CN114437054B - 降解erk1/2蛋白的靶向嵌合体及其应用 - Google Patents

降解erk1/2蛋白的靶向嵌合体及其应用 Download PDF

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Abstract

本申请涉及抑制剂技术领域，尤其涉及一种降解ERK1/2蛋白的靶向嵌合体及其应用。该靶向嵌合体具有如下化学结构：其中，L为刚性连接基团或亲水性连接基团，M为泛素连接酶配体分子，n1为0～20的整数；R1和R3分别独立选自氢、卤基、羟基、氨基、硝基、烷基、烷氧基烷基、芳基和酯基中的任意一种；R2选自氢、烷基、卤基、烷氧基、含氮杂环、环氧烷和环丙烷中的至少一种。该靶向嵌合体能够有效、且专一性地降解ERK1/2，抑制肿瘤生长，从而能够解决ERK1/2突变耐药的临床问题，因此，这样的靶向嵌合体在制备抗肿瘤药物中具有很好的应用前景。

Description

降解ERK1/2蛋白的靶向嵌合体及其应用
技术领域
本申请属于抑制剂技术领域，尤其涉及一种降解ERK1/2蛋白的靶向嵌合体及其应用。
背景技术
蛋白降解靶向嵌合体(Proteolysis Targeting Chimeras，PROTAC)是一种杂合双功能小分子化合物，结构中含有两种不同配体，一个是泛素连接酶E3配体，另一个是与细胞中目标靶蛋白结合的配体，两个配体之间通过连接子(Linker)相连，从而形成“三体”化合物：靶蛋白配体-Linker-E3配体。通过E3连接酶给靶蛋白加上泛素化标签，启动细胞内强大的泛素化水解过程，通过泛素-蛋白酶体途径特异性地降解靶蛋白。
细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK1/2)是与肿瘤密切相关的激酶，根据研究报导，32％的人类肿瘤与ERK1/2通路激活有关，临床上缺少一款有效的ERK1/2抑制剂，而同一条丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinase，MAPK)信号通路上游的RAF，MEK抑制剂在临床上又面临肿瘤细胞产生新的突变与耐药的问题。目前发现ERK1/2的突变大多发生在激酶口袋位置的胺基酸，使得抑制剂与ERK1/2的亲和力下降，因此ERK1/2激酶缺乏一个好抑制剂。
发明内容
本申请的目的在于提供一种降解ERK1/2蛋白的靶向嵌合体及其应用，旨在解决如何更好地降解ERK1/2蛋白的技术问题。
为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：
第一方面，本申请提供一种降解ERK1/2蛋白的靶向嵌合体，所述靶向嵌合体具有如下化学结构：
其中，L为刚性连接基团或亲水性连接基团，M为泛素连接酶配体分子，n1为0～20的整数；
R1和R3分别独立选自氢、卤基、羟基、氨基、硝基、烷基、烷氧基烷基、芳基和酯基中的任意一种，R2选自氢、烷基、卤基、烷氧基、含氮杂环、环氧烷和环丙烷中的至少一种。
第二方面，本申请提供一种上述靶向嵌合体在制备抗肿瘤药物中的应用。
本申请提供一种降解ERK1/2蛋白的靶向嵌合体，在PROTAC原理的基础上，基于Laxiflorin B及其衍生物对于ERK1/2具有良好的靶向性，选用刚性连接基团或亲水性连接基团与招募泛素连接酶(E3酶)配体分子连接，形成效果良好的蛋白降解靶向嵌合体PROTAC分子，并且通过试验证明其能够有效、且专一性地降解ERK1/2，抑制肿瘤生长，从而能够解决ERK1/2突变耐药的临床问题，因此，这样的靶向嵌合体在制备抗肿瘤药物中具有很好的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本申请实施例1提供的ERK1/2降解效果图；
图2是本申请实施例2提供的ERK1/2降解效果图；
图3是本申请实施例3提供的ERK1/2降解效果图；
图4是本申请实施例4提供的ERK1/2降解效果图；
图5是本申请实施例5提供的ERK1/2降解效果图；
图6是本申请实施例6提供的ERK1/2降解效果图；
图7是本申请实施例7提供的ERK1/2降解效果图；
图8是本申请实施例8提供的ERK1/2降解效果图；
图9是本申请实施例9提供的ERK1/2降解效果图；
图10是本申请实施例10提供的ERK1/2降解效果图；
图11是本申请实施例11提供的ERK1/2降解效果图；
图12是本申请实施例12提供的ERK1/2降解效果图；
图13是本申请实施例13提供的PC9细胞系活力图；
图14是本申请实施例14提供的药物在体内药效图；
图15是本申请实施例14提供的肿瘤内蛋白标志物的免疫组化图。
具体实施方式
为了使本申请要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。
应理解，在本申请的各种实施例中，上述各过程的序号的大小并不意味着执行顺序的先后，部分或全部步骤可以并行执行或先后执行，各过程的执行顺序应以其功能和内在逻辑确定，而不应对本申请实施例的实施过程构成任何限定。
在本申请实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本申请。在本申请实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”、“所述”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。
本申请实施例第一方面提供一种降解ERK1/2蛋白的靶向嵌合体，该靶向嵌合体具有如下式1的化学结构：
其中，L为刚性连接基团或亲水性连接基团，M为泛素连接酶配体分子，n1为0～20的整数；R1和R3分别独立选自氢、卤基、羟基、氨基、硝基、烷基、烷氧基烷基、芳基和酯基中的任意一种；R2选自氢、烷基、卤基、烷氧基、含氮杂环、环氧烷和环丙烷中的至少一种，具体地，R2选自氢、烷基和卤代基团、烷氧基、含氮杂环等易于实现羰基β消除(β-elimination)的离去基团中的任意一种，或者环外双键位置为环氧，环丙烷(三元环)；Me为甲基，“”表示单键、双键或者环氧、环丙烷。
本申请提供一种降解ERK1/2蛋白的靶向嵌合体，在PROTAC原理的基础上，基于Laxiflorin B及其衍生物对于ERK1/2具有良好的靶向性，选用刚性连接基团或亲水性连接基团与招募E3酶的配体分子连接，形成效果良好的蛋白降解靶向嵌合体PROTAC分子，并且通过试验证明其能够有效、且专一性地降解ERK1/2，抑制肿瘤生长，从而能够解决ERK1/2突变耐药的临床问题，因此，这样的靶向嵌合体在制备抗肿瘤药物中具有很好的应用前景。
需要说明的是，本申请实施例中，卤基可以是氟、氯、溴、碘等；烷基可以是含有1～20个碳的烷基，如1～10个碳的烷基，可以是直链或带有支链的，包括但不限于如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、异戊基、己基以及其它类似基团。烷氧基烷基可以是对应的(C1-C20)烷氧基(C1-C20)烷基。芳基是一种具有芳香性的环状结构的芳香烃，包括但不限于如苯基、萘基、蒽基、菲基等以及其它类似基团。酯基可以是含有1～20个碳链的酯基。
Laxiflorin B(简称LB)的化学结构如下：
通过式1中的R1、R2和R3不同的取代(R1、R2和R3均为氢时，即为Laxiflorin B)，可以形成对应的Laxiflorin B衍生物。Laxiflorin B及其衍生物被鉴定为一个新颖的细胞外调节蛋白激酶抑制剂，能专一性的靶向ERK蛋白，有巨大的潜力能够开发成为一个高度专一性的ERK1/2PROTAC药物；若能有效抑制生物演化上相对保守又处于MAPK信号通路下游的ERK1/2，会是肿瘤治疗上新的手段与思路。因此本申请实施例利用该分子特性，结合蛋白降解靶向嵌合体的原理，选用的刚性连接基团或亲水性连接基团与招募E3酶的沙利度胺连接，通过连接基团的调整与修饰，得到效果良好的能够降解ERK1/2的靶向嵌合体小分子。
在一些实施例中，L选自如下基团中的任意一种：
其中，R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R12、R13分别独立选自氢、卤基、羟基、氨基、硝基、烷基、烷氧基烷基、芳基和酯基中的任意一种；A为四元环、五元环、六元环、七元环、稠环或并环。n2为1～20的整数，n3为1～20的整数；E1，E2分别独立为羰基的氧原子，或者CH2上两个氢原子；X为氮原子或者氧原子或碳原子。
式2～式7中，A为不饱和的单环或稠环，可以是非杂环，也可以是杂环；具体可以是四元～七元的非杂环或杂环以及对应的稠环；例如，非杂环可以是苯环、萘环、蒽环等以及其它类似基团，杂环可以是吡啶环，咪唑环，哌啶环，其中，六元杂环和五元杂环可以是氮杂环，而稠环可以是不饱和五五并环,五六并环,六六并环等系列。本申请实施例中，选用苯环进行了相关试验，苯环取代基位点可以是邻位、间位或者对位。
式2～式7为刚性连接基团，可以降低分子团聚；式8～式9为亲水性连接基团，含有水溶性分子(PEG)，可以增加亲水性。式2～式9中，左边连接Laxiflorin B及其衍生物，右边连接泛素连接酶配体分子，进一步可以通过碳链连接泛素连接酶配体分子，碳链可以是2～6个碳(即n1为2～6的整数)。
在一些实施例中，连接基团L为式2；其中，R4和R5都为氢，A为苯环。在一些实施例中，连接基团L为式3；其中，R6和R7都为氢，A为苯环。在一些实施例中，连接基团L为式4；其中，R8和R9都为氢，A为苯环。在一些实施例中，连接基团L为式5；其中，R10和R11都为氢，A为苯环。在一些实施例中，连接基团L为式6；其中，R12为氢，A为苯环。在一些实施例中，连接基团L为式7；其中，R13为氢，A为苯环。在一些实施例中，连接基团L为式8；其中，n2为1～5的整数。在一些实施例中，连接基团L为式9；其中，n3为1～5的整数。本申请实施例中优选式2和式8。
在一些实施例中，M泛素连接酶配体分子选自如下结构中的任意一种：
其中，X1为碳、氮或氧，X2为碳、氮或氧，R14为氢或烷基。
进一步地，M为式12：其中，X1为碳或氮。
泛素连接酶配体分子以沙利度胺(Thalidomine，简称TH)为例，化学结构如下：
本申请实施例中基于Laxiflorin B靶向ERK蛋白，选用刚性连接基团或亲水性连接基团L，同时通过碳链-(CH2)n1-与招募E3酶的配体分子M(如沙利度胺)连接，通过连接基团的调整与修饰，得到效果良好的能够降解ERK1/2的靶向嵌合体小分子(Laxiflorin B-TH表示)。利用蛋白质印迹法(Western Blot)又称西方点墨法鉴定Laxiflorin B-THs促进ERK1/2的活性。利用细胞增殖检测鉴定Laxiflorin B-THs的抑癌活性。
上述Laxiflorin B可以利用天然物提取EB，再利用半合成的方式，将EB转换成Laxiflorin B，相较于直接从天然物中提取Laxiflorin B，能够大幅度增加Laxiflorin B的得率。再以特定不同长度的连接分子，利用酯化反应等条件将Laxiflorin B与能够招募E3酶的小分子Thalidomine沙利度胺连接，形成不同的靶向嵌合体。进一步地，上述靶向嵌合体的分子结构，还可以进一步优化，例如水溶性、细胞膜的穿透性、刚性连接基团的方向性等等；透过增加一些功能基团，能够对于该靶向嵌合体分子的灵敏度进行提升与改进。
本申请提供的降解ERK1/2蛋白的式1所示的靶向嵌合体可以分两步制备：
(1)Laxiflorin B及其衍生物先连接靶向嵌合体中的连接基团(L)，得中间产物；(2)将中间产物连接E3酶配体分子(M)，得到最终嵌合体。
以Laxiflorin B为例，反应过程如下：
第一步：取Laxiflorin B(17mg，0.05mmol)溶解在1mL二氯甲烷中，依次加入酸模块1(acids 1:含有式1中对应的连接基团L，0.05mmol)，EDCI(0.05mmol)和DMAP(cat.)，继续室温(25～27℃)反应12小时，TLC检测反应原料完全消失，加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，浓缩。柱色谱分离(PE/EA＝1:2)或(MeOH/DCM＝1:10)得到相应的中间产物。
第二步：在室温条件下，向上述中间产物的二氯甲烷溶液(1mL)中，加入TFA(0.05mL)。继续室温反应1小时，至TLC检测反应原料完全消失，减压浓缩反应液得到粗产物。将粗产物重新溶解至二氯甲烷溶液中(1mL)，依次向反应液加入酸模块2(acids 2:含有式1中对应的泛素连接酶配体分子M，0.05mmol),HATU(0.05mmol)，HOBT(0.05mmol)以及DIPEA(0.05mL)。在室温下持续搅拌反应液12小时，直至TLC监控反应完全。向反应液加入饱和NaHCO3水溶液(2mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(10mL)稀释有机相；萃取后水相使用乙酸乙酯(5mL×3)反复萃取，合并有机相用饱和食盐水萃取后，Na2SO4干燥。减压浓缩有机相后柱色谱分离(silica gel,Hexanes/Ethyl acetate＝1:2orMeOH/DCM＝1:10)得到目标产物靶向嵌合体PROTACs。
例如，第一步中，合成有如下部分中间体：
LB-Pi:(25mg,0.04mmol,80％).1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.90(d,J＝7.8Hz,2H),7.31(d,J＝7.7Hz,2H),6.64(d,J＝9.9Hz,1H),6.03(s,1H),5.95(d,J＝9.9Hz,1H),5.49(s,1H),4.74(s,2H),4.58(tt,J＝12.9,7.2Hz,2H),4.30(d,J＝13.2Hz,2H),3.10(dd,J＝9.3,4.6Hz,1H),2.85(t,J＝12.7Hz,2H),2.77–2.70(m,2H),2.55–2.46(m,3H),2.25–2.14(m,1H),1.86(d,J＝13.2Hz,2H),1.80–1.72(m,1H),1.72–1.59(m,3H),1.51(s,9H),1.38(s,3H),1.29(s,3H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ202.1,199.0,169.4,166.0,157.7,154.9,151.8,150.5,129.9,127.2,127.1,124.6,119.1,79.9,77.3,77.0,76.7,69.4,61.0,60.4,58.3,51.5,44.4,44.1,42.7,42.2,36.4,34.9,32.7,31.8,30.0,29.8,29.6,28.4,24.0,18.0,14.1.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.forC37H45NNaO8:654.3037,found654.3040.
LB-NPi:(19mg,0.03mmol,60％).1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.02–7.83(m,2H),7.29(d,J＝8.9Hz,2H),6.64(d,J＝10.2Hz,1H),6.04(s,1H),5.95(d,J＝10.2Hz,1H),5.52(s,1H),4.74(s,2H),4.64–4.51(m,2H),3.81(d,J＝5.5Hz,2H),3.72–3.61(m,1H),3.44(d,J＝4.9Hz,3H),3.12(dq,J＝10.3,5.4,4.8Hz,2H),2.73(dd,J＝12.7,3.4Hz,1H),2.60–2.42(m,3H),2.24(d,J＝2.9Hz,1H),2.19(m,1H),1.76(m,1H),1.37(s,6H),1.29(s,9H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ202.2,199.1,175.5,169.4,165.4,157.7,154.4,150.5,131.5,124.6,119.2,116.6,80.7,69.3,60.9,60.4,58.3,51.5,50.6,49.9,44.5,42.1,36.5,34.9,31.8,30.0,29.7,29.6,28.4,28.3,20.6,18.1,14.1.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.for C36H44N2NaO8:655.2990,found 655.2993.
LB-PM-Pi:(22mg,0.035mmol,70％).1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.87(d,J＝7.9Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),6.60(d,J＝10.2Hz,1H),6.00(s,1H),5.92(d,J＝10.2Hz,1H),5.45(s,1H),4.70(s,2H),4.57(m,2H),3.06(m,1H),2.75(m,3H),2.69(m,1H),2.48(m,3H),2.00(d,J＝4.1Hz,1H),1.77(d,J＝12.4Hz,2H),1.61(m,3H),1.47(s,9H),1.34(s,3H),1.25(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ202.1,199.0,169.3,165.9,157.7,154.8,150.5,149.7,129.8,127.4,124.6,119.1,79.7,69.2,61.0,58.4,51.5,44.4,42.2,36.5,34.9,31.8,31.5,30.0,29.8,29.6,28.4,23.9,18.1.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.forC37H45NNaO8:654.3037,found 654.3038.
LB-MPi:(22mg,0.035mmol,70％).1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.82(dt,J＝3.5,1.8Hz,1H),7.76(dq,J＝7.7,1.4Hz,1H),7.53–7.41(m,1H),7.38(t,J＝7.7Hz,1H),6.60(d,J＝10.2Hz,1H),5.98(s,1H),5.92(d,J＝10.2Hz,1H),5.55–5.35(s,1H),4.70(d,J＝2.0Hz,2H),4.64–4.49(m,2H),3.05(m,1H),2.73(d,J＝9.7Hz,3H),2.53–2.45(m,2H),2.42(m,1H),2.22–2.09(m,1H),2.01(m,2H),1.77(m,1H),1.69(m,1H),1.60(m,1H),1.46(s,9H),1.35(s,3H),1.25(s,3H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ202.1,199.0,169.3,166.2,166.1,157.7,154.7,150.5,144.3,132.6,132.6,129.3,128.8,128.2,127.7,124.6,119.1,79.6,69.2,61.2,60.4,58.3,53.4,51.5,44.4,42.3,36.5,34.9,31.8,31.6,30.0,29.7,28.4,25.3,23.9,18.1,14.1.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.forC37H45NNaO8:654.3037,found 654.3039.
第二步中，合成有如下目标产物靶向嵌合体PROTACs：
LB-A19-TH:(22mg,0.025mmol,50％).1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.21(s,1H),7.76(t,J＝6.0Hz,1H),7.68(t,J＝7.1Hz,1H),7.19(d,J＝8.6Hz,1H),7.12(d,J＝7.3Hz,1H),6.91(d,J＝10.2,1H),6.64(t,J＝5.9Hz,1H),6.01(s,1H),5.95(d,J＝10.2,1H),5.75(s,1H),5.16(m,1H),4.73–4.59(m,2H),4.52–4.40(m,2H),4.30–4.08(m,2H),3.95(d,J＝2.5Hz,2H),3.79–3.67(m,4H),3.39(q,J＝6.8Hz,2H),3.20(q,J＝6.6Hz,3H),2.99(m,1H),2.76–2.62(m,3H),2.54–2.39(m,1H),2.27(m,2H),2.13(m,2H),1.66(m,4H),1.53(m,3H),1.46(m,2H),1.31(s,3H),1.23(s,3H).13CNMR(100MHz,DMSO)δ202.8,200.0,175.0,173.4,170.6,170.2,169.5,169.5,167.8,159.8,151.1,146.9,136.8,132.7,124.0,119.7,117.7,110.9,109.5,70.7,70.6,70.5,70.2,70.0,70.0,68.2,61.1,58.4,51.6,49.0,44.1,42.3,41.9,38.8,36.7,34.8,31.8,31.5,29.7,29.2,26.6,25.0,23.4,22.7,18.0,14.5.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.forC46H56N4NaO15:927.3634,found927.3639.
LB-Pi-A12-TH:(28mg,0.034mmol,68％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),7.99–7.69(m,5H),7.40(m,2H),6.86(d,J＝10.2Hz,1H),5.95–5.79(m,2H),5.59(s,1H),5.16(m,1H),4.71(d,J＝11.5Hz,1H),4.66–4.49(m,4H),4.02(m,1H),3.29(m,2H),3.20–2.99(m,3H),2.96–2.82(m,2H),2.80–2.72(m,2H),2.61(m,2H),2.35(m,1H),2.26–2.17(m,1H),2.14(d,J＝2.8Hz,1H),2.10–2.05(m,2H),1.80(m,2H),1.59–1.45(m,4H),1.33(s,3H),1.22(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ202.8,200.0,173.3,172.6,170.4,169.7,168.2,167.6,165.8,160.0,152.3,150.9,142.1,136.9,135.0,132.2,129.9,128.3,127.8,127.6,124.1,121.9,119.8,69.8,61.5,58.5,55.4,51.5,49.3,45.8,44.0,42.2,42.1,36.7,34.7,33.4,32.7,31.5,31.4,31.2,30.1,26.9,23.6,22.5,21.6,18.0.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.forC48H49N3NaO11:866.3259,found 866.3265.
LB-Pi-A13-TH:(30mg,0.035mmol,70％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),8.02–7.65(m,5H),7.52–7.31(m,2H),6.86(d,J＝10.2Hz,1H),6.03–5.83(m,2H),5.59(s,1H),5.15(m,1H),4.71(d,J＝11.5Hz,1H),4.60(m,4H),3.97(d,J＝13.2Hz,1H),3.08(m,4H),2.90(m,2H),2.52(m,4H),2.47–2.38(m,2H),2.35(m,1H),2.28–2.17(m,1H),2.14–2.01(m,2H),1.91–1.77(m,4H),1.55(m,5H),1.30(s,3H),1.23(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ202.8,200.0,173.3,170.4,170.4,169.5,168.2,167.6,165.8,165.1,160.0,152.3,150.9,142.6,136.6,135.1,132.4,129.9,128.2,127.8,127.6,124.1,121.9,119.8,69.8,61.5,58.5,55.4,51.5,49.3,45.8,44.0,42.3,42.1,41.9,36.7,34.7,33.4,32.8,32.5,31.4,31.4,30.6,30.1,26.6,23.6,22.5,18.0.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.forC49H51N3NaO11:880.3416,found 880.3412.
LB-Pi-A14-TH:(32mg,0.037mmol,74％).1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),7.90–7.67(m,5H),7.41(d,J＝8.2Hz,2H),6.86(d,J＝10.2Hz,1H),5.96–5.82(m,2H),5.59(s,1H),5.15(m,1H),4.71(m,1H),4.59(m,4H),4.04–3.93(m,1H),3.12–3.03(m,4H),2.90(m,2H),2.60(m,3H),2.28–2.17(m,1H),2.15–2.01(m,3H),1.79(m,3H),1.70–1.62(m,2H),1.61–1.50(m,5H),1.50–1.42(m,1H),1.30(s,3H),1.22(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ202.8,200.0,173.3,170.7,170.4,169.5,168.2,167.5,165.8,165.1,160.0,152.3,150.9,143.0,136.6,135.0,132.3,129.9,128.1,127.8,127.6,124.1,121.7,119.8,69.8,61.5,58.5,51.5,49.3,46.2,45.8,44.0,42.3,42.1,41.9,36.7,34.7,33.5,32.8,32.6,31.5,31.4,30.7,30.5,30.1,29.5,25.1,23.6,22.5,18.0,9.1.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.for C50H53N3NaO11:894.3572,found 894.3568.
LB-Pi-A15-TH:(33mg，0.0375mmol，75％).1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.15(s1H),7.86–7.70(m,5H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),6.86(d,J＝10.2Hz,1H),5.98–5.81(m,2H),5.59(s,1H),5.15(m,1H),4.71(m,1H),4.60(m,4H),4.02(m,1H),3.12–3.00(m,4H),2.95–2.82(m,2H),2.66–2.53(m,4H),2.35(m,3H),2.22(m,1H),2.15–2.03(m,2H),1.87–1.73(m,2H),1.65(m,3H),1.56(m,5H),1.39(m,2H),1.30(s,3H),1.22(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ202.8,200.0,173.3,171.0,170.9,170.4,169.5,168.2,167.5,165.7,160.0,150.9,150.2,150.0,143.1,136.6,135.0,132.3,129.9,128.3,128.1,127.9,124.1,121.7,119.8,69.8,61.6,60.3,58.5,55.4,51.5,49.3,47.3,45.8,44.0,43.4,42.5,42.1,36.8,36.7,34.7,32.7,31.7,31.5,31.4,30.8,30.7,30.1,29.1,26.2,25.1,23.6,22.5,21.3,18.0,14.6.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.forC51H55N3NaO11:908.3729,found908.3724.
LB-Pi-A16-TH:(31mg,0.035mmol,70％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),7.87–7.68(m,5H),6.86(d,J＝10.2Hz,1H),5.99–5.74(m,2H),5.59(s,1H),5.15(m,1H),4.70(d,J＝11.4Hz,1H),4.66–4.49(m,4H),4.01(m,1H),3.25–3.09(m,2H),3.09–2.97(m,4H),2.96–2.81(m,3H),2.66–2.56(m,3H),2.35(m,3H),2.29–2.17(m,2H),2.12–2.03(m,2H),1.81(m,2H),1.61(m,3H),1.56–1.43(m,6H),1.41–1.32(m,4H),1.30(s,3H),1.22(s,3H).13CNMR(100MHz,DMSO)δ202.8,200.0,173.3,172.6,170.9,170.5,169.5,168.2,167.6,165.8,160.0,152.3,150.9,143.1,136.6,135.0,132.6,132.3,132.1,132.0,129.9,129.4,129.2,128.0,127.8,127.6,124.1,121.7,119.8,69.8,61.5,58.5,51.5,49.3,45.9,44.0,42.3,42.1,41.9,36.7,34.7,33.5,32.8,31.5,31.4,31.2,30.9,30.9,30.1,29.3,29.1,25.3,23.6,22.5,21.6,18.0.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.for C52H57N3NaO11:922.3885,found 922.3890.
LB-Pi-A18-TH:(28mg,0.03mmol,60％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),7.95(q,J＝7.1,6.4Hz,1H),7.82(d,J＝8.1Hz,2H),7.59(dd,J＝8.6,7.1Hz,1H),7.42(d,J＝8.2Hz,2H),7.13(d,J＝8.6Hz,1H),7.03(d,J＝7.0Hz,1H),6.86(d,J＝10.2Hz,1H),6.72(t,J＝6.4Hz,1H),5.99–5.83(m,2H),5.59(s,1H),5.07(m,1H),4.70(m,1H),4.58(m,4H),4.09–3.98(m,1H),3.21–3.16(m,1H),3.16–3.07(m,3H),3.05(m,1H),2.90(m,2H),2.61(tt,J＝11.2,6.7Hz,5H),2.41–2.30(m,3H),2.22(m,1H),2.04(m,1H),1.82(t,J＝14.8Hz,2H),1.73–1.59(m,3H),1.57–1.45(m,4H),1.30(s,3H),1.22(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ202.8,200.0,173.4,172.2,170.6,170.2,169.5,169.3,167.8,165.8,160.0,152.3,150.9,146.8,136.7,132.8,129.9,127.8,127.6,124.1,119.9,117.7,110.9,109.6,69.8,61.5,58.5,55.4,51.5,49.0,45.7,44.0,42.3,42.1,36.7,36.4,34.7,34.2,33.3,32.7,31.8,31.4,31.1,30.3,30.1,29.5,28.4,25.0,23.6,22.6,18.0,14.5.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.forC52H57N5NaO12:966.3896,found 966.3893.
LB-Pi-A21-TH:(27mg,0.028mmol,56％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),7.87–7.77(m,3H),7.59(m,1H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),7.11(dd,J＝8.6,2.8Hz,1H),7.03(dd,J＝7.0,2.2Hz,1H),6.86(d,J＝10.2Hz,1H),6.56(t,J＝5.9Hz,1H),5.94–5.84(m,2H),5.60(s,1H),5.07(m,1H),4.70(m,1H),4.65–4.50(m,4H),4.07–3.96(m,1H),3.30(m,3H),3.16(m,2H),3.04(m,4H),2.96–2.83(m,2H),2.63–2.55(m,5H),2.39–2.29(m,3H),2.21(m,1H),2.13–2.01(m,2H),1.81(m,2H),1.59(m,5H),1.45–1.39(m,3H),1.36(m,4H),1.30(s,3H),1.22(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ202.8,200.0,173.4,171.7,170.6,170.2,169.5,169.5,167.8,165.8,160.0,152.3,150.9,146.9,136.8,132.7,129.9,127.8,127.6,124.1,119.8,117.7,110.9,109.5,69.8,61.5,58.5,51.5,49.0,45.7,44.0,42.3,42.1,38.9,36.7,34.7,33.3,31.8,31.5,31.4,31.1,30.1,29.6,29.5,29.2,28.4,26.6,26.6,23.6,22.7,22.6,18.0,14.5.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.for C55H63N5NaO12:1008.4365,found 1008.4373.
LB-NPi-A15-TH:(34mg,0.038mmol,76％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),7.85–7.68(m,6H),6.98(d,J＝8.9Hz,2H),6.86(d,J＝10.2Hz,1H),6.06–5.79(m,2H),5.63(s,1H),5.19–5.12(m,1H),4.69(m,1H),4.65–4.46(m,3H),3.64–3.57(m,4H),3.14–2.95(m,4H),2.90(m,1H),2.66–2.56(m,2H),2.38(m,3H),2.30–2.14(m,2H),2.13–2.03(m,2H),1.65(m,2H),1.60–1.49(m,4H),1.37(m,2H),1.30(s,3H),1.21(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ202.8,200.1,173.3,171.3,170.5,169.6,168.2,167.5,165.7,160.0,154.3,150.9,143.1,136.6,135.0,133.7,132.7,132.6,132.3,131.4,128.1,124.1,121.7,119.9,118.0,113.8,69.9,60.9,60.3,58.5,51.5,49.3,47.1,46.8,44.8,44.1,42.1,36.7,34.7,32.5,31.4,30.7,30.1,29.1,24.9,23.6,22.5,21.3,18.0,14.6.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.for C50H54N4NaO11:909.3681,found 909.3684.
LB-MPi-A15-TH:(29mg,0.033mmol,66％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),7.84–7.53(m,6H),7.50(t,J＝7.7Hz,1H),6.86(d,J＝10.1Hz,1H),5.95–5.78(m,2H),5.54(s,1H),5.14(m,1H),4.71(m,1H),4.65–4.53(m,3H),4.46(t,J＝12.4Hz,1H),3.90(m,1H),3.21–2.99(m,4H),2.90(m,1H),2.66–2.55(m,4H),2.42–2.17(m,4H),2.11–2.01(m,2H),1.93(m,2H),1.76(m,2H),1.61(m,4H),1.46–1.32(m,3H),1.20(d,J＝12.0Hz,6H).13CNMR(101MHz,DMSO)δ202.7,200.1,173.3,170.9,170.4,169.5,168.2,167.5,165.9,159.9,151.0,144.9,144.7,143.1,136.6,135.0,132.3,129.8,129.6,128.2,128.0,127.9,124.1,121.7,119.6,69.8,61.7,60.3,58.5,55.4,51.6,49.3,45.7,44.1,42.3,42.1,36.8,34.7,32.7,31.4,30.8,30.7,30.1,30.0,29.1,26.3,25.1,22.5,21.3,18.0,14.6.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.for C51H55N3NaO11:908.3729,found 908.3732.
LB-PM-Pi-A15-TH:(32mg,0.036nmmol,72％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),7.96–7.65(m,5H),7.46(dd,J＝18.5,8.0Hz,2H),6.86(d,J＝10.2Hz,1H),5.95–5.81(m,2H),5.59(d,J＝5.5Hz,1H),5.14(s,1H),4.71(m,1H),4.65–4.39(m,4H),3.96–3.83(m,1H),3.19–2.97(m,4H),2.97–2.84(m,1H),2.73–2.61(m,2H),2.59(m,1H),2.36(m,3H),2.22(m,1H),2.13–2.01(m,2H),1.93(m,1H),1.76(m,2H),1.64(m,2H),1.56(m,5H),1.36(m,2H),1.30(s,3H),1.22(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ200.0,173.3,171.0,170.9,170.4,169.5,168.2,167.5,165.7,160.0,150.9,150.2,143.1,136.6,135.0,132.3,129.9,128.3,128.1,127.9,124.1,121.7,119.8,69.8,61.6,60.3,58.5,55.4,51.5,49.3,47.3,45.8,44.0,42.5,42.1,36.7,34.7,32.7,31.7,31.5,30.8,30.7,30.1,29.1,26.2,25.1,23.6,22.5,21.3,18.0,14.6.HRMS(ESI/[M+Na]+)calcd.for C51H55N3NaO11:908.3729,found 908.3733.
本申请实施例第二方面提供一种上述靶向嵌合体在制备抗肿瘤药物中的应用。本申请的靶向嵌合体能够有效、且专一性地降解ERK1/2，抑制肿瘤生长，从而能够解决ERK1/2突变耐药的临床问题，因此，这样的靶向嵌合体在制备抗肿瘤药物中具有很好的应用前景。具体地，可以是非小细胞肺癌。
下面结合具体实施例进行说明。
实施例1
一种靶向嵌合体(LB-Pi-A12-TH表示)，其结构如图1中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-Pi-A12-TH的不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10μM)处理6小时，或1微摩处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-Pi-A12-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图1中的B所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A12-TH处理后，从药物浓度1微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图1中的C所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A12-TH处理后，在1微摩的浓度下，随着处理时间增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例2
一种靶向嵌合体(LB-Pi-A13-TH表示)，其结构如图2中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-Pi-A14-TH的不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10μM)处理6小时，或1微摩处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-Pi-A13-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图2中的B所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A13-TH处理后，从药物浓度1微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图2中的C所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A13-TH处理后，在1微摩的浓度下，随着处理时间增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例3
一种靶向嵌合体(LB-Pi-A14-TH表示)，其结构如图3中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-Pi-A14-TH的不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10μM)处理6小时，或1微摩处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-Pi-A14-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图3中的B所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A14-TH处理后，从药物浓度1微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图3中的C所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A14-TH处理后，在1微摩的浓度下，随着处理时间增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例4
一种靶向嵌合体(LB-Pi-A15-TH表示)，其结构如图4中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-Pi-A15-TH的不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10μM)处理6小时，或3μM、10μM处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-Pi-A15-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图4中的B所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A15-TH处理后,从药物浓度1微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图4中的C所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A15-TH处理后，在3微摩的浓度下，随着处理时间增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例5
一种靶向嵌合体(LB-Pi-A16-TH表示)，其结构如图5中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-Pi-A16-TH的不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10μM)处理6小时，或1μM处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-Pi-A16-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图5中的B所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A16-TH处理后,从药物浓度3微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图5中的C所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A16-TH处理后，在1微摩的浓度下，随着处理时间增加，些微促进ERK1/2降解，但能观察到在12小时处理后,磷酸化RSK水平的下降。
实施例6
一种靶向嵌合体(LB-Pi-A18-TH表示)，其结构如图6中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-Pi-A18-TH的不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10μM)处理6小时，或3μM处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-Pi-A18-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图6中的B所示，透过Western Blot分析，LB-Pi-A18-TH处理后，从药物浓度3微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图6中的C所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A18-TH处理后，在3微摩的浓度下，随着处理时间增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例7
一种靶向嵌合体(LB-Pi-A21-TH表示)，其结构如图7中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-Pi-A21-TH的不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10μM)处理6小时，或3μM处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-Pi-A21-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图7中的B所示，透过Western Blot分析，LB-Pi-A21-TH处理后,从药物浓度3微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图7中的C所示，通过Western Blot分析，LB-Pi-A21-TH处理后，在3微摩的浓度下，随着处理时间增加,，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例8
一种靶向嵌合体(LB-PEG-A19-TH表示)，其结构如图8中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-PEG-A19-TH的不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10μM)处理6小时，或3μM处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-PEG-A19-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图8中的B所示，通过Western Blot分析，LB-PEG-A19-TH处理后，从药物浓度3微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图8中的C所示，通过Western Blot分析，LB-PEG-A19-TH处理后，在3微摩的浓度下，随着处理时间增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例9
一种靶向嵌合体(LB-NPi-A15-TH表示)，其结构如图9中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-NPi-A15-TH的不同浓度(0、0.3、1、3、5、10μM)处理6小时，或3μM处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-NPi-A15-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图9中的B所示，通过Western Blot分析，LB-NPi-A15-TH处理后，从药物浓度3微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图9中的C所示，通过Western Blot分析，LB-NPi-A15-TH处理后，在3微摩的浓度下，随着处理时间增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例10
一种靶向嵌合体(LB-3R-A22-TH表示)，其结构如图10中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-3R-A22-TH的不同浓度(0、0.3、1、3、5、10μM)处理6小时，或3μM处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-3R-A22-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图10中的B所示，通过Western Blot分析，LB-3R-A22-TH处理后，从药物浓度3微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图10中的C所示，通过Western Blot分析，LB-3R-A22-TH处理后，在3微摩的浓度下，随着处理时间增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例11
一种靶向嵌合体(LB-Meta-Pi-A15-TH表示)，其结构如图11中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-Meta-Pi-A15-TH的不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10μM)处理6小时，或1μM处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-Meta-Pi-A15-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图11中的B所示，通过Western Blot分析，LB-Meta-Pi-A15-TH处理后，从药物浓度0.3微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图11中的C所示，通过Western Blot分析，LB-Meta-Pi-A15-TH处理后，在1微摩的浓度下，随着处理时间增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例12
一种靶向嵌合体(LB-PM-Pi-A15-TH表示)，其结构如图11中A所示，通过试验验证其ERK1/2降解效果：
(1)在6孔板中以5×105颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系，安排LB-PM-Pi-A15-TH的不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10μM)处理6小时，或3μM处理不同时间点(0、1、3、6、12、24小时)。
(2)待细胞贴壁后，加入LB-PM-Pi-A15-TH开始处理。
(3)以裂解液收取总蛋白，定量后，使用Western Blot法检测总ERK与磷酸化RSK的表达量。
结果分析：试验结果如图12中的B所示，通过Western Blot分析，LB-PM-Pi-A15-TH处理后，从药物浓度3微摩开始，随着浓度增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。如图12中的C所示，通过Western Blot分析，LB-PM-Pi-A15-TH处理后，在3微摩的浓度下，随着处理时间增加，能够有效促进ERK1/2降解，及RSK磷酸化水平的下降。
实施例13
在96孔板中以3000-5000颗细胞/孔的密度分别种入PC9非小细胞肺癌细胞系。
待细胞贴壁后，安排实施例1-12的不同靶向嵌合体的不同浓度(0、0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10μM)，每个组别皆作6个复孔，以利后续统计分析。处理48小时后，入CCK-8呈色试剂，并放置于37℃培养箱，反应2小时。以酶标仪测定450nm吸光值读数，并以Prism 6.0作出抑制曲线图。
结果分析：如图13所示，不同的靶向嵌合体处理后，对PC9细胞的抑制作用。与Laxiflorin B相比，LB-Pi-A15-TH对PC9细胞的抑制效果最好，IC50约为0.27μM；其次为LB-Pi-A21-TH，IC50约为0.52μM，LB-NPi-A15-TH则与Laxiflorin B效果接近，LB-PEG-A19-TH，IC50约为2.33μM，而LB-Pi-A18-TH效果不佳。
实施例14
将裸鼠分为4组,每组10只,在鼠背上分别接种5x 106PC9细胞,让肿瘤细胞生长一周后开始给药。
4组裸鼠分别给予生理盐水、LB-Pi-A13-TH、LB-Pi-A14-TH、LB-Pi-A15-TH,药物浓度为10mg/kg，给药频率为一周三次，隔日给药与测量肿瘤体积，连续给药三周后，观察肿瘤体积、重量、裸鼠体重等，并进行免疫组画分析，观察Ki67、pRSK、ERK、ARGE、EREG等标志物的表达水平变化。
结果分析：试验结果如图14中的A所示，给药三周内，测量裸鼠背上肿瘤体积显示LB-Pi-A14-TH与LB-Pi-A15-TH两组肿瘤与对照组相比明显受到生长抑制，而三种药物并未产生明显的毒性，对于裸鼠体重无影响(图14，B)，给药三周后，将裸鼠处死，肿瘤取出，无论体积还是重量，给药组都比对照组小(图14，C与D)。如图15所示，在肿瘤标记表达上，我们以免疫组化的方式，证明了LB-Pi-A14-TH与LB-Pi-A15-TH两者皆能明显的促进肿瘤组织内的ERK1/2总蛋白下降，Ki67、磷酸化RSK、AREG、EREG等与细胞增殖相关，或是与MAPK通路相关的生物标志物表达皆下调，反映药物的效果。
以上所述仅为本申请的较佳实施例而已，并不用以限制本申请，凡在本申请的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种降解ERK1/2蛋白的靶向嵌合体，其特征在于，所述靶向嵌合体具有如下化学结构中的至少一种：
。
2.如权利要求1所述的靶向嵌合体在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用。
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