CN114480149B - 巴斯德毕赤酵母、发酵剂和它们在降解呕吐毒素或制备发酵饲料中的应用 - Google Patents

巴斯德毕赤酵母、发酵剂和它们在降解呕吐毒素或制备发酵饲料中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物领域，公开了巴斯德毕赤酵母、发酵剂和它们在降解呕吐毒素或制备发酵饲料中的应用。该巴斯德毕赤酵母的保藏编号为CGMCC No.23705，筛选自玉米浸泡水，该菌能在pH4‑7条件下生长并降解玉米浆中的呕吐毒素。将该菌与乳酸菌和芽孢杆菌复配制备成发酵剂进行饲料发酵时，能够提高发酵饲料的营养价值，其中，活菌数超过1010CFU/g，粗蛋白含量能达35重量％，降低呕吐毒素含量(低于1mg/kg)。

Description

巴斯德毕赤酵母、发酵剂和它们在降解呕吐毒素或制备发酵 饲料中的应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体涉及一株巴斯德毕赤酵母，一种发酵剂，一种发酵剂的制备方法，所述巴斯德毕赤酵母或所述发酵剂在降解呕吐毒素或制备发酵饲料中的应用，一种降解呕吐毒素方法，以及一种发酵饲料及其制备方法。
背景技术
玉米在生长和储存过程中经常受到真菌毒素污染，主要包括呕吐毒素(DON)、黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和伏马毒素。若将受真菌毒素污染的饲料直接饲喂动物，会引起机体免疫抑制反应、生产性能降低，并对肝脏、肾脏等器官造成严重损害。我国真菌毒素污染在饲料及饲料原料中普遍存在，其中，玉米及其副产物的呕吐毒素污染非常严重，检出率几乎达到100％(雷元培等，饲料工业，2020，41(10)：60)。
湿磨法生产玉米淀粉过程中产出约占玉米干物质20％的副产物玉米皮和玉米浸泡水。其中，玉米皮中含有大量半纤维素和纤维素以及少量蛋白质、脂肪等，直接将玉米皮用作饲料饲喂动物适口性比较差，难以被动物消化吸收；玉米浆是浓缩的玉米浸泡水，约含40％干物质，包括蛋白质、多糖、氨基酸、维生素和微量元素等营养成分。
利用湿磨法生产玉米淀粉的工艺中，DON主要分布在玉米浸泡水中，在玉米浆中进一步浓缩。在不少专利报道了利用玉米加工副产物以及其他原料生产发酵饲料的方法(CN201310753491.2、CN201811572545.4、CN201911402385.3等)，但同时实现发酵饲料生产和呕吐毒素降解的生产方法较少，亟需提供新的能够实现发酵饲料生产和呕吐毒素降解的菌株。
发明内容
为了解决目前利用玉米加工副产物生产发酵饲料时呕吐毒素污染严重的问题，本发明提供了一株巴斯德毕赤酵母，一种发酵剂，一种发酵剂的制备方法，所述巴斯德毕赤酵母或所述发酵剂在降解呕吐毒素或制备发酵饲料中的应用，一种降解呕吐毒素方法，以及一种发酵饲料及其制备方法。本发明提供的巴斯德毕赤酵母用于制备发酵饲料时，能够降低发酵饲料中的呕吐毒素的含量，还能够提高发酵饲料的营养价值。
因此，本发明第一方面提供了一株巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris，该巴斯德毕赤酵母的保藏编号为CGMCC No.23705。
本发明第二方面提供一种发酵剂，所述发酵剂包含如上所述的巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)。
优选地，所述发酵剂还含有乳酸菌和/或芽孢杆菌。
本发明第三方面提供一种发酵剂的制备方法，该方法包括：由如上所述的巴斯德毕赤酵母在酵母发酵培养基中进行发酵培养而制得。
优选地，该方法还包括引入乳酸菌和/或芽孢杆菌的步骤。
本发明第四方面提供如上所述的巴斯德毕赤酵母或如上所述的发酵剂或根据如上所述的制备方法制备的发酵剂在降解呕吐毒素或制备发酵饲料中的应用。
本发明第五方面提供一种降解呕吐毒素的方法，该方法包括将如上所述的巴斯德毕赤酵母或如上所述的发酵剂或根据如上所述的制备方法制备的发酵剂与含呕吐毒素的物料接触。
本发明第六方面提供一种发酵饲料的制备方法，该方法包括：将如上所述的发酵剂或根据如上所述的制备方法制备的发酵剂与固态发酵培养基接触并进行固态发酵，得到发酵饲料。
本发明第七方面提供一种发酵饲料，所述发酵饲料由第六方面所述的制备方法制备得到。
本发明提供的巴斯德毕赤酵母来自玉米浸泡水，能够在pH较宽(4-7)的范围内降解呕吐毒素，且具有较高的降解率。
本发明的巴斯德毕赤酵母易于培养和发酵，能够作为发酵剂用于发酵饲料的生产，同时实现呕吐毒素的原位脱毒。
在优选地情况下，将本发明所述的巴斯德毕赤酵母与乳酸菌和芽孢杆菌发酵剂组合使用生产发酵饲料时，能够进一步提高发酵饲料的营养价值，能够使得发酵饲料的粗蛋白含量达到35重量％，还能保证发酵饲料中的呕吐毒素含量低于1mg/kg。
综上，本发明针对玉米深加工副产品利用现状的特点，从玉米浸泡水中筛选中一株具有呕吐毒素降解能力的巴斯德毕赤酵母，利用该菌开发了一种同时实现发酵饲料生产和呕吐毒素原位脱毒的方法，生产过程简单，此发明对于玉米深加工副产品的综合利用和饲料中真菌毒素的降解具有重要意义。
本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
生物保藏
本发明提供的菌株的分类命名为巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris，于2021年11月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(缩写为CGMCC)，其保藏编号为CGMCC No.23705，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
附图说明
图1示出了本发明所述的巴斯德毕赤酵母在不同pH条件下对玉米浆中的DON降解率变化曲线。
图2示出了固体发酵过程中活菌数的变化。
图3示出了固态发酵时DON浓度的变化，柱状图代表的是DON浓度，线型图代表的是DON降解率。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明第一方面提供了一株巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris，该巴斯德毕赤酵母的保藏编号为CGMCC No.23705。
所述菌株筛选自玉米浸泡罐的老酸液，能够在pH为3.5-7.5(优选4-7)范围内生长，降解呕吐毒素。
本发明提供的菌株的分类命名为巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris，于2021年11月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(缩写为CGMCC)，其保藏编号为CGMCC No.23705，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
所述巴斯德毕赤酵母在使用前，可以先在酵母活化培养基中活化培养，得到酵母菌活化液。酵母活化基可以是本领域常用的培养基，比如可以为YPD培养基，或为玉米浆离心去除固体后的清液。活化培养的条件可以是本领域常规的条件，比如温度可以为28-37℃，培养时间可以为10-24h。经过活化培养的巴斯德毕赤酵母可以恢复活力，用于后续的培养和发酵。
所述活化培养可以在摇床中进行，培养过程中可以保持转速为150-220r/min。
优选地，活化液的OD600为5-11，更优选为10-11。
其中，YPD培养基配方优选包括：酵母膏5-15g/L，蛋白胨15-25g/L，葡萄糖15-25g/L。配制得到的YPD培养基可以在118-123℃下灭菌15-25min。当培养基为固体培养基时，优选还包含琼脂15-20g/L。
通过对巴斯德毕赤酵母的活化，得到的活化液可以用于后续的扩培和发酵，进而用于发酵剂的生产。
本发明第二方面提供一种发酵剂，所述发酵剂包含如上所述的巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)。
根据本发明，为了更进一步提高发酵产品的营养价值和风味，优选地，所述发酵剂还含有乳酸菌和/或芽孢杆菌。
其中，所述乳酸菌可以为本领域常规使用的乳酸菌，例如，所述乳酸菌可以包括但不限于乳杆菌、乳球菌和片球菌。优选地，所述乳酸菌为植物乳杆菌和/或干酪乳杆菌。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述乳酸菌包含植物乳杆菌和干酪乳杆菌，优选地，植物乳杆菌和干酪乳杆菌的活菌数之比为0.1-10：1。
其中，所述芽孢杆菌可以为本领域常规使用的芽孢杆菌，比如可以为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌，优选地，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌和/或地衣芽孢杆菌。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述芽孢杆菌包含枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌，优选地，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的活菌数之比为0.1-10：1。
应当理解的是，所述发酵剂中，巴斯德毕赤酵母、乳酸菌和芽孢杆菌可以单独存在，也可以以混合的形式存在，没有特别的限制。
优选地，所述发酵剂中，活菌数为108CFU/mL以上。
根据本发明，所述发酵剂中，巴斯德毕赤酵母、乳酸菌和芽孢杆菌的活菌数的比例可以在较宽的范围内选择，例如，巴斯德毕赤酵母、乳酸菌和芽孢杆菌的活菌数比为1-100：1-50：1。更优选地，巴斯德毕赤酵母和乳酸菌的活菌数比为1-10：1-5：1。
根据本发明，所述发酵剂的形式可以不受特别的限制，比如可以所述发酵剂以液体发酵剂、半液体发酵剂、浓缩发酵剂或固体发酵剂的形式存在。
其中，所述半液体发酵剂是指浓缩后的发酵液或者是和发酵底物混合的发酵液，固体菌剂可以是干燥制备得到的菌剂，例如，可以为冻干菌剂、喷雾干燥菌剂或真空干燥菌剂等。
本领域技术人员可以根据需要选择合适的制备方法制备所述菌剂。
第三方面，本发明提供了一种发酵剂的制备方法，该方法包括：由如上所述的巴斯德毕赤酵母在酵母发酵培养基中进行发酵培养而制得。
优选地，该方法包括：将如上所述的巴斯德毕赤酵母菌在酵母发酵培养基中进行培养，并使OD600达到5-11(优选为10-11)，得到的发酵液即为发酵剂。应当理解的是，还可以对发酵液进行后处理，以得到不同形态的发酵剂，本领域技术人员可以根据需要进行选择，在此不在赘述。
所述酵母发酵培养基可以含有糖化液和玉米浆，以干物质计，所述酵母发酵培养基中的糖化液的含量为20-50g/L，玉米浆的含量为2-4g/L。
其中，所述糖化液和玉米浆的制备方法可以为本领域常规的制备方法，在此不再赘述。
所述酵母在发酵培养前，可以按照第一方面所述的方法进行活化，得到的活化液可以按照1-5体积％接种到酵母发酵培养基中。
优选地，该方法还包括引入乳酸菌和/或芽孢杆菌的步骤。
其中，所述乳酸菌和芽孢杆菌可以以任意形式在任意时机引入，例如，可以在发酵培养过程中引入，也可以分别发酵培养后混合。
所述发酵剂中，巴斯德毕赤酵母、乳酸菌和芽孢杆菌的活菌数的比例如第一方面所述，在此不再赘述。
其中，所述乳酸菌的发酵方式可以为本领域常规的发酵方式，比如用于乳酸菌发酵的培养基可以为含淀粉糖化液、玉米浆和酵母浸粉(优选地，以干物质计，所述乳酸菌发酵培养基含有20-50g/L淀粉糖化液，4-8g/L玉米浆，3-7g/L酵母浸粉，所述乳酸菌发酵培养基的pH为6.5)。
所述乳酸菌的发酵条件可以包括：温度为30-37℃，pH为6-7，150-220r/min下摇床培养16-24h。
优选地，乳酸菌发酵液的OD600为5-11，更优选为6-7。
所述乳酸菌在发酵前可以使用MRS培养基进行活化，所述活化的条件比如可以为温度为30-37℃，pH为6-7，150-220r/min下摇床培养10-14h。
其中，乳酸菌的活化液的接种量优选为1-5体积％。
其中，所述芽孢杆菌的发酵方式可以为本领域常规的发酵方式，比如用于芽孢杆菌发酵的培养基可以为含淀粉糖化液、玉米浆和酵母浸粉(优选地，以干物质计，所述芽孢杆菌发酵培养基含有20-50g/L淀粉糖化液，1-4g/L玉米浆，1-3g/L酵母浸粉，所述芽孢杆菌发酵培养基的pH为6-7)。
所述芽孢杆菌的发酵条件可以包括：温度为30-38℃，pH为6-7，150-220r/min下摇床培养16-24h。
优选地，芽孢杆菌发酵液的OD600为5-11，更优选为5-6。
所述芽孢杆菌在发酵前可以使用LB培养基进行活化，所述活化的条件比如可以为温度为35-38℃，pH为6-7，150-220r/min下摇床培养10-14h。
其中，芽孢杆菌的活化液的接种量优选为1-5体积％。
本发明第四方面提供如上所述的巴斯德毕赤酵母或如上所述的发酵剂或根据如上所述的制备方法制备的发酵剂在降解呕吐毒素或制备发酵饲料中的应用。
本发明第五方面提供一种降解呕吐毒素的方法，该方法包括将如上所述的巴斯德毕赤酵母或如上所述的发酵剂或根据如上所述的制备方法制备的发酵剂与含呕吐毒素的物料接触。
优选地，所述含呕吐毒素的物料中呕吐毒素的含量为10mg/kg以下。
所述含呕吐毒素的物料可以是本领域常规的含呕吐毒素的物料，一般是玉米深加工过程中的物料，优选地，所述含呕吐毒素的物料包含玉米浆。应当理解的是，根据实际需要，可以对玉米浆进行稀释或浓缩处理。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述接触的条件包括：温度为20-37℃，pH为3.5-7.5。
本发明第六方面提供一种发酵饲料的制备方法，该方法包括：将如上所述的发酵剂或根据如上所述的制备方法制备的发酵剂与固态发酵培养基接触并进行固态发酵，得到发酵饲料。
所述发酵剂的制备方法可以参见第三方面，在此不再赘述。
优选地，所述发酵剂的接种量使得固态发酵体系中的活菌数为1×106-1×108CFU/g。
所述固态发酵培养基可以由本领域常规用于饲料生产的原料配制得到，优选地，所述固态发酵培养基含有玉米皮和玉米浆。
优选地，以干物质计，相比于100重量份的玉米皮，所述玉米浆的含量为15-35重量份。
优选地，所述固态发酵培养基还包含柠檬酸湿菌渣和石膏。
其中，所述柠檬酸湿菌渣可以为黑曲霉菌渣。
其中，所述石膏可以为湿石膏。
优选地，以干物质计，相比于100重量份的玉米皮，所述固态发酵培养基还包含0-1.5重量份的柠檬酸湿菌渣和0-2重量份石膏。
优选地，所述固态发酵的条件包括：固态发酵体系的含水量为40-60重量％(更优选为45-55重量％)，发酵温度为20-37℃，pH为4-7.5(优选为5-6)，固态发酵过程中厌氧发酵的时间为5天以上。
所述固态发酵的方法具体可以为将发酵剂以接种量为固态发酵培养基质量的5-20重量％(优选为8-12重量％)接种，并加水调节整个固态发酵体系的含水量为40-60重量％(优选为45-55重量％)，装入带单向通气阀的发酵袋或发酵瓶，装料量可以为40-100体积％(优选为70-90体积％)，静置培养，进行不少于5天的厌氧发酵得到发酵饲料。
本发明第七方面提供一种发酵饲料，所述发酵饲料由第六方面所述的制备方法制备得到。
通过筛选合适的混合菌种组成，加入可降解呕吐毒素的巴斯德毕赤酵母，发酵得到的饲料不仅提高了营养成分，还降低了DON含量。采用混合菌株进行固态发酵，发酵饲料中的活菌数菌高。发酵后，每克饲料总活菌数超过1010CFU，粗蛋白比发酵前显著增加，发酵饲料的pH在4-5左右，具有醇香味。通过发酵作用，饲料中的呕吐毒素浓度降低至1mg/kg以下。
优选地，所述发酵饲料中的活菌数为1×1010CFU/g以上，呕吐毒素含量低于1mg/kg，pH为4-5。
实施例
下述实施例中涉及的培养基配方如下：
玉米浆：干物质含量为40重量％，pH为4-7。
黑曲霉菌渣为来自中粮生化能源(榆树)有限公司的黑曲霉菌渣，含水量77％。
石膏为来自中粮生化能源(榆树)有限公司的石膏，含水量27％。
YPD培养基：酵母浸粉10g/L、蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L，121℃灭菌20min。
MRS培养基：蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母浸粉5g，K2HPO4 2g/L，柠檬酸二铵2g/L，乙酸钠5g/L，葡萄糖20g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，MnSO44H2O 0.25g/L，121℃灭菌20min。
LB培养基：蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl 10g/L，121℃灭菌20min。
玉米浆培养基：玉米浆稀释两倍后，5mol/LNaOH调pH至5，12000r/min离心10min，取上清，添加DON标准品至5.0g/mL，得玉米浆培养基。
酵母发酵培养基：40g/L淀粉乳经液化糖化后得到糖化液，向糖化液中加入5g/L玉米浆，pH 6.5。
乳酸菌发酵培养基：40g/L淀粉乳经液化糖化后得到糖化液，向糖化液中加入15g/L玉米浆，5g/L酵母浸粉，pH 6.5。
芽孢杆菌发酵培养基：40g/L淀粉乳经液化糖化后得到糖化液，向糖化液中加入5g/L玉米浆，2g/L酵母浸粉，pH 6.5。
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis为保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.13141的枯草芽孢杆菌(ZL201710117811.3)。
植物乳杆菌、干酪乳杆菌和地衣芽孢杆菌保藏于大连理工大学生物工程学院生物转化与生物分离实验室。
粗蛋白测定：参照国标GB/T 6432-2018《饲料中粗蛋白的测定》中全量凯式定氮法测定粗蛋白含量。
真蛋白测定参考文献：王海静,朱风华.三氯乙酸法与硫酸铜法测定饲料真蛋白比较[J].饲料研究,2012(11):69–71。
发酵饲料中酸含量的测定方法：HPLC法，检测器为Waters 2414示差检测器。色谱条件：色谱柱为Aminex HPX-87H(300×7.8mm)；流动相为0.005M硫酸溶液，流速0.6mL/min，色谱柱温度65℃，检测器温度35℃。
在无特殊说明的情况下，使用的试剂和材料均通过商购获得。
在无特殊说明的情况下，操作均为本领域常规的操作。
制备例
本制备例用于说明菌株的活化方法。
(1)巴斯德毕赤酵母菌活化：将巴斯德毕赤酵母菌接种于YPD培养基中，并在200r/min、30℃摇床培养活化培养12h，得到活化液。
(2)乳酸菌活化：将巴斯德毕赤酵母菌接种于MRS培养基中，并在200r/min、30℃摇床培养活化培养12h，得到活化液。
(3)芽孢杆菌活化：将芽孢杆菌接种于LB培养基中，并在200r/min、37℃摇床培养活化培养12h，得到活化液。
实施例1
本实施例用于说明本发明所述的巴斯德毕赤酵母菌的筛选。
将取自中粮生化能源(榆树)有限公司玉米浸泡罐的老酸浸泡水稀释10倍后，接入玉米浆培养基，在37℃、200r/min摇床培养72h后测DON浓度。
取DON降解率最高的3#培养液涂布于含10μg/mL DON的玉米浆培养基平板，37℃恒温倒置培养48h，发现有单菌落生长。挑取单菌落至玉米浆培养基中，在37℃、200r/min摇床培养72h，筛选出菌株E3(DON降解率为29％)和菌株E4(DON降解率为35％)。
将E4培养液涂布于LB平板培养，挑选平板上的单菌落至玉米浆培养基中，37℃、200rpm摇床恒温培养48h，培养后筛选出一株具有DON降解能力的菌株E4-205，48h后DON降解率可达31％。
经26S rRNA鉴定为巴斯德毕赤酵母菌，于2021年11月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(缩写为CGMCC)，其保藏编号为CGMCC No.23705，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
其中，样品前处理参考Romer呕吐毒素检测试剂盒说明书，经免疫亲和柱净化后，氮气吹干，加1mL流动相重新溶解。呕吐毒素检测参考国标GB/T30956-2014用HPLC检测。
实施例2
本实施例用于说明pH对DON降解的影响。
将本发明的巴斯德毕赤酵母E4-205活化后，按2体积％的接种量接入不同pH的玉米浆培养基(DON 5.0μg/mL)中，在37℃、200rpm条件下培养48h，离心取上清测DON浓度。
经测定，在pH4.0、5.0、6.0、7.0时的降解率分别为22％、27％、32％、37％，说明该菌在pH4-7范围内均有降解DON的能力。
实施例3
本实施例用于说明本发明所述的巴斯德毕赤酵母在玉米浆DON的降解应用。
玉米浆(含4μg/mL DON)用去离子水稀释两倍，5mol/L NaOH调节pH 7.0，分装15mL于50mL锥形瓶中，121℃高温蒸汽灭菌20min。将保巴斯德毕赤酵母E4-205活化后，按2体积％在灭菌后的玉米浆中，37℃、200rpm摇床培养3d，培养液离心取上清后检测DON含量。
DON降解随时间变化如图1所示。发酵初始，DON浓度为1.94μg/mL，未调pH(pH4)条件下培养3d DON降解率为36％，pH7条件下DON降解率为40％。
实施例4
本实施例用于说明本发明所述的发酵剂中菌种组成比例对菌种生长和DON降解的影响。
发酵剂的制备方法：
(1)将巴斯德毕赤酵母的活化液按2体积％的接种量接种于酵母发酵培养基中进行扩大培养，200r/min、30℃摇床培养18h，OD600达到10-11，即为酵母菌发酵液。
(2)将乳酸菌(植物乳杆菌和干酪乳杆菌按1：1混合)按2体积％的接种量接种于乳酸菌发酵培养基中进行扩大培养，200r/min、30℃摇床培养18h，OD600达到6-7，即为乳酸菌发酵液。
(3)将芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌按1：1混合)按2体积％的接种量接种于芽孢杆菌发酵培养基中进行扩大培养，200r/min、37℃摇床培养18h，OD600达到5-6，即为芽孢杆菌发酵液。
(4)将上述制备的发酵液按活菌数比例(巴斯德毕赤酵母菌：乳酸菌：芽孢杆菌)为1：1：1、3：1：1和6：1：1混合，即得3种不同组成的发酵剂。
将20g玉米浆与1.2g黑曲霉菌渣、0.8g石膏和27g水混合，使用NaOH颗粒调节pH至5.8。与25g玉米皮混合并搅拌均匀，121℃灭菌20min，得到固态发酵培养基。向固态发酵培养基中按照12％(V/W)分别接入不同的发酵剂。
物料搅拌均匀后装入带有单向透气阀的发酵袋中发酵，室温(21℃)下静置培养。发酵7d后，酵母菌活菌数依次为1.5×105cfu/g、8.0×105cfu/g和4.4×105cfu/g，乳酸菌活菌数依次为7.9×109cfu/g、1.3×109cfu/g和1.1×109cfu/g，芽孢杆菌活菌数依次为7.0×104cfu/g、2.8×105cfu/g和2.1×105cfu/g。发酵初始，物料中的DON浓度为1.14mg/kg，经过7d固态发酵后，DON降解率依次为8.8％、11.4％和11.4％。
实施例5
本实施例用于说明本发明所述的发酵剂在生产发酵饲料中的应用。
按照实施例4所述的方法进行操作，不同的是，将发酵液按活菌数比例(巴斯德毕赤酵母菌：乳酸菌：芽孢杆菌)为3：1：1混合，制得发酵剂。
物料搅拌均匀后装入带有单向透气阀的发酵袋中密封，室温(21℃)下静置培养15天，活菌数的变化如图2所示，DON浓度变化如图3所示。发酵15d后，酵母菌活菌数为3.2×105cfu/g，乳酸菌达6.3×1011cfu/g，芽孢杆菌6.0×106cfu/g。发酵初始，物料中的DON浓度为1.14mg/kg，经过15d固态发酵后，DON浓度降为0.83mg/kg。
发酵结束后，发酵饲料中的真蛋白含量由原来的21％提升到发酵后的29％，粗蛋白含量由原来的28％提升到35％。另外，发酵过程中产生乳酸0.37g/kg，产生琥珀酸1.18g/kg、乙酸0.26g/kg、甲酸0.24g/kg。
实施例6
本实施例用于说明本发明所述的发酵剂在生产发酵饲料中的应用。
按照实施例5所述的方法进行操作，不同的是，玉米浆中DON的浓度为8.0μg/mL。
发酵25d后，酵母菌活菌数可达6.1×104cfu/g，乳酸菌达1.4×1010cfu/g，芽孢杆菌7.5×106cfu/g。发酵初始，物料中的DON浓度为2.18mg/kg，经过25d固态发酵后，DON浓度降为0.85mg/kg。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (18)

1.一株巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris，其特征在于，该巴斯德毕赤酵母的保藏编号为CGMCC No. 23705。
2.一种发酵剂，其特征在于，所述发酵剂包含权利要求1所述的巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）。
3.根据权利要求2所述的发酵剂，其中，所述发酵剂还含有乳酸菌和/或芽孢杆菌。
4.根据权利要求3所述的发酵剂，其中，所述发酵剂中，巴斯德毕赤酵母、乳酸菌和芽孢杆菌的活菌数的比例为1-100：1-50：1。
5.一种发酵剂的制备方法，其特征在于，该方法包括：由权利要求1所述的巴斯德毕赤酵母在酵母发酵培养基中进行发酵培养而制得。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，该方法还包括引入乳酸菌和/或芽孢杆菌的步骤。
7.权利要求1所述的巴斯德毕赤酵母或权利要求2-4中任意一项所述的发酵剂或根据权利要求5或6所述的方法制备得到的发酵剂在降解呕吐毒素或制备发酵饲料中的应用。
8.一种降解呕吐毒素的方法，其特征在于，该方法包括将权利要求1所述的巴斯德毕赤酵母或权利要求2-4中任意一项所述的发酵剂或根据权利要求5或6所述的方法制备得到的发酵剂与含呕吐毒素的物料接触。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述含呕吐毒素的物料包含玉米浆。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其中，所述含呕吐毒素的物料中呕吐毒素的含量为10 mg/kg以下。
11.根据权利要求8所述的方法，其中，所述接触的条件包括：温度为20-37℃，pH为3.5-7.5。
12.一种发酵饲料的制备方法，其特征在于，该方法包括：将权利要求2-4中任意一项所述的发酵剂或根据权利要求5或6所述的方法制备得到的发酵剂与固态发酵培养基接触并进行固态发酵，得到发酵饲料。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述发酵剂的接种量使得固态发酵体系中的活菌数为1×106 -1×108 CFU/g。
14.根据权利要求12所述的方法，其中，所述固态发酵培养基含有玉米皮和玉米浆；
其中，以干物质计，相比于100重量份的玉米皮，所述玉米浆的含量为15-35重量份。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，以干物质计，相比于100重量份的玉米皮，所述固态发酵培养基还包含0-1.5重量份的柠檬酸湿菌渣和0-2重量份石膏。
16.根据权利要求12-15中任意一项所述的方法，其中，所述固态发酵的条件包括：固态发酵体系的含水量为40-60重量%，发酵温度为20-37℃，pH为4-7.5，固态发酵过程中厌氧发酵的时间为5天以上。
17.一种发酵饲料，其特征在于，所述发酵饲料由权利要求12-16中任意一项所述的制备方法制备得到。
18.根据权利要求17所述的发酵饲料，其中，所述发酵饲料中的活菌数为1×1010 CFU/g以上，呕吐毒素含量低于1mg/kg，pH为4-5。
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