CN114437962A - 一株伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株及其应用。本发明所述伯克霍尔德氏菌(Burkholderiasp.)BsNLG8菌株对稻瘟病菌、香蕉枯萎病菌、番茄酸腐病菌、番石榴果腐病菌、菜心炭疽病菌和水鬼蕉叶斑病菌等多种植物病原真菌具有良好的拮抗效果，可用于植物病害的生物防治，同时为植物病害的生物防治提供了新的菌种资源。其中，BsNLG8菌株可以显著降低水稻稻瘟病的病情指数，提高稻瘟病的防治效果，具有良好的开发运用前景。此外，BsNLG8菌株还具有良好的产嗜铁素的能力，可将其用于制备含嗜铁素的制剂，应用前景广阔。

Description

一株伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株及其应用

技术领域

本发明属于农业微生物技术领域。更具体地，涉及一株伯克霍尔德氏菌 BsNLG8菌株及其应用。

背景技术

伯克霍尔德氏菌(Burkholderiasp.)中的洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderiacepacia，BC)是一组表型相近但基因型不同的复合物，称为洋葱伯克霍尔德氏菌群(Burkholderiacepaciacomplex,BCC)，包含至少十种表型相似但基因型不同的菌种。例如Burkholderiacepacia、Burkholderiamultivorans、 Burkholderiacenocepacina、Burkholderiavietnamiensis、Burkholderiastabilis、 Burkholderiadolosa、Burkholderiaanthina和Burkholderiapuraquae等， Burkholderiapuraquae是其中一个较新的种。

洋葱伯克霍尔德氏菌群可以从土壤、水或植物表面分离得到，研究发现许多洋葱伯克霍尔德氏菌群的菌株具有生物防治、生物降解农药和部分化学物质以及促进植物生长等多种功能，具有较好的生态和开发利用价值。例如，谢关林等曾在菲律宾及国内的水稻上分离出不少BCC菌株，发现它们在离体条件下可以显著抑制水稻纹枯病菌和恶苗病菌的生长，是一种很好的水稻生防菌。另有学者从烟草根际土壤中分离到了一株B.pyrrociniaLyc2菌株，其对棉花水培苗具有明显的促生作用，同时还能抑制多种植物病原真菌菌丝的生长，对棉花苗期立枯病的防治效果达到48.8％(于晓庆等，2007)。因此，寻找具有高效拮抗，对多种植物病原菌具有抑制作用且又安全的BCC菌株具有十分重要的科学意义和应用价值。

嗜铁素(Siderophore)又名高铁载体，是指由嗜铁微生物在低铁条件下合成的能特异螯合三价铁离子的一类小分子螯合因子(1～2kDa)。土壤中的嗜铁微生物通过配基的螯合反应，使难溶性的铁(如氧化铁和氢氧化铁)释放出来，并形成Siderophore-Fe螯合物，以特异的转运系统将铁转移到体内，满足微生物自身的生长需要，从而使环境中的铁浓度被降低，这样病原微生物由于缺乏铁而不能生长繁殖，进而达到控制植物病害的目的。大量研究表明，嗜铁素在植物病害防治和促进植物生长方面均起着重要的作用。例如，Arora等人从药用植物 pruriens中分离到12株根瘤菌菌株，其中有2株菌株能够分泌嗜铁素，其能有效抑制菜豆壳球孢(Macrophominaphaseolina)引起的花生芽腐病的发生，具有潜在的生物防治作用(Arora et al.,2001)。又例如，冉隆贤等利用3株假单胞杆菌菌株及嗜铁素缺失突变体防治桉树灰霉病，结果表明荧光假单胞杆菌 (Pseudomonas fluorescens)WCS374r菌株和恶臭假单胞杆菌(Pseudomonas putida)WCS358r菌株通过对铁离子的竞争抑制了桉树灰霉菌的生长(Ran et al., 2005)。即利用嗜铁微生物在作物根际对土壤环境中的铁进行生物富集，提高铁的生物利用率，将能够极大地促进农作物的生长，加强病虫害的防治，改善作物生长的生态环境，为农作物病害的生物防治奠定基础。将嗜铁微生物作为生防菌加以利用，能够减少化学农药的污染，为绿色食品的生产创造条件，创造一定的经济效益和社会效益。

现有技术中虽有关于既具有分泌嗜铁素能力又对多种植物病原菌具有抑制效果的洋葱伯克霍尔德氏菌菌株的报道。例如，中国专利CN112625970A公开了一株洋葱伯克霍尔德氏菌JT79，其具有较强的溶解难溶性磷、钾、固氮以及分泌嗜铁素的能力，对烟草、黄瓜、玉米和大豆苗具有良好促生长效果，对多种植物病原菌如棉花黄萎病菌、菜心炭疽病菌等13种病菌具有良好的抑菌效果。但由于微生物存在特异性，不同种的微生物的功能存在很大差异，即使是同种不同株的微生物，其所具有的功能也可能存在很大不同。因此，对洋葱伯克霍尔德氏菌群菌株进行广泛发掘，筛选具有抑菌效果的菌株，对于植物病害的绿色防治仍具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供一株伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株及其应用。

本发明的第一个目的是提供一株伯克霍尔德氏菌(Burkholderiasp.)BsNLG8 菌株。

本发明的第二个目的是提供所述BsNLG8菌株或其发酵菌液在抑制植物病原真菌或制备植物病原真菌抑制剂中的应用。

本发明的第三个目的是提供所述BsNLG8菌株或其发酵菌液在防治植物病害或制备植物病害生防菌剂中的应用。

本发明的第四个目的是提供所述BsNLG8菌株或其发酵菌液在制备含嗜铁素的制剂中的应用。

本发明的第五个目的是提供一种植物病害生防菌剂。

本发明的第六个目的是提供一种防治植物病害的方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一株伯克霍尔德氏菌(Burkholderiasp.)BsNLG8菌株，所述菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏时间为2021年7月30日，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏号为GDMCC.No：61833。

本发明所述伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株的16rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其具体分类学地位为Burkholderiapuraquae，属于洋葱伯克霍尔德氏菌群。

具体地，本发明从褐飞虱雌成虫中肠道内分离获得了一株伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株。通过平板对峙法发现，所述BsNLG8菌株对稻瘟病菌、香蕉枯萎病菌、番茄酸腐病菌、番石榴果腐病菌、菜心炭疽病菌和水鬼蕉叶斑病菌等多种植物病原真菌具有良好的拮抗抑制效果，可用于植物真菌病害的防治。而CAS 平板检测法检测发现BsNLG8菌株具有较好的产嗜铁素的能力，一方面有助于其抑制植物病原真菌，另一方面也可将其用于制备含嗜铁素的制剂。因此，本发明申请保护所述伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株的以下应用：

本发明申请保护所述BsNLG8菌株或其发酵菌液在抑制植物病原真菌或制备植物病原真菌抑制剂中的应用。

优选地，所述病原真菌为稻瘟病菌，香蕉枯萎病菌，番茄酸腐病菌，水鬼蕉叶斑病菌，番石榴果腐病菌，菜心炭疽病菌中的一种或多种，见实施例3。

本发明申请保护所述BsNLG8菌株或其发酵菌液在防治植物病害或制备植物病害生防菌剂中的应用。

优选地，所述植物病害为稻瘟病，香蕉枯萎病，番茄酸腐病，水鬼蕉叶斑病，番石榴果腐病，菜心炭疽病中的一种或多种，见实施例3。

本发明申请保护所述BsNLG8菌株或其发酵菌液在制备含嗜铁素的制剂中的应用。

本发明还提供了一种植物病害生防菌剂，所述生防菌剂中含有BsNLG8菌株或其发酵菌液。

优选地，所述生防菌剂中BsNLG8的浓度为1×10⁷CFU/mL，见实施例4。

本发明还提供了一种防治植物病害的方法，其特征在于，将上述生防菌剂施用于植物叶片、果实、植物根部或根系土壤。

具体地，所述植物病害为稻瘟病，香蕉枯萎病，番茄酸腐病，水鬼蕉叶斑病，番石榴果腐病或菜心炭疽病；用于防治稻瘟病、水鬼蕉叶斑病或菜心炭疽病时将所述生防制剂施用于植物叶片，用于防治番茄酸腐病和番石榴果腐病时施用于果实表面，用于防治香蕉枯萎病时施用于植物根部或根系土壤。

具体地，BsNLG8发酵菌液的培养方法为：将-80℃保存的BsNLG8甘油菌以1：100的体积比接入新鲜的液体LB培养基中，220rpm，37℃条件下活化12 h，获得种子菌液；再以1：100的体积比将种子菌液接于新鲜的液体LB培养基中，220rpm，37℃摇4h。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一株伯克霍尔德氏菌(Burkholderiasp.)BsNLG8菌株，其具体分类学地位为Burkholderiapuraquae，属于洋葱伯克霍尔德氏菌群。所述菌株于2021年7月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址为广州市先烈中路100号，保藏号为GDMCC.No：61833。

本发明所述BsNLG8菌株对稻瘟病菌、香蕉枯萎病菌、番茄酸腐病菌、番石榴果腐病菌、菜心炭疽病菌和水鬼蕉叶斑病菌等多种植物病原真菌具有良好的拮抗抑制效果，可用于植物病害的生物防治，同时为植物病害的生物防治提供了新的菌种资源。其中，伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株可以显著降低水稻稻瘟病菌的病情指数，提高稻瘟病的防治效果，具有良好的开发运用前景。此外，BsNLG8 菌株还具有良好的产嗜铁素的能力，可将其用于制备含嗜铁素的制剂，应用前景广阔。

附图说明

图1为伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株的菌落及显微形态图；其中，图A为 BsNLG8菌株在LB培养基上37℃培养12h后的菌落背面图，图B为对应的菌落正面图，图C为BsNLG8菌株的菌落形态图，图D为BsNLG8菌株的显微形态图。

图2为基于16S rDNA构建的伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株的系统进化树。

图3为伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株与病原真菌的对峙培养结果；其中图A 为稻瘟病菌，图B为香蕉枯萎病菌，图C为菜心炭疽病菌，图D为水鬼蕉叶斑病菌，图E为番茄酸腐病菌，图F为番石榴果腐病菌。

图4为伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株的CAS平板检测结果。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1菌株的分离培养及保存

本发明所述伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株是从褐飞虱雌成虫肠道中分离获得，采用稀释涂布法分离培养，具体过程如下：

1、选择性分离培养基的配制

LB培养基：蛋白胨10g，酵母抽提物5g，氯化钠10g，琼脂15g，溶于1 L无菌ddH₂O中，调pH至7.0，121℃高压灭菌20分钟。

EB培养基：牛肉浸粉3g，胰蛋白胨10g，酵母粉15g，氯化钠5g，葡萄糖10g，琼脂15g，溶于1L无菌ddH₂O中，调pH至7.2±0.2，121℃高压灭菌 20分钟。

NA培养基：胰蛋白胨10g，牛肉浸粉3g，氯化钠5g，琼脂15g，溶于1L 无菌ddH₂O中，调pH至7.2±0.2，121℃高压灭菌20分钟。

2、褐飞虱雌成虫肠道微生物的分离

体式显微镜下解剖褐飞虱雌成虫肠道，将其置于PBS中，利用电动研磨仪研磨成匀浆，匀浆稀释后分别涂布于上述三种选择性分离培养基，每个处理三个重复，置于37℃恒温培养箱中培养，每隔24h观察一次。

3、连续纯化培养并拍照

待选择性分离培养基中长出单菌落后，挑取单菌落于相应的培养基上连续划线纯化5次以上，纯化后转接至LB液体培养基中，摇菌培养至细菌指数生长期时，保存于25％的甘油水溶液中，冻存于-80℃冰箱备用。

实施例2菌种鉴定

本发明所述伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株的菌种鉴定过程及结果如下所示：

1、菌株的传统生物学鉴定

对分离得到的菌株进行革兰氏染色并在显微镜下观察，将所得菌株在NA(营养琼脂)培养基上培养两天，观察其菌落形态，结果如图1所示。其中，图1A 为BsNLG8菌株在LB培养基上于37℃培养12h后的菌落背面图，图1B为对应的菌落正面图，图1C为BsNLG8菌株的菌落形态图，图1D为BsNLG8菌株的显微形态图。由图1可知，BsNLG8菌株为革兰氏阴性杆状细菌，其菌落形态为黄色圆形，凸起，表面光滑，边缘整齐。

2、菌株的生理生化特征测定

本发明所述伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株的生理生化特征测定结果如表1 所示：由表1可知，伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株在37℃和42℃条件下均可生长。其可以和接触酶、氧化酶发生反应，在D-葡萄糖发酵、麦芽糖发酵、乳糖发酵反应试验中呈阳性，不能分解蔗糖和脲酶，可以液化明胶，不能分解鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶。

表1 BsNLG8菌株的生理生化特征

注：“+”为阳性反应，“﹣”为阴性反应。

3、分子生物学鉴定

使用天根生物公司的细菌基因组DNA提取试剂盒(TIANamp Bacteria DNA Kit)抽提保存的单克隆菌株的基因组DNA，以提取的DNA为模板。利用通用引物27F(5’-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-GGTTACCTTGTTA CGACTT-3’)为上下游引物扩增细菌的16S rDNA。

PCR反应体系如表2所示。将PCR体系轻轻混匀后，短暂离心，置于PCR 仪上。PCR反应基本条件设置为：98℃预变性2min；98℃变性10s，50℃退火 15s，72℃延伸15s，30个循环；72℃，5min；10℃。

表2细菌16S rDNA PCR扩增体系(20μL)

PCR反应结束后，将PCR产物经1％琼脂糖凝胶检测并切胶回收纯化后送广州擎科生物技术有限公司测序鉴定。本发明所述伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株的 16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

4、菌株BsNLG8的系统发育分析

对SEQ ID NO:1所示测序结果进行分析比对，将获得的测序结果用软件 DNAStar拼接，并将该序列与NCBI中rRNA/ITS数据库进行blast比对。利用 ClustalW软件进行多序列比对分析，后用Mega7.0软件采取邻接法 (Neighbor-Joining)构建系统进化树，调整bootstrap值并检验进化树的可靠性。

系统发育分析结果如图2所示，由图2可知，BsNLG8菌株与Burkholderiacontaminans strain J2956(NR_104978.1)和Burkholderiapuraquaestrain CAMPA 1040(NR_159299.1)的相似性最高。综合生物学及生理生化鉴定结果表明所鉴菌株属于洋葱伯克霍尔德氏菌群，具体分类学地位为 Burkholderiapuraquae。将BsNLG8菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心 (GDMCC)，保藏时间为2021年7月30日，保藏地址为广州市先烈中路100 号，保藏号为GDMCC.No：61833。

实施例3伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株的抑菌测试

本发明采用平板对峙法测定伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株对植物病原真菌的抑菌能力。

所用固体培养基为PDA培养基；其配制方法为：46g马铃薯葡萄糖琼脂培养基(不含抗生素)制成1L，将培养基加热至完全溶解，121℃高压灭菌20分钟。

BsNLG8菌液的制备方法：将保存于-80℃的甘油菌以1：100的体积比接入新鲜的液体LB培养基中，在220rpm，37℃条件下活化12h获得种子菌液，再以1：100的体积比取种子菌液接入新鲜的液体LB培养基，220rpm，37℃摇4h 获得具有较强活性的菌液，测定其OD值，配制成1×10⁷CFU/mL的菌液。

抑菌测试：先在PDA培养基中央接种活化好的植物病原菌菌饼，在距菌饼 2.5cm的对称处通过划线法接种拮抗菌BsNLG8的菌液，以仅接种病原菌的平板为对照，将平板置于25℃，湿度75％的恒温培养箱中倒置培养，设置3次生物学重复。根据病原菌的生长周期，共培养一定时间后测量处理组和对照组的病原菌菌落直径，评估伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株的抑菌效果，结果如图3和表3 所示。其中，图3A所示病原菌为稻瘟病菌，图3B为香蕉枯萎病菌，图3C为菜心炭疽病菌，图3D为水鬼蕉叶斑病菌，图3E为番茄酸腐病菌，图3F为番石榴果腐病菌。

由图3可知，伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株对稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)、香蕉枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.)、菜心炭疽病菌(ColletotrichumhigginsianumSacc.)、水鬼蕉叶斑病菌(Botrytis cinerea)、番茄酸腐病菌(Geotrichumcandidum)和番石榴果腐病菌(PstalotiopsiscocuuliGuba)具有非常显著的抑制作用。本发明同时测定了BsNLG8菌株对植物病原真菌的具体抑菌率，如表3所示。

由表3可知，伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株对多种植物病原真菌的抑制率均达到了80％以上，表明其对植物病原真菌具有强烈的抑制效果，可用于植物真菌病害的防治。

表3 BsNLG8菌株对6种真菌的抑菌率

实施例4 BcNLG8菌株对水稻稻瘟病的防效测定

1、BsNLG8生防菌液的制备

将保存于-80℃的甘油菌以1：100的体积比接入新鲜的液体LB培养基中，在220rpm，37℃条件下活化12h获得种子菌液，以1：100的体积比将种子菌液接入新鲜的液体LB培养基，220rpm，37℃摇4h获得具有较强活性的菌液，测定其OD值，配制成1×10⁷CFU/mL的菌液。

2、稻瘟病菌孢子的制备

将稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)在25℃，75％的湿度条件下活化培养10 天，待菌落长满培养皿后在超净台中打开，刮除气生菌丝后光照诱导产孢，温度为25℃，湿度为90％，光周期为12-12h，诱导产孢2天。取出已产有稻瘟病菌孢子的培养基，朝下倒扣于盛有4mL无菌水的培养皿中，用玻璃涂布棒在培养基背面轻划，吸取孢子悬浮液，重复三次，混合计数。最后用血球板计算孢子浓度，使孢子浓度至5×10⁵CFU/mL。

3、BsNLG8对稻瘟病菌的防效测定

选取生长状态良好且长势均一的盆栽水稻苗(生长期60天左右)，每个处理组水稻苗喷施BsNLG8菌液5mL(浓度为1×10⁷CFU/mL)，24h后喷施稻瘟病菌孢子悬浮液5mL。对照组喷施相同体积的无菌水，24h后喷施稻瘟病菌孢子悬浮液5mL，处理组和对照组的水稻苗均置于温室进行培养，处理7天后调查病情，统计病情指数，实验重复三次。

根据国际水稻所稻瘟病抗性评价分级标准进行调查(以叶片为单位)，按0～9级分级，分级标准如下(以叶片为单位)：

0级：无病

1级：仅有小的针尖大小的褐点

2级：较大褐点

3级：小而圆以至稍长的褐色坏死灰斑，直径1～2毫米

4级：典型的稻瘟病斑或椭圆形，长1～2厘米，常限于两条叶脉间，病斑面积不足叶面积的2％

5级：典型的稻瘟病斑，受害面积小于10％

6级：典型的稻瘟病斑，受害面积为10～25％

7级：典型的稻瘟病斑，受害面积为26～50％

8级：典型的稻瘟病斑，受害面积为51～75％

9级：全部叶片死亡

感病指数和防治效果的计算方法如下：

病情指数＝∑(病级株数×代表值)/(株数总和×发病最重的一级的代表值) ×100

防治效果(％)＝(对照组病情指数－处理组病情指数)/对照组病情指数×100％

BcNLG8菌株对水稻稻瘟病的防效测定结果如表4所示：

表4 BsNLG8菌株对稻瘟病的防效

由表4可知，BsNLG8菌液处理过的水稻植株的稻瘟病症状较轻，生长状况良好。与对照组相比，BsNLG8菌液处理过的水稻植株的病情指数为24.56，病情指数显著降低，防效高达70.85％以上。上述结果表明，BsNLG8菌液对于稻瘟病具有一定的防治效果，在生防菌的开发应用方面具有一定的潜力。

实施例5 BcNLG8菌株产嗜铁素能力检测

CAS检测平板的配置：将10.87g的CAS检测培养基加入1L蒸馏水中，加热煮沸使其完全溶解，于121℃高压灭菌30min。

取-80℃冰箱保存的伯克霍尔德氏菌BsNLG8甘油菌划线培养，挑取单菌落接种于LB液体培养基中，30℃，180rpm/min摇12h，取5mL菌液点到CAS 检测平板上，以仅接LB液体培养基的平板为对照，均置于30℃恒温培养箱培养 72h，观察菌落周围的颜色变化。BcNLG8菌株的产嗜铁素能力检测结果如图4 所示，由图4可知，在30℃培养72h后，BsNLG8菌株在CAS检测平板上中央接种菌液处有明显的黄色晕圈，表明伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株可以产生与铁离子具有高亲和力的嗜铁素，平板中的铁离子被伯克霍尔德氏菌BsNLG8分泌的嗜铁素夺走，从而呈现黄色晕圈。

综上，本发明提供的伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株对于多种植物病原真菌的生长具有强烈的抑制作用，可用于植物病害的生物防治，为植物病害的生物防治提供了一定的菌种资源。同时，伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株可以降低水稻稻瘟病菌的病情指数，提高防治效果，具有良好的开发运用前景。伯克霍尔德氏菌 BsNLG8还具有良好的产嗜铁素的能力，可将其用于制备含嗜铁素的制剂，为该生防菌的功能开发也提供了一定的方向和理论基础。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 一株伯克霍尔德氏菌BsNLG8菌株及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1445

<212> DNA

<213> 伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)

<400> 1

tgggtagtgg ggcatgctta acatgcagtc gaacggcagc acgggtgctt gcacctggtg 60

gcgagtggcg aacgggtgag taatacatcg gaacatgtcc tgtagtgggg gatagcccgg 120

cgaaagccgg attaataccg catacgatct acggatgaaa gcgggggacc ttcgggcctc 180

gcgctatagg gttggccgat ggctgattag ctagttggtg gggtaaaggc ctaccaaggc 240

gacgatcagt agctggtctg agaggacgac cagccacact gggactgaga cacggcccag 300

actcctacgg gaggcagcag tggggaattt tggacaatgg gcgaaagcct gatccagcaa 360

tgccgcgtgt gtgaagaagg ccttcgggtt gtaaagcact tttgtccgga aagaaatcct 420

tggctctaat acagtcgggg gatgacggta ccggaagaat aagcaccggc taactacgtg 480

ccagcagccg cggtaatacg tagggtgcga gcgttaatcg gaattactgg gcgtaaagcg 540

tgcgcaggcg gtttgctaag accgatgtga aatccccggg ctcaacctgg gaactgcatt 600

ggtgactggc aggctagagt atggcagagg ggggtagaat tccacgtgta gcagtgaaat 660

gcgtagagat gtggaggaat accgatggcg aaggcagccc cctgggccaa tactgacgct 720

catgcacgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca cgccctaaac 780

gatgtcaact agttgttggg gattcatttc cttagtaacg tagctaacgc gtgaagttga 840

ccgcctgggg agtacggtcg caagattaaa actcaaagga attgacgggg acccgcacaa 900

gcggtggatg atgtggatta attcgatgca acgcgaaaaa ccttacctac ccttgacatg 960

gtcggaatcc cgctgagagg tgggagtgct cgaaagagaa ccggcgcaca ggtgctgcat 1020

ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt 1080

gtccttagtt gctacgcaag agcactctaa ggagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg 1140

tggggatgac gtcaagtcct catggccctt atgggtaggg cttcacacgt catacaatgg 1200

tcggaacaga gggttgccaa cccgcgaggg ggagctaatc ccagaaaacc gatcgtagtc 1260

cggattgcac tctgcaactc gagtgcatga agctggaatc gctagtaatc gcggatcagc 1320

atgccgcggt gaatacgttc ccgggtcttg tacacaccgc ccgtcacacc atgggagtgg 1380

gttttaccag aagtggctag tctaaccgca aggaggacgg tcaccacggt aggatccagg 1440

tcgtt 1445

Claims (10)

1.一株伯克霍尔德氏菌(Burkholderiasp.)BsNLG8菌株，其特征在于，所述菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏时间为2021年7月30日，保藏地址为广州市先烈中路100号，保藏号为GDMCC.No：61833。

2.根据权利要求1所述BsNLG8菌株，其特征在于，所述菌株的16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.权利要求1所述BsNLG8菌株或其发酵菌液在抑制植物病原真菌或制备植物病原真菌抑制剂中的应用。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述病原真菌为稻瘟病菌，香蕉枯萎病菌，番茄酸腐病菌，水鬼蕉叶斑病菌，番石榴果腐病菌，菜心炭疽病菌中的一种或多种。

5.权利要求1所述BsNLG8菌株或其发酵菌液在防治植物病害或制备植物病害生防菌剂中的应用。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述植物病害为稻瘟病，香蕉枯萎病，番茄酸腐病，水鬼蕉叶斑病，番石榴果腐病，菜心炭疽病中的一种或多种。

7.权利要求1所述BsNLG8菌株或其发酵菌液在制备含嗜铁素的制剂中的应用。

8.一种植物病害生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂中含有权利要求1所述BsNLG8菌株或其发酵菌液。

9.根据权利要求8所述生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂中BsNLG8的浓度为1×10⁷CFU/mL。

10.一种防治植物病害的方法，其特征在于，将权利要求8或9任一所述生防菌剂施用于植物叶片、果实、植物根部或根系土壤。

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