CN114425057A - 护理组合物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种护理组合物及其用途。本发明护理组合物包括地瓜、豆薯及/或山药的茎及/或叶萃取物以及离子溶液，其中所述护理组合物中的盐度为
钠含量低于0.3％(w/w)，镁含量为
钾含量为
Description
技术领域
本发明公开了一种护理组合物及其用途，且特别有关于一种护理组合物在用于制备治疗调控鼻腔杯状细胞内的分泌囊泡数量的医药组成物的用途。
背景技术
在健康的人中，鼻子、喉咙和气道黏膜组织(Mucosa)的腺体每天会产生约1至1.5公升的浓稠物质，称之为黏液(Mucus)。黏液的主要目的是协助捕捉和消灭外界的有害细菌和病毒，防止其进入人体。黏液最终会进入消化系统被清除或通过分泌排出体外，此过程通常不被察觉，类似于呼吸或眨眼。但是，当病毒感染和被刺激物刺激时，这些病毒、微粒和微生物会增加黏液分泌，产生过多且更为黏稠的黏液。黏液的量增加、厚度变厚会引起刺激及不适感，常见症状如因呼吸道分泌物增加而引发鼻后滴流综合症(post nasal dripsyndrome,PNDS)、上呼吸道咳嗽综合症(upper airway cough syndrome,UACS)；因眼角分泌物增加而影响视力；因阴道分泌物增加而引发异味、搔痒感。
黏液由黏膜组织产生，黏膜组织包括上皮细胞(Epithelial cells)、杯状细胞(Goblet cells)和黏膜下腺体(Submucosal glands)。杯状细胞位于黏膜组织上皮细胞间，其顶端表面通常伸入管腔，此位置让它们有助于迅速应对外界的侵袭及伤害，杯状细胞可能比黏膜下腺体有更大的黏液分泌能力。因此，杯状细胞为黏膜组织的主要防线。
黏液是一种能够形成凝胶的生物液体。它是各种成分的混合物，包括水和各种细胞的分泌产物。人体黏液含有约95％的水和5％的固体；固体含量包括
的蛋白质和糖蛋白，1％的脂质和1％的矿物质。黏蛋白，又称为黏液糖蛋白或上皮糖蛋白，其为一种蛋白质及多糖聚合物，寡糖侧链藉由N及O-link连接至胜肽核心。
黏液的过度分泌会造成人类和非人类动物的不适感甚至是引发相关疾病，常见气管发炎性疾病，如哮喘(Asthma)、慢性阻塞性肺病(Chronic obstructive pulmonarydisease,COPD)、慢性支气管炎(Chronic bronchitis)等慢性疾病、囊性纤维化(Cysticfibrosis)、肺炎(Pneumonia)、鼻炎(Rhinitis)等，且流感或普通感冒也皆会造成黏液分泌增加。
为了治疗黏液过多所造成的不适，通常会使用抗组织胺(Anti-histamine)及喷雾类皮质类固醇(Corticosteroids)、交感神经兴奋剂(Sympathomimetic drugs)等药物。然而，抗组织胺可能会使黏液变稠，并使细菌性炎症恶化。特定的抗组织胺药物可能会随着时间的流逝而失去效力，需要更多或替代的抗组织胺药来减少全身反应，且抗组织胺药可能会产生副作用，例如头痛、口干、鼻子干燥、高血压、高血糖、白内障、骨质流失、贺尔蒙失调等。喷雾类皮质类固醇的副作用包括干燥、烧灼、鼻腔刺痛、打喷嚏、头痛和鼻血。交感神经兴奋剂的副作用为产生依赖性、药物性鼻炎等。所以，目前的药物治疗方式长期下来会对身体造成严重的负担。
此外，现今研究认为杯状细胞为黏膜组织的主要防线，因此，至今多以杯状细胞数量多寡，用以判断鼻腔黏液分泌的状况，但分析杯状细胞的数量并不足以证明调控黏液分泌能能够有效改善。
发明内容
有鉴于此，为解决上述问题，业界亟需一种安全、有效的组合物来调控鼻腔环境，且不会对身体造成负担。因此，本发明提供一种护理组合物，用以调节杯状细胞内的分泌囊泡数量，进而调控黏膜组织黏液分泌量。
本发明提供一种护理组合物，包括地瓜、豆薯及/或山药的茎及/或叶萃取物，以及离子溶液组成，其中含有钠(sodium)、镁(Magnesium)及钾(Potassium)元素。
在本发明一实施例中，其中护理组合物的盐度为
在本发明一实施例中，其中护理组合物的钠含量低于0.3％(w/w)。
在本发明一实施例中，其中护理组合物的镁含量高于0.25％(w/w)。
在本发明一实施例中，其中护理组合物的镁含量为
优选为
在本发明一实施例中，其中护理组合物的镁:钾比为
在本发明一实施例中，其中护理组合物的钾含量为
在本发明一实施例中，还包括铁(Iron)、铜(Copper)、锌(Zinc)、碘(Iodine)、铬(Chromium)及/或钼(Molybdenum)元素。
在本发明一实施例中，其护理组合物为液体。
本发明更提供一种使用本护理组合物用于制备调控鼻腔杯状细胞内的分泌囊泡数量的医药组合物的用途。
其中，所述组合物由地瓜叶、豆薯和山药的茎和/或叶的萃取物以及离子溶液所组成。
特别是，所述离子溶液包含镁、钾、钠离子，其中所述镁离子与钾离子浓度比为4～17:1(w/w)，且镁离子含量为0.3～1％、钠离子含量低于0.3.％、钾含量为0.02～0.2％，以及盐度为0.9～4％。
特别是，所述护理组合物调控分泌囊泡的分泌量。
在本发明一实施例中，所述护理组合物可调控杯状细胞内的分泌囊泡的分泌量。
其中，调控减少的分泌囊泡数量不超过45％；调控所述杯状细胞内的分泌囊泡分泌黏液增加的量少于240％。
在本发明一实施例中，所述护理组合物可分解组织胺(Histamine)。
在本发明一实施例中，所述护理组合物可抑制白三烯类(Leukotrienes)、前列腺素(Prostaglandins)的生成。
在本发明一实施例中，所述护理组合物还包括免疫抑制剂、免疫调节剂或消炎药。
本发明再一方面提供一种护理组合物，所述组合物由地瓜叶、豆薯及/或山药叶的茎和/或叶的萃取物以及离子溶液所组成，所述护理组合物由下述方法制得：
(1)将地瓜叶、豆薯及/或山药叶置于70℃的烘箱中，烘干至含水量剩余5～7％，防止有机物螯合金属离子；
(2)取干燥地瓜叶，放入行星式球磨机中，将地瓜叶、豆薯及/或山药叶磨成粉末，其尺寸需介于1μm～0.1μm；
(3)将液态二氧化碳利用高压帮浦加压至临界压力以上(高于72.9atm)，并流经热交换器使高压液态二氧化碳变成超临界态，之后超临界二氧化碳进入装有地瓜叶粉末的高压槽内，将地瓜叶粉末中的脂溶性成分萃出，并进行静态萃取20分钟以及动态萃取4分钟，再降压至1atm，升温至室温，使二氧化碳气化后进入分离槽；
(4)将离子溶液进行电解后成等张离子溶液，放入烧杯中煮沸后，加入地瓜叶、豆薯及/或山药叶粉末，并盖上铝箔纸，用磁石搅拌1小时，恒温75℃，使地瓜叶、豆薯及/或山药叶粉末中含的金属离子溶出，达成镁离子含量>0.25％(w/w)，且镁离子:钾离子＝4～17:1(w/w)；
(5)将加热后的地瓜叶、豆薯及/或山药叶溶液放凉后，通入足量二氧化碳气体CO2，与溶液中的钠离子形成碳酸氢钠，沉淀析出后，使该离子浓度滤液内钠离子含量<0.3％(w/w)；以及
(6)将含碳酸氢钠沉淀的地瓜叶、豆薯及/或山药叶溶液倒入过滤杯(孔径0.1μm)，进行真空过滤，过滤所得的滤液即为护理组合物。
附图说明
图1显示以不同稀释比例的护理组合物对β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)的影响。由图1的结果可知，稀释比例1/800、1/400、1/200、1/100的护理组合物可降低β-hexosaminidase的含量。
图2显示稀释比例1/200、1/100的所述护理组合物可降低肿瘤坏死因子α(Tumornecrosis factor-α,TNF-α)的含量。
图3显示稀释比例1/1600、1/800、1/400、1/200、1/100的所述护理组合物可降低白血球介素-6(Interleukin-6,IL-6)的含量。
图4显示稀释比例1/200、1/100的所述护理组合物可增加细胞内ATP含量，使细胞趋向将小分子合成为大分子的合成作用。
图5显示试验期间的小鼠体重。
图6显示以卵蛋白素(ovalbumin,OVA)诱发小鼠鼻炎过敏血清中IgE表达量显著增加。
图7显示以OVA诱发小鼠鼻炎过敏血清中IL-6表达量显著增加。
图8显示OVA诱发鼻炎过敏小鼠杯状细胞中平均被染色的范围较控制组降低约55％，在给予本护理组合物后，平均被染色的范围仅降低13％，表示杯状细胞中的分泌囊泡含量较诱发鼻炎组多，且趋近于控制组小鼠杯状细胞中的分泌囊泡数量。
图9显示OVA诱发鼻炎小鼠的平均黏液层厚度较控制组增加约240％，而给予护理组合物后平均黏液层厚度仅增加8％。
具体实施方式
本发明提供一种护理组合物，由地瓜叶、豆薯及/或山药的茎及/或叶萃取物，以及离子溶液组成。
本发明在一实施例中，地瓜、豆薯或山药\的茎及/或叶在使用前，应清洁、检测农药、重金属等，选择符合政府法规的茎及/或叶。熟悉此技艺的人士了解使用液相层析串联质谱仪(Liquid chromatography-Mass spectrometry,LC/MS)、气相层析串联质谱仪(Gaschromatography-Mass spectrometry,GC/MS)等仪器进行农药、重金属等检测。
在一实施例中，本发明将地瓜叶、豆薯及山药的茎和/或叶置于70℃的烘箱中，烘干至含水量剩余5～7％。上述方法含水量为0～10％，例如，1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％，较佳为5～7％。
在一实施例中，本发明取干燥地瓜叶、豆薯及山药的茎和/或叶，放入行星式球磨机中磨成粉末，其尺寸需介于1um以下，使增加接触面积，以提高后续离子溶出速率。上述磨成粉末后尺寸范围为0.1um～5um，较佳为0.1um～1um。
在一实施例中，本发明镁离子含量大于0.25％(w/w)，且镁离子:钾离子＝4～17:1(w/w)
在本发明中，以上述方法所获得的澄清液中的钾离子浓度为50mg/L以上，较佳为60mg/L以上，例如，60mg/L、70mg/L、80mg/L、90mg/L、100mg/L、150mg/L以上，较佳为
之间。
将萃取地瓜叶、豆薯及/或山药叶的澄清液以电透析后的等张离子溶液(即渗透压与红细胞张力相等的离子溶液)进行稀释。在一实施例中，离子溶液盐度为0.9％(w/w)，以重量比1:1混和。离子溶液中的镁离子浓度为
钙离子浓度为
钾离子浓度为
钠离子浓度为
应注意的是，本护理组合物所使用的离子溶液具有特定比例的镁、钙、钾及钠离子浓度，使最后所获得的护理组合物具有特定的钠、镁及钾离子比例。本护理组合必须具有此特定的钠、镁及钾离子比例或浓度，才可达成本护理组合物所述的功效。
本护理组合物的盐度为
较佳为
最佳为
本护理组合物的钠离子浓度为低于3％(w/w)，较佳为低于2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％(w/w)，最佳为低于0.2％(w/w)，例如，0.1％。然而，若钠离子过高，会刺激免疫细胞产生促发炎物质，以及降低纤毛上皮细胞纤毛摆动率，使清除异物的能力下降，因此钠离子浓度最佳低于0.3％(w/w)。
本护理组合物的镁离子含量高于0.3％(w/w)，较佳为
更佳为
本护理组合物的钾离子必须与镁离子具有一特定重量比，当钾离子为1时，镁离子为约
较佳为约
例如，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17等。
在一实施例中，本护理组合物的钾离子含量为
本发明护理组合物中的钠、镁及钾离子各扮演重要且不同角色，其浓度及比例尤其重要。
本护理组合物可抑制发炎物质的生成或有助于发炎物质分解。本护理组合物可抑制细胞发炎因子的表现，包括，但不限于，M-CSF、GM-CSF、TNF、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IFN、TNF-α、TNF-β、TNF0、TNF1、TNF2、G-CSF、Meg-CSF、NLRP及/或Caspase等。
本护理组合物也可降低过敏物质含量，包括白三烯类、前列腺素、组织胺、缓激肽(bradykinin)、血小板活化因子(platelet activating factors,PAFs)等。例如，本护理组合物中的镁离子有助于分解组织胺，以及抑制白三烯类等发炎物质的合成，而本护理组合物中的钾离子可抑制前列腺素的合成。
此外，本护理组合物可调控黏液分泌。本护理组合物可调节杯状细胞内的分泌囊泡的数量，进而调控黏液分泌量。本护理组合物亦可调控分泌囊泡的分泌量，以减少黏液的分泌。因此，本发明护理组合物可减缓因黏液分泌量增加而引起的不适症状。
本护理组合物另提供一种使用本发明护理组合物用于制备治疗调控鼻腔杯状细胞内的分泌囊泡数量的医药组成物的用途。本技术领域人士自可利用习知的方式将本护理组合物制备成使用于个体的组合物。
本发明中所述的个体包括人类和非人类。非人类个体包括伴侣动物，例如猫和狗等，以及牲畜，例如牛、马、绵羊或猪等。
在需要治疗的个体中，本护理组合物或药物可减少及/或抑制由杯状细胞中内的分泌囊泡产生的黏液。可使用本领域已知的给药方式给予至特定目标器官鼻腔的杯状细胞内的分泌囊泡，以减少器官，较佳为鼻腔的黏液量。本技术领域人士自可知道如何进行局部给药，且无需过度实验即可将本护理组合物或药物与其他已知的药物传送技术一起使用。
用于本护理组合物包括适合于吸入、局部(鼻腔)给予。本护理组合物或药物可以透过习知的任何方法来制备。最适合的给予途径取决于被治疗组织的位置、疾病特性、严重程度以及所使用的特定活性成份等而定，这对于本领域技术人员来说是显而易见的。本领域技术人士能够使用本领域已知的剂量反应来确定特定化合物的适当剂量。
本护理组合物或药物可透过任何适当的方式给予至受试者的呼吸道等部位，但是较佳是以吸入式颗粒组成的喷雾剂来给予，此可吸入式颗粒由本护理组合物活性成份构成，吸入式颗粒可为液体或固体，且可选择性地包含其他治疗成分合并。吸入式颗粒大小会依给予的部位不同而改变，例如在给予至鼻腔时，颗粒的粒径较佳为
将活性护理组合物与适合的媒介物(例如，无菌水、乙醇水溶液、等渗透液等)混合来制备液体组合物。可利用市售喷雾器，透过压缩气体(通常是空气或氧气)加速，溶液或悬浮液通过狭窄的微文氏管(micro venturi tube)或以超音波震荡转化为喷雾。
在本发明中，本护理组合物可为唯一活性成分，或与其他药物(例如，免疫抑制剂、免疫调节剂、或消炎药等)组合投予。在一实施例中，本护理组合物可与免疫抑制剂、免疫调节剂、消炎药、抗氧化剂或自噬作用促进剂合并使用。
黏膜组织分泌的黏液中，最重要的组成分为黏液素，黏液素被分泌前储存于杯状细胞中的囊泡里，而这些囊泡则是透过Rab蛋白(Rab protein)及Rab effector两种蛋白质被系于接近杯状细胞表面的位置。当黏膜组织接受到外界刺激，需要分泌黏液时，杯状细胞表面的G蛋白(G protein)及PLC会产生DAG及IP3，DAG及IP3会启动讯息传递链，将含有黏液素的分泌囊泡拉到杯状细胞细表面，接着分泌囊泡会融合到杯状细胞细胞膜上，释放出黏液素。被释放出的黏液素会吸收水分，膨胀后达到适当的黏性及弹性，进而成为黏液。若无法阻断外界刺激，则无法阻断讯息传递链，分泌囊泡将持续被拉到杯状细胞膜表面，持续释放黏液素，形成过多的黏液。
【实施例】
名词定义
本发明中所述「OVA」为卵蛋白素(ovalbumin,OVA)，以下均简称OVA。
实施例1:本发明护理组合物的制备方法
(A)烘干:将地瓜叶、豆薯及/或山药叶置于70℃的烘箱中，烘干至含水量剩余5～7％，去除水分，以降低有机物活性，防止有机物螯合金属离子(一般制程不使用干燥方式)。
(B)研磨:取干燥地瓜叶、豆薯及/或山药叶，放入行星式球磨机中，将地瓜叶、豆薯及/或山药叶磨成粉末，其尺寸需介于1um～0.1um，使增加接触面积，以提高后续离子溶出速率。
(C)将液态二氧化碳利用高压帮浦(泵，bump)加压至临界压力以上(高于72.9atm)，并流经热交换器使高压液态二氧化碳变成超临界态，之后超临界二氧化碳进入装有地瓜叶、豆薯及/或山药叶粉末的高压槽内，将地瓜叶、豆薯及/或山药叶粉末中的脂溶性成分萃出，并进行静态萃取20分钟以及动态萃取4分钟，再降压至1atm、升温至室温，使二氧化碳气化后进入分离槽(将脂溶性成分留在此处)。透过分离槽内二氧化碳压力改变，因而对脂溶性成分的溶解度不同，使得二氧化碳与其分离，之后二氧化碳可经冷却器进行液化即可循环使用。
(D)溶出金属离子:将离子溶液(钠<3000mg/L,K<380mg/L,Mg>1100mg/L Ca<400mg/L)进行电解后成等张离子溶液(有别于一般制程使用去离子水)放入烧杯中煮沸后，加入地瓜叶、豆薯及/或山药叶粉末，并盖上铝箔纸，用磁石搅拌1小时，恒温75℃，使地瓜叶、豆薯及/或山药叶粉末中含的金属离子溶出，达成镁离子含量大于0.25％(w/w)，且镁离子:钾离子＝4～17:1(w/w)。
(E)沉淀:将加热后的地瓜叶、豆薯及/或山药叶溶液放凉后，通入足量CO2，与溶液中的钠离子形成碳酸氢钠，沉淀析出后，使滤液内钠离子含量<0.2％(w/w)。
(F)过滤:将含碳酸氢钠沉淀的地瓜叶、豆薯及/或山药叶溶液倒入过滤杯(孔径0.1um)，进行真空过滤，用来过滤溶液中的地瓜叶、豆薯及/或山药叶粉末、碳酸氢钠与微生物，过滤后所得的滤液即为护理组合物。
表一、本护理组合物的成份比例
实施例2:降低细胞发炎反应
将大鼠嗜碱性球细胞RBL-2H3以5×104细胞数种于96孔细胞培养盘中。置于5％CO2、37℃细胞培养箱培养过夜后，移除培养液，分别加入不同稀释比例(1/1600、1/800、1/400、1/200与1/100)的护理组合物(以下简称AMDS)与对照物质(空白对照组、阳性对照组Quercetin)，半小时后加入A23187(1μg/mL)，作用1小时。取上清液以盘式酵素免疫分析(ELISA)仪测定β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)含量。此外，将细胞培养液置换成0.5mg/mL MTT容液培养2小时。去除MTT溶液，加入150μL的DMSO在室温中静置10分钟后，使formazan蓝紫色结晶溶解，测定吸光值OD570，以分析细胞存活率。细胞存活率(％)＝(试验物质OD570吸光值/空白对照组OD570吸光值)×100％。
如图1，稀释比例为1/800、1/400、1/200、1/100的护理组合物会降低β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)含量，与对照组相比具有统计学上的显著差异，β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)含量越低表示试验物质具有抗过敏的功效。细胞存活率则无明显变化(表二)。由此结果可知，AMDS可抑制β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)的生成，显示AMDS具有抗过敏的功效。
表二、细胞存活率
实施例3:降低细胞发炎反应
将巨噬细胞RAW264.7细胞以2×104的细胞数种于96孔细胞培养盘中，置于5％CO2、37℃细胞培养箱培养隔夜后，去除细胞培养液，分别加入不同稀释比例(1/1600、1/800、1/400、1/200与1/100)的AMDS与对照物质(空白对照组、阳性对照组Quercetin)。再加入刺激物LPS(脂多糖，Lipopolysaccharide，0.1μg/mL)培养24小时，收集细胞上清液进行TNF-α和IL-6的ELISA测试，检测TNF-α和IL-6的含量。利用实施例2所述方式分析细胞存活率。
由结果可知，AMDS稀释比例1/200、1/100会降低TNF-α含量(图2)；稀释比例1/1600、1/800、1/400、1/200、1/100会降低IL-6含量(图3)，与对照组相比，具有统计上的显著差异。细胞存活率则无明显变化(表三)。由此结果可知，AMDS可抑制TNF-α和IL-6含量生成，具有抗发炎功效。
表三、细胞存活率
实施例4:细胞活性试验
将4×105的人类纤维母细胞Hs68细胞细胞数种于6孔细胞培养盘中，置于5％CO2、37℃细胞培养箱培养隔夜后，去除细胞培养液，分别加入不同稀释比例(1/1600、1/800、1/400、1/200与1/100)的AMDS与对照物质(空白对照组为细胞培养液，阳性对照组为TGF-β细胞培养液)培养48小时。收集细胞进行ATP荧光试剂分析，检测ATP的含量。
如图4，AMDS稀释浓度1/200、1/100的ATP含量分别为58.73±0.48μM、72.67±0.78μM。由此结果可知，AMDS可增加细胞内ATP含量，ATP主要是由细胞能量工厂粒线体制造，透过ATP含量分析可以间接得知细胞粒线体的状态是否健康。当粒线体的状态或活性不佳时，许多讯息传递路径会受影响，其中即包括免疫及发炎反应。目前已有研究指出当粒线体功能低下或不正常时，会影响身体的免疫反应，导致免疫功能受损，人体更容易受到外界污染物或病菌的侵害。发炎反应的部分，由于ATP能促进合成作用，当ATP含量减少时，抗发炎物质的合成也会相对减少。在部分研究中也指出，ATP本身也具有抗发炎的效果。
细胞趋向将小分子合成为大分子的合成作用。
实施例5:动物试验
使用40只健康8周龄健康雌性BALB/c鼠，平均体重约23±2公克，饲养于SPF等级动物实验室，环境温度
环境湿度
光周期一天12/12小时(光/暗)循环，并供予不含OVA的饲料，小鼠以自由摄食方式进食。
以OVA为过敏原辅以氢氧化铝诱发小鼠慢性鼻炎，由第0天开始到第14天，每两天一次以腹腔注射(intraperitoneal，IP)方式诱发过敏反应。并由第20天开始到第29天，每天一次以蒸汽吸入(inhalation，IH)方式给予气化OVA吸剂致过敏及AMDS进行治疗。每日监测老鼠生理变化，如体重、排泄量等，以及行为模式，如以觅食时间观察嗅觉功能、揉鼻子、打喷嚏等动作，并于第30天牺牲小鼠。此外，小鼠于IP诱发前、最后一次IP诱发后第10小时及IH诱发前由尾静脉采血(tail vein sampling)方式采其血清检验，牺牲时以心脏采血(cardiac puncture)进行血清检验。检测IgE及IL-6含量。
将小鼠牺牲后，取其肺脏及呼吸道，以甲醇基底Carnoy固定法(methacarn)固定组织后包埋于组织蜡块中切片，切片厚度为5mm。将切片组织脱蜡后以PAFS(periodic acidfluorescent Schiff stain,PAFS stain)染色法染色，PAFS染色法能检测组织中的糖类，由于黏液素分子结构中含有大量糖基，因此于显微镜下观察可以看到被染色的黏液。所以显微镜下可观察到被染色的分泌囊泡。以ImageJ软件进行分析、定量，结果以单颗细胞内被染色的范围呈现，每只小鼠随机取三段组织分析，每段组织取10颗杯状细胞分析其染色范围，实验数据为所有数据加总、平均及组内标准偏差呈现。
在试验期间，所有小鼠的体重并无显著变化(如图5)。以OVA诱发小鼠鼻炎过敏的血清中IgE及IL-6表现量均显著增加，表示有成功诱发小鼠过敏反应(如图6、7)。
杯状细胞内含有黏液的分泌囊泡，是分泌后为黏液层主成分之一。观察杯状细胞中的分泌囊泡数量可以间接推论黏液分泌量。若细胞中被染色的范围减少，其原因为黏液分泌量增加，囊泡内物质分泌出去，因此细胞中的分泌囊泡量减少。图8显示PAFS染色法染色后的结果，以ImageJ软件进行黏液厚度定量分析。由图8结果显示，OVA诱发鼻炎过敏小鼠杯状细胞中平均被染色的范围较控制组降低约55％，给予AMDS后，平均被染色的范围仅降低13％，表示杯状细胞中的分泌囊泡含量较诱发鼻炎组多，且趋近于控制组小鼠杯状细胞中的分泌囊泡含量。
此外，分析杯状细胞中分泌囊泡含量来推论黏液分泌量。利用切片染色观察实际黏液层厚度，以ImageJ软件进行黏液厚度定量分析。图9显示，OVA诱发鼻炎小鼠的平均黏液层厚度较控制组增加约240％，而给予AMDS后平均黏液层厚度仅增加8％。
根据上述结果显示，假设总共有10颗杯状细胞，每颗杯状细胞里的囊泡都只有一小个，总共黏液分泌量为10ul。若同样的杯状细胞数量，但每颗杯状细胞里有5个囊泡，总共黏液分泌量为50ul。由此可见，相同的杯状细胞数量，但因为里面含有的囊泡数量不同，黏液分泌量也不同，因此本发明护理组和物可调控杯状细胞内的分泌囊泡数量，且可维持分泌囊泡在健康情况下可达到的分泌量。
因此，在相同的杯状细胞数量，因分泌囊泡数量变少，导致黏液分泌量减少。由此可见，并非调控杯状细胞数量即能达到黏液分泌量的改善。
本实验结果图示中，*代表p<0.05，实验组与控制组结果有显着差异；§代表p<0.05，组别与疾病组结果有显着差异。
本发明上述实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (16)
1.一种护理组合物在用于制备治疗调控鼻腔杯状细胞内的分泌囊泡数量的医药组成物的用途，其特征在于，所述组合物由地瓜叶、豆薯和山药的茎和/或叶的萃取物以及离子溶液所组成。
2.如权利要求1所述的用途，其特征是，调控减少的分泌囊泡数量不超过45％。
3.如权利要求1所述的用途，其特征是，调控所述杯状细胞内的分泌囊泡分泌黏液增加的量少于240％。
4.如权利要求1所述的用途，其特征是，所述离子溶液包含镁、钾、钠离子，其中所述镁离子与钾离子浓度比为4～17:1(w/w)，且镁离子含量为0.3～1％、钠离子含量低于0.3.％、钾含量为0.02～0.2％，以及盐度为0.9～4％。
5.如权利要求1所述的用途，其特征是，所述护理组合物调控分泌囊泡的分泌量。
6.如权利要求1所述的用途，其特征是，所述护理组合物分解组织胺。
7.如权利要求1所述的用途，其特征是，所述护理组合物抑制白三烯类、前列腺素的生成。
8.如权利要求1所述的用途，其特征是，所述护理组合物还包含免疫抑制剂、免疫调节剂或消炎药。
9.一种护理组合物，其特征是，所述组合物由地瓜叶、豆薯及/或山药叶的茎和/或叶的萃取物以及离子溶液所组成，所述护理组合物由下述方法制得:
(1)将地瓜叶、豆薯及/或山药叶置于70℃的烘箱中，烘干至含水量剩余5～7％，防止有机物螯合金属离子；
(2)取干燥地瓜叶，放入行星式球磨机中，将地瓜叶、豆薯及/或山药叶磨成粉末，其尺寸需介于1μm～0.1μm；
(3)将液态二氧化碳利用高压帮浦加压至临界压力以上(高于72.9atm)，并流经热交换器使高压液态二氧化碳变成超临界态，之后超临界二氧化碳进入装有地瓜叶粉末的高压槽内，将地瓜叶粉末中的脂溶性成分萃出，并进行静态萃取20分钟以及动态萃取4分钟，再降压至1atm，升温至室温，使二氧化碳气化后进入分离槽；
(4)将离子溶液进行电透析后成等张离子溶液，放入烧杯中煮沸后，加入地瓜叶、豆薯及/或山药叶粉末，并盖上铝箔纸，用磁石搅拌1小时，恒温75℃，使地瓜叶、豆薯及/或山药叶粉末中含的金属离子溶出，达成镁离子含量>0.25％(w/w)，且镁离子:钾离子＝4～17:1(w/w)；
(5)将加热后的地瓜叶、豆薯及/或山药叶溶液放凉后，通入足量二氧化碳气体CO2，与溶液中的钠离子形成碳酸氢钠，沉淀析出后，使该离子浓度滤液内钠离子含量<0.3％(w/w)；以及
(6)将含碳酸氢钠沉淀的地瓜叶、豆薯及/或山药叶溶液倒入过滤杯(孔径0.1μm)，进行真空过滤，过滤所得的滤液即为护理组合物。
10.如权利要求10所述的护理组合物，其特征是，所述溶液盐度总盐度为
11.如权利要求10所述的护理组合物，其特征是，所述钠离子含量低于0.3％(w/w)。
12.如权利要求10所述的护理组合物，其特征是，所述镁离子含量高于0.25％(w/w)。
13.如权利要求10所述的护理组合物，其特征是，所述镁离子含量为
14.如权利要求10所述的护理组合物，其特征是，所述镁：钾比为
15.如权利要求10所述的护理组合物，其特征是，所述钾离子含量为
16.如权利要求10所述的护理组合物，其特征是，还包括铁、铜、锌、碘、铬及/或钼离子。
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