CN114436887B - 一种中药薏苡仁中的新生物碱及其提取纯化方法和应用 - Google Patents

一种中药薏苡仁中的新生物碱及其提取纯化方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114436887B
CN114436887B CN202210142464.0A CN202210142464A CN114436887B CN 114436887 B CN114436887 B CN 114436887B CN 202210142464 A CN202210142464 A CN 202210142464A CN 114436887 B CN114436887 B CN 114436887B
Authority
CN
China
Prior art keywords
coixdine
extract
methanol
extracting
silica gel
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210142464.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114436887A (zh
Inventor
张爽
殷鑫
周英
俸婷婷
周永强
魏鑫
朱蔚芊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guizhou University of Traditional Chinese Medicine
Original Assignee
Guizhou University of Traditional Chinese Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guizhou University of Traditional Chinese Medicine filed Critical Guizhou University of Traditional Chinese Medicine
Priority to CN202210142464.0A priority Critical patent/CN114436887B/zh
Publication of CN114436887A publication Critical patent/CN114436887A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114436887B publication Critical patent/CN114436887B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/32—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton containing six-membered aromatic rings
    • C07C235/34—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton containing six-membered aromatic rings having the nitrogen atoms of the carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种中药薏苡仁中的新生物碱及其提取纯化方法和应用，步骤包括：将薏苡仁用甲醇加热回流提取，提取液经减压回收，得到粗浸膏；然后采用蒸馏水将其混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，再将得到萃取液回收溶剂得石油醚部位浸膏，乙酸乙酯部位浸膏，正丁醇部位浸膏；乙酸乙酯部位萃取物复溶后，采用正相硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、HPLC高效液相色谱法进行分离纯化，得到2个新的生物碱；通过活性筛选等研究，初步掌握了薏苡仁的抗肿瘤药效，为抗肿瘤新药的研发、薏苡仁质量评价标准提供物质基础，同时也为薏苡仁资源的进一步开发及利用提供科学依据。

Description

一种中药薏苡仁中的新生物碱及其提取纯化方法和应用
技术领域
本发明涉及中药化合物领域，具体涉及一种中药薏苡仁中的新生物碱及其提取纯化方法和应用。
背景技术
生物碱是自然界中广泛存在的一大类碱性含氮化合物，是许多中草药的有效成分。薏苡(Coix lacryma-jobi)原产于东南亚，已有数千年的栽培历史[1]。薏苡的成熟种子(薏苡仁)在玉米兴起之前是亚洲国家重要的食物[2-3]。除了作为食品外，薏苡仁一直以来作为传统药物使用，且药用历史悠久[4]。
据2020版《中国药典》记载，薏苡仁性凉，味甘、淡，归脾、胃、肺经，具有利水渗湿、健脾止泻、除痹排脓、解毒散结之功效，主治水肿、脚气、小便不利、脾虚泄泻等疾病[5]，现代药理学研究表明，薏苡仁具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化及治疗糖尿病等作用，尤其在抗肿瘤作用方便疗效显著[6-9]。为了进一步挖掘薏苡仁中具有潜在抗肿瘤活性成分，本研究采用正相硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、HPLC高效液相色谱法对薏苡仁甲醇提取物进行分离纯化，得到2个新的生物碱成分，分别为：coixdine A(N1-acetyl-N6,N10-(E)-di-p-coumaroylspermidine)和coixdine B(N1-formyl-N6,N10-(E)-di-p-coumaroylspermidine)。通过活性筛选等研究，初步掌握了薏苡仁的抗肿瘤药效，为抗肿瘤新药的研发、薏苡仁质量评价标准提供物质基础，同时也为薏苡仁资源的进一步开发及利用提供科学依据。
发明内容
本发明的目的是提供一种中药薏苡仁中的新生物碱；
本发明的另一目的是提供一种中药薏苡仁中的新生物碱的提取纯化分离方法；
本发明的另一目的是提供一种中药薏苡仁中的新生物碱在制备抗肿瘤功能药物方面的应用。
本发明所述新生物碱为coixdine A、coixdine B。
本发明所述新生物碱coixdine A化合物表征为：
结构式：
Figure BDA0003507598700000011
分子式：C27H33N3O5
HR-ESI-MS m/z：[M+Na]+502.2311
状态：白色粉末
比旋光度：
Figure BDA0003507598700000012
/>
本发明所述新生物碱coixdine B化合物表征为：
结构式：
Figure BDA0003507598700000021
分子式：C26H31N3O5
HR-ESI-MS m/z：[M+Na]+488.2153
状态：白色粉末
比旋光度：
Figure BDA0003507598700000022
1H-NMR、13C-NMR数据如表1：
表1 1H-NMR、13C-NMR数据
Figure BDA0003507598700000023
本发明所述的新生物碱的提取纯化方法包括如下步骤：
(1)取干燥的薏苡仁80～120kg，经3～7倍量的甲醇加热回流提取2～6次，每次1～5小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪回收溶剂，得浸膏1156～1856g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取2～6次，每种萃取液分别合并，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位342～523g，乙酸乙酯萃取部位32.9～54.3g，正丁醇萃取部位198～302g以及水部位；
(2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样，样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱，洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
(3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9～10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1～Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，得到化合物coixdine A 9.8～16.1mg和coixdine B 2.6～4.4mg。
进一步地，本发明所述的新生物碱的提取纯化方法包括如下步骤：
(1)取干燥的薏苡仁90～110kg，经4～6倍量的甲醇加热回流提取3～5次，每次2～4小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪回收溶剂，得浸膏1360～1660g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取3～5次，合并萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位392～481g，乙酸乙酯萃取部位38.2～48.1g，正丁醇萃取部位220～269g以及水部位；
(2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样，样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
(3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9-10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1-Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，得到化合物coixdine A 11.4～13.9mg和coixdine B 3.1～3.8mg。
再进一步地，本发明所述的新生物碱的提取纯化方法包括如下步骤：
(1)取干燥的薏苡仁98kg，经5倍量的甲醇加热回流提取4次，每次3小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪回收溶剂，得浸膏1481g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取4次，合并萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位428g，乙酸乙酯萃取部位42g，正丁醇萃取部位240g以及水部位；
(2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样,样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
(3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9～10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1～Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，得到化合物coixdine A 12.4mg和coixdine B 3.4mg。
本发明所述步骤(1)中的旋转蒸发仪处理温度为40℃。
本发明所述步骤(3)中色谱纯化的条件为：以体积比53:47的甲醇-水为流动相，流速3mL/min，保留时间分别为18.3min和21.1min。
本发明所述的新生物碱coixdine A、coixdine B在制备抗肿瘤药物中的应用；
本发明所述的新生物碱coixdine A、coixdine B在制备抗肿瘤药物制剂中的应用；
本发明所述制剂为加入药学上可接受的辅料按常规工艺制备成药学上可接受的制剂，所述药学上可接受的制剂为固体制剂或液体制剂；
本发明所述固体制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂；所述液体制剂为注射制剂、口服液。
有益效果：
1.现有文献中未见coixdine A和coixdine B的报道，本发明从薏苡仁中分离并鉴定出两个新化合物：分别为coixdine A和coixdine B。
2.两个新化合物coixdine A和coixdine B具有亚精胺类骨架，这是首次在薏苡属植物中发现具有该骨架类型的化合物。
3.通过体外抗肿瘤作用研究发现，化合物coixdine A和coixdine B在抑制A549细胞系增值方面优于阳性药依托泊甙。因此化合物coixdine A和coixdine B在开发成治疗肺癌药物方面具有一定的潜力。
附图说明
图1化合物coixdine A的1H-NMR谱
图2化合物coixdine A的13C-NMR谱
图3化合物coixdine A的HR-ESI-MS谱
图4化合物coixdine B的1H-NMR谱
图5化合物coixdine B的13C-NMR谱
图6化合物coixdine B的HR-ESI-MS谱
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步地具体说明。
实施例1
新生物碱为：coixdine A、coixdine B，其结构式为：
Figure BDA0003507598700000041
/>
实施例2
中药薏苡仁中新生物碱的提取纯化方法：
(1)取干燥的薏苡仁98kg，经5倍量的甲醇加热回流提取4次，每次3小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪回收溶剂，得浸膏1481g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取4次，合并萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位428g，乙酸乙酯萃取部位42g，正丁醇萃取部位240g以及水部位；
(2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样,样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
(3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9～10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1～Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，以比例为53:47的甲醇:水为流动相，流速3mL/min，保留时间分别为18.3分钟和21.1分钟，得到化合物coixdine A 12.4mg和coixdine B 3.4mg。
实施例3
中药薏苡仁中新生物碱的提取纯化方法：
(1)取干燥的薏苡仁120kg，经7倍量的甲醇加热回流提取6次，每次5小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪回收溶剂，得浸膏1856g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取6次，合并萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位523g，乙酸乙酯萃取部位54.3g，正丁醇萃取部位302g以及水部位；
(2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样,样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
(3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9～10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1～Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，以比例为53:47的甲醇:水为流动相，流速3mL/min，保留时间分别为18.3分钟和21.1分钟，得到化合物coixdine A 16.1mg和coixdine B 4.4mg。
实施例4
中药薏苡仁中新生物碱的提取纯化方法：
(1)取干燥的薏苡仁80kg，经3倍量的甲醇加热回流提取2次，每次1小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪(40℃)回收溶剂，得浸膏1156g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取2次，合并萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位342g，乙酸乙酯萃取部位32.9g，正丁醇萃取部位198g以及水部位；
(2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样,样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
(3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9～10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1～Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，以比例为53:47的甲醇:水为流动相，流速3mL/min，保留时间分别为18.3分钟和21.1分钟，得到化合物coixdine A 9.8mg和coixdineB 2.6mg。
实施例5
中药薏苡仁中新生物碱的提取纯化方法：
(1)取干燥的薏苡仁110kg，经6倍量的甲醇加热回流提取5次，每次4小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪(40℃)回收溶剂，得浸膏1660g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取5次，合并萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位481g，乙酸乙酯萃取部位48.1g，正丁醇萃取部位269g以及水部位；
(2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样,样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
(3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9～10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1～Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，以比例为53:47的甲醇:水为流动相，流速3mL/min，保留时间分别为18.3分钟和21.1分钟，得到化合物coixdine A 13.9mg和coixdine B 3.8mg。
实施例6
中药薏苡仁中新生物碱的提取纯化方法：
(1)取干燥的薏苡仁90kg，经4倍量的甲醇加热回流提取3次，每次2小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪(40℃)回收溶剂，得浸膏1360g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取3次，合并萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位392g，乙酸乙酯萃取部位38.2g，正丁醇萃取部位220g以及水部位；
(2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样,样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
(3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9～10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1～Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，以比例为53:47的甲醇:水为流动相，流速3mL/min，保留时间分别为18.3分钟和21.1分钟，得到化合物coixdine A 11.4mg和coixdine B 3.1mg。
实施例7
取coixdine A、coixdine B任意一种化合物或两种作为原料，加入药学上可接受的辅料糊精，制粒，得颗粒剂。
实施例8
取coixdine A、coixdine B任意一种化合物或两种作为原料，加入药学上可接受的辅料糊精，混匀，装入胶囊，得胶囊剂。
实施例9
取coixdine A、coixdine B任意一种化合物或两种作为原料，加入药学上可接受的辅料糊精，制粒，压片，得片剂。
实施例10
取coixdine A、coixdine B任意一种化合物或两种作为原料，加入药学上可接受的辅料糊精，混匀，压丸，干燥，得丸剂。
实施例11
取coixdine A、coixdine B任意一种化合物或两种作为原料，加入10倍量的注射用水，混匀，过滤，灭菌，得注射剂。
为了进一步验证本发明的可行性及有效性，筛选出最佳方案，发明人进行了一系列的试验，具体如下：
1.仪器与材料
Bruker DPX-400型核磁共振波谱仪(德国Bruker公司)；
半制备型HPLC高效液相色谱仪(日本岛津公司)；
半制备型高效液相色谱柱(waters公司，SunFire C18)；
柱层析硅胶200-300目(青岛海洋化工厂)；
ODS色谱填料(日本YMC公司)；有机试剂均为天津富宇精细化工有限公司生产。
2.化合物提取纯化方法
1)取干燥的薏苡仁98kg，经5倍量的甲醇加热回流提取4次，每次3小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪回收溶剂，得浸膏1481g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取4次，合并萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位428g，乙酸乙酯萃取部位42g，正丁醇萃取部位240g以及水部位；
2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样,样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱，洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9～10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1～Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，得到化合物coixdine A 12.4mg和coixdine B 3.4mg。
新生物碱coixdine A化合物表征为：
结构式：
Figure BDA0003507598700000071
分子式：C27H33N3O5
HR-ESI-MS m/z：[M+Na]+502.2311
状态：白色粉末
比旋光度：
Figure BDA0003507598700000072
新生物碱coixdine B化合物表征为：
结构式：
Figure BDA0003507598700000073
分子式：C26H31N3O5
HR-ESI-MS m/z：[M+Na]+488.2153
状态：白色粉末
比旋光度：
Figure BDA0003507598700000081
1H-NMR、13C-NMR数据如表1：
表1 1H-NMR、13C-NMR数据
Figure BDA0003507598700000082
3.活性筛选
本研究采用MTT法考察化合物coixdine A和coixdine B对于A549(人非小细胞肺癌细胞系)肿瘤细胞系的体外抗肿瘤作用。
具体方法如下：A549细胞用含有10％FBS的培养基DMEM在37℃，5％CO2条件下进行培养。取对数生长期的各细胞系(100μL，细胞密度2×105)接种于96孔板上，使其贴壁12小时，后加入浓度为0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、40μM的化合物coixdine A和coixdine B继续培养24小时(顺铂作为阳性对照，每组设3个复孔)。之后各孔加入MTT(5mg/mL)20μL，37℃孵育4个小时，弃去上清液，每孔加入100μL DMSO，最后用酶标仪在490nm下测定吸光度，计算IC50值。
表1化合物coixdine A和coixdine B对A549肿瘤细胞系的细胞毒活性
Figure BDA0003507598700000091
实验结论：通过体外抗肿瘤作用研究发现，化合物coixdine A和coixdine B在抑制A549细胞系增值方面优于阳性药依托泊甙。因此化合物coixdine A和coixdine B在开发成治疗肺癌药物方面具有一定的潜力。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
参考文献
[1]Zhu F.Coix:Chemical composition and health effects[J].Trends infood science&technology,2017,61:160-175.
[2]Corke H,Huang Y,Li J S.Coix:overview[J].Encyclopedia of foodgrains,2016,1:184-189.
[3]Roder W.Speculations on the importance of job's tears in pastagricultural systems of Bhutan[J].Economic Botany,2006,60(2):187-191.
[4]Devaraj R D,Jeepipalli S P K,Xu B.Phytochemistry and healthpromoting effects of Job's tears(Coix lacryma-jobi)-A critical review[J].FoodBioscience,2020,34:100537.
[5]中国药典[S].一部.2020:393.
[6]Qu D,Liu M,Huang M,et al.Octanoyl galactose ester-modifiedmicroemulsion system self-assembled by coix seed components to enhance tumortargeting and hepatoma therapy[J].International journal of nanomedicine,2017,12:2045.
[7]Choi G,Han A R,Lee J H,et al.A comparative study on hulled adlayand unhulled adlay through evaluation of their LPS-induced anti-inflammatoryeffects,and isolation of pure compounds[J].Chemistry&biodiversity,2015,12(3):380-387.
[8]Wang L,Chen J,Xie H,et al.Phytochemical profiles and antioxidantactivity of adlay varieties[J].Journal of agricultural and food chemistry,2013,61(21):5103-5113.
[9]Byun A R,Chun H,Lee J,et al.Effects of a dietary supplement withbarley sprout extract on blood cholesterol metabolism[J].Evidence-basedComplementary and Alternative Medicine,2015,2015.

Claims (10)

1.一种化合物coixdine A和coixdine B，其结构式为：
Figure FDA0004173049060000011
2.根据权利要求1所述的化合物coixdine A和coixdine B的提取纯化方法，其特征在于，所述提取纯化方法包括如下步骤：
1)取干燥的薏苡仁80～120kg，经3～7倍量的甲醇加热回流提取2～6次，每次1～5小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪回收溶剂，得浸膏1156～1856g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，体积比为1：1，每种极性溶剂萃取2～6次，分别合并各萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位342～523g，乙酸乙酯萃取部位32.9～54.3g，正丁醇萃取部位198～302g以及水部位；
2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样，样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱，洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9～10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1～Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，得到化合物coixdine A 9.8～16.1mg和coixdineB 2.6～4.4mg。
3.根据权利要求2所述的提取纯化方法，其特征在于，所述提取纯化方法具体包括如下步骤：
1)取干燥的薏苡仁90～110kg，经4～6倍量的甲醇加热回流提取3～5次，每次2～4小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪回收溶剂，得浸膏1360～1660g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取3～5次，合并萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位392～481g，乙酸乙酯萃取部位38.2～48.1g，正丁醇萃取部位220～269g以及水部位；
2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样，样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9-10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1-Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，得到化合物coixdine A 11.4～13.9mg和coixdineB 3.1～3.8mg。
4.根据权利要求3所述的提取纯化方法，其特征在于，所述提取纯化方法具体包括如下步骤：
1)取干燥的薏苡仁98kg，经5倍量的甲醇加热回流提取4次，每次3小时，过滤合并滤液，采用旋转蒸发仪回收溶剂，得浸膏1481g；所得浸膏加入5L蒸馏水分散，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行1：1的萃取，每种极性溶剂萃取4次，合并萃取液，经旋转蒸发仪回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位428g，乙酸乙酯萃取部位42g，正丁醇萃取部位240g以及水部位；
2)将乙酸乙酯部位萃取物加甲醇进行复溶，后用80～100目硅胶拌样,样品与硅胶质量比为1：1.2，湿法装柱，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱，洗脱比例为100：0～0：100，采用薄层色谱检识合并相同流份，得到7个组分Fr.1～Fr.7；
3)将Fr.7经反相ODS柱色谱以比例1：9～10：0的甲醇-水梯度洗脱得到9个组分Fr7.1～Fr7.9；Fr7.5经HPLC高效液相色谱纯化，得到化合物coixdine A 12.4mg和coixdine B3.4mg。
5.根据权利要求2-4任一项所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤1)中旋转蒸发仪处理温度为40℃。
6.根据权利要求2-4任一项所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤3)中色谱纯化的条件为：以体积比53:47的甲醇-水为流动相，流速3mL/min，保留时间分别为18.3min和21.1min。
7.一种如权利要求1所述的化合物coixdine A、coixdine B在制备抗肿瘤药物中的应用。
8.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的化合物和药学上可接受的辅料。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为固体制剂或液体制剂。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述固体制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂；所述液体制剂为注射制剂、口服液。
CN202210142464.0A 2022-02-16 2022-02-16 一种中药薏苡仁中的新生物碱及其提取纯化方法和应用 Active CN114436887B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210142464.0A CN114436887B (zh) 2022-02-16 2022-02-16 一种中药薏苡仁中的新生物碱及其提取纯化方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210142464.0A CN114436887B (zh) 2022-02-16 2022-02-16 一种中药薏苡仁中的新生物碱及其提取纯化方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114436887A CN114436887A (zh) 2022-05-06
CN114436887B true CN114436887B (zh) 2023-05-26

Family

ID=81373011

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210142464.0A Active CN114436887B (zh) 2022-02-16 2022-02-16 一种中药薏苡仁中的新生物碱及其提取纯化方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114436887B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106620393A (zh) * 2017-01-18 2017-05-10 南京财经大学 一种薏米多酚提取物及制备方法
CN113045449A (zh) * 2021-02-04 2021-06-29 深圳大学 香豆酰亚精胺衍生物及其提取方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106620393A (zh) * 2017-01-18 2017-05-10 南京财经大学 一种薏米多酚提取物及制备方法
CN113045449A (zh) * 2021-02-04 2021-06-29 深圳大学 香豆酰亚精胺衍生物及其提取方法和应用

Non-Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Antifungal Polyamides of Hydroxycinnamic Acids from Sunflower Bee Pollen;Jan Kyselka等;J. Agric. Food Chem.;第66卷;11018−11026 *
Anti-inflammatory Principles from Cordyceps sinensis;Mei-Lin Yang等;Journal of Natural Products;第74卷;1996–2000 *
Antioxidant mechanism of a newly found phenolic compound from adlay (NDPS) in HepG2 cells via Nrf2 signalling;Wenfei Xiong等;Food Chemistry;第378卷;132034 *
Antiproliferative and Chemopreventive Effects of Adlay Seed on Lung Cancer in Vitro and in Vivo;CHANG，Huichiu等;J. Agric. Food Chem.;第51卷;3656−3660 *
D I - C O U M A R O Y L S P E R M I D I N E S A N D T R I - C O U M A R O Y L S P E R M I D I N E S IN A N T H E R S OF D I F F E R E N T SPECIES OF THE G E N U S APHELANDRA;CHRISTA WERNER等;Phytochemistry;第40卷(第2期);461~465 *
Synthesis of 13C-dilabeled 4-coumaroylspermidines;H. Geneste, M. Hesse等;Tetrahedron;第54卷;15199-15214 *
Two new amides from the seeds of Coix lacryma-jobi var. lacryma-jobi;Xin Yin等;Natural Product Research;1-6 *
油菜花粉化学残渣的化学成分;鲁国庆;范思洋;杨义芳;萧伟;王振中;;中国医药工业杂志(第07期);669 *
薏苡仁中 1 个新的生物碱类化合物;殷鑫等;中草药;第53卷(第10期);2937-2940 *
薏苡仁的化学成分研究;朱蔚芊等;中药材;第44卷(第12期);2823-2828 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114436887A (zh) 2022-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101035548B (zh) 甾体皂苷药物组合物及其制备方法和应用
EP2520305B1 (en) Pharmaceutical composition including sunflower extract, preparative method and use thereof
CN111087285B (zh) 一种从铁皮石斛中提取联苄类化合物的方法及其应用
CN101185671B (zh) 从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物及其制备方法
US20040067263A1 (en) Method for preparating an anemone raddeana extract and the pharmaceutical composition containing the same as well as use thereof
CN102133220B (zh) 白头翁皂苷a的制备方法
CN116606269B (zh) 米团花二倍半萜化合物与提取物l01及其在制药中的应用
CN107137438B (zh) 腊梅属植物抗结核杆菌的用途
CN114436887B (zh) 一种中药薏苡仁中的新生物碱及其提取纯化方法和应用
CN107708717B (zh) 白鹤灵芝醌c作为神经细胞凋亡抑制剂的应用
KR20100097517A (ko) 쑥속（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ｓｐｅｃｉｅｓ）식물의 추출물로부터 원심향류분배 크로마토그래피를 이용한 고농도 유파티린(Ｅｕｐａｔｉｌｉｎ) 및 자세오시딘（Ｊａｃｅｏｓｉｄｉｎｅ）을 대량으로 분리 및생산하는 방법
CN107260777B (zh) 一种具有抗肿瘤活性的八月札精制总皂苷及其应用
CN102764320B (zh) 山大颜提取物及其制备方法与抗肿瘤应用
CN109467581B (zh) 一种荷叶黄酮苷的提取方法以及包括荷叶黄酮苷的药物制剂
CN102988525A (zh) 山楂核中总木脂素的制备方法及新用途
CN113429452A (zh) 一种作为抗炎剂的罗汉果酸酰化衍生物以及一种抗炎组合物
CN101735189A (zh) 小麦黄素的制备方法、制剂与用途
JPS6312445B2 (zh)
CN109575089B (zh) 酰化葡萄糖类化合物及其药物组合物和制备方法与应用
CN114805382B (zh) 一种倍半萜色酮类化合物及其分离和在制备抗胰腺癌药物中的应用
CN112121053B (zh) 三叶木通降三萜化合物在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用
CN114507265B (zh) 一种植物药百两金中的新单萜苷化合物及其提取分离方法和应用
KR20050097710A (ko) 선택적 폐암 억제활성을 갖는 복합 진세노사이드 조성물
CN116589513A (zh) 一种没食子酸鞣质的制备方法及其在降血压上的应用
CN111747835B (zh) 一种自胡麻科植物根部萃取或分离得到的分离物或纯化物及其制备方法和用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Zhang Shuang

Inventor after: Yin Xin

Inventor after: Zhou Ying

Inventor after: Beng Tingting

Inventor after: Zhou Yongqiang

Inventor after: Wei Xin

Inventor after: Zhu Weiqian

Inventor before: Yin Xin

Inventor before: Zhang Shuang

Inventor before: Zhou Ying

Inventor before: Beng Tingting

Inventor before: Zhou Yongqiang

Inventor before: Wei Xin

Inventor before: Zhu Weiqian

CB03 Change of inventor or designer information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant