE移入到修饰的Vκ基因座中的第二位点特异性重组事件。在本实施例中，非天然的DNA是包含犬科动物Vλ基因区段编码序列阵列和Jλ-Cλ串联盒阵列的合成核酸，其中Jλ是犬科动物来源的，并且Cλ是小鼠来源的，例如嵌入小鼠IGK调控和侧翼序列中的Cλ1、Cλ2或Cλ3。
构建两个基因靶向载体来完成刚刚概述的方法。载体之一(1403)包含取自最远端Vκ基因区段上游的基因座的5’末端的小鼠基因组DNA。另一个载体(1405)包含取自跨越Cκ外显子(1321)上游(5’)和下游(3’)的区域中的基因座内的小鼠基因组DNA。
实施例7中描述了5’载体(1403)和3’载体(1405)的关键特征。
根据如实施例7中描述的广泛使用的程序，将来源于C57B1/6NTac小鼠的小鼠胚胎干(ES)细胞通过电穿孔用3’载体(1405)转染。来自ES细胞克隆的DNA通过PCR使用如实施例7中描述的广泛使用的基因靶向测定进行筛选。DNA印迹测定根据如实施例7中描述的广泛使用的程序进行。
ES细胞的PCR阳性克隆和DNA印迹阳性克隆的核型使用被设计为区分小鼠ES细胞中出现的最常出现的染色体畸变的原位荧光杂交程序进行分析。具有这样的畸变的克隆被排除在进一步使用之外。选择基于DNA印迹数据被判断为具有预期的正确基因组结构的核型正常克隆用于进一步使用。
可接受的克隆使用如实施例7中描述的程序和筛选测定用5’载体(1403)进行修饰。所得的正确靶向的ES克隆具有内源κ基因座的基因组DNA构型，其中5’载体(1403)被插入内源Vκ基因区段的上游，并且3’载体(1405)被插入内源Cκ的下游。在这些克隆中，Cre重组酶引起由两个载体引入到κ基因座中的loxP位点之间发生重组(1402)，产生1407处所示的基因组DNA构型。
与同源染色体相反，可接受的克隆在同一条染色体上经历基因靶向；使得通过靶向载体产生的工程化突变在同一条DNA链上呈顺式，而不是在分开的同源DNA链上呈反式。将具有顺式排列的克隆与具有反式排列的那些克隆通过如实施例7中描述的分析程序区分开。
将双重靶向细胞克隆用表达Cre重组酶的载体瞬时转染(1402)，并且随后将转染的细胞置于更昔洛韦选择下，并且使用如实施例7中描述的程序进行分析。在选择的克隆中，Cre重组酶已经引起在由两个载体引入到κ链基因座中的loxP位点(1437)之间发生重组。因为loxP位点在两个载体中以相同的相对方向排列，重组导致包含两个loxP位点之间整个基因组区间的DNA圈被切下。该圈不包含复制起点，并且因此在有丝分裂期间不被复制，并且因此在细胞经历克隆增殖时从细胞克隆中损失。所得的克隆携带最初位于两个loxP位点之间的DNA缺失，并且具有1407处示出的基因组结构。选择具有预期缺失的克隆用于进一步使用。
在其免疫球蛋白κ链基因座的两个同源拷贝之一中携带序列缺失的ES细胞克隆用Cre重组酶表达载体与包含部分犬科动物免疫球蛋白λ链基因座的DNA片段(1409)一起再转染(1404)，所述部分犬科动物免疫球蛋白λ链基因座包含嵌入在小鼠IGK侧翼和调控DNA序列(1457)中的Vλ(1451)区段编码序列和犬科动物Jλ基因区段编码序列和一个或更多个小鼠Cλ外显子的串联盒阵列。该DNA片段的关键特征如下：lox5171位点(1431)；新霉素抗性基因开放阅读框(1447，缺乏起始甲硫氨酸密码子，但符合框并与lox5171位点(1431)中的不间断开放阅读框邻接)；FRT位点(1427)；1-76个功能性犬科动物Vλ可变区基因区段的阵列(1451)，每个区段包含嵌入小鼠非编码调控或支架序列中的犬科动物编码序列；任选地，来自紧邻小鼠κ链基因座中的Jκ区基因区段簇上游的13.5Kb基因组DNA片段(未示出)；包含含有嵌入小鼠IGK侧翼和调控DNA序列中的犬科动物Jλ基因区段编码序列和一个或更多个小鼠Cλ外显子的串联盒阵列的DNA(1457)；与lox5171位点(1431)在相反的相对方向的loxP位点(1437)。
犬科动物Vλ和Jλ基因编码区的序列在表3中。
将转染的细胞置于G418选择下，这富集了已经经历RMCE的细胞克隆，其中部分犬科动物供体DNA(1409)以其整体被整合到分别由5’(1403)和3’(1405)载体置于其处的lox5171(1431)与loxP(1437)位点之间缺失的免疫球蛋白κ链基因座中。仅适当地经历RMCE的细胞才具有表达新霉素抗性基因(1447)的能力，因为其表达所要求的启动子(1429)和起始甲硫氨酸密码子(1435)不存在于载体(1409)中，并且已经预先存在于宿主细胞IGK基因座(1407)中。由RMCE产生的DNA区域在1411处示出。来自5’载体(1403)中的剩余元件经由Flp介导的重组(1406)在体外或体内去除，产生如1413处所示的最终基于犬科动物的轻链基因座。
G418抗性ES细胞克隆通过PCR和DNA印迹分析，以确定它们是否已经经历预期的RMCE过程而没有不想要的重排或缺失。选择具有预期基因组结构的克隆用于进一步使用。
根据标准程序，将小鼠κ链基因座(1413)中携带部分犬科动物免疫球蛋白DNA的克隆显微注射到来自品系DBA/2的小鼠胚泡中，以产生部分ES细胞来源的嵌合小鼠。选择对其皮毛具有最高的ES细胞来源贡献水平的雄性嵌合小鼠与雌性小鼠交配。选择用于在交配中使用的雌性小鼠是C57B1/6NTac品系，并且还携带编码在其种系中表达的Flp重组酶的转基因。分析来自这些交配的后代的部分犬科动物免疫球蛋白λ轻链基因座的存在，以及在RMCE步骤中产生的侧翼为FRT的新霉素抗性基因的损失。携带部分犬科动物基因座的小鼠用于建立小鼠的集落。
如实施例3中描述地产生的携带部分犬科动物重链基因座的小鼠可以与携带基于犬科动物λ的κ链基因座的小鼠一起育种。继而将它们的后代在一个方案中一起育种，最终产生的小鼠的两个基于犬科动物的基因座(即，基于犬科动物的重链和基于λ的κ)均是纯合的。这样的小鼠产生具有犬科动物可变结构域和小鼠恒定结构域的部分犬科动物重链。这样的小鼠还从其κ基因座产生具有犬科动物λ可变结构域和小鼠λ恒定结构域的部分犬科动物λ蛋白。从这些小鼠中回收的单克隆抗体具有与犬科动物λ可变结构域配对的犬科动物重链可变结构域。
育种方案的一种变化形式包括产生这样的小鼠，所述小鼠的基于犬科动物的重链基因座是纯合的，但在κ基因座处是杂合的，使得在一条染色体上它们具有实施例4中描述的K-K基于犬科动物的基因座，并且在另一条染色体上它们具有本实施例中描述的基于部分犬科动物λ的κ基因座。这样的小鼠产生具有犬科动物可变结构域和小鼠恒定结构域的部分犬科动物重链。这样的小鼠还从其κ基因座之一产生具有犬科动物κ可变结构域和小鼠κ恒定结构域的部分犬科动物κ蛋白。从另一个κ基因座，这样的小鼠产生具有犬科动物λ可变结构域和小鼠λ恒定结构域的部分犬科动物λ蛋白。从这些小鼠中回收的单克隆抗体具有在一些情况下与犬科动物κ可变结构域配对并且在其他情况下与犬科动物λ可变结构域配对的犬科动物可变结构域。
以上描述的用于引入工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座的方法包括小鼠Cκ外显子的缺失，该工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座具有嵌入小鼠κ免疫球蛋白非编码序列中的犬科动物λ可变区编码序列和小鼠λ恒定区序列。替代方法包括通过突变其剪接受体位点使Cκ外显子失活。内含子必须通过称为RNA剪接的过程从初级mRNA转录物中去除，在该过程中，位于核中的大分子机器剪接体识别内含子5’(剪接供体)和3’(剪接受体)末端处的序列以及内含子的其他特征，包括位于紧邻剪接受体上游的多聚嘧啶区。DNA中的剪接供体序列是NGT，其中“N”是任何脱氧核苷酸，并且剪接受体是AGN(Cech TR、Steitz JA和Atkins JF编著(2019)(RNA Worlds:New Tools for Deep Exploration,CSHL Press)ISBN978-1-621822-24-0)。
小鼠Cκ外显子通过使其剪接受体序列和多聚嘧啶区突变而失活。Cκ外显子上游的野生型序列是CTTCCTTCCTCAG(SEQ ID NO:470)(对剪接受体位点加下划线)。它突变为AAATTAATTAACC(SEQ ID NO:471)，产生非功能性剪接受体位点并且因此产生非功能性Cκ外显子。突变体序列还引入PacI限制酶位点(加下划线的)。作为八个碱基对的识别序列，该限制性位点预期很少存在于小鼠基因组中(～每65,000bp)，使得通过对已经用PacI和另一种更常见切割的限制酶消化的ES细胞DNA进行DNA印迹分析来检测突变体序列是否已经插入到IGK位点变得简单。野生型序列通过本领域广泛已知的关于将3’RMCE载体插入的技术同源重组被突变体序列取代。用于使Cκ外显子剪接受体序列和多聚嘧啶区突变的同源重组载体(MSA，1457)的关键特征如下：6Kb小鼠基因组DNA(1443)，其在跨越Cκ外显子(1421)上游(5’)和下游(3’)的区域中的κ基因座内定位，并且在其天然位置紧邻Cκ外显子上游的包含突变体AAATTAATTAACC(SEQ ID NO:471)(1459)序列而不是野生型CTTCCTTCCTCAG(SEQ IDNO:470)序列；在小鼠磷酸甘油酸激酶1基因启动子(1447)控制下并且侧翼为突变体FRT位点(1461)的新霉素抗性基因；3.6Kb小鼠基因组DNA(1449)，其紧邻在载体5’末端包含的6KbDNA片段的基因组下游定位，其中两个片段以与小鼠基因组相同的相对方式取向；在与来自多瘤病毒的两个突变体转录增强子偶联的修饰的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因启动子的转录控制下编码白喉毒素A(DTA)亚基的基因(1423)。这里使用突变体FRT位点(1461)，例如，FRT F3或FRT F5(Schlake和Bode(1994)Use of mutated FLP recognition target(FRT)sites for the exchange of expression cassettes at defined chromosomalloci.Biochemistry 33:12746-12751PMID:7947678DOI:10.1021/bi00209a003)，因为在剪接突变被引入并且Neo基因通过FLP重组酶表达载体的瞬时转染(1406)而缺失后，ES细胞就经历进一步的遗传操纵。该过程需要野生型FRT位点来使另一个Neo选择基因(1403处的1447)缺失。如果在引入剪接突变之后保留在IGK基因座(1469)中的FRT位点(1461)是野生型，尝试的FRT介导的第二Neo基因(1413处的1406)的缺失可能无意中导致整个新引入的部分犬科动物基因座缺失和小鼠Cκ外显子失活。
根据广泛使用的程序，将来源于C57B1/6NTac小鼠的小鼠胚胎干(ES)细胞通过电穿孔用MSA载体(1457)转染。在电穿孔之前，将载体DNA用稀有切割限制酶线性化，该稀有切割限制酶仅切割原核质粒序列或与其关联的多接头。将转染的细胞铺板，并且在～24小时之后，将其置于通过使用新霉素类似物药物G418对已经将MSA载体整合到其DNA中的细胞进行的阳性选择下。也存在阴性选择用于已经将载体整合到其DNA中但不是通过同源重组进行整合的细胞。非同源重组导致DTA基因的保留，在基因表达时DTA基因杀死细胞，而DTA基因因为位于与小鼠IGK基因座的载体同源性区域之外而通过同源重组缺失。约一周之后，在药物抗性ES细胞的集落变成裸眼可见之后，将药物抗性ES细胞的集落从其板上物理提取。这些挑选的集落被分解，再铺板于微孔板中，并且培养数天。此后，每个细胞克隆被分配，使得一些细胞被冷冻作为存档材料，并且其余的用于DNA的分离用于分析目的。
通过同源重组正确靶向的ES细胞中的IGK基因座具有1463处描绘的构型。
来自ES细胞克隆的DNA通过PCR使用广泛使用的基因靶向测定设计进行筛选。对于该测定，一种PCR寡核苷酸引物序列定位在MSA载体(1457)与基因组DNA(1401)之间共有同一性的区域之外，而另一种PCR寡核苷酸引物序列定位在载体中有基因组同一性的两条臂之间的新DNA，即或新霉素抗性(1447)基因中。根据标准设计，这些测定检测仅存在于来源于转染细胞的ES细胞克隆中的DNA片段，所述转染细胞已经经历MSA载体(1457)与内源小鼠IGK基因座之间完全正常的同源重组。两次单独的转染用MSA载体(1457)进行。选择来自两次转染的PCR阳性克隆进行扩增，随后使用DNA印迹测定进一步分析。
DNA印迹测定根据广泛使用的程序使用三种探针和用所选的多种限制酶消化的基因组DNA进行，使得探针和消化物的组合允许得出关于以下的结论：克隆中靶向的基因座的结构以及其是否通过同源重组被适当修饰。在该特定实施例中，DNA被Pac1和另一种限制酶诸如EcoRI或HindIII双重消化，因为仅具有被整合的MSA载体的细胞才包含PacI位点。第一探针定位至位于MSA载体(1457)与基因组DNA之间共有同一性的区域5’侧的侧翼的DNA序列；第二探针还定位在同一性区域之外，但在3’侧；第三探针定位在载体中有基因组同一性的两个臂之间的新DNA中，即在新霉素抗性(1447)基因中。DNA印迹鉴定预期限制酶产生的DNA片段的存在，该DNA片段对应于由一种外部探针和由新霉素抗性基因探针检测到的经正确突变(即通过使用MSAκ靶向载体(1457)的同源重组)的κ基因座的一部分。外部探针检测突变体片段和也检测来自同源染色体上免疫球蛋白κ基因座的非突变体拷贝的野生型片段。DNA印迹测定根据实施例7中描述的广泛使用的程序进行。
ES细胞的PCR阳性克隆和DNA印迹阳性克隆的核型使用被设计为区分小鼠ES细胞中出现的最常出现的染色体畸变的原位荧光杂交程序进行分析。具有这样的畸变的克隆被排除在进一步使用之外。选择基于DNA印迹数据被判断为具有预期的正确基因组结构的核型正常克隆用于进一步使用。
尽管ES细胞DNA在突变的IGK等位基因中被PacI消化的能力确认了TTAATTAA序列的存在，但是进行了聚焦于Cκ外显子上游区域的DNA测序以确认完全预期剪接突变的存在。该区域通过基因组PCR使用位于突变侧翼的引物[1465和1467(表6：SEQ ID NO:417和SEQID NO:418)]进行扩增。替代引物对示于SEQ ID NO:419和SEQ ID NO:420。这些引物使用NCBI Primer-Blast设计，并且通过计算机验证在小鼠基因组中缺乏任何预测的脱靶结合位点。
经序列验证的ES细胞克隆用FLP重组酶表达载体瞬时转染(1406)，以使新霉素抗性基因(1427)缺失。然后将细胞亚克隆，并且缺失通过PCR来确认。ES细胞中的IGK基因座具有1469处描绘的基因组构型。
如以上描述的，将ES细胞用5’和3’RMCE载体进行电穿孔。唯一的区别是3’载体(1405)被插入在突变体Cκ外显子的上游在图9中示出的位置901处，并且3’载体(1405)的上游和下游同源性臂分别被图9中示出的3’载体(905)的序列943和949取代。结果，用于测试3’载体(1405)正确整合的PCR引物和DNA印迹探针来源于序列943和949，而不是1443和1449。iEκ增强子不包含在靶向载体(1409)中，因为该序列没有缺失。
实施例9：犬科动物Vλ结构域与小鼠Cκ结构域不能发挥良好功能，并且犬科动物Vκ 结构域与小鼠Cλ结构域不能发挥良好功能。
对于所提出的L-K小鼠(实施例4)，侧翼是小鼠非编码和调控序列的犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列被嵌入内源Vκ和Jκ基因区段已从其缺失的小鼠IGK基因座中。在有效Vλ→Jλ基因重排之后，所得的Ig基因编码具有犬科动物λ可变结构域和小鼠κ恒定结构域的LC。为了测试这样的杂交体LC是否被正确表达并形成完整的Ig分子，用Vs(Vκ和Vλ二者)和C轻链外显子(Cκ和Cλ二者)的不同组合与Ig HC一起进行一系列瞬时转染测定，并且测试了编码的Ig的细胞表面和细胞内表达和分泌。
对于这些实验，将与小鼠IgMb同种异型HC连接的犬科动物IGHV3-5(登录号MF785020.1)、IGHV3-19(登录号FJ197781.1)或IGHV4-1(登录号DN362337.1)分别克隆到pCMV载体中。每个编码VH的DNA都包含内源犬科动物L1-内含子-L2和种系VDJ序列，即未突变的VDJ序列。将未突变的犬科动物IGLV3-28(登录号EU305423)或IGKV2-5(登录号EU295719.1)克隆到pFUSE载体中。每个犬科动物VL外显子都与小鼠Cκ、Cλ1或Cλ2的恒定区连接(推定Cλ3具有与Cλ2相同的特性，因为它们具有几乎相同的蛋白序列)。每个VL中的L1-内含子-L2序列都是犬科动物来源的。将293T/17细胞与作为转染对照的人类CD4表达载体加上HC和LC构建体之一以及CD79a/b表达载体共转染。细胞表面表达IgM要求CD79a/b异二聚体。大约24h后，转染的细胞通过流式细胞术经历细胞表面或细胞内染色。为了分析Ig的分泌，将与以上相同的VH基因克隆到包含小鼠IgG2a Fc的pFUSE载体中。将293T/17细胞与作为转染对照的人类CD4(hCD4)表达载体加上以上描述的HC和LC构建体之一共转染。(在这些实验中，也测试了Cλ3)。大约48小时后，收获转染的细胞及其对应的上清液，并且通过蛋白印迹分析HC/LC表达/分泌。
总结从这些实验中获得的数据，在犬科动物IGLV3-28与小鼠Cκ连接时，细胞表面上的IgM表达比相同犬Vλ与Cλ1或Cλ2连接时少至少两倍。同样，在IGKV2-5与小鼠Cλ连接时，表面IgM水平急剧减少。表达缺陷的程度取决于所使用的特定VH基因；一些VH基因允许杂交体轻链的一定细胞表面表达，但其他的更严格。也观察到Ig分泌的相同趋势。
图15示出了用犬科动物IGVL3-28/IGLJ6(1501)或用犬科动物IGVK2-5/IGJK1(1502)表达较不严格的VH基因之一的IGHV3-5的细胞的流式细胞术分析结果。上方一行图是用hCD4 mAb抗体(1509)染色的转染对照，并且底部的图用小鼠IgMb同种异型mAb(1510)染色。未转染的hCD4-细胞(1513)和转染的hCD4+细胞(1514)在全部图中通过不同的阴影直方图指示。未转染的hCD4-细胞的频率由上部行中每幅图左上角的数字指示，并且转染的hCD4+细胞的频率由上部行中每幅图右上角的数字指示。转染效率在全部情况下都类似。然而，在犬科动物Vλ与小鼠Cκ(1503，底部行)连接时，细胞表面上的IgM表达比相同的犬科动物Vλ与小鼠Cλ1或Cλ2(1504，1505，底部行)连接时更少。类似地，在与Cκ(1506，底部行)连接时，犬科动物IgM与Vκ比与Cλ1或Cλ2(1507，1508，底部行)连接时表达更好。底部行各图右上方的数字指示细胞表面IgMb染色的平均荧光强度(MFI)，这是表达水平的定量指示。
图16示出了用犬科动物IGVL3-28/IGLJ6(1601)或用犬科动物IGVK2-5/IGJK1(1602)表达较不严格的VH基因之一的IGHV3-5的细胞的流式细胞术分析结果。这些细胞与图15中的细胞相同，但是对细胞表面小鼠κLC(1609)或小鼠λLC(1610)染色，确认了图15中示出的结果。
图17示出了用犬科动物IGVL3-28/IGLJ6(1701)或用犬科动物IGVK2-5/IGJK1(1702)表达比IGHV3-5更严格的IGHV4-1的细胞的流式细胞术分析结果。上部行图是用hCD4mAb抗体(1709)染色的转染对照，并且底部行图用小鼠IgMb同种异型mAb(1710)染色。未转染的hCD4-细胞(1713)和转染的hCD4+细胞(1714)在全部底部的图中通过不同的阴影直方图指示。未转染的hCD4-细胞的频率由上部行中每幅图左上角的数字指示，并且转染的hCD4+细胞的频率由上部行中每幅图右上角的数字指示。转染效率在全部情况下都类似。然而，在犬科动物Vλ与小鼠Cκ(1703，底部行)连接时，细胞表面上的IgM表达比相同的犬科动物Vλ与小鼠Cλ1或Cλ2(1704，1705，底部行)连接时少得多，尽管这种情况下最好的表达是与Cλ2(1705，底部行)连接。类似地，在与Cκ(1706，底部行)连接时，犬科动物IgM与Vκ比与Cλ1或Cλ2(1707，1708，底部行)连接时表达好得多。事实上，在这种情况下，IgM与Cλ1或Cλ2表达的基本上是检测不到的。底部行各图右上方的数字指示细胞表面IgMb染色的平均荧光强度(MFI)，这是表达水平的定量指示。用小鼠λLC或κLC特异性抗体染色在全部实验中进行，并且确认了用IgMb同种异型mAb染色的结果(未示出)。
图18示出了表达IGHV3-19的细胞的流式细胞术分析结果，在犬科动物Vλ的与小鼠Cκ、与犬科动物IGVL3-28/IGLJ6(1801)或与犬科动物IGVK2-5/IGJK1(1802)一起发挥功能的能力方面，IGHV3-19是所测试的最严格的IGHV基因。上部行图是用hCD4 mAb抗体(1809)染色的转染对照，并且底部行图用小鼠IgMb同种异型mAb(1810)染色。未转染的hCD4-细胞(1813)和转染的hCD4+细胞(1814)在全部底部的图中通过不同的阴影直方图指示。未转染的hCD4-细胞的频率由上部行中每幅图左上角的数字指示，并且转染的hCD4+细胞的频率由上部行中每幅图右上角的数字指示。转染效率在全部情况下都类似。在犬科动物Vλ与小鼠Cκ(1803，底部行)连接时，基本上不存在表面IgM表达，而在犬科动物Vκ与小鼠Cλ1或Cλ2(1807，1808，底部行)连接时，仅存在低水平表达。底部行各图右上方的数字指示细胞表面IgMb染色的平均荧光强度(MFI)，这是表达水平的定量指示。用小鼠λLC或κLC特异性抗体染色在全部实验中进行，并且确认了用IgMb同种异型mAb染色的结果(未示出)。
该分析的结果指示，包含犬科动物Vλ和小鼠Cκ或者犬科动物Vκ和小鼠Cλ1或Cλ2的杂合体轻链在具有μHC的细胞表面上通常表达不良。细胞表面IgM的水平取决于被μHC使用的特定VH，但不存在允许预测特定VH是否允许适度或不允许细胞表面IgM表达的可辨别的模式。由于B细胞的存活取决于IgM BCR的表达，犬科动物Vλ和小鼠Cκ的配对会导致表达λLC的B细胞的发育大大降低。类似地，将犬科动物Vκ与小鼠Cλ1或Cλ2配对会降低表达κ-LC的B细胞的发育。
还测试了具有杂交体或同源LC的Ig的表达和分泌。瞬时转染细胞的上清液和细胞裂解物通过蛋白印迹进行分析。图19A示出了使用与小鼠Cκ、Cλ1、Cλ2或Cλ3配对的犬科动物IGVL3-28和包含犬科动物IGHVH3-5(1901)、IGHVH3-19(1902)或IGHVH4-1(1903)的小鼠IgG2a HC的细胞上清液的结果。图19B示出了使用与小鼠Cκ、Cλ1、Cλ2或Cλ3配对的犬科动物IGVL3-28和包含犬科动物IGHVH3-5(1904)、IGHVH3-19(1905)或IGHVH4-1(1906)的小鼠IgG2a HC的细胞裂解物的结果。将样品在非还原(未示出)或还原条件下电泳，并且将印迹用IgG2a抗体探测。在犬科动物IGVL3-28与小鼠Cκ(1907)配对时，分泌的IgG2a的量始终比在其与Cλ1(1908)、Cλ2(1909)或Cλ3(1910)配对时少得多(图18A)。这种差异不是由于γ2a HC在犬科动物IGVL3-28-小鼠Cκ细胞中的较低表达或增强的降解(因为每组转染子中的水平相似(图19B))，或者是由于被分析的蛋白较少。载量对照Myc(图20A)和GAPDH(图20B)显示每组中的蛋白量几乎相同。图19B中使用的印迹被剥离，并且依次用针对Myc和GAPDH的抗体再探测，并且因此图20A和20B中的泳道与图19B相同。
在另一组实验中，与分泌分析(图21A，非还原条件)平行地检查了犬科动物IGVL3-28-小鼠CκLC在转染细胞中的稳定性(图21B，还原条件)。同样，在LC是犬科动物IGVL3-28-小鼠Cκ(图2A，2102)时，分泌比在其是犬科动物IGVL3-28-小鼠Cλ1(图2A，2103)或IGVL3-28-小鼠Cλ2(图2A，2104)时少得多的IgG2a。然而，在用抗κ抗体可检测到的IGVL3-28-小鼠Cκ细胞裂解物中存在显著量的细胞内κLC(图2B，2102)，与LC是犬科动物IGVK2-5-小鼠Cκ(图20B，2105)时观察到的水平类似。因此，杂交体IGVL3-28-小鼠Cκ表达良好，并且在细胞内没有快速降解。在该特定犬科动物VH-VK组合中，在其附接至Vκ(2105)、Cλ1(2106)或Cλ2(2107)时，使用VK2-5的犬科动物IgG2a的分泌是类似的。
图21A和21B中的结果指示，携带杂交体犬科动物Vλ-小鼠Cκ的Ig分子分泌降低是由于不能折叠或不能与γ2a HC正确配对。虽然不希望受理论束缚，但认为这通过内质网(ER)质量控制机制，诸如Ig HC保留分子BiP导致不完全组装的IgG2a分子保留在内质网中(Haas和Wabl(1983)Immunoglobulin Heavy Chain Binding Protein.Nature 306:387-389PMID 6417546；Bole，等人(1986)Posttranslational association of immunoglobulinheavy chain binding protein with nascent heavy chains in nonsecreting andsecreting hybridomas.J.Cell Biology 102:1558-1566PMID 3084497)。
实施例10：部分犬科动物免疫球蛋白与小鼠IgD的表达
在大多数哺乳动物的成熟B细胞中，IgD与IgM共表达。然而，关于犬是否具有编码δHC的功能性恒定区基因的问题颇有争议。使用mAb的早期血清学研究鉴定了在犬科动物淋巴细胞上表达的“IgD样”分子(Yang，等人(1995)Identification of a dog IgD-likemolecule by a monoclonal antibody.Vet.Immunol.and Immunopath.47:215-224.PMID:8571542)。然而，在用豚草提取物免疫接种犬后，这种IgD的血清水平增加。这并不是真正的IgD的典型特征，真正的IgD在血清中以极少的量存在，并且没有通过免疫接种增强；IgD主要是BCR同种型，特别是在小鼠中。后来，Rogers等人((2006)Molecular characterizationof immunoglobulin D in mammals:immunoglobulin heavy constant delta genes indogs,chimpanzees and four old world monkey species.Immunol.118:88-100(doi:10.1111/j.1365-2567.2006.02345.x))通过从犬血液分离的RNA的RT-PCR克隆了cDNA，该RNA通过序列同源性编码真正的δHC。然而，国际ImMunoGeneTics
Figure BDA0003513397210000931
/www.imgt.org(IMGT)对犬科动物IgH基因座的最新注释将Cδ列为非功能性开放阅读框，因为铰链2外显子有一个非典型剪接供体位点NGC，而不是NGT。某种低水平的正确“渗漏”剪接和IgD表达可以在犬中出现是可能的，因此解释了Rogers等人分离CδcDNA克隆的能力。然而，令人担忧的是，犬科动物VH结构域在与小鼠Cδ连接时可能不正确折叠，因为犬VH基因区域显然随着部分或完全非功能性Cδ基因而进化。部分犬科动物IgD的部分组装或组装不存在问题可能干扰正常的B细胞发育。
为了测试具有Cδ骨架的犬科动物VH结构域是否能组装为可在细胞膜上表达的IgD分子，使用类似于实施例8中描述的那些方法进行瞬时转染和流式细胞术分析。
将293T/17细胞与作为转染对照的人类CD4(hCD4)表达载体加上来自实施例8的HC构建体之一(不同之处在于Cμ被Cδ取代)以及κ或λLC构建体之一连同CD79a/b表达载体共转染。如图22-图24中示出的，在与犬科动物Vκ-小鼠Cκ或犬科动物Cκ-小鼠CλLC配对时，具有犬科动物VH结构域与小鼠IgD骨架的HC在细胞表面上表达。
图22示出了细胞表面犬科动物IGHV3-5与小鼠IgD骨架和犬科动物IGKV2-5/IGKJ1-Cκ(列2201)和附接至小鼠Cλ1(2202)、Cλ2(2203)或Cλ3(2204)的犬科动物IGLV3-28/IGLJ6的表达。在这些研究中，上部行(2205)显示细胞表面hCD4染色，这是转染效率的对照。行2206显示了CD79b染色，CD79b是BCR的专性组分，这确认了细胞表面IgD表达。行2207显示IgD染色，行2208显示κLC，并且行2209显示λLC。这些特定的犬科动物VH/Vκ或VH/VλLC组合在细胞表面上良好表达。
图23示出了细胞表面犬科动物IGHV3-19与小鼠IgD骨架和犬科动物IGKV2-5/IGKJ1-Cκ(列2301)和附接至小鼠Cλ1(2302)、Cλ2(2303)或Cλ3(2304)的犬科动物IGLV3-28/IGLJ6的表达。(细胞表面染色数据与图22中的排列相同)。具有这些特定的犬科动物VH/Vκ或VH/VλLC组合的IgD的细胞表面表达没有比图22中的高。记起的是，犬科动物IGHV3-19在其与犬科动物Vκ-小鼠CλLC关联的能力方面也是最严格的VH。(图19)。
图24示出了细胞表面犬科动物IGHV4-1与小鼠IgD骨架和犬科动物IGKV2-5/IGKJ1-Cκ(列2401)和附接至小鼠Cλ1(2402)、Cλ2(2403)或Cλ3(2404)的犬科动物IGLV3-28/IGLJ6的表达。(细胞表面染色数据与图22中的排列相同)。具有这些特定的犬科动物VH/Vκ或VH/VλLC组合的IgD的细胞表面表达介于图22和图23中观察到的细胞表面表达之间。
该数据展示出，尽管细胞表面表达水平根据特定的HC/LC组合而不同，犬科动物VH基因与小鼠IgD骨架一起表达。认为，在B细胞发育期间，可以在细胞表面上表达为IgD的HC/LC组合被选择进入滤泡B细胞区室，产生足够的BCR库。
前面仅仅说明了本文描述的方法的原理。将理解的是，本领域技术人员将能够设计出各种布置，尽管本文未明确描述或显示，这些布置体现本发明的原理并且被包括在本发明的精神和范围内。此外，本文列举的全部实例和条件性语言主要意在帮助读者理解本发明的原理和发明人为促进本领域发展而贡献的概念，并且应被解释为不限于这样的具体列举的实例和条件。此外，本文中列举本发明的原理、方面和实施方案及其具体实例的全部陈述意在包括其结构和功能等同物两者。此外，意在这样的等同物既包括当前已知的等同物又包括未来开发的等同物，即开发的执行相同的功能而不管结构如何的任何元件。因此，本发明的范围并不意图被限制为本文示出和描述的示例性实施方案。而是，本发明的范围和精神由所附权利要求书体现。在随附的权利要求书中，除非使用术语“手段(means)”，否则其中列举的特征或要素都不应被解释为根据35 U.S.C.§112,
Figure BDA0003513397210000951
的手段加功能的限定。本文引用的全部参考文献为了全部目的通过引用以其整体并入。
序列表
犬科动物Ig
(注意，犬基因组的序列和注释仍然不完整。这些表格不一定描述完整的犬科动物VH、DH和JH、Vκ和Jκ，或Vλ和Jλ基因区段库。)
(F＝功能性，ORF＝开放阅读框，P＝假基因，*0X指示IMGT等位基因数)
表1.犬科动物IGH基因座
种系VH序列
SEQ ID NO.1 IGHV1-4-1(P)
>IGHV1-4-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtccagctggtgcagtctggggctgaggtgaggaaaccagtttcatctgtgaaggtctcctggaaggcatctggatacacctacatggatgcttatatgcactggttatgacaagcttcaggaataaggtttgggtgtatgggatggattggtcccaaagatggtgccacaagatattcacagaagttccacagcagagtctccctgatggcagacatgtccaaagcacagcctacatgctgctgagcagtcagaggcctgaggacacacctgcatattactgtgtgggacact
SEQ ID NO.2 IGHV1-15(P)
>IGHV1-15*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtccagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagccaggtacatccgtgaaggtctcatgcaagacatctggatacaccttcactgactactatatgtactgggtacgacaggcttcaggagcagggcttgattggatgggacagattggtccctaagatggtgccacaaggtatgcacagaagtttcagggcagagtcaccctgtcaacagacacatccacaagcacagcctacatggagctgagcagtctgagagctgaggacacagccatgtactactctgtgaga
SEQ ID NO.3 IGHV1-17(P)
>IGHV1-17*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtccagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagctaagggcatcagtgatagtcccctgcaagacatctggatacagcttcactgactacattttggaatgggtatgacaggctccaggaccagggcttgagtggatgggatggattggtcctgaagatggtgagacaaagtatgtgcagaagttccaggcagagtcaccctgatggcagacacaaccacaagcacagccaacatggagctgaccagtctgagagctgaggacacagccatgtactactgtgtga
SEQ ID NO.4 IGHV1-30(F)
>IGHV1-30*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtccagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagccaggggcatctgtgaaggtctcctgcaagacatctggatacaccttcattaactactatatgatctgggtacgacaggctccaggagcagggcttgattggatgggacagattgatcctgaagatggtgccacaagttatgcacagaagttccagggcagagtcaccctgacagcagacacatccacaagcacagcctacatggagctgagcagtctgagagctggggacatagctgtgtactactgtgcgaga
SEQ ID NO.5 IGHV3-2(F)
>IGHV3-2*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagcaactacatgagctggatccgccaggctccagggaaggggctgcagtgggtctcacaaattagcagtgatggaagtagcacaagctacgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagatgaggacacggcagtgtattactgtgcaaggga
SEQ ID NO.6 IGHV3-3(F)
>IGHV3-3*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacatggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggcctctggatttaccttcagtagttactacatgtattgggcccgccaggctccagggaaggggcttcagtgggtctcacacattaacaaagatggaagtagcacaagctatgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgcaaagaatacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagctgaggacacagcggtgtattactgtgcaaagga
SEQ ID NO.7 IGHV3-4(P)
>IGHV3-4*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctgatgaagcctgggggggtccctgagactctcctgtgtggcctctgaattcatcttcagtggctactggaagtactggatccaccaagctccagggaaggggctgcagtgggtcacatggattagcaatgatggaagtagcaaaagctatgcagacgctgtgaagggccaattcaccatctccaaagacaatgccaaatacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacatggccgtgtattactgtatgatgca
SEQ ID NO.8 IGHV3-5(F)
>IMGT000001|IGHV3-5*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactttcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctaccacatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggcttcagtgggtcgcatacattaacagtggtggaagtagcacaagctatgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctgtatcttcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagtga
SEQ ID NO.9 IGHV3-5-1(P)
>IMGT000001|IGHV3-5-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|gaggtgcagctggtggagtctgggggagccctggtgaagcctgggggggtccctgagactctcctatgtggcctctggattcaccttcagtagctaccacatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcgcatacattaacagtggtggaagtagggatccctgggtggcgcagtggtttggcgcctgcctttggcccagggcacgatcctggagacccgggatcgaatcccacgtcgggctccctgcatggagcctgcttctccctctgcctgtgtctct
SEQ ID NO.10 IGHV3-6(F)
>IGHV3-6*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtagcctctggattcaccttcagtagctccgacatgagctggatccgccaggctccaggaaaggggcttcagtgggtcgcatacattagcaatgatggaagtagcacaagctacgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctctatctgcagatgaacagcctcagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcaga
SEQ ID NO.11 IGHV3-7(F)
>IGHV3-7*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggagcaactggtggagtttggaggacacatggtgaatcctgggggttccctgggtctctcctgtcaggcctctggattcaccttcagtagctatggcatgagctgggtccgccaggctcaaaagaaggggctgcagtgggtcggacatattagctatgatggaagtagtacatactacgcagacactttgagggacagattcaccatctccagagacaacaccaagaacatgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagccgtgtattactgcatgaggaa
SEQ ID NO.12 IGHV3-8(F)
>IGHV3-8*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtaactacgaaatgtactgggtccgccaggctccagggaaagggctggagtgggtcgcaaggatttatgagagtggaagtaccacatactatgcagaagctgtaaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacatggcgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagtga
SEQ ID NO.13 IGHV3-9(F)
>IGHV3-9*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|gaggtgcagctggtggagtctggaggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactttcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctatgacatggactgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagtggctctcagaaattagcagtagtggaagtagcacatactacgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcaaggga
SEQ ID NO.14 IGHV3-10(F)
>IGHV3-10*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagactgagggagacctggtgaagcctgggggatccctgagactttcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctacgacatggactgggtctaccaggctccagggaaagggttacagtgggtcacatacattagcaatggtggaagtagcacaaggtatgcagacgctgtgaagggccaattcaccatctccagagacaacgccaggaacacgctctatctgcagatgaacagcctgagagacaaggacatggccgtgtattactgtgtgagtga
SEQ ID NO.15 IGHV3-11(P)
>IMGT000001|IGHV3-11*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctaggggagacgtggtgaagcctggggaggtccctctcctgtgtggcctctagattcaccttcagtagctactacatgggctgggtccactaggctccagggaaggggctgcagtgggtcgcaggtattaccaatgatagaagtagcacaagctatgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgggagccgaggacacggctgtgtattattgtgtgaaacaga
SEQ ID NO.16 IGHV3-12(P)
>IGHV3-12*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctggggagacctggtgaagcctggggggtctctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactacatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcggatacattaacagtggtggaagtagcacatactatgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtattactgtgggaaggga
SEQ ID NO.17 IGHV3-13(F)
>IGHV3-13*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggagcaactggtggagtttggaggacacatggtgaatcctgggggttccctgggtctctcctgtcaggcctctggattcaccttcagtagctatggcatgagctgggtccgccaggctcaaaagaaggggctgcagtgggtcggacatattagctatgatggaagtagcacatactacacagacactgtgagggacagattcaccatctccagagacaacaccaagaacatgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagccgtgtattactgcatgaggaa
SEQ ID NO.18 IGHV3-14(P)
>IGHV3-14*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagatggtggagtctgggggagacctggtgaagcctgggggatccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtaactacaaaatgtactgggtccaccaggctccagggaaagggctggagtgggtcgcaaggatttatgagagtggaagtaccacatactacgcagaagctgtaaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacatggtgtatctgcagatgaacagcctgagagcctaggacacggccgtgtattactgtgtgagtga
SEQ ID NO.19 IGHV3-16(F)
>IGHV3-16*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtacagctggtggagtctggaggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcacctttagtagttactacatgttttggatccgccaggcaccagggaagggcaatcagtgggtcggatatattaacaaagatggaagtagcacatactacccagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacactgtatctgcagatgaacagcctgacagtggaggacacagccctttattactgtgcgagaga
SEQ ID NO.20 IGHV3-18(F)
>IGHV3-18*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagaccttgtgaaacctgaggggtccctgagactctcctgtgtggtctctggcttcaccttcagtagctacgacatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcgcatacattagcagtgatggaaggagcacaagttacacagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagaactgaggacacagccgtgtattactgtgcgaagga
SEQ ID NO.21 IGHV3-19(F)
>IGHV3-19*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctgcggggtccctgagactgtcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctacagcatgagctgggtccgccaggctcctgagaaggggctgcagttggtcgcaggtattaacagcggtggaagtagcacatactacacagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacagtgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccatgtattactgtgcaaagga
SEQ ID NO.22 IGHV3-20(P)
>IGHV3-20*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggatacctggtgaagcctggagggtcctgagactctcctctgtgtcctctggattcaccttcagtatctactgcatgtgatgggtctgccaggctccaggaaaggggctgcagtgagtcgcatacagtaacagtggtggaagtagcactaggtacacagacgctgtgaagggctgattcaccacctccagagacaatgccaagaacacactgtatctgcagatgaacagcctgagagtgaggacacagcggtgtattactgtgcaggtga
SEQ ID NO.23 IGHV3-21(P)
>IGHV3-21*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctgttggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactgtcctgtgtggtctctggattcaccttcagtaagtatggcatgagctgggtctgccaggctttggggaaggggctacagttggtcgcagctattagctaagatggaaggagcacatactacacagacactgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtacctgcagatgaacagcttgagagctgaggacacggccgtgtattactgtgagagtga
SEQ ID NO.24 IGHV3-21-1(P)
>IGHV3-21-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgaagctagtggagtctgggggagacctggtgaagcctgggggatcaattagactctcctatgtgacctctggattcaccttcaggagctactggatgagctgggtcagccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcatatgggttaatactggtggaagcagaaaaagctatgcagatgctgtgaaggggtgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcatatgaacagcctgagagccctgtattattatgtgagtga
SEQ ID NO.25 IGHV3-22(P)
>IGHV3-22*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagatgatggagtctgggggagaactgatgaagcctgcaggatccctgagacctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactggatgtactggatccaccaaactccggggaaggggctgcagtgggtcgcaggtattagcacagatggaagtagcacaagctacgtagacgctctgaagggctgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctctatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacatggccatgtattactgtgcaga
SEQ ID NO.26 IGHV3-23(F)
>IGHV3-23*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggagaagcctgggggatccctgagactgtcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctacggcatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagggggtctcattgattaggtatgatggaagtagcacaaggtatgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagccgtgtattcctgtgcgaagga
SEQ ID NO.27 IGHV3-24(F)
>IGHV3-24*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagaccttgtgaagcctgaggggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagcttctacatgagctggttctgccaggctccaaggaaggggctacagtgggttgcagaaattagcagtagtggaagtagcacaagctacgcagacattgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacatgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacatggccgtatattattgtgcaaggta
SEQ ID NO.28 IGHV3-25(P)
>IGHV3-25*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagcctgggggagaactggtgaagcctggggcgtccctgagactctcctgtgtggtccctggattcaccttcagtagctacaacatgggctgggctcaccagcctccagggaaggggatgcagtgggtcgcaggttttaacagcggtggaagtagcacaagctacacagatgctgtgaagggtgaattcaccatctccagagacaatgtcaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagatccgaggacacggccgtgtattactgtgtgaagga
SEQ ID NO.29 IGHV3-26(P)
>IGHV3-26*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgtagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtgggctctggattcaccttcagtagctactggatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctacagtgggttgcagaaattagcggtagtggaagtagcacaaactatgcagacgctgtgaagggccgattcatcatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccatgtattactgtgcaaggga
SEQ ID NO.30 IGHV3-27(P)
>IGHV3-27*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
aaggtgcatctggtggagtctgcgggagacgtggtgaagcctaggaggtccctgagactctcctgtgtgggctctggattcaccttcagtagctacagcatgtggtgggcccgtgaggctcccgggatggggctacagggggtcgcaggtattagatatgatggaagtagcacaagctacgcagacgctctgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaaaaacacactgtatctgtagaagaacagcctgagagccgagggaggacacggccgtgtattactgtgcgaggga
SEQ ID NO.31 IGHV3-28(P)
>IGHV3-28*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctagtggagtctgggggagacctggtgaagtctgggggggtccctgagagtctcctgtgtgggctctggattcaccttcagtagctactggatgtactgggtccaccaggctccagggaaggggctccatgggtcgcatggattaggtatgatggaagtagcacaagctacgcagaagctgtgaaaggccgattcactgtttctagagacaacgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgtgaggga
SEQ ID NO.32 IGHV3-29(P)
>IGHV3-29*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtcctggggagacctggtgaagactggaggtttcctgagactctcctgtctcctgtgtggcttccggattcaccttcagtaactacagcatgatctgggtccgccaggctccaaggaaggggctgcagtggatcacaactattagcaatagtggaagtagcacaaatcacgcagacacagtaaagggccgatttaccatctccagagacaacaccaagaacacgctgtatctacagatgagcagcctgggagccgatgacacggccctgtattactgtgtgaggga
SEQ ID NO.33 IGHV3-31(P)
>IGHV3-31*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagaactggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactacatgagctggatccgccaggctcctgggaaggggctgcagtgggtcgcagatattagtgacagtggaggtagcacatactacactgacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgtcaagaactcgctgtatttgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgaagga
SEQ ID NO.34 IGHV3-32(ORF)
>IGHV3-32*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
ggggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgacactctcctgtgtggcctatggattcaccttcagtagctacagcatgcaatgggtctgtcaggctccagggaagggggtgcagtgggtcgcatacattaacagtggtggaagtagcacaagctccgcagatgctgtgaagggtcgattcatcatctccagagacaacgtcaagaacacgctatatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtattactgtgcgggtga
SEQ ID NO.35 IGHV3-33(P)
>IGHV3-33*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gagatgcagctggtggaggctgggggagacctggtgaagcttggggggtccctgagactcttctgtgtggcctctggatttaccttcagtagctattggatgagctgggtcggccaggctccagggaaagggttgcagtgggttgcatacattaacagtggtggaagtagcacatactatgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaactgcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgtggga
SEQ ID NO.36 IGHV3-34(F)
>IGHV3-34*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagacactgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctctatctgcagatgaacagcctgagagctgaggacacggccgtgtattactgtgcgaagga(Incomplete sequence indatabase)
SEQ ID NO.37 IGHV3-35(F)
>IGHV3-35*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|||
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctgtgggatccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctatgacatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcgcatacattagcagtggtggaagtagcacatactatgcagatgctgtgaagggccggttcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctgtatcttcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccatgtattactgtgcgggtga
SEQ ID NO.38 IGHV3-36(P)
>IGHV3-36*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggggcagctggcggagtctgggggagacctggtgaagcctgagaggtccctgagactcgcccgtgtggcctctggattcaccttcatttcctataccatgagctgggtccacaaggctcctgggaaggggctgccgtgagtcgcatgaatttattctagtggaagtaacatgagctatgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacatgctgtatctgcagatgaacagcctgagagctgaggacatggccatgtattactgtgtgaatga
SEQ ID NO.39 IGHV3-37(F)
>IGHV3-37*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtacagctggtggagtctggggaagatttggtgaagcctggagggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagcagtgaaatgagctgggtccaccaggctccagggcaggggctgcagtgggtctcatggattaggtatgatggaagtatctcaaggtatgcagacactgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgtcaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccatatattactgtgcaga
SEQ ID NO.40 IGHV3-38(F)
>IGHV3-38*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggaccttgagactgtcctgtgtggcctctggattcacctttagtagctatgacatgagctgggtccgtcagtctccagggaaggggctgcagtgggtcgcagttatttggaatgatggaagtagcacatactacgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgaagga
SEQ ID NO.41 IGHV3-39(F)
>IGHV3-39*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtacagctggtggaatctgggggagacctcgtgaagcctgggggttccctgagactctcctgtgtggcctcgggattcaccttcagtagctactacatgagctggatccgccaggctcctgggaaggggctgcagtgggtcgcagatattagtgatagtggaggtagcacaggctacgcagacgctgtgaagggccggttcaccatctccagagagaacgccaagaacaagctgtatcttcagatgaacagcctgagagccgaggacacagccgtgtattactgtgcgaagga
SEQ ID NO.42 IGHV3-40(P)
>IGHV3-40*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
atgcaatgggtccgtcaggctcctgggaagggggtgcagtgggtcgcatacattaacagtggtggaagtagcacaagcttcgcagatgctgtgaagggcatgagctggtttcgccaggctccagggaaggggctgcaatgggttacatggattgggtatgatggaagtagcacatactacacagacactgtaaagggccgattcactatctccatagacaacgccaagaacatgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacatagccctgtattactgtgcgaggga
SEQ ID NO.43 IGHV3-41(F)
>IGHV3-41*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtagcctctggattcaccttcagtaactacgacatgagctgggtccgccaggctcctgggaaggggctgcagtgggtcgcagctattagctatgatggaagtagcacatactacactgacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaggaacacagtgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaagga
SEQ ID NO.44 IGHV3-42(P)
IGHV3-42*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaagtgcagctggtggagtctgggggaagacctggtgaagccaggggggtccctgagactctcctgtgtgacctctggattcaccttcagtaggtatgccatgagctgggtcggccaggctccagggaagggcctgcagtgggttgcagctattagcagtagtggaagtagcacatactacgtagatgctgtgaagggccgattcaccatctccatagacaacgccaagaacatggtgtatctgcagatgaacagcctgagagctgaggatattgctgtgtattactgtgggaagga
SEQ ID NO.45 IGHV3-43(P)
>IGHV3-43*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
aaggtgtagctggtggagtctgggggagacctgatgaagcctgggggttccctgagactgtcctgtgtggcctctggattcaccttcaggagctatggcatgagctgggtctgccaggcttcagggaaggggctgcagtgggtcgcagctattagctatgatggaaggagcacatactacacagacactgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatggcaagaacacgctgtacctgcagatgaacagcttgagagctgaggacacggccgtgtattactgtgcgagtga
SEQ ID NO.46 IGHV3-44(ORF)
>IGHV3-44*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctgggggttccctgagactctcatgtgtgacttctggattcaccttcagtagctattggatgagctgtgtccgccaggctccagggaaggagctgcagtgggtcgcgtacattaacagtggtggaagtagcacatggtacacagacgctgtgaagggtcgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacaacctgagagccgaagacacggccgtgtattactgtgcgaggga
SEQ ID NO.47 IGHV3-45(P)
>IGHV3-45*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaagtacagctgctggagtctgggggagaccgagtgaaacctggggggtcccagagactctcctgtgtggcctcaaggttcaccttcagtagctacagcatgcattgtctccgtcagtctcctgggatggggctacagtgggtcacatacattagcagtaatggaagcagcacatactatgcagacgctgtgaagggtcgattcaccatctccagagacaaagccaagaacatgctttatctacagatgaacagcctgagagctcaggacatagccctgtattactgtgcagatg
SEQ ID NO.48 IGHV3-46(F)
>IGHV3-46*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtacagctggtggagtctggggaagatttggtgaagcctggagggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagcagtgaaatgagctgggtccaccaggctccagggcaggggctgcagtgggtctcatggattaggtatgatggaagtagctcaaggtatgcagacactgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccatatattactgtgcaga
SEQ ID NO.49 IGHV3-47(F)
>IGHV3-47*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggcgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattaaccttcagtagctacagcatgagctgggtccgccaggctcctgggaaggggctgcagtgggtcacagctattagctatgatggaagtagcacatactacactgacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaggaacacagtgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtattactgtgtgga
SEQ ID NO.50 IGHV3-47-1(P)
>IGHV3-47-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgccactggtggaatctgggggagagctggtgaagcctggggggtccctgagactctcctttgtagcctctgcattcactttcagtagttactggataagctgggtccgccaagctccagggaaagggctgcactgagtctcagtaattaacaaagatggaagtaccacataccacgcagatgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagctgaggacacggctgtgtattactgtgcaca
SEQ ID NO.51 IGHV3-48(P)
>IGHV3-48*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggagcagttggtgaaatctaggggagacctggtgaagcctggcgggtccctgagactcttctgtgagtcctctacattcacctttcatagcaacagcatacattggctccaccagtctcccggtagtggctacagtgggtcatatccaatagcagtaatggaagtagcatgtactatgcagacgctgtaaagggctgattcaccatctccagagacagcaccaggaacatgctgtatctgcagatgaacagcctgagagctgaggacacagccgtgcattgctgtgcgaggga
SEQ ID NO.52 IGHV3-49(P)
>IGHV3-49*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctcatgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggccgctggattcaccttcagtagctacagcatgagctgggtccgccaggctcccgggaaggggattcagtgggtcgcatggatttaagctagtggaaatagcacaagctacacagatgctgtgaagggccgattcaccatctccagagaacgccaagaacacagtgtttctgcagatgaacagcctgagagctgaggacaaggccatgtattactgtgcgaggga
SEQ ID NO.53 IGHV3-50(F)
>IGHV3-50*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccttgagactctcctgtgtggcctctggtttcaccttcagtagcaacgacatggactgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagtggctcacacggattagcaatgatggaaggagcacaggctacgcagatgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagctgaggacacagccgtgtattactgtgcgaagga
SEQ ID NO.54 IGHV3-51(P)
>IGHV3-51*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggaggagtctgggggagacctggtgaagcctggggttccctaagactgtcctgtgtgacctccggattcactttcagtagctatgccatgcactgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcgcagttattagcagggatggaagtagcacaaactacgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacatgctgtatctacagatgaacagcctgagagctgaggacacggccatgtattactgtgcgaagga
SEQ ID NO.55 IGHV3-52(P)
>IGHV3-52*01|家犬_拳师犬|P|V-区域||
gaagtgcagctggtggagtatgggggagagctggtgaagcctggggggtccctgagactgtcctgtgtggcctccggattcaccttcagtatctactacatgcactgggtccaccaggctccagggaaggggctgcagtggttcgcatgaattaggagtgatggaagtagcacatactacactgatgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacactctgtatctgcagatgaccagcctgagagccgaggacacggccctatattactgtgcgatgga
SEQ ID NO.56 IGHV3-53(P)
>IGHV3-53*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gagatgcagctggtggagtctagggaggcctggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggaccctggattcaccttcagtagctactggatgtactgggtccaccaggctccagggatggggctgcagtggcttgcagaaattagcagtactggaagtagcacaaactatgcagacgctgtgaggggcccattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtacctgcaggtgaacagcctgagagccgaagacacggccgtgtattactgtgtgagtga
SEQ ID NO.57 IGHV3-54(F)
>IGHV3-54*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctgatgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggcctccggattcactatcagtagcaactacatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcggatacattagcagtgatggaagtagcacaagctatgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgtgaaggga
SEQ ID NO.58 IGHV3-55(P)
>IGHV3-55*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctggggaaacctggtgaagcctggggagtctctgagactctcttgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactggatgcattgggtctgccaggctccagggaaagggttggggtgggttgcaattattaacagtggtggaggtagcacatactatgcagacacagtgaagggccaattcaccatcttcagagacaatgccaagaacatgctgtatctgcagatgaacagcctgagagcccaggacatgaccgcgtattactgtgtgagtga
SEQ ID NO.59 IGHV3-56(P)
>IGHV3-56*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggaatctgggggagacctggtgaagcctgggggatccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactatatggaatgggtctgccaggctccagggaggggctgaagtgggtcgcacggattagcagtgacggaagtagcacatactacacagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagacggccgtgtattactgtgcgaagga
SEQ ID NO.60 IGHV3-57(P)
>IGHV3-57*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaagtgcagcttgtggagtctgggggagagctggtgaagcctgggggttccctgagactgtcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactacatgcactgggtctgcaggctccagggaaggggctgcagtgggttgcaagaattaggagtgatggaagtagcacaagctacccagacgctgtgaagggcagattcaccatctccagagacaattccaagaacactctgtatctgcagatgaacagcctgagagctgatgatacggccctatattactgtgcaaggga
SEQ ID NO.61 IGHV3-58(F)
>IGHV3-58*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctgggggatccctgagactctcttgtgtggcctccggattcaccttcagtagccatgccaagagctgggtccgccaggctccagggaaggggctgaagtgggtagcagttattagcagtagtggaagtagcacaggctccgcagacactgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagctgaggacacagccgtgtattactgtgcgaagga
SEQ ID NO.62 IGHV3-59(P)
>IGHV3-59*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtacagctggtggagtctggaggagaccttgtgaagactgagcggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagcttctacatgaggtgtctgccagactccagggaagggactacagtgggttgcagaaattagcagtagtggaagtagcacaagctacacagatgctctgaagggctgattctccatctccaaaaacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggtcacagccgtatattactgtgcaaggta
SEQ ID NO.63 IGHV3-60(P)
>IGHV3-60*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgaagctggtggagtctgggggagacctgttgaagcctgggggatcaattaaactctcctatgtgacctctggattcaccttcaggagctactggatgagctgggtcagccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcacatgggttaatactggtggaagcagcaaaagctatgcagatgctgtgaaggggcaattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcatatgaacagcctgatagccctgtattattgtgtgagtga
SEQ ID NO.64 IGHV3-61(F)
>IGHV3-61*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctggtggaaacctggtgaagcctgggggttccctgagactgtcctgtgtggcctctggattaaccttctatagctatgccatttactgggtccacgaggctcctgggaaggggctgcagtgggtcgcagctattaccactgatggaagtagcacatactacactgacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagctgaggacatgcccgtgtattactgtgcgaggga
SEQ ID NO.65 IGHV3-62(P)
>IGHV3-62*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggagcagctggtggagtctcggggagatctggtgaagtctggggggtccctgagactctcctgtgtggccccttgattcaccttcagtaactgtgacatgagctgggtccattaggctccaggaaagggctgcagtgtgttgcatacattagctatgatggaagtagcacaggttacaaagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacatgctgtatcttcagatgaacagcctgagagctgaggacacggctctgtattactgtgcaga
SEQ ID NO.66 IGHV3-63(P)
IGHV3-63*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggagcagttggtgaaatctaggggagacctggtgaagcctggcgggtccctgagactcttctgtgagtcctctacgttcacctttcatagctacagcatgcattggctccaccagtctcccggtagtggctacagtgggtcatatccaatagcagtaatggaagtagcatgtactatgcagacgctgtaaagggctgatacaccatctccagagacaacaccaggaacatgctgtatctgcagatgaataacctgagagctgaggacacagccgtgcattgctgtgcgaggga
SEQ ID NO.67 IGHV3-64(P)
>IGHV3-64*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgcgggagaccccgtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggccgctggattcaccttcagtagctacagcatgagctgggtccgccaggctcccgggaaggggatgcagtgggtcgcatggatatatgctagcggaagtagcacaagctacgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacactgtttctgcagatgcctgagagctgaggacacggccatgtattcctgtgcagggga
SEQ ID NO.68 IGHV3-65(P)
>IGHV3-65*01|家犬_拳师犬|P|V-区域
|gatgtacagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactgtcctgtgtggcctctggattcacctgcagtagctactacatgtactagacccaccaaattccagggaaggggatgcagggggttgcacggattagctatgatggaagtagcacaagctacaccgacgcaatgaaaggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacatgctgtatctgcaatgaacagcctgagagccgaggacacagccgtgtattactgtgtgaagga
SEQ ID NO.69 IGHV3-66(P)
>IGHV3-66*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctggcggagacctggtgaagcctgggcggtccctgagactgtcctgtatggcctctggattcacttcagtagctacagcatgagctgtgtccgccaggctcctgggaagggctgcagtgggtcgcaaaaattagcaatagtggaagtagcacatactacacagatgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctctatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccttgtattactgtgcaga
SEQ ID NO.70 IGHV3-67(F)
>IGHV3-67*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactgtcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactacatgtactgggtccgccaggctccagggaaggggcttcagtgggtcgcacggattagcagtgatggaagtagcacatactacgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggctatgtattactgtgcaaagga
SEQ ID NO.71 IGHV3-68(P)
>IGHV3-68*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaagtgcagctggtggagtctgggggagagctggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactacatgtactgggtccgccaggctccagggaaatggctgctgtgggtcacatgaattaggagtgatggaagtagcacatatacactgatgctgtgaaggaccgatacaccatctccaaagacaattccaagaacattctgtatctgcagatgaacagcctgagagccaaggacacggccctatatccctgtgcaatgga
SEQ ID NO.72 IGHV3-69(F)
>IGHV3-69*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtacagctggtggagtctgggggagacctggtgaagcctgggggatccctgagactgtcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcgcatacattaacagtggtggaagtagcacatactacgcagatgctgtgaagggccggttcaccatctccagagacaatgccaggaacacactgtatctgcagatgaacagcctgagatccgaggacacagccgtgtattactgtccgaagga
SEQ ID NO.73 IGHV3-70(F)
>IGHV3-70*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctggaggagaccttgtgaagcctgagcggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagcttctacatgagctggttctgccaggctccagggaaggggctacagtgtgttgcagaaattagcagtagtggaaatagcacaagctacgcagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctgtatctacggatgcacagcctgagagccgaggacacggctgtatattactgtgcaaggta
SEQ ID NO.74 IGHV3-71(P)
>IGHV3-71*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgaagctggtggagtgtgggggagacctggtgaagcccgggggatcgattagactctcctttgtgacctctggattcaccttcaggagctattggatgggctgtgtcagccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcacatgggttaatactggtggaagcagcaaaagctatgcagatgctatgaaggggcgatttaccatctccaggcacaaagccaagaacacactatctgcatatgaacagcctgagagccgtgtattattgtgtgagtga
SEQ ID NO.75 IGHV3-72(P)
>IGHV3-72*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctggcggagacctggtgaagcctggggattccctgagactgtcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctatgccatgagctgggtccgccaggctcctaggaaggggctgcagtgggtcggatacattagcagtgatggaagtagcacataatacgcagacgctgtgaagggccgattcaccatttccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagctgaggatacggccctgtataactgtgcaaggga
SEQ ID NO.76 IGHV3-73(P)
>IGHV3-73*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctgatggagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtccctgagactctcctgtgtggcccctggattcaccttcagtaactatgacatgagctcggtccattagactccaggaaagggctgcagtgtattgcatatattagctatgatggaagtagcacaggttacaaagacgctgtgcagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctgtatcttcagatgaacagcctgagagctgagcacacggccctgtattactgtgcaga
SEQ ID NO.77 IGHV3-74(P)
>IGHV3-74*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacttggtgaagccttgtgggctcctgagactctcctgtgtggcttctggattcaccttcagtagctacatcatgagctgggtccgccaggctccagggaagtggctgcagtgggtcgcatacattaacagtggtggaagtagcacaaggtacacagatgctgtgaagggccgattcacctctccagagacaacgccaagaacatgctgtatctgcagttgaacagcctgagagccgaggacaccgctgtgtattactgtgcgaggga
SEQ ID NO.78 IGHV3-75(F)
>IGHV3-75*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaattgcagctggtggagcttgggggagatctggtgaagccaggggggtccctgagactctcctgtgtggcctctggattcaccttcagtagctatgccatgagttgggtctgccaggctccagggaaggggctgcagtgggttgcagctattagcagtagtggaagtagcacataccatgtagacgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacagtgtatctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcaga
SEQ ID NO.79 IGHV3-76(F)
>IGHV3-76*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgccactggtggaatctgggggagagctggtgaagcctgaggggtccctgagattctcctgtgtagcctctggattcactttcagtagttactggataagctgggtccgccaagctccagggaaagggctgcactgggtctcagtaattaacaaagatggaagtaccacataccacgcagatgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagctgagggcacgactgtgtattactgtgcaca
SEQ ID NO.80 IGHV3-77(P)
>IGHV3-77*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggagcagttggtgaagtctgggggagacctggtgaagcttggcaggtccctgagtcctctacattcacctttcatagctacagcatgcattggctccaccagtctcccggtagtggctacagtgggtcatatccaatagcagtaatggaagtagcatgtactatgcagacgctgtaaagggttgattcaccatctccagagacaacaccaggaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgagagccgacgacacggccgtgtgttgctgtgcgaggga
SEQ ID NO.81 IGHV3-78(P)
>|IGHV3-78*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagaccttgtgaagccggaggggtccctgagactctcctgtgtggccgctggattcacctttagtagctacagcatgagctgggtccgccaggctcccgggaagggggtgcagtgggtcacatagatttatgctagtggaagtagcacaagctacacagatgctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacagtgtttctgcagatgaacagcctgagagctgagaacacggccatgtattcctgtgcaaggga
SEQ ID NO.82 IGHV3-79(P)
>IGHV3-79*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tggggaattccctctggtgtggcctctggattcacctgcagtagctccctcacctccctctcctgtgtggcctctagattcaccttcagtagctactacatatactgtatccaccaagctccagggaaggggctgcaggtggtcgcatggattagctatgatggaagtagaacaagctacgccgacgctatgtagggccaattcatcatctccagagaaaacaccaagaacacgctgtatctgtagatgaacagcctgagtgccaaggacacggcactatatccctgtgcgaggaa
SEQ ID NO.83 IGHV3-80(F)
>IGHV3-80*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctgggggagatctggtgaagcctgggggatccctgagactctcttgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactacatggaatgggtccgccaggctccagggaaggggctgcagtgggtcgcacagattagcagtgatggaagtagcacatactacccagacgctgtgaagggtcaattcaccatctccagagacaatgccaagaacacgctgtatctgcagatgaacagcctgggagccgaggacacggccgtgtattactgtgcaaagga
SEQ ID NO.84 IGHV3-81(F)
>IGHV3-81*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctggaggaaacctggtgaagcctggggggtccctgagactctcttgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactacatggactgggtccgccaggctccagggaagaggctgcagtgggtcgcagggattagcagtgatggaagtagcacatactacccacaggctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacgctctatctgcagatgaacagcctgagagccgaggactctgctgtgtattactgtgcgatgga
SEQ ID NO.85 IGHV3-82(F)
>IGHV3-82*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggtgcagctggtggagtctggaggagacctggtgaagtctggggggtccctgagactctcttgtgtggcctctggattcaccttcagtagctactacatgcactgggtccgccaggctacagggaaggggctgcagtgggtcacaaggattagcaatgatggaagtagcacaaggtacgcagacgccatgaagggccaatttaccatctccagagacaattccaagaatacgctgtatctgcagatgaacagccagagagccgaggacatggccctatattactgtgcaaggga
SEQ ID NO.86 IGHV3-83(P)
>IGHV3-83*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gagttgcagctggtagagtctgggggagacctggtgaagcctggggggtctctgagactttcttgtgtgtcctctggattcaccttcagtagctactggatgcactgggtcctccaggctccagggaaagggctggagtgggtcgcaattattaacagtggtggaggtagcatatactacgcagacacagtgaagggccgattcaccatctccagagaaaacgccaagaacacgctctatctgcagatgaacagcctgagagctgaggacagggccatgcattactgtgcgaaggga
SEQ ID NO.87 IGHV4-1(F)
>IGHV4-1*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaactcacactgcaggagtcagggccaggactggtgaagccctcacagaccctctctctcacctgtgttgtgtccggaggctccgtcaccagcagttactactggaactggatccgccagcgccctgggaggggactggaatggatggggtactggacaggtagcacaaactacaacccggcattccagggacgcatctccatcactgctgacacggccaagaaccagttctccctgcagctgagctccatgaccaccgaggacacggccgtgtattactgtgcaagaga
SEQ ID NO.88 IGHV(II)-1(P)
>IGHV(II)-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ctggcacccctgcaggagtctgtttctgggctggggaaacccaggcagatccttacactcacctgctccttctctgggttcttattgagcatgtcagtatgggtgtcacatgggtcctttacccaccaggggaaggcactggagtcaatgccacatctggtgggagaacgctaagtaccacagcctgtctctgaacagcagcaagatgtatagaaagtccaacacttggaaagataaaggattatgtttcacaccagaagcacatctattcaacctgatgaacagccagcctgat
SEQ ID NO.89 IGHV(II)-2(P)
>IGHV(II)-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ctggcacccctgcaggagtctgtttctgggctggggaaacccaggcagacccttacactcacctgctccttctctgggttcttattgagcatgtcagtgtgggtgtcacatgggtcctttacccaccaggggaaggcactggagtcaatgccacgtctggtgggagaacactaagtaccacagcctgtctctgaacagcagcaagatgtatagaaagtccaacacttggaaagataaaggattatgtttcacaccagaagcacatctattcaacctgatgaacaatcagcctgatgaga
种系D序列
SEQ ID NO.90 IGHD1(F)
>IGHD1*01|家犬_拳师犬|F|D-区域|
gtactactgtactgatgattactgtttcaac
SEQ ID NO.91 IGHD2(F)
>IGHD2*01|家犬_拳师犬|F|D-区域|
ctactacggtagctactac
SEQ ID NO.92 IGHD3(F)
>IGHD3*01|家犬_拳师犬|F|D-区域|
tatatatatatggatac
SEQ ID NO.93 IGHD4(F)
>IGHD4*01|家犬_拳师犬|F|D-区域|
gtatagtagcagctggtac
SEQ ID NO.94 IGHD5(ORF)
>IGHD5*01|家犬_拳师犬|ORF|D-区域|
agttctagtagttggggct
SEQ ID NO.95 IGHD6(F)
>IGHD6*01|家犬_拳师犬|F|D-区域|
ctaactggggc
种系JH序列
SEQ ID NO.96 IGHJ1(ORF)
>IGHJ1*01|家犬_拳师犬|ORF|J-区域|
tgacatttactttgacctctggggcccgggcaccctggtcaccatctcctcag
SEQ ID NO.97 IGHJ2(F)
>IGHJ2*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
aacatgattacttagacctctggggccagggcaccctggtcaccgtctcctcag
SEQ ID NO.98 IGHJ3(F)
>IGHJ3*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
caatgcttttggttactggggccagggcaccctggtcactgtctcctcag
SEQ ID NO.99 IGHJ4(F)
>IGHJ4*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
ataattttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag
SEQ ID NO.100 IGHJ5(F)
>IGHJ5*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
acaactggttctactactggggccaagggaccctggtcactgtgtcctcag
SEQ ID NO.101 IGHJ6(F)
>IGHJ6*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
attactatggtatggactactggggccatggcacctcactcttcgtgtcctcag
表2.犬科动物Igκ序列信息
种系Vκ序列
SEQ ID NO.102 IGKV2-4(F)
>IGKV2-4*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gatattgtcatgacacagacgccaccgtccctgtctgtcagccctagagagacggcctccatctcctgcaaggccagtcagagcctcctgcacagtgatggaaacacctatttggattggtacctgcaaaagccaggccagtctccacagcttctgatctacttggtttccaaccgcttcactggcgtgtcagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctaacgatactggagtttattactgcgggcaaggtacacagcttcctcc
SEQ ID NO.103 IGKV2-5(F)
>IGKV2-5*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gatattgtcatgacacagaccccactgtccctgtccgtcagccctggagagccggcctccatctcctgcaaggccagtcagagcctcctgcacagtaatgggaacacctatttgtattggttccgacagaagccaggccagtctccacagcgtttgatctataaggtctccaacagagaccctggggtcccagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgatgatgctggagtttattactgcgggcaaggtatacaagatcctcc
SEQ ID NO.104 IGKV2-6(F)
>IIGKV2-6*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gatattgtcatgacacagaccccactgtccctgtctgtcagccctggagagactgcctccatctcctgcaaggccagtcagagcctcctgcacagtgatggaaacacgtatttgaactggttccgacagaagccaggccagtctccacagcgtttaatctataaggtctccaacagagaccctggggtcccagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgacgatactggagtttattactgcgggcaaggtatacaagatcctcc
SEQ ID NO.105 IGKV2-7(F)
>IGKV2-7*01|家犬_拳师犬|F|V-区域||
gatattgtcatgacacagaacccactgtccctgtccgtcagccctggagagacggcctccatctcctgcaaggccagtcagagcctcctgcacagtaacgggaacacctatttgaattggttccgacagaagccaggccagtctccacagggcctgatctataaggtctccaacagagaccctggggtcccagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgacgatgctggagtttattactgcatgcaaggtatacaagctcctcc
SEQ ID NO.106 IGKV2-8(F)
>IGKV2-8*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gatattgtcatgacacagaccccaccgtccctgtccgtcagccctggagagccggcctccatctcctgcaaggccagtcagagcctcctgcacagtaacgggaacacctatttgaattggttccgacagaagccaggccagtctccacagggcctgatctatagggtgtccaaccgctccactggcgtgtcagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgacgatgctggagtttattactgcgggcaaggtatacaagatcctcc
SEQ ID NO.107 IGKV2-9(F)
>IGKV2-9*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gatattgtcatgacacagaccccactgtccctgtctgtcagccctggagagactgcctccatctcttgcaaggccagtcagagcctcctgcacagtgatggaaacacgtatttgaattggttccgacagaagccaggccagtctccacagcgtttgatctataaggtctccaacagagaccctggggtcccagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgacgatactggagtttattactgcgggcaagttatacaagatcctcc
SEQ ID NO.108 IGKV2-10(F)
>IGKV2-10*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gatattgtcatgacacagaccccactgtccctgtccgtcagccctggagagactgcctccatctcctgcaaggccagtcagagcctcctgcacagtgatggaaacacgtatttgaattggttccgacagaagccaggccagtctccacagcgtttgatctataaggtctccaacagagaccctggggtcccagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgacgatactggagtttattactgcatgcaaggtacacagtttcctcg
SEQ ID NO.109 IGKV2-11(F)
>IGKV2-11*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gatatcgtcatgacacagaccccactgtccctgtccgtcagccctggagagactgcctccatctcctgcaaggccagtcagagcctcctgcacagtaacgggaacacctatttgttttggttccgacagaagccaggccagtctccacagcgcctgatcaacttggtttccaacagagaccctggggtcccacacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgacgatgctggagtttattactgcgggcaaggtatacaagctcctcc
SEQ ID NO.110 IGKV2S12(P)
>IGKV2S12*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gatatcgtgatgacccagaccccattgtccttgcctgtcacccctggagagctagcctcatcactgtgcaggaggccagtcagagcctcctgcacagtgatggatatatttatttgaattggtactttcagaaatcaggccagtctccatactcttgatctatatgctttacaaccagacttctggagtcccaggctggttcattggcagtggatcagggacagatttcaccctgaggatcagcagggtggaggctgaagatgctggagtttattattgccaacaaactctacaaaatcctcc
SEQ ID NO.111 IGKV2S13(F)
>IGKV2S13*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gatatcgtcatgacgcagaccccactgtccctgtctgtcagccctggagagccggcctccatctcctgcagggccagtcagagcctcctgcacagtaatgggaacacctatttgtattggttccgacagaagccaggccagtctccacagggcctgatctacttggtttccaaccgtttctcttgggtcccagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgacgatgctggagtttattactgcgggcaaaatttacagtttccttc
SEQ ID NO.112 IGKV2S14(P)
>IGKV2S14*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaggttgtgatgatacagaccccactgtccctgtctgtcagccctggagagccggcctccatctcctgcagggccagtcagagtctccggcacagtaatggaaacacctatttgtattggtacctgcaaaagccaggccagtctccacagcttctgatcgacttggtttccaaccatttcactggggtgtcagacaggttcagtggcagcgggtctggcacagattttaccctgaggatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgcatgcaaagtacacatgatcctcc
SEQ ID NO.113 IGKV2S15(P)
>IGKV2S15*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gatatcatgatgacacagaccccactctccctgcctgccacccctggggaattggctgccatcttctgcagggccagagtctcctgcacaataatggaaacacttatttacactggttcctgcagacatcaggccaggttccaaggcatctgaaccatttggcttccagctgttactctggggtctcagacaggttcagtggcaacgggtcagggacagatttcacactgaaaatcagcagagtggaggctgaggatgttagtgtttattagtgcctgcaagtacacaaccttccatc
SEQ ID NO.114 IGKV2S16(F)
>IGKV2S16*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaggccgtgatgacgcagaccccactgtccctggccgtcacccctggagagctggccactatctcctgcagggccagtcagagtctcctgcgcagtgatggaaaatcctatttgaattggtacctgcagaagccaggccagactcctcggccgctgatttatgaggcttccaagcgtttctctggggtctcagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacccttaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgccagcaaagtctacattttcctcc
SEQ ID NO.115 IGKV2S18(P)
>IGKV2S18*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gatatcgtcatgacacagaccccactgtccgtgtctgtcagccctggagagacggcctccatctcctgcagggccagtcagagcctcctgcacagtgatggaaacacctatttggattggtacctgcagaagccaggccagattccaaaggacctgatctatagggtgtccaactgcttcactggggtgtcagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgacaacgctggagtttattactgcatgcaaggtatacaagatcctcc
SEQ ID NO.116 IGKV2S19(F)
>IGKV2S19*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gatatcgtcatgacacagactccactgtccctgtctgtcagccctggagagacggcctccatctcctgcagggccaatcagagcctcctgcacagtaatgggaacacctatttggattggtacatgcagaagccaggccagtctccacagggcctgatctatagggtgtccaaccacttcactggcgtgtcagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgaagatcagcagagtggaggctgacgatgctggagtttattactgcgggcaaggtacacactctcctcc
SEQ ID NO.117 IGKV3-3(P)
>IGKV3-3*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaaatagtcttgacctagtctccagcctccctggctatttcccaaggggacagagtcaaccatcacctatgggaccagcaccagtaaaagctccagcaacttaacctggtaccaacagaactctggagcttcttctaagctccttgtttacagcacagcaagcctggcttctgggatcccagctggcttcattggcagtggatgtgggaactcttcctctctcacaatcaatggcatggaggctgaaggtgctgcctactattactaccagcagtagggtagctatctgct
SEQ ID NO.118 IGKV3S1(F)
>IGKV3S1*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaaatcgtgatgacacagtctccagcctccctctccttgtctcaggaggaaaaagtcaccatcacctgccgggccagtcagagtgttagcagctacttagcctggtaccagcaaaaacctgggcaggctcccaagctcctcatctatggtacatccaacagggccactggtgtcccatcccggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcagcttcaccatcagcagcctggagcctgaagatgttgcagtttattactgtcagcagtataatagcggatata
SEQ ID NO.119 IGKV3S2(P)
>IGKV3S2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gagattgtgccaacctagtctctagccttctaagactccagaagaaaaagtcaccatcagctgctgggcagtcagagtgttagcagctacttagcctggtaccagcaaaaacctggacaggctcccaggctcttcatctatggtgcatccaacagggccactggtgtcccagtccgcttcagcggcagtgggtgtgggacagatttcaccctcatcagcagcagtctggagtcagtctgaagatgttgcaacatattactgccagcagtataatagctacccacc
SEQ ID NO.120 IGKV4S1(F)
>IGKV4S1*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
gaaatcgtgatgacccagtctccaggctctctggctgggtctgcaggagagagcgtctccatcaactgcaagtccagccagagtcttctgtacagcttcaaccagaagaactacttagcctggtaccagcagaaaccaggagagcgtcctaagctgctcatctacttagcctccagctgggcatctggggtccctgcccgattcagcagcagtggatctgggacagatttcaccctcaccatcaacaacctccaggctgaagatgtgggggattattactgtcagcagcattatagttctcctcc
SEQ ID NO.121 IGKV4-1(ORF)
>IGKV4-1*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
gacatcacgatgactcagtgtccaggctccctggctgtgtctccaggtcagcaggtcaccacgaactgcagggccagtcaaagcgttagtggctacttagcctggtacctgcagaaaccaggacagcgtcctaagctgctcatctacttagcctccagctgggcatctggggtccctgcccgattcagcagcagtggatctgggacagatttcaccctcaccgtcaacaacctcgaggctgaagatgtgagggattattactgtcagcagcattatagttctcctct
SEQ ID NO.122 IGKV7-2(P)
>IGKV7-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gacattatgctgacccagtctccagcctccttgaccatgtgtctccaggagagagggccaccatctcttgcagggccagtcagaaagccagtgatatttggggcattacccaccatattaccttgtaccaacagaaatcagaacagcatcctaaagtcctgattaatgaagcctccagttgggtctggggtcctaggcaggttcagtggctgtgggtctgggactgatttcagcctcacaattgatcctgtggaggctggcgatgctgtcaactattactgccagcagagtaaggagtctcctcc
SEQ ID NO.123 IGKV(II)-1(P)
>IGKV(II)-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gaaattgcagattgtcaaatggataataccaggatgcggtctctagcctccctgactcccaggggagagaaccatcattacccataaaataaatcctgatgacataataagtttgcttggtatcaatagaaaccaggtgagattcctcgagtcctggtatacgacacttccatccttacaggtcccaaactggttcagtggcagtgtctccaagtcagatcttactctcatcatcagcaatgtgggcacacctgatgctgctacttattactgttatgagcattcagga
种系Jκ序列
SEQ ID NO.124 IGKJ1(F)
>GKJ1*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
gtggacgttcggagcaggaaccaaggtggagctcaaac
SEQ ID NO.125 IGKJ2(ORF)
>IGKJ2*01|家犬_拳师犬|ORF|J-区域|
tttatactttcagccagggaaccaagctggagataaaac
SEQ ID NO.126 IGKJ3(F)
>IGKJ3*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
gttcacttttggccaagggaccaaactggagatcaaac
SEQ ID NO.127 IGKJ4(F)
>IGKJ4*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
gcttacgttcggccaagggaccaaggtggagatcaaac
SEQ ID NO.128 IGKJ5(F)
>IGKJ5*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
gatcacctttggcaaagggacacatctggagattaaac
表3.犬科动物Igλ序列信息
种系Vλ序列
SEQ ID NO.129 IGLV1-35(P)
>IGLV1-35*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagctggcctcggtgtctggggccctgggccacagggtcagcatctcctggactggaagcagctccaacataagggttgattatcctttgagctgataccaacagctcccagaatgaagaacgaacccaaactcctcatctatggtaacagcaattggctctcaggggttccagatccattctctagaggctccaagtctggcacctcaggctccctgaccaactctggcctccaggctgaggacgaggctgattgttactgcgcagcgtgggacatggatctcagtgctc
SEQ ID NO.130 IGLV1-37(ORF)
>IGLV1-37*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
caatctgtgctgactcagctggcctcagtgtctgggtccttgggccagagggtcaccatctcctgctctggaagcacaaatgacattggtattattggtgtgaactggtaccagcagctcccagggaaggcccctaaactcctcatatacgataatgagaagcgaccctcaggtatccccgatcgattctctggctccaagtctggcaactcaggcaccctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgccagtccatggatttcagcctcggtggt
SEQ ID NO.131 IGLV1-41(ORF)
>IGLV1-41*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccagcctccgtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatttcctgcactggaagcagctccaacgttggttatagcagtagtgtgggctggtaccagcagttcccaggaacaggccccagaaccatcatctattatgatagtagccgaccctcgggggtccccgatcgattctctggctccaagtctggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgctcatcttgggacaacagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.132 IGLV1-44(F)
>IGLV1-44*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
caggctgtgctgaatcagccggcctcagtgtctggggccctgggccagaaggtcaccatctcctgctctggaagcacaaatgacattgatatatttggtgtgagctggtaccaacagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtggacagtgatggggatcgaccctcaggggtccctgacagattttctggctccagctctggcaactcaggcaccctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgtcagtctgttgattccacgcttggtgctca
SEQ ID NO.133 IGLV1-45(P)
>IGLV1-45*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtactgactcaatcagcctcagcgtctgggtccttgggccagagggtctccgtctcctgctctagcagcacaaacaacattggtattattggtgtgaagtggtaccagcagatcccaagaaaggcccctaaactcctcatatatgataatgagaagagaccctcaggtgtccccaattgattctctggctccaagtctggcaacttaggcaccctaaccatcaatgggcttcaggctgagggcgaggctgattattactgccagtccatggatttcagcctcggtggt
SEQ ID NO.134 IGLV1-46(F)
>IGLV1-46*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccagcctcagtgtccgggtctctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacattggtagagattatgtgggctggtaccaacagctcccgggaacacgccccagaaccctcatctatggtaatagtaaccgaccctcgggggtccccgatcgattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgctctacatgggacaacagtctcactgttcc
SEQ ID NO.135 IGLV1-48(F)
>IGLV1-48*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctatgctgactcagccagcctcagtgtctgggtccctgggccagaaggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtggtaattatgtgggctggtaccaacagctcccaggaataggccctagaaccgtcatctatggtaataattaccgaccttcaggggtccccgatcgattctctggctccaagtcaggcagttcagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgagtattactgctcatcatgggatgatagtctcagaggtca
SEQ ID NO.136 IGLV1-49(F)
>IGLV1-49*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
caggctgtgctgactcagccgccctcagtgtctgcggtcctgggacagagggtcaccatctcctgcactggaagcagcaccaacattggcagtggttatgatgtacaatggtaccagcagctcccaggaaagtcccctaaaactatcatctatggtaatagcaatcgaccctcaggggtcccggatcgcttctctggctccaagtcaggcagcacagcctctctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgccagtcctctgatgacaacctcgatgatca
SEQ ID NO.137 IGLV1-50(P)
>IGLV1-50*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctca...gtgtccgggtctctgggccagagagtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatc..................gatagaaaatatgttggctggtaccaacagctc...ccgggaacaggccccagaaccgtcatctatgataat.....................agtaaccgaccctcgggggtccct...gatcgattctctggctccaag......tcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgat...tattactgctcaacatacgacagcagtctcagtagtgg
SEQ ID NO.138 IGLV1-52(P)
>IGLV1-52*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcagtagatataatgtgaactggtaccaacagctcctgggaacaggccccagaaccctcatctatggtagtagtaaccgaccctcgggggtccccgattgattctctggctccaagtcaggcagcccagctaccctgaccatctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgctcaacatacgacaggggtctcagtgctcg
SEQ ID NO.139 IGLV1-54(P)
>IGLV1-54*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgactcagccgccctcagggtctgggggcctgggccagaggttcagcatctcctgttctggaagcacaaacaacatcagtgattattatgtgaactggtactaacagctcccagggacagcccctaaaaccattatctatttggatgataccagaccccctggggtcccggattgattctctgtctccaagtctagcagctcagctaccctgaccatctctgggctccaggctgaggatgaagctgattattactgctcatcctggggtgatagtctcaatgctcc
SEQ ID NO.140 IGLV1-55(F)
>IGLV1-55*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagaggatcaccatctcctgcactggaagcagctccaacattggaggtaataatgtgggttggtaccagcagctcccaggaagaggccccagaactgtcatctatagtacaaatagtcgaccctcgggggtgcccgatcgattctctggctccaagtctggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgctcaacgtgggatgatagtctcagtgctcc
SEQ ID NO.141 IGLV1-56(ORF)
>IGLV1-56*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
cggtctgtgctgactcagccgccctcagtgtcgggatctgtgggccagagaatcaccatctcccgctctggaagcacaaacagcattggtatacttggtgtgaactggtaccaagagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtagatggtactgggaatagaccctcaggggtccctgaccgattttctggctccaaatctggcaactcaggcactctgaccatcactgggcttcagcctgaggacgaggctgattattattgtcagtccattgaacccatgcttggtgctcc
SEQ ID NO.142 IGLV1-57(F)
>IGLV1-57*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
caggctgtgctgactccgctgccctcagtgtctgcggccctgggacagacggtcaccatctcttgtactggaaatagcacccaaatcagcagtggttatgctgtacaatggtaccagcagctcccaggaaagtcccctgaaactatcatctatggtgatagcaatcgaccctcgggggtcccagatcgattctctggcttcagctctggcaattcagccacactggccatcactgggctccaggatgaggacgaggctgattattactgccagtccttagatgacaacctcaatggtca
SEQ ID NO.143 IGLV1-58(F)
>IGLV1-58*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtagatatagtgttggctggttccagcagctcccgggaaaaggccccagaaccgtcatctatagtagtagtaaccgaccctcaggggtccctgatcgattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgctcaacatacgacagcagtctcagtagtag
SEQ ID NO.144 IGLV1-61(P)
>IGLV1-61*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgacatagccaccctcagtgtctggggccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctcaagcatgggtagttattatgtgagctggcacaagcagctcccaggaacaggccccagaaccatcatgtgttgtaaaaacatcgaccttcgggaatctccaatcaagtctctggctcccattctggcaacacagccaccctgaccatcactgggctcctggctgaggatgaggctgattattactgttcaacatgggatgacaatctcaatgcacc
SEQ ID NO.145 IGLV1-63(P)
>IGLV1-63*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|cagtctgtgctgactcagctgccctcagtgtctggggccctgggccagagggtcaccatctcctgctctggaagcagctctaaacttggggcttatgctctgaactagaaccaacaattcccaggaacagattccaatttcctcatctatgatgatagtaattgatctttctggatgcctgattaattctgtggctccacatccagcagttcaggctccctgaccatcactgggctctgggatgaggacaaggctgattattactgccagtgccattaccatagcctccgtgct
SEQ ID NO.146 IGLV1-65(P)
>IGLV1-65*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccagcctcagtgtctggatccctgggccaaagggtcaccatctcctgcactggaagcacaaacaacatcggtggtgataattatgtgcactggtaccaacagctcccaggaaaggcacccagtctcctcatctatggtgatgataacagagaatctggggtcccggaacgattctctggctccaagtcaggcagctcagccactctgaccatcactgggctccatgctgaggacgaggctgatattattgccagtcctacgatgacagcctcaatactca
SEQ ID NO.147 IGLV1-66(F)
>IGLV1-66*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccgccctcagtgtcaggatctgtgggccagagaatcaccatctcctgctctggaagcacaaacagcattggtatacttggtgtgaactggtaccaactgctctcaggaaaggcccctaaactcctcgtagatggtactggaaatcgaccctcaggggtccctgaccgattttctggctccaaatctggcaactcaggcactctgaccatcactgggcttcagcctgaggacgaggctgattattattgtcagtccattgaacccatgcttggtgctcc
SEQ ID NO.148 IGLV1-67(F)
>IGLV1-67*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtcctgactcagccggcctcagtgtctggggttctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacattggtggaaattatgtgagctggcaccagcaggtcccagaaacaggccccagaaacatcatctatgctgataactaccgagcctcgggggtccctgatcgattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgtgctccaggctgaggatgaggctgattattactgctcagtgggggatgatagtctcaaagcacc
SEQ ID NO.149 IGLV1-68(P)
>IGLV1-68*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtccatcctgactcagcagccctcagtctctgggtcactgggccagagggtcaccatctcttgcactggattccctagcaacaatgattatgatgcaatgaaaattcatacttaagtgggctggtaccaacagtccccaggaaagtcacccagtctcctcatttatgatgaaaccagaaactctggggtccctgatcgattctctggctccagaactggtagctcagcctccctgcccatctctggactccaggctgaggacaagactgagtattactgctcagcatgggatgatcgtcttgatgctca
SEQ ID NO.150 IGLV1-69(P)
>IGLV1-69*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctaactcagccaccctcagtgtcggggtcgctgggccagagggtcaccatctcctgctctggaagcacaaacaacatcagtattgttggtgcgagctggtaccaacagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtggacagtgatggggatcgaccgtcaggggtccctgaccgattttctggctctaagtctggcaaatcagccaccctgaccatcactgggcttcaggctgaggacgaggctgattattactgtatattggtcccacgctttgtgctca
SEQ ID NO.151 IGLV1-69-1(P)
>IGLV1-69-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccactgttagggcctggggccctgggcagagggtcaccctctcctgacctggaagagtcccagtattggtgattatggtatgaaatggtacaagcagcttgcaaggacagaccccagactcgtcatctatggcaatagcaattgatcctcgggtccccaatcaattttctggctctggttttggcatcactggctccttgaccacctctgggctccagactgaaaaataggctgattactagtgcttctccagtgatccaggcctgt
SEQ ID NO.152 IGLV1-70(F)
>IGLV1-70*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccggcctccgtgtctgggtccctgggccagagagtcaccatctcttgcactagaagcagctcgaacgttggctatggcaatgatgtgggatggtaccagcagctcccaggaacaggccccagaaccatcatctataataccaatactcgaccctctggggttcctgatcgattctctggctccaaatcaggcagcacagccaccctgaccatctctggactccaggctgaggacgaggctgattattactgctcttcctatgacagcagtctcaatgctca
SEQ ID NO.153 IGLV1-72(ORF)
>IGLV1-72*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
cagtctgtgctaactcagccggcctcagtgtctggttccctgggtcagagggtcaccatctgcactggaagcagctccaacattggtacatatagtgtaggctggtaccaacagctcccaggatcaggccccagaaccatcatctatggtagtagtaaccgaccgttgggggtccctgatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaagctgattattactgcttcacatacgacagtagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.154 IGLV1-73(F)
>IGLV1-73*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgaatcagccaccttcagtgtctggatccctgggccagagaatcaccatctcctgctctggaagcacgaatgacatcggtatgcttggtgtgaactggtaccaacagctcccaggaaatgcccctaaactccttgtagatggtactgggaatcgaccctcaggggtccctgaccaattttctggctccaaatctggcaattcaggcactctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggctgattattattgtcagtcctatgatctcacgcttggtgctcc
SEQ ID NO.155 IGLV1-74(P)
>IGLV1-74*01|家犬_拳师犬|P|V-区域||
cagtccatgatgactcagccaccctcagtgtctgggtcactgggccagagggtcaccatctactgcactggaatccctagcaacactgattatagtggattggaaatttatacttatgtgagctggtaccaacagtataaggaaaggcacccagtctcctcatctatggggatgataccggaaactctgaggtccctgatcaattctctggctccaggtctggtagctcaacctccctgaccatctctggactccaggctgaggatagtcttaatgctca
SEQ ID NO.156 IGLV1-75(F)
>IGLV1-75*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgactgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtggatataatgttggctggttccagcagctcccgggaacaggccccagaaccgtcatctatagtagtagtaaccgaccctcgggggtcccggatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgagtattactgctcaacatgggacagcagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.157 IGLV1-78(P)
>IGLV1-78*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccggcctcagtgtccaggtccctgggccagatagtcaccatctcttgcgctggaagcagctccaacatccgtacaaaatatgtgggctggtactaacagctcccgagaacaggccccagaaccgtcatctatggtaatagtaactgaccctcgggggtcctcgatcaattctctggctccaagtcaggcagcatagccaccctgaccatctctgtgctccaggctgaggacgaggcttattattactgctcaacatatgacagcagtctcagtgctct
SEQ ID NO.158 IGLV1-79(P)
>IGLV1-79*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccggcctctgtgtctggggccctgggccagaggtcaccatctcctgcactaggagcagctccaatgttggttatagcagttatgtgggctggtaccagcagctcccaggaacaggccccaaaaccatcatctataataccaatactcgaccctctggggttcctgatcgattctctggctccaaatcaggcagcacagccacccttaccattgctggactccaggctgaggacgaggctgattattactgctcatcctatgacagcagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.159 IGLV1-79-1(P)
>IGLV1-79-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctatgctgactcaccctggccagaggatcaccctctcctgacctggaagagtcccagtattggtgattatggtgtgaaatggtacaggcagctagcaagaacagaccccagactcctcatttatagcaatagcaatcgatccttgagtccccaatcaattttccgcctctggttttgacattactggctccttgaccacctccaggctccagactgaaaaataggctgattactagtgcttatacagtgatccaggcttgtggggctg
SEQ ID NO.160 IGLV1-80(F)
>IGLV1-80*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccgacctcagtgtcgtggtccctgggccagagggtcacaatctcatgctctagaagcacgaataacatcggtattgtcggggcgagctggtaccaacagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtggacagtgatggggatcaactgtcaggggtccctgaccgattttctggctccaagtctggcaactcagccaacctgaccatcactgggctccaggctgaggacaaggctgattattactgccagtcctttgatcacacgcttggtgctcg
SEQ ID NO.161 IGLV1-81(P)
>IGLV1-81*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgttgagtcagccagcctcagtgtctggggttctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtggaaattacgtgagctggcaccagcaggtcccagaaacaggccccagaaacatcatctatgctgataactactgagcctcgggggtccctgatggattctctggctccaagtaaggcagcacagccaccccgaccatctctgtgctccaggctgaggatgaggctgattattactgctcagtgggggataatagtctcaaagcacc
SEQ ID NO.162 IGLV1-82(F)
>IGLV1-82*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccagcctcagtgtcggggtccctgggccagagagtcaccatctcctgctctggaaggacaaacatcggtaggtttggtgctagctggtaccaacagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtggacagtgatggggatcgaccgtcaggggtccctgaccgattttccggctccaagtctggcaactcggccactctgaccatcactggtctccatgctgaggacgaggctgattattactgtctgtctattggtcccacgcttggtgctca
SEQ ID NO.163 IGLV1-82-1(P)
>IGLV1-82-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccactgttagggcctggggccctggccagaggctcactctctcctgccctggaagagtcccagtattggtgattatgatgtgaagtggtacaggcagctcacaagaacagaccctagactcctcatccatggtgatagcaattgatcctcgggtccccaatcacttttctggctctgtttttggcatcactggctgcttgaccacctctgggctccagactgaaaaataggctgattactagtgcttatccagtgatccag
SEQ ID NO.164 IGLV1-83(P)
>IGLV1-83*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccggcctctgtgtctggggccctgggccagaggtcaccatctcctgcactaggagcagctccaatgttggttatagcagttatgtgggctggtaccagcagctcccaggaacaggccccaaaaccatcatctataataccaatactcgaccctctggggtccctgatcgattctctggctccaaatcaggcaggacagccacccttaccattgctggactccaggctgaggacgaggctgattattactgctcatcctatgacagcagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.165 IGLV1-84(F)
>IGLV1-84*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
caggctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaatgttggttatggcaattatgtgggctggtaccagcagctcccaggaacaggccccagaaccctcatctatggtagtagttaccgaccctcgggggtccctgatcgattctctggctccagttcaggcagctcagccacactgaccatctctgggctccaggctgaggatgaagctgattattactgctcatcctatgacagcagtctcagtggtgg
SEQ ID NO.166 IGLV1-84-1(ORF)
>IGLV1-84-1*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccagcctcagcgtctgggtccttgggccagagggtcactgtctcctgctctagcagcacaaacaacatcggtattattggtgtgaagtggtaccagcagatcccaggaaaggcccataaactcctcatatatgataatgagaagcgaccctcaggtgtccccaatcgattctctggctccaagtctggcgacttaagcaccctgaccatcaatgggcttcagggtgaggacgaggctgattattattgccagtccatggatttcagcctcggtggtca
SEQ ID NO.167 IGLV1-86(ORF)
>IGLV1-86*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccagcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaatccccagcaacacagattttgatggaatagaatttgatacttctgtgagctggtaccaacagctcccagaaaagccccctaaaaccatcatctatggtagtactctttcattctcgggggtccccgatcgattctctggctccaggtctggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgctcatcctgggatgatagtctcaaatcata
SEQ ID NO.168 IGLV1-87(F)
>IGLV1-87*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccagcctcagtgtctggatccctgggccaaagggtcaccatctcctgcactggaagcacaaacaacatcggtggtgataattatgtgcactggtaccaacagctcccaggaaaggcacccagtctcctcatctatggtgatgataacagagaatctggggtccctgaacgattctctggctccaagtcaggcagctcagccactctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggctgattattattgccagtcctacgatgacagcctcaatactca
SEQ ID NO.169 IGLV1-88(P)
>IGLV1-88*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccgccctcagtgtcgggatctgtgggccagagaatcaccatctcctgctctggaagcacaaacagctaccaacagctctcaggaaaggcctctaaactcctcgtagatggtactgggaaccgaccctcaggggtccccgaccgattttctggctccaaatctggcaactcaggcactctgaccatcactgggcttgggacgaggctgaggacgaggctgaggacgaggctgattattattgttagtccactgatctcacgcttggtgctcc
SEQ ID NO.170 IGLV1-88-2(P)
>IGLV1-88-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggccgccctgggcaatgagttcgtgcaggtcaaggctgagacagacctgcagaattcaggtttgtctgagacacagctcatcagatgtgtgcagtgtgtgtcctggtaccaacggctcccatgaatgggtcctaaatccttatctagaaataacatttagatcactttgtggcccggatccattctctggctccatgtctggcaactctggcctcatgaacatcactgggctatggtctgaagatggagctgctcttcacaggccctcttgggacaaaattcttggggct
SEQ ID NO.171 IGLV1-88-3(P)
>IGLV1-88-3*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtccatcctgactcagccgccctcagtctctgggtcactgggccagagggtcaccatctcctgcaatggaatccctgacagcaatgattatgatgcatgaaaattcatacttacgtgagctggtaccaacagttcccaagaaagtcaccagtctcctcatctacgatgataccagaaactctggggaccctgatcaattctctggctccagatctggtaactcagcctccctgcccatctctggactccaggctgaggacgaggctgagtattactgctcagcatgggatgatcgtcttgatgctca
SEQ ID NO.172 IGLV1-89(P)
>IGLV1-89*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtactgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtggatattatgtgagctggctctagcagctcccgggaacaggccccagaaccatcatctatagtagtagtaaccgaccttcaggggtccctgatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgttcaacatacgacagcagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.173 IGLV1-89-2(P)
>IGLV1-89-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cttcctgtgctgacccagccaccctcaaggtctgggggtctggttcagaagatcaccatcttctgttctggaagcacaaacaacatgggtgataattatgttaactggtacaaacagcttccaggaacggcccctaaaaccatcatctaagtggatcatatcagaccctcaggggtcctggagagattctctgtctccaattctggcagctcagccaacctgaccatctctgggctccaggatgaggactaggctgattattattgctcatcctggcatgatagtctcagtgctcc
SEQ ID NO.174 IGLV1-91(P)
>IGLV1-91*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtgctgactcagctgccctcagtgtctgcagccctgggacagagggtcaccatctgcactggaagcagcaccaacatcggcagtggttattatacactatggtaccagcagctgcaggaaagtcccctaaaactatcatctatggtaatagcaatcgacccttgagggtcccggatcgattctctggctccaagtatggcaattcagccacgctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggatgattattactgccagtcctctgatgacaacctcgatggtca
SEQ ID NO.175 IGLV1-92(F)
>IGLV1-92*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcggtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaatgttggttatggcaattatgtgggctggtaccagcagcttccaggaacaggccccagaaccattatctgttataccaatactcgaccctctggggttcctgatcgatactctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaagacgagactgattattactgtactacgtgtgacagcagtctcaatgctag
SEQ ID NO.176 IGLV1-94(F)
>IGLV1-94*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagcctccctcagtgtccgggttcctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtagaggttatgtgcactggtaccaacagctcccaggaacaggccccagaaccctcatctatggtattagtaaccgaccctcaggggtccccgatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagccactctgacaatctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgctcatcctgggacagcagtctcagtgctct
SEQ ID NO.177 IGLV1-95-1(P)
>IGLV1-95-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccactgttagggcctgggttcctggccagagggtcaccctctcctgccctggaagagtctcagttttggtgattatggtgtgaaacggtacaggaagctcgcatggacagaccccagactcctcatctatggcaatagcaattgattctcgggtccccagtctattttctggctctggttttggcatcactggctccttgaccacctccgggctccagactgaaaaataggctgatttctagtgcttctccagtgatccaggccttt
SEQ ID NO.178 IGLV1-96(F)
>IGLV1-96*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgcgctgactcaaacggcctccatgtctgggtctctgggccagagggtcaccgtctcctgcactggaagcagttccaacgttggttatagaagttatgtgggctggtaccagcagctcccaggaacaggccccagaaccatcatctataataccaatactcgaccctctggggttcctgatcgattctctggctccatatcaggcagcacagccaccctgactattgctggactccaggctgaggacgaggctgattattactgctcatcctatgacagcagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.179 IGLV1-97(P)
>IGLV1-97*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgaatcagctgccttcagtgttaggatccctgggccagagaatcaccatctcctgctctggaagcacgaatgacatcggtatgcttggtgtgaactggtaccaagagccgccaggaaaggcccctaaactcctcgtagatggtactgggaatcgaccctcagggtccctgccgattttctggctccaaatctggcaactcaggcactctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggctgattattattgtcagtccactgatctcacgcttggtgctcc
SEQ ID NO.180 IGLV1-97-4(F)
>IGLV1-97-4*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagcctccctcagtgttcaggtccctgggccagagggtcactatatcctgcactggaagcagctccaacgtcggtagaggttatgtgatctggtaccaacagctcctgggaacacgcccaagaaccctcatatatggtagtagtaaccaaccctcaggggtccccaatcaattctctggctccaggtcaggcagcacagacactctgacaatctctgggttccaggctgaggatgaggctgattattactgctcatcctgggacagcagtctcagtgctct
SEQ ID NO.181 IGLV1-98(P)
>IGLV1-98*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccagtctcagtgtctggggccctgtgccagagggtcaccatctcctgcactggaaacagctccaacattggttatagcagttgtgtgagctgatatcagcagctcccaggaacaggccccagaaccatcatctatagtatgaatactcaaccctctggggttcctgatcgattctctggctccaggtcaggcaactcagccaccctaaccatctctgggctccaggctgaggacaaggctgactattactgctcaacatatgacagcagtctcagtgctca
SEQ ID NO.182 IGLV1-100(F)
>IGLV1-100*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccgacctcagtgtcggggtcccttggccagagggtcaccatctcctgctctggaagcacgaacaacatcggtattgttggtgcgagctggtaccaacagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtggacagtgatggggatcgaccgtcaggggtccctgaccggttttccggctccaagtctggcaactcagccaccctgaccatcactgggcttcaggctgaggacgaggctgattattactgccagtcctttgataccacgcttgatgctca
SEQ ID NO.183 IGLV1-100-1(P)
>IGLV1-100-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtactgactcagcagccgttagtgcttggggccctggccagagggtcagcttctcctgccttggaagagtcccagtattggtaattatggtgtgaaatggtacaagcagctcaaaaggacagaccccagacttctcatctatggcaatagcaattgatcctcgggtccccaatcaattttctggctctggttttggcatcactggctccttgaccacctatgggctccagactgaaaaataggctgattactagtgcttttccagtgatccagtcctgaggggc
SEQ ID NO.184 IGLV1-101(P)
>IGLV1-101*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccggcctccgtgtctggggccttgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaatgttggttatagcagctatgtgggcttgtaccagcagctcccaggaacaggcctcaaaaccatcatctataataccaatactcgaccctctggggttcctgatcaattctctggctccaaatcaggcagcacagccacctgaccattgctggacttcaggctgaggacgaggctgattattactgctcatcctatgacagcagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.185 IGLV1-103(F)
>IGLV1-103*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
caggctgtgctgactcagccaccctctgtgtctgcagccctggggcagagggtcaccatctcctgcactggaagtaacaccaacatcggcagtggttatgatgtacaatggtaccagcagctcccaggaaagtcccctaaaactatcatttatggtaatagcaatcgaccctcgggggtcccggttcgattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatcactgggatccaggctgaggatgaggctgattattactgccagtcctatgatgacaacctcgatggtca
SEQ ID NO.186 IGLV1-104(P)
>IGLV1-104*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccagcttcagtgtctgggtccctgggccagaggatcaccatctcctgcactaaaagcagctccaacatcggtaggtattatgtgagctgacaacagctcccaggaacaggccccagaaccgtcatctatgataataataactgaccctcgggggtccctgatcaattttctggctctaaatcaggcagcacagccaccctgaccatctctaggctccaggctgaggacgatgctgattattactgctcgccatatgccagcagtctcagtgctgg
SEQ ID NO.187 IGLV1-106(F)
>IGLV1-106*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgttgactcaaccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcatcatctcctgcactggaagcagctccagcattggcagaggttatgtgggctggtaccaacagctcccaggaacaggccccagaaccctcatctatggtattagtaacctacccccgggagtccccaatagattctctggttcgaggtcaggcagcacagccaccctgaccatcgctgagctccaggctgaggacgaggctgattattactgctcatcgtgggacagaagtctcagtgctcc
SEQ ID NO.188 IGLV1-107(P)
>IGLV1-107*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtgctgactcagcccgccctcagtgtctgcggccttgggacagagggtcaccatctcctgcactggaagcagcaccaacatcagcagtggttacgttgtacaatggtaccagcagctcccaggaaagtcccctaaaacaatctatggtactagcaagtgacccttggggatcccggttcaattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatcactggtatctaggctgaggacgaggctgattattactgccaatcctatgatgacaacctcgatggtca
SEQ ID NO.189 IGLV1-110(P)
>IGLV1-110*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtacggaatcaaccgccctcagagtctgcagccctgggacagagagtcaccatctcctgcacgggaagcagatccaacattggcagtggttatgctgtacaatggtaccaacggctcacaggaaagtctccttaaaactatcatctatggtaatagcaatcaaccctcgggggtcctggatcaattctctggctccaagtgaggcagcacagccaccctgaccatcactgggatccagtctgaggacgaggctgattattactgccagtcctatgatagaagtctctgtgctca
SEQ ID NO.190 IGLV1-111(ORF)
>IGLV1-111*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggcctgagggtcaccatctgctgcactggaagcagctccaacatcagtagttattatgtgggctggtaccaaccactcgcgggaacaggccccagaactgtcatctatgataatagtaaccgtccctcgggggtccctgatcaattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatctctcggctccaggctgaggacgaggctgattattacggctcatcatatgacagcagtctcaatgctgg
SEQ ID NO.191 IGLV1-112(P)
>IGLV1-112*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccagcctcagtgtctcagtccctgggtcagagggtcaccatctcctgtactggaagcagctccaatgttggttataacagttatgtgagctggtaccagcagctcccaggaacagtccccagaaccatcatctattataccaatactcgaccctatggggttcctgatcgattctctggctccaaatcaggcaactcagccaccctgaccattgctggactccaggctgaggacgaggctgattattattgctcaacatatgacagcagtctcagtggtgc
SEQ ID NO.192 IGLV1-113(P)
>IGLV1-113-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgaatcagacgccctcagtgtcggggtccctgggccagagagtcgccatctcctgctctggaagcacaaacatcagtaggtttggtgcgagctggtaacaacagctcctgggaaaggcttcaaaactcctcctagacagtgatggggatcaaccatcagtggtccctgactgattttccggctccaagtctggcaactcaggtgccctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgccagtcctttgatcccacacttggtgctca
SEQ ID NO.193 IGLV1-114(P)
>IGLV1-114*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctttgctgactcagccaccctcagtgtctgaggccctgggacagagggtcaccatctcctgcactggaagcagcaccaacatcggcagtggttatgatgtacaatggtaccagcagctcccaggaaagtcccctcaaactatcgtatacggtaatagcaattgaccctcgggggtcccagatcaattctctggctccaagtctcacaattcagccaccctgaccatcactgggctccagactgaggacgaggctgattattactgccagtcctctgatgacaacctcga
SEQ ID NO.194 IGLV1-115(P)
>IGLV1-115*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccagcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtagatatagtgtaggctgataccagcagctcccgggaacaggccccagaactgtcatctatggtagtagtagccgaccctcgggggtccccgatcgattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatctcagggctccaggctgaggacgaggctgattattactgttcaacatacgacagcagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.195 IGLV1-116(F)
>IGLV1-116*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagcctgtgctcactcagccgccctcagtgtctgggttcctgggacagagggtcactatctcctgcactggaagcagctccaacatccttggtaattctgtgaactggtaccagcagctcacaggaagaggccccagaaccgtcatctattatgataacaaccgaccctctggggtccctgatcaattctctggctccaagtcaggcaactcagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgagactgattattactgctcaacgtgggacagcaggctcagagctcc
SEQ ID NO.196 IGLV1-118(P)
GLV1-118*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactgaaagcagctccaacatcggtggatattatgtgggctggtaccaacagctcccaggaacaggccccagaaccatcatctatagtagtagtaaccgaccctcaggggtccctgattgattctctggctccaggtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgctctacatgggacagcagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.197 IGLV1-118-2(P)
>IGLV1-118-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ctgcctgtgctgacccagccgccctcaaggtctgggggtctggttcagaggttcaccatcttctgttctggaagcacaaacaacataggtgataattattttaactggtacaaacagcttccaggaacggcccctaaaaccatcatctaagtggatcatatcagaccctcaggggtcctggagagattctctgtctccaattctggcagctcagccaacctgaccatctctgggctccaggctgaggactaggctgattattattgctcatcctgggatgatagtctcaatgctcc
SEQ ID NO.198 IGLV1-122(P)
>IGLV1-122*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtgctgactcagctgccctcagtgtctgcagccctgggacagagggtcaccatctgcactggaagcagcaccaacatcggcagtggttattatacactatggtaccagtagctgcaggaaagtcccctaaaactatcatctatggtaatagcaatcgacccttgagggtcccggatcgattctctggctccaagtatggcaattcagccacgctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggatgattattactgccagtcctctgatgacaacctcgatggtca
SEQ ID NO.199 IGLV1-123(P)
>IGLV1-123*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggtcagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtgaatattatgtgagttggctccagcagctcccgggaacacgccccagaaccgtcatctatagtagtagtaaccgaccctcaggggtccctgatcgattctctggctccaagtcaggtagcatagccaccctatctctgggctccaggctgaagacgaggctgattattactgtactacgtgggacagcagtctcaatgctgg
SEQ ID NO.200 IGLV1-125(F)
>IGLV1-125*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtccgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtagaggttatgtgggctggtaccaacagctcccgggaacaggccccagaaccctcatctatggtaatagtaaccgaccctcaggggtccccgatcggttctctggctccaggtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgctcatcgtgggacagcagtctcagtgctct
SEQ ID NO.201 IGLV1-127(P)
>IGLV1-127*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagcctccctcagtgtctgggtccctgggccagaggtcaccgtctcctgcactggaagctgcttcaacattggtagatatagtgtgagctggctccagcagctcccgggaacaggccccagaaccatcatctattatgatcgtagccgaccctcaggggttcccgatcgattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgctcatcctatgacagcagtctcaaaggtca
SEQ ID NO.202 IGLV1-129(P)
>IGLV1-129*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccagtctcagtgtctggggccctgtgccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacattggttatagcagctgtgtgagctgatatcagcagctcccaggaacaggccccagaaccatcatctatagtatgaatactctaccctctggggttcctgatcgattgtctggctccaggtcaggcaactcagccaccctaaccatctctgggctccaggctgaggacaaggctgactattactgctcaacatatgacagcagtctcaatgctca
SEQ ID NO.203 IGLV1-130(P)
>IGLV1-130*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgacccagctggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatcacctgcactggaagcagctccaacattggtagtgattatgtgggctggttccaacagctcccaggaacaggccctagaaccctcatctaaggcaatagtaaccgaccctcgggggtccctgatcaattctctggctccaagtctggcagtacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggatgatgctgattattactgcacatcatgggatagcagtctcaaggctcc
SEQ ID NO.204 IGLV1-132(ORF)
>IGLV1-132*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
cagtctgtgctgactcagcctccctcagtgtctgggaccctggggcaaagggtcatcatctcctgcactggaatccccagcaacataaatttagaagaattgggaatcgctactaaggtgaactggtaccaacagctcccaggaaaggcacccagtctcctcatctatgatgatgatagcagaggttctgggattcctgatcgattctctggctccaagtctggcaactcaggcaccctgaccatcactgggctccaggctgaggatgaggctgattattattgccaatcctatgatgaaagccttggtgtt
SEQ ID NO.205 IGLV1-133(P)
>IGLV1-133*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|cagtctgtgctgactcagcctccctcagtgttcaggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacgtcggtagaggttatgtgatctggtaccaaagctcctgggaacacgcccaagaaccctcatatatggtagtagtaaccaaccctcaggggtccccaatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagacactctgacaatctctgtgttccaggctgaggatgaggctgattattactgctcatcctgggacagcagtctcagtgctct
SEQ ID NO.206 IGLV1-135(F)
>IGLV1-135*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgaatcagctgccttcagtgttaggatccctgggccagagaatcaccatctcctgctctggaagcacgaatgacatcggtatgcttggtgtgaactggtaccaagagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtagatggtactgggaatcgaccctcaggggtccctgaccgattttctggctccaaatctggcaactcaggcactctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggctgattattattgtcagtccactgatctcacgcttggtgctcc
SEQ ID NO.207 IGLV1-136(F)
>IGLV1-136*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtagaggttatgtgggctggtaccagcagctcccaggaacaggccccagaaccctcatctatgatagtagtagccgaccctcgggggtccctgatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagcaaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgctcagcatatgacagcagtctcagtggtgg
SEQ ID NO.208 IGLV1-138(F)
>IGLV1-138*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaatgttggttatggcaattatgtgggctggtaccagcagctcccaggaacaagccccagaaccctcatctatgatagtagtagccgaccctcgggggtccctgatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagcaaccctgaccatctctgggctccaggctgaggatgaagccgattattactgctcatcctatgacagcagtctcagtggtgg
SEQ ID NO.209 IGLV1-139(F)
>IGLV1-139*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
caggctgtgctgactccgctgccctcagtgtctgcggccctgggacagacggtcaccatctcttgtactggaaatagcacccaaatcagcagtggttatgctgtacaatggtaccagcagctcccaggaaagtcccctgaaactatcatctatggtgatagcaatcgaccctcgggggtcccagatcgattctctggcttcagctctggcaattcagccacactggccatcactgggctccaggatgaggacgaggctgattattactgccagtccttagatgacaacctcaatggtca
SEQ ID NO.210 IGLV1-140(P)
>IGLV1-140*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccggcctccgtgtctggggacttgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaattttggttatagcagctatgtgggcttgtaccagcagctcccaggaacaggccccagaaccatcatctataataccaatactcgaccctctggggttcctgatcgattctctggctccaaatcaggcagcacagccacctgaccattgctggacttcaagctgaggacgaggctgattattactgctcatcctatgacagcagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.211 IGLV1-140-1(P)
>IGLV1-140-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtactgactcagccgccattagtgcttggggccctggccagagggtcaccttctcctgccttggaagagtcccagtattggtgattatggtgtgaaatggtacaagcagctcaaaaggacagaccccagacttctcatctatggcaatagcaattgatcctcgggtccccaatcaattttctggctctggttttggcatcactggctccttgaccacctatgggctccagactgaaaaataggctgattactagtgcttctccggtgatccag
SEQ ID NO.212 IGLV1-141(F)
>IGLV1-141*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccgacctcagtgtcggggtcccttggccagagggtcaccatctcctgctctggaagcacgaacaacatcggtattgttggtgcgagctggtaccaacagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtgtacagtgttggggatcgaccgtcaggggtccctgaccggttttccggctccaactctggcaactcagccaccctgaccatcactgggcttcaggctgaggacgaggctgattattactgccagtcctttgataccacgcttggtgctca
SEQ ID NO.213 IGLV1-143(P)
>IGLV1-143*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccagtctcagtgtctggggccctgtgccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacattggttatagcagctgtgtgagctgatatcagcagctcccaggaacaggccccagaaccatcatctatagtatgaatactctaccctctggggttcctgatcgattgtctggctccaggtcaggcaactcagccaccctaaccatctctgggctccaggctgaggacaaggctgactattactgctcaacatatgacagcagtctcaatgctca
SEQ ID NO.214 IGLV1-144(F)
>IGLV1-144*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagcctccctcagtgttcaggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctgcaacgtcggtagaggttatgtgatctggtaccaacagctcctgggaacacgcccaagaaccctcatatatggtagtagtaaccaaccctcaggggtccccaatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagccactctgacaatctctgggttccaggctgaggatgaggctgattattactgctcatcctgggacagcagtctcagtgctct
SEQ ID NO.215 IGLV1-146(P)
>IGLV1-146*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgaatcagctgccttcagtgttaggatccctgggccagagaatcaccatctcctgctctggaagcacgaatgacatcggtatgcttggtgtgaactggtaccaagagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtagatggtactgggaatcgaccctcaggggtccctgactgattttctggctccaaatctggcaactcaggcactctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggctgattattattgtcagtccactgatctcacgcttggtgctcc
SEQ ID NO.216 IGLV1-147(F)
>IGLV1-147*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtagaggttatgtgggctggtaccagcagctcccaggaacaggccccagaaccctcatctatgataatagtaaccgaccctcgggggtccctgatcgattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgctcaacatacgacagcagtctcagtggtgg
SEQ ID NO.217 IGLV1-149(F)
>IGLV1-149*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaatgttggttatggcaattatgtgggctggtaccagcagctcccaggaacaggccccagaaccctcatctatcgtagtagtagccgaccctcgggggtccctgatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagcaaccctgaccatctctgggctccaggctgaggatgaagccgattattactgctcatcctatgacagcagtctcagtggtgg
SEQ ID NO.218 IGLV1-150(F)
>IGLV1-150*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
caggctgtgctgactccgctgccctcagtgtctgcggccctgggacagacggtcaccatctcttgtactggaaatagcacccaaatcggcagtggttatgctgtacaatggtaccagcagctcccaggaaagtcccctgaaactatcatctatggtgatagcaatcgaccctcgggggtcccagatcgattctctggcttcagctctggcaattcagccacactggccatcactgggctccaggatgaggacgaggctgattattactgccagtccttagatgacaacctcgatggtca
SEQ ID NO.219 IGLV1-151(F)
>IGLV1-151*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgcgctgactcaaacggcctccatgtctgggtctctgggccagagggtcaccgtctcctgcactggaagcagttccaacgttggttatagaagttatgtgggctggtaccagcagctcccaggaacaggccccagaaccatcatctataataccaatactcgaccctctggggttcctgatcgattctctggctccatatcaggcagcacagccaccctgactattgctggactccaggctgaggacgaggctgattattactgctcatcctatgacagcagtctcaaagctcc
SEQ ID NO.220 IGLV1-151-1(P)
>IGLV1-151-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccactgttagggcctgggttcctggccagagggtcaccctctcctgccctggaagagtctcagttttggtgattatggtgtgaaacggtacaggaagctcgcatggacagaccccagactcctcatctatggcaatagcaattgattctcgggtccccagtctattttctggctctggttttggcatcactggctccttgaccacctccgggctccagactgaaaaataggctgatttctagtgcttc
SEQ ID NO.221 IGLV1-152(P)
>IGLV1-152*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caatctgtgctgatccagccggcctcagtgtcgggatccctgggccagagagtcaccatctcctgctctggaaggacaaacaacatcggtaggtttggtgcgagctggtaccaacagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtggacagtgatggggattgaccgtcaggggtccctgaccggttttccggctccaggtctggcagctcagccaccctgaccatcactggggtccaggctgaggatgaggctgattattactgccagtcctttgatcccacgcttggtgctca
SEQ ID NO.222 IGLV1-154(P)
>IGLV1-154*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccgtcctcagtgtccgggtccctgggccagagggtcactgtcccctgcactggaagcagctccaacattggtagatatagtgtgagctggctatatctgctggctccagcagctcccgggaacaggccccagaaccatcatctattatgattgtagccgaccctcaggggttcccgatcgattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgctcatcctatgacagcagtctcaaaggtca
SEQ ID NO.223 IGLV1-155(F)
>IGLV1-155*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagcctccctcagtgtccgggttcctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtagaggttatgtgcactggtaccaacagctcccaggaacaggccccagaaccctcatctatggtattagtaaccgaccctcaggggtccccgatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagccactctgacaatctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgctcatcctgggacagcagtctcagtgctct
SEQ ID NO.224 IGLV1-157(F)
>IGLV1-157*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccggcctcagtgtctgggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacatcggtagaggttatgtgggctggtaccagcagctcccaggaacaggccccagaaccctcatctatgataatagtaaccgaccctcgggggtccctgatcgattctctggctccaagtcaggcagcacagccaccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgctcaacatacgacagcagtctcagtggtgg
SEQ ID NO.225 IGLV1-158(F)
>IGLV1-158*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgaatcagctgccttcagtgttaggatccctgggccagagaatcaccatctcctgctctggaagcacgaatgacatcggtatgcttggtgtgaactggtaccaagagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtagatggtactgggaatcgaccctcaggggtccctgaccgattttctggctccaaatctggcaactcaggcactctgaccatcactgggctccaggctgaggacgaggctgattattattgtcagtccactgatctcacgcttggtgctcc
SEQ ID NO.226 IGLV1-159(F)
>IGLV1-159*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagcctccctcagtgttcaggtccctgggccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctgcaacgtcggtagaggttatgtgatctggtaccaacagctcctgggaacacgcccaagaaccctcatatatggtagtagtaaccaaccctcaggggtccccaatcgattctctggctccaggtcaggcagcacagccactctgacaatctctgggttccaggctgaggatgaggctgattattactgctcatcctgggacagcagtctcagtgctct
SEQ ID NO.227 IGLV1-160(P)
>IGLV1-160*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgtgctgactcaaccagtctcagtgtctggggccctgtgccagagggtcaccatctcctgcactggaagcagctccaacattggttatagcagctgtgtgagctgatatcagcagctcccaggaacaggccccagaaccatcatctatagtatgaatactctaccctctggggttcctgatcgattgtctggctccaggtcaggcaactcagccaccctaaccatctctgggctccaggctgaggacaaggctgactattactgctcaacatatgacagcagtctcaatgctca
SEQ ID NO.228 IGLV1-161(P)
>IGLV1-161-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caaggtcagctgccctgaggacagagtccatgacaggtcagggcagaaacagggactctgaatccagctctgagtcaggacacatcaggagtgtccaatatgtgtcctgctaccaacagctccatgagtgggcagtcaaatcctcatgtattatgatggcttgaccttctgtggaccctggtccattctctgcctccatgtctggcagctctggctctctggccattgctgggctgagccaggaggatgaggtcatgcttcactgcccctccagtgacagcatttcaaggat
SEQ ID NO.229 IGLV1-162(F)
>IGLV1-162*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgtgctgactcagccgacctcagtgtcggggtcccttggccagagggtcaccatctcctgctctggaagcacgaacaacatcggtattgttggtgcgagctggtaccaacagctcccaggaaaggcccctaaactcctcgtgtacagtgatggggatcgaccgtcaggggtccctgaccggttttccggctccaactctggcaactcagacaccctgaccatcactgggcttcaggctgaggacgaggctgattattactgccagtcctttgataccacgcttgatgctca
SEQ ID NO.230 IGLV2-31(F)
>IGLV2-31*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagtctgccctgactcaaccttcctcggtgtctgggactttgggccagactgtcaccatctcctgtgatggaagcagcagtaacattggcagtagtaattatatcgaatggtaccaacagttcccaggcacctcccccaaactcctgatttactataccaataatcggccatcagggatccctgctcgcttctctggctccaagtctgggaacacggcctccttgaccatctctgggctccaggctgaagatgaggctgattattactgcagcgcatatactggtagtaatactttc
SEQ ID NO.231 IGLV2-31-1(P)
>IGLV2-31-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctaacctaattgagcccccctttttgtccaggattctaggatggactgtcactgtctcctgtgttttaagcagctgtgacatcaggagtgataatgaaatatcctggtaccaatagcacccgagcatgactcagaaattcctgatttactataccagttcttgggcatcagatatccctgattgctttcctggctcccagtctggaaacatggcctgtctgaccatttccaggctccaggctaatgatgacgctgattatcattgttacttatatgatggtagtggcgctttt
SEQ ID NO.232 IGLV2-32(P)
>IGLV2-32*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgccctgactcagcctccctcgatgtctgggacactgggacagaccatcatcatttcctgtactggaagcggcagtgacattgggaggtatagttatgtctcctggtaccaagagctcccaagcacgtcccccacactcctgatttatggtaccaataatcggccattagagatccctgctcgcttctctggctccaagtctggaaacacagcccccatgaccatctctgggcttcaggctgaagatgaggctaattattactgttgctcatatacaaccagtggcacaca
SEQ ID NO.233 IGLV2-32-1(P)
>IGLV2-32-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagtctgccttgacccaacctccctttgtgtctgggactttgagacaaactgtcacatctcttgcaatggaagcagcagccacactggaacttataaccctacctctggcaccagcaatgtctggaaaggcccccacactccagatagatgctgtgagttctttgccttcagggcttccagctctgtcctcaggctctgagtctagcaacacagcctccagtccatttttggactgcaccctgaggacaaggctgattattactgattgtccagggacagccagag
SEQ ID NO.234 IGLV3-1(P)
>IGLV3-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
gccaacaagctgactcaatccctgtttatgtcagtggccctgggacagatggccaggatcacctgtgggagagacaactctggaagaaaaagtgctcactggtaccagcagaagccaagccaggctcccgtgatgcttatcgatgatgattgcttccagccctcaggattctctgagcaattctcaggcactaactcggggaacacagccaccctgaccattagtgggcccccagcgaggacgcggctattactgtgccaccagccatggcagttggagcacct
SEQ ID NO.235 IGLV3-1-1(P)
>IGLV3-1-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tccaatgtactgacacagccacccttggtgtcagtgaacctgggacagaaggccagcctcacctgtggaagaaacagcattgaagataaatatgtttcatggtcccagcaggagccaggccaggcccccatgctggtcatctattatagtacacaagaaaccctgagcgattttctgcctccagctctagctcggggtacatgatcaccctgaccaacagtggggcctaggacaaggacgaggatggctattactgtcagtcctatgacagtagtggtactcct
SEQ ID NO.236 IGLV3-2(F)
>IGLV3-2*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tcctatgtgctgactcagtcaccctcagtgtcagtgaccctgggacagacggccagcatcacctgtaggggaaacagcattggaaggaaagatgttcattggtaccagcagaagccgggccaagcccccctgctgattatctataatgataacagccagccctcagggatccctgagcgattctctgggaccaactcagggagcacggccaccctgaccatcagtgaggcccaaaccaacgatgaggctgactattactgccaggtgtgggaaagtagcgctgatgct
SEQ ID NO.237 IGLV3-3(F)
>IGLV3-3*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tcctatgtgctgacacagctgccatccaaaaatgtgaccctgaagcagccggcccacatcacctgtgggggagacaacattggaagtaaaagtgttcactggtaccagcagaagctgggccaggcccctgtactgattatctattatgatagcagcaggccgacagggatccctgagcgattctccggcgccaactcggggaacacggccaccctgaccatcagcggggccctggccgaggacgaggctgactattactgccaggtgtgggacagcagtgctaaggct
SEQ ID NO.238 IGLV3-4(F)
>IGLV3-4*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tccactgggttgaatcaggctccctccatgttggtggccctgggacagatggaaacaatcacctgctccggagatatcttagggaaaagatatgcatattggtaccagcataagccaagccaagcccctgtgctcctaatcaataaaaataatgagcgggcttctgggatccctcactggttctctggttccaactcgggcaacatggccaccctgaccatcagtggggcccgggctgaggacgaggctgactattactgccagtcctatgacagcagtggaaatgct
SEQ ID NO.239 IGLV3-7(P)
>IGLV3-7*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tcctatgtgctgactctgctgctatcagtgaccgtgaacctgggacagaccaccagcatcacctgtggtggagacagcattggagggagaactgtttactggtaccagcagaagcctggccagcgccccctgctgattatctataatgatagcaattgaccctcagggatccctgcctgattctctggctccaactcagggaacagggcctccctaaccatcattggggcctgggcctaagacgagtctgagtattacggagaggtgtgggacagcagtgctaaggct
SEQ ID NO.240 IGLV3-7-1(P)
>IGLV3-7-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tcctatatgctgactcagcagccattggcaagtgtaaacctcagccagtgggccagcaccacctgtggtggagataacattggagaaaaaaccgtccaatggaaccagcagaagcctggctaagctcccattacggctatctataaaggtagtgatctgccctcagggatccctgagcaattccctggccccaatttggggaacggggcctccctgaacatcagcggggctaagccgacgacgaggctattactgccagtcagcagacattagtggtaaggct
SEQ ID NO.241 IGLV3-8(F)
>IGLV3-8*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tcctatgtgctgacacagctgccatccgtgagtgtgaccctgaggcagacggcccgcatcacctgtgggggagacagcattggaagtaaaagtgtttactggtaccagcagaagctgggccaggcccctgtactgattatctatagagatagcaacaggccgacagggatccctgagcgattctctggcgccaactcggggaacacggccaccctgaccatcagcggggccctggccgaggacgaggctgactattactgccaggtgtgggacagcagtactaaggct
SEQ ID NO.242 IGLV3-9(P)
>IGLV3-9*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tccactgggttgaatcaggctccctccgtgttgctggcactgggacagatggcaacaatcacctgatccagagatgtctttgggaaaaatatgcatattggtaccagcagaagccaagccaagcccctgtgctcctaatcaataaaaataatgagcaggattctgggatccctgaccggttctctggctccaactcgggcaacacggccaccctgaccatcagtggggcccgggccgaggacgaggctgactattactgccagtcctatgacagcagtggaaatgtt
SEQ ID NO.243 IGLV3-11(F)
>IGLV3-11*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tcctatgtgctgtctcagccgccatcagcgactgtgactctgaggcagacggcccgcctcacctgtgggggagacagcattggaagtaaaagtgttgaatggtaccagcagaagccgggccagccccccgtgctcattatctatggtgatagcagcaggccgtcagggatccctgagcgattctccggcgccaactcggggaacacggccaccctgaccatcagcggggccctggccgaggacgaggctgactattactgccaggtgtgggacagcagtactaaggct
SEQ ID NO.244 IGLV3-13(P)
>IGLV3-13*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tcctatgtactgactcagctgccatcagtgactgtgaacctgggacagaccaccagcatcacctgtggtggagacagcattggagggagaactgtttactggtaccagcagaagcctggccagcgccccctgctgattatctataatgatagcaattggccctcagagatccctgcctgattctctggctccaactcagggaacagggcctccctaaccatcattggggcctgggcctaagatgagtctgagtattacggagaggtgtgggacagcagtgctaaggct
SEQ ID NO.245 IGLV3-13-1(P)
>IGLV3-13-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tcctatatgctgactcagcagccattggcaagtgtaaacctcagccagtgggccagcaccacctgtggtggagataacattggagagaaaactgtccaatggaaccagcagaagcctggctaagctctcattatggctatctataaaggtagtgatctaccctcagggatccctgagcaattccctggccccaactcgggtcggggcctccctgaacatcagcggggctacgccgacgactaggctattactgccagtcagcagacattagtggtaaggct
SEQ ID NO.246 IGLV3-14(F)
>IGLV3-14*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tcctatgtgctgacacagctgccatccatgagtgtgaccctgaggcagacggcccgcatcacctgtgagggagacagcattggaagtaaaagagtttactggtaccagcagaagctgggccaggtccctgtactgattatctatgatgatagcagcaggccgtcagggatccctgagcgattctccggcgccaactcggggaacacagccaccctgaccatcagcggggccctggccgaggacgaggctgactattactgccaggtgtgggacagcagtactaaggct
SEQ ID NO.247 IGLV3-15(P)
>IGLV3-15*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tccactgggttgaatcaggctccctccgtgttggtggccctgggacagatggaaacaatcacctgctcgagagatgtcttagggaaaagatatgcatataggtaccagcataagccaagccaagcccctgtgctcctaatcaataaaaataatgagcaggattctgggatccctgaccggttctctggctccaactcgggcaacacggccaccctgaccatcagtggggcccgggctgaggacgaggctgagtattactgccagtcctatgacagcagtggaaatgtt
SEQ ID NO.248 IGLV3-18(P)
>IGLV3-18*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tcctatgtgctgacacagctgccatccgtgaatgtgacccagaggcagacggcccgcatcacctgtgggggagacagcattggaagtaaaagtgtttactggtaccagcagaagctgggccaggcccctgttgattatctatagagacagcaacaggccgacagggatccctgagcgattctctggcgccaacacggggaacatggccaccctgactatcagcggggccctggccgtggacgaggctgactattactgccaggtgtgggacagcagtgctaaggct
SEQ ID NO.249 IGLV3-19(ORF)
>IGLV3-19*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
tcccctgggctgaatcagcctccctccgtgttggtggccctgggacagatggcaacaaacacctgctccggagatgtcttagggaaaagatatgcatattggtaccagcataagccaagccaagcccctgtgctcctaatcaataaaaataatgagctgggttctgggatccctgaccgattctctggctccaactcgggcaacacggccaccctgaccatcagtggggcccgggccgaggacgaggctgactattactgccagtcctatgacagcagtggaaatgct
SEQ ID NO.250 IGLV3-21(F)
>IGLV3-21*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tcctatgagctgactcagccaccatccgtgaatgtgaccctgagggagacggcccacatcacctgtgggggagacagcattggaagtaaatatgttcaatggatccagcagaatccaggccaggcccccgtggtgattatctataaagatagcaacaggccgacagggatccctgagcgattctctggcgccaactcagggaacacggctaccctgaccatcagtggggccctggccgaagacgaggctgactattactgccaggtgggggacagtggtactaaggct
SEQ ID NO.251 IGLV3-23(P)
>IGLV3-23*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tcctatgtactgactcagctgccatcagtgactgtgaacctgggacagaccaccagcatcacctgtggtggagacagcattggagggagaactgtttactggtaccagcagaagcctggccagcgccccctgctgattatctataatgatagcaattggccctcagagatccctgcctgattctctggctccaactcagggaacagggcctccctaaccatcattggggcctgggcctaagacgagtctgagtattacggagaggtgtgggacagcagtgctaaggct
SEQ ID NO.252 IGLV3-23-1(P)
>IGLV3-23-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tcctatatgctgactcagcagccattggcaagtgtaaacctcagccagtgggccagcaccacctgtggtggagataacattggagaaaaaactgtccaatggaaccagcagaagcctggctaagctcccattacggctatctataaaggtagtgatctgccctcagggattcctgagcaattccctggccccaactcgggaaacggggcctccctgaacatcagcggggctaagccgacgactaggctattactgccagtcagcagacattagtggtaaggct
SEQ ID NO.253 IGLV3-24(F)
>IGLV3-24*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tcctatgtgctgacacagctgccatccgtgagtgtgaccctgaggcagacggcccgcatcacctgtgggggagacagcattggaagtaaaaatgtttactggtaccagcagaagctgggccaggcccctgtactgattatctatgatgatagcagcaggccgtcagggatccctgagcgattctccggcgccaactcggggaacacggccaccctgaccatcagcggggccctggccgaggatgaggctgactattactgccaggtgtgggacagcagtactaagcct
SEQ ID NO.254 IGLV3-25(ORF)
>IGLV3-25*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
tccactgggttgaatcaggcttcctccgtgttggtggccctgggacagatggaaacaatcacctgctcgagagatgtcttagggaaaagatatgcatataggtaccagcataagccaagccaagcccctgtgctcctaatcaataaaaataatgagcaggattctgggatccctgaccggttctctggctccaactcgggcaacacggccaccctgaccatcagtggggcccgggctgaggacgaggctgagtattactgccagtcctatgacagcagtggaaatgtt
SEQ ID NO.255 IGLV3-26(F)
>IGLV3-26*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tcctatgtgctgacacagctgccatccgtgaatgtgaccctgaggcagccggcccacatcacctgtgggggagacagcattggaagtaaaagtgttcactggtaccaacagaagctgggccaggcccctgtactgattatctatggtgatagcaacaggccgtcagggatccctgagcgattctctggtgacaactcggggaacacggccaccctgaccatcagtggggccctggccgaggacgaggcttactattactgccaggtgtgggacagcagtgctcaggct
SEQ ID NO.256 IGLV3-27(F)
>IGLV3-27*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tccagtgtgctgactcagcctccttcagtatcagtgtctctgggacagacagcaaccatctcctgctctggagagagtctgagtaaatattatgcacaatggttccagcagaaggcaggccaagtccctgtgttggtcatatataaggacactgagcggccctctgggatccctgaccgattctccggctccagttcagggaacacacacaccctgaccatcagcggggctcgggccgaggacgaggctgactattactgcgagtcagaagtcagtactggtactgct
SEQ ID NO.257 IGLV3-28(F)
>IGLV3-28*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tcctatgtgttgactcagctgccttcagtgtcagtgaacctgggaaagacagccagcatcacctgtgagggaaataacataggagataaatatgcttattggtaccagcagaagcctggccaggcccccgtgctgattatttatgaggatagcaagcggccctcagggatccctgagcgattctctggctccaactcggggaacacggccaccctgaccatcagcggggccagggccgaggatgaggctgactattactgtcaggtgtgggacaacagtgctaaggct
SEQ ID NO.258 IGLV3-29(F)
>IGLV3-29*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tccagtgtgctgactcagcctccctcggtgtcagtgtccctgggacagacggcgaccatcacctgctctggagagagtctgagcagatactatgcacaatggtatcagcagaagccaggccaagcccccatgacagtcatatatggggacagagagcgaccctcagggatccctgaccgattctccagctccagttcagagaacacacacaccttgacaatcagtggagcccaggctgaggatgaggctgaatattactgtgagatatgggacgccagtgctgatgat
SEQ ID NO.259 IGLV3-30(F)
>IGLV3-30*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
tcctacgtggtgacccagccaccctcagtgtcagtgaacctgggacagacggccagcatcacctgtgggggagacaacattgcaagcacatatgtttcctggcagcagcagaagtcgggtcaagcccctgtgacgattatctatcgtgatagcaaccggccctcagggatccctgagcgattctctggctccaactcggggaacacggccaccctgaccatcagcagggcccaggccgaggatgaggctgactattactgccaggtgtggaagagtggtaataaggct
SEQ ID NO.260 IGLV4-5(F)
>IGLV4-5*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
ttgcccgtgctgacccagcctacaaatgcatctgcctccctggaagagtcggtcaagctgacctgcactttgagcagtgagcacagcaattacattgttcagtggtatcaacaacaaccagggaaggcccctcggtatctgatgtatgtcaggagtgatggaagctacaaaaggggggacgggatccccagtcgcttctcaggctccagctctggggctgaccgctatttaaccatctccaacatcaagtctgaagatgaggatgactattattactgtggtgcagactatacaatcagtggccaatacggttaagc
SEQ ID NO.261 IGLV4-6(P)
>IGLV4-6*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ttgcccgtgctgacccagcctccaagtgcatctgcctccctggaagcctcggtcaagctcacatgcactctgagcagtgagcacagcagttactatatttactggtatgaacaacaacaaccagggaaggcccctcggtatctgatgagggttaacagtgatggaagccacagcaggggggacgggatccccagtcgcttctcaggctccagctctggggctgaccgctatttaaccatctccaacatccagtctgaggatgaggcagattattactgtggtgcacccgctggtagcagtagc
SEQ ID NO.262 IGLV4-10(F)
>IGLV4-10*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
ttgcccgtgctgacccagcctacaaatgcatctgcctccctggaagagtcggtcaagctgacctgcactttgagcagtgagcacagcaattacattgttcattggtatcaacaacaaccagggaaggcccctcggtatctgatgtatgtcaggagtgatggaagctacaaaaggggggacgggatccccagtcgcttctcaggctccagctctggggctgaccgctatttaaccatctccaacatcaagtctgaagatgaggatgactattattactgtggtgcagactatacaatcagtggccaatacggttaagc
SEQ ID NO.263 IGLV4-12(P)
>IGLV4-12*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ttgcccgtgctgacccagcctccaagtgcatctgcctccctggaagcctcggtcaagctcacatgcactctgagcagtgagcacagcagttactatatttactggtatcaacaacaaccagggaaggcccctcggtatctgatgaaggttaacagtgatggaagccacagcaggggggacgggatccccagtcgcttctcaggctccagctctggggctgaccgctatttaaccatctccaacatccagtctgaggatgaggcaggttattactatggtgtacccctggtagcagtagc
SEQ ID NO.264 IGLV4-16(ORF)
>IGLV4-16*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
ttgcccatgctgacccagcctacaaatgcatctgcctccctggaagagtcggtcaagctcacatgcactttgagcagtgagcacagcaattacattgttcaatggtatcaacaacaaccagggaaggcccctcggtatctgatgcatgtcaggagtgatggaagctacaacaggggggacgggatccccagtcgcttctcaggctccagctctggggctgaccgctatttaaccatctccaacatcaagtctgaagatgaggatgactattattacagtggtgcatactatacaatcagtggccaatacggttaagc
SEQ ID NO.265 IGLV4-17(P)
>IGLV4-17*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ttgcccatgctgacccagcctccaagtgcatctgcctccctggaagcctcggtcaagctcacatgcactctgagcagtgagcaaagcagttactatatttactggtatcaacaacaacaaccagggaaggcccctcggtatctgatgaaggttaacagtgatggaagccacagcagggcgtcgggatccccagtcgcttctcaggctccagctctggggctgaccgctatttaaccatctccaacatccagtctgaggatgaggcagattattactgtggtgtacccactggtagcagtagc
SEQ ID NO.266 IGLV4-20(ORF)
>IGLV4-20*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
ttgcccatgctgaccgagcctacaaatgcatctgcctccctggaagagtcagtcaagctcacctgcactttgagcagtgagcacagcaattacattgttcgatggtatcaacaacaaccagggaaggcccctcggtatctgatgtatgtcaggagtgatggaagctacaacaggggggacgggatccccagtcgcttttcaggctccagctctggggctgaccgctatttaaccatctccaacatcaagtctgaagatgaggctgagtattattacggtggtgcagactataaaatcagtgaccaatatggttaaga
SEQ ID NO.267 IGLV4-22(F)
>IGLV4-22*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
ttgcccgtgctgacccagcctccaagtgcatctgcctgcctggaaacctcggtcaagctcacatgcactctgagcagtgagcacagcagttactatatttactggtatcaacaacaacaaccagggaaggcccctcggtatctgatgaaggttaacagtgatggaagccacagcaggggggacgggatccccagtcgcttctcaggctccagctctggggctgaccgctatttaaccatctccaacatccagtctgaagatgaggcagattattactgtggtgtacccgctggtagcagtagc
SEQ ID NO.268 IGLV5-34(P)
>IGLV5-34*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtgctgacccagccgccctccctctctgcatccctgggatcaacagccagactcacctgcaccctgagcagtggcttcagtgttggcagctactacatatactggtaccagtagaagccagggagccctccccggtatctcctgtactaactactactcaagtacacagctgggccccggggtccccagccatttctctggatccaaagacaactcggccaatgcagggctcctgctcacctctgggctgcagcctgaggacgaggctgactactactgtgctacaggttattgggatgggagcaactatgcttacc
SEQ ID NO.269 IGLV5-38(P)
>IGLV5-38*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagccgccctccctctctgcatccctgggaacagcggccagaaatacctgcactctgagcagtgacctcagtgttggcagctgtgctataagctgatcccagcagaagccagggagccctccctggtatctcctgaactactaaacacacccatgcaagcaccaggactcacatctgtagccgcttctctggatttgaggatgcctctgccagtgcagggctctgctcatctctggaggctgaccatcactgtgctaagatcatggcagtgggggcagctagtgttaca
SEQ ID NO.270 IGLV5-38-1(P)
>IGLV5-38-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagccgccgtcctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagtggcttcaatatgtggggctaccatatattctggtaccagcagaagccagggagccctccccggtatctgctgaacttctactcagataagcaccagggctccaaggacacctcggccaatgcagggatcctgctcatctctgggctccagcctgaggacgaggctgactactactgtaaaatctggtacagtggtctggt
SEQ ID NO.271 IGLV5-40-1(P)
>IGLV5-40-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctctgctacccagccacccccttctctgcgtctccaggtactacagccagacccacctgcaccctgagcagtggcaacagtgttggcagctgttccttataacggctcccacaaagacagagggccctccctggtatctgctgaggttcccctctaatagacaccatgtctctggatccacacataccttggccaatgcagggctcctgctcat
SEQ ID NO.272 IGLV5-42(P)
>IGLV5-42*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgaccaagtgccctctctttctgcatctcctggaacaacagtcagactcacttgcacctggagcagtggctccagcactggcagctactatatacactggttccagagccacagagccagagccacagagctctccctggtatctcctgtactactactcagactcagataagcaccagggctctggggttctcagctctgtctcctgatccaaggatgcctcagttattggagggctctctcatctctgggctgcagcctgaggattagactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.273 IGLV5-47(P)
>IGLV5-47*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagctgccctccctctctgcataccggggaacaaactccagatgtacctacaccctgagcagtgtcgccaactactaaacatacttctcaaagagaatacagggcaccttccacagtacatcctgtactactactcagactcaagtgcatgattgggatttggggtcccaggcacttctctggatccaaagatgcctcagccaatgcagggatcctgctgatctctgggctgcagccagaggacaagtctgactgtcactgtgctacagatcatggcagtgggagcagcttccgatact
SEQ ID NO.274 IGLV5-47-1(P)
>IGLV5-47-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagccagggctgacccagccacactccctctctgcatatcagggagaaacagccacacatacctgcaccctgagcggtggcttcagtgttggcagctgccatatatactggatccagaagaagccagagagccctccctgatgtctcctgaactactactaagactcagataaggcctcgacgtccccagccctactctgaatccaaagacaccttgcccaaggtgggaatcctgctcatctctgggctgcagccggaggacaaggctgtctcttactgtataatatggcacagtggttctggtcacagggaca
SEQ ID NO.275 IGLV5-48-1(P)
>IGLV5-48-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caccctgtgctgacccagctgccctccctctctgcatccctgggaacaacagccagactcatgtgcaccctgagcagtggctgcagtggtggccatacgctggttccagcagccaggaggcctcctgagtacctgctgatggtctactgagactcaccagggccccggtggccccagccgcttctctggctccaaggacacctcggccaatgcagggctcctgctcatctctaggctgcagcctgaggacgaggctgactgtcactgtgttacagaccatggcagtgggagcagctcccgaaactca
SEQ ID NO.276 IGLV5-49-1(P)
>IGLV5-49-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagccagggctggcccagcttccccccacctccctctgcatctccaggaacaacagccagactcacatgaaccatgagcagtggcttcatcgttggcgctgctacatatactggttccaacagaagccagggagcaccgccccagtatctcctgaggttctactcagactcagataagcactagggctcaacgaccccagccctgttctggatctgaagacacctccgccgaagcagggcctctgctcatctctgggctgcagcgtgaggacaaggctgactcttatgggacaatctggcacagtggtcctggtcacagggacaca
SEQ ID NO.277 IGLV5-51(P)
>IGLV5-51*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagctgccctccctttctgcatccctgggaacaacagccagactcacatgcaccctgagcagcggctgcagcggtggccacacattggttccagcagccaggaggcctcctgagtacctgctgatggtctactgagactcaccagggccccggtgttgccagcctcttctctggctccaaggacacctcggccaatgcaggactcctgctcatctctgggctgcagcctgaggatgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggagcagctccggatact
SEQ ID NO.278 IGLV5-53(P)
>IGLV5-53*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagctgccctccctttctgcatccctgagaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagtggctgcagtggtggccatatgctggttccagcagccaggaagcctcctgagtatctgctgacggtcttctgagactcaccagggccccgaggtccccagcctcttctctggctccaaggacacctcagccaatgcaggactcctgctcatctctgggctgcagcctgaggatgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggagcagctcccgatact
SEQ ID NO.279IGLV5-53-1(P)
>IGLV5-53-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caccctgggctgacccagtcgtcctccctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagtggcttcagaaatgacaggtatgtaataagttggttccagcagaaatcagggagcccttcctggtgtctcctgtattattactcgaactcaagtacacatttgggctctgaggttcccagctgcttctctggatccaagacaaggccacacccacactgagtagacccctctctgggtgggtctagagctccagctccacctgaggctgatgcacaattgcag
SEQ ID NO.280 IGLV5-57-1(P)
>IGLV5-57-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagccagggctggcccagctgccctccctctctgcatctccaggaacaacagccagactcacatgaaccatgagcagtggcttcattgttggtggctgctacatatactggttccaacagaagccagggagcatgccccccagtatctcctgaggttctactcagactcagataagcaccaggtctcaacatccccagcccggctctggatctgaagacactcagccgaagcagggcctctgctcatctctgggctgcagcatgaggacaaggctgactcttactgtacaatctggcacagtggtcctggtcacagggaca
SEQ ID NO.281 IGLV5-58-1(P)
>IGLV5-58-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccattgccctccctctctgcatcctgggaaataacaaccagactcacctgcactctgagcagcggctgcagcggtggccatacagtggttccagcagcaaggaagcctcctgagtacctgctgacgttctactgagactcaccagggctctagggtccccagccacttctctggtttcaaggacaccacggccaatgcagggcact
SEQ ID NO.282 IGLV5-59(P)
>IGLV5-59*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagtcgccctccctctcggcatctttggaacaacagtcagactcacctgtaccctgatcagtggctccagtgttggcagctattacatcaactggttccagaagaagccacggagccctccccagtatctcctgtactactacttagactcagataagcaccagggctctggggtccccagctgcttctcctgatccaaggatgcctcagtcattggaggacaccctcatctctgaactgcagcctgaggactagactgaccttcgctgtctaatcagaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.283 IGLV5-62(P)
>IGLV5-62*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagcctccctctctctctgcatctctgggaacaatagccagacaaacatgcagcctgagcaggggctacagtatggggacttatgtcatacgctggttccagcagtagcaagaaactctcctgagtatctgctgaggttatactgagcctcagcaggtctctggggaccccagctgagtctttagatccaagatgcctcagccaattcagggctcctgcttatctctgtgctgcagcctgaggacaagggttactattactgttctgtacatcatggaattgtgagcagctatacttacc
SEQ ID NO.284 IGLV5-64(F)
>IGLV5-64*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagcttgtggtgacccagccgccctccctctctgcatccctgggatcatccgccagactcacctgcaccctgagcagtggcttcagtgttggcagttattctgtaacttggttccagcagaagccagggagccctctctggtacctcctgtactaccactcagactcagataagcaccagggctccagggtccccagccgcttctctggatccaaggacacctcggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgaggatgaggctgactactactgtgcctccgctcatggcagtgggagcaactaccattact
SEQ ID NO.285 IGLV5-67-1(P)
>IGLV5-67-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagccagtgctgacccagctgccctccttctctgtatctctgggaacaacagtcagactcacctgcaccctgagcagtgttggcagctactaaacatccttttcaaggagaaaccaaggagccccccaccccggtatctcctatactactattcagactcagataaaccccaggtctctggggtccccagccacttctctgcatccaaagactcctaggccaatgcagggctcctgctcgcctctgggctgcagcctgaggacgaggctgactatcactgtgctataaatcatgacagtgggagtagttcctgatact
SEQ ID NO.286 IGLV5-70-1(P)
>IGLV5-70-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctttggtgacccagcgccctccctctctgcatctcctgaaacaacagtcagactcacatgcaccctgagcagtggccccagtgctggcagctactacatacactggttccagtggaagccacggtgcccgccccggtatctcctgtactactactcagactcagatgagcaccagggctctggggtccccagccgcttctcctgatccaaggatgcctcagccagggcagggctccctcatctctgggctacagtctgaggtctacactgaccttcactgtctaatcggaaacaataatgtttct
SEQ ID NO.287 IGLV5-72-1(P)
>IGLV5-72-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagcgacctccctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagcggctgaagcggtggccatacgctggttccagcagccaggaagcctcctgagtacctgctgatggtctactgagactcaccaggctatggggtccccagcatcttctctggctccaaggacacctcggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgaggtcgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggagcagctcccgatact
SEQ ID NO.288 IGLV5-76(P)
>IGLV5-76*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagtcgccctccctctcagcatctttggaacaacagtcagactcacctgtaccctgatcagtggctccagtgttggcagctattacatcaactggttccagaagaagccacggagccctccccagtatctcctatactactacttagactcagataagcaccagggctctggggtccccagctgcttctcctgatccaaggatgcctcagtcattggagggcaccctcatctctgagctgcagcctgaggactagactgaccttcgctgtctaatcggaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.289 IGLV5-77(P)
>IGLV5-77*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagccaccctccctctctgcatccccgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagtggcttcagtgttggtgactatgacatgtactggtaccagaagaagccaggaagcccccaccccgggatctcctgtactactactcagactcatataaacaccagggctccggggtctccagcagcttctctggatccaaggatacctcagccaatacagggctcctgctcatctctgggccacagcctgaggacgaggctgactactactgtgctacagatcatggcagtgagagcaggtactcttacc
SEQ ID NO.290 IGLV5-77-1(P)
>IGLV5-77-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctctgctacccagcacccccttcgctgcgtttccaggtactacagccagaatcacctgcaccctgagcaggggcatcagtgttgggagctgttccttataacggctcccgcagaggcagggagccctgcctggtatctgctgaggttcccctctaatagacaccacatctctggatccaaagaaacctcggccaatgcagggctcctgctcattgttgtgctgccacctgacaactagtctatcagtggtggttgaggactaggactattactgggatgctttggttt
SEQ ID NO.291 IGLV5-78-1(P)
>IGLV5-78-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctttgctgatccagcgccctccctctctgcatctcctggaacaacagtcagactcacctgcacccagagcagtggcccctgtgttggcagctactacatacactggttccagtggaagccatggagccctccctggtatcttctgtactactaatcagactcagatgagcaccagggctctggggtccccagccgcttctcctgatccaaggatgcctcagccagagcagggctccctcatctctggactgcagcctgaggactagactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatgttt
SEQ ID NO.292 IGLV5-83-1(P)
>IGLV5-83-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tgcaggtccctgtcccagcctttgccctccctctttgcatctcctggaagaacagtcagatccacctgcacccagagcagtggcccctgtgttggcagctactacatacaccggttccagtggaagccacggagccgtctccatatctcctgtactactactcagactcagatgagcaccagagctctggagtccccaactgcttctcctgatccaaggatgcctcagggaaggcagggctccctcatctctgggctacaggctgaggacaagactgacctttactgtctaatccaaaacaataatgtttct
SEQ ID NO.293 IGLV5-85(F)
>IGLV5-85*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagcctgtgctgacccagccaccctccctctctgcatccctgggatcaacagccagacccacctgcaccctgagcagtggcttcagtgttggaagctaccatatactctggttccagcagaagtcagagagccctccccggtatctcctgaggttctactcagattctaatgaacaccagggtcccggggtccccagccgcttctctggatccaaggacacctcaacctatgcagggctcttgctcatctctgggctgcagcctgaggacgaggctgactactactgtgctacagaccatggcagtgggagcagctacacttacc
SEQ ID NO.294 IGLV5-86-1(P)
>IGLV5-86-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctttgctgacccagcgccctccctctctgcatctcctggaacaaaagtcagactcacctgcatccagagcagtggatccagcgttggcagctactacatacactggttccagtagaagccatggagccctccccagtatctcctgtactactacttagactcagataagcactaggcctatggggaacccagatccttcccctgatccaaggatgcctcagtcaatgcagggtcaaagagaggggattatttagagtggacaattggggcctttggccaggag
SEQ ID NO.295 IGLV5-88-1(P)
>IGLV5-88-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagccagtgcagacccagctgccctccttctctgtacctctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagtgttggcggccagtaaacatccttttcaaggagaaaccaaggagccccccagtctctcctgtactattacccagactcagataaaccccaggtctctggggtccccagccacttctctgaatccaaagactcctaggccaatgcagggctcctgctcgcctctgggctgcagcctgaggacgaggctgactatcactgtgctgtaaatcatgacagtgggagcagctccggatact
SEQ ID NO.296 IGLV5-89-1(P)
>IGLV5-89-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtggtgacccagcttccttctctgcatccctgggaacaacagccagactcacatgcaccctgagctgtggcttcagtattgatagatatgctataaactggttccagcagaaggcagagagccttccctggtacctactgtgctattactggtactcaagtacacagttgggcttcagcgtccccagctgcatctctggatccaagacaaggccacattcacaaacgagtagacccatctctggttgggtctagagctccagccccacctgagactgatgcacaattgcagc
SEQ ID NO.297 IGLV5-92-2(P)
>IGLV5-92-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtatagacccagtcaccctccctttctgcatctttggaacaacagtcagagtcacctgtaccctgagcagtggctccagtgttggcagctactacatatactggttccaggagaagccatggagcaatccccggtatctcctgtactactcaggctcagatgagcaccagggctctgggatccgtagctgcttctcctgatacaatgatgcctcagccaaggcagagctccctaatctctgggctgcagcctgaggactatactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatcctttt
SEQ ID NO.298 IGLV5-94-1(P)
>IGLV5-94-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tagcctgtgctgacccagcgccctcccactctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcgccctgagcagcggctgcagcagtgaccatacgctggttccagcagccagaaggcctcctgagtacctgctgacggtctactgagactcaccagcgccccggggtcctcagcctcttctctggctccaaggacacctcggccaatgcagggcactcagatgg
SEQ ID NO.299 IGLV5-95(P)
>IGLV5-95*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgatgacccagctgtcctccctctctgcatccctggaaacaacaaccagacacacctgcaccctgagcagtggcttcagaaataacagctgtgtaataagttgattccagcagaagtcagggagccctccctggtgtctcctgtactattactcagactcaagtatacatttgggctctgaggttcccagctgcttctctggatccaagacaaggccacacccacactgagtagacccatccctgggtgggtctagagctccagccccactggaggctgatgcacaattgcagc
SEQ ID NO.300 IGLV5-96-1(P)
>IGLV5-96-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caacctttgcggacccagcgcactccctctgcatctcctggaacaacagttagactcatctgcacccagagcagtggccccagtgttggcagctactacaaacactggttccagcagaagccacggagccctccccggtacttcctgtactacttctcagactcagatgagcaccagggctctggggaccgcagccacttctcctgatccaaggatgactcaggaaaggcagggctccctcatctctgggctacagcctgaggactagactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.301 IGLV5-97-1(P)
>IGLV5-97-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ttaaaaccaaccaaaccaaaccaaaccaaaacaaaacaaaacaaaataacagccagattcacctgctccctgagcagtggcttcagtgttggtggctataacacactggtaccagcagaagccagggagccctccctgttacctcctgtactactactcagaatcagataaacaccatggctccgggatcaccagctgcttccctggccctatggacacctcggccaatgcagggctcctgctcatctcagggctgcagcctgaggacgaggctgactactactgcggtatactccacagcagtgggagcagctactcttacc
SEQ ID NO.302 IGLV5-97-2(P)
>IGLV5-97-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtgaggacacactcctccttcctctctgcacctttgggatcatcaaccagactcacctgcatccttcccagggcctgaatgttggcaggtactgaacatactggacaaggagaatcaaggagacatcaggagttccctcagatccagataagtgccagggcacggggttctcagccacttctatggatctaatgatgcctcaggcaatgcaggtctcctgctcatgtctgggctgcagcctgaggacgaggctgactatgactatgctgcacattgtggggtgggagcagctcccgatact
SEQ ID NO.303 IGLV5-97-3(P)
>IGLV5-97-3*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagccgccctccctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagcagctgcagcggtggccatatgctggttccagcatgcaagaggcctcctgagtacctgctgatggtctactgagactcaccagggccctggggtccccagcctcttctctggctccaaggaagcctcggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgagaatgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggaacagctcccaatact
SEQ ID NO.304 IGLV5-101-1(P)
>IGLV5-101-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctttgctgacccagcgtcctccctctctgcatctcctggaacaacagtcagactcacatgtaccctgagcagtggccccggtgctggcagctactacacacactggttccagcagaggccacagagtcctccccggtatctcctgtactactactcagactcagatgatctccagggctccgggttccccagccactcctcctgatccaaggatgcctcagccagggcagggctcccatctctggggtacagcctgaggactacactgaccttcactgtctaatcggaaacaataatgtttct
SEQ ID NO.305 IGLV5-103-1(P)
>IGLV5-103-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagccagggctggcccagctgccccccacctccctctgcatctccaggaacaacagccagactcacatgaaccatgagcagtggcttcattgttggcagctgctacatatactggttccaacagaagccagggagcccccctcccccaatatctcttgaggttgtattcagaatcagataaacaccagggctcaatgtccccagccctgctctggatctgaagacacctccgccgaagcagggcctctgctcatctctgggctgcagcgtgaggacaaggctgactcttactgtacaatctgg
SEQ ID NO.306 IGLV5-105(P)
>IGLV5-105*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagccgccctccctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccatgagcagcagctacagtggtggccatacactggttccagcagccaggaggcctcctgagtacctgctgatggtctactgagatttaccagggccccggggtccccagccgcttctctggctccaaggacatctcggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgtagcctgaggacgaggctgactgtcactgtgctacagaacatggcagcgggagcagctcccaatact
SEQ ID NO.307 IGLV5-105-1(P)
>IGLV5-105-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ctgcctctgctacccagccaccgccttctctgcatctccaggtactacagccagacccacctgcaccctgaacagtggcatcagtattcgcagctgttccttataatggctcccgcaaaggcagggagccctgcctggtatctgctaaggttgtactctaataaataccatggctctagggtcccaagccacatctctggatccaaagaaacctc
SEQ ID NO.308 IGLV5-106-1(P)
>IGLV5-106-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctttgctgacccagcgtcctccctctctgcatctcctggaacaacagtcagactcacctgtatccagagcagtggccccagtgttggcagctactacatacaccggttccagcggaaaccacggagccctcccctgtatctcctgtactactactcagactcagataagcactaggcctacagggtccccagctgcttctcctgatccatggatgcctcagccagtgcagtgctccctcatctctgggctacagcctgaggactagactgaccttcactgtctaatcggaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.309 IGLV5-109(F)
>IGLV5-109*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagcttgtgctgacccagccgccctccctctctgcatccctgggatcaacaaccagactcacctgcaccctgagcagtggcttcagtgttggtggctatagcatatactggcaccagcagaagccagggagcactccctggtacctcctgtactactactcaagtacagagttgggacctggggtccccagctgcttctctggatccaaagacacctcagccaatgtagggctcctgctcatctcagggctgcagcctgaggatgagactgactactactgtgctataggtcacggcagtgggagcagctacacttacc
SEQ ID NO.310 IGLV5-110-1(P)
>IGLV5-110-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagccagggctggcccagctgcccccccacctccctctgcatctccaggaataacagccagactcacatgaaccatgagcagtggcttcattgttggccgctgctacatatactgattccaacagaagccaaggagcccccgctccaccagtatctcctgatattctactcagactcagataagcaccagggctcaacgtccccagccctgctctgaatctgaagacacctccgcgaagcagggcttctgctcatctctgggctcagcgtgaggacaaggctgactcttactgtacaatctgg
SEQ ID NO.311 IGLV5-111-1(P)
>IGLV5-111-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
tagcctgtgctgacccagtgctctccctctctgcatccctgggaacaacagccagactcccctgcaccctgagcagcggctgcagcggtgtccatacgcaggttccagcagccaggaggcctcctgaatacctgctgatggtctacggtgactcaccagggccccggggtccccagccgcttctctggctccgaggacacctcggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgaggacaagactgactgtcactgtgctacagaccatggcagtaggagcagttcccaatact
SEQ ID NO.312 IGLV5-111-2(P)
>IGLV5-111-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagctgcccttcctctctgcatccctggagacaacaagcagatgtacctacacccagagcggtgtcggcagctactacacatactcatcaaggacaatccagggagacctccctggtatttcctgtactactactcagactcaactacatggttgggatttggtgtccccaaccacttctctgtatccaaagatgcctcagccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagccagaggacaaggatgactgtcactgtgctgcattcagatcatggcagtgggagcagctcccgatact
SEQ ID NO.313 IGLV5-113-2(P)
>IGLV5-113-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctttgctgatccagtgccctccctctctgcatctcctggaacaagagtcagactcacctgcacccagagcagtggccccagggttggcagctactacatacactggttgcagcggaaaccacggagccctcctcagtatctcctgtactactactcagaatcagatgagcaccagggctctggggtccccagccacttctcctgatccaaggatgcctcaggcaaggcagggctccctcatccctgggctacagcctgagggctagactgaccttcactgtctaatccgaaacaataatgtttct
SEQ ID NO.314 IGLV5-114-1(P)
>IGLV5-114-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagccagggctggcccagctgccctccctctctgcatctccaggaacaacagccagactcacatgaaccatgaacagtggcttcattcttggcggctgatacatatacttgttccaacagaaaccagggaacccccgctccccgtattgcctgaggttctactcagactcagataagcaccagggctcaacatccccagccctgctctggatctgaagacacctcaactgaagcagggcctctgctcatctctggatgtccagcgtgaggacaaggttgattcttactgtacaatctggcacagtggtcctggt
SEQ ID NO.315 IGLV5-115-1(P)
>IGLV5-115-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctctgctgacccagccaccctccctctctgcatccctgggaacaagacccagagtcacctgcaccctgagcaacaactgcagtggtggccatacgctggttccagcagccaggaagcctcctgaatacctattgatggtttactgagacttaccagggcccccggggccccagctgcttctctggctccaaggacaccttggccaatgcaggactcctgctcatctctgggctgtagcctgaggatgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggagcagctcccgatact
SEQ ID NO.316 IGLV5-118-1(P)
>IGLV5-118-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtggtgacccagcttccttctctgcatccctgggaacaacagccagattcacatgcaccctgagctatggcttcagtattgatagatatgttataagctggttccagcagaaggcagagagccttccctggtacctactgtactattactgatactcaagtacacagttgggcttcggcattcccagctgcgtctctggatccaagacaaggccacattcacaaatgagtagacccatctctggttgggtctagagctccagccccacctgagactgatgcacaattgcagccacattgtcttgatatcggaaa
SEQ ID NO.317 IGLV5-124-1(P)
>IGLV5-124-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtatagacccagtcaccctccctttctgcatctttggaacaacagtcagactcacctgtaccctgagcagtggctccagtgttggcagctactacatatactggttccaggagaagccatggagcaatccccggtatctcctgtactattcaggctcagatgagcaccagggctctgggatccctagctgcttctcctgatccaaggatgcctcagccaaggcagagctccctcatctctgggctgcagcctgaggactagactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.318 IGLV5-125-1(P)
>IGLV5-125-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagcgccctcccactctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagcggctgcagcggtggccatatgctggttccagcagccagaaggcctcctgagtacctgctgacggtctactgagactcaccagggcccctgggtcctcagcctcttctctgactccaaagacacctcggccaatgcagggcactcagatggctgtgaagttcatacaacagggtcctcatgggggctcatggtaccacttcacgttt
SEQ ID NO.319 IGLV5-126(P)
>IGLV5-126*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgatgacccagctgtcctccctctcagcatccctggaaacaacaacaagactcacctgaaccctgagcagtggcttcagaaatgacagatgtgtaataagttggttccagcagaagtcagggagccctccctggtgtctcctgtactattactcggactcaagtacacatttgggctctgaggttcccagctgcttctctggatccaagacaaggccacacccacactgagtagacccatccccgggtgggtctagagctccagccccactggaggctgatgcacaattgcagc
SEQ ID NO.320 IGLV5-128-1(P)
>IGLV5-128-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caacctttgcggacccagcgccctccctctctgcatctcctggaacaacagttagactcatctgcacccagagcagtggccccagtgttggcagctactacaaacactggttccagcagaagccacggagccctccccggtacctcctgtactactactcagactcagatgagcaccagggctctggggaccacagccacttctcctgatccaaggatgcctcaggaaaggcagggctccctcatctctgggctacagcctgaggactagactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.321 IGLV5-129-1(P)
>IGLV5-129-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgaccagctgccctctctgcatccctgggaacaacaggcagatgtacttacaccctgagcagttttggcagctactacacatactcgtcaaggagaatacagggagacctccctggtatttcctgtactactactcagactcaactacatggttgggatttggggtccccaaccacttctctggatccaaagatgcctcagccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagccagaggacaaggatgactgtcactgtgctgcatacatatcaaggcagtggaagcagctcccaatact
SEQ ID NO.322 IGLV5-129-2(P)
>IGLV5-129-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ctgcctgtgctgacccagtgccctccctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagtggctgcagcggtggccatatgctggttccagcagccaggaggcctcctaagtacctgctgatggtctactgagactcatcacggtcctggggtccctagcctcttctctggctccaaggacacctcggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgaggacgaggctgactgtcattgtgctacagaccatggcagtgggagcagctcctgatact
SEQ ID NO.323 IGLV5-131(F)
>IGLV5-131*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagcctgtgctgacccagccaccctccctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagtggcttcagtgttggtgactatgacatgtactggtaccagcagaagccagggagccctccccgggatctcctgtactactactcggactcatataaaaaccagggctctggggtctccaaaagcttctctggatccaaggatacctcagccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgaggacgaggctgactactactgtgctacagatcatggcagtgagagcagctactcttacc
SEQ ID NO.324 IGLV5-132-1(P)
>IGLV5-132-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtatagacccagtcaccctccctttctgcatctttggaacaacagtcagactcacctgtaccctgagcagtggctccagtgttggcagctactacatatactggttccaggagaagccatggagcaatccccggtatctcctgtactactcaggctcagatgagcaccagggctctgggatccctagctgtttctcctgatccaaggatgcctcagccaaggcagagctccctcatctctgggctgcagcctgaggactatactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.325 IGLV5-134(P)
>IGLV5-134*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagccgccctccctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccatgagcagcagctgcagcggtggccatatgctggtaccagcatgcaagaggcctcctgagtacctgctgatggtctactgagactcaccagggccctggggtccccagcctcttctctggctccaaggacaccttggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgagaatgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggaacagctcccaatact
SEQ ID NO.326 IGLV5-134-1(P)
>IGLV5-134-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
taaaaccaaaccaaaccaaaccaaaccaaaacaaaacaaaacaaaataacagccagattcacctgctccctgagcagtggcttcagtgttggtggctataacacactggtaccagcagaagccagggagccctccctgttacctcctgtactactactcagaatcagataaacaccatggctccgggatcaccagctgcttccctggccctatggacacctcggccaatgcagggctcctgctcatccttgggctgcagcctgaggacgaggctgactactactgcggtatactccacagcagtgggagcagctactcttacc
SEQ ID NO.327 IGLV5-135-1(P)
>IGLV5-135-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
aagcctgtgctgacccagcgccctccctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagcggctggagtggtggctataggctggttccagcagccaggaagcctcctgagtacctgctgatggtctactgagactcaccaggctatggggtccccagcatcttctctggctccaaggaagcctcggccaatgcagggctcctgctcatctctggcctgcagcctgaggtcgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggagcagctcccgatac
SEQ ID NO.328 IGLV5-137-1(P)
>IGLV5-137-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctaacccagtcgctctccctcttgacatctttggaacaacagtcagactcacctgtaccgtgaacagtggctccagtgttggcagctattacatcaactggttccagtataagccatggagctctccctagtatcacctgtactactacttagactcagataagcaccagggctctggggtccccagctgcttctcctgatccaaggatgcctcagtcattggagggcaccctcatctctgggctgcagcctgaggactagactgaccttcacgtctaatcagaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.329 IGLV5-137-2(P)
>IGLV5-137-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ctgcctgtgctgacccagccgccctccctctctgcatccctgggatcaacagccagactcacctgcacactgagcagtggctgcagcggtggccatatgctggttccagcagccaggaggcctcctgtgtacctgctgatggtctactgagactcaccagggccccagtgtccccagccactactctggtttcaaagacacctcggccaatgcaggtcactcagatagctgcgaaattcatacaacaagggtcctcatggggactcatgggcaccccttcagattttcctgcctgcatgaacag
SEQ ID NO.330 IGLV5-138-1(P)
>IGLV5-138-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagggatggcccagctgttcccccacctccctctgcatctccaggaacaacagccagactcacatgaaccatgagcagtggcttcattgttggcggctgctacatatactggttccaacagaagccagggagtccccttccccccatatctcctgagtttctactcagactcagataagcaccagggctcaaaatccccagccctgttctggatctgaagacacctcagccaaagcagcgcctctgctcatctctgggctgcagggtgaggataagaatgactcttactctacaatctgg
SEQ ID NO.331 IGLV5-139-1(P)
>IGLV5-139-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caacctttgcggacccagtgccctccctctctgcatctcctggaacaacagttagactcatctgcacccagagcagtggccccagtgttggcagctactacaaacactggttccagcagaagccacggagccctccccagtacctcctgtactacttctcagactcagatgagcaccagggctctggggactgcagccacttcccctgatccaaggatgcctcaggaaagcagggctccctcatctctgggctacagcctgaggactagactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatgcttcttacagt
SEQ ID NO.332 IGLV5-145(P)
>IGLV5-145*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagccgccctccctctctgcatccctgggaacaacattcagactcacctgcaccctgagcagcagctgcagcggtggccatatgctggttccagcatgcaagaggcctcctgagtacctactgatggtctactgagactcaccagggccctggggtccccagcctcttctccggctccaaggacaccttggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgagaatgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggaacagctcccaatact
SEQ ID NO.333 IGLV5-145-1(P)
>IGLV5-145-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtgacgacacactcctccttcctctctgcacctttgggatcatcaaccagactcacctgcatccttcccagggcctgaatgttggcaggtactgaacatactggacaaggagaatcaaggaggcatcaggagttccctcagatccagataagtgccagggcacggggttctcagccacttctatggatctaatgatgcctcaggcaatgcaggtctcctgctcatgtctgggctgcagcctgaggacgaggctgactatgactatgctgcacattgtggggtgggagcagctcccgatact
SEQ ID NO.334 IGLV5-146-1(P)
>IGLV5-146-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
aagcctgtgctgacccagcgccctttctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagcggctggagtggtggctataggctggttccagcagccaggaagcctcctgagtacctgctgatggtctactgagactcaccaggctatggggtccccagcatattctctggctccaaggaagcctcggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgaggtcgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggagcagctcccgatact
SEQ ID NO.335 IGLV5-148(P)
>IGLV5-148*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtcaccaaggatccatcactctcagtgtttccaggagggacagtcacattcacatgtggcctcagctctgggtcagtctttacaagtaactaccccagctggtaccagcagacccatggccgggctcctcacatgcttatctacagcacaagcagctgcccccccggggtccctgatcgcttctctggatccatctctgggaacaaagttgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggatgagactattattgttcactgcgtatgggtagtacattta
SEQ ID NO.336 IGLV5-148-1(P)
>IGLV5-148-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctaacccagtcgccctccctcttgacatctttggaacaacagtcagactcacctgtaccgtgaacagtggctccagtattggcagctattacatcaactggttccaggagaagccatggagctctccctggtatcacctatactacttcttagactcagataagcaccagggctctggggtccccagctgcttctcctgatccaaggatgcctcagtcattggagggcaccctcatctctgggctgcagcctgaggactagactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.337 IGLV5-148-2(P)
>IGLV5-148-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ctgcctgtgctgacccagccgccctccctctctgcatccctgggatcaacagccagactcacctgcacactgagcagtggctgcagcggtagccatatgctggttccagcagccaggaggcctcctgggtacctgctgatggtctactgagactcaccagggccccagtgtccccagccactactctggatgcaaagacacctcggccaatgcaggt
SEQ ID NO.338 IGLV5-149-1(P)
>IGLV5-149-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagggatggcccagctgttcccccacctccctctgcatctccaggaacaacagccagactcacatgaaccatgagcagtggcttcattgttggcggctgctacatatactggttccaacagaagccagggagtccccttccccccatatctcctgagtttctactcagactcagataagcaccagggctcaaaatccccagccctgttctggatctgaagacacctcagccaaagcagcgcctctgctcatctctgggctgcagggtgaggataagaatgactcttactctacaatctgg
SEQ ID NO.339 IGLV5-150-2(P)
>IGLV5-150-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caacctttgcggacccagcgcactccctctgcatctcctggaacaacagttagactcatctgcacccagagcagtggccccagtgttggcagctactacaaacactggttccagcagaagccacggagccctccccggtacttcctgtactacttctcagactcagatgagcaccagggctctggggaccgcagccacttctcctgatccaaggatgactcaggaaaggcagggctccctcatctctgggctacagcctgaggactagactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatgcttct
SEQ ID NO.340 IGLV5-154-1(P)
>IGLV5-154-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgatgacccagctgtcctccctctctgcatccctggaaacaacaaccagacacacctgcaccctgagcagtggcttcagaaataacagctgtgtaataagttgattccagcagaagtcagggagccctccctggtgtctcctgtactattactcagactcaagtatacatttgggctctgaggttcccagctgcttctctggatccaagacaaggccacacccacactgagtagacccatccctgggtgggtctagagctccagccccactggaggctgatgcacaattgcagc
SEQ ID NO.341 IGLV5-155-1(P)
>IGLV5-155-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctaacccagtcgctctccctcttgacatctttggaacaacagtcagactcacctgtaccgtgaacagtggctccagtgttggcagctattacatcaactggttccagtataagccatggagctctccctagtatcacctgtactactacttagactcagataagcaccagggctctggggtccccagctgcttctcctgatccaaggatgcctcagtcattggagggcaccctcatctcggggctgcagcctgaggactagactgaccttcactgtctaatcagaaacaataatgcttctaacagtga
SEQ ID NO.342 IGLV5-157-1(P)
>IGLV5-157-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域||
cccagcgccctttctctctgcatccctgggaacaacagccagactcacctgcaccctgagcagcggctagagtggtggctataggctggttccagcagccaggaagcctcctgagtacctgctgatggtctactgagactcaccaggctatggggtccccagcatcttctctggctccaaggacacctcggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgaggtcgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggagcagctcccgata
SEQ ID NO.343 IGLV5-158-1(P)
>IGLV5-158-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
ataacagccagattcacctgctccctgagcagtggcttcagtgttggtggctataacacactggtaccagcagaagccagggagccctccctgttacctcctgtactactactcagaatcagataaacaccatggctccgggatcaccagctgcttccctggccctatggacacctcggccaatgcagggctcctgctcatctcagggctgcagcctgaggacgaggctgactactactgcggtatactccacagcagtgggagcagctactcttacc
SEQ ID NO.344 IGLV5-158-2(P)
>IGLV5-158-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtgacgacacactcctccttcctctctgcacctttgggatcatcaaccagactcacctgcatccttcccagggcctgaatgttggcaggtactgaacatactggacaaggagaatcaaggaggcatcaggagttccctcagatccagataagtgccagggcacggggttctcagccacttctatggatctaatgatgcctcaggcaatgcaggtttcctgctcatgtctgggctgcagcctgaggacgaggctgactatgactatgctgcacattgtggggtgggagcagctcccgatact
SEQ ID NO.345 IGLV5-158-3(P)
>IGLV5-158-3*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagcctgtgctgacccagccgccctccctctctgcatccctgggaacaacattcagactcacctgcaccctgagcagcagctgcagcggtggccatatgctggttccagcatgcaagaggcctcctgagtacctactgatggtctactgagactcaccagggccctggggtccccagcctcttctctggctccaaggacaccttggccaatgcagggctcctgctcatctctgggctgcagcctgagaatgaggctgactgtcactgtgctacagaccatggcagtgggaacagctcccaatact
SEQ ID NO.346 IGLV7-32-2(P)
>IGLV7-32-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtggtgactccagagcccttctgaccatccccaggagtgacagtcacttttacctgtgactccagcactggagagtcattaatagtgactatccacgttagttccagcagaagcctagacaaactcgcaccacacacacaacaaacactcacggactcccacccagttctcaggctccctccaggctcaaaactgccctcacctttttggggtcccagcctgagaaagaaggtgagtactaccatatgctggtctatcttggttcttgg
SEQ ID NO.347 IGLV7-33(P)
>IGLV7-33*01|家犬_拳师犬|P|V-区域||
caggctgtggtgactcaggaaccctcactgaccgtgtccctggagggacagtcactctcacctgtgcctccagcactggcgaggtcaccaatggacactatccatactggttccagcagaagcctggccaagtccccaggacattgatttataatacacacataatactcctggacccctacccggttctcaggctgcctctttgggggcaaagctgccttgaccatcacaggggcccagcccgaggatgaagctgaggactactgctggctagtatatatggtaatagg
SEQ ID NO.348 IGLV7-36-1(P)
>IGLV7-36-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtggtgattcaggaatcctcactaacagtgcccccaggaggaacactctcacctgtgcctcgaacactggcacagtcaccaatgtcagtatccttactggtttcagcagaaccctagtcaagtccccagggcattgacttaggatacaagcaataaacacttctggatccctaccaagctttcagtttccctccttggatgtaaaactcccctgaccttctctggttccctagcctgaggccaaggctgattaccactggtgggtactcatagtggtgctgca
SEQ ID NO.349 IGLV7-38-2(P)
>IGLV7-38-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggtcatggtgactcaggagccttcatggccatgtccccaggagggacagtcactctcacctatgcctccagcacaggacactatccatactggatccaagaaaatattggccaagtcagggccatttatttataataaaaacaacaaatactgatttctcatgctcccttcttgggagcaaatctgacatgaccatctcctagtgcccagcctgaggacgaggatgagtacccatgggggctacactatagtggtgctggg
SEQ ID NO.350 IGLV7-43-1(P)
>IGLV7-43-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagattgtggtgactcaggagccttcatggtcgtgtccccaggagggacagtcactctcactatgcctccagcacagaacactatccatactggatccaggaaaatattggccaagtctagagcatttatttataaaagaaacaataaatactgatttctaggctcccttcttgggaataaatctgacttgaccatctgctagtgcgcagcctgaggacgaggctgagtacccctaggggttacac
SEQ ID NO.351 IGLV7-44-1(P)
>IGLV7-44-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtgatgactcaggagtcctcactaacagtgtccccaggagggacattcactctcacctgtgcctccagccactggcatagtaacaatgctcagtatccttcctggttttaccagaagcctggccaagttcccagggcattgatttaggatacaagcaatgaaaattcctggacccccaccaagtgctcaggttccctttgtggagcaatattctcctgaccctctacagtgccttggtgagaacatagctgagtggcactggtggctgcttttattgtgatgctgggtgc
SEQ ID NO.352 IGLV7-84-2(P)
>IGLV7-84-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
caggctgtgatgactcaagagtcctcactaacagtgtccccaggagggacattcactctcacctgcgcctccagctactggcatagtaacaatgctcagtatccttactggttttagcagaatcctggccaagtccccagggcattgatttaggatacaagcaatgaacacacctggacccccaccatgtgctcaggttccctttgtggagcaatattctcctgaccctctacagtgccttggtgagaacatagctgagtggcactggtggctgcttttattgtgatg
SEQ ID NO.353 IGLV7-90-2(P)
>IGLV7-90-2*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtggcataggagccttcatggccatatccccaggagggacagtcactctcacctatccctccagcacaggacactatctatactggatctagtagcatactggccaagtctaggtcatttatttataataaaaacaataaatactcatagacctccactcatttctcaggctcccatcttgggggcaaatctgactggattgtcccctagtgcccagcctgaggatgaggctgagtaccgctggggctacactatggtggtgtggg
SEQ ID NO.354 IGLV7-120-1(P)
>IGLV7-120-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtggcataggagccttcatggccatatccccaggagggacagtcactctcacctatccctccagcacaggacactatctatactggatctagtagcatactggccaagtctaggtcatttatttataataaaaacaataaatactcatagacctccactcatttctcaggctcccatcttgggggcaaatctgactggattgtcccctagtgcccagcctgaggatgaggctgagtaccgctggggctacactatggtggtgtggg
SEQ ID NO.355 IGLV8-36(F)
>IGLV8-36*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagactgtggtgacccaggagccatcactctcagtgtctctgggagggacagtcaccctcacatgtggcctcagctccgggtcagtctctacaagtaactaccccaactggtcccagcagaccccagggcaggctcctcgcacgattatctacaacacaaacagccgcccctctggggtccctaatcgcttcactggatccatctctgggaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggacgaggctgactactactgtgctctgggattaagtagtagtagtagtta
SEQ ID NO.356 IGLV8-39(F)
>IGLV8-39*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagactgtggtaacccaggagccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcacatgtggcctcagctctgggtcagtctctacaagtaaccaccctagctggtaccagcagacccaagggaaggctcctcgcatgcttatctacaacacaaacaaccgcccctctgggatccctaattgcttctctggatccatctctgggaacaaagcctccctcaccatcacaggagcccagcctgaggacgagactgactattactgtttattgtatatgggtagtaacattta
SEQ ID NO.357 IGLV8-40(P)
>IGLV8-40*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagattgtggtgacccaggagccatcactctaagtttctccaggagggacagtcacactcacatgtggcctcagctctgggtcagtccctacaagtaactaccccagctggtttcagcagaccccaggccgggctcctagaacagttatctacaacacaaacagctgcccctctggggtccctaatcgcttcactggatccatctctggcaacaaagccgccctcaccatcacaagagcccagcctgaggatgaggctgactcctgctgtgctgaatatcaaagcagtgggagcagctacacttacc
SEQ ID NO.358 IGLV8-43(P)
>IGLV8-43*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtaacccaggaaccatcactctcagtgtctccatgagggacagtcacactcacatgtggcctcagctctgggtcagtctctacaagtaactaccccaactggtaccagcagacccaaggccgggctcctcacagggttatctacaacacaaacaaccgcccctctggggtccctgatcgcttctctggatccatctctgggaacaaagccgccctcaccatcacagctgcccagcctgaggacgaggctgactattactgttcattgtatatgggtagtaacatttg
SEQ ID NO.359 IGLV8-60(P)
>IGLV8-60*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtgatcacccaagatacatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcacatgtggcctcagctctgggtcagtctctacaagtaactaccccagctggtaccagcagacccaaggccgggatcctcgcatgcttatctacagcacaaacagccacccctctggggtccctaattgcttcactagatccatctctgggaagaaagctgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggatgagactattattgttcactaaatatgggtagtacatgta
SEQ ID NO.360 IGLV8-71(P)
>IGLV8-71*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagattgtggtgacccaggacccatcactgtcagtgtctagaggagggacagtcacactcacttgtggcctcagctctgggtcagtcactacaataaataccccagctggtcccagcagaccccagggcaggctcctcgcatgattatctatgacacaaacagccgcccctctggggtccctgatcgcttctctggatccatctgtgggaacaaagctgccctcaccatcacaggagcccatcctgaggatgagactgactactactgtggtatacaacatggcagtgggagcagcctcacttacc
SEQ ID NO.361 IGLV8-74-1(ORF)
>IGLV8-74-1*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
cagattgtggtgacccaggagccatcactgtcagtgtctccaggaggaacagttacactcacatgtggcctaagctctgggtcagtcactataagtaactaccctgattggtaccagcagactccaggcaggtctcctcgcatgcttatctacaacacaaacaaccgcccctctggggtccctaatcacttctctggatccatctctgggaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggatgaggcttactactactgtgctgtgtatcaaggcagtgggagcagctacacttacc
SEQ ID NO.362 IGLV8-76-1(P)
>IGLV8-76-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtcacccaggatccatcactctcagtgtctccaggaggaacagtcacactcacatgtggcctcagctctgggtcagtctctacaagtaactaccccggctggtaccagcagacccaagtgaaagctccttgcatgcttatctacagcacaaacagctacccctctggggttcctaattgcttcactggatccatctctgggaagaaagctgccctcaccatcacaggagaccagcctgaggatgagactattattgttcactgcatatgggtagtacactta
SEQ ID NO.363 IGLV8-88-4(P)
>IGLV8-88-4*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtggctcaggagtcatcagtctcagtgtctccaggagggacagtcacactcacttgtggcctcagctctgggtcagtgactacaagtaactaccacagctggtaccagcggacccaaggccggtctcctcacatgcttatctatgacacaagcagccgtccttctgaggtcctgatcgcttccctggttccatctctgggaacaaagctgccctcactgtcagaggagcccagcctgaggacgaggctgactactactgtggcatgcatgatgtcagtgggaggaattacaattacc
SEQ ID NO.364 IGLV8-89-3(P)
>IGLV8-89-3*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagattgtggtggccaggaggcattgttgtcagtgtctccaggagggagagtcacactcacttgtggcctcagctctgggtcagtcactacaagtaactaccccaactggttccagcagaccccagggcgggctcctggcacgattatctacagcacaaaagactgcccctctggggtccctgactgcttctctagatccatctctgggaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagtctgaggacgaggctattactgttttacacgacatggtagtgggagctgctacacttacc
SEQ ID NO.365 IGLV8-90(P)
>IGLV8-90*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtaacccaggagccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcacttgtggcctcagctctgggtcagtctctacaggtaacaaacctggctggtaccagcacaccccaggccaggctcctcgcaggattatctatgacacaagcagccgcccttctggggtccctgatcgcttctctggatccatctctgagaacaaaactgccctcaccatcacagaagcccaacctgaggatgaggctgactacatcatatatgagtggtggtgctta
SEQ ID NO.366 IGLV8-90-1(P)
>IGLV8-90-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagattgtggtgacccaggaggcatcgttgttagtgtctcctggagggatagtcacactcacttgtggcctcagctctggatcaatcactacaagtaactaccccaactggctccagcagaccccagggcgggctcctcgcagatgatctatggcacaaaaagccgcccctctggggtccctgatcgcttctgtagatccatctctgggaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagtctgaggatgaggctgactattactgttttacacgacatggcagtgggagcagctacaattac
SEQ ID NO.367 IGLV8-90-3(P)
>IGLV8-90-3*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtgacccaggagtcatcagtctcagtgtctccaggaggaacagtcacactcccttgtggcctcagctctgggtcactgactacaagtaacactacaccagctggtaccagcagacccaaggccagtctcctcgcatgcttgtctatgacacaagcagctgtccctctgaggttcctgatcacttctctggatccatttctgggaacaaagccaccctcaccatcacaggagcccagcctgaggacgaggctgactactactgtggcatgcatgatgtcagtgggagcagctaaaattacc
SEQ ID NO.368 IGLV8-90-4(P)
>IGLV8-90-4*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
catattttggtgactcaggagccatcactgtcagtgtctccatgagggacagtcacactcacttgtggcctcagctctgggtcagtcactacaagtaactaccccaggtataccagcagaacccaggcaaggctcctagcacagttatctacaacaaaaacagctgcccctctggggtccatggtcgattctctggatccatctctggaagcaaagccgccttcacaatcacaggagcccagcctgaggttgaggctgactactactgtgttacagaacatggctcctcacatgggaacagcctcactcac
SEQ ID NO.369 IGLV8-92-1(P)
>IGLV8-92-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtcacccaggatccgtcactctcagtgtctccaggagggacagtcacattcacatgtggcctcagctctgggtaagtctctacaagaaactaccccagctggtaccagcagacccaaggccaggctccttgcatgcttatctacagcacaagcagacacccttctggggtccctgatcgcttctctggatccatctctgggaacaaagtcgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggataagactattattgttcactgcatatgggtagtacattta
SEQ ID NO.370 IGLV8-93(F)
>IGLV8-93*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagactgtggtaacccaggagccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcacatgtggcctcagctctgggtcagtctctacaagtaattaccctggctggtaccagcagacccaaggccgggctcctcgcacgattatctacaacacaagcagccgcccctctggggtccctaatcgcttctctggatccatctctggaaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagcccgaggatgaggctgactattactgttccttgtatacgggtagttacactga
SEQ ID NO.371 IGLV8-99(F)
>IGLV8-99*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagactgtggtcacccagaagccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcatatgtggcttcagctctgggtcagtctctacaagtaattaccctggctggtaccagcagacccaaggccgggcttctcgcacaattatctacagcacaagcagccgcccctctggggtccctaatcgcttccctggatccatctctgggaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggacgaggctgactattactgttccttgtatatgggtagttacactga
SEQ ID NO.372 IGLV8-102(ORF)
>IGLV8-102*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
cagattgtagtgacccaggaaccatcactgtctccaggagggacagtcctactcacttgtggcctcagctctgggtcagtcactacaagtaactactccagctggtaccagcagaccccagggcgggctcctcgcacgattatctacaacactaacagccacccctctggagtccctgatcgcttctctggatccatctctgggaacaaagcggcgctcaccatcacaggagcccagcctgaggacgaggctgactactactgtgttacagaacatggtagtgggagcagcttcacttac
SEQ ID NO.373 IGLV8-108(F)
>IGLV8-108*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagactgtggtgactcaggagtcatcagtctcagtgtctccaggagggacagtcacactcacgtgtgacctcagctctgggtcagtgactacaagtaacaaccccagctggtaccagcagacccaaggccgatctcctcgcatgcttatctatgacacaagcagctgtccctcggaggtccctgatcgcttctctggatccatttctgggaacacagctgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggacaaggctgactactactgtagtatgcatgatgtcagtgggagcagctacaattacc
SEQ ID NO.374 IGLV8-113(P)
>IGLV8-113*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtcacccaggagccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcacatgtggcctcagttctgggtcagtcactataagtaactaccccagctggtcccagcagaccccagggcaggctcctcacacaataatctacaggacaaacagctgaccctctggggtccctgatcgcttctctggatccatctctgggaacaacgccgccctcagcatcacagtcgcccagcctgaggacgaggctgactattactgttcattgtatatgggtagtaacattta
SEQ ID NO.375 IGLV8-113-3(P)
>IGLV8-113-3*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagattgtggtgacccaggagccatcactctcagtgtctagaggagggacagtcacactcacttgtggcctcagctctgagtcaatcactacaactaccccagctgatcccagcagaccccagggcaggctcctcacacaattatctatgacaaaaacagccgcccctctggggtccctgatcacttctcaggatccatctgtgggaacaaagccaccctcaccatcacaggaacccagcctgaggacaaggctgactactactgtggtatccaacatggcagtaggaggagcctcattaacc
SEQ ID NO.376 IGLV8-117(P)
>IGLV8-117*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgttgtgactcaggagtcatcagtctcagtgtctccaggagggacagtaacactcacgtgtagcctcagctctgggtcagtgactacaagtaagtactccagctggaccagtagacccaaggccgatctcctcgcatgcttatctatgacacaagcagccgtccctctgaggtccctgatcgcttctctggatccatctccgggaacaaagctgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggacgaggctgactactactgtggtatgcatgatgtcagtgggaggagttacaattacc
SEQ ID NO.377 IGLV8-118-3(P)
>IGLV8-118-3*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagattgtggtggccaggaggcattgttgtcagtgtcctctggagggagagtcacactcacttgtggcctcagctctgggtcagtcactacaagtaactaccccaactggttccagcagaccccagggcgggctcctggcacgattatgtacagcacaaaagactgcccctctggggtccctgattgcttctctagatccatctctgggaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagtctgaggacgaggttattactgttttacacgacatggtagtgggagctgctacacttacc
SEQ ID NO.378 IGLV8-119(P)
>IGLV8-119*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtaacccaggagccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcacttgtggcctcagctctgggtcagtctctacaggtaacaaacctggctggtaccagcacaccccaggccaggctcctcgcaggattatctatgacacaagcagccgcccttctggggtccctgatcgcttctctggatccatctctgagaacaaagctgccctcaccatcacagaagcccagcctgaggatgaggctgcctaccactgttcgctgtatatgagtggtggtgctta
SEQ ID NO.379 IGLV8-120(P)
>IGLV8-120*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagattgtggtgacccaggaggcatcgttgtcagtgtctcctggagggatagtcacactcacttgtggcctcagctctggatcaatcactacaagtaactaccccaactggttccagcagaccccagggcgggctcctcgcagatgatctatggcacaaaaagccgcccctctggggtccctgatcgcttctgtagatccatctctgggaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagtctgaggatgaggctgactattactgttttacacgacatggcagtgggagcagctacaattacc
SEQ ID NO.380 IGLV8-121(P)
>IGLV8-121*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtgacccaggagtcatcagtctcagtgtctccagtcggaacagtcacactcacttgtggcctcagctctgggtcactgactacaagtaactacaccagctggtaccagcagacccaaggccagtctcctcgcatgcttgtctatgacacaagcagctgtccctctgaagttcctgatcacttctctggatccatttctgggaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggacgaggctgactactactgtggtatgcatgatgtcagtgggagcagctaaaattacc
SEQ ID NO.381 IGLV8-121-1(P)
>IGLV8-121-1*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
catattttggtgactcaggagccatcactgtcagtgtctccatgagggacagtcacactcacttgtggcctcagctctgggtcagtcactacaagtaactaccccaggtataccagcagaacccaggcaaggctcctagcacagttatctacaacaaaaacagctgcccctctggggtccatggtcgattctctggatccatctctggaagcaaagccgccttcacaatcacaggagcccagcctgaggttgaggctgactactactgtgttacagaacatggctcct
SEQ ID NO.382 IGLV8-124(P)
>IGLV8-124*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtcaaccaggatccgtcactctcagtgtctccaggagggacagtcacattcacatgtggcctcagctctgggtaagtctctgcaagaaactaccccagctggtaccagcagacccaaggccaggctccttgcatgcttatctacagcacaagcagccgcccttctggggtccctgatcgcttctctggatccatctctgggaacaaagtcgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggatgagactattattgttcactgcatatgggtagtacattta
SEQ ID NO.383 IGLV8-128(F)
>IGLV8-128*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagactgtggtaacccaggagccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcacatgtggcctcagctctgggtcagtctctacaagtaattaccctggctggtaccagcagaccctaggccgggctcctcgcacgattatctacagaacaagcagccgcccctctggggtccctaatcgcttctctggatccatctctgggaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggacgaggctgactattactgttccttgtatatgggtagttacactga
SEQ ID NO.384 IGLV8-137(P)
>IGLV8-137*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtcaccaaggatccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacattcacatgtggcctcagctctgggtcagtctttacaagtaactaccccagctggtaccagcagacccatggccgggctcctcgcatgcttatctacagcacaaggagctgcccccccggggtccctgatcgcttctctggatccatctctgggaacaaagttgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggatgagactattattgttcactgtgtatgggtagtacattta
SEQ ID NO.385 IGLV8-142(F)
>IGLV8-142*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagactgtggtcacccagaagccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcatatgtggcctcagctctgggtcagtctctacaagtaattaccctggctggtaccagcagacccaaggccgggcttctcgcacaattatctacagcacaagcagccgcccctctggggtccctaatcgcttcactggatccatctctgggaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggacgaggctgactattactgttccttgtatatgggtagttacactga
SEQ ID NO.386 IGLV8-150-1(ORF)
>IGLV8-150-1*01|家犬_拳师犬|ORF|V-区域|
cagattgtggtgacccaggaaccatcactgtcagtgtctccaggagggacactcacactcacttgtggcctcagctctgggtcagtcactacaagtaactaccccagctggtaccagcagaccccaggccaggctcctagcacagttatctacaacacaaacagccgcccctctggtgtccctgatcacttctctggatccgtctctgggaacaaagccgccctcatcatcacaggagcccagcctgaggacgaggctgatgactactctgttgcagaacatgtcagtgggagcagcttcacttacc
SEQ ID NO.387 IGLV8-153(F)
>IGLV8-153*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagactgtggtaacccaggagccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcacatgtggcctcagctctgggtcagtctctacaagtaattaccctggctggtaccagcagacccaaggccgggctcctcgcacgattatctacaacacaagcagccgcccctctggggtccctaatcgcttctctggatccatctctggaaacaaagccgccctcaccatcacaggagcccagcccgaggatgaggctgactattactgttccttgtatacgggtagttacactga
SEQ ID NO.388 IGLV8-156(P)
>IGLV8-156*01|家犬_拳师犬|P|V-区域|
cagactgtggtcaccaaggatccatcactctcagtgtttccaggagggacagtcacattcacatgtggcctcagctctgggtcagtctttacaagtaactaccccagctggtaccagcagacccatggccgggctcctcgcatgcttatctacagcacaagcagctgcccccccggggtccctgatcgcttctctggatccatctctgggaacaaagttgccctcaccatcacaggagcccagcctgaggatgagactattattgttcactgtgtatgggtagtacattta
SEQ ID NO.389 IGLV8-161(F)
>IGLV8-161*01|家犬_拳师犬|F|V-区域|
cagactgtggtcacccagaagccatcactctcagtgtctccaggagggacagtcacactcatatgtggcctcagctctgggtcagtctctacaagtaattaccctggctggtaccagcagacccaaggccgggcttctcgcacaattatctacagcacaagcagccgcccctctggggtccctaatcgcttccctggatccatctctgggaacaaagccgccctcatcatcacaggagcccagcctgaggacgaggctgactattactgttccttgtatatgggtagttacactga
种系Jλ序列
SEQ ID NO.390 IGLJ1(F)
>IGLJ1*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
ttgggtattcggtgaagggacccagctgaccgtcctcg
SEQ ID NO.391 IGLJ2(F)
>IGLJ2*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
tatggtattcggcagagggacccagctgaccatcctcg
SEQ ID NO.392 IGLJ3(F)
>IGLJ3*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
tagtgtgttcggcggaggcacccatctgaccgtcctcg
SEQ ID NO.393 IGLJ4(F)
>IGLJ4*01|家犬_拳师犬|F|J-区域||
ttacgtgttcggctcaggaacccaactgaccgtccttg
SEQ ID NO.394 IGLJ5(F)
>IGLJ5*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
tattgtgttcggcggaggcacccatctgaccgtcctcg
SEQ ID NO.395 IGLJ6(F)
>IGLJ6*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
tggtgtgttcggcggaggcacccacctgaccgtcctcg
SEQ ID NO.396 IGLJ7(F)
>IGLJ7*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
tgctgtgttcggcggaggcacccacctgaccgtcctcg
SEQ ID NO.397 IGLJ8(F)
>IGLJ8*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
tgctgtgttcggcggaggcacccacctgaccgtcctcg
SEQ ID NO.398 IGLJ9(F)
>IGLJ9*01|家犬_拳师犬|F|J-区域|
ttacgtgttcggctcaggaacccaactgaccgtccttg
表4.犬科动物恒定区区域基因
IGHC序列
当登录号(加下划线的)指重排的基因组DNA或cDNA并且对应的种系基因尚未分离时，功能性在中括号之间示出，[F]和[P]。
SEQ ID NO.399 IGHA(F)
>IGHA*01|家犬_拳师犬|F|CH1|
nagtccaaaaccagccccagtgtgttcccgctgagcctctgccaccaggagtcagaagggtacgtggtcatcggctgcctggtgcagggattcttcccaccggagcctgtgaacgtgacctggaatgccggcaaggacagcacatctgtcaagaacttcccccccatgaaggctgctaccggaagcctatacaccatgagcagccagttgaccctgccagccgcccagtgccctgatgactcgtctgtgaaatgccaagtgcagcatgcttccagccccagcaaggcagtgtctgtgccctgcaaa
>IGHA*01|家犬_拳师犬|F|H-CH2|
gataactgtcatccgtgtcctcatccaagtccctcgtgcaatgagccccgcctgtcactacagaagccagccctcgaggatctgcttttaggctccaatgccagcctcacatgcacactgagtggcctgaaagaccccaagggtgccaccttcacctggaacccctccaaagggaaggaacccatccagaagaatcctgagcgtgactcctgtggctgctacagtgtgtccagtgtcctaccaggctgtgctgatccatggaaccatggggacaccttctcctgcacagccacccaccctgaatccaagagcccgatcactgtcagcatcaccaaaaccaca
>IGHA*01|家犬_拳师犬|F|CH3-CHS|
gagcacatcccgccccaggtccacctgctgccgccgccgtcggaagagctggccctcaatgagctggtgacactgacgtgcttggtgaggggcttcaaaccaaaagatgtgctcgtacgatggctgcaagggacccaggagctaccccaagagaagtacttgacctgggagcccctgaaggagcctgaccagaccaacatgtttgccgtgaccagcatgctgagggtgacagccgaagactggaagcagggggagaagttctcctgcatggtgggccacgaggctctgcccatgtccttcacccagaagaccatcgaccgcctggcgggtaaacccacccacgtcaacgtgtctgtggtcatggcagaggtggacggcatctgctac
>IGHA*01|家犬_拳师犬|F|M|
gactcacagtgtcttgcaggttaccgggagccacttccctggctggtgctggacctgtcgcaggaggacctggaggaggatgccccaggagccagcctgtggcccactaccgtcacccttctcaccctcttcctactgagtctcttctacagcacagcactgactgtgacaagcgtgcggggcccaactgacagcagagagggcccccagtac
SEQ ID NO.400 IGHD(ORF)
>|IGHD*01|家犬_拳师犬|ORF|CH1|
gaatcgtcacttctgctccccttggtctcaggatgtaaggtcccaaaaaatggtgaggacataaccctggcctgcttggcaaaaggacccttcctagattctgtgcgggtcacgacaggcccagagtcacaggcccagatggaaaagaccacactgaagatgctaaagataccggaccacactcaggtgtctctcctgtccaccccctggaaaccaggcctgcactactgcgaagccatcaggaaagataacaaagagaagctgaagaaagccatccactggcca
>IGHD*01|家犬_拳师犬|ORF|H1|
gcatcctgggaaactgctatctccctgttgactcatgcgccatcccgaccccaggaccacacccaagcccccagcatggccagggtctca
>IGHD*01|家犬_拳师犬|ORF|H2|
gtgcctcccaccagccacacccagacgcaagcccaggagccaggatgcccagtggacaccatcctcaga
>IGHD*01|家犬_拳师犬|ORF|CH2|
gagtgttggaaccacacccaccctcccagcctctacatgctgcgccctcccctgcggggaccatggctccagggagaagctgctttcacctgcctggtggtgggagatgaccttcagaaggcccacctgtcctgggaggtagccggggcgccccccagcgaggctgtggaggagaggccactgcaggagcatgagaatggctcccagagctggagcagccgcctggtcttgcccatatccctgtgggcctcaggagccaacatcacctgcacgctgagcctccccagcatgccttcccaggtggtgtccgcagcagccagagagcat
>IGHD*01|家犬_拳师犬|ORF|CH3|
gctgccagagcacccagcagcctcaatgtccatgccctgaccatgcccagagcagcctcctggttcctgtgcgaggtgtccggcttctcaccccctgacatcctcctcacctggatcaaggaccagattgaggtggacccttcttggttcgccactgcaccccccatggcccagccgggcagtggcacgttccagacctggagtctcctgcgtgtcctcgctccccagggccctcacccgcccacctacacgtgtgtagtcaggcacgaggcctcccggaagctgctcaacaccagctggagcctggacagt
>IGHD*01|家犬_拳师犬|ORF|M1|
ggtctgaccatgacccccccagcccctcagagccacgacgagagcagcggggactccatggatctggaagatgccagcggactgtggcccacgttcgctgccctcttcgtcctcactctgctctacagcggcttcgtcaccttcctcaaa
>IGHD*01|家犬_拳师犬|ORF|M2|
gtgaag
SEQ ID NO.401 IGHE(F)
>IGHE*01|家犬_拳师犬|F|CH1|
nccaccagccaggacctgtctgtgttccccttggcctcctgctgtaaagacaacatcgccagtacctctgttacactgggctgtctggtcaccggctatctccccatgtcgacaactgtgacctgggacacggggtctctaaataagaatgtcacgaccttccccaccaccttccacgagacctacggcctccacagcatcgtcagccaggtgaccgcctcgggcgagtgggccaaacagaggttcacctgcagcgtggctcacgctgagtccaccgccatcaacaagaccttcagt
>IGHE*01|家犬_拳师犬|F|CH2|
gcatgtgccttaaacttcattccgcctaccgtgaagctcttccactcctcctgcaaccccgtcggtgatacccacaccaccatccagctcctgtgcctcatctctggctacgtcccaggtgacatggaggtcatctggctggtggatgggcaaaaggctacaaacatattcccatacactgcacccggcacaaaggagggcaacgtgacctctacccacagcgagctcaacatcacccagggcgagtgggtatcccaaaaaacctacacctgccaggtcacctatcaaggctttacctttaaagatgaggctcgcaagtgctca
>IGHE*01|家犬_拳师犬|F|CH3|
gagtccgacccccgaggcgtgagcagctacctgagcccacccagcccccttgacctgtatgtccacaaggcgcccaagatcacctgcctggtagtggacctggccaccatggaaggcatgaacctgacctggtaccgggagagcaaagaacccgtgaacccgggccctttgaacaagaaggatcacttcaatgggacgatcacagtcacgtctaccctgccagtgaacaccaatgactggatcgagggcgagacctactattgcagggtgacccacccgcacctgcccaaggacatcgtgcgctccattgccaaggcccct
>IGHE*01|家犬_拳师犬|F|CH4-CHS|
ggcaagcgtgcccccccggatgtgtacttgttcctgccaccggaggaggagcaggggaccaaggacagagtcaccctcacgtgcctgatccagaacttcttccccgcggacatttcagtgcaatggctgcgaaacgacagccccatccagacagaccagtacaccaccacggggccccacaaggtctcgggctccaggcctgccttcttcatcttcagccgcctggaggttagccgggtggactgggagcagaaaaacaaattcacctgccaagtggtgcatgaggcgctgtccggctctaggatcctccagaaatgggtgtccaaaacccccggtaaa
>IGHE*01|家犬_拳师犬|F|M1|
gagctccaggagctgtgcgcggatgccactgagagtgaggagctggacgagctgtgggccagcctgctcatcttcatcaccctcttcctgctcagcgtgagctacggcgccaccagcaccctcttcaag
>IGHE*01|家犬_拳师犬|F|M2|
gtgaagtgggtactcgccaccgtcctgcaggagaagccacaggccgcccaagactacgccaacatcgtgcggccggcacag
SEQ ID NO.402 IGHG1[F]
>AF354264|IGHG1*01|家犬|(F)|CH1||
gcctccaccacggccccctcggttttcccactggcccccagctgcgggtccacttccggctccacggtggccctggcctgcctggtgtcaggctacttccccgagcctgtaactgtgtcctggaattccggctccttgaccagcggtgtgcacaccttcccgtccgtcctgcagtcctcagggcttcactccctcagcagcatggtgacagtgccctccagcaggtggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggtccacccagccagcaacactaaagtagacaagcca
>IGHG1*01|家犬|(F)|H|
gtgttcaatgaatgcagatgcactgatacacccccatgccca
>IGHG1*01|家犬|(F)|CH2|
gtccctgaacctctgggagggccttcggtcctcatctttcccccgaaacccaaggacatcctcaggattacccgaacacccgaggtcacctgtgtggtgttagatctgggccgtgaggaccctgaggtgcagatcagctggttcgtggatggtaaggaggtgcacacagccaagacccagtctcgtgagcagcagttcaacggcacctaccgtgtggtcagcgtcctccccattgagcaccaggactggctcacagggaaggagttcaagtgcagagtcaaccacatagacctcccgtctcccatcgagaggaccatctctaaggccaga
>IGHG1*01|家犬|(F)|CH3-CHS|
gggagggcccataagcccagtgtgtatgtcctgccgccatccccaaaggagttgtcatccagtgacacagtcagcatcacctgcctgataaaagacttctacccacctgacattgatgtggagtggcagagcaatggacagcaggagcccgagaggaagcaccgcatgaccccgccccagctggacgaggacgggtcctacttcctgtacagcaagctctctgtggacaagagccgctggcagcagggagaccccttcacatgtgcggtgatgcatgaaactctacagaaccactacacagatctatccctctcccattctccgggtaaa
SEQ ID NO.403 IGHG2(F)
>IGHG2*01|家犬_拳师犬|F|CH1|
ncctccaccacggccccctcggttttcccactggcccccagctgcgggtccacttccggctccacggtggccctggcctgcctggtgtcaggctacttccccgagcctgtaactgtgtcctggaattccggctccttgaccagcggtgtgcacaccttcccgtccgtcctgcagtcctcagggctctactccctcagcagcatggtgacagtgccctccagcaggtggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggcccacccggccagcaaaactaaagtagacaagcca
>|IGHG2*01|家犬_拳师犬|F|H|
gtgcccaaaagagaaaatggaagagttcctcgcccacctgattgtcccaaatgccca
>IGHG2*01|家犬_拳师犬|F|CH2|
gcccctgaaatgctgggagggccttcggtcttcatctttcccccgaaacccaaggacaccctcttgattgcccgaacacctgaggtcacatgtgtggtggtggatctggacccagaagaccctgaggtgcagatcagctggttcgtggacggtaagcagatgcaaacagccaagactcagcctcgtgaggagcagttcaatggcacctaccgtgtggtcagtgtcctccccattgggcaccaggactggctcaaggggaagcagttcacgtgcaaagtcaacaacaaagccctcccatccccgatcgagaggaccatctccaaggccaga
>IGHG2*01|家犬_拳师犬|F|CH3-CHS|
gggcaggcccatcaacccagtgtgtatgtcctgccgccatcccgggaggagttgagcaagaacacagtcagcttgacatgcctgatcaaagacttcttcccacctgacattgatgtggagtggcagagcaatggacagcaggagcctgagagcaagtaccgcacgaccccgccccagctggacgaggacgggtcctacttcctgtacagcaagctctctgtggacaagagccgctggcagcggggagacaccttcatatgtgcggtgatgcatgaagctctacacaaccactacacacagaaatccctctcccattctccgggtaaa
>IGHG2*01|家犬_拳师犬|F|M1|
gagctgatcctggatgacagctgtgctgaggaccaggacggggagctggacgggctgtggaccaccatctccatcttcatcaccctcttcctgctcagcgtgtgctacagcgccactgtcaccctcttcaag
>|IGHG2*01|家犬_拳师犬|F|M2|
gtgaagtggatcttctcatcagtggtggagctgaagcgcacgattgtccccgactacaggaatatgatcgggcagggggcc
SEQ ID NO.404 IGHG3[F]
>AF354266|IGHG3*01|家犬|(F)|CH1|
gcctccaccacggccccctcggttttcccactggcccccagctgtgggtcccaatccggctccacggtggccctggcctgcctggtgtcaggctacatccccgagcctgtaactgtgtcctggaattccgtctccttgaccagcggtgtgcacaccttcccgtccgtcctgcagtcctcagggctctactccctcagcagcatggtgacagtgccctccagcaggtggcccagcgagaccttcacctgcaatgtggcccacccggccaccaacactaaagtagacaagcca
>IGHG3*01|家犬|(F)|H|
gtggccaaagaatgcgagtgcaagtgtaactgtaacaactgcccatgccca
>IGHG3*01|家犬|(F)|CH2|
ggttgtggcctgctgggagggccttcggtcttcatctttcccccaaaacccaaggacatcctcgtgactgcccggacacccacagtcacttgtgtggtggtggatctggacccagaaaaccctgaggtgcagatcagctggttcgtggatagtaagcaggtgcaaacagccaacacgcagcctcgtgaggagcagtccaatggcacctaccgtgtggtcagtgtcctccccattgggcaccaggactggctttcagggaagcagttcaagtgcaaagtcaacaacaaagccctcccatcccccattgaggagatcatctccaagacccca
>IGHG3*01|家犬|(F)|CH3-CHS|
gggcaggcccatcagcctaatgtgtatgtcctgccgccatcgcgggatgagatgagcaagaatacggtcaccctgacctgtctggtcaaagacttcttcccacctgagattgatgtggagtggcagagcaatggacagcaggagcctgagagcaagtaccgcatgaccccgccccagctggatgaagatgggtcctacttcctatacagcaagctctccgtggacaagagccgctggcagcggggagacaccttcatatgtgcggtgatgcatgaagctctacacaaccactacacacagatatccctctcccattctccgggtaaa
SEQ ID NO.405 IGHG4[F]
>AF354267|IGHG4*01|家犬|(F)|CH1|
gcctccaccacggccccctcggttttcccactggcccccagctgcgggtccacttccggctccacggtggccctggcctgcctggtgtcaggctacttccccgagcctgtaactgtgtcctggaattccggctccttgaccagcggtgtgcacaccttcccgtccgtcctgcagtcctcagggctctactccctcagcagcacggtgacagtgccctccagcaggtggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggtccacccggccagcaacactaaagtagacaagcca
>IGHG4*01|家犬|(F)|H|
gtgcccaaagagtccacctgcaagtgtatatccccatgccca
>IGHG4*01|家犬|(F)|CH2|
gtccctgaatcactgggagggccttcggtcttcatctttcccccgaaacccaaggacatcctcaggattacccgaacacccgagatcacctgtgtggtgttagatctgggccgtgaggaccctgaggtgcagatcagctggttcgtggatggtaaggaggtgcacacagccaagacgcagcctcgtgagcagcagttcaacagcacctaccgtgtggtcagcgtcctccccattgagcaccaggactggctcaccggaaaggagttcaagtgcagagtcaaccacataggcctcccgtcccccatcgagaggactatctccaaagccaga
>IGHG4*01|家犬|(F)|CH3-CHS|
gggcaagcccatcagcccagtgtgtatgtcctgccaccatccccaaaggagttgtcatccagtgacacggtcaccctgacctgcctgatcaaagacttcttcccacctgagattgatgtggagtggcagagcaatggacagccggagcccgagagcaagtaccacacgactgcgccccagctggacgaggacgggtcctacttcctgtacagcaagctctctgtggacaagagccgctggcagcagggagacaccttcacatgtgcggtgatgcatgaagctctacagaaccactacacagatctatccctctcccattctccgggtaaa
SEQ ID NO.406 IGHM(F)
>IGHM*01|家犬_拳师犬|F|CH1|
nagagtccatcccctccaaacctcttccccctcatcacctgtgagaactccctgtccgatgagaccctcgtggccatgggctgcctggcccgggacttcctgcctggctccatcaccttctcctggaagtacgagaacctcagtgcaatcaacaaccaggacattaagaccttcccttcagttctgagagagggcaagtatgtggcgacctctcaggtgttcctgccctccgtggacatcatccagggttcagacgagtacatcacatgcaacgtcaagcactccaatggtgacaaatctgtgaacgtgcccatcaca
>IGHM*01|家犬_拳师犬|F|CH2|
gggcctgtaccaacgtctcccaacgtgactgtcttcatcccaccccgcgacgccttctctggcaatggccagcgcaagtcccagctcatctgccaggctgcaggtttcagccccaagcagatttccgtgtcttggttccgtgatggaaagcagattgagtctggcttcaacacagggaaggcagaggccgaggagaaagagcatgggcctgtgacctacagcatcctcagcatgctgaccatcaccgagagtgcctggctcagccagagcgtgttcacctgccacgtggagcacaatgggatcatcttccagaagaacgtgtcctccatgtgcacctcc
>IGHM*01|家犬_拳师犬|F|CH3|
aatacacccgttggcatcagcatcttcaccatccccccctcctttgccagcatcttcaacaccaagtcagccaagctgtcctgcctggtcactgacctggccacttatgacagcctgaccatctcctggacccgtcagaatggcgaggctctgaaaacccacaccaacatctctgagagccatcccaacaacaccttcagtgccatgggggaagccactgtctgcgtggaggaatgggagtcaggcgagcagttcacctgcacagtgacccacacagatctgccctcaccgctgaagaagaccatctccaggcccaag
>IGHM*01|家犬_拳师犬|F|CH4-CHS|
gatgtcaacaagcacatgccttctgtctacgtcctgcccccgagccgggagcagctgagcctgcgggaatcggcctcactcacctgcctggtgaaaggcttctcacccccagatgtgttcgtgcagtggctgcagaagggccagcccgtgccccctgacagctacgtgaccagcgccccgatgcccgagccccaagcccccggcctctactttgtccacagcatcctgaccgtgagtgaggaggactggaatgccggggagacctacacctgtgttgtaggccatgaggccctgccccatgtggtgaccgagaggagcgtggacaagtccaccggtaaacccaccttgtacaacgtgtccctggtcttatctgacacagccagcacctgctac
>IGHM*01|家犬_拳师犬|F|M1|
gggggggaggtgagtgccgaggaggaaggcttcgagaacctgaataccatggcatccaccttcatcgtcctcttcctcctcagtgtcttctacagcaccacagtcactctgttcaag
>IGHM*01|家犬_拳师犬|F|M2|
gtgaaa
IGKC序列
SEQ ID NO.407 IGKC(F)
>IGKC*01|家犬_拳师犬|F|C-区域|
cggaatgatgcccagccagccgtctatttgttccaaccatctccagaccagttacacacaggaagtgcctctgttgtgtgcttgctgaatagcttctaccccaaagacatcaatgtcaagtggaaagtggatggtgtcatccaagacacaggcatccaggaaagtgtcacagagcaggacaaggacagtacctacagcctcagcagcaccctgacgatgtccagtactgagtacctaagtcatgagttgtactcctgtgagatcactcacaagagcctgccctccaccctcatcaagagcttccaaaggagcgagtgtcagagagtggac
IGLC序列
[F],为基因的可用序列定义的功能性(3'中的部分基因，因为序列中的空位)。
SEQ ID NO.408 IGLC1(F)
>IGLC1*01|家犬_拳师犬|F|C-区域|
ggtcagcccaagtcctcccccttggtcacactcttcccgccctcctctgaggagctcggcgccaacaaggctaccctggtgtgcctcatcagcgacttctaccccagtggcctgaaagtggcttggaaggcagatggcagcaccatcatccagggcgtggaaaccaccaagccctccaagcagagcaacaacaagtacacggccagcagctacctgagcctgacgcctgacaagtggaaatctcacagcagcttcagctgcctggtcacgcaccaggggagcaccgtggagaagaaggtggcccctgcagagtgctct
SEQ ID NO.409 IGLC2(F)
>IGLC2*01|家犬_拳师犬|F|C-区域|
ggtcagcccaaggcctccccctcagtcacactcttcccaccctcctctgaggagctcggcgccaacaaggccaccctggtgtgcctcatcagcgacttctaccccagcggcgtgacggtggcctggaaggcagacggcagccccggcatccagggcgtggagaccaccaagccctccaagcagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgacaagtggaaatctcacagcagcttcagctgcctggtcacgcatgaggggagcaccgtggagaagaaggtggcccccgcagagtgctct
SEQ ID NO.410 IGLC3(F)
>IGLC3*01|家犬_拳师犬|F|C-区域|
ggtcagcccaaggcctccccctcggtcacactcttcccgccctcctctgaggagctcggcgccaacaaggccaccctggtgtgcctcatcagcgacttctaccccagtggcgtgacggtggcctggaaggcagacggcagccccgtcacccagggcgtggagaccaccaagccctccaagcagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgacaagtggaaatctcacagcagcttcagctgcctggtcacacacgaggggagcaccgtggagaagaaggtggcccccgcagagtgctct
SEQ ID NO.411 IGLC4[F]
>IGLC4*01|家犬_拳师犬|F|C-区域|
ggtcagcccaaggcctccccctcggtcacactcttcccgccctcctctgaggagctcggcgccaacaaggccaccctggtgtgcctcatcagcgacttctaccccagcggtgtgacggtggcctggaaggcagacggcagccccgtcacccagggcgtggagaccaccaagccctccaagcagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgacaagtggaaatctcacagcagcttcagctgcctggtcacacacgaggggagcactgtgg
SEQ ID NO.412 IGLC5(F)
>IGLC5*01|家犬_拳师犬|F|C-区域|
ggtcagcccaaggcctccccttcggtcacactcttcccgccctcctctgaggagcttggcgccaacaaggccaccctggtgtgcctcatcagcgacttctaccccagcggcgtgacagtggcctggaaggcagacggcagccccatcacccagggtgtggagaccaccaagccctccaagcagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgacaagtggaaatctcacagcagcttcagctgcctggtcacgcacgaggggagcaccgtggagaagaaggtggcccccgcagagtgctct
SEQ ID NO.413 IGLC6(F)
>IGLC6*01|家犬_拳师犬|F|C-区域|
ggtcagcccaaggcctccccctcggtcacactcttcccgccctcctctgaggagctcggcgccaacaaggccaccctggtgtgcctcatcagcgacttctaccccagcggtgtgacggtggcctggaaggcagacggcagccccgtcacccagggcgtggagaccaccaagccctccaagcagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgacaagtggaaatctcacagcagcttcagctgcctggtcacgcacgaggggagcaccgtggagaagaaggtggcccccgcagagtgctct
SEQ ID NO.414 IGLC7(F)
>IGLC7*01|家犬_拳师犬|F|C-区域|
ggtcagcccaaggcctccccctcggtcacactcttcccgccctcctctgaggagctcggcgccaacaaggccaccctggtgtgcctcatcagcgacttctaccccagcggcgtgacggtggcctggaaggcagacggcagccccgtcacccagggcgtggagaccaccaagccctccaagcagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgacaagtggaaatctcacagcagcttcagctgcctggtcacgcacgaggggagcaccgtggagaagaaggtggcccccgcagagtgctct
SEQ ID NO.415 IGLC8(F)
>IGLC8*01|家犬_拳师犬|F|C-区域|
ggtcagcccaaggcctccccctcggtcacactcttcccgccctcctctgaggagctcggcgccaacaaggccaccctggtgtgcctcatcagcgacttctaccccagcggcgtgacggtggcctggaaggcagacggcagccccgtcacccagggcgtggagaccaccaagccctccaagcagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgacaagtggaaatctcacagcagcttcagctgcctggtcacgcacgaggggagcaccgtggagaagaaggtggcccccgcagagtgctct
SEQ ID NO.416 IGLC9(F)
>IGLC9*01|家犬_拳师犬|F|C-区域|
ggtcagcccaaggcctccccctcggtcacactcttcccgccctcctctgaggagctcggcgccaacaaggccaccctggtgtgcctcatcagcgacttctaccccagcggcgtgacggtggcctggaaggcagacggcagccccatcacccagggcgtggagaccaccaagccctccaagcagagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgacaagtggaaatctcacagcagcttcagctgcctggtcacgcacgaggggagcactgtggagaagaaggtggcccccgcagagtgctct
//犬科动物Ig序列结束
表5.PCR引物
SEQ ID NO.417 1F:ACATAATACACTGAAATGGAGCCC
SEQ ID NO.418 1R:GTCCTTGGTCAACGTGAGGG
SEQ ID NO.419 2F:CATAATACACTGAAATGGAGCCCT
SEQ ID NO.420 2R:GCAACAGTGGTAGGTCGCTT
表6.杂项序列数据
前DJ
这是Ighd-5 DH基因上游的21609bp片段。前DJ序列可以见于小家鼠(Musmusculus)品系C57BL/6J第12号染色体上，组装：GRCm38.p4，注释版本106，序列ID:NC_000078.6整个序列位于如下所示的两个100bp序列之间：
Ighd-5 DH基因区段的上游，对应于NC_000078.6中的位置113526905-113527004：
ATTTCTGTACCTGATCTATGTCAATATCTGTACCATGGCTCTAGCAGAGATGAAATATGAGACAGTCTGATGTCATGTGGCCATGCCTGGTCCAGACTTG(SEQ ID NO.421)
ADAM6A基因上游2kb，对应于NC_000078.6中的位置113548415–113548514：
GTCAATCAGCAGAAATCCATCATACATGAGACAAAGTTATAATCAAGAAATGTTGCCCATAGGAAACAGAGGATATCTCTAGCACTCAGAGACTGAGCAC(SEQ ID NO.422)
ADAM6A
ADAM6A(解整联蛋白和金属肽酶结构域6A)是参与雄性生育力的基因。ADAM6A序列可以见于小家鼠品系C57BL/6J第12条染色体上，组装：GRCm38.p4，注释版本106，序列ID：NC_000078.6，处于位置113543908-113546414处。
ADAM6A序列ID:OTTMUSG00000051592(VEGA)
表7.嵌合犬科动物/小鼠Ig基因序列
Igk形式A
小鼠Igkv 1-133上游的序列(SEQ ID NO:423)
GCATTGAATAAACCAGTATAAACAAGCAAGCAAAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATACATAGATAGATAGATAGATAGATAGATGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATTTTTACGTATAATACAATAAAAACATTCATTGTCCCTCTATTGGTGACTACTCAAGGAAAAAAATGTTCATATGCAAGAAAAAATGTTATCATTACCAGATGATCCAGCAATCTAGCAATATATATATTGTTTATTCACAAAACATGAATGAACCTTTTAAGAAGCTGTTACAGTGTAAAAATTAAGTTAAATCACTGAAGAACATATACTGTGTGATTTCATTCAAATGAAATTTGAGAAGTAAATATATATGTATATATATATATATGTAAAAAATATAAGTCTGAACTACAAAAATTCAATTTGTTTGATATGTAAGAATAAGAAAAATTGACCCCCAAAATTTGTTAATAATTAGGTATGTGTATTTTTATGAATATATAAGTATAATAATGCTTATAGTATACACTATTCTGAATCACATTTATTCCCTAAGTGTGTTCCCTTGATTATAATTAAAAGTATATTTTTTAAATACAGAGTCAGAGTACAGTCAATAAGGCGAAAATATAGTTGAATGATTTGCTTCAGCTTTTGTAATGTACTAGAGATTGTGAGTACAAAGTCTCAGAGCTCATTTTATCCCTGACAATAACCAGCTCTGTGCTTCAAGTACATTTCCATCTTTCTCTGAAATTTAGTCTTATATAGATAGACAAAATTTAAGTAAATTTCAAACTACACAGAACAACTAAGTTGTTGTTTCATATTGATAATGGATTTGAACTGCATTAACAGAACTTTAACATCCTGCTTATTCTCCCTTCAGCCATCATATTTTGCTTTATTATTTTCACTTTTTGAGTTATTTTTCACATTCAGAAAGCTCACATAATTGTCACTTCTTTGTATACTGGTATACAGACCAGAACATTTGCATATTGTTCCCTGGGGAGGTCTTTGCCCTGTTGGCCTGAGATAAAACCTCAAGTGTCCTCTTGCCTCCACTGATCACTCTCCTATGTTTATTTCCTCAAA
来自LOC475754的犬科动物外显子1(前导)(SEQ ID NO.424):
atgaggttcccttctcagctcctggggctgctgatgctctggatcc
来自LOC475754的犬科动物内含子1(SEQ ID NO.425)
Caggtaaggacagggcggagatgaggaaagacatgggggcgtggatggtgagctcccctggtgctgtttctctccctgtgtattctgtgcatgggacagattgccctccaacagggggaatttaatttttagactgtgagaattaagaagaatataaaatatttgatgaacagtactttagtgagatgctaaagaagaaagaagtcactctgtcttgctatcttgggttttccatgataattgaatagatttaaaatataaatcaaaatcaaaatatgatttagcctaaaatatacaaaacccaaaatgattgaaatgtcttatactgtttctaacacaacttgtacttatctctcattattttaggatccagtggg
来自LOC475754的犬科动物的外显子2(前导)的5’部分(SEQ ID NO.426)
aggatccagtggg
来自LOC475754的犬科动物Vκ(SEQ ID NO.427)
Gatattgtcatgacacagaccccactgtccctgtctgtcagccctggagagactgcctccatctcctgcaaggccagtcagagcctcctgcacagtgatggaaacacgtatttgaactggttccgacagaagccaggccagtctccacagcgtttaatctataaggtctccaacagagaccctggggtcccagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgacgatactggagtttattactgcgggcaaggtatacaagat
小鼠RSS七聚体(SEQ ID NO:428)
CACAGTG
小鼠RSS七聚体下游的序列(SEQ ID NO.429)
ATACAGACTCTATCAAAAACTTCCTTGCCTGGGGCAGCCCAGCTGACAATGTGCAATCTGAAGAGGAGCAGAGAGCATCTTGTGTCTGTGTGAGAAGGAGGGGCTGGGATACATGAGTAATTCTTTGCAGCTGTGAGCTCTG
Igk形式B
小鼠Igkv上游的序列1-133(SEQ ID NO.430)
GCATTGAATAAACCAGTATAAACAAGCAAGCAAAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATACATAGATAGATAGATAGATAGATAGATGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATTTTTACGTATAATACAATAAAAACATTCATTGTCCCTCTATTGGTGACTACTCAAGGAAAAAAATGTTCATATGCAAGAAAAAATGTTATCATTACCAGATGATCCAGCAATCTAGCAATATATATATTGTTTATTCACAAAACATGAATGAACCTTTTAAGAAGCTGTTACAGTGTAAAAATTAAGTTAAATCACTGAAGAACATATACTGTGTGATTTCATTCAAATGAAATTTGAGAAGTAAATATATATGTATATATATATATATGTAAAAAATATAAGTCTGAACTACAAAAATTCAATTTGTTTGATATGTAAGAATAAGAAAAATTGACCCCCAAAATTTGTTAATAATTAGGTATGTGTATTTTTATGAATATATAAGTATAATAATGCTTATAGTATACACTATTCTGAATCACATTTATTCCCTAAGTGTGTTCCCTTGATTATAATTAAAAGTATATTTTTTAAATACAGAGTCAGAGTACAGTCAATAAGGCGAAAATATAGTTGAATGATTTGCTTCAGCTTTTGTAATGTACTAGAGATTGTGAGTACAAAGTCTCAGAGCTCATTTTATCCCTGACAATAACCAGCTCTGTGCTTCAAGTACATTTCCATCTTTCTCTGAAATTTAGTCTTATATAGATAGACAAAATTTAAGTAAATTTCAAACTACACAGAACAACTAAGTTGTTGTTTCATATTGATAATGGATTTGAACTGCATTAACAGAACTTTAACATCCTGCTTATTCTCCCTTCAGCCATCATATTTTGCTTTATTATTTTCACTTTTTGAGTTATTTTTCACATTCAGAAAGCTCACATAATTGTCACTTCTTTGTATACTGGTATACAGACCAGAACATTTGCATATTGTTCCCTGGGGAGGTCTTTGCCCTGTTGGCCTGAGATAAAACCTCAAGTGTCCTCTTGCCTCCACTGATCACTCTCCTATGTTTATTTCCTCAAA
小鼠Igkv 1-133外显子1(前导)(SEQ ID NO.431)
ATGATGAGTCCTGCCCAGTTCCTGTTTCTGTTAGTGCTCTGGATTCAGG
小鼠Igkv 1-133内含子1(SEQ ID NO.432)
GTAAGGAGTTTTGGAATGTGAGGGATGAGAATGGGGATGGAGGGTGATCTCTGGATGCCTATGTGTGCTGTTTATTTGTGGTGGGGCAGGTCATATCTTCCAGAATGTGAGGTTTTGTTACATCCTAATGAGATATTCCACATGGAACAGTATCTGTACTAAGATCAGTATTCTGACATAGATTGGATGGAGTGGTATAGACTCCATCTATAATGGATGATGTTTAGAAACTTCAACACTTGTTTTATGACAAAGCATTTGATATATAATATTTTTAAATCTGAAAAACTGCTAGGATCTTACTTGAAAGGAATAGCATAAAAGATTTCACAAAGGTTGCTCAGGATCTTTGCACATGATTTTCCACTATTGTATTGTAATTTCAG
小鼠Igkv 1-133外显子2的5’部分(前导)(SEQ ID NO.433)
AAACCAACGGT
来自LOC475754的犬科动物Vκ(SEQ ID NO.434)
Gatattgtcatgacacagaccccactgtccctgtctgtcagccctggagagactgcctccatctcctgcaaggccagtcagagcctcctgcacagtgatggaaacacgtatttgaactggttccgacagaagccaggccagtctccacagcgtttaatctataaggtctccaacagagaccctggggtcccagacaggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcaccctgagaatcagcagagtggaggctgacgatactggagtttattactgcgggcaaggtatacaagat
小鼠RSS七聚体(SEQ ID NO:435)
CACAGTG
小鼠RSS七聚体下游的序列(SEQ ID NO.436)
ATACAGACTCTATCAAAAACTTCCTTGCCTGGGGCAGCCCAGCTGACAATGTGCAATCTGAAGAGGAGCAGAGAGCATCTTGTGTCTGTGTGAGAAGGAGGGGCTGGGATACATGAGTAATTCTTTGCAGCTGTGAGCTCTG。
序列表
<110> 特里安尼公司
<120> 转基因哺乳动物及使用方法
<130> 0133-0006WO1
<140> PCT/US2020/040282
<141> 2020-06-30
<150> 62/869,435
<151> 2019-07-01
<160> 471
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 297
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 1
gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaggaaac cagtttcatc tgtgaaggtc 60
tcctggaagg catctggata cacctacatg gatgcttata tgcactggtt atgacaagct 120
tcaggaataa ggtttgggtg tatgggatgg attggtccca aagatggtgc cacaagatat 180
tcacagaagt tccacagcag agtctccctg atggcagaca tgtccaaagc acagcctaca 240
tgctgctgag cagtcagagg cctgaggaca cacctgcata ttactgtgtg ggacact 297
<210> 2
<211> 294
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 2
gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc caggtacatc cgtgaaggtc 60
tcatgcaaga catctggata caccttcact gactactata tgtactgggt acgacaggct 120
tcaggagcag ggcttgattg gatgggacag attggtccct aagatggtgc cacaaggtat 180
gcacagaagt ttcagggcag agtcaccctg tcaacagaca catccacaag cacagcctac 240
atggagctga gcagtctgag agctgaggac acagccatgt actactctgt gaga 294
<210> 3
<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 3
gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc taagggcatc agtgatagtc 60
ccctgcaaga catctggata cagcttcact gactacattt tggaatgggt atgacaggct 120
ccaggaccag ggcttgagtg gatgggatgg attggtcctg aagatggtga gacaaagtat 180
gtgcagaagt tccaggcaga gtcaccctga tggcagacac aaccacaagc acagccaaca 240
tggagctgac cagtctgaga gctgaggaca cagccatgta ctactgtgtg a 291
<210> 4
<211> 294
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 4
gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc caggggcatc tgtgaaggtc 60
tcctgcaaga catctggata caccttcatt aactactata tgatctgggt acgacaggct 120
ccaggagcag ggcttgattg gatgggacag attgatcctg aagatggtgc cacaagttat 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccctg acagcagaca catccacaag cacagcctac 240
atggagctga gcagtctgag agctggggac atagctgtgt actactgtgc gaga 294
<210> 5
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 5
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agcaactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctgcagtg ggtctcacaa attagcagtg atggaagtag cacaagctac 180
gcagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agatgaggac acggcagtgt attactgtgc aaggga 296
<210> 6
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 6
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac atggtgaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg cctctggatt taccttcagt agttactaca tgtattgggc ccgccaggct 120
ccagggaagg ggcttcagtg ggtctcacac attaacaaag atggaagtag cacaagctat 180
gcagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgcaaagaa tacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agctgaggac acagcggtgt attactgtgc aaagga 296
<210> 7
<211> 297
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 7
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ctgatgaagc ctgggggggt ccctgagact 60
ctcctgtgtg gcctctgaat tcatcttcag tggctactgg aagtactgga tccaccaagc 120
tccagggaag gggctgcagt gggtcacatg gattagcaat gatggaagta gcaaaagcta 180
tgcagacgct gtgaagggcc aattcaccat ctccaaagac aatgccaaat acacgctgta 240
tctgcagatg aacagcctga gagccgagga catggccgtg tattactgta tgatgca 297
<210> 8
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 8
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactt 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agctaccaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggcttcagtg ggtcgcatac attaacagtg gtggaagtag cacaagctat 180
gcagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240
cttcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagtga 296
<210> 9
<211> 297
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 9
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagcc ctggtgaagc ctgggggggt ccctgagact 60
ctcctatgtg gcctctggat tcaccttcag tagctaccac atgagctggg tccgccaggc 120
tccagggaag gggctgcagt gggtcgcata cattaacagt ggtggaagta gggatccctg 180
ggtggcgcag tggtttggcg cctgcctttg gcccagggca cgatcctgga gacccgggat 240
cgaatcccac gtcgggctcc ctgcatggag cctgcttctc cctctgcctg tgtctct 297
<210> 10
<211> 293
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 10
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtag cctctggatt caccttcagt agctccgaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccaggaaagg ggcttcagtg ggtcgcatac attagcaatg atggaagtag cacaagctac 180
gcagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctctat 240
ctgcagatga acagcctcag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc aga 293
<210> 11
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 11
gaggagcaac tggtggagtt tggaggacac atggtgaatc ctgggggttc cctgggtctc 60
tcctgtcagg cctctggatt caccttcagt agctatggca tgagctgggt ccgccaggct 120
caaaagaagg ggctgcagtg ggtcggacat attagctatg atggaagtag tacatactac 180
gcagacactt tgagggacag attcaccatc tccagagaca acaccaagaa catgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acagccgtgt attactgcat gaggaa 296
<210> 12
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 12
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt aactacgaaa tgtactgggt ccgccaggct 120
ccagggaaag ggctggagtg ggtcgcaagg atttatgaga gtggaagtac cacatactat 180
gcagaagctg taaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa catggcgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagtga 296
<210> 13
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 13
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactt 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agctatgaca tggactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctgcagtg gctctcagaa attagcagta gtggaagtag cacatactac 180
gcagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc aaggga 296
<210> 14
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 14
gaggtgcagc tggtggagac tgagggagac ctggtgaagc ctgggggatc cctgagactt 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agctacgaca tggactgggt ctaccaggct 120
ccagggaaag ggttacagtg ggtcacatac attagcaatg gtggaagtag cacaaggtat 180
gcagacgctg tgaagggcca attcaccatc tccagagaca acgccaggaa cacgctctat 240
ctgcagatga acagcctgag agacaaggac atggccgtgt attactgtgt gagtga 296
<210> 15
<211> 293
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 15
gaggtgcagc tggtggagtc taggggagac gtggtgaagc ctggggaggt ccctctcctg 60
tgtggcctct agattcacct tcagtagcta ctacatgggc tgggtccact aggctccagg 120
gaaggggctg cagtgggtcg caggtattac caatgataga agtagcacaa gctatgcaga 180
cgctgtgaag ggccgattca ccatctccag agacaatgcc aagaacacgc tgtatctgca 240
gatgaacagc ctgggagccg aggacacggc tgtgtattat tgtgtgaaac aga 293
<210> 16
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 16
gaggtgcagc tggtggagtc tggggagacc tggtgaagcc tggggggtct ctgagactct 60
cctgtgtggc ctctggattc accttcagta gctactacat gagctgggtc cgccaggctc 120
cagggaaggg gctgcagtgg gtcggataca ttaacagtgg tggaagtagc acatactatg 180
cagacgctgt gaagggccga ttcaccatct ccagagacaa tgccaagaac acgctgtatc 240
tgcagatgaa cagcctgaga gccgaggaca cagctgtgta ttactgtggg aaggga 296
<210> 17
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 17
gaggagcaac tggtggagtt tggaggacac atggtgaatc ctgggggttc cctgggtctc 60
tcctgtcagg cctctggatt caccttcagt agctatggca tgagctgggt ccgccaggct 120
caaaagaagg ggctgcagtg ggtcggacat attagctatg atggaagtag cacatactac 180
acagacactg tgagggacag attcaccatc tccagagaca acaccaagaa catgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acagccgtgt attactgcat gaggaa 296
<210> 18
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 18
gaggtgcaga tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctgggggatc cctgagactc 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt aactacaaaa tgtactgggt ccaccaggct 120
ccagggaaag ggctggagtg ggtcgcaagg atttatgaga gtggaagtac cacatactac 180
gcagaagctg taaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa catggtgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agcctaggac acggccgtgt attactgtgt gagtga 296
<210> 19
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 19
gaggtacagc tggtggagtc tggaggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg cctctggatt cacctttagt agttactaca tgttttggat ccgccaggca 120
ccagggaagg gcaatcagtg ggtcggatat attaacaaag atggaagtag cacatactac 180
ccagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacactgtat 240
ctgcagatga acagcctgac agtggaggac acagcccttt attactgtgc gagaga 296
<210> 20
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 20
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac cttgtgaaac ctgaggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg tctctggctt caccttcagt agctacgaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctgcagtg ggtcgcatac attagcagtg atggaaggag cacaagttac 180
acagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag aactgaggac acagccgtgt attactgtgc gaagga 296
<210> 21
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 21
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctgcggggtc cctgagactg 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agctacagca tgagctgggt ccgccaggct 120
cctgagaagg ggctgcagtt ggtcgcaggt attaacagcg gtggaagtag cacatactac 180
acagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacagtgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccatgt attactgtgc aaagga 296
<210> 22
<211> 294
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 22
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggatac ctggtgaagc ctggagggtc ctgagactct 60
cctctgtgtc ctctggattc accttcagta tctactgcat gtgatgggtc tgccaggctc 120
caggaaaggg gctgcagtga gtcgcataca gtaacagtgg tggaagtagc actaggtaca 180
cagacgctgt gaagggctga ttcaccacct ccagagacaa tgccaagaac acactgtatc 240
tgcagatgaa cagcctgaga gtgaggacac agcggtgtat tactgtgcag gtga 294
<210> 23
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 23
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactg 60
tcctgtgtgg tctctggatt caccttcagt aagtatggca tgagctgggt ctgccaggct 120
ttggggaagg ggctacagtt ggtcgcagct attagctaag atggaaggag cacatactac 180
acagacactg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cacgctgtac 240
ctgcagatga acagcttgag agctgaggac acggccgtgt attactgtga gagtga 296
<210> 24
<211> 284
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 24
gaggtgaagc tagtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctgggggatc aattagactc 60
tcctatgtga cctctggatt caccttcagg agctactgga tgagctgggt cagccaggct 120
ccagggaagg ggctgcagtg ggtcatatgg gttaatactg gtggaagcag aaaaagctat 180
gcagatgctg tgaaggggtg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cacgctgtat 240
ctgcatatga acagcctgag agccctgtat tattatgtga gtga 284
<210> 25
<211> 292
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 25
gaggtgcaga tgatggagtc tgggggagaa ctgatgaagc ctgcaggatc cctgagacct 60
cctgtgtggc ctctggattc accttcagta gctactggat gtactggatc caccaaactc 120
cggggaaggg gctgcagtgg gtcgcaggta ttagcacaga tggaagtagc acaagctacg 180
tagacgctct gaagggctga ttcaccatct ccagagacaa cgccaagaac acgctctatc 240
tgcagatgaa cagcctgaga gccgaggaca tggccatgta ttactgtgca ga 292
<210> 26
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 26
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ctggagaagc ctgggggatc cctgagactg 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agctacggca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctgcaggg ggtctcattg attaggtatg atggaagtag cacaaggtat 180
gcagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acagccgtgt attcctgtgc gaagga 296
<210> 27
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 27
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac cttgtgaagc ctgaggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agcttctaca tgagctggtt ctgccaggct 120
ccaaggaagg ggctacagtg ggttgcagaa attagcagta gtggaagtag cacaagctac 180
gcagacattg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa catgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac atggccgtat attattgtgc aaggta 296
<210> 28
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 28
gaggtgcagc tggtggagcc tgggggagaa ctggtgaagc ctggggcgtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg tccctggatt caccttcagt agctacaaca tgggctgggc tcaccagcct 120
ccagggaagg ggatgcagtg ggtcgcaggt tttaacagcg gtggaagtag cacaagctac 180
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ctgcagatga acagcctgag atccgaggac acggccgtgt attactgtgt gaagga 296
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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tcctgtgtgg gctctggatt caccttcagt agctactgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctacagtg ggttgcagaa attagcggta gtggaagtag cacaaactat 180
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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aaggtgcatc tggtggagtc tgcgggagac gtggtgaagc ctaggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg gctctggatt caccttcagt agctacagca tgtggtgggc ccgtgaggct 120
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gaggtgcagc tagtggagtc tgggggagac ctggtgaagt ctgggggggt ccctgagagt 60
ctcctgtgtg ggctctggat tcaccttcag tagctactgg atgtactggg tccaccaggc 120
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gaggtgcagc tggtggagtc ctggggagac ctggtgaaga ctggaggttt cctgagactc 60
tcctgtctcc tgtgtggctt ccggattcac cttcagtaac tacagcatga tctgggtccg 120
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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ttcagatgaa cagcctgaga gctgaggaca cggctctgta ttactgtgca ga 292
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gaggagcagt tggtgaaatc taggggagac ctggtgaagc ctggcgggtc cctgagactc 60
ttctgtgagt cctctacgtt cacctttcat agctacagca tgcattggct ccaccagtct 120
cccggtagtg gctacagtgg gtcatatcca atagcagtaa tggaagtagc atgtactatg 180
cagacgctgt aaagggctga tacaccatct ccagagacaa caccaggaac atgctgtatc 240
tgcagatgaa taacctgaga gctgaggaca cagccgtgca ttgctgtgcg aggga 295
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 67
gaggtgcagc tggtggagtc tgcgggagac cccgtgaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg ccgctggatt caccttcagt agctacagca tgagctgggt ccgccaggct 120
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ctgcagatgc ctgagagctg aggacacggc catgtattcc tgtgcagggg a 291
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 68
gatgtacagc tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactg 60
tcctgtgtgg cctctggatt cacctgcagt agctactaca tgtactagac ccaccaaatt 120
ccagggaagg ggatgcaggg ggttgcacgg attagctatg atggaagtag cacaagctac 180
accgacgcaa tgaaaggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa catgctgtat 240
ctgcaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cagccgtgta ttactgtgtg aagga 295
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gaggtgcagc tggtggagtc tggcggagac ctggtgaagc ctgggcggtc cctgagactg 60
tcctgtatgg cctctggatt cacttcagta gctacagcat gagctgtgtc cgccaggctc 120
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactg 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agctactaca tgtactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggcttcagtg ggtcgcacgg attagcagtg atggaagtag cacatactac 180
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gaagtgcagc tggtggagtc tgggggagag ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agctactaca tgtactgggt ccgccaggct 120
ccagggaaat ggctgctgtg ggtcacatga attaggagtg atggaagtag cacatataca 180
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tgcagatgaa cagcctgaga gccaaggaca cggccctata tccctgtgca atgga 295
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gaggtacagc tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctgggggatc cctgagactg 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gaggtgcagc tggtggagtc tggaggagac cttgtgaagc ctgagcggtc cctgagactc 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agcttctaca tgagctggtt ctgccaggct 120
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagat ctggtgaagc ctgggggatc cctgagactc 60
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 86
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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acctgctcct tctctgggtt cttattgagc atgtcagtgt gggtgtcaca tgggtccttt 120
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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<210> 101
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 101
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 102
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 103
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cc 302
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 104
gatattgtca tgacacagac cccactgtcc ctgtctgtca gccctggaga gactgcctcc 60
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cc 302
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 105
gatattgtca tgacacagaa cccactgtcc ctgtccgtca gccctggaga gacggcctcc 60
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cc 302
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<400> 106
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cc 302
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 107
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cc 302
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 108
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 109
gatatcgtca tgacacagac cccactgtcc ctgtccgtca gccctggaga gactgcctcc 60
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<400> 110
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tcactgtgca ggaggccagt cagagcctcc tgcacagtga tggatatatt tatttgaatt 120
ggtactttca gaaatcaggc cagtctccat actcttgatc tatatgcttt acaaccagac 180
ttctggagtc ccaggctggt tcattggcag tggatcaggg acagatttca ccctgaggat 240
cagcagggtg gaggctgaag atgctggagt ttattattgc caacaaactc tacaaaatcc 300
tcc 303
<210> 111
<211> 302
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 111
gatatcgtca tgacgcagac cccactgtcc ctgtctgtca gccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca gggccagtca gagcctcctg cacagtaatg ggaacaccta tttgtattgg 120
ttccgacaga agccaggcca gtctccacag ggcctgatct acttggtttc caaccgtttc 180
tcttgggtcc cagacaggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac cctgagaatc 240
agcagagtgg aggctgacga tgctggagtt tattactgcg ggcaaaattt acagtttcct 300
tc 302
<210> 112
<211> 302
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 112
gaggttgtga tgatacagac cccactgtcc ctgtctgtca gccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca gggccagtca gagtctccgg cacagtaatg gaaacaccta tttgtattgg 120
tacctgcaaa agccaggcca gtctccacag cttctgatcg acttggtttc caaccatttc 180
actggggtgt cagacaggtt cagtggcagc gggtctggca cagattttac cctgaggatc 240
agcagggtgg aggctgagga tgttggagtt tattactgca tgcaaagtac acatgatcct 300
cc 302
<210> 113
<211> 298
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 113
gatatcatga tgacacagac cccactctcc ctgcctgcca cccctgggga attggctgcc 60
atcttctgca gggccagagt ctcctgcaca ataatggaaa cacttattta cactggttcc 120
tgcagacatc aggccaggtt ccaaggcatc tgaaccattt ggcttccagc tgttactctg 180
gggtctcaga caggttcagt ggcaacgggt cagggacaga tttcacactg aaaatcagca 240
gagtggaggc tgaggatgtt agtgtttatt agtgcctgca agtacacaac cttccatc 298
<210> 114
<211> 302
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 114
gaggccgtga tgacgcagac cccactgtcc ctggccgtca cccctggaga gctggccact 60
atctcctgca gggccagtca gagtctcctg cgcagtgatg gaaaatccta tttgaattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gactcctcgg ccgctgattt atgaggcttc caagcgtttc 180
tctggggtct cagacaggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac ccttaaaatc 240
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cc 302
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 115
gatatcgtca tgacacagac cccactgtcc gtgtctgtca gccctggaga gacggcctcc 60
atctcctgca gggccagtca gagcctcctg cacagtgatg gaaacaccta tttggattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gattccaaag gacctgatct atagggtgtc caactgcttc 180
actggggtgt cagacaggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac cctgagaatc 240
agcagagtgg aggctgacaa cgctggagtt tattactgca tgcaaggtat acaagatcct 300
cc 302
<210> 116
<211> 302
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 116
gatatcgtca tgacacagac tccactgtcc ctgtctgtca gccctggaga gacggcctcc 60
atctcctgca gggccaatca gagcctcctg cacagtaatg ggaacaccta tttggattgg 120
tacatgcaga agccaggcca gtctccacag ggcctgatct atagggtgtc caaccacttc 180
actggcgtgt cagacaggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac cctgaagatc 240
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cc 302
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 117
gaaatagtct tgacctagtc tccagcctcc ctggctattt cccaagggga cagagtcaac 60
catcacctat gggaccagca ccagtaaaag ctccagcaac ttaacctggt accaacagaa 120
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ggctgaaggt gctgcctact attactacca gcagtagggt agctatctgc t 291
<210> 118
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 118
gaaatcgtga tgacacagtc tccagcctcc ctctccttgt ctcaggagga aaaagtcacc 60
atcacctgcc gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca gcaaaaacct 120
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<210> 119
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 119
gagattgtgc caacctagtc tctagccttc taagactcca gaagaaaaag tcaccatcag 60
ctgctgggca gtcagagtgt tagcagctac ttagcctggt accagcaaaa acctggacag 120
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agatgttgca acatattact gccagcagta taatagctac ccacc 285
<210> 120
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 120
gaaatcgtga tgacccagtc tccaggctct ctggctgggt ctgcaggaga gagcgtctcc 60
atcaactgca agtccagcca gagtcttctg tacagcttca accagaagaa ctacttagcc 120
tggtaccagc agaaaccagg agagcgtcct aagctgctca tctacttagc ctccagctgg 180
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cctcc 305
<210> 121
<211> 287
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 121
gacatcacga tgactcagtg tccaggctcc ctggctgtgt ctccaggtca gcaggtcacc 60
acgaactgca gggccagtca aagcgttagt ggctacttag cctggtacct gcagaaacca 120
ggacagcgtc ctaagctgct catctactta gcctccagct gggcatctgg ggtccctgcc 180
cgattcagca gcagtggatc tgggacagat ttcaccctca ccgtcaacaa cctcgaggct 240
gaagatgtga gggattatta ctgtcagcag cattatagtt ctcctct 287
<210> 122
<211> 305
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 122
gacattatgc tgacccagtc tccagcctcc ttgaccatgt gtctccagga gagagggcca 60
ccatctcttg cagggccagt cagaaagcca gtgatatttg gggcattacc caccatatta 120
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attgatcctg tggaggctgg cgatgctgtc aactattact gccagcagag taaggagtct 300
cctcc 305
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<211> 289
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 123
gaaattgcag attgtcaaat ggataatacc aggatgcggt ctctagcctc cctgactccc 60
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gtggacgttc ggagcaggaa ccaaggtgga gctcaaac 38
<210> 125
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 125
tttatacttt cagccaggga accaagctgg agataaaac 39
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 126
gttcactttt ggccaaggga ccaaactgga gatcaaac 38
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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gcttacgttc ggccaaggga ccaaggtgga gatcaaac 38
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 128
gatcaccttt ggcaaaggga cacatctgga gattaaac 38
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 129
cagtctgtgc tgactcagct ggcctcggtg tctggggccc tgggccacag ggtcagcatc 60
tcctggactg gaagcagctc caacataagg gttgattatc ctttgagctg ataccaacag 120
ctcccagaat gaagaacgaa cccaaactcc tcatctatgg taacagcaat tggctctcag 180
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ctggcctcca ggctgaggac gaggctgatt gttactgcgc agcgtgggac atggatctca 300
gtgctc 306
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 130
caatctgtgc tgactcagct ggcctcagtg tctgggtcct tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacaaa tgacattggt attattggtg tgaactggta ccagcagctc 120
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gctgaggacg aggctgatta ttactgccag tccatggatt tcagcctcgg tggt 294
<210> 131
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 131
cagtctgtgc tgactcagcc agcctccgtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatt 60
tcctgcactg gaagcagctc caacgttggt tatagcagta gtgtgggctg gtaccagcag 120
ttcccaggaa caggccccag aaccatcatc tattatgata gtagccgacc ctcgggggtc 180
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caggctgagg atgaggctga ttattactgc tcatcttggg acaacagtct caaagctcc 299
<210> 132
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 132
caggctgtgc tgaatcagcc ggcctcagtg tctggggccc tgggccagaa ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacaaa tgacattgat atatttggtg tgagctggta ccaacagctc 120
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gctgaggacg aggctgatta ttactgtcag tctgttgatt ccacgcttgg tgctca 296
<210> 133
<211> 294
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 133
cagtctgtac tgactcaatc agcctcagcg tctgggtcct tgggccagag ggtctccgtc 60
tcctgctcta gcagcacaaa caacattggt attattggtg tgaagtggta ccagcagatc 120
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<210> 134
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 134
cagtctgtgc tgactcaacc agcctcagtg tccgggtctc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacattggt agagattatg tgggctggta ccaacagctc 120
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gatcgattct ctggctccaa gtcaggcagc acagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgctct acatgggaca acagtctcac tgttcc 296
<210> 135
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 135
cagtctatgc tgactcagcc agcctcagtg tctgggtccc tgggccagaa ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt ggtaattatg tgggctggta ccaacagctc 120
ccaggaatag gccctagaac cgtcatctat ggtaataatt accgaccttc aggggtcccc 180
gatcgattct ctggctccaa gtcaggcagt tcagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggacg aggctgagta ttactgctca tcatgggatg atagtctcag aggtca 296
<210> 136
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 136
caggctgtgc tgactcagcc gccctcagtg tctgcggtcc tgggacagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagcac caacattggc agtggttatg atgtacaatg gtaccagcag 120
ctcccaggaa agtcccctaa aactatcatc tatggtaata gcaatcgacc ctcaggggtc 180
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caggctgagg acgaggctga ttattactgc cagtcctctg atgacaacct cgatgatca 299
<210> 137
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 137
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tccgggtctc tgggccagag agtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcgat agaaaatatg ttggctggta ccaacagctc 120
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gctgaggacg aggctgatta ttactgctca acatacgaca gcagtctcag tagtgg 296
<210> 138
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 138
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcagt agatataatg tgaactggta ccaacagctc 120
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gctgaggatg aggctgatta ttactgctca acatacgaca ggggtctcag tgctcg 296
<210> 139
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 139
cagcctgtgc tgactcagcc gccctcaggg tctgggggcc tgggccagag gttcagcatc 60
tcctgttctg gaagcacaaa caacatcagt gattattatg tgaactggta ctaacagctc 120
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gctgaggatg aagctgatta ttactgctca tcctggggtg atagtctcaa tgctcc 296
<210> 140
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 140
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag gatcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacattgga ggtaataatg tgggttggta ccagcagctc 120
ccaggaagag gccccagaac tgtcatctat agtacaaata gtcgaccctc gggggtgccc 180
gatcgattct ctggctccaa gtctggcagc acagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggatg aggctgatta ttactgctca acgtgggatg atagtctcag tgctcc 296
<210> 141
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 141
cggtctgtgc tgactcagcc gccctcagtg tcgggatctg tgggccagag aatcaccatc 60
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cctgaggacg aggctgatta ttattgtcag tccattgaac ccatgcttgg tgctcc 296
<210> 142
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 142
caggctgtgc tgactccgct gccctcagtg tctgcggccc tgggacagac ggtcaccatc 60
tcttgtactg gaaatagcac ccaaatcagc agtggttatg ctgtacaatg gtaccagcag 120
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caggatgagg acgaggctga ttattactgc cagtccttag atgacaacct caatggtca 299
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 143
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt agatatagtg ttggctggtt ccagcagctc 120
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gatcgattct ctggctccaa gtcaggcagc acagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgctca acatacgaca gcagtctcag tagtag 296
<210> 144
<211> 295
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 144
cagtctgtgc tgacatagcc accctcagtg tctggggccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc aagcatgggt agttattatg tgagctggca caagcagctc 120
ccaggaacag gccccagaac catcatgtgt tgtaaaaaca tcgaccttcg ggaatctcca 180
atcaagtctc tggctcccat tctggcaaca cagccaccct gaccatcact gggctcctgg 240
ctgaggatga ggctgattat tactgttcaa catgggatga caatctcaat gcacc 295
<210> 145
<211> 294
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 145
cagtctgtgc tgactcagct gccctcagtg tctggggccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcagctc taaacttggg gcttatgctc tgaactagaa ccaacaattc 120
ccaggaacag attccaattt cctcatctat gatgatagta attgatcttt ctggatgcct 180
gattaattct gtggctccac atccagcagt tcaggctccc tgaccatcac tgggctctgg 240
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 146
cagtctgtgc tgactcagcc agcctcagtg tctggatccc tgggccaaag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcacaaa caacatcggt ggtgataatt atgtgcactg gtaccaacag 120
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catgctgagg acgaggctga tattattgcc agtcctacga tgacagcctc aatactca 298
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 147
cagtctgtgc tgactcagcc gccctcagtg tcaggatctg tgggccagag aatcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacaaa cagcattggt atacttggtg tgaactggta ccaactgctc 120
tcaggaaagg cccctaaact cctcgtagat ggtactggaa atcgaccctc aggggtccct 180
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cctgaggacg aggctgatta ttattgtcag tccattgaac ccatgcttgg tgctcc 296
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 148
cagtctgtcc tgactcagcc ggcctcagtg tctggggttc tgggccagag ggtcaccatc 60
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 149
cagtccatcc tgactcagca gccctcagtc tctgggtcac tgggccagag ggtcaccatc 60
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atctctggac tccaggctga ggacaagact gagtattact gctcagcatg ggatgatcgt 300
cttgatgctc a 311
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<400> 150
cagtctgtgc taactcagcc accctcagtg tcggggtcgc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacaaa caacatcagt attgttggtg cgagctggta ccaacagctc 120
ccaggaaagg cccctaaact cctcgtggac agtgatgggg atcgaccgtc aggggtccct 180
gaccgatttt ctggctctaa gtctggcaaa tcagccaccc tgaccatcac tgggcttcag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgtata ttggtcccac gctttgtgct ca 292
<210> 151
<211> 285
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 151
cagtctgtgc tgactcagcc actgttaggg cctggggccc tgggcagagg gtcaccctct 60
cctgacctgg aagagtccca gtattggtga ttatggtatg aaatggtaca agcagcttgc 120
aaggacagac cccagactcg tcatctatgg caatagcaat tgatcctcgg gtccccaatc 180
aattttctgg ctctggtttt ggcatcactg gctccttgac cacctctggg ctccagactg 240
aaaaataggc tgattactag tgcttctcca gtgatccagg cctgt 285
<210> 152
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 152
cagtctgtgc tgactcaacc ggcctccgtg tctgggtccc tgggccagag agtcaccatc 60
tcttgcacta gaagcagctc gaacgttggc tatggcaatg atgtgggatg gtaccagcag 120
ctcccaggaa caggccccag aaccatcatc tataatacca atactcgacc ctctggggtt 180
cctgatcgat tctctggctc caaatcaggc agcacagcca ccctgaccat ctctggactc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc tcttcctatg acagcagtct caatgctca 299
<210> 153
<211> 293
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 153
cagtctgtgc taactcagcc ggcctcagtg tctggttccc tgggtcagag ggtcaccatc 60
tgcactggaa gcagctccaa cattggtaca tatagtgtag gctggtacca acagctccca 120
ggatcaggcc ccagaaccat catctatggt agtagtaacc gaccgttggg ggtccctgat 180
cgattctctg gctccaggtc aggcagcaca gccaccctga ccatctctgg gctccaggct 240
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<210> 154
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 154
cagtctgtgc tgaatcagcc accttcagtg tctggatccc tgggccagag aatcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacgaa tgacatcggt atgcttggtg tgaactggta ccaacagctc 120
ccaggaaatg cccctaaact ccttgtagat ggtactggga atcgaccctc aggggtccct 180
gaccaatttt ctggctccaa atctggcaat tcaggcactc tgaccatcac tgggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttattgtcag tcctatgatc tcacgcttgg tgctcc 296
<210> 155
<211> 280
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 155
cagtccatga tgactcagcc accctcagtg tctgggtcac tgggccagag ggtcaccatc 60
tactgcactg gaatccctag caacactgat tatagtggat tggaaattta tacttatgtg 120
agctggtacc aacagtataa ggaaaggcac ccagtctcct catctatggg gatgataccg 180
gaaactctga ggtccctgat caattctctg gctccaggtc tggtagctca acctccctga 240
ccatctctgg actccaggct gaggatagtc ttaatgctca 280
<210> 156
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 156
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg actgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt ggatataatg ttggctggtt ccagcagctc 120
ccgggaacag gccccagaac cgtcatctat agtagtagta accgaccctc gggggtcccg 180
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gctgaggacg aggctgagta ttactgctca acatgggaca gcagtctcaa agctcc 296
<210> 157
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 157
cagtctgtgc tgactcaacc ggcctcagtg tccaggtccc tgggccagat agtcaccatc 60
tcttgcgctg gaagcagctc caacatccgt acaaaatatg tgggctggta ctaacagctc 120
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gctgaggacg aggcttatta ttactgctca acatatgaca gcagtctcag tgctct 296
<210> 158
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 158
cagtctgtgc tgactcaacc ggcctctgtg tctggggccc tgggccagag gtcaccatct 60
cctgcactag gagcagctcc aatgttggtt atagcagtta tgtgggctgg taccagcagc 120
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 159
cagtctatgc tgactcaccc tggccagagg atcaccctct cctgacctgg aagagtccca 60
gtattggtga ttatggtgtg aaatggtaca ggcagctagc aagaacagac cccagactcc 120
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<210> 160
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 160
cagtctgtgc tgactcagcc gacctcagtg tcgtggtccc tgggccagag ggtcacaatc 60
tcatgctcta gaagcacgaa taacatcggt attgtcgggg cgagctggta ccaacagctc 120
ccaggaaagg cccctaaact cctcgtggac agtgatgggg atcaactgtc aggggtccct 180
gaccgatttt ctggctccaa gtctggcaac tcagccaacc tgaccatcac tgggctccag 240
gctgaggaca aggctgatta ttactgccag tcctttgatc acacgcttgg tgctcg 296
<210> 161
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 161
cagtctgtgt tgagtcagcc agcctcagtg tctggggttc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt ggaaattacg tgagctggca ccagcaggtc 120
ccagaaacag gccccagaaa catcatctat gctgataact actgagcctc gggggtccct 180
gatggattct ctggctccaa gtaaggcagc acagccaccc cgaccatctc tgtgctccag 240
gctgaggatg aggctgatta ttactgctca gtgggggata atagtctcaa agcacc 296
<210> 162
<211> 293
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 162
cagtctgtgc tgactcagcc agcctcagtg tcggggtccc tgggccagag agtcaccatc 60
tcctgctctg gaaggacaaa catcggtagg tttggtgcta gctggtacca acagctccca 120
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 163
cagtctgtgc tgactcagcc actgttaggg cctggggccc tggccagagg ctcactctct 60
cctgccctgg aagagtccca gtattggtga ttatgatgtg aagtggtaca ggcagctcac 120
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 164
cagtctgtgc tgactcaacc ggcctctgtg tctggggccc tgggccagag gtcaccatct 60
cctgcactag gagcagctcc aatgttggtt atagcagtta tgtgggctgg taccagcagc 120
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<210> 165
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 165
caggctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caatgttggt tatggcaatt atgtgggctg gtaccagcag 120
ctcccaggaa caggccccag aaccctcatc tatggtagta gttaccgacc ctcgggggtc 180
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<210> 166
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 166
cagtctgtgc tgactcagcc agcctcagcg tctgggtcct tgggccagag ggtcactgtc 60
tcctgctcta gcagcacaaa caacatcggt attattggtg tgaagtggta ccagcagatc 120
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ggtgaggacg aggctgatta ttattgccag tccatggatt tcagcctcgg tggtca 296
<210> 167
<211> 314
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 167
cagtctgtgc tgactcagcc agcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaatccccag caacacagat tttgatggaa tagaatttga tacttctgtg 120
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accatctctg ggctccaggc tgaggacgag gctgattatt actgctcatc ctgggatgat 300
agtctcaaat cata 314
<210> 168
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 168
cagtctgtgc tgactcagcc agcctcagtg tctggatccc tgggccaaag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcacaaa caacatcggt ggtgataatt atgtgcactg gtaccaacag 120
ctcccaggaa aggcacccag tctcctcatc tatggtgatg ataacagaga atctggggtc 180
cctgaacgat tctctggctc caagtcaggc agctcagcca ctctgaccat cactgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattattgc cagtcctacg atgacagcct caatactca 299
<210> 169
<211> 289
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 169
cagtctgtgc tgactcagcc gccctcagtg tcgggatctg tgggccagag aatcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacaaa cagctaccaa cagctctcag gaaaggcctc taaactcctc 120
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ggcaactcag gcactctgac catcactggg cttgggacga ggctgaggac gaggctgagg 240
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<210> 170
<211> 292
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 170
caggccgccc tgggcaatga gttcgtgcag gtcaaggctg agacagacct gcagaattca 60
ggtttgtctg agacacagct catcagatgt gtgcagtgtg tgtcctggta ccaacggctc 120
ccatgaatgg gtcctaaatc cttatctaga aataacattt agatcacttt gtggcccgga 180
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tgaagatgga gctgctcttc acaggccctc ttgggacaaa attcttgggg ct 292
<210> 171
<211> 309
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 171
cagtccatcc tgactcagcc gccctcagtc tctgggtcac tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcaatg gaatccctga cagcaatgat tatgatgcat gaaaattcat acttacgtga 120
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<210> 172
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 172
cagtctgtac tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt ggatattatg tgagctggct ctagcagctc 120
ccgggaacag gccccagaac catcatctat agtagtagta accgaccttc aggggtccct 180
gatcgattct ctggctccag gtcaggcagc acagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggatg aggctgatta ttactgttca acatacgaca gcagtctcaa agctcc 296
<210> 173
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 173
cttcctgtgc tgacccagcc accctcaagg tctgggggtc tggttcagaa gatcaccatc 60
ttctgttctg gaagcacaaa caacatgggt gataattatg ttaactggta caaacagctt 120
ccaggaacgg cccctaaaac catcatctaa gtggatcata tcagaccctc aggggtcctg 180
gagagattct ctgtctccaa ttctggcagc tcagccaacc tgaccatctc tgggctccag 240
gatgaggact aggctgatta ttattgctca tcctggcatg atagtctcag tgctcc 296
<210> 174
<211> 295
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 174
caggctgtgc tgactcagct gccctcagtg tctgcagccc tgggacagag ggtcaccatc 60
tgcactggaa gcagcaccaa catcggcagt ggttattata cactatggta ccagcagctg 120
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ctgaggacga ggatgattat tactgccagt cctctgatga caacctcgat ggtca 295
<210> 175
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 175
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcggtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caatgttggt tatggcaatt atgtgggctg gtaccagcag 120
cttccaggaa caggccccag aaccattatc tgttatacca atactcgacc ctctggggtt 180
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<210> 176
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 176
cagtctgtgc tgactcagcc tccctcagtg tccgggttcc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt agaggttatg tgcactggta ccaacagctc 120
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<210> 177
<211> 285
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 177
cagtctgtgc tgactcagcc actgttaggg cctgggttcc tggccagagg gtcaccctct 60
cctgccctgg aagagtctca gttttggtga ttatggtgtg aaacggtaca ggaagctcgc 120
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 178
cagtctgcgc tgactcaaac ggcctccatg tctgggtctc tgggccagag ggtcaccgtc 60
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 179
cagtctgtgc tgaatcagct gccttcagtg ttaggatccc tgggccagag aatcaccatc 60
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<400> 180
cagtctgtgc tgactcagcc tccctcagtg ttcaggtccc tgggccagag ggtcactata 60
tcctgcactg gaagcagctc caacgtcggt agaggttatg tgatctggta ccaacagctc 120
ctgggaacac gcccaagaac cctcatatat ggtagtagta accaaccctc aggggtcccc 180
aatcaattct ctggctccag gtcaggcagc acagacactc tgacaatctc tgggttccag 240
gctgaggatg aggctgatta ttactgctca tcctgggaca gcagtctcag tgctct 296
<210> 181
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 181
cagtctgtgc tgactcaacc agtctcagtg tctggggccc tgtgccagag ggtcaccatc 60
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 182
cagtctgtgc tgactcagcc gacctcagtg tcggggtccc ttggccagag ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacgaa caacatcggt attgttggtg cgagctggta ccaacagctc 120
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 184
cagtctgtgc tgactcaacc ggcctccgtg tctggggcct tgggccagag ggtcaccatc 60
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 185
caggctgtgc tgactcagcc accctctgtg tctgcagccc tggggcagag ggtcaccatc 60
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<211> 293
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 186
cagtctgtgc tgactcagcc agcttcagtg tctgggtccc tgggccagag gatcaccatc 60
tcctgcacta aaagcagctc caacatcggt aggtattatg tgagctgaca acagctccca 120
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<400> 187
cagtctgtgt tgactcaacc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcatcatc 60
tcctgcactg gaagcagctc cagcattggc agaggttatg tgggctggta ccaacagctc 120
ccaggaacag gccccagaac cctcatctat ggtattagta acctaccccc gggagtcccc 180
aatagattct ctggttcgag gtcaggcagc acagccaccc tgaccatcgc tgagctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgctca tcgtgggaca gaagtctcag tgctcc 296
<210> 188
<211> 297
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 188
caggctgtgc tgactcagcc cgccctcagt gtctgcggcc ttgggacaga gggtcaccat 60
ctcctgcact ggaagcagca ccaacatcag cagtggttac gttgtacaat ggtaccagca 120
gctcccagga aagtccccta aaacaatcta tggtactagc aagtgaccct tggggatccc 180
ggttcaattc tctggctcca agtcaggcag cacagccacc ctgaccatca ctggtatcta 240
ggctgaggac gaggctgatt attactgcca atcctatgat gacaacctcg atggtca 297
<210> 189
<211> 300
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 189
caggctgtac ggaatcaacc gccctcagag tctgcagccc tgggacagag agtcaccatc 60
tcctgcacgg gaagcagatc caacattggc agtggttatg ctgtacaatg gtaccaacgg 120
ctcacaggaa agtctcctta aaactatcat ctatggtaat agcaatcaac cctcgggggt 180
cctggatcaa ttctctggct ccaagtgagg cagcacagcc accctgacca tcactgggat 240
ccagtctgag gacgaggctg attattactg ccagtcctat gatagaagtc tctgtgctca 300
<210> 190
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 190
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggcctgag ggtcaccatc 60
tgctgcactg gaagcagctc caacatcagt agttattatg tgggctggta ccaaccactc 120
gcgggaacag gccccagaac tgtcatctat gataatagta accgtccctc gggggtccct 180
gatcaattct ctggctccaa gtcaggcagc acagccaccc tgaccatctc tcggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttacggctca tcatatgaca gcagtctcaa tgctgg 296
<210> 191
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 191
cagtctgtgc tgactcagcc agcctcagtg tctcagtccc tgggtcagag ggtcaccatc 60
tcctgtactg gaagcagctc caatgttggt tataacagtt atgtgagctg gtaccagcag 120
ctcccaggaa cagtccccag aaccatcatc tattatacca atactcgacc ctatggggtt 180
cctgatcgat tctctggctc caaatcaggc aactcagcca ccctgaccat tgctggactc 240
caggctgagg acgaggctga ttattattgc tcaacatatg acagcagtct cagtggtgc 299
<210> 192
<211> 293
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 192
cagtctgtgc tgaatcagac gccctcagtg tcggggtccc tgggccagag agtcgccatc 60
tcctgctctg gaagcacaaa catcagtagg tttggtgcga gctggtaaca acagctcctg 120
ggaaaggctt caaaactcct cctagacagt gatggggatc aaccatcagt ggtccctgac 180
tgattttccg gctccaagtc tggcaactca ggtgccctga ccatcactgg gctccaggct 240
gaggacgagg ctgattatta ctgccagtcc tttgatccca cacttggtgc tca 293
<210> 193
<211> 293
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 193
caggctttgc tgactcagcc accctcagtg tctgaggccc tgggacagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagcac caacatcggc agtggttatg atgtacaatg gtaccagcag 120
ctcccaggaa agtcccctca aactatcgta tacggtaata gcaattgacc ctcgggggtc 180
ccagatcaat tctctggctc caagtctcac aattcagcca ccctgaccat cactgggctc 240
cagactgagg acgaggctga ttattactgc cagtcctctg atgacaacct cga 293
<210> 194
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 194
cagtctgtgc tgactcagcc agcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt agatatagtg taggctgata ccagcagctc 120
ccgggaacag gccccagaac tgtcatctat ggtagtagta gccgaccctc gggggtcccc 180
gatcgattct ctggctccaa gtcaggcagc acagccaccc tgaccatctc agggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgttca acatacgaca gcagtctcaa agctcc 296
<210> 195
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 195
cagcctgtgc tcactcagcc gccctcagtg tctgggttcc tgggacagag ggtcactatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcctt ggtaattctg tgaactggta ccagcagctc 120
acaggaagag gccccagaac cgtcatctat tatgataaca accgaccctc tggggtccct 180
gatcaattct ctggctccaa gtcaggcaac tcagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggacg agactgatta ttactgctca acgtgggaca gcaggctcag agctcc 296
<210> 196
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 196
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg aaagcagctc caacatcggt ggatattatg tgggctggta ccaacagctc 120
ccaggaacag gccccagaac catcatctat agtagtagta accgaccctc aggggtccct 180
gattgattct ctggctccag gtcaggcagc acagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgctct acatgggaca gcagtctcaa agctcc 296
<210> 197
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 197
ctgcctgtgc tgacccagcc gccctcaagg tctgggggtc tggttcagag gttcaccatc 60
ttctgttctg gaagcacaaa caacataggt gataattatt ttaactggta caaacagctt 120
ccaggaacgg cccctaaaac catcatctaa gtggatcata tcagaccctc aggggtcctg 180
gagagattct ctgtctccaa ttctggcagc tcagccaacc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggact aggctgatta ttattgctca tcctgggatg atagtctcaa tgctcc 296
<210> 198
<211> 295
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 198
caggctgtgc tgactcagct gccctcagtg tctgcagccc tgggacagag ggtcaccatc 60
tgcactggaa gcagcaccaa catcggcagt ggttattata cactatggta ccagtagctg 120
caggaaagtc ccctaaaact atcatctatg gtaatagcaa tcgacccttg agggtcccgg 180
atcgattctc tggctccaag tatggcaatt cagccacgct gaccatcact gggctccagg 240
ctgaggacga ggatgattat tactgccagt cctctgatga caacctcgat ggtca 295
<210> 199
<211> 292
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 199
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggtcagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt gaatattatg tgagttggct ccagcagctc 120
ccgggaacac gccccagaac cgtcatctat agtagtagta accgaccctc aggggtccct 180
gatcgattct ctggctccaa gtcaggtagc atagccaccc tatctctggg ctccaggctg 240
aagacgaggc tgattattac tgtactacgt gggacagcag tctcaatgct gg 292
<210> 200
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 200
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tccgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt agaggttatg tgggctggta ccaacagctc 120
ccgggaacag gccccagaac cctcatctat ggtaatagta accgaccctc aggggtcccc 180
gatcggttct ctggctccag gtcaggcagc acagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggatg aggctgatta ttactgctca tcgtgggaca gcagtctcag tgctct 296
<210> 201
<211> 295
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 201
cagtctgtgc tgactcagcc tccctcagtg tctgggtccc tgggccagag gtcaccgtct 60
cctgcactgg aagctgcttc aacattggta gatatagtgt gagctggctc cagcagctcc 120
cgggaacagg ccccagaacc atcatctatt atgatcgtag ccgaccctca ggggttcccg 180
atcgattctc tggctccaag tcaggcagca cagccaccct gaccatctct gggctccagg 240
ctgaggacga ggctgattat tactgctcat cctatgacag cagtctcaaa ggtca 295
<210> 202
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 202
cagtctgtgc tgactcaacc agtctcagtg tctggggccc tgtgccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacattggt tatagcagct gtgtgagctg atatcagcag 120
ctcccaggaa caggccccag aaccatcatc tatagtatga atactctacc ctctggggtt 180
cctgatcgat tgtctggctc caggtcaggc aactcagcca ccctaaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acaaggctga ctattactgc tcaacatatg acagcagtct caatgctca 299
<210> 203
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 203
cagtctgtgc tgacccagct ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
acctgcactg gaagcagctc caacattggt agtgattatg tgggctggtt ccaacagctc 120
ccaggaacag gccctagaac cctcatctaa ggcaatagta accgaccctc gggggtccct 180
gatcaattct ctggctccaa gtctggcagt acagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggatg atgctgatta ttactgcaca tcatgggata gcagtctcaa ggctcc 296
<210> 204
<211> 312
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 204
cagtctgtgc tgactcagcc tccctcagtg tctgggaccc tggggcaaag ggtcatcatc 60
tcctgcactg gaatccccag caacataaat ttagaagaat tgggaatcgc tactaaggtg 120
aactggtacc aacagctccc aggaaaggca cccagtctcc tcatctatga tgatgatagc 180
agaggttctg ggattcctga tcgattctct ggctccaagt ctggcaactc aggcaccctg 240
accatcactg ggctccaggc tgaggatgag gctgattatt attgccaatc ctatgatgaa 300
agccttggtg tt 312
<210> 205
<211> 295
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 205
cagtctgtgc tgactcagcc tccctcagtg ttcaggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacgtcggt agaggttatg tgatctggta ccaaagctcc 120
tgggaacacg cccaagaacc ctcatatatg gtagtagtaa ccaaccctca ggggtcccca 180
atcgattctc tggctccagg tcaggcagca cagacactct gacaatctct gtgttccagg 240
ctgaggatga ggctgattat tactgctcat cctgggacag cagtctcagt gctct 295
<210> 206
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 206
cagtctgtgc tgaatcagct gccttcagtg ttaggatccc tgggccagag aatcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacgaa tgacatcggt atgcttggtg tgaactggta ccaagagctc 120
ccaggaaagg cccctaaact cctcgtagat ggtactggga atcgaccctc aggggtccct 180
gaccgatttt ctggctccaa atctggcaac tcaggcactc tgaccatcac tgggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttattgtcag tccactgatc tcacgcttgg tgctcc 296
<210> 207
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 207
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt agaggttatg tgggctggta ccagcagctc 120
ccaggaacag gccccagaac cctcatctat gatagtagta gccgaccctc gggggtccct 180
gatcgattct ctggctccag gtcaggcagc acagcaaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgctca gcatatgaca gcagtctcag tggtgg 296
<210> 208
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 208
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caatgttggt tatggcaatt atgtgggctg gtaccagcag 120
ctcccaggaa caagccccag aaccctcatc tatgatagta gtagccgacc ctcgggggtc 180
cctgatcgat tctctggctc caggtcaggc agcacagcaa ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg atgaagccga ttattactgc tcatcctatg acagcagtct cagtggtgg 299
<210> 209
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 209
caggctgtgc tgactccgct gccctcagtg tctgcggccc tgggacagac ggtcaccatc 60
tcttgtactg gaaatagcac ccaaatcagc agtggttatg ctgtacaatg gtaccagcag 120
ctcccaggaa agtcccctga aactatcatc tatggtgata gcaatcgacc ctcgggggtc 180
ccagatcgat tctctggctt cagctctggc aattcagcca cactggccat cactgggctc 240
caggatgagg acgaggctga ttattactgc cagtccttag atgacaacct caatggtca 299
<210> 210
<211> 298
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 210
cagtctgtgc tgactcaacc ggcctccgtg tctggggact tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caattttggt tatagcagct atgtgggctt gtaccagcag 120
ctcccaggaa caggccccag aaccatcatc tataatacca atactcgacc ctctggggtt 180
cctgatcgat tctctggctc caaatcaggc agcacagcca cctgaccatt gctggacttc 240
aagctgagga cgaggctgat tattactgct catcctatga cagcagtctc aaagctcc 298
<210> 211
<211> 279
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 211
cagtctgtac tgactcagcc gccattagtg cttggggccc tggccagagg gtcaccttct 60
cctgccttgg aagagtccca gtattggtga ttatggtgtg aaatggtaca agcagctcaa 120
aaggacagac cccagacttc tcatctatgg caatagcaat tgatcctcgg gtccccaatc 180
aattttctgg ctctggtttt ggcatcactg gctccttgac cacctatggg ctccagactg 240
aaaaataggc tgattactag tgcttctccg gtgatccag 279
<210> 212
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 212
cagtctgtgc tgactcagcc gacctcagtg tcggggtccc ttggccagag ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacgaa caacatcggt attgttggtg cgagctggta ccaacagctc 120
ccaggaaagg cccctaaact cctcgtgtac agtgttgggg atcgaccgtc aggggtccct 180
gaccggtttt ccggctccaa ctctggcaac tcagccaccc tgaccatcac tgggcttcag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgccag tcctttgata ccacgcttgg tgctca 296
<210> 213
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 213
cagtctgtgc tgactcaacc agtctcagtg tctggggccc tgtgccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacattggt tatagcagct gtgtgagctg atatcagcag 120
ctcccaggaa caggccccag aaccatcatc tatagtatga atactctacc ctctggggtt 180
cctgatcgat tgtctggctc caggtcaggc aactcagcca ccctaaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acaaggctga ctattactgc tcaacatatg acagcagtct caatgctca 299
<210> 214
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 214
cagtctgtgc tgactcagcc tccctcagtg ttcaggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctg caacgtcggt agaggttatg tgatctggta ccaacagctc 120
ctgggaacac gcccaagaac cctcatatat ggtagtagta accaaccctc aggggtcccc 180
aatcgattct ctggctccag gtcaggcagc acagccactc tgacaatctc tgggttccag 240
gctgaggatg aggctgatta ttactgctca tcctgggaca gcagtctcag tgctct 296
<210> 215
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 215
cagtctgtgc tgaatcagct gccttcagtg ttaggatccc tgggccagag aatcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacgaa tgacatcggt atgcttggtg tgaactggta ccaagagctc 120
ccaggaaagg cccctaaact cctcgtagat ggtactggga atcgaccctc aggggtccct 180
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gctgaggacg aggctgatta ttattgtcag tccactgatc tcacgcttgg tgctcc 296
<210> 216
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 216
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt agaggttatg tgggctggta ccagcagctc 120
ccaggaacag gccccagaac cctcatctat gataatagta accgaccctc gggggtccct 180
gatcgattct ctggctccaa gtcaggcagc acagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgctca acatacgaca gcagtctcag tggtgg 296
<210> 217
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 217
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caatgttggt tatggcaatt atgtgggctg gtaccagcag 120
ctcccaggaa caggccccag aaccctcatc tatcgtagta gtagccgacc ctcgggggtc 180
cctgatcgat tctctggctc caggtcaggc agcacagcaa ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg atgaagccga ttattactgc tcatcctatg acagcagtct cagtggtgg 299
<210> 218
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 218
caggctgtgc tgactccgct gccctcagtg tctgcggccc tgggacagac ggtcaccatc 60
tcttgtactg gaaatagcac ccaaatcggc agtggttatg ctgtacaatg gtaccagcag 120
ctcccaggaa agtcccctga aactatcatc tatggtgata gcaatcgacc ctcgggggtc 180
ccagatcgat tctctggctt cagctctggc aattcagcca cactggccat cactgggctc 240
caggatgagg acgaggctga ttattactgc cagtccttag atgacaacct cgatggtca 299
<210> 219
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 219
cagtctgcgc tgactcaaac ggcctccatg tctgggtctc tgggccagag ggtcaccgtc 60
tcctgcactg gaagcagttc caacgttggt tatagaagtt atgtgggctg gtaccagcag 120
ctcccaggaa caggccccag aaccatcatc tataatacca atactcgacc ctctggggtt 180
cctgatcgat tctctggctc catatcaggc agcacagcca ccctgactat tgctggactc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc tcatcctatg acagcagtct caaagctcc 299
<210> 220
<211> 266
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 220
cagtctgtgc tgactcagcc actgttaggg cctgggttcc tggccagagg gtcaccctct 60
cctgccctgg aagagtctca gttttggtga ttatggtgtg aaacggtaca ggaagctcgc 120
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<210> 221
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 221
caatctgtgc tgatccagcc ggcctcagtg tcgggatccc tgggccagag agtcaccatc 60
tcctgctctg gaaggacaaa caacatcggt aggtttggtg cgagctggta ccaacagctc 120
ccaggaaagg cccctaaact cctcgtggac agtgatgggg attgaccgtc aggggtccct 180
gaccggtttt ccggctccag gtctggcagc tcagccaccc tgaccatcac tggggtccag 240
gctgaggatg aggctgatta ttactgccag tcctttgatc ccacgcttgg tgctca 296
<210> 222
<211> 309
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 222
cagtctgtgc tgactcaacc gtcctcagtg tccgggtccc tgggccagag ggtcactgtc 60
ccctgcactg gaagcagctc caacattggt agatatagtg tgagctggct atatctgctg 120
gctccagcag ctcccgggaa caggccccag aaccatcatc tattatgatt gtagccgacc 180
ctcaggggtt cccgatcgat tctctggctc caagtcaggc agcacagcca ccctgaccat 240
ctctgggctc caggctgagg acgaggctga ttattactgc tcatcctatg acagcagtct 300
caaaggtca 309
<210> 223
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 223
cagtctgtgc tgactcagcc tccctcagtg tccgggttcc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt agaggttatg tgcactggta ccaacagctc 120
ccaggaacag gccccagaac cctcatctat ggtattagta accgaccctc aggggtcccc 180
gatcgattct ctggctccag gtcaggcagc acagccactc tgacaatctc tgggctccag 240
gctgaggatg aggctgatta ttactgctca tcctgggaca gcagtctcag tgctct 296
<210> 224
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 224
cagtctgtgc tgactcagcc ggcctcagtg tctgggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacatcggt agaggttatg tgggctggta ccagcagctc 120
ccaggaacag gccccagaac cctcatctat gataatagta accgaccctc gggggtccct 180
gatcgattct ctggctccaa gtcaggcagc acagccaccc tgaccatctc tgggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgctca acatacgaca gcagtctcag tggtgg 296
<210> 225
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 225
cagtctgtgc tgaatcagct gccttcagtg ttaggatccc tgggccagag aatcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacgaa tgacatcggt atgcttggtg tgaactggta ccaagagctc 120
ccaggaaagg cccctaaact cctcgtagat ggtactggga atcgaccctc aggggtccct 180
gaccgatttt ctggctccaa atctggcaac tcaggcactc tgaccatcac tgggctccag 240
gctgaggacg aggctgatta ttattgtcag tccactgatc tcacgcttgg tgctcc 296
<210> 226
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 226
cagtctgtgc tgactcagcc tccctcagtg ttcaggtccc tgggccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctg caacgtcggt agaggttatg tgatctggta ccaacagctc 120
ctgggaacac gcccaagaac cctcatatat ggtagtagta accaaccctc aggggtcccc 180
aatcgattct ctggctccag gtcaggcagc acagccactc tgacaatctc tgggttccag 240
gctgaggatg aggctgatta ttactgctca tcctgggaca gcagtctcag tgctct 296
<210> 227
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 227
cagtctgtgc tgactcaacc agtctcagtg tctggggccc tgtgccagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg gaagcagctc caacattggt tatagcagct gtgtgagctg atatcagcag 120
ctcccaggaa caggccccag aaccatcatc tatagtatga atactctacc ctctggggtt 180
cctgatcgat tgtctggctc caggtcaggc aactcagcca ccctaaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acaaggctga ctattactgc tcaacatatg acagcagtct caatgctca 299
<210> 228
<211> 292
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 228
caaggtcagc tgccctgagg acagagtcca tgacaggtca gggcagaaac agggactctg 60
aatccagctc tgagtcagga cacatcagga gtgtccaata tgtgtcctgc taccaacagc 120
tccatgagtg ggcagtcaaa tcctcatgta ttatgatggc ttgaccttct gtggaccctg 180
gtccattctc tgcctccatg tctggcagct ctggctctct ggccattgct gggctgagcc 240
aggaggatga ggtcatgctt cactgcccct ccagtgacag catttcaagg at 292
<210> 229
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 229
cagtctgtgc tgactcagcc gacctcagtg tcggggtccc ttggccagag ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacgaa caacatcggt attgttggtg cgagctggta ccaacagctc 120
ccaggaaagg cccctaaact cctcgtgtac agtgatgggg atcgaccgtc aggggtccct 180
gaccggtttt ccggctccaa ctctggcaac tcagacaccc tgaccatcac tgggcttcag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgccag tcctttgata ccacgcttga tgctca 296
<210> 230
<211> 297
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 230
cagtctgccc tgactcaacc ttcctcggtg tctgggactt tgggccagac tgtcaccatc 60
tcctgtgatg gaagcagcag taacattggc agtagtaatt atatcgaatg gtaccaacag 120
ttcccaggca cctcccccaa actcctgatt tactatacca ataatcggcc atcagggatc 180
cctgctcgct tctctggctc caagtctggg aacacggcct ccttgaccat ctctgggctc 240
caggctgaag atgaggctga ttattactgc agcgcatata ctggtagtaa tactttc 297
<210> 231
<211> 297
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 231
cagtctaacc taattgagcc cccctttttg tccaggattc taggatggac tgtcactgtc 60
tcctgtgttt taagcagctg tgacatcagg agtgataatg aaatatcctg gtaccaatag 120
cacccgagca tgactcagaa attcctgatt tactatacca gttcttgggc atcagatatc 180
cctgattgct ttcctggctc ccagtctgga aacatggcct gtctgaccat ttccaggctc 240
caggctaatg atgacgctga ttatcattgt tacttatatg atggtagtgg cgctttt 297
<210> 232
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 232
cagtctgccc tgactcagcc tccctcgatg tctgggacac tgggacagac catcatcatt 60
tcctgtactg gaagcggcag tgacattggg aggtatagtt atgtctcctg gtaccaagag 120
ctcccaagca cgtcccccac actcctgatt tatggtacca ataatcggcc attagagatc 180
cctgctcgct tctctggctc caagtctgga aacacagccc ccatgaccat ctctgggctt 240
caggctgaag atgaggctaa ttattactgt tgctcatata caaccagtgg cacaca 296
<210> 233
<211> 286
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 233
cagtctgcct tgacccaacc tccctttgtg tctgggactt tgagacaaac tgtcacatct 60
cttgcaatgg aagcagcagc cacactggaa cttataaccc tacctctggc accagcaatg 120
tctggaaagg cccccacact ccagatagat gctgtgagtt ctttgccttc agggcttcca 180
gctctgtcct caggctctga gtctagcaac acagcctcca gtccattttt ggactgcacc 240
ctgaggacaa ggctgattat tactgattgt ccagggacag ccagag 286
<210> 234
<211> 284
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 234
gccaacaagc tgactcaatc cctgtttatg tcagtggccc tgggacagat ggccaggatc 60
acctgtggga gagacaactc tggaagaaaa agtgctcact ggtaccagca gaagccaagc 120
caggctcccg tgatgcttat cgatgatgat tgcttccagc cctcaggatt ctctgagcaa 180
ttctcaggca ctaactcggg gaacacagcc accctgacca ttagtgggcc cccagcgagg 240
acgcggctat tactgtgcca ccagccatgg cagttggagc acct 284
<210> 235
<211> 284
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 235
tccaatgtac tgacacagcc acccttggtg tcagtgaacc tgggacagaa ggccagcctc 60
acctgtggaa gaaacagcat tgaagataaa tatgtttcat ggtcccagca ggagccaggc 120
caggccccca tgctggtcat ctattatagt acacaagaaa ccctgagcga ttttctgcct 180
ccagctctag ctcggggtac atgatcaccc tgaccaacag tggggcctag gacaaggacg 240
aggatggcta ttactgtcag tcctatgaca gtagtggtac tcct 284
<210> 236
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 236
tcctatgtgc tgactcagtc accctcagtg tcagtgaccc tgggacagac ggccagcatc 60
acctgtaggg gaaacagcat tggaaggaaa gatgttcatt ggtaccagca gaagccgggc 120
caagcccccc tgctgattat ctataatgat aacagccagc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggga ccaactcagg gagcacggcc accctgacca tcagtgaggc ccaaaccaac 240
gatgaggctg actattactg ccaggtgtgg gaaagtagcg ctgatgct 288
<210> 237
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 237
tcctatgtgc tgacacagct gccatccaaa aatgtgaccc tgaagcagcc ggcccacatc 60
acctgtgggg gagacaacat tggaagtaaa agtgttcact ggtaccagca gaagctgggc 120
caggcccctg tactgattat ctattatgat agcagcaggc cgacagggat ccctgagcga 180
ttctccggcg ccaactcggg gaacacggcc accctgacca tcagcggggc cctggccgag 240
gacgaggctg actattactg ccaggtgtgg gacagcagtg ctaaggct 288
<210> 238
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 238
tccactgggt tgaatcaggc tccctccatg ttggtggccc tgggacagat ggaaacaatc 60
acctgctccg gagatatctt agggaaaaga tatgcatatt ggtaccagca taagccaagc 120
caagcccctg tgctcctaat caataaaaat aatgagcggg cttctgggat ccctcactgg 180
ttctctggtt ccaactcggg caacatggcc accctgacca tcagtggggc ccgggctgag 240
gacgaggctg actattactg ccagtcctat gacagcagtg gaaatgct 288
<210> 239
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 239
tcctatgtgc tgactctgct gctatcagtg accgtgaacc tgggacagac caccagcatc 60
acctgtggtg gagacagcat tggagggaga actgtttact ggtaccagca gaagcctggc 120
cagcgccccc tgctgattat ctataatgat agcaattgac cctcagggat ccctgcctga 180
ttctctggct ccaactcagg gaacagggcc tccctaacca tcattggggc ctgggcctaa 240
gacgagtctg agtattacgg agaggtgtgg gacagcagtg ctaaggct 288
<210> 240
<211> 283
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 240
tcctatatgc tgactcagca gccattggca agtgtaaacc tcagccagtg ggccagcacc 60
acctgtggtg gagataacat tggagaaaaa accgtccaat ggaaccagca gaagcctggc 120
taagctccca ttacggctat ctataaaggt agtgatctgc cctcagggat ccctgagcaa 180
ttccctggcc ccaatttggg gaacggggcc tccctgaaca tcagcggggc taagccgacg 240
acgaggctat tactgccagt cagcagacat tagtggtaag gct 283
<210> 241
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 241
tcctatgtgc tgacacagct gccatccgtg agtgtgaccc tgaggcagac ggcccgcatc 60
acctgtgggg gagacagcat tggaagtaaa agtgtttact ggtaccagca gaagctgggc 120
caggcccctg tactgattat ctatagagat agcaacaggc cgacagggat ccctgagcga 180
ttctctggcg ccaactcggg gaacacggcc accctgacca tcagcggggc cctggccgag 240
gacgaggctg actattactg ccaggtgtgg gacagcagta ctaaggct 288
<210> 242
<211> 287
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 242
tccactgggt tgaatcaggc tccctccgtg ttgctggcac tgggacagat ggcaacaatc 60
acctgatcca gagatgtctt tgggaaaaat atgcatattg gtaccagcag aagccaagcc 120
aagcccctgt gctcctaatc aataaaaata atgagcagga ttctgggatc cctgaccggt 180
tctctggctc caactcgggc aacacggcca ccctgaccat cagtggggcc cgggccgagg 240
acgaggctga ctattactgc cagtcctatg acagcagtgg aaatgtt 287
<210> 243
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 243
tcctatgtgc tgtctcagcc gccatcagcg actgtgactc tgaggcagac ggcccgcctc 60
acctgtgggg gagacagcat tggaagtaaa agtgttgaat ggtaccagca gaagccgggc 120
cagccccccg tgctcattat ctatggtgat agcagcaggc cgtcagggat ccctgagcga 180
ttctccggcg ccaactcggg gaacacggcc accctgacca tcagcggggc cctggccgag 240
gacgaggctg actattactg ccaggtgtgg gacagcagta ctaaggct 288
<210> 244
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 244
tcctatgtac tgactcagct gccatcagtg actgtgaacc tgggacagac caccagcatc 60
acctgtggtg gagacagcat tggagggaga actgtttact ggtaccagca gaagcctggc 120
cagcgccccc tgctgattat ctataatgat agcaattggc cctcagagat ccctgcctga 180
ttctctggct ccaactcagg gaacagggcc tccctaacca tcattggggc ctgggcctaa 240
gatgagtctg agtattacgg agaggtgtgg gacagcagtg ctaaggct 288
<210> 245
<211> 281
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 245
tcctatatgc tgactcagca gccattggca agtgtaaacc tcagccagtg ggccagcacc 60
acctgtggtg gagataacat tggagagaaa actgtccaat ggaaccagca gaagcctggc 120
taagctctca ttatggctat ctataaaggt agtgatctac cctcagggat ccctgagcaa 180
ttccctggcc ccaactcggg tcggggcctc cctgaacatc agcggggcta cgccgacgac 240
taggctatta ctgccagtca gcagacatta gtggtaaggc t 281
<210> 246
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 246
tcctatgtgc tgacacagct gccatccatg agtgtgaccc tgaggcagac ggcccgcatc 60
acctgtgagg gagacagcat tggaagtaaa agagtttact ggtaccagca gaagctgggc 120
caggtccctg tactgattat ctatgatgat agcagcaggc cgtcagggat ccctgagcga 180
ttctccggcg ccaactcggg gaacacagcc accctgacca tcagcggggc cctggccgag 240
gacgaggctg actattactg ccaggtgtgg gacagcagta ctaaggct 288
<210> 247
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 247
tccactgggt tgaatcaggc tccctccgtg ttggtggccc tgggacagat ggaaacaatc 60
acctgctcga gagatgtctt agggaaaaga tatgcatata ggtaccagca taagccaagc 120
caagcccctg tgctcctaat caataaaaat aatgagcagg attctgggat ccctgaccgg 180
ttctctggct ccaactcggg caacacggcc accctgacca tcagtggggc ccgggctgag 240
gacgaggctg agtattactg ccagtcctat gacagcagtg gaaatgtt 288
<210> 248
<211> 286
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 248
tcctatgtgc tgacacagct gccatccgtg aatgtgaccc agaggcagac ggcccgcatc 60
acctgtgggg gagacagcat tggaagtaaa agtgtttact ggtaccagca gaagctgggc 120
caggcccctg ttgattatct atagagacag caacaggccg acagggatcc ctgagcgatt 180
ctctggcgcc aacacgggga acatggccac cctgactatc agcggggccc tggccgtgga 240
cgaggctgac tattactgcc aggtgtggga cagcagtgct aaggct 286
<210> 249
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 249
tcccctgggc tgaatcagcc tccctccgtg ttggtggccc tgggacagat ggcaacaaac 60
acctgctccg gagatgtctt agggaaaaga tatgcatatt ggtaccagca taagccaagc 120
caagcccctg tgctcctaat caataaaaat aatgagctgg gttctgggat ccctgaccga 180
ttctctggct ccaactcggg caacacggcc accctgacca tcagtggggc ccgggccgag 240
gacgaggctg actattactg ccagtcctat gacagcagtg gaaatgct 288
<210> 250
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 250
tcctatgagc tgactcagcc accatccgtg aatgtgaccc tgagggagac ggcccacatc 60
acctgtgggg gagacagcat tggaagtaaa tatgttcaat ggatccagca gaatccaggc 120
caggcccccg tggtgattat ctataaagat agcaacaggc cgacagggat ccctgagcga 180
ttctctggcg ccaactcagg gaacacggct accctgacca tcagtggggc cctggccgaa 240
gacgaggctg actattactg ccaggtgggg gacagtggta ctaaggct 288
<210> 251
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 251
tcctatgtac tgactcagct gccatcagtg actgtgaacc tgggacagac caccagcatc 60
acctgtggtg gagacagcat tggagggaga actgtttact ggtaccagca gaagcctggc 120
cagcgccccc tgctgattat ctataatgat agcaattggc cctcagagat ccctgcctga 180
ttctctggct ccaactcagg gaacagggcc tccctaacca tcattggggc ctgggcctaa 240
gacgagtctg agtattacgg agaggtgtgg gacagcagtg ctaaggct 288
<210> 252
<211> 283
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 252
tcctatatgc tgactcagca gccattggca agtgtaaacc tcagccagtg ggccagcacc 60
acctgtggtg gagataacat tggagaaaaa actgtccaat ggaaccagca gaagcctggc 120
taagctccca ttacggctat ctataaaggt agtgatctgc cctcagggat tcctgagcaa 180
ttccctggcc ccaactcggg aaacggggcc tccctgaaca tcagcggggc taagccgacg 240
actaggctat tactgccagt cagcagacat tagtggtaag gct 283
<210> 253
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 253
tcctatgtgc tgacacagct gccatccgtg agtgtgaccc tgaggcagac ggcccgcatc 60
acctgtgggg gagacagcat tggaagtaaa aatgtttact ggtaccagca gaagctgggc 120
caggcccctg tactgattat ctatgatgat agcagcaggc cgtcagggat ccctgagcga 180
ttctccggcg ccaactcggg gaacacggcc accctgacca tcagcggggc cctggccgag 240
gatgaggctg actattactg ccaggtgtgg gacagcagta ctaagcct 288
<210> 254
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 254
tccactgggt tgaatcaggc ttcctccgtg ttggtggccc tgggacagat ggaaacaatc 60
acctgctcga gagatgtctt agggaaaaga tatgcatata ggtaccagca taagccaagc 120
caagcccctg tgctcctaat caataaaaat aatgagcagg attctgggat ccctgaccgg 180
ttctctggct ccaactcggg caacacggcc accctgacca tcagtggggc ccgggctgag 240
gacgaggctg agtattactg ccagtcctat gacagcagtg gaaatgtt 288
<210> 255
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 255
tcctatgtgc tgacacagct gccatccgtg aatgtgaccc tgaggcagcc ggcccacatc 60
acctgtgggg gagacagcat tggaagtaaa agtgttcact ggtaccaaca gaagctgggc 120
caggcccctg tactgattat ctatggtgat agcaacaggc cgtcagggat ccctgagcga 180
ttctctggtg acaactcggg gaacacggcc accctgacca tcagtggggc cctggccgag 240
gacgaggctt actattactg ccaggtgtgg gacagcagtg ctcaggct 288
<210> 256
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 256
tccagtgtgc tgactcagcc tccttcagta tcagtgtctc tgggacagac agcaaccatc 60
tcctgctctg gagagagtct gagtaaatat tatgcacaat ggttccagca gaaggcaggc 120
caagtccctg tgttggtcat atataaggac actgagcggc cctctgggat ccctgaccga 180
ttctccggct ccagttcagg gaacacacac accctgacca tcagcggggc tcgggccgag 240
gacgaggctg actattactg cgagtcagaa gtcagtactg gtactgct 288
<210> 257
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 257
tcctatgtgt tgactcagct gccttcagtg tcagtgaacc tgggaaagac agccagcatc 60
acctgtgagg gaaataacat aggagataaa tatgcttatt ggtaccagca gaagcctggc 120
caggcccccg tgctgattat ttatgaggat agcaagcggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactcggg gaacacggcc accctgacca tcagcggggc cagggccgag 240
gatgaggctg actattactg tcaggtgtgg gacaacagtg ctaaggct 288
<210> 258
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 258
tccagtgtgc tgactcagcc tccctcggtg tcagtgtccc tgggacagac ggcgaccatc 60
acctgctctg gagagagtct gagcagatac tatgcacaat ggtatcagca gaagccaggc 120
caagccccca tgacagtcat atatggggac agagagcgac cctcagggat ccctgaccga 180
ttctccagct ccagttcaga gaacacacac accttgacaa tcagtggagc ccaggctgag 240
gatgaggctg aatattactg tgagatatgg gacgccagtg ctgatgat 288
<210> 259
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 259
tcctacgtgg tgacccagcc accctcagtg tcagtgaacc tgggacagac ggccagcatc 60
acctgtgggg gagacaacat tgcaagcaca tatgtttcct ggcagcagca gaagtcgggt 120
caagcccctg tgacgattat ctatcgtgat agcaaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactcggg gaacacggcc accctgacca tcagcagggc ccaggccgag 240
gatgaggctg actattactg ccaggtgtgg aagagtggta ataaggct 288
<210> 260
<211> 317
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 260
ttgcccgtgc tgacccagcc tacaaatgca tctgcctccc tggaagagtc ggtcaagctg 60
acctgcactt tgagcagtga gcacagcaat tacattgttc agtggtatca acaacaacca 120
gggaaggccc ctcggtatct gatgtatgtc aggagtgatg gaagctacaa aaggggggac 180
gggatcccca gtcgcttctc aggctccagc tctggggctg accgctattt aaccatctcc 240
aacatcaagt ctgaagatga ggatgactat tattactgtg gtgcagacta tacaatcagt 300
ggccaatacg gttaagc 317
<210> 261
<211> 303
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 261
ttgcccgtgc tgacccagcc tccaagtgca tctgcctccc tggaagcctc ggtcaagctc 60
acatgcactc tgagcagtga gcacagcagt tactatattt actggtatga acaacaacaa 120
ccagggaagg cccctcggta tctgatgagg gttaacagtg atggaagcca cagcaggggg 180
gacgggatcc ccagtcgctt ctcaggctcc agctctgggg ctgaccgcta tttaaccatc 240
tccaacatcc agtctgagga tgaggcagat tattactgtg gtgcacccgc tggtagcagt 300
agc 303
<210> 262
<211> 317
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 262
ttgcccgtgc tgacccagcc tacaaatgca tctgcctccc tggaagagtc ggtcaagctg 60
acctgcactt tgagcagtga gcacagcaat tacattgttc attggtatca acaacaacca 120
gggaaggccc ctcggtatct gatgtatgtc aggagtgatg gaagctacaa aaggggggac 180
gggatcccca gtcgcttctc aggctccagc tctggggctg accgctattt aaccatctcc 240
aacatcaagt ctgaagatga ggatgactat tattactgtg gtgcagacta tacaatcagt 300
ggccaatacg gttaagc 317
<210> 263
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 263
ttgcccgtgc tgacccagcc tccaagtgca tctgcctccc tggaagcctc ggtcaagctc 60
acatgcactc tgagcagtga gcacagcagt tactatattt actggtatca acaacaacca 120
gggaaggccc ctcggtatct gatgaaggtt aacagtgatg gaagccacag caggggggac 180
gggatcccca gtcgcttctc aggctccagc tctggggctg accgctattt aaccatctcc 240
aacatccagt ctgaggatga ggcaggttat tactatggtg tacccctggt agcagtagc 299
<210> 264
<211> 317
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 264
ttgcccatgc tgacccagcc tacaaatgca tctgcctccc tggaagagtc ggtcaagctc 60
acatgcactt tgagcagtga gcacagcaat tacattgttc aatggtatca acaacaacca 120
gggaaggccc ctcggtatct gatgcatgtc aggagtgatg gaagctacaa caggggggac 180
gggatcccca gtcgcttctc aggctccagc tctggggctg accgctattt aaccatctcc 240
aacatcaagt ctgaagatga ggatgactat tattacagtg gtgcatacta tacaatcagt 300
ggccaatacg gttaagc 317
<210> 265
<211> 302
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 265
ttgcccatgc tgacccagcc tccaagtgca tctgcctccc tggaagcctc ggtcaagctc 60
acatgcactc tgagcagtga gcaaagcagt tactatattt actggtatca acaacaacaa 120
ccagggaagg cccctcggta tctgatgaag gttaacagtg atggaagcca cagcagggcg 180
tcgggatccc cagtcgcttc tcaggctcca gctctggggc tgaccgctat ttaaccatct 240
ccaacatcca gtctgaggat gaggcagatt attactgtgg tgtacccact ggtagcagta 300
gc 302
<210> 266
<211> 317
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 266
ttgcccatgc tgaccgagcc tacaaatgca tctgcctccc tggaagagtc agtcaagctc 60
acctgcactt tgagcagtga gcacagcaat tacattgttc gatggtatca acaacaacca 120
gggaaggccc ctcggtatct gatgtatgtc aggagtgatg gaagctacaa caggggggac 180
gggatcccca gtcgcttttc aggctccagc tctggggctg accgctattt aaccatctcc 240
aacatcaagt ctgaagatga ggctgagtat tattacggtg gtgcagacta taaaatcagt 300
gaccaatatg gttaaga 317
<210> 267
<211> 303
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 267
ttgcccgtgc tgacccagcc tccaagtgca tctgcctgcc tggaaacctc ggtcaagctc 60
acatgcactc tgagcagtga gcacagcagt tactatattt actggtatca acaacaacaa 120
ccagggaagg cccctcggta tctgatgaag gttaacagtg atggaagcca cagcaggggg 180
gacgggatcc ccagtcgctt ctcaggctcc agctctgggg ctgaccgcta tttaaccatc 240
tccaacatcc agtctgaaga tgaggcagat tattactgtg gtgtacccgc tggtagcagt 300
agc 303
<210> 268
<211> 323
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 268
caggctgtgc tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggatcaac agccagactc 60
acctgcaccc tgagcagtgg cttcagtgtt ggcagctact acatatactg gtaccagtag 120
aagccaggga gccctccccg gtatctcctg tactaactac tactcaagta cacagctggg 180
ccccggggtc cccagccatt tctctggatc caaagacaac tcggccaatg cagggctcct 240
gctcacctct gggctgcagc ctgaggacga ggctgactac tactgtgcta caggttattg 300
ggatgggagc aactatgctt acc 323
<210> 269
<211> 304
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 269
cagcctgtgc tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggaacagc ggccagaaat 60
acctgcactc tgagcagtga cctcagtgtt ggcagctgtg ctataagctg atcccagcag 120
aagccaggga gccctccctg gtatctcctg aactactaaa cacacccatg caagcaccag 180
gactcacatc tgtagccgct tctctggatt tgaggatgcc tctgccagtg cagggctctg 240
ctcatctctg gaggctgacc atcactgtgc taagatcatg gcagtggggg cagctagtgt 300
taca 304
<210> 270
<211> 277
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 270
cagcctgtgc tgacccagcc gccgtcctct ctgcatccct gggaacaaca gccagactca 60
cctgcaccct gagcagtggc ttcaatatgt ggggctacca tatattctgg taccagcaga 120
agccagggag ccctccccgg tatctgctga acttctactc agataagcac cagggctcca 180
aggacacctc ggccaatgca gggatcctgc tcatctctgg gctccagcct gaggacgagg 240
ctgactacta ctgtaaaatc tggtacagtg gtctggt 277
<210> 271
<211> 218
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 271
cagcctctgc tacccagcca cccccttctc tgcgtctcca ggtactacag ccagacccac 60
ctgcaccctg agcagtggca acagtgttgg cagctgttcc ttataacggc tcccacaaag 120
acagagggcc ctccctggta tctgctgagg ttcccctcta atagacacca tgtctctgga 180
tccacacata ccttggccaa tgcagggctc ctgctcat 218
<210> 272
<211> 319
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 272
cagcctgtgc tgaccaagtg ccctctcttt ctgcatctcc tggaacaaca gtcagactca 60
cttgcacctg gagcagtggc tccagcactg gcagctacta tatacactgg ttccagagcc 120
acagagccag agccacagag ctctccctgg tatctcctgt actactactc agactcagat 180
aagcaccagg gctctggggt tctcagctct gtctcctgat ccaaggatgc ctcagttatt 240
ggagggctct ctcatctctg ggctgcagcc tgaggattag actgaccttc actgtctaat 300
cagaaacaat aatgcttct 319
<210> 273
<211> 314
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 273
cagcctgtgc tgacccagct gccctccctc tctgcatacc ggggaacaaa ctccagatgt 60
acctacaccc tgagcagtgt cgccaactac taaacatact tctcaaagag aatacagggc 120
accttccaca gtacatcctg tactactact cagactcaag tgcatgattg ggatttgggg 180
tcccaggcac ttctctggat ccaaagatgc ctcagccaat gcagggatcc tgctgatctc 240
tgggctgcag ccagaggaca agtctgactg tcactgtgct acagatcatg gcagtgggag 300
cagcttccga tact 314
<210> 274
<211> 314
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 274
cagccagggc tgacccagcc acactccctc tctgcatatc agggagaaac agccacacat 60
acctgcaccc tgagcggtgg cttcagtgtt ggcagctgcc atatatactg gatccagaag 120
aagccagaga gccctccctg atgtctcctg aactactact aagactcaga taaggcctcg 180
acgtccccag ccctactctg aatccaaaga caccttgccc aaggtgggaa tcctgctcat 240
ctctgggctg cagccggagg acaaggctgt ctcttactgt ataatatggc acagtggttc 300
tggtcacagg gaca 314
<210> 275
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 275
caccctgtgc tgacccagct gccctccctc tctgcatccc tgggaacaac agccagactc 60
atgtgcaccc tgagcagtgg ctgcagtggt ggccatacgc tggttccagc agccaggagg 120
cctcctgagt acctgctgat ggtctactga gactcaccag ggccccggtg gccccagccg 180
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gcctgaggac gaggctgact gtcactgtgt tacagaccat ggcagtggga gcagctcccg 300
aaactca 307
<210> 276
<211> 326
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 276
cagccagggc tggcccagct tccccccacc tccctctgca tctccaggaa caacagccag 60
actcacatga accatgagca gtggcttcat cgttggcgct gctacatata ctggttccaa 120
cagaagccag ggagcaccgc cccagtatct cctgaggttc tactcagact cagataagca 180
ctagggctca acgaccccag ccctgttctg gatctgaaga cacctccgcc gaagcagggc 240
ctctgctcat ctctgggctg cagcgtgagg acaaggctga ctcttatggg acaatctggc 300
acagtggtcc tggtcacagg gacaca 326
<210> 277
<211> 305
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 277
cagcctgtgc tgacccagct gccctccctt tctgcatccc tgggaacaac agccagactc 60
acatgcaccc tgagcagcgg ctgcagcggt ggccacacat tggttccagc agccaggagg 120
cctcctgagt acctgctgat ggtctactga gactcaccag ggccccggtg ttgccagcct 180
cttctctggc tccaaggaca cctcggccaa tgcaggactc ctgctcatct ctgggctgca 240
gcctgaggat gaggctgact gtcactgtgc tacagaccat ggcagtggga gcagctccgg 300
atact 305
<210> 278
<211> 305
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 278
cagcctgtgc tgacccagct gccctccctt tctgcatccc tgagaacaac agccagactc 60
acctgcaccc tgagcagtgg ctgcagtggt ggccatatgc tggttccagc agccaggaag 120
cctcctgagt atctgctgac ggtcttctga gactcaccag ggccccgagg tccccagcct 180
cttctctggc tccaaggaca cctcagccaa tgcaggactc ctgctcatct ctgggctgca 240
gcctgaggat gaggctgact gtcactgtgc tacagaccat ggcagtggga gcagctcccg 300
atact 305
<210> 279
<211> 300
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 279
caccctgggc tgacccagtc gtcctccctc tctgcatccc tgggaacaac agccagactc 60
acctgcaccc tgagcagtgg cttcagaaat gacaggtatg taataagttg gttccagcag 120
aaatcaggga gcccttcctg gtgtctcctg tattattact cgaactcaag tacacatttg 180
ggctctgagg ttcccagctg cttctctgga tccaagacaa ggccacaccc acactgagta 240
gacccctctc tgggtgggtc tagagctcca gctccacctg aggctgatgc acaattgcag 300
<210> 280
<211> 321
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 280
cagccagggc tggcccagct gccctccctc tctgcatctc caggaacaac agccagactc 60
acatgaacca tgagcagtgg cttcattgtt ggtggctgct acatatactg gttccaacag 120
aagccaggga gcatgccccc cagtatctcc tgaggttcta ctcagactca gataagcacc 180
aggtctcaac atccccagcc cggctctgga tctgaagaca ctcagccgaa gcagggcctc 240
tgctcatctc tgggctgcag catgaggaca aggctgactc ttactgtaca atctggcaca 300
gtggtcctgg tcacagggac a 321
<210> 281
<211> 220
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 281
cagcctgtgc tgacccattg ccctccctct ctgcatcctg ggaaataaca accagactca 60
cctgcactct gagcagcggc tgcagcggtg gccatacagt ggttccagca gcaaggaagc 120
ctcctgagta cctgctgacg ttctactgag actcaccagg gctctagggt ccccagccac 180
ttctctggtt tcaaggacac cacggccaat gcagggcact 220
<210> 282
<211> 309
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 282
cagcctgtgc tgacccagtc gccctccctc tcggcatctt tggaacaaca gtcagactca 60
cctgtaccct gatcagtggc tccagtgttg gcagctatta catcaactgg ttccagaaga 120
agccacggag ccctccccag tatctcctgt actactactt agactcagat aagcaccagg 180
gctctggggt ccccagctgc ttctcctgat ccaaggatgc ctcagtcatt ggaggacacc 240
ctcatctctg aactgcagcc tgaggactag actgaccttc gctgtctaat cagaaacaat 300
aatgcttct 309
<210> 283
<211> 315
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 283
cagcctgtgc tgacccagcc tccctctctc tctgcatctc tgggaacaat agccagacaa 60
acatgcagcc tgagcagggg ctacagtatg gggacttatg tcatacgctg gttccagcag 120
tagcaagaaa ctctcctgag tatctgctga ggttatactg agcctcagca ggtctctggg 180
gaccccagct gagtctttag atccaagatg cctcagccaa ttcagggctc ctgcttatct 240
ctgtgctgca gcctgaggac aagggttact attactgttc tgtacatcat ggaattgtga 300
gcagctatac ttacc 315
<210> 284
<211> 325
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 284
cagcttgtgg tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggatcatc cgccagactc 60
acctgcaccc tgagcagtgg cttcagtgtt ggcagttatt ctgtaacttg gttccagcag 120
aagccaggga gccctctctg gtacctcctg tactaccact cagactcaga taagcaccag 180
ggctccaggg tccccagccg cttctctgga tccaaggaca cctcggccaa tgcagggctc 240
ctgctcatct ctgggctgca gcctgaggat gaggctgact actactgtgc ctccgctcat 300
ggcagtggga gcaactacca ttact 325
<210> 285
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 285
cagccagtgc tgacccagct gccctccttc tctgtatctc tgggaacaac agtcagactc 60
acctgcaccc tgagcagtgt tggcagctac taaacatcct tttcaaggag aaaccaagga 120
gccccccacc ccggtatctc ctatactact attcagactc agataaaccc caggtctctg 180
gggtccccag ccacttctct gcatccaaag actcctaggc caatgcaggg ctcctgctcg 240
cctctgggct gcagcctgag gacgaggctg actatcactg tgctataaat catgacagtg 300
ggagtagttc ctgatact 318
<210> 286
<211> 309
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 286
cagcctttgg tgacccagcg ccctccctct ctgcatctcc tgaaacaaca gtcagactca 60
catgcaccct gagcagtggc cccagtgctg gcagctacta catacactgg ttccagtgga 120
agccacggtg cccgccccgg tatctcctgt actactactc agactcagat gagcaccagg 180
gctctggggt ccccagccgc ttctcctgat ccaaggatgc ctcagccagg gcagggctcc 240
ctcatctctg ggctacagtc tgaggtctac actgaccttc actgtctaat cggaaacaat 300
aatgtttct 309
<210> 287
<211> 303
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 287
cagcctgtgc tgacccagcg acctccctct ctgcatccct gggaacaaca gccagactca 60
cctgcaccct gagcagcggc tgaagcggtg gccatacgct ggttccagca gccaggaagc 120
ctcctgagta cctgctgatg gtctactgag actcaccagg ctatggggtc cccagcatct 180
tctctggctc caaggacacc tcggccaatg cagggctcct gctcatctct gggctgcagc 240
ctgaggtcga ggctgactgt cactgtgcta cagaccatgg cagtgggagc agctcccgat 300
act 303
<210> 288
<211> 309
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 288
cagcctgtgc tgacccagtc gccctccctc tcagcatctt tggaacaaca gtcagactca 60
cctgtaccct gatcagtggc tccagtgttg gcagctatta catcaactgg ttccagaaga 120
agccacggag ccctccccag tatctcctat actactactt agactcagat aagcaccagg 180
gctctggggt ccccagctgc ttctcctgat ccaaggatgc ctcagtcatt ggagggcacc 240
ctcatctctg agctgcagcc tgaggactag actgaccttc gctgtctaat cggaaacaat 300
aatgcttct 309
<210> 289
<211> 327
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 289
cagcctgtgc tgacccagcc accctccctc tctgcatccc cgggaacaac agccagactc 60
acctgcaccc tgagcagtgg cttcagtgtt ggtgactatg acatgtactg gtaccagaag 120
aagccaggaa gcccccaccc cgggatctcc tgtactacta ctcagactca tataaacacc 180
agggctccgg ggtctccagc agcttctctg gatccaagga tacctcagcc aatacagggc 240
tcctgctcat ctctgggcca cagcctgagg acgaggctga ctactactgt gctacagatc 300
atggcagtga gagcaggtac tcttacc 327
<210> 290
<211> 292
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 290
cagcctctgc tacccagcac ccccttcgct gcgtttccag gtactacagc cagaatcacc 60
tgcaccctga gcaggggcat cagtgttggg agctgttcct tataacggct cccgcagagg 120
cagggagccc tgcctggtat ctgctgaggt tcccctctaa tagacaccac atctctggat 180
ccaaagaaac ctcggccaat gcagggctcc tgctcattgt tgtgctgcca cctgacaact 240
agtctatcag tggtggttga ggactaggac tattactggg atgctttggt tt 292
<210> 291
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 291
cagcctttgc tgatccagcg ccctccctct ctgcatctcc tggaacaaca gtcagactca 60
cctgcaccca gagcagtggc ccctgtgttg gcagctacta catacactgg ttccagtgga 120
agccatggag ccctccctgg tatcttctgt actactaatc agactcagat gagcaccagg 180
gctctggggt ccccagccgc ttctcctgat ccaaggatgc ctcagccaga gcagggctcc 240
ctcatctctg gactgcagcc tgaggactag actgaccttc actgtctaat cagaaacaat 300
aatgttt 307
<210> 292
<211> 312
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 292
tgcaggtccc tgtcccagcc tttgccctcc ctctttgcat ctcctggaag aacagtcaga 60
tccacctgca cccagagcag tggcccctgt gttggcagct actacataca ccggttccag 120
tggaagccac ggagccgtct ccatatctcc tgtactacta ctcagactca gatgagcacc 180
agagctctgg agtccccaac tgcttctcct gatccaagga tgcctcaggg aaggcagggc 240
tccctcatct ctgggctaca ggctgaggac aagactgacc tttactgtct aatccaaaac 300
aataatgttt ct 312
<210> 293
<211> 325
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 293
cagcctgtgc tgacccagcc accctccctc tctgcatccc tgggatcaac agccagaccc 60
acctgcaccc tgagcagtgg cttcagtgtt ggaagctacc atatactctg gttccagcag 120
aagtcagaga gccctccccg gtatctcctg aggttctact cagattctaa tgaacaccag 180
ggtcccgggg tccccagccg cttctctgga tccaaggaca cctcaaccta tgcagggctc 240
ttgctcatct ctgggctgca gcctgaggac gaggctgact actactgtgc tacagaccat 300
ggcagtggga gcagctacac ttacc 325
<210> 294
<211> 287
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 294
cagcctttgc tgacccagcg ccctccctct ctgcatctcc tggaacaaaa gtcagactca 60
cctgcatcca gagcagtgga tccagcgttg gcagctacta catacactgg ttccagtaga 120
agccatggag ccctccccag tatctcctgt actactactt agactcagat aagcactagg 180
cctatgggga acccagatcc ttcccctgat ccaaggatgc ctcagtcaat gcagggtcaa 240
agagagggga ttatttagag tggacaattg gggcctttgg ccaggag 287
<210> 295
<211> 313
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 295
cagccagtgc agacccagct gccctccttc tctgtacctc tgggaacaac agccagactc 60
acctgcaccc tgagcagtgt tggcggccag taaacatcct tttcaaggag aaaccaagga 120
gccccccagt ctctcctgta ctattaccca gactcagata aaccccaggt ctctggggtc 180
cccagccact tctctgaatc caaagactcc taggccaatg cagggctcct gctcgcctct 240
gggctgcagc ctgaggacga ggctgactat cactgtgctg taaatcatga cagtgggagc 300
agctccggat act 313
<210> 296
<211> 298
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 296
caggctgtgg tgacccagct tccttctctg catccctggg aacaacagcc agactcacat 60
gcaccctgag ctgtggcttc agtattgata gatatgctat aaactggttc cagcagaagg 120
cagagagcct tccctggtac ctactgtgct attactggta ctcaagtaca cagttgggct 180
tcagcgtccc cagctgcatc tctggatcca agacaaggcc acattcacaa acgagtagac 240
ccatctctgg ttgggtctag agctccagcc ccacctgaga ctgatgcaca attgcagc 298
<210> 297
<211> 306
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 297
cagcctgtat agacccagtc accctccctt tctgcatctt tggaacaaca gtcagagtca 60
cctgtaccct gagcagtggc tccagtgttg gcagctacta catatactgg ttccaggaga 120
agccatggag caatccccgg tatctcctgt actactcagg ctcagatgag caccagggct 180
ctgggatccg tagctgcttc tcctgataca atgatgcctc agccaaggca gagctcccta 240
atctctgggc tgcagcctga ggactatact gaccttcact gtctaatcag aaacaataat 300
cctttt 306
<210> 298
<211> 227
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 298
tagcctgtgc tgacccagcg ccctcccact ctgcatccct gggaacaaca gccagactca 60
cctgcgccct gagcagcggc tgcagcagtg accatacgct ggttccagca gccagaaggc 120
ctcctgagta cctgctgacg gtctactgag actcaccagc gccccggggt cctcagcctc 180
ttctctggct ccaaggacac ctcggccaat gcagggcact cagatgg 227
<210> 299
<211> 301
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 299
cagcctgtga tgacccagct gtcctccctc tctgcatccc tggaaacaac aaccagacac 60
acctgcaccc tgagcagtgg cttcagaaat aacagctgtg taataagttg attccagcag 120
aagtcaggga gccctccctg gtgtctcctg tactattact cagactcaag tatacatttg 180
ggctctgagg ttcccagctg cttctctgga tccaagacaa ggccacaccc acactgagta 240
gacccatccc tgggtgggtc tagagctcca gccccactgg aggctgatgc acaattgcag 300
c 301
<210> 300
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 300
caacctttgc ggacccagcg cactccctct gcatctcctg gaacaacagt tagactcatc 60
tgcacccaga gcagtggccc cagtgttggc agctactaca aacactggtt ccagcagaag 120
ccacggagcc ctccccggta cttcctgtac tacttctcag actcagatga gcaccagggc 180
tctggggacc gcagccactt ctcctgatcc aaggatgact caggaaaggc agggctccct 240
catctctggg ctacagcctg aggactagac tgaccttcac tgtctaatca gaaacaataa 300
tgcttct 307
<210> 301
<211> 323
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 301
ttaaaaccaa ccaaaccaaa ccaaaccaaa acaaaacaaa acaaaataac agccagattc 60
acctgctccc tgagcagtgg cttcagtgtt ggtggctata acacactggt accagcagaa 120
gccagggagc cctccctgtt acctcctgta ctactactca gaatcagata aacaccatgg 180
ctccgggatc accagctgct tccctggccc tatggacacc tcggccaatg cagggctcct 240
gctcatctca gggctgcagc ctgaggacga ggctgactac tactgcggta tactccacag 300
cagtgggagc agctactctt acc 323
<210> 302
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 302
caggctgtga ggacacactc ctccttcctc tctgcacctt tgggatcatc aaccagactc 60
acctgcatcc ttcccagggc ctgaatgttg gcaggtactg aacatactgg acaaggagaa 120
tcaaggagac atcaggagtt ccctcagatc cagataagtg ccagggcacg gggttctcag 180
ccacttctat ggatctaatg atgcctcagg caatgcaggt ctcctgctca tgtctgggct 240
gcagcctgag gacgaggctg actatgacta tgctgcacat tgtggggtgg gagcagctcc 300
cgatact 307
<210> 303
<211> 305
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 303
cagcctgtgc tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggaacaac agccagactc 60
acctgcaccc tgagcagcag ctgcagcggt ggccatatgc tggttccagc atgcaagagg 120
cctcctgagt acctgctgat ggtctactga gactcaccag ggccctgggg tccccagcct 180
cttctctggc tccaaggaag cctcggccaa tgcagggctc ctgctcatct ctgggctgca 240
gcctgagaat gaggctgact gtcactgtgc tacagaccat ggcagtggga acagctccca 300
atact 305
<210> 304
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 304
cagcctttgc tgacccagcg tcctccctct ctgcatctcc tggaacaaca gtcagactca 60
catgtaccct gagcagtggc cccggtgctg gcagctacta cacacactgg ttccagcaga 120
ggccacagag tcctccccgg tatctcctgt actactactc agactcagat gatctccagg 180
gctccgggtt ccccagccac tcctcctgat ccaaggatgc ctcagccagg gcagggctcc 240
catctctggg gtacagcctg aggactacac tgaccttcac tgtctaatcg gaaacaataa 300
tgtttct 307
<210> 305
<211> 303
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 305
cagccagggc tggcccagct gccccccacc tccctctgca tctccaggaa caacagccag 60
actcacatga accatgagca gtggcttcat tgttggcagc tgctacatat actggttcca 120
acagaagcca gggagccccc ctcccccaat atctcttgag gttgtattca gaatcagata 180
aacaccaggg ctcaatgtcc ccagccctgc tctggatctg aagacacctc cgccgaagca 240
gggcctctgc tcatctctgg gctgcagcgt gaggacaagg ctgactctta ctgtacaatc 300
tgg 303
<210> 306
<211> 305
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 306
cagcctgtgc tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggaacaac agccagactc 60
acctgcacca tgagcagcag ctacagtggt ggccatacac tggttccagc agccaggagg 120
cctcctgagt acctgctgat ggtctactga gatttaccag ggccccgggg tccccagccg 180
cttctctggc tccaaggaca tctcggccaa tgcagggctc ctgctcatct ctgggctgta 240
gcctgaggac gaggctgact gtcactgtgc tacagaacat ggcagcggga gcagctccca 300
atact 305
<210> 307
<211> 215
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 307
ctgcctctgc tacccagcca ccgccttctc tgcatctcca ggtactacag ccagacccac 60
ctgcaccctg aacagtggca tcagtattcg cagctgttcc ttataatggc tcccgcaaag 120
gcagggagcc ctgcctggta tctgctaagg ttgtactcta ataaatacca tggctctagg 180
gtcccaagcc acatctctgg atccaaagaa acctc 215
<210> 308
<211> 309
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 308
cagcctttgc tgacccagcg tcctccctct ctgcatctcc tggaacaaca gtcagactca 60
cctgtatcca gagcagtggc cccagtgttg gcagctacta catacaccgg ttccagcgga 120
aaccacggag ccctcccctg tatctcctgt actactactc agactcagat aagcactagg 180
cctacagggt ccccagctgc ttctcctgat ccatggatgc ctcagccagt gcagtgctcc 240
ctcatctctg ggctacagcc tgaggactag actgaccttc actgtctaat cggaaacaat 300
aatgcttct 309
<210> 309
<211> 319
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 309
cagcttgtgc tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggatcaac aaccagactc 60
acctgcaccc tgagcagtgg cttcagtgtt ggtggctata gcatatactg gcaccagcag 120
aagccaggga gcactccctg gtacctcctg tactactact caagtacaga gttgggacct 180
ggggtcccca gctgcttctc tggatccaaa gacacctcag ccaatgtagg gctcctgctc 240
atctcagggc tgcagcctga ggatgagact gactactact gtgctatagg tcacggcagt 300
gggagcagct acacttacc 319
<210> 310
<211> 303
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 310
cagccagggc tggcccagct gcccccccac ctccctctgc atctccagga ataacagcca 60
gactcacatg aaccatgagc agtggcttca ttgttggccg ctgctacata tactgattcc 120
aacagaagcc aaggagcccc cgctccacca gtatctcctg atattctact cagactcaga 180
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agggcttctg ctcatctctg ggctcagcgt gaggacaagg ctgactctta ctgtacaatc 300
tgg 303
<210> 311
<211> 304
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 311
tagcctgtgc tgacccagtg ctctccctct ctgcatccct gggaacaaca gccagactcc 60
cctgcaccct gagcagcggc tgcagcggtg tccatacgca ggttccagca gccaggaggc 120
ctcctgaata cctgctgatg gtctacggtg actcaccagg gccccggggt ccccagccgc 180
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tact 304
<210> 312
<211> 319
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 312
cagcctgtgc tgacccagct gcccttcctc tctgcatccc tggagacaac aagcagatgt 60
acctacaccc agagcggtgt cggcagctac tacacatact catcaaggac aatccaggga 120
gacctccctg gtatttcctg tactactact cagactcaac tacatggttg ggatttggtg 180
tccccaacca cttctctgta tccaaagatg cctcagccaa tgcagggctc ctgctcatct 240
ctgggctgca gccagaggac aaggatgact gtcactgtgc tgcattcaga tcatggcagt 300
gggagcagct cccgatact 319
<210> 313
<211> 309
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 313
cagcctttgc tgatccagtg ccctccctct ctgcatctcc tggaacaaga gtcagactca 60
cctgcaccca gagcagtggc cccagggttg gcagctacta catacactgg ttgcagcgga 120
aaccacggag ccctcctcag tatctcctgt actactactc agaatcagat gagcaccagg 180
gctctggggt ccccagccac ttctcctgat ccaaggatgc ctcaggcaag gcagggctcc 240
ctcatccctg ggctacagcc tgagggctag actgaccttc actgtctaat ccgaaacaat 300
aatgtttct 309
<210> 314
<211> 314
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 314
cagccagggc tggcccagct gccctccctc tctgcatctc caggaacaac agccagactc 60
acatgaacca tgaacagtgg cttcattctt ggcggctgat acatatactt gttccaacag 120
aaaccaggga acccccgctc cccgtattgc ctgaggttct actcagactc agataagcac 180
cagggctcaa catccccagc cctgctctgg atctgaagac acctcaactg aagcagggcc 240
tctgctcatc tctggatgtc cagcgtgagg acaaggttga ttcttactgt acaatctggc 300
acagtggtcc tggt 314
<210> 315
<211> 305
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 315
cagcctctgc tgacccagcc accctccctc tctgcatccc tgggaacaag acccagagtc 60
acctgcaccc tgagcaacaa ctgcagtggt ggccatacgc tggttccagc agccaggaag 120
cctcctgaat acctattgat ggtttactga gacttaccag ggcccccggg gccccagctg 180
cttctctggc tccaaggaca ccttggccaa tgcaggactc ctgctcatct ctgggctgta 240
gcctgaggat gaggctgact gtcactgtgc tacagaccat ggcagtggga gcagctcccg 300
atact 305
<210> 316
<211> 320
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 316
caggctgtgg tgacccagct tccttctctg catccctggg aacaacagcc agattcacat 60
gcaccctgag ctatggcttc agtattgata gatatgttat aagctggttc cagcagaagg 120
cagagagcct tccctggtac ctactgtact attactgata ctcaagtaca cagttgggct 180
tcggcattcc cagctgcgtc tctggatcca agacaaggcc acattcacaa atgagtagac 240
ccatctctgg ttgggtctag agctccagcc ccacctgaga ctgatgcaca attgcagcca 300
cattgtcttg atatcggaaa 320
<210> 317
<211> 306
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 317
cagcctgtat agacccagtc accctccctt tctgcatctt tggaacaaca gtcagactca 60
cctgtaccct gagcagtggc tccagtgttg gcagctacta catatactgg ttccaggaga 120
agccatggag caatccccgg tatctcctgt actattcagg ctcagatgag caccagggct 180
ctgggatccc tagctgcttc tcctgatcca aggatgcctc agccaaggca gagctccctc 240
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gcttct 306
<210> 318
<211> 283
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 318
cagcctgtgc tgacccagcg ccctcccact ctgcatccct gggaacaaca gccagactca 60
cctgcaccct gagcagcggc tgcagcggtg gccatatgct ggttccagca gccagaaggc 120
ctcctgagta cctgctgacg gtctactgag actcaccagg gcccctgggt cctcagcctc 180
ttctctgact ccaaagacac ctcggccaat gcagggcact cagatggctg tgaagttcat 240
acaacagggt cctcatgggg gctcatggta ccacttcacg ttt 283
<210> 319
<211> 301
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 319
cagcctgtga tgacccagct gtcctccctc tcagcatccc tggaaacaac aacaagactc 60
acctgaaccc tgagcagtgg cttcagaaat gacagatgtg taataagttg gttccagcag 120
aagtcaggga gccctccctg gtgtctcctg tactattact cggactcaag tacacatttg 180
ggctctgagg ttcccagctg cttctctgga tccaagacaa ggccacaccc acactgagta 240
gacccatccc cgggtgggtc tagagctcca gccccactgg aggctgatgc acaattgcag 300
c 301
<210> 320
<211> 309
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 320
caacctttgc ggacccagcg ccctccctct ctgcatctcc tggaacaaca gttagactca 60
tctgcaccca gagcagtggc cccagtgttg gcagctacta caaacactgg ttccagcaga 120
agccacggag ccctccccgg tacctcctgt actactactc agactcagat gagcaccagg 180
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ctcatctctg ggctacagcc tgaggactag actgaccttc actgtctaat cagaaacaat 300
aatgcttct 309
<210> 321
<211> 314
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 321
cagcctgtgc tgaccagctg ccctctctgc atccctggga acaacaggca gatgtactta 60
caccctgagc agttttggca gctactacac atactcgtca aggagaatac agggagacct 120
ccctggtatt tcctgtacta ctactcagac tcaactacat ggttgggatt tggggtcccc 180
aaccacttct ctggatccaa agatgcctca gccaatgcag ggctcctgct catctctggg 240
ctgcagccag aggacaagga tgactgtcac tgtgctgcat acatatcaag gcagtggaag 300
cagctcccaa tact 314
<210> 322
<211> 304
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 322
ctgcctgtgc tgacccagtg ccctccctct ctgcatccct gggaacaaca gccagactca 60
cctgcaccct gagcagtggc tgcagcggtg gccatatgct ggttccagca gccaggaggc 120
ctcctaagta cctgctgatg gtctactgag actcatcacg gtcctggggt ccctagcctc 180
ttctctggct ccaaggacac ctcggccaat gcagggctcc tgctcatctc tgggctgcag 240
cctgaggacg aggctgactg tcattgtgct acagaccatg gcagtgggag cagctcctga 300
tact 304
<210> 323
<211> 325
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 323
cagcctgtgc tgacccagcc accctccctc tctgcatccc tgggaacaac agccagactc 60
acctgcaccc tgagcagtgg cttcagtgtt ggtgactatg acatgtactg gtaccagcag 120
aagccaggga gccctccccg ggatctcctg tactactact cggactcata taaaaaccag 180
ggctctgggg tctccaaaag cttctctgga tccaaggata cctcagccaa tgcagggctc 240
ctgctcatct ctgggctgca gcctgaggac gaggctgact actactgtgc tacagatcat 300
ggcagtgaga gcagctactc ttacc 325
<210> 324
<211> 306
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 324
cagcctgtat agacccagtc accctccctt tctgcatctt tggaacaaca gtcagactca 60
cctgtaccct gagcagtggc tccagtgttg gcagctacta catatactgg ttccaggaga 120
agccatggag caatccccgg tatctcctgt actactcagg ctcagatgag caccagggct 180
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gcttct 306
<210> 325
<211> 305
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 325
cagcctgtgc tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggaacaac agccagactc 60
acctgcacca tgagcagcag ctgcagcggt ggccatatgc tggtaccagc atgcaagagg 120
cctcctgagt acctgctgat ggtctactga gactcaccag ggccctgggg tccccagcct 180
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gcctgagaat gaggctgact gtcactgtgc tacagaccat ggcagtggga acagctccca 300
atact 305
<210> 326
<211> 323
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 326
taaaaccaaa ccaaaccaaa ccaaaccaaa acaaaacaaa acaaaataac agccagattc 60
acctgctccc tgagcagtgg cttcagtgtt ggtggctata acacactggt accagcagaa 120
gccagggagc cctccctgtt acctcctgta ctactactca gaatcagata aacaccatgg 180
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cagtgggagc agctactctt acc 323
<210> 327
<211> 302
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 327
aagcctgtgc tgacccagcg ccctccctct ctgcatccct gggaacaaca gccagactca 60
cctgcaccct gagcagcggc tggagtggtg gctataggct ggttccagca gccaggaagc 120
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ctgaggtcga ggctgactgt cactgtgcta cagaccatgg cagtgggagc agctcccgat 300
ac 302
<210> 328
<211> 308
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 328
cagcctgtgc taacccagtc gctctccctc ttgacatctt tggaacaaca gtcagactca 60
cctgtaccgt gaacagtggc tccagtgttg gcagctatta catcaactgg ttccagtata 120
agccatggag ctctccctag tatcacctgt actactactt agactcagat aagcaccagg 180
gctctggggt ccccagctgc ttctcctgat ccaaggatgc ctcagtcatt ggagggcacc 240
ctcatctctg ggctgcagcc tgaggactag actgaccttc acgtctaatc agaaacaata 300
atgcttct 308
<210> 329
<211> 304
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 329
ctgcctgtgc tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggatcaac agccagactc 60
acctgcacac tgagcagtgg ctgcagcggt ggccatatgc tggttccagc agccaggagg 120
cctcctgtgt acctgctgat ggtctactga gactcaccag ggccccagtg tccccagcca 180
ctactctggt ttcaaagaca cctcggccaa tgcaggtcac tcagatagct gcgaaattca 240
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acag 304
<210> 330
<211> 300
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 330
cagggatggc ccagctgttc ccccacctcc ctctgcatct ccaggaacaa cagccagact 60
cacatgaacc atgagcagtg gcttcattgt tggcggctgc tacatatact ggttccaaca 120
gaagccaggg agtccccttc cccccatatc tcctgagttt ctactcagac tcagataagc 180
accagggctc aaaatcccca gccctgttct ggatctgaag acacctcagc caaagcagcg 240
cctctgctca tctctgggct gcagggtgag gataagaatg actcttactc tacaatctgg 300
<210> 331
<211> 314
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 331
caacctttgc ggacccagtg ccctccctct ctgcatctcc tggaacaaca gttagactca 60
tctgcaccca gagcagtggc cccagtgttg gcagctacta caaacactgg ttccagcaga 120
agccacggag ccctccccag tacctcctgt actacttctc agactcagat gagcaccagg 180
gctctgggga ctgcagccac ttcccctgat ccaaggatgc ctcaggaaag cagggctccc 240
tcatctctgg gctacagcct gaggactaga ctgaccttca ctgtctaatc agaaacaata 300
atgcttctta cagt 314
<210> 332
<211> 305
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 332
cagcctgtgc tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggaacaac attcagactc 60
acctgcaccc tgagcagcag ctgcagcggt ggccatatgc tggttccagc atgcaagagg 120
cctcctgagt acctactgat ggtctactga gactcaccag ggccctgggg tccccagcct 180
cttctccggc tccaaggaca ccttggccaa tgcagggctc ctgctcatct ctgggctgca 240
gcctgagaat gaggctgact gtcactgtgc tacagaccat ggcagtggga acagctccca 300
atact 305
<210> 333
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 333
caggctgtga cgacacactc ctccttcctc tctgcacctt tgggatcatc aaccagactc 60
acctgcatcc ttcccagggc ctgaatgttg gcaggtactg aacatactgg acaaggagaa 120
tcaaggaggc atcaggagtt ccctcagatc cagataagtg ccagggcacg gggttctcag 180
ccacttctat ggatctaatg atgcctcagg caatgcaggt ctcctgctca tgtctgggct 240
gcagcctgag gacgaggctg actatgacta tgctgcacat tgtggggtgg gagcagctcc 300
cgatact 307
<210> 334
<211> 303
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 334
aagcctgtgc tgacccagcg ccctttctct ctgcatccct gggaacaaca gccagactca 60
cctgcaccct gagcagcggc tggagtggtg gctataggct ggttccagca gccaggaagc 120
ctcctgagta cctgctgatg gtctactgag actcaccagg ctatggggtc cccagcatat 180
tctctggctc caaggaagcc tcggccaatg cagggctcct gctcatctct gggctgcagc 240
ctgaggtcga ggctgactgt cactgtgcta cagaccatgg cagtgggagc agctcccgat 300
act 303
<210> 335
<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 335
cagactgtgg tcaccaagga tccatcactc tcagtgtttc caggagggac agtcacattc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtcttt acaagtaact accccagctg gtaccagcag 120
acccatggcc gggctcctca catgcttatc tacagcacaa gcagctgccc ccccggggtc 180
cctgatcgct tctctggatc catctctggg aacaaagttg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcctgagg atgagactat tattgttcac tgcgtatggg tagtacattt a 291
<210> 336
<211> 309
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 336
cagcctgtgc taacccagtc gccctccctc ttgacatctt tggaacaaca gtcagactca 60
cctgtaccgt gaacagtggc tccagtattg gcagctatta catcaactgg ttccaggaga 120
agccatggag ctctccctgg tatcacctat actacttctt agactcagat aagcaccagg 180
gctctggggt ccccagctgc ttctcctgat ccaaggatgc ctcagtcatt ggagggcacc 240
ctcatctctg ggctgcagcc tgaggactag actgaccttc actgtctaat cagaaacaat 300
aatgcttct 309
<210> 337
<211> 217
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 337
ctgcctgtgc tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggatcaac agccagactc 60
acctgcacac tgagcagtgg ctgcagcggt agccatatgc tggttccagc agccaggagg 120
cctcctgggt acctgctgat ggtctactga gactcaccag ggccccagtg tccccagcca 180
ctactctgga tgcaaagaca cctcggccaa tgcaggt 217
<210> 338
<211> 300
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 338
cagggatggc ccagctgttc ccccacctcc ctctgcatct ccaggaacaa cagccagact 60
cacatgaacc atgagcagtg gcttcattgt tggcggctgc tacatatact ggttccaaca 120
gaagccaggg agtccccttc cccccatatc tcctgagttt ctactcagac tcagataagc 180
accagggctc aaaatcccca gccctgttct ggatctgaag acacctcagc caaagcagcg 240
cctctgctca tctctgggct gcagggtgag gataagaatg actcttactc tacaatctgg 300
<210> 339
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 339
caacctttgc ggacccagcg cactccctct gcatctcctg gaacaacagt tagactcatc 60
tgcacccaga gcagtggccc cagtgttggc agctactaca aacactggtt ccagcagaag 120
ccacggagcc ctccccggta cttcctgtac tacttctcag actcagatga gcaccagggc 180
tctggggacc gcagccactt ctcctgatcc aaggatgact caggaaaggc agggctccct 240
catctctggg ctacagcctg aggactagac tgaccttcac tgtctaatca gaaacaataa 300
tgcttct 307
<210> 340
<211> 301
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 340
cagcctgtga tgacccagct gtcctccctc tctgcatccc tggaaacaac aaccagacac 60
acctgcaccc tgagcagtgg cttcagaaat aacagctgtg taataagttg attccagcag 120
aagtcaggga gccctccctg gtgtctcctg tactattact cagactcaag tatacatttg 180
ggctctgagg ttcccagctg cttctctgga tccaagacaa ggccacaccc acactgagta 240
gacccatccc tgggtgggtc tagagctcca gccccactgg aggctgatgc acaattgcag 300
c 301
<210> 341
<211> 317
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 341
cagcctgtgc taacccagtc gctctccctc ttgacatctt tggaacaaca gtcagactca 60
cctgtaccgt gaacagtggc tccagtgttg gcagctatta catcaactgg ttccagtata 120
agccatggag ctctccctag tatcacctgt actactactt agactcagat aagcaccagg 180
gctctggggt ccccagctgc ttctcctgat ccaaggatgc ctcagtcatt ggagggcacc 240
ctcatctcgg ggctgcagcc tgaggactag actgaccttc actgtctaat cagaaacaat 300
aatgcttcta acagtga 317
<210> 342
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 342
cccagcgccc tttctctctg catccctggg aacaacagcc agactcacct gcaccctgag 60
cagcggctag agtggtggct ataggctggt tccagcagcc aggaagcctc ctgagtacct 120
gctgatggtc tactgagact caccaggcta tggggtcccc agcatcttct ctggctccaa 180
ggacacctcg gccaatgcag ggctcctgct catctctggg ctgcagcctg aggtcgaggc 240
tgactgtcac tgtgctacag accatggcag tgggagcagc tcccgata 288
<210> 343
<211> 278
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 343
ataacagcca gattcacctg ctccctgagc agtggcttca gtgttggtgg ctataacaca 60
ctggtaccag cagaagccag ggagccctcc ctgttacctc ctgtactact actcagaatc 120
agataaacac catggctccg ggatcaccag ctgcttccct ggccctatgg acacctcggc 180
caatgcaggg ctcctgctca tctcagggct gcagcctgag gacgaggctg actactactg 240
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<210> 344
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 344
caggctgtga cgacacactc ctccttcctc tctgcacctt tgggatcatc aaccagactc 60
acctgcatcc ttcccagggc ctgaatgttg gcaggtactg aacatactgg acaaggagaa 120
tcaaggaggc atcaggagtt ccctcagatc cagataagtg ccagggcacg gggttctcag 180
ccacttctat ggatctaatg atgcctcagg caatgcaggt ttcctgctca tgtctgggct 240
gcagcctgag gacgaggctg actatgacta tgctgcacat tgtggggtgg gagcagctcc 300
cgatact 307
<210> 345
<211> 305
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 345
cagcctgtgc tgacccagcc gccctccctc tctgcatccc tgggaacaac attcagactc 60
acctgcaccc tgagcagcag ctgcagcggt ggccatatgc tggttccagc atgcaagagg 120
cctcctgagt acctactgat ggtctactga gactcaccag ggccctgggg tccccagcct 180
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atact 305
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<211> 275
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 346
caggctgtgg tgactccaga gcccttctga ccatccccag gagtgacagt cacttttacc 60
tgtgactcca gcactggaga gtcattaata gtgactatcc acgttagttc cagcagaagc 120
ctagacaaac tcgcaccaca cacacaacaa acactcacgg actcccaccc agttctcagg 180
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<210> 347
<211> 290
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 347
caggctgtgg tgactcagga accctcactg accgtgtccc tggagggaca gtcactctca 60
cctgtgcctc cagcactggc gaggtcacca atggacacta tccatactgg ttccagcaga 120
agcctggcca agtccccagg acattgattt ataatacaca cataatactc ctggacccct 180
acccggttct caggctgcct ctttgggggc aaagctgcct tgaccatcac aggggcccag 240
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<210> 348
<211> 289
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 348
caggctgtgg tgattcagga atcctcacta acagtgcccc caggaggaac actctcacct 60
gtgcctcgaa cactggcaca gtcaccaatg tcagtatcct tactggtttc agcagaaccc 120
tagtcaagtc cccagggcat tgacttagga tacaagcaat aaacacttct ggatccctac 180
caagctttca gtttccctcc ttggatgtaa aactcccctg accttctctg gttccctagc 240
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<210> 349
<211> 263
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 349
caggtcatgg tgactcagga gccttcatgg ccatgtcccc aggagggaca gtcactctca 60
cctatgcctc cagcacagga cactatccat actggatcca agaaaatatt ggccaagtca 120
gggccattta tttataataa aaacaacaaa tactgatttc tcatgctccc ttcttgggag 180
caaatctgac atgaccatct cctagtgccc agcctgagga cgaggatgag tacccatggg 240
ggctacacta tagtggtgct ggg 263
<210> 350
<211> 246
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 350
cagattgtgg tgactcagga gccttcatgg tcgtgtcccc aggagggaca gtcactctca 60
ctatgcctcc agcacagaac actatccata ctggatccag gaaaatattg gccaagtcta 120
gagcatttat ttataaaaga aacaataaat actgatttct aggctccctt cttgggaata 180
aatctgactt gaccatctgc tagtgcgcag cctgaggacg aggctgagta cccctagggg 240
ttacac 246
<210> 351
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 351
caggctgtga tgactcagga gtcctcacta acagtgtccc caggagggac attcactctc 60
acctgtgcct ccagccactg gcatagtaac aatgctcagt atccttcctg gttttaccag 120
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<210> 352
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 352
caggctgtga tgactcaaga gtcctcacta acagtgtccc caggagggac attcactctc 60
acctgcgcct ccagctactg gcatagtaac aatgctcagt atccttactg gttttagcag 120
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<211> 275
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 353
cagactgtgg tggcatagga gccttcatgg ccatatcccc aggagggaca gtcactctca 60
cctatccctc cagcacagga cactatctat actggatcta gtagcatact ggccaagtct 120
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<210> 354
<211> 275
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 354
cagactgtgg tggcatagga gccttcatgg ccatatcccc aggagggaca gtcactctca 60
cctatccctc cagcacagga cactatctat actggatcta gtagcatact ggccaagtct 120
aggtcattta tttataataa aaacaataaa tactcataga cctccactca tttctcaggc 180
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<210> 355
<211> 299
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 355
cagactgtgg tgacccagga gccatcactc tcagtgtctc tgggagggac agtcaccctc 60
acatgtggcc tcagctccgg gtcagtctct acaagtaact accccaactg gtcccagcag 120
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<210> 356
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 356
cagactgtgg taacccagga gccatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtctct acaagtaacc accctagctg gtaccagcag 120
acccaaggga aggctcctcg catgcttatc tacaacacaa acaaccgccc ctctgggatc 180
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cagcctgagg acgagactga ctattactgt ttattgtata tgggtagtaa cattta 296
<210> 357
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 357
cagattgtgg tgacccagga gccatcactc taagtttctc caggagggac agtcacactc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtccct acaagtaact accccagctg gtttcagcag 120
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cagcctgagg atgaggctga ctcctgctgt gctgaatatc aaagcagtgg gagcagctac 300
acttacc 307
<210> 358
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 358
cagactgtgg taacccagga accatcactc tcagtgtctc catgagggac agtcacactc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtctct acaagtaact accccaactg gtaccagcag 120
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cagcctgagg acgaggctga ctattactgt tcattgtata tgggtagtaa catttg 296
<210> 359
<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 359
cagactgtga tcacccaaga tacatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtctct acaagtaact accccagctg gtaccagcag 120
acccaaggcc gggatcctcg catgcttatc tacagcacaa acagccaccc ctctggggtc 180
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<210> 360
<211> 306
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 360
cagattgtgg tgacccagga cccatcactg tcagtgtcta gaggagggac agtcacactc 60
acttgtggcc tcagctctgg gtcagtcact acaataaata ccccagctgg tcccagcaga 120
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cttacc 306
<210> 361
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 361
cagattgtgg tgacccagga gccatcactg tcagtgtctc caggaggaac agttacactc 60
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<211> 291
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 362
cagactgtgg tcacccagga tccatcactc tcagtgtctc caggaggaac agtcacactc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtctct acaagtaact accccggctg gtaccagcag 120
acccaagtga aagctccttg catgcttatc tacagcacaa acagctaccc ctctggggtt 180
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cagcctgagg atgagactat tattgttcac tgcatatggg tagtacactt a 291
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<211> 306
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 363
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 364
cagattgtgg tggccaggag gcattgttgt cagtgtctcc aggagggaga gtcacactca 60
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cc 302
<210> 365
<211> 288
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 365
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accccaggcc aggctcctcg caggattatc tatgacacaa gcagccgccc ttctggggtc 180
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<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
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cagattgtgg tgacccagga ggcatcgttg ttagtgtctc ctggagggat agtcacactc 60
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<211> 309
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 367
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<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 368
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<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 369
cagactgtgg tcacccagga tccgtcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacattc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtaagtctct acaagaaact accccagctg gtaccagcag 120
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<400> 370
cagactgtgg taacccagga gccatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtctct acaagtaatt accctggctg gtaccagcag 120
acccaaggcc gggctcctcg cacgattatc tacaacacaa gcagccgccc ctctggggtc 180
cctaatcgct tctctggatc catctctgga aacaaagccg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcccgagg atgaggctga ctattactgt tccttgtata cgggtagtta cactga 296
<210> 371
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 371
cagactgtgg tcacccagaa gccatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
atatgtggct tcagctctgg gtcagtctct acaagtaatt accctggctg gtaccagcag 120
acccaaggcc gggcttctcg cacaattatc tacagcacaa gcagccgccc ctctggggtc 180
cctaatcgct tccctggatc catctctggg aacaaagccg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcctgagg acgaggctga ctattactgt tccttgtata tgggtagtta cactga 296
<210> 372
<211> 300
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 372
cagattgtag tgacccagga accatcactg tctccaggag ggacagtcct actcacttgt 60
ggcctcagct ctgggtcagt cactacaagt aactactcca gctggtacca gcagacccca 120
gggcgggctc ctcgcacgat tatctacaac actaacagcc acccctctgg agtccctgat 180
cgcttctctg gatccatctc tgggaacaaa gcggcgctca ccatcacagg agcccagcct 240
gaggacgagg ctgactacta ctgtgttaca gaacatggta gtgggagcag cttcacttac 300
<210> 373
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 373
cagactgtgg tgactcagga gtcatcagtc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
acgtgtgacc tcagctctgg gtcagtgact acaagtaaca accccagctg gtaccagcag 120
acccaaggcc gatctcctcg catgcttatc tatgacacaa gcagctgtcc ctcggaggtc 180
cctgatcgct tctctggatc catttctggg aacacagctg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcctgagg acaaggctga ctactactgt agtatgcatg atgtcagtgg gagcagctac 300
aattacc 307
<210> 374
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 374
cagactgtgg tcacccagga gccatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
acatgtggcc tcagttctgg gtcagtcact ataagtaact accccagctg gtcccagcag 120
accccagggc aggctcctca cacaataatc tacaggacaa acagctgacc ctctggggtc 180
cctgatcgct tctctggatc catctctggg aacaacgccg ccctcagcat cacagtcgcc 240
cagcctgagg acgaggctga ctattactgt tcattgtata tgggtagtaa cattta 296
<210> 375
<211> 303
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 375
cagattgtgg tgacccagga gccatcactc tcagtgtcta gaggagggac agtcacactc 60
acttgtggcc tcagctctga gtcaatcact acaactaccc cagctgatcc cagcagaccc 120
cagggcaggc tcctcacaca attatctatg acaaaaacag ccgcccctct ggggtccctg 180
atcacttctc aggatccatc tgtgggaaca aagccaccct caccatcaca ggaacccagc 240
ctgaggacaa ggctgactac tactgtggta tccaacatgg cagtaggagg agcctcatta 300
acc 303
<210> 376
<211> 306
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 376
cagactgttg tgactcagga gtcatcagtc tcagtgtctc caggagggac agtaacactc 60
acgtgtagcc tcagctctgg gtcagtgact acaagtaagt actccagctg gaccagtaga 120
cccaaggccg atctcctcgc atgcttatct atgacacaag cagccgtccc tctgaggtcc 180
ctgatcgctt ctctggatcc atctccggga acaaagctgc cctcaccatc acaggagccc 240
agcctgagga cgaggctgac tactactgtg gtatgcatga tgtcagtggg aggagttaca 300
attacc 306
<210> 377
<211> 302
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 377
cagattgtgg tggccaggag gcattgttgt cagtgtcctc tggagggaga gtcacactca 60
cttgtggcct cagctctggg tcagtcacta caagtaacta ccccaactgg ttccagcaga 120
ccccagggcg ggctcctggc acgattatgt acagcacaaa agactgcccc tctggggtcc 180
ctgattgctt ctctagatcc atctctggga acaaagccgc cctcaccatc acaggagccc 240
agtctgagga cgaggttatt actgttttac acgacatggt agtgggagct gctacactta 300
cc 302
<210> 378
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 378
cagactgtgg taacccagga gccatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
acttgtggcc tcagctctgg gtcagtctct acaggtaaca aacctggctg gtaccagcac 120
accccaggcc aggctcctcg caggattatc tatgacacaa gcagccgccc ttctggggtc 180
cctgatcgct tctctggatc catctctgag aacaaagctg ccctcaccat cacagaagcc 240
cagcctgagg atgaggctgc ctaccactgt tcgctgtata tgagtggtgg tgctta 296
<210> 379
<211> 306
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 379
cagattgtgg tgacccagga ggcatcgttg tcagtgtctc ctggagggat agtcacactc 60
acttgtggcc tcagctctgg atcaatcact acaagtaact accccaactg gttccagcag 120
accccagggc gggctcctcg cagatgatct atggcacaaa aagccgcccc tctggggtcc 180
ctgatcgctt ctgtagatcc atctctggga acaaagccgc cctcaccatc acaggagccc 240
agtctgagga tgaggctgac tattactgtt ttacacgaca tggcagtggg agcagctaca 300
attacc 306
<210> 380
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 380
cagactgtgg tgacccagga gtcatcagtc tcagtgtctc cagtcggaac agtcacactc 60
acttgtggcc tcagctctgg gtcactgact acaagtaact acaccagctg gtaccagcag 120
acccaaggcc agtctcctcg catgcttgtc tatgacacaa gcagctgtcc ctctgaagtt 180
cctgatcact tctctggatc catttctggg aacaaagccg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcctgagg acgaggctga ctactactgt ggtatgcatg atgtcagtgg gagcagctaa 300
aattacc 307
<210> 381
<211> 288
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 381
catattttgg tgactcagga gccatcactg tcagtgtctc catgagggac agtcacactc 60
acttgtggcc tcagctctgg gtcagtcact acaagtaact accccaggta taccagcaga 120
acccaggcaa ggctcctagc acagttatct acaacaaaaa cagctgcccc tctggggtcc 180
atggtcgatt ctctggatcc atctctggaa gcaaagccgc cttcacaatc acaggagccc 240
agcctgaggt tgaggctgac tactactgtg ttacagaaca tggctcct 288
<210> 382
<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 382
cagactgtgg tcaaccagga tccgtcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacattc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtaagtctct gcaagaaact accccagctg gtaccagcag 120
acccaaggcc aggctccttg catgcttatc tacagcacaa gcagccgccc ttctggggtc 180
cctgatcgct tctctggatc catctctggg aacaaagtcg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcctgagg atgagactat tattgttcac tgcatatggg tagtacattt a 291
<210> 383
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 383
cagactgtgg taacccagga gccatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtctct acaagtaatt accctggctg gtaccagcag 120
accctaggcc gggctcctcg cacgattatc tacagaacaa gcagccgccc ctctggggtc 180
cctaatcgct tctctggatc catctctggg aacaaagccg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcctgagg acgaggctga ctattactgt tccttgtata tgggtagtta cactga 296
<210> 384
<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 384
cagactgtgg tcaccaagga tccatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacattc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtcttt acaagtaact accccagctg gtaccagcag 120
acccatggcc gggctcctcg catgcttatc tacagcacaa ggagctgccc ccccggggtc 180
cctgatcgct tctctggatc catctctggg aacaaagttg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcctgagg atgagactat tattgttcac tgtgtatggg tagtacattt a 291
<210> 385
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 385
cagactgtgg tcacccagaa gccatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
atatgtggcc tcagctctgg gtcagtctct acaagtaatt accctggctg gtaccagcag 120
acccaaggcc gggcttctcg cacaattatc tacagcacaa gcagccgccc ctctggggtc 180
cctaatcgct tcactggatc catctctggg aacaaagccg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcctgagg acgaggctga ctattactgt tccttgtata tgggtagtta cactga 296
<210> 386
<211> 307
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 386
cagattgtgg tgacccagga accatcactg tcagtgtctc caggagggac actcacactc 60
acttgtggcc tcagctctgg gtcagtcact acaagtaact accccagctg gtaccagcag 120
accccaggcc aggctcctag cacagttatc tacaacacaa acagccgccc ctctggtgtc 180
cctgatcact tctctggatc cgtctctggg aacaaagccg ccctcatcat cacaggagcc 240
cagcctgagg acgaggctga tgactactct gttgcagaac atgtcagtgg gagcagcttc 300
acttacc 307
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<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 387
cagactgtgg taacccagga gccatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtctct acaagtaatt accctggctg gtaccagcag 120
acccaaggcc gggctcctcg cacgattatc tacaacacaa gcagccgccc ctctggggtc 180
cctaatcgct tctctggatc catctctgga aacaaagccg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcccgagg atgaggctga ctattactgt tccttgtata cgggtagtta cactga 296
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<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 388
cagactgtgg tcaccaagga tccatcactc tcagtgtttc caggagggac agtcacattc 60
acatgtggcc tcagctctgg gtcagtcttt acaagtaact accccagctg gtaccagcag 120
acccatggcc gggctcctcg catgcttatc tacagcacaa gcagctgccc ccccggggtc 180
cctgatcgct tctctggatc catctctggg aacaaagttg ccctcaccat cacaggagcc 240
cagcctgagg atgagactat tattgttcac tgtgtatggg tagtacattt a 291
<210> 389
<211> 296
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 389
cagactgtgg tcacccagaa gccatcactc tcagtgtctc caggagggac agtcacactc 60
atatgtggcc tcagctctgg gtcagtctct acaagtaatt accctggctg gtaccagcag 120
acccaaggcc gggcttctcg cacaattatc tacagcacaa gcagccgccc ctctggggtc 180
cctaatcgct tccctggatc catctctggg aacaaagccg ccctcatcat cacaggagcc 240
cagcctgagg acgaggctga ctattactgt tccttgtata tgggtagtta cactga 296
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<211> 38
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 390
ttgggtattc ggtgaaggga cccagctgac cgtcctcg 38
<210> 391
<211> 38
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 391
tatggtattc ggcagaggga cccagctgac catcctcg 38
<210> 392
<211> 38
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 392
tagtgtgttc ggcggaggca cccatctgac cgtcctcg 38
<210> 393
<211> 38
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 393
ttacgtgttc ggctcaggaa cccaactgac cgtccttg 38
<210> 394
<211> 38
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 394
tattgtgttc ggcggaggca cccatctgac cgtcctcg 38
<210> 395
<211> 38
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 395
tggtgtgttc ggcggaggca cccacctgac cgtcctcg 38
<210> 396
<211> 38
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 396
tgctgtgttc ggcggaggca cccacctgac cgtcctcg 38
<210> 397
<211> 38
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 397
tgctgtgttc ggcggaggca cccacctgac cgtcctcg 38
<210> 398
<211> 38
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 398
ttacgtgttc ggctcaggaa cccaactgac cgtccttg 38
<210> 399
<211> 306
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
<223> a、c、t、g、未知或其他
<400> 399
nagtccaaaa ccagccccag tgtgttcccg ctgagcctct gccaccagga gtcagaaggg 60
tacgtggtca tcggctgcct ggtgcaggga ttcttcccac cggagcctgt gaacgtgacc 120
tggaatgccg gcaaggacag cacatctgtc aagaacttcc cccccatgaa ggctgctacc 180
ggaagcctat acaccatgag cagccagttg accctgccag ccgcccagtg ccctgatgac 240
tcgtctgtga aatgccaagt gcagcatgct tccagcccca gcaaggcagt gtctgtgccc 300
tgcaaa 306
<210> 400
<211> 342
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 400
gataactgtc atccgtgtcc tcatccaagt ccctcgtgca atgagccccg cctgtcacta 60
cagaagccag ccctcgagga tctgctttta ggctccaatg ccagcctcac atgcacactg 120
agtggcctga aagaccccaa gggtgccacc ttcacctgga acccctccaa agggaaggaa 180
cccatccaga agaatcctga gcgtgactcc tgtggctgct acagtgtgtc cagtgtccta 240
ccaggctgtg ctgatccatg gaaccatggg gacaccttct cctgcacagc cacccaccct 300
gaatccaaga gcccgatcac tgtcagcatc accaaaacca ca 342
<210> 401
<211> 387
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 401
gagcacatcc cgccccaggt ccacctgctg ccgccgccgt cggaagagct ggccctcaat 60
gagctggtga cactgacgtg cttggtgagg ggcttcaaac caaaagatgt gctcgtacga 120
tggctgcaag ggacccagga gctaccccaa gagaagtact tgacctggga gcccctgaag 180
gagcctgacc agaccaacat gtttgccgtg accagcatgc tgagggtgac agccgaagac 240
tggaagcagg gggagaagtt ctcctgcatg gtgggccacg aggctctgcc catgtccttc 300
acccagaaga ccatcgaccg cctggcgggt aaacccaccc acgtcaacgt gtctgtggtc 360
atggcagagg tggacggcat ctgctac 387
<210> 402
<211> 213
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 402
gactcacagt gtcttgcagg ttaccgggag ccacttccct ggctggtgct ggacctgtcg 60
caggaggacc tggaggagga tgccccagga gccagcctgt ggcccactac cgtcaccctt 120
ctcaccctct tcctactgag tctcttctac agcacagcac tgactgtgac aagcgtgcgg 180
ggcccaactg acagcagaga gggcccccag tac 213
<210> 403
<211> 285
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 403
gaatcgtcac ttctgctccc cttggtctca ggatgtaagg tcccaaaaaa tggtgaggac 60
ataaccctgg cctgcttggc aaaaggaccc ttcctagatt ctgtgcgggt cacgacaggc 120
ccagagtcac aggcccagat ggaaaagacc acactgaaga tgctaaagat accggaccac 180
actcaggtgt ctctcctgtc caccccctgg aaaccaggcc tgcactactg cgaagccatc 240
aggaaagata acaaagagaa gctgaagaaa gccatccact ggcca 285
<210> 404
<211> 90
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 404
gcatcctggg aaactgctat ctccctgttg actcatgcgc catcccgacc ccaggaccac 60
acccaagccc ccagcatggc cagggtctca 90
<210> 405
<211> 69
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 405
gtgcctccca ccagccacac ccagacgcaa gcccaggagc caggatgccc agtggacacc 60
atcctcaga 69
<210> 406
<211> 327
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 406
gagtgttgga accacaccca ccctcccagc ctctacatgc tgcgccctcc cctgcgggga 60
ccatggctcc agggagaagc tgctttcacc tgcctggtgg tgggagatga ccttcagaag 120
gcccacctgt cctgggaggt agccggggcg ccccccagcg aggctgtgga ggagaggcca 180
ctgcaggagc atgagaatgg ctcccagagc tggagcagcc gcctggtctt gcccatatcc 240
ctgtgggcct caggagccaa catcacctgc acgctgagcc tccccagcat gccttcccag 300
gtggtgtccg cagcagccag agagcat 327
<210> 407
<211> 312
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 407
gctgccagag cacccagcag cctcaatgtc catgccctga ccatgcccag agcagcctcc 60
tggttcctgt gcgaggtgtc cggcttctca ccccctgaca tcctcctcac ctggatcaag 120
gaccagattg aggtggaccc ttcttggttc gccactgcac cccccatggc ccagccgggc 180
agtggcacgt tccagacctg gagtctcctg cgtgtcctcg ctccccaggg ccctcacccg 240
cccacctaca cgtgtgtagt caggcacgag gcctcccgga agctgctcaa caccagctgg 300
agcctggaca gt 312
<210> 408
<211> 150
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 408
ggtctgacca tgaccccccc agcccctcag agccacgacg agagcagcgg ggactccatg 60
gatctggaag atgccagcgg actgtggccc acgttcgctg ccctcttcgt cctcactctg 120
ctctacagcg gcttcgtcac cttcctcaaa 150
<210> 409
<211> 6
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 409
gtgaag 6
<210> 410
<211> 297
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
<223> a、c、t、g、未知或其他
<400> 410
nccaccagcc aggacctgtc tgtgttcccc ttggcctcct gctgtaaaga caacatcgcc 60
agtacctctg ttacactggg ctgtctggtc accggctatc tccccatgtc gacaactgtg 120
acctgggaca cggggtctct aaataagaat gtcacgacct tccccaccac cttccacgag 180
acctacggcc tccacagcat cgtcagccag gtgaccgcct cgggcgagtg ggccaaacag 240
aggttcacct gcagcgtggc tcacgctgag tccaccgcca tcaacaagac cttcagt 297
<210> 411
<211> 324
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 411
gcatgtgcct taaacttcat tccgcctacc gtgaagctct tccactcctc ctgcaacccc 60
gtcggtgata cccacaccac catccagctc ctgtgcctca tctctggcta cgtcccaggt 120
gacatggagg tcatctggct ggtggatggg caaaaggcta caaacatatt cccatacact 180
gcacccggca caaaggaggg caacgtgacc tctacccaca gcgagctcaa catcacccag 240
ggcgagtggg tatcccaaaa aacctacacc tgccaggtca cctatcaagg ctttaccttt 300
aaagatgagg ctcgcaagtg ctca 324
<210> 412
<211> 321
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 412
gagtccgacc cccgaggcgt gagcagctac ctgagcccac ccagccccct tgacctgtat 60
gtccacaagg cgcccaagat cacctgcctg gtagtggacc tggccaccat ggaaggcatg 120
aacctgacct ggtaccggga gagcaaagaa cccgtgaacc cgggcccttt gaacaagaag 180
gatcacttca atgggacgat cacagtcacg tctaccctgc cagtgaacac caatgactgg 240
atcgagggcg agacctacta ttgcagggtg acccacccgc acctgcccaa ggacatcgtg 300
cgctccattg ccaaggcccc t 321
<210> 413
<211> 339
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 413
ggcaagcgtg cccccccgga tgtgtacttg ttcctgccac cggaggagga gcaggggacc 60
aaggacagag tcaccctcac gtgcctgatc cagaacttct tccccgcgga catttcagtg 120
caatggctgc gaaacgacag ccccatccag acagaccagt acaccaccac ggggccccac 180
aaggtctcgg gctccaggcc tgccttcttc atcttcagcc gcctggaggt tagccgggtg 240
gactgggagc agaaaaacaa attcacctgc caagtggtgc atgaggcgct gtccggctct 300
aggatcctcc agaaatgggt gtccaaaacc cccggtaaa 339
<210> 414
<211> 129
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 414
gagctccagg agctgtgcgc ggatgccact gagagtgagg agctggacga gctgtgggcc 60
agcctgctca tcttcatcac cctcttcctg ctcagcgtga gctacggcgc caccagcacc 120
ctcttcaag 129
<210> 415
<211> 81
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 415
gtgaagtggg tactcgccac cgtcctgcag gagaagccac aggccgccca agactacgcc 60
aacatcgtgc ggccggcaca g 81
<210> 416
<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 416
gcctccacca cggccccctc ggttttccca ctggccccca gctgcgggtc cacttccggc 60
tccacggtgg ccctggcctg cctggtgtca ggctacttcc ccgagcctgt aactgtgtcc 120
tggaattccg gctccttgac cagcggtgtg cacaccttcc cgtccgtcct gcagtcctca 180
gggcttcact ccctcagcag catggtgaca gtgccctcca gcaggtggcc cagcgagacc 240
ttcacctgca acgtggtcca cccagccagc aacactaaag tagacaagcc a 291
<210> 417
<211> 42
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 417
gtgttcaatg aatgcagatg cactgataca cccccatgcc ca 42
<210> 418
<211> 330
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 418
gtccctgaac ctctgggagg gccttcggtc ctcatctttc ccccgaaacc caaggacatc 60
ctcaggatta cccgaacacc cgaggtcacc tgtgtggtgt tagatctggg ccgtgaggac 120
cctgaggtgc agatcagctg gttcgtggat ggtaaggagg tgcacacagc caagacccag 180
tctcgtgagc agcagttcaa cggcacctac cgtgtggtca gcgtcctccc cattgagcac 240
caggactggc tcacagggaa ggagttcaag tgcagagtca accacataga cctcccgtct 300
cccatcgaga ggaccatctc taaggccaga 330
<210> 419
<211> 330
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 419
gggagggccc ataagcccag tgtgtatgtc ctgccgccat ccccaaagga gttgtcatcc 60
agtgacacag tcagcatcac ctgcctgata aaagacttct acccacctga cattgatgtg 120
gagtggcaga gcaatggaca gcaggagccc gagaggaagc accgcatgac cccgccccag 180
ctggacgagg acgggtccta cttcctgtac agcaagctct ctgtggacaa gagccgctgg 240
cagcagggag accccttcac atgtgcggtg atgcatgaaa ctctacagaa ccactacaca 300
gatctatccc tctcccattc tccgggtaaa 330
<210> 420
<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
<223> a、c、t、g、未知或其他
<400> 420
ncctccacca cggccccctc ggttttccca ctggccccca gctgcgggtc cacttccggc 60
tccacggtgg ccctggcctg cctggtgtca ggctacttcc ccgagcctgt aactgtgtcc 120
tggaattccg gctccttgac cagcggtgtg cacaccttcc cgtccgtcct gcagtcctca 180
gggctctact ccctcagcag catggtgaca gtgccctcca gcaggtggcc cagcgagacc 240
ttcacctgca acgtggccca cccggccagc aaaactaaag tagacaagcc a 291
<210> 421
<211> 57
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 421
gtgcccaaaa gagaaaatgg aagagttcct cgcccacctg attgtcccaa atgccca 57
<210> 422
<211> 330
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 422
gcccctgaaa tgctgggagg gccttcggtc ttcatctttc ccccgaaacc caaggacacc 60
ctcttgattg cccgaacacc tgaggtcaca tgtgtggtgg tggatctgga cccagaagac 120
cctgaggtgc agatcagctg gttcgtggac ggtaagcaga tgcaaacagc caagactcag 180
cctcgtgagg agcagttcaa tggcacctac cgtgtggtca gtgtcctccc cattgggcac 240
caggactggc tcaaggggaa gcagttcacg tgcaaagtca acaacaaagc cctcccatcc 300
ccgatcgaga ggaccatctc caaggccaga 330
<210> 423
<211> 327
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 423
gggcaggccc atcaacccag tgtgtatgtc ctgccgccat cccgggagga gttgagcaag 60
aacacagtca gcttgacatg cctgatcaaa gacttcttcc cacctgacat tgatgtggag 120
tggcagagca atggacagca ggagcctgag agcaagtacc gcacgacccc gccccagctg 180
gacgaggacg ggtcctactt cctgtacagc aagctctctg tggacaagag ccgctggcag 240
cggggagaca ccttcatatg tgcggtgatg catgaagctc tacacaacca ctacacacag 300
aaatccctct cccattctcc gggtaaa 327
<210> 424
<211> 132
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 424
gagctgatcc tggatgacag ctgtgctgag gaccaggacg gggagctgga cgggctgtgg 60
accaccatct ccatcttcat caccctcttc ctgctcagcg tgtgctacag cgccactgtc 120
accctcttca ag 132
<210> 425
<211> 81
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 425
gtgaagtgga tcttctcatc agtggtggag ctgaagcgca cgattgtccc cgactacagg 60
aatatgatcg ggcagggggc c 81
<210> 426
<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 426
gcctccacca cggccccctc ggttttccca ctggccccca gctgtgggtc ccaatccggc 60
tccacggtgg ccctggcctg cctggtgtca ggctacatcc ccgagcctgt aactgtgtcc 120
tggaattccg tctccttgac cagcggtgtg cacaccttcc cgtccgtcct gcagtcctca 180
gggctctact ccctcagcag catggtgaca gtgccctcca gcaggtggcc cagcgagacc 240
ttcacctgca atgtggccca cccggccacc aacactaaag tagacaagcc a 291
<210> 427
<211> 51
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 427
gtggccaaag aatgcgagtg caagtgtaac tgtaacaact gcccatgccc a 51
<210> 428
<211> 330
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 428
ggttgtggcc tgctgggagg gccttcggtc ttcatctttc ccccaaaacc caaggacatc 60
ctcgtgactg cccggacacc cacagtcact tgtgtggtgg tggatctgga cccagaaaac 120
cctgaggtgc agatcagctg gttcgtggat agtaagcagg tgcaaacagc caacacgcag 180
cctcgtgagg agcagtccaa tggcacctac cgtgtggtca gtgtcctccc cattgggcac 240
caggactggc tttcagggaa gcagttcaag tgcaaagtca acaacaaagc cctcccatcc 300
cccattgagg agatcatctc caagacccca 330
<210> 429
<211> 327
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 429
gggcaggccc atcagcctaa tgtgtatgtc ctgccgccat cgcgggatga gatgagcaag 60
aatacggtca ccctgacctg tctggtcaaa gacttcttcc cacctgagat tgatgtggag 120
tggcagagca atggacagca ggagcctgag agcaagtacc gcatgacccc gccccagctg 180
gatgaagatg ggtcctactt cctatacagc aagctctccg tggacaagag ccgctggcag 240
cggggagaca ccttcatatg tgcggtgatg catgaagctc tacacaacca ctacacacag 300
atatccctct cccattctcc gggtaaa 327
<210> 430
<211> 291
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 430
gcctccacca cggccccctc ggttttccca ctggccccca gctgcgggtc cacttccggc 60
tccacggtgg ccctggcctg cctggtgtca ggctacttcc ccgagcctgt aactgtgtcc 120
tggaattccg gctccttgac cagcggtgtg cacaccttcc cgtccgtcct gcagtcctca 180
gggctctact ccctcagcag cacggtgaca gtgccctcca gcaggtggcc cagcgagacc 240
ttcacctgca acgtggtcca cccggccagc aacactaaag tagacaagcc a 291
<210> 431
<211> 42
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 431
gtgcccaaag agtccacctg caagtgtata tccccatgcc ca 42
<210> 432
<211> 330
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 432
gtccctgaat cactgggagg gccttcggtc ttcatctttc ccccgaaacc caaggacatc 60
ctcaggatta cccgaacacc cgagatcacc tgtgtggtgt tagatctggg ccgtgaggac 120
cctgaggtgc agatcagctg gttcgtggat ggtaaggagg tgcacacagc caagacgcag 180
cctcgtgagc agcagttcaa cagcacctac cgtgtggtca gcgtcctccc cattgagcac 240
caggactggc tcaccggaaa ggagttcaag tgcagagtca accacatagg cctcccgtcc 300
cccatcgaga ggactatctc caaagccaga 330
<210> 433
<211> 330
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 433
gggcaagccc atcagcccag tgtgtatgtc ctgccaccat ccccaaagga gttgtcatcc 60
agtgacacgg tcaccctgac ctgcctgatc aaagacttct tcccacctga gattgatgtg 120
gagtggcaga gcaatggaca gccggagccc gagagcaagt accacacgac tgcgccccag 180
ctggacgagg acgggtccta cttcctgtac agcaagctct ctgtggacaa gagccgctgg 240
cagcagggag acaccttcac atgtgcggtg atgcatgaag ctctacagaa ccactacaca 300
gatctatccc tctcccattc tccgggtaaa 330
<210> 434
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
<223> a、c、t、g、未知或其他
<400> 434
nagagtccat cccctccaaa cctcttcccc ctcatcacct gtgagaactc cctgtccgat 60
gagaccctcg tggccatggg ctgcctggcc cgggacttcc tgcctggctc catcaccttc 120
tcctggaagt acgagaacct cagtgcaatc aacaaccagg acattaagac cttcccttca 180
gttctgagag agggcaagta tgtggcgacc tctcaggtgt tcctgccctc cgtggacatc 240
atccagggtt cagacgagta catcacatgc aacgtcaagc actccaatgg tgacaaatct 300
gtgaacgtgc ccatcaca 318
<210> 435
<211> 339
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 435
gggcctgtac caacgtctcc caacgtgact gtcttcatcc caccccgcga cgccttctct 60
ggcaatggcc agcgcaagtc ccagctcatc tgccaggctg caggtttcag ccccaagcag 120
atttccgtgt cttggttccg tgatggaaag cagattgagt ctggcttcaa cacagggaag 180
gcagaggccg aggagaaaga gcatgggcct gtgacctaca gcatcctcag catgctgacc 240
atcaccgaga gtgcctggct cagccagagc gtgttcacct gccacgtgga gcacaatggg 300
atcatcttcc agaagaacgt gtcctccatg tgcacctcc 339
<210> 436
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 436
aatacacccg ttggcatcag catcttcacc atccccccct cctttgccag catcttcaac 60
accaagtcag ccaagctgtc ctgcctggtc actgacctgg ccacttatga cagcctgacc 120
atctcctgga cccgtcagaa tggcgaggct ctgaaaaccc acaccaacat ctctgagagc 180
catcccaaca acaccttcag tgccatgggg gaagccactg tctgcgtgga ggaatgggag 240
tcaggcgagc agttcacctg cacagtgacc cacacagatc tgccctcacc gctgaagaag 300
accatctcca ggcccaag 318
<210> 437
<211> 393
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 437
gatgtcaaca agcacatgcc ttctgtctac gtcctgcccc cgagccggga gcagctgagc 60
ctgcgggaat cggcctcact cacctgcctg gtgaaaggct tctcaccccc agatgtgttc 120
gtgcagtggc tgcagaaggg ccagcccgtg ccccctgaca gctacgtgac cagcgccccg 180
atgcccgagc cccaagcccc cggcctctac tttgtccaca gcatcctgac cgtgagtgag 240
gaggactgga atgccgggga gacctacacc tgtgttgtag gccatgaggc cctgccccat 300
gtggtgaccg agaggagcgt ggacaagtcc accggtaaac ccaccttgta caacgtgtcc 360
ctggtcttat ctgacacagc cagcacctgc tac 393
<210> 438
<211> 117
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 438
gggggggagg tgagtgccga ggaggaaggc ttcgagaacc tgaataccat ggcatccacc 60
ttcatcgtcc tcttcctcct cagtgtcttc tacagcacca cagtcactct gttcaag 117
<210> 439
<211> 6
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 439
gtgaaa 6
<210> 440
<211> 330
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 440
cggaatgatg cccagccagc cgtctatttg ttccaaccat ctccagacca gttacacaca 60
ggaagtgcct ctgttgtgtg cttgctgaat agcttctacc ccaaagacat caatgtcaag 120
tggaaagtgg atggtgtcat ccaagacaca ggcatccagg aaagtgtcac agagcaggac 180
aaggacagta cctacagcct cagcagcacc ctgacgatgt ccagtactga gtacctaagt 240
catgagttgt actcctgtga gatcactcac aagagcctgc cctccaccct catcaagagc 300
ttccaaagga gcgagtgtca gagagtggac 330
<210> 441
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 441
ggtcagccca agtcctcccc cttggtcaca ctcttcccgc cctcctctga ggagctcggc 60
gccaacaagg ctaccctggt gtgcctcatc agcgacttct accccagtgg cctgaaagtg 120
gcttggaagg cagatggcag caccatcatc cagggcgtgg aaaccaccaa gccctccaag 180
cagagcaaca acaagtacac ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga caagtggaaa 240
tctcacagca gcttcagctg cctggtcacg caccagggga gcaccgtgga gaagaaggtg 300
gcccctgcag agtgctct 318
<210> 442
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 442
ggtcagccca aggcctcccc ctcagtcaca ctcttcccac cctcctctga ggagctcggc 60
gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc agcgacttct accccagcgg cgtgacggtg 120
gcctggaagg cagacggcag ccccggcatc cagggcgtgg agaccaccaa gccctccaag 180
cagagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga caagtggaaa 240
tctcacagca gcttcagctg cctggtcacg catgagggga gcaccgtgga gaagaaggtg 300
gcccccgcag agtgctct 318
<210> 443
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 443
ggtcagccca aggcctcccc ctcggtcaca ctcttcccgc cctcctctga ggagctcggc 60
gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc agcgacttct accccagtgg cgtgacggtg 120
gcctggaagg cagacggcag ccccgtcacc cagggcgtgg agaccaccaa gccctccaag 180
cagagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga caagtggaaa 240
tctcacagca gcttcagctg cctggtcaca cacgagggga gcaccgtgga gaagaaggtg 300
gcccccgcag agtgctct 318
<210> 444
<211> 289
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 444
ggtcagccca aggcctcccc ctcggtcaca ctcttcccgc cctcctctga ggagctcggc 60
gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc agcgacttct accccagcgg tgtgacggtg 120
gcctggaagg cagacggcag ccccgtcacc cagggcgtgg agaccaccaa gccctccaag 180
cagagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga caagtggaaa 240
tctcacagca gcttcagctg cctggtcaca cacgagggga gcactgtgg 289
<210> 445
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 445
ggtcagccca aggcctcccc ttcggtcaca ctcttcccgc cctcctctga ggagcttggc 60
gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc agcgacttct accccagcgg cgtgacagtg 120
gcctggaagg cagacggcag ccccatcacc cagggtgtgg agaccaccaa gccctccaag 180
cagagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga caagtggaaa 240
tctcacagca gcttcagctg cctggtcacg cacgagggga gcaccgtgga gaagaaggtg 300
gcccccgcag agtgctct 318
<210> 446
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 446
ggtcagccca aggcctcccc ctcggtcaca ctcttcccgc cctcctctga ggagctcggc 60
gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc agcgacttct accccagcgg tgtgacggtg 120
gcctggaagg cagacggcag ccccgtcacc cagggcgtgg agaccaccaa gccctccaag 180
cagagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga caagtggaaa 240
tctcacagca gcttcagctg cctggtcacg cacgagggga gcaccgtgga gaagaaggtg 300
gcccccgcag agtgctct 318
<210> 447
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 447
ggtcagccca aggcctcccc ctcggtcaca ctcttcccgc cctcctctga ggagctcggc 60
gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc agcgacttct accccagcgg cgtgacggtg 120
gcctggaagg cagacggcag ccccgtcacc cagggcgtgg agaccaccaa gccctccaag 180
cagagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga caagtggaaa 240
tctcacagca gcttcagctg cctggtcacg cacgagggga gcaccgtgga gaagaaggtg 300
gcccccgcag agtgctct 318
<210> 448
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 448
ggtcagccca aggcctcccc ctcggtcaca ctcttcccgc cctcctctga ggagctcggc 60
gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc agcgacttct accccagcgg cgtgacggtg 120
gcctggaagg cagacggcag ccccgtcacc cagggcgtgg agaccaccaa gccctccaag 180
cagagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga caagtggaaa 240
tctcacagca gcttcagctg cctggtcacg cacgagggga gcaccgtgga gaagaaggtg 300
gcccccgcag agtgctct 318
<210> 449
<211> 318
<212> DNA
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 449
ggtcagccca aggcctcccc ctcggtcaca ctcttcccgc cctcctctga ggagctcggc 60
gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc agcgacttct accccagcgg cgtgacggtg 120
gcctggaagg cagacggcag ccccatcacc cagggcgtgg agaccaccaa gccctccaag 180
cagagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga caagtggaaa 240
tctcacagca gcttcagctg cctggtcacg cacgagggga gcactgtgga gaagaaggtg 300
gcccccgcag agtgctct 318
<210> 450
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成引物"
<400> 450
acataataca ctgaaatgga gccc 24
<210> 451
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成引物”
<400> 451
gtccttggtc aacgtgaggg 20
<210> 452
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成引物”
<400> 452
cataatacac tgaaatggag ccct 24
<210> 453
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成引物”
<400> 453
gcaacagtgg taggtcgctt 20
<210> 454
<211> 100
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 454
atttctgtac ctgatctatg tcaatatctg taccatggct ctagcagaga tgaaatatga 60
gacagtctga tgtcatgtgg ccatgcctgg tccagacttg 100
<210> 455
<211> 100
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 455
gtcaatcagc agaaatccat catacatgag acaaagttat aatcaagaaa tgttgcccat 60
aggaaacaga ggatatctct agcactcaga gactgagcac 100
<210> 456
<211> 1103
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 456
gcattgaata aaccagtata aacaagcaag caaagataga tagatagata gatagataga 60
tagatagata catagataga tagatagata gatagatgat agatagatag atagatagat 120
agatttttac gtataataca ataaaaacat tcattgtccc tctattggtg actactcaag 180
gaaaaaaatg ttcatatgca agaaaaaatg ttatcattac cagatgatcc agcaatctag 240
caatatatat attgtttatt cacaaaacat gaatgaacct tttaagaagc tgttacagtg 300
taaaaattaa gttaaatcac tgaagaacat atactgtgtg atttcattca aatgaaattt 360
gagaagtaaa tatatatgta tatatatata tatgtaaaaa atataagtct gaactacaaa 420
aattcaattt gtttgatatg taagaataag aaaaattgac ccccaaaatt tgttaataat 480
taggtatgtg tatttttatg aatatataag tataataatg cttatagtat acactattct 540
gaatcacatt tattccctaa gtgtgttccc ttgattataa ttaaaagtat attttttaaa 600
tacagagtca gagtacagtc aataaggcga aaatatagtt gaatgatttg cttcagcttt 660
tgtaatgtac tagagattgt gagtacaaag tctcagagct cattttatcc ctgacaataa 720
ccagctctgt gcttcaagta catttccatc tttctctgaa atttagtctt atatagatag 780
acaaaattta agtaaatttc aaactacaca gaacaactaa gttgttgttt catattgata 840
atggatttga actgcattaa cagaacttta acatcctgct tattctccct tcagccatca 900
tattttgctt tattattttc actttttgag ttatttttca cattcagaaa gctcacataa 960
ttgtcacttc tttgtatact ggtatacaga ccagaacatt tgcatattgt tccctgggga 1020
ggtctttgcc ctgttggcct gagataaaac ctcaagtgtc ctcttgcctc cactgatcac 1080
tctcctatgt ttatttcctc aaa 1103
<210> 457
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”
<400> 457
atgaggttcc cttctcagct cctggggctg ctgatgctct ggatcc 46
<210> 458
<211> 377
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 458
caggtaagga cagggcggag atgaggaaag acatgggggc gtggatggtg agctcccctg 60
gtgctgtttc tctccctgtg tattctgtgc atgggacaga ttgccctcca acagggggaa 120
tttaattttt agactgtgag aattaagaag aatataaaat atttgatgaa cagtacttta 180
gtgagatgct aaagaagaaa gaagtcactc tgtcttgcta tcttgggttt tccatgataa 240
ttgaatagat ttaaaatata aatcaaaatc aaaatatgat ttagcctaaa atatacaaaa 300
cccaaaatga ttgaaatgtc ttatactgtt tctaacacaa cttgtactta tctctcatta 360
ttttaggatc cagtggg 377
<210> 459
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”
<400> 459
aggatccagt ggg 13
<210> 460
<211> 297
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 460
gatattgtca tgacacagac cccactgtcc ctgtctgtca gccctggaga gactgcctcc 60
atctcctgca aggccagtca gagcctcctg cacagtgatg gaaacacgta tttgaactgg 120
ttccgacaga agccaggcca gtctccacag cgtttaatct ataaggtctc caacagagac 180
cctggggtcc cagacaggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac cctgagaatc 240
agcagagtgg aggctgacga tactggagtt tattactgcg ggcaaggtat acaagat 297
<210> 461
<211> 7
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”
<400> 461
cacagtg 7
<210> 462
<211> 142
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 462
atacagactc tatcaaaaac ttccttgcct ggggcagccc agctgacaat gtgcaatctg 60
aagaggagca gagagcatct tgtgtctgtg tgagaaggag gggctgggat acatgagtaa 120
ttctttgcag ctgtgagctc tg 142
<210> 463
<211> 1103
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 463
gcattgaata aaccagtata aacaagcaag caaagataga tagatagata gatagataga 60
tagatagata catagataga tagatagata gatagatgat agatagatag atagatagat 120
agatttttac gtataataca ataaaaacat tcattgtccc tctattggtg actactcaag 180
gaaaaaaatg ttcatatgca agaaaaaatg ttatcattac cagatgatcc agcaatctag 240
caatatatat attgtttatt cacaaaacat gaatgaacct tttaagaagc tgttacagtg 300
taaaaattaa gttaaatcac tgaagaacat atactgtgtg atttcattca aatgaaattt 360
gagaagtaaa tatatatgta tatatatata tatgtaaaaa atataagtct gaactacaaa 420
aattcaattt gtttgatatg taagaataag aaaaattgac ccccaaaatt tgttaataat 480
taggtatgtg tatttttatg aatatataag tataataatg cttatagtat acactattct 540
gaatcacatt tattccctaa gtgtgttccc ttgattataa ttaaaagtat attttttaaa 600
tacagagtca gagtacagtc aataaggcga aaatatagtt gaatgatttg cttcagcttt 660
tgtaatgtac tagagattgt gagtacaaag tctcagagct cattttatcc ctgacaataa 720
ccagctctgt gcttcaagta catttccatc tttctctgaa atttagtctt atatagatag 780
acaaaattta agtaaatttc aaactacaca gaacaactaa gttgttgttt catattgata 840
atggatttga actgcattaa cagaacttta acatcctgct tattctccct tcagccatca 900
tattttgctt tattattttc actttttgag ttatttttca cattcagaaa gctcacataa 960
ttgtcacttc tttgtatact ggtatacaga ccagaacatt tgcatattgt tccctgggga 1020
ggtctttgcc ctgttggcct gagataaaac ctcaagtgtc ctcttgcctc cactgatcac 1080
tctcctatgt ttatttcctc aaa 1103
<210> 464
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”
<400> 464
atgatgagtc ctgcccagtt cctgtttctg ttagtgctct ggattcagg 49
<210> 465
<211> 386
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 465
gtaaggagtt ttggaatgtg agggatgaga atggggatgg agggtgatct ctggatgcct 60
atgtgtgctg tttatttgtg gtggggcagg tcatatcttc cagaatgtga ggttttgtta 120
catcctaatg agatattcca catggaacag tatctgtact aagatcagta ttctgacata 180
gattggatgg agtggtatag actccatcta taatggatga tgtttagaaa cttcaacact 240
tgttttatga caaagcattt gatatataat atttttaaat ctgaaaaact gctaggatct 300
tacttgaaag gaatagcata aaagatttca caaaggttgc tcaggatctt tgcacatgat 360
tttccactat tgtattgtaa tttcag 386
<210> 466
<211> 11
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”
<400> 466
aaaccaacgg t 11
<210> 467
<211> 297
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 467
gatattgtca tgacacagac cccactgtcc ctgtctgtca gccctggaga gactgcctcc 60
atctcctgca aggccagtca gagcctcctg cacagtgatg gaaacacgta tttgaactgg 120
ttccgacaga agccaggcca gtctccacag cgtttaatct ataaggtctc caacagagac 180
cctggggtcc cagacaggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac cctgagaatc 240
agcagagtgg aggctgacga tactggagtt tattactgcg ggcaaggtat acaagat 297
<210> 468
<211> 7
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”
<400> 468
cacagtg 7
<210> 469
<211> 142
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多核苷酸”
<400> 469
atacagactc tatcaaaaac ttccttgcct ggggcagccc agctgacaat gtgcaatctg 60
aagaggagca gagagcatct tgtgtctgtg tgagaaggag gggctgggat acatgagtaa 120
ttctttgcag ctgtgagctc tg 142
<210> 470
<211> 13
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 470
cttccttcct cag 13
<210> 471
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”
<400> 471
aaattaatta acc 13

Claims (41)

1.一种转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞包含含有工程化部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座的基因组，所述工程化部分犬科动物免疫球蛋白轻链基因座包含犬科动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因区段，其中所述工程化免疫球蛋白基因座能够表达包含犬科动物可变结构域的免疫球蛋白，并且其中所述转基因啮齿动物产生的包含λ轻链的免疫球蛋白比包含κ轻链的免疫球蛋白更多，或者产生包含λ轻链的免疫球蛋白的可能性比包含κ轻链的免疫球蛋白更大。
2.根据权利要求1所述的转基因啮齿动物，其中从所述啮齿动物分离出产生λ轻链的细胞的可能性比分离出产生κ轻链的细胞更大。
3.根据权利要求1所述的转基因啮齿动物，其中所述转基因啮齿动物产生至少约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％以及高达约100％的包含λ轻链的免疫球蛋白。
4.根据权利要求1所述的转基因啮齿动物细胞，其中所述转基因啮齿动物细胞或其后代具有至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％以及高达约100％的概率产生包含λ轻链的免疫球蛋白。
5.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述工程化免疫球蛋白基因座包含犬科动物Vλ基因区段编码序列和Jλ基因区段编码序列和来自啮齿动物免疫球蛋白轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列。
6.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述工程化免疫球蛋白基因座包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中的犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列。
7.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述部分犬科动物免疫球蛋白基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列和一个或更多个啮齿动物免疫球蛋白λ恒定区编码序列。
8.根据权利要求1至4中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述工程化免疫球蛋白基因座包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中的犬科动物Vλ和Jλ基因区段编码序列。
9.根据权利要求8所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述工程化免疫球蛋白可变区基因座包含一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列和一个或更多个J-C单元，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物λ恒定区编码序列。
10.根据权利要求9所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述啮齿动物λ恒定区编码序列包含啮齿动物Cλ1、Cλ2、Cλ3编码序列或其组合。
11.根据权利要求9至10所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞包含位于一个或更多个J-C单元上游的一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ编码序列。
12.根据权利要求9或10所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞包含位于一个或更多个J-C单元上游的一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列，其中每个J-C单元包含犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物Cλ编码序列和啮齿动物Cλ非编码序列。
13.根据权利要求9至12中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述J-C单元包含嵌入啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座的非编码调控或支架序列中的犬科动物Jλ基因区段编码序列和啮齿动物λ恒定区编码序列。
14.根据权利要求8所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述工程化免疫球蛋白基因座包括啮齿动物免疫球蛋白κ基因座，其中一个或更多个啮齿动物Vκ基因区段编码序列和一个或更多个啮齿动物Jκ基因区段编码序列已经缺失并且分别被一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列和一个或更多个Jλ基因区段编码序列取代，并且其中所述基因座中的啮齿动物Cκ编码序列已经被啮齿动物Cλ1、Cλ2、Cλ3编码序列或其组合取代。
15.根据权利要求14所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述工程化免疫球蛋白基因座包含位于一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列上游的一个或更多个犬科动物Vλ基因区段编码序列，所述一个或更多个犬科动物Jλ基因区段编码序列位于一个或更多个啮齿动物Cλ编码序列上游。
16.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中内源啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座因以下中的一种或更多种而缺失、失活或成为非功能性的：
a.缺失或突变全部内源啮齿动物Vκ基因区段编码序列；
b.缺失或突变全部内源啮齿动物Jκ基因区段编码序列；
c.缺失或突变全部内源啮齿动物Cκ编码序列；
d.缺失或突变啮齿动物Cκ编码序列的5’剪接位点和相邻的多聚嘧啶区；
e.缺失、突变或破坏内源内含子κ增强子(iEκ)和3’增强子序列。
17.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中内源啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变结构域的表达因以下中的一种或更多种而受抑制或失活：
a.缺失或突变全部内源啮齿动物Vλ基因区段
b.缺失或突变全部内源啮齿动物Jλ基因区段；和
c.缺失或突变全部内源啮齿动物Cλ编码序列。
18.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述工程化免疫球蛋白基因座表达包含犬科动物λ可变结构域和啮齿动物λ恒定结构域的免疫球蛋白轻链。
19.根据权利要求1至4中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞的基因组包含含有犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列的工程化免疫球蛋白基因座。
20.根据权利要求19所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列插入到啮齿动物免疫球蛋白κ轻链基因座中。
21.根据权利要求19或20所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列嵌入所述啮齿动物免疫球蛋白κ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中。
22.根据权利要求19至21中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述犬科动物Vκ和Jκ编码序列插入到啮齿动物免疫球蛋白κ轻链恒定区编码序列的上游。
23.根据权利要求1至4中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞的基因组包含含有插入到啮齿动物免疫球蛋白λ轻链基因座中的犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列的工程化免疫球蛋白基因座。
24.根据权利要求23所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列嵌入所述啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变区基因座的啮齿动物非编码调控或支架序列中。
25.根据权利要求23或24所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞包含插入所述犬科动物Vκ和Jκ基因区段编码序列下游的啮齿动物免疫球蛋白κ轻链恒定区编码序列。
26.根据权利要求25所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述啮齿动物免疫球蛋白κ轻链恒定区插入内源啮齿动物Cλ2编码序列的上游。
27.根据权利要求23至26中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中内源啮齿动物免疫球蛋白λ轻链可变结构域的表达因以下一种或更多种而受抑制或失活：
a.缺失或突变全部内源啮齿动物Vλ基因区段编码序列；
b.缺失或突变全部内源啮齿动物Jλ基因区段编码序列；和
c.缺失或突变全部内源Cλ编码序列或剪接位点。
28.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述工程化犬科动物免疫球蛋白轻链基因座包含啮齿动物内含子κ增强子(iEκ)和3’Eκ调控序列。
29.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述转基因啮齿动物或啮齿动物细胞包含工程化部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座，所述工程化部分犬科动物免疫球蛋白重链基因座包含犬科动物免疫球蛋白重链可变区基因编码序列和所述啮齿动物免疫球蛋白重链基因座的非编码调控或支架序列。
30.根据权利要求29所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述工程化犬科动物免疫球蛋白重链基因座包含犬科动物VH、D和JH基因区段。
31.根据权利要求30所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中每个犬科动物VH、D或JH编码基因区段包含嵌入所述啮齿动物免疫球蛋白重链基因座的非编码调控或支架序列中的VH、D或JH编码序列。
32.根据权利要求31所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中重链支架序列被功能性ADAM6A基因、ADAM6B基因或其组合间隔开。
33.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述啮齿动物调控或支架序列包括增强子、启动子、剪接位点、内含子、重组信号序列或其组合。
34.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中内源啮齿动物免疫球蛋白基因座已经缺失并且被所述工程化部分犬科动物免疫球蛋白基因座取代。
35.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述啮齿动物是小鼠或大鼠。
36.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述啮齿动物细胞是胚胎干(ES)细胞或早期胚胎的细胞。
37.根据前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物或啮齿动物细胞，其中所述啮齿动物细胞是小鼠或大鼠胚胎干(ES)细胞，或者小鼠或大鼠早期胚胎的细胞。
38.从前述权利要求中任一项所述的转基因啮齿动物获得的B淋巴细胞谱系细胞，其中所述工程化免疫球蛋白基因座表达包含犬科动物可变区和啮齿动物免疫球蛋白恒定区的嵌合免疫球蛋白重链或轻链。
39.来源于根据权利要求38所述的B淋巴细胞谱系细胞的杂交瘤细胞或永生化细胞系。
40.由权利要求38或39所述的细胞产生的抗体或其抗原结合部分。
41.来源于由权利要求38或39所述的细胞产生的免疫球蛋白的VH、D或JH或者VL或JL基因区段编码序列的核酸序列。
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