CN114470238A - AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用 - Google Patents

AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114470238A
CN114470238A CN202210305699.7A CN202210305699A CN114470238A CN 114470238 A CN114470238 A CN 114470238A CN 202210305699 A CN202210305699 A CN 202210305699A CN 114470238 A CN114470238 A CN 114470238A
Authority
CN
China
Prior art keywords
drug
tumor
macrophages
micelle
nano
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210305699.7A
Other languages
English (en)
Inventor
陶娟
吴娜明
申晨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology
Original Assignee
Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology filed Critical Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology
Priority to CN202210305699.7A priority Critical patent/CN114470238A/zh
Publication of CN114470238A publication Critical patent/CN114470238A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6907—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a microemulsion, nanoemulsion or micelle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明构建了偶联抗肿瘤相关M2型巨噬细胞表面高表达的CD206(甘露糖受体)的单克隆抗体，同时负载AhR抑制剂CH223191的纳米靶向递药系统(CD206‑NM@CH223191)，特异性靶向黑素瘤肿瘤相关M2型巨噬细胞，以调控其AhR信号通路，使其向具有抗肿瘤活性的M1型巨噬细胞极化，重塑免疫微环境，阻止病情进展，为以M2型TAM为靶点的纳米靶向免疫治疗提供新的思路。

Description

AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的 应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用。
背景技术
巨噬细胞是人类天然免疫系统的重要组成部分，巨噬细胞在组织修复及重塑、应激反应中起重要作用，是机体抵抗病原微生物的第一道防线。巨噬细胞起源于骨髓前体细胞，根据所在组织及免疫微环境获得不同的形态及功能。肿瘤组织微环境(tumormicroenvironment，TME)中存在大量巨噬细胞浸润，对肿瘤的生长、转移以及药物治疗有重要影响。M1和M2是巨噬细胞的两种重要表型，M1在TME中分泌细胞因子，吞噬肿瘤细胞，招募促进免疫应答的白细胞浸润，发挥抗肿瘤作用；M2在TME中降解肿瘤组织基底层，以利于肿瘤转移，促进新生血管生成，抑制免疫应答，发挥促肿瘤作用。TME中M1比例的降低和M2比例的升高与肿瘤不良预后密切相关。目前，针对肿瘤相关巨噬细胞 (tumor associatedmacrophage，TAM)的抗肿瘤策略主要集中于TAM的清除或者相关表型的转化，研究表明，完全清除TAM疗效不佳，因为肿瘤微环境中除 M2型巨噬细胞外，还包括具有抗肿瘤活性的M1型巨噬细胞。通过抑制肿瘤浸润的巨噬细胞向M2型TAM极化，或通过对M2型TAM重编程，使其再极化为具抗肿瘤活性的M1型，可改善肿瘤免疫抑制性微环境，提高抗肿瘤免疫治疗的疗效。然而，如何调控M2型TAM重编程，进而特异性靶向M2型TAM使其再极化为M1型，仍有待深入研究。
研究表明，芳香烃受体(AhR)可通过调控免疫细胞中多种代谢相关靶基因和蛋白酶的表达，进而调控肿瘤进展。AhR是配体依赖性激活的转录因子，在缺乏配体的非激活状态，AhR与热休克蛋白(HSP90)、AhR相互作用蛋白(AIP)、辅助伴侣分子p23及SRC蛋白激酶形成蛋白复合物存在于胞质中。当AhR与配体结合并活化后，其构象发生改变，AhR解离易位至细胞核，与AhR核转运蛋白(ARNT)形成异二聚体转录因子，结合到不同靶基因DNA基序的生物异源物质效应元件(XRE)上，启动下游不同基因的转录。CH223191是一种人工合成的，能拮抗生物体内AhR信号通路的化合物，中国专利文献CN 112048002 B 公开了一种靶向T细胞的酶敏感纳米体系及其制备方法和应用，所述的纳米体系以多肽载体为基础，利用其包封并向T细胞递送疏水性药物CH223191，同时荷载CD28抗体提供共刺激信号，期望达到实现PD-1下调与T细胞激活的效果，最终达到有效的肿瘤细胞杀伤效果。其中，CH223191能阻断T细胞表面 PD-1的表达，进而起到杀伤肿瘤细胞的作用。
但是关于AhR抑制剂CH223191在抑制肿瘤相关巨噬细胞中的应用，目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种AhR抑制剂CH223191 在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用。本发明中的AhR抑制剂CH223191 可促进肿瘤相关巨噬细胞向M1型极化，同时抑制其向M2型极化，进而改善肿瘤免疫抑制性免疫微环境，提高免疫治疗疗效，抑制肿瘤进展。
本发明的一个目的在于提供一种AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用。
进一步地，所述肿瘤相关巨噬细胞为肿瘤相关M2型巨噬细胞。
进一步地，所述AhR抑制剂CH223191在制备促进肿瘤相关M2型巨噬细胞向具有抗肿瘤活性的M1型巨噬细胞转化的药物中的应用。
本发明的另一个目的在于提供一种抑制肿瘤相关M2型巨噬细胞的药物。
一种抑制肿瘤相关M2型巨噬细胞的药物，所述药物的活性成分为AhR抑制剂CH223191。
进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体。所述载体可以选自乳化剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂和助溶剂中的一种。
本发明还提供了一种纳米载药胶束。
一种纳米载药胶束，所述纳米载药胶束包载所述AhR抑制剂CH223191。
进一步地，所述纳米载药胶束为CD206-PEG-PCL。
进一步地，所述纳米载药胶束CD206-PEG-PCL的制备方法如下：将 PEG-PCL胶束溶液与CD206抗体溶液混合，PEG-PCL胶束与CD206抗体的质量比为1：5，避光密闭反应18h，得到纳米载药胶束CD206-PEG-PCL。
本发明的最后一个目的在于提供上述任一项所述的纳米载药胶束在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用。
进一步地，所述肿瘤相关巨噬细胞为肿瘤相关M2型巨噬细胞。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
本发明构建了偶联抗肿瘤相关M2型巨噬细胞表面高表达的CD206(甘露糖受体)的单克隆抗体，同时负载AhR抑制剂CH223191的纳米靶向递药系统 (CD206-NM@CH223191)，特异性靶向黑素瘤肿瘤相关M2型巨噬细胞，以调控其AhR信号通路，使其向具有抗肿瘤活性的M1型巨噬细胞极化，重塑免疫微环境，阻止病情进展，为以M2型TAM为靶点的纳米靶向免疫治疗提供新的思路。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1中小鼠M2型巨噬细胞相关指标(Arg1、Fizz1)的mRNA 相对表达量结果图；
图2为实施例1中小鼠M1型巨噬细胞相关指标(IL-6、IL-1β)的mRNA 相对表达量结果图；
图3为实施例2制得的纳米载药胶束粒径图；
图4为实施例2制得的纳米载药胶束电镜图；
图5为实施例2制得的纳米载药胶束体外药物释放结果图；
图6为实施例2制得的纳米载药胶束靶向肿瘤相关巨噬细胞减缓黑素瘤小鼠肿瘤生长实验结果，其中，图(A)为不同时间点黑素瘤小鼠肿瘤体积变化曲线图，图(B)为第20d，四种不同处理的黑素瘤小鼠肿瘤体积和重量结果图；
图7为实施例3中的纳米载药胶束作用小鼠后的血常规和血生化指标(外周血中白细胞、红细胞、血小板、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、总胆红素、直接胆红素、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肌酐、尿素)的检测结果图；
图8为实施例3中的纳米载药胶束作用小鼠后的脑、心、肝、脾、肺、肾组织切片观察结果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明所使用的常规试剂和设备，如无特殊说明，均可市售获得。
实施例1CH223191抑制肿瘤相关巨噬细胞的体外实验
小鼠骨髓来源巨噬细胞的获取和培养按以下步骤进行：
1)取6-8周龄雌性C57BL/6小鼠，体重约16-18g，颈椎脱臼法处死小鼠；
2)超净台中取小鼠双侧胫骨和股骨，浸泡于含预冷DMEM培养液的EP管中；
3)用无菌纱布剔除组织上附着的肌肉，用无菌手术刀片刮除骨膜，再将胫骨和股骨转入含DMEM培养液的6cm细胞培养皿中；
4)用10mL注射器配1mL注射器针头，冲出骨髓，40μm无菌细胞筛过滤；
5)2000rpm，3min，4℃离心弃上清，加入红细胞裂解液冰上裂解红细胞后，再加入DMEM培养液离心、并洗涤一次；
6)加入10mL含10％FBS、P/S(青霉素Penicillin 100units/mL，链霉素Streptomycin 100ug/mL)、50ng/mL M-CSF的DMEM培养液重悬细胞，充分混匀后平均分至2个10cm细胞培养皿中，在细胞培养箱中培养两天；
7)第3天每皿细胞加入2.5mL含10％FBS、P/S和50ng/mL M-CSF的 DMEM培养液；第5天加入1mL上述培养液；
8)第6天用预温PBS缓冲液润洗细胞两次后，加入Accutase酶37℃消化 10min，收集细胞并计数，按1×106/mL的细胞密度种于细胞培养板(含50ng/mL MCSF)，贴壁一晚后即可得到小鼠骨髓来源巨噬细胞。
实验分组如下：第一组：小鼠骨髓来源巨噬细胞(不添加药物CH223191，不添加IL-4进行诱导)；第二组：小鼠骨髓来源巨噬细胞(添加药物CH223191，不添加IL-4进行诱导)；第三组：小鼠骨髓来源巨噬细胞(不添加药物CH223191，添加IL-4进行诱导)；第四组：小鼠骨髓来源巨噬细胞(添加药物CH223191，添加IL-4进行诱导)，其中，药物CH223191的添加浓度为10μM，IL-4的添加浓度为20ng/ml，上述四组处理后的细胞继续培养24h后，提取总RNA，检测 M2型巨噬细胞相关指标(Arg1、Fizz1)的mRNA相对表达量。
同理，第一组：小鼠骨髓来源巨噬细胞(不添加药物CH223191，不添加 LPS进行诱导)；第二组：小鼠骨髓来源巨噬细胞(添加药物CH223191，不添加LPS进行诱导)；第三组：小鼠骨髓来源巨噬细胞(不添加药物CH223191，添加LPS进行诱导)；第四组：小鼠骨髓来源巨噬细胞(添加药物CH223191，添加LPS进行诱导)，其中，药物CH223191的添加浓度为10μM，LPS的添加浓度为100ng/ml，上述四组处理后的细胞继续培养6h后，提取总RNA，检测 M1型巨噬细胞相关指标(IL-6、IL-1β)的mRNA相对表达量。
总RNA的提取采用Trizol法进行，cDNA合成依照试剂盒说明进行，设定反应条件：42℃60min，70℃5min，4℃保存；Real-Time PCR依照试剂盒说明进行，设定扩增程序：95℃3min，95℃15s，60℃20s，72℃15s，40个循环，数据处理采用2-ΔΔCt计算基因的相对表达量，目的基因的引物序列如下表1所示：
表1目的基因的引物序列表
Figure BDA0003565027260000061
RT-PCR的检测结果如图1和图2所示，从图中可以看出，药物CH223191 能使M2型巨噬细胞相关指标(Arg1、Fizz1)降低，使M1型巨噬细胞相关指标(IL-6、IL-1β)上调，结果表明，药物CH223191可以使M2型巨噬细胞向 M1型巨噬细胞极化。
实施例2CH223191抑制肿瘤相关巨噬细胞的体内实验
2.1纳米载药胶束的制备与表征
2.1.1纳米载药胶束的制备
胶束单体材料CD206-PEG-PCL的制备：将购自于上海甄准生物科技有限公司的PEG-PCL胶束溶液与CD206抗体溶液混合，PEG-PCL胶束与CD206抗体的质量比为1：5，避光密闭反应18h，得到胶束单体材料CD206-PEG-PCL。
纳米载药胶束的制备：将500μg CH223191和5mg胶束单体材料 CD206-PEG-PCL溶于1mL二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)中，混合搅拌1h后，在15min内向上述混合液中逐滴滴入5mL超纯水，继续搅拌1h后，移入截留分子量为2000的透析袋中，用10L超纯水透析48h，透析时，每隔3h 换一次超纯水，得到纳米载药胶束(CD206-NM@CH223191)。
2.1.2纳米载药胶束的粒径和Zeta电位的表征
取步骤2.1.1制得的纳米载药胶束，用粒径为450nm的滤膜去除不溶杂质，然后吸取一定量的纳米载药胶束溶液，用动态光散射纳米粒度仪(ZS-90,Malvern Ltd.,U.K.)测定胶束的粒径、粒径分布及Zeta电位，测得的纳米载药胶束的Zeta 电位为-25mV，粒径分布结果图3所示，从图中可以看出，纳米载药胶束的粒径分布均匀，大小为100nm左右。
2.1.3纳米载药胶束的形貌观察
取步骤2.1.1制得的纳米载药胶束，用粒径为450nm的滤膜去除不溶杂质，然后吸取一定量的纳米载药胶束溶液滴在含碳支持膜的200目的铜网上，静置 3-5min后吸去多余的胶束溶液，滴入数滴1％(w/v)的磷钨酸负染液，染色几分钟后，移去铜网上多余的液体，待挥发完毕之后，用透射电子显微镜(TEM，日立H-600IV)进行检测，加速电压200kV，结果如图4所示。
2.1.4纳米载药胶束药物释放特性的表征
取步骤2.1.1制得的冻干后的纳米载药胶束5mg，溶于5mL pH值为6.8(模拟肿瘤组织的pH值)的杜氏磷酸盐缓冲盐水中，然后将胶束溶液转移至截留分子量为3500的透析袋中，再分别浸入45mL pH值相同的杜氏磷酸盐缓冲盐水中透析。在预设的时间点每次取样1mL并立刻补偿相同体积和pH值的杜氏磷酸盐缓冲盐水，利用紫外分光分光光度法测190nm处的吸收值。最后，使用软件线性拟合出标准曲线并回归定量后，再根据已测得的载药量绘制出药物释放率随时间变化的曲线，分析其释放特性，结果如图5所示。从图中可以看出，在12h内药物的释放较快，在12～48h，药物的释放较慢，到达48h后，药物的释放量达到80％左右。
2.2纳米载药胶束靶向肿瘤相关巨噬细胞减缓黑素瘤小鼠肿瘤生长实验
将C57BL/6小鼠来源的B16-F10细胞置于DMEM培养基中(含10％胎牛血清，青霉素和链霉素各100U/ml)，在5％CO2、37℃细胞培养箱中培养，每日用PBS缓冲液清洗，弃去未贴壁细胞，更换培养液，继续传代培养。
取60只C57BL/6小鼠，脱毛膏脱去小鼠背部鼠毛，用75％乙醇消毒小鼠此处皮肤，抽取上述制备的B16-F10细胞悬液0.1ml(含有3×105个细胞)接种于小鼠背部皮下，在第10日小鼠出瘤后，然后将小鼠随机分成4组，每组15只，进行如下处理：第一组：control组(尾静脉注射生理盐水，400μL)；第二组： CH223191组(尾静脉注射药物CH223191，400μL，浓度为25μg/mL)；第三组： CD206-NM组(尾静脉注射纳米胶束空载，400μL)；第四组： CD206-NM@CH223191(尾静脉注射纳米载药胶束药物，400μL，载药浓度为25μg/mL)，处理完成后，小鼠进行正常的饲养，分别于第10、12、14、16、 18、20d进行肿瘤体积的测量和第20d肿瘤重量的测试，结果如图6所示。
从图中的结果可以看出，同对照组相比，纳米载药胶束药物组的小鼠在饲养的过程中，黑素瘤小鼠肿瘤的体积增加较小，明显被抑制，而单纯的药物组 (CH223191组)中，黑素瘤小鼠肿瘤的体积增加明显，这是由于CH223191药物不能精准的达到黑素瘤小鼠肿瘤的靶点，发挥药效，因此，本发明首先构建了靶向性的纳米胶束，然后负载CH223191药物，使得药物能靶向性的达到黑素瘤小鼠肿瘤相关巨噬细胞，使得M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化，从而抑制黑素瘤小鼠肿瘤的生长。
2.3纳米载药胶束生物安全性评价实验
取20只C57BL/6小鼠，脱毛膏脱去小鼠背部鼠毛，用75％乙醇消毒小鼠此处皮肤，抽取步骤2.2中制备的B16-F10细胞悬液0.1ml(含有3×105个细胞) 接种于小鼠背部皮下，饲养10d，待小鼠出瘤后，然后将小鼠随机分成4组，每组5只，进行如下处理：第一组：control组(尾静脉注射生理盐水，400μL)；第二组：CH223191组(尾静脉注射药物CH223191，400μL，浓度为25μg/mL)；第三组：CD206-NM组(尾静脉注射纳米胶束空载，400μL)；第四组：CD206-NM@CH223191(尾静脉注射纳米载药胶束药物，400μL，载药浓度为 25μg/mL)，处理完成后，小鼠进行正常的饲养，于第20d将小鼠处死，采集小鼠的血液，进行血常规和血生化指标(外周血中白细胞、红细胞、血小板、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、总胆红素、直接胆红素、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肌酐、尿素)的检测，同时，对四组不同处理的小鼠的脑、心、肝、脾、肺、肾脏进行组织切片观察，结果如图7 和图8所示。
从图中的结果可以看出，同对照组相比，纳米载药胶束药物组的小鼠血常规和血生化指标没有明显的变化，纳米载药胶束药物组的小鼠脑、心、肝、脾、肺、肾脏组织切片无明显异常，结果表明，纳米载药胶束药物具有良好的生物安全性，对人体没有副作用影响。
以上实施例，仅为本发明的具体实施方式，用以说明本发明的技术方案，而非对其限制，本发明的保护范围并不局限于此，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改或可轻易想到变化，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改、变化或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 华中科技大学同济医学院附属协和医院
<120> AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ccacagtctg gcagttggaa g 21
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ggttgtcagg ggagtgttga tg 22
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
cctgctggga tgactgcta 19
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tgggttctcc acctcttcat 20
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
cccaatttcc aatgctctcc ta 22
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
aggaatgtcc acaaactgat atgct 25
<210> 7
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
aaggagaacc aagcaacgac aaaata 26
<210> 8
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
tttccatctt cttctttggg tattgc 26

Claims (10)

1.AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤相关巨噬细胞为肿瘤相关M2型巨噬细胞。
3.根据权利要求2所述的AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用，其特征在于，所述AhR抑制剂CH223191在制备促进肿瘤相关M2型巨噬细胞向具有抗肿瘤活性的M1型巨噬细胞转化的药物中的应用。
4.一种抑制肿瘤相关M2型巨噬细胞的药物，其特征在于，所述药物的活性成分为AhR抑制剂CH223191。
5.根据权利要求4所述的抑制肿瘤相关M2型巨噬细胞的药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体。
6.一种纳米载药胶束，其特征在于，所述纳米载药胶束包载所述AhR抑制剂CH223191。
7.根据权利要求6所述的纳米载药胶束，其特征在于，所述纳米载药胶束为CD206-PEG-PCL。
8.根据权利要求7所述的纳米载药胶束，其特征在于，所述纳米载药胶束CD206-PEG-PCL的制备方法如下：将PEG-PCL胶束溶液与CD206抗体溶液混合，PEG-PCL胶束与CD206抗体的质量比为1：5，避光密闭反应18h，得到纳米载药胶束CD206-PEG-PCL。
9.权利要求6～8任一项所述的纳米载药胶束在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的纳米载药胶束在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤相关巨噬细胞为肿瘤相关M2型巨噬细胞。
CN202210305699.7A 2022-03-25 2022-03-25 AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用 Pending CN114470238A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210305699.7A CN114470238A (zh) 2022-03-25 2022-03-25 AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210305699.7A CN114470238A (zh) 2022-03-25 2022-03-25 AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114470238A true CN114470238A (zh) 2022-05-13

Family

ID=81488353

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210305699.7A Pending CN114470238A (zh) 2022-03-25 2022-03-25 AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114470238A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115105498A (zh) * 2022-06-22 2022-09-27 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 抑制cyp1a1的药物在制备用于减轻临床使用何首乌造成的肝损伤的药物中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104023713A (zh) * 2011-09-07 2014-09-03 德国癌症研究中心 用于治疗和/或预防天然ahr配体依赖性癌症的手段和方法
CN112048002A (zh) * 2020-08-07 2020-12-08 上海维洱生物医药科技有限公司 一种靶向t细胞的酶敏感纳米体系及其制备方法和应用
CN113512117A (zh) * 2021-07-12 2021-10-19 武汉麦考津生物科技有限公司 一种可结合cd206的抗体及其应用
CN113559271A (zh) * 2020-04-10 2021-10-29 上海交通大学 巨噬细胞靶向载体系统的组分、制法及其在药物和核酸传递中的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104023713A (zh) * 2011-09-07 2014-09-03 德国癌症研究中心 用于治疗和/或预防天然ahr配体依赖性癌症的手段和方法
CN113559271A (zh) * 2020-04-10 2021-10-29 上海交通大学 巨噬细胞靶向载体系统的组分、制法及其在药物和核酸传递中的应用
CN112048002A (zh) * 2020-08-07 2020-12-08 上海维洱生物医药科技有限公司 一种靶向t细胞的酶敏感纳米体系及其制备方法和应用
CN113512117A (zh) * 2021-07-12 2021-10-19 武汉麦考津生物科技有限公司 一种可结合cd206的抗体及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YUMIAO ZHAO等: "Tryptophan 2,3-dioxygenase 2 controls M2 macrophages polarization to promote esophageal squamous cell carcinoma progression via AKT/GSK3b/IL-8 signaling pathway", 《ACTA PHARMACEUTICA SINICA B》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115105498A (zh) * 2022-06-22 2022-09-27 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 抑制cyp1a1的药物在制备用于减轻临床使用何首乌造成的肝损伤的药物中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kurimoto et al. Neutrophils express oncomodulin and promote optic nerve regeneration
CN110577931B (zh) 间断缺氧处理干细胞来源外泌体及在心肌组织中的应用
CN106794260A (zh) 治疗血红蛋白病的组合物和方法
CN101955906A (zh) 肝脏组织来源
CN111467345B (zh) 地塞米松、罗格列酮、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤组合物在制备抑制受氯化钴诱导的卵巢癌细胞生长转移的药物中的用途
EP3088526A1 (en) Use of mirna-214 inhibitor in inhibiting regulatory t cells
US20230364201A1 (en) Pharmaceutical composition containing insulin-like growth factor-2 and use thereof
CN109640959A (zh) 靶向先天免疫系统以诱导长期耐受性及解决动脉粥样硬化中的巨噬细胞累积
CN108004311B (zh) 长链非编码rna nonmmut002009及其过表达质粒在诊断和治疗骨骼系统疾病中的应用
CN114470238A (zh) AhR抑制剂CH223191在制备抑制肿瘤相关巨噬细胞药物中的应用
US20190160099A1 (en) Pharmaceutical composition and use thereof
Zhao et al. Soluble factor (s) from bone marrow cells can rescue lethally irradiated mice by protecting endogenous hematopoietic stem cells
CN110551688B (zh) 一种诱导体细胞重编程为造血干/祖细胞且促进造血干/祖细胞体外扩增的组合物及其应用
CN111166867A (zh) Pd-1泛素化激动剂的功能与用途
CN112190718B (zh) 基因传递载体及其制备方法、抗肿瘤药物及其制备方法
CN113995753A (zh) 一种中药分子槐果碱在制备治疗胶质母细胞瘤药物上的应用
CN107243006B (zh) Amd3100在制备治疗和/或预防恶液质的药物中的应用
WO2008016078A1 (fr) Procédé de prolifération d&#39;une cellule lak
EP3533801A1 (en) Synoviolin expression inhibitor containing mesenchymal stem cell or culture supernatant thereof
CN114642662B (zh) Mk-5046的药物用途
CN114652717B (zh) 盐酸萘甲唑啉的药物用途
Nalesnik et al. Autologous lymphokine-activated killer cell therapy of lymphoproliferative disorders arising in organ transplant recipients
CN114621930B (zh) 一种胰腺癌动物模型的构建方法及其应用
CN117180223A (zh) 一种负载硝呋齐特的巨噬细胞递药系统及其应用
CN114642668B (zh) 拉坦前列素的药物新用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20220513