CN116042436B - 一株贝莱斯芽孢杆菌sf334及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一株贝莱斯芽孢杆菌SF334及其应用。所述贝莱斯芽孢杆菌SF334菌株已于2022年04月02日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏名称为：贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SF334，保藏编号为CCTCC NO：M 2022378。本发明的贝莱斯芽孢杆菌对橡胶树炭疽病菌具有显著的抑制作用，对多种植物病原真菌也表现出广谱的抑菌活性。同时本发明的贝莱斯芽孢杆菌能产生具有促生作用的吲哚‑3‑乙酸类生长素。本发明结果表明该菌株具有防病促生应用前景，为橡胶树炭疽病的防治提供了良好的生防资源，也为水稻稻瘟病、黄瓜枯萎病、辣椒疫霉病等病害研发新型的微生物菌剂打下了基础。

Description

一株贝莱斯芽孢杆菌SF334及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术应用领域，尤其是涉及一株贝莱斯芽孢杆菌SF334及其应用。
背景技术
天然橡胶因其具有良好的弹性、绝缘性、强伸性，较好的防水性、气密性和耐磨性，易于与其它材料粘合等优点，广泛用于军工、航天、医疗、汽车制造等领域，是重要的工业原料和战略物资，其制品多达7万多种。美国将天然橡胶作为关键农业原料，欧盟将其列入关键原材料清单，我国也积极发展橡胶产业(杨琳,莫业勇.2021年中国天然橡胶进出口情况分析[J].世界热带农业信息,2021,7:74-76)。世界天然橡胶总产量99％以上均来自巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)。
橡胶树炭疽病是巴西橡胶树重要的叶部病害，病原菌为胶孢炭疽病菌复合群(Colletotrichum gloeosporioides species complex)、尖孢炭疽病菌复合群(Colletotrichum acutatum species complex)和博宁炭疽复合群(Colletotrichumboniense species complex)，其中我国植胶区以胶孢炭疽病菌复合群和尖孢炭疽病菌复合群为主(Liu X B,Li B X,Cai J M,et al.Colletotrichum species causinganthracnose of rubber trees in China[J].Scientific Reports,2018,8:10435)。其中，橡胶树胶孢炭疽菌(Colletotrichum siamense)和橡胶树尖孢炭疽菌(Colletotrichumaustralisinense)是我国橡胶树种植区的炭疽病菌田间优势种。病菌能够侵染嫩叶、叶柄、嫩梢和果实等部位，引起叶片脱落、树梢回枯和果实腐烂，严重时会引起胶树的重复落叶，影响橡胶树的生长(林春花,张宇,刘文波等.我国巴西橡胶树炭疽病的研究进展[J].热带生物学报.2021,12(3):393-402+268)。橡胶树炭疽病被认为是造成巴西橡胶树减产的主要原因之一。该病害于1906年斯里兰卡首次发现，目前已广泛分布于非洲中部、南美洲、亚洲南部和东南部等植胶国家。该病害早期在我国只在苗圃和新植幼树上少量发现，近些年已成为橡胶树的重要叶部病害。2018年在海南省重病区防治炭疽病累计喷施药剂达到213t(郑行恺.海南省橡胶树炭疽病监测及其防治药剂施用技术研究[D].海南大学,2019)。2018年云南省橡胶树炭疽病在植胶主产区景洪市和临沧市均有发生，发生面积共计813.33hm2(江涛.国内橡胶主栽区炭疽病菌种群鉴定及其生物学特性分析[D].海南大学,2020)。
目前生产上对于橡胶树炭疽病的防治仍以化学杀菌剂为主；然而化学农药造成的病菌抗药性、毒性和环境污染问题日益突出，成为制约农业可持续发展的主要障碍。生防微生物具有环境兼容性好、无毒无害的优点，是化学农药的理想替代品。因此，用生防微生物防治橡胶树炭疽病对实现农业的可持续发展具有重要意义。
生物防治作为植物病害防治的重要组成部分，被认为是最具有发展潜力的重要防治方法之一。随着人们环保意识的加强，生物防治以其符合对环境、生态、人类健康的安全，不污染环境，成本低廉等特征成为近年来国内外病害综合防治与研究热点。近年来，橡胶树炭疽病的发生危害呈现越来越严重的趋势，从自然环境中筛选出对病害具有拮抗作用的生物资源，开展对橡胶树炭疽病生防菌筛选研究是一种值得探索的防治方法，也是一项具有重大意义的工作。
发明内容
本发明的目的是为了提供一株对橡胶树炭疽病菌具有显著抑制作用的贝莱斯芽孢杆菌及其应用。
本发明的贝莱斯芽孢杆菌对植物病原真菌如橡胶树胶孢炭疽病菌、尖孢炭疽病菌、水稻稻瘟病菌、黄瓜枯萎病菌、辣椒疫霉病菌、禾谷镰孢菌、灰霉病菌和马铃薯早疫病菌等表现出广谱的抑菌活性。同时本发明的贝莱斯芽孢杆菌能产生具有促生作用的吲哚-3-乙酸类生长素。本发明结果表明该菌株具有防病促生应用前景，为橡胶树橡胶炭疽病的防治提供了良好的生防资源，也为水稻稻瘟病、黄瓜枯萎病等多种病害的防治提供参考。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
本发明的第一方面是，提供一株贝莱斯芽孢杆菌，于2018年11月8日分离自海南省海口市海甸港湾花园果园地土壤，命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SF334，所述贝莱斯芽孢杆菌已于2022年04月02日在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：M 2022378。
进一步，贝莱斯芽孢杆菌SF334的16S rRNA基因如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第二个方面是，提供上述贝莱斯芽孢杆菌的发酵液。
本发明的第三个方面是，提供上述贝莱斯芽孢杆菌的发酵液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
以上所述的贝莱斯芽孢杆菌，取其单菌落接种至NB培养基中，28℃、180rpm摇床中培养24h后，即得。
本发明的第四个方面是，提供所述贝莱斯芽孢杆菌和/或发酵液在制备抑制橡胶树胶孢炭疽菌(Colletotrichum siamense)和/或橡胶树尖孢炭疽菌(Colletotrichumaustralisinense)的制剂上的应用。
本发明的第五个方面是，提供所述贝莱斯芽孢杆菌和/或发酵液在制备抑制由橡胶树胶孢炭疽菌(Colletotrichum siamense)和/或橡胶树尖孢炭疽菌(Colletotrichumaustralisinense)所致病害的制剂上的应用。
本发明的第六个方面是，提供所述的贝莱斯芽孢杆菌和/发酵液在拮抗植物病原真菌中的应用，所述植物病原真菌为稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp cucumerinum)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)和/或马铃薯早疫病菌(Alternaria solani)。
本发明的第七个方面是，提供所述的贝莱斯芽孢杆菌和/发酵液在制备拮抗植物病原真菌所致病害的制剂上的应用，所述植物病原真菌为稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp cucumerinum)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)、灰霉病菌(Botrytiscinerea)和/或马铃薯早疫病菌(Alternaria solani)。
本发明的第八个方面是，提供所述的贝莱斯芽孢杆菌和/发酵液在制备植物促生制剂上的应用。
本发明的第九个方面是，提供一种生防菌剂，包括以上所述的贝莱斯芽孢杆菌和/或所述的发酵液。
有益效果：
与现有技术相比，本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌SF334(简称“菌株SF334”)对橡胶树炭疽病菌具有显著的拮抗作用，对目前生产上重要的植物病原真菌也具有拮抗活性。此外，本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌SF334能够产生吲哚-3-乙酸(1H-Indole-3-aceticacid，IAA)类生长素，具有促生能力。因此，本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌SF334，在防治橡胶树炭疽病以及多种作物重要的真菌病害上具有较好的应用潜力，并且能够产生生长素，其生防潜力有待于进一步开发，将为研发多功能的生防菌剂打下基础。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1.菌株SF334的观察照片，其中A为菌株SF334的显微镜(1000X)观察照片，B为菌株SF334菌落形态平皿照片，C为菌株SF334扫描电镜照片。
图2.菌株SF334的16S rRNA基因的凝胶电泳结果。其中1代表DL2000 Marker；2代表菌株SF334的16S rRNA基因的产物。
图3.菌株SF334的16S rRNA基因序列比对结果，以Lactobacillus delbrueckiisubsp.lactis ATCC 12315(AF429505)为外枝构建的Neighbor-Joining系统发育树。
图4.贝莱斯芽孢杆菌SF334对橡胶树胶孢炭疽病菌的拮抗效果图。
图5.贝莱斯芽孢杆菌SF334对橡胶树尖孢炭疽病菌的拮抗效果图。
图6.贝莱斯芽孢杆菌SF334对稻瘟病菌的拮抗效果图。
图7.贝莱斯芽孢杆菌SF334对黄瓜枯萎病菌的拮抗效果图。
图8.贝莱斯芽孢杆菌SF334对辣椒疫霉病菌的拮抗效果图。
图9.贝莱斯芽孢杆菌SF334对禾谷镰孢菌的拮抗效果图。
图10.贝莱斯芽孢杆菌SF334对灰霉病菌的拮抗效果图。
图11.贝莱斯芽孢杆菌SF334对马铃薯早疫病菌的拮抗效果图。
图12.菌株SF334产生吲哚-3-乙酸类生长素的效果图，其中A为菌株SF334产生吲哚-3-乙酸类生长素的效果图，B为菌株SF334产生吲哚-3-乙酸类生长素的含量标准曲线。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例中所用的菌种培养基如下：
NA固体培养基(g/L)：牛肉浸膏3g，多聚蛋白胨5g，蔗糖10g，酵母粉1g，琼脂粉15g，加水溶解并定容至1000mL，调节pH 7.0-7.2，高压灭菌(121℃，20min)。
NB液体培养基(g/L)：牛肉浸膏3g，多聚蛋白胨5g，蔗糖10g，酵母粉1g，加水溶解并定容至1000mL，调节pH 7.0-7.2，高压灭菌(121℃，20min)。
PDA固体培养基(g/L)：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，加入水溶解，最后定容至1000mL，pH 7.0-7.2，高压灭菌(121℃，20min)。
生长素测定YM培养基(g/L)：M(g/L)：甘露醇5g，K2HPO4 0.25g，NaCl 0.05g，酵母膏1.5g，色氨酸0.05g，加水溶解并定容至1000mL，调节pH 7.0，高压灭菌(121℃，20min)。
实施例1、贝莱斯芽孢杆菌SF334的获得
1、土壤来源
2018年11月8日采集的海南省海口市海甸港湾花园果园地土壤。
2、菌株的筛选
(1)土样采集
采集果树植株根围表层约10cm的土样，每点采集200g土样。每块地采集3个土样，记录好采样的时间、地点和种类。采集完成的土样置于常温保存，以用于细菌的分离。
(2)细菌的分离
平板稀释法：称取10g土样于锥形瓶中，加入90mL无菌水，然后在200rpm，28℃摇床中振荡，20min后取出，在室温静置10min，制成土壤菌悬液原液。将该原液进行梯度稀释，分别得到100、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5，共6个梯度的稀释液。各取200μL菌悬液稀释液，均匀涂布于含有水稻条斑病菌RS105(OD600＝2.0)的NA平板上，每个梯度做3个重复。将平板置于28℃培养箱中，培养48h，观察。
(3)细菌纯化
观察并挑出具有明显抑菌圈的单菌落，在NA平板上进行划线纯化，在28℃培养箱倒置培养，12h后挑取单菌落，依次编号。
(4)细菌的保存
将菌株单菌落接种在NB液体培养基中，在28℃、180rpm摇床中培养12h后，吸取1mL菌液与1mL 50％的无菌甘油，轻轻振荡混匀，置于-80℃长期保存。
(5)促生菌的筛选
生长素测定法：采用分光光度计法对分泌生长素IAA的菌株进行筛选和含量测定。将制备改良YM培养基注入试管进行灭菌。在无菌条件下把每一个试管中接上待测菌株。置于28℃摇床在135r/min条件下培养96h。离心保留上清液，与比色液混合，在室温下培养30min，有粉红色出现，说明有IAA产生。在波长为530nm处测量OD值，代入IAA标准曲线，计算内生菌产IAA的含量。
最终筛选出的菌株SF334的显微镜(1000X)观察照片、菌落形态以及扫描电镜照片如图1所示。
通过固体培养基平板培养，观察所述贝莱斯芽孢杆菌的菌落颜色为乳白色，边缘不光滑，不规则，表面干燥粗糙，不透明，菌体较短，近椭圆形，革兰氏染色结果呈现的结果为阳性。
菌株SF334产生吲哚-3-乙酸(IAA)的效果图为图12所示。其中图12A的左图空白不接菌(CK)为无色，右图接种贝莱斯芽孢杆菌SF334为粉红色，说明产生了IAA。
实施例2、菌株SF334的16S rRNA基因和gyrA基因鉴定
利用Omega公司Becterial DNA Kit试剂盒提取菌株SF334的基因组DNA，利用细菌16S rDNA基因引物：27F 5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’和1492R 5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’，以提取的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，以获得目的片段。PCR反应体系为：
表1 Ex-Taq聚合酶链式反应体系
PCR反应基本条件为：95℃预变性5min，94℃变性1min，56℃退火1min，72℃延伸2min(1kb/min)，72℃预延伸6min，4℃保存，共30个循环。反应结束后，PCR产物均通过1％琼脂糖凝胶电泳检验，将PCR原液送武汉天一华煜基因科技有限公司进行测序。测序结果如图3所示。运用DNA Star进行分析测序结果，并在NCBI网站上进行BLAST比对，确定近缘株细菌的种属。菌株SF334的16SrRNA基因如SEQ ID NO.1所示。其比对结果如表2所示。
表2菌株SF334的16S rRNA基因测序BLAST结果
利用Omega公司Becterial DNA Kit试剂盒提取菌株SF334的基因组DNA通利用引物：GyrA-F 5’-CAGTCAGGAAATGCGTACGTCCTT-3’和GyrA-R 5’-CAAGGTAATGCTCCAGGCATTGCT-3’，以提取的DNA为模板，进行PCR扩增，以获得目的片段。PCR反应体系为：
表3 Ex-Taq聚合酶链式反应体系
反应条件：94℃预变性10min，94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，72℃预延伸10min，4℃保存，共30个循环。将PCR原液送武汉天一华煜基因科技有限公司进行测序。测序结果运用DNA Star进行分析，并在NCBI网站上进行BLAST比对，确定近缘株细菌的种属。菌株SF334的gyrA基因如SEQ ID NO.2所示。其结果如表4所示。
表4菌株SF334的gyrA基因测序BLAST结果
菌株SF334 16S rRNA基因序列比对结果以Lactobacillus delbrueckiisubsp.lactis ATCC 12315(AF429505)为外枝构建的Neighbor-Joining系统发育树如图3所示，结果显示：菌株SF334的16SrRNA基因与Bacillus velezensis具有99.64％的相似度。
菌株SF334 gyrA基因序列与Bacillus velezensis的模式菌株的gyrA基因序列比较，具有98.69％的相似度，与Bacillus amyloliquefaciens的模式菌株的gyrA基因序列比较，具有96.02％的相似度。
通过上述检测结果，最终确定菌株SF334为贝莱斯芽孢杆菌，将其命名为：贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SF334，已于2022年04月02日在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：M 2022378，地址在中国武汉的武汉大学。
实施例3、菌株SF334的生理生化鉴定
通过生理生化测试，明确所述菌株SF334是一株革兰氏阳性细菌，短杆状，能产生芽孢，需氧或兼性厌氧细菌。
本发明的菌株SF334的生理生化特征为：能够分泌3-羟基丁酮产生乙酰甲基甲醇和明胶酶；不能水解邻硝基苯-半乳糖苷、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、柠檬酸钠和硫代硫酸钠等；不能够氧化葡萄糖、甘露醇、肌醇、山梨醇和鼠李糖等；能够利用甘油、L-阿拉伯糖、核糖、葡萄糖、果糖、甘露糖等20种碳源产酸。具体结果见表5和表6。
表5菌株SF334生理生化特性–酶活、碳源氧化
+：阳性反应；-：阴性反应；W：弱阳性反应
表6菌株SF334生理生化特性–利用碳源产酸
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+：阳性反应；-：阴性反应；W：弱阳性反应
实施例4、贝莱斯芽孢杆菌SF334发酵液的制备
将贝莱斯芽孢杆菌SF334单菌落接种至NB培养基中，28℃、180rpm摇床中培养24h后，得到贝莱斯芽孢杆菌SF334的发酵液。之后，调整发酵液浓度为OD600＝2.0，备用。
实施例5、贝莱斯芽孢杆菌SF334的拮抗谱测定
采用滤纸片对峙培养法，将橡胶树胶孢炭疽病菌(Colletotrichum siamense)、橡胶树尖孢炭疽病菌(Colletotrichum australisinense)、稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp cucumerinum)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)、灰霉病菌(Botrytiscinerea)、马铃薯早疫病菌(Alternaria solani)分别在PDA培养基上培养，待菌丝长满整个平板后，用5mm孔径打孔器在平板上打取菌块，取其中一个菌饼，菌丝面朝上，接种到新的PDA平板中央，在菌饼上、下、左、右等距离(20mm)放入预先处理的滤纸片，左、右位置的滤纸片为灭菌烘干后加入30ul的供试贝莱斯芽孢杆菌SF334发酵液，上、下位置的滤纸片为灭菌烘干后加入30ul的NB培养基。每个处理3个重复，同时，以不接贝莱斯芽孢杆菌SF334，只接无菌水的平板为对照(CK)。在28℃培养箱中进行培养，5天后观察并记录抑菌现象。
对橡胶树胶孢炭疽病菌的拮抗效果如图4所示，对橡胶树尖孢炭疽病菌的拮抗效果如图5所示，对稻瘟病菌的拮抗效果如图6所示，对黄瓜枯萎病菌的拮抗效果如图7所示，对辣椒疫霉病菌的拮抗效果如图8所示，对禾谷镰孢菌的拮抗效果如图9所示，对灰霉病菌的拮抗效果如图10所示，对马铃薯早疫病菌的拮抗效果如图11所示。贝莱斯芽孢杆菌SF334对各个病原菌的相对抑菌率如表7所示。
表7贝莱斯芽孢杆菌SF334对8种植物病原真菌的抑菌效果
结果显示，贝莱斯芽孢杆菌SF334对橡胶树胶孢炭疽病菌的抑菌率为62.59％，对橡胶树尖孢炭疽病菌的抑菌率分为68.52％，对稻瘟病菌的抑菌率为59.63％，对黄瓜枯萎病菌的抑菌率为50.93％，对辣椒疫霉病菌的抑菌率为51.48％，对禾谷镰孢菌的抑菌率为56.67％，对灰霉病菌的抑菌率为61.85％，对马铃薯早疫病菌的抑菌率为59.26％。这表明，SF334对这8种病原真菌都具有较好的拮抗作用。
由此，本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌SF334，对橡胶树炭疽病菌具有显著的拮抗作用，对多种生产上重要的植物病原真菌也具有拮抗作用，能够产生生长素IAA，为橡胶树炭疽病的生物防治提供了新资源，也为其他重要病害防治研发新型的微生物菌剂打下了基础。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一株贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），其特征在于，命名为贝莱斯芽孢杆菌SF334，所述贝莱斯芽孢杆菌已于2022年04月02日在中国典型培养物保藏中心（CCTCC）保藏，保藏编号为CCTCC NO：M 2022378。
2.如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌的发酵液，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：
权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌，取其单菌落接种至NB培养基中，28 ℃、180 rpm摇床中培养24 h后，即得。
3.如权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌和/或权利要求2所述的发酵液在制备抑制橡胶树胶孢炭疽菌（Colletotrichum siamense）和/或橡胶树尖孢炭疽菌（Colletotrichum australisinense）的制剂上的应用。
4.如权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌和/或权利要求2所述的发酵液在制备抑制由橡胶树胶孢炭疽菌（Colletotrichum siamense）和/或橡胶树尖孢炭疽菌（Colletotrichum australisinense）所致病害的制剂上的应用。
5.如权利要求1所述的一株贝莱斯芽孢杆菌和/或权利要求2所述的发酵液在拮抗植物病原真菌中的应用，其特征在于，所述植物病原真菌为稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp cucumerinum）、辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）、禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum）、灰霉病菌（Botrytis cinerea）和/或马铃薯早疫病菌（Alternaria solani）。
6.如权利要求1所述的一株贝莱斯芽孢杆菌和/或权利要求2所述的发酵液在制备拮抗植物病原真菌所致病害的制剂上的应用，其特征在于，所述植物病原真菌为稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp cucumerinum）、辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）、禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum）、灰霉病菌（Botrytis cinerea）和/或马铃薯早疫病菌（Alternaria solani）。
7.一种生防菌剂，包括权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌和/或权利要求2所述的发酵液。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100052797A (ko) * 2008-11-11 2010-05-20 한국화학연구원 바실러스 벨레젠시스 ｐｂ3 균주 및 이를 이용한 식물병 방제방법
CN114736821A (zh) * 2022-04-03 2022-07-12 中国热带农业科学院橡胶研究所 一株对橡胶树红根病菌具有拮抗作用的贝莱斯芽孢杆菌sf305及其应用
CN114854618A (zh) * 2022-03-02 2022-08-05 上海交通大学 一株贝莱斯芽孢杆菌sf327及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100052797A (ko) * 2008-11-11 2010-05-20 한국화학연구원 바실러스 벨레젠시스 ｐｂ3 균주 및 이를 이용한 식물병 방제방법
CN114854618A (zh) * 2022-03-02 2022-08-05 上海交通大学 一株贝莱斯芽孢杆菌sf327及其应用
CN114736821A (zh) * 2022-04-03 2022-07-12 中国热带农业科学院橡胶研究所 一株对橡胶树红根病菌具有拮抗作用的贝莱斯芽孢杆菌sf305及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Multi-Omics Techniques for Analysis Antifungal Mechanisms of Lipopeptides Produced by Bacillus velezensis GS-1 against Magnaporthe oryzae In Vitro;Yanhua Zhang等;《Int J Mol Sci》;参见全文 *
Saravanan,R.等.GenBank: MT372157.1 Bacillus velezensis strain YEBBR6 16S ribosomal RNA gene, partial sequence.《GenBank》.2020,参见全文. *
一株具有防病促生功能的贝莱斯芽孢杆菌SF327;方园等;《微生物学报》;参见全文 *

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