CN114414685A - 一种中药胶囊指纹图谱检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于图谱检测技术领域，涉及一种前列舒通胶囊指纹图谱检测方法，包括以下步骤：1)采用乙醇对前列舒通胶囊进行超声提取，得到供试品溶液；2)采用高效液相色谱法对步骤1)的供试品溶液进行检测，记录供试品溶液100min内的色谱数据；并将色谱数据通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》生成前列舒通胶囊指纹图谱。本发明提供的检测方法，具有准确度高、稳定性高、重复性好的特点，能够较为全面反映前列舒通胶囊的质量，保证产品质量。
Description
技术领域
本发明属于图谱检测技术领域，涉及一种中药胶囊指纹图谱检测方法。
背景技术
中药指纹图谱是指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱；中药指纹图谱的特点包括整体性、特征性及可量化等方面，突出中药的完整面貌，在研究中药有效成分，控制中药质量以及鉴别方面的作用越来越突出。
前列舒通胶囊(国药准字Z20027140)为保定步长天浩制药有限公司生产的独家中药品种，对慢性前列腺炎、前列腺增生有独特的疗效；前列舒通胶囊由黄柏、赤芍、当归、川芎、土茯苓、三棱、泽泻、马齿苋、马鞭草、虎耳草、柴胡、川牛膝和甘草13味药材组成，功效清热利湿、化瘀散结；用于慢性前列腺炎，前列腺增生治疗。方中黄柏苦寒沉降，清热燥湿，善除下焦湿热；赤芍清热凉血，活血散瘀，二者合用，清湿热，消瘀滞，共为君药。泽泻渗利湿热；土茯苓除湿解毒；川芎行气活血止痛；三棱破血消积散结，善治癥积，四味合用，共助君药除湿热瘀结，用为臣药。马齿苋解毒通淋，散结消肿；马鞭草、虎耳草清热解毒；柴胡疏肝解郁，以调畅气血，促进血行；当归养血活血，使活血而不伤血，有扶正祛邪之义；川牛膝性善下行，有引药直达病所之义，亦兼具使药之用。清热利湿与活血消淤相配，气血并调，标本兼顾，诸药合用共奏清热利湿热，消前阴癥积之功。
前列舒通胶囊的现有药品标准中，主要通过盐酸小檗碱这一单一成分对前列舒通胶囊进行质量控制(参见图1和图2)。但由于前列舒通胶囊药味繁多，成分复杂，若采用单一成分分析具有一定的片面性，影响质量控制结果的准确性；因此，要实现前列舒通胶囊质量控制的准确性要求，只针对其一两个化学成分进行表征和控制是不够的，难以全面反映药品的全面信息。
发明内容
针对现有技术存在的技术问题，本发明提供一种中药胶囊指纹图谱检测方法，具有准确度高、稳定性高、重复性好的特点，能够较为全面反映前列舒通胶囊的质量，保证产品质量。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种中药胶囊指纹图谱检测方法，包括以下步骤：
1)采用乙醇对前列舒通胶囊进行超声提取，得到供试品溶液；
2)采用高效液相色谱法对步骤1)的供试品溶液进行检测，记录供试品溶液100min内的色谱数据；并将色谱数据通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》生成前列舒通胶囊指纹图谱；
所述高效液相色谱法的条件为：色谱柱为C18柱，检测波长为210～400nm，供试品溶液的进样体积为5～20μL，流速为0.5～1mL/min；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数0.05％～0.2％的磷酸溶液；洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱参数如下表所示：
| 时间min | 乙腈洗脱体积比％ | 磷酸溶液洗脱体积比％ |
| 0 | 5 | 95 |
| 5 | 10 | 90 |
| 30 | 10 | 90 |
| 40 | 17 | 83 |
| 55 | 20 | 80 |
| 65 | 25 | 75 |
| 70 | 35 | 75 |
| 80 | 50 | 50 |
| 90 | 50 | 50 |
| 100 | 80 | 20 |
进一步的，所述步骤1)的具体过程是，称取前列舒通胶囊粉末0.5g，采用20％～70％乙醇水溶液定容至25mL，依次经称重、超声处理、冷却后；再采用20％～70％乙醇水溶液定容至25mL，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，过滤液为供试品溶液。
进一步的，所述超声功率为400～800W，超声频率为30～50KHZ，时间为10～60min。
进一步的，所述步骤2)中，色谱柱规格为4.6mm×250mm，色谱柱中的填料粒径为5μm；柱温为30～50℃。
所述中药胶囊指纹图谱检测方法包括步骤3)：
配制混合对照品溶液，然后采用与供试品溶液相同的高效液相色谱条件对混合对照品溶液进行测试，得到混合对照品溶液的色谱图；将混合对照品溶液的色谱图与步骤2)得到的前列舒通胶囊指纹图谱进行对比，指认得出前列舒通胶囊指纹图谱的色谱峰。
进一步的，所述混合对照品溶液的配制方法是，将精密称取的阿魏酸、落新妇苷和盐酸小檗碱依次加入50％乙醇中得到混合对照品溶液，所述混合对照品溶液中，阿魏酸、落新妇苷、盐酸小檗碱的质量浓度分别为5.72μg/mL、100μg/mL和49μg/mL。
进一步的，以盐酸小檗碱色谱峰为参照时，所述前列舒通胶囊指纹图谱包括22个共有峰，各共有峰的相对保留时间分别为：
1号峰，相对保留时间为0.098；
2号峰，相对保留时间为0.1657；
3号峰，相对保留时间为0.2687；
4号峰，相对保留时间为0.2796；
5号峰，相对保留时间为0.3185；
6号峰，相对保留时间为0.5684；
7号峰，相对保留时间为0.5889；
8号峰，相对保留时间为0.6627；
9号峰，相对保留时间为0.6722；
10号峰，相对保留时间为0.6821；
11号峰，相对保留时间为0.7766；
12号峰，相对保留时间为0.8508；
13号峰，相对保留时间为0.9484；
14号峰，相对保留时间为0.9790；
15号峰，相对保留时间为0.9906；
16号峰，相对保留时间为1.0000；
17号峰，相对保留时间为1.1654；
18号峰，相对保留时间为1.2172；
19号峰，相对保留时间为1.2929；
20号峰，相对保留时间为1.3867；
21号峰，相对保留时间为1.4330；
22号峰，相对保留时间为1.4485。
进一步的，22个共有峰中，8号峰为阿魏酸；11号峰为落新妇苷；16号峰为盐酸小檗碱。
本发明的有益效果是：
1、本发明通过指纹图谱检测方法，得到前列舒通胶囊指纹图谱具有22个达到有效分离的共有峰，能够有效地表征前列舒通胶囊的质量，有利于全面监控药物的质量、可靠性高；此外指纹图谱具有反映中药全貌的整体性特征，可为前列舒通胶囊质量标准提升奠定基础。
2、本发明通过对18个不同批次的前列舒通胶囊进行检测，结果表明，相同位置色谱峰的相对保留时间的RSD均在5％之内，说明本发明提供的指纹图谱具有较好的重现性，具有准确度高、稳定性高的特点。
附图说明
图1为现有药品标准中前列舒通胶囊样品高效液相色谱图；
图2为现有药品标准中对照品(盐酸小檗碱)高效液相色谱图。
图3为210305批供试品(样品S10)指纹图谱；
图4为本发明混合对照品的高效液相色谱图；
图5为本发明18个批次前列舒通胶囊指纹图谱的叠加图谱；
图6为18批样品聚类分析图；
图7为主成分得分图；
图8为18批前列舒通胶囊OPLS-DA得分图；
图9为18批前列舒通胶囊22个共有峰的VIP值。
具体实施方式
现结合附图以及实施例对本发明做详细的说明。
本发明提供的中药胶囊指纹图谱检测方法，包括以下步骤：
1)采用乙醇对前列舒通胶囊进行超声提取，得到供试品溶液；
所述步骤1)的具体过程是，称取前列舒通胶囊粉末0.5g，采用20％～70％乙醇水溶液定容至25mL，经称重、超声处理、放冷后；再采用20％～70％乙醇水溶液定容至25mL，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，过滤液为供试品溶液。
进一步的，所述超声功率为400～800W，超声频率为30～50KHZ，时间为60～100min。
本发明中，超声功率为400W、500W、600W、700、800W；超声频率为30KHZ、35KHZ、40KHZ、45KHZ、50KHZ，超声时间为10min、20min、30min、40min、50min、60min。
本发明中，基于单因素(乙醇浓度、超声提取时间和超声功率)试验结果结合正交设计法，以共有峰个数和总面积为评价指标，结果以体积分数70％的乙醇为提取溶剂，超声40min、功率为40kHz，提取效果最佳。
2)采用高效液相色谱法对步骤1)的供试品溶液进行检测，记录供试品溶液100min内的色谱数据；并将色谱数据通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》生成前列舒通胶囊指纹图谱；
高效液相色谱法的条件为：色谱柱为C18柱，检测波长为210～400nm，供试品溶液的进样体积为5～20μL，流速为0.5～1mL/min；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数0.05％～ 0.2％的磷酸溶液；洗脱方式为梯度洗脱。
色谱柱规格为4.6mm×250mm，色谱柱中的填料粒径为5μm；柱温为30～50℃。
本发明中，前列舒通胶囊为处方组成包括黄柏3等13味，成分多样且复杂，采用二极管阵列(DAD)检测器对供试品进行全波长扫描(190～400nm)；分别考察了甲醇-水、甲醇-0.1％磷酸溶液、乙腈-水和乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相，最终确定以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相、 325nm为检测波长，该色谱条件下基线平稳、色谱峰数多、峰形佳及分离度好。
3)配制混合对照品溶液，然后采用与供试品溶液相同的高效液相色谱条件对混合对照品溶液进行测试，得到混合对照品溶液的色谱图；将混合对照品溶液的色谱图与步骤2)得到的前列舒通胶囊指纹图谱进行对比，指认得出前列舒通胶囊指纹图谱的色谱峰。
混合对照品溶液的配制方法是，将精密称取的阿魏酸、落新妇苷和盐酸小檗碱依次加入 50％乙醇中得到混合对照品溶液，所述混合对照品溶液中，阿魏酸、落新妇苷、盐酸小檗碱的质量浓度分别为5.72μg/mL、100μg/mL和49μg/mL。
本实施例中，以盐酸小檗碱色谱峰为参照时，所述前列舒通胶囊指纹图谱包括22个共有峰，各共有峰的相对保留时间分别为：
1号峰，相对保留时间为0.098；
2号峰，相对保留时间为0.1657；
3号峰，相对保留时间为0.2687；
4号峰，相对保留时间为0.2796；
5号峰，相对保留时间为0.3185；
6号峰，相对保留时间为0.5684；
7号峰，相对保留时间为0.5889；
8号峰，相对保留时间为0.6627；
9号峰，相对保留时间为0.6722；
10号峰，相对保留时间为0.6821；
11号峰，相对保留时间为0.7766；
12号峰，相对保留时间为0.8508；
13号峰，相对保留时间为0.9484；
14号峰，相对保留时间为0.9790；
15号峰，相对保留时间为0.9906；
16号峰，相对保留时间为1.0000；
17号峰，相对保留时间为1.1654；
18号峰，相对保留时间为1.2172；
19号峰，相对保留时间为1.2929；
20号峰，相对保留时间为1.3867；
21号峰，相对保留时间为1.4330；
22号峰，相对保留时间为1.4485。
本发明中，22个共有峰中，8号峰为阿魏酸；11号峰为落新妇苷；16号峰为盐酸小檗碱。
实施例
本实施例提供的中药胶囊指纹图谱检测方法包括以下步骤：
1)采用乙醇对前列舒通胶囊进行超声提取，得到供试品溶液；
具体过程是，精密称取前列舒通胶囊粉末0.5g，并置于具塞锥形瓶中，加入50％乙醇水溶液定容至25mL，称重、超声处理、放冷后，再采用50％乙醇水溶液补足减失的质量，定容至25mL、摇匀，过0.45μm微孔滤膜，过滤液为供试品溶液；
本实施例中，超声功率为600W，超声频率为45KHZ，时间为40min；
2)采用高效液相色谱法对供试品溶液进行高效液相色谱检测，记录100min内的色谱数据；根据《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》，由色谱数据生成前列舒通胶囊指纹图谱；
本实施例提供的高效液相色谱法的条件为：色谱柱为迪马C18柱；色谱柱规格为4.6 mm×250mm，5μm；柱温为35℃；进样体积(供试品溶液)为10μL；检测波长为280nm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数0.1％的磷酸溶液；流速为1mL/min；洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱的洗脱程序如表1所示：
表1梯度洗脱的洗脱程序
3)配制混合对照品溶液，然后采用与供试品溶液相同的高效液相色谱条件对混合对照品溶液进行测试，得到混合对照品溶液的色谱图；将混合对照品溶液的色谱图与步骤2)得到的前列舒通胶囊指纹图谱进行对比，指认得出前列舒通胶囊指纹图谱的色谱峰。
混合对照品溶液的配制方法是，以阿魏酸、落新妇苷、盐酸小檗碱为对照品，分别精密称取各对照品，均依次加入乙醇中配制成，含阿魏酸、落新妇苷、盐酸小檗碱的质量浓度分别为5.72μg/mL、100μg/mL和49μg/mL的混合对照品溶液。
当选择以盐酸小檗碱色谱峰为参照时，前列舒通胶囊指纹图谱包括22个共有峰，各共有峰的相对保留时间分别为：
1号峰，相对保留时间为0.098；
2号峰，相对保留时间为0.1657；
3号峰，相对保留时间为0.2687；
4号峰，相对保留时间为0.2796；
5号峰，相对保留时间为0.3185；
6号峰，相对保留时间为0.5684；
7号峰，相对保留时间为0.5889；
8号峰，相对保留时间为0.6627；
9号峰，相对保留时间为0.6722；
10号峰，相对保留时间为0.6821；
11号峰，相对保留时间为0.7766；
12号峰，相对保留时间为0.8508；
13号峰，相对保留时间为0.9484；
14号峰，相对保留时间为0.9790；
15号峰，相对保留时间为0.9906；
16号峰，相对保留时间为1.0000；
17号峰，相对保留时间为1.1654；
18号峰，相对保留时间为1.2172；
19号峰，相对保留时间为1.2929；
20号峰，相对保留时间为1.3867；
21号峰，相对保留时间为1.4330；
22号峰，相对保留时间为1.4485。
本发明的22个共有峰中，8号峰为阿魏酸；11号峰为落新妇苷；16号峰为盐酸小檗碱。
为了进一步说明本发明提供的检测方法的优越性，进行以下实验验证。
首先对实施过程中所使用的仪器、试剂进行说明。
1、仪器设备
高效液相色谱仪(Waters e2695)，Empower色谱工作站；TE124S型电子分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；Milli-Q Reference超纯水仪(默克化工技术(上海)有限公司)；超声清洗器(上海易净超声波仪器有限公司)。
2、对照品、供试品及试剂
(1)对照品
盐酸小檗碱标准品(110713-202015)、落新妇苷标准品(111798-201805)、阿魏酸标准品 (110773-201915)均购于中国食品药品检定研究院。
(2)供试品
本发明用前列舒通胶囊的批号分别为：210304、200812、200810、210308、210301、201221、 210303、210404、201224、210305、210310、210306、210312、201225、210302、210309、 200809、201222均由保定天浩制药有限公司提供。
(3)试剂
乙腈，色谱纯，德国默克公司；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
试验1精密度
本试验的方法包括：
(1)取前列舒通胶囊(210404批)，精密称取前列舒通胶囊粉末0.5g，置具塞锥形瓶中，加70％乙醇水溶液50mL，超声处理40min，放冷，用70％乙醇水溶液补足减失的质量，摇匀，过0.45μm微孔有机滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
(2)采用下列超高效液相色谱条件对供试品溶液进行测试，
色谱柱：迪马C18柱；
检测波长：325nm；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数0.1％的磷酸水溶液；
洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如表1所示；
流速：1mL/min；
柱温：35℃；
色谱柱规格：4.6mm×250mm，色谱柱中填料粒径为5μm；
进样体积：10μL；
按照上述色谱条件连续进样6针，以盐酸小檗碱色谱峰为参照峰，计算各共有峰与参照峰的相对峰面积及相对保留时间，并计算RSD值，结果如表2和表3所示：
表2精密度实验(各共有峰的相对峰面积)
注：(S)为参照峰
表3精密度实验(各共有峰的相对保留时间)
由表2和表3可知，各共有峰的相对峰面积RSD％＜5％、相对保留时间RSD％＜5％，说明本实施例提供的检测方法精密度良好。
试验2重复性
本试验的方法包括：
(1)取前列舒通胶囊(210404批)，平行称取6份，按试验1的供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，按试验1中色谱条件分别进样，以盐酸小檗碱色谱峰为参照峰，计算各共有峰与参照峰的相对峰面积及相对保留时间，并计算RSD值，结果如表4和表5所示。
表4重复性实验(各共有峰的相对峰面积)
表5重复性实验(各共有峰的相对保留时间)
由表4和表5可知，各共有峰的相对峰面积RSD％＜5％、相对保留时间RSD％＜5％，说明该方法重复性良好。
试验3稳定性
本试验的方法包括：
(1)取前列舒通胶囊(2104046批)，按试验1的供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按试验1中色谱条件，分别与0h、2h、4h、8h、12h、24h、48h条件进样，以虎杖苷色谱峰为参照峰，计算各共有峰与参照峰的相对峰面积及相对保留时间，并计算RSD值，结果如表 6和表7所示。
表6稳定性实验(各共有峰的相对峰面积)
表7稳定性实验(各共有峰的相对保留时间)
由表6和表7可知，各共有峰的相对峰面积RSD％＜5％、相对保留时间RSD％＜5％，说明供试品溶液在24h内基本稳定。
试验4相似度
本试验提供的检测方法包括：
(1)供试品溶液的制备
取以上18个批次的前列舒通胶囊，批号依次为210304、200812、200810、210308、210301、 201221、210303、210404、201224、210305、210310、210306、210312、201225、210302、 210309、200809、201222，分别编号为S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8、S9、S10、S11、S12、S13、S14、S15、S16、S17、S18，分别精密称取前列舒通胶囊粉末0.5g，置具塞锥形瓶中，加70％乙醇水溶液定容至25mL，在功率800W，频率40kHz下超声处理40min，放冷，用70％乙醇水溶液补足减失的质量，过0.45μm微孔有机滤膜滤过，取续滤液，得18个批次的中药复方制剂供试品溶液。
(2)混合对照品溶液的制备
分别精密称取各对照品阿魏酸、落新妇苷和盐酸小檗碱，依次加入到50％乙醇中配制成混合对照品溶液，所述混合对照品溶液中，阿魏酸、落新妇苷、盐酸小檗碱的质量浓度分别为5.72μg/mL、100μg/mL和49μg/mL，即得。
(3)高效液相色谱条件
色谱柱：迪马C18柱(规格为4.6mm×250mm，5μm)；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数0.1％的磷酸水溶液；
洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱方式如表1所示；
流速：1mL/min；
柱温：35℃；
进样量：10μL；
检测波长：325nm；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，采用上述高效液相色谱条件进行测试，分别得到供试品溶液的液相色谱和对照品溶液的液相色谱。
其中图3为210305批供试品(样品S10)指纹图谱，图4为对照品溶液的液相色谱，图4中8号峰为阿魏酸；11号峰为落新妇苷；16号峰为盐酸小檗碱。
将供试品溶液的液相色谱导入指纹图谱相似度评价软件《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》分析，以S1供试品作为对照图谱，选取“时间窗宽度”为0.5min，采用平均数法计算，多点校正、数据匹配，生成叠加色谱图，即前列舒通胶囊指纹图谱，如图5所示；以18批供试品图谱为基础的“共有模式”以及生成的对照图谱。
将18批制剂的指纹图谱与生成的对照图谱进行相似度分析，计算各共有峰的相对保留时间，计算各共有峰与参照峰的相对保留时间，并计算RSD值。结果如表8、表9所示。
表8 18批制中药复方剂指纹图谱相似度
对照组指纹图谱的相似度为1.000。
表9 18批次中药复方制剂指纹图谱相对保留时间测定结果
由表8和表9可知，不同批次前列舒通胶囊指纹图谱与对照图谱的相似度均在0.98之上，表明不同批次间的相似度较高，说明不同批次样品化学成分一致性高，质量稳定；不同批次前列舒通胶囊各共有峰相对保留时间RSD％＜5％，表明本发明提供的测试方法稳定性较好。
试验5共有峰的指认、归属及相对峰面积的计算
取混合对照品溶液、供试品溶液，按试验1下的色谱条件分别进样测定，记录色谱图，见图3、图4。通过与对照品出峰保留时间和紫外光谱图信息比对，最终确认了3个色谱峰，分别为8号峰为阿魏酸；11号峰为落新妇苷；16号峰为盐酸小檗碱。
其中16号峰分离度良好，色谱峰保留时间适中，峰面积较大且为所有样品共有，故以其作为参考峰，计算其他共有峰相对峰面积。结果各共有峰相对峰面积的RSD为12.2％～41.2％，表明前列舒通胶囊不同批次间共有峰含量存在一定差异，见表10。
表10 18批样品各共有峰相对峰面积
试验6
为了更加全面而准确地评价前列舒通胶囊不同批次间质量的差异，本试验采用化学模式识别技术对指纹图谱中涵盖的大量化学信息进行提取、挖掘和分析，寻找质量差异性成分。
1、聚类分析(CA)
以18批前列舒通胶囊指纹图谱中22个共有峰峰面积与样品取样量的比值作为变量，得 18×22阶原始数据矩阵，导入SPSS 24.0软件中，采用组间连接法，以平方欧氏距离作为度量标准，进行聚类分析，结果参见图6。
根据图6分析可知，210301、210305、210308、210306、210312、210310、201225、210309、 200812和200809为一类，其余为一类。
2、主成分分析(PCA)
以18批前列舒通胶囊指纹图谱中22个共有峰峰面积为变量，导入SPSS 24.0进行标准化，以特征值大于1，提取主成分个数为4，累计贡献率为89.093％大于85％，可以涵盖大部分信息，主成分的初始特征值和贡献率见表11，因子载荷矩阵表见表12。
采用SIMCA 14.1绘制主成分得分图(参见图7)，由图7知210304、210302、210303、201221、201222、201224和210404为Ⅰ类，200810为异常点，其余批次样品为Ⅱ类。
表11主成分的初始特征值和贡献率
表12因子载荷矩阵
根据表11、表12及样品22个共有峰峰面积标准化值，计算18批次样品的主成分得分及综合排序，结果见表13。
从表13可知，综合排序1～8为1210304、200810、210302、201224、201222、201221、210303和210404批次样品包括全部聚类分析结果Ⅰ类及异常点200810。200810批次样品的主成分Z1得分最高，Z2得分最低，通过因子载荷矩阵知，Z1中F3、F6、F21、F5、F8和 F14贡献大，Z2中F9、F18、F2贡献大，通过比较各批次各共有峰面积知，200810批次样品的F2、F5、F6、F14、F18峰面积均为最大，可能与生产原料药有关。
表13主成分得分及综合排序
3、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-PA)
以18批前列舒通胶囊指纹图谱中22个共有峰峰面积为变量，导入SIMCA14.1软件，采用Pareto算法，获得相应OPLS-DA模型，模型解释率参数R2X和R2Y分别为0.889和0.718，模型预测能力参数Q2为0.634，说明该模型稳定、可靠。OPLS-DA得分图及VIP值图，参见图8和图9。
由图8和图9可知，当以VIP值大于1为阈值，则筛选出4个共有峰，分别为F16、F7、F21、F3，其中F16为盐酸小檗碱，因此确定这4个共有峰是引起批间质量差异的质量标志物。
综上所述，本发明提供的指纹图谱检测方法，其相似度计算表明18批前列舒通胶囊样品相似度均大于0.98，且CA、PCA、OPLS-DA分析结果显示，不同批次的样品与生产时间无明显相关性，从而反映出前列舒通胶囊生产工艺成熟稳定、药品质量一致性好。
Claims (8)
1.一种前列舒通胶囊指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)采用乙醇对前列舒通胶囊进行超声提取，得到供试品溶液；
2)采用高效液相色谱法对步骤1)的供试品溶液进行检测，记录供试品溶液100min内的色谱数据；并将色谱数据通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》生成前列舒通胶囊指纹图谱；
所述高效液相色谱法的条件为：色谱柱为C18柱，检测波长为210～400nm，供试品溶液的进样体积为5～20μL；流速为0.5～1mL/min；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数0.05％～0.2％的磷酸溶液；洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱参数如下表所示：
。
2.根据权利要求1所述的前列舒通胶囊指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤1)的具体过程是，称取前列舒通胶囊粉末0.5g，采用20％～70％乙醇水溶液定容至25mL，依次经称重、超声处理、冷却后；再采用20％～70％乙醇水溶液定容至25mL，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，过滤液为供试品溶液。
3.根据权利要求2所述的前列舒通胶囊指纹图谱检测方法，其特征在于：所述超声功率为400～800W，超声频率为30～50KHZ，时间为10～60min。
4.根据权利要求3所述的前列舒通胶囊指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤2)中，色谱柱规格为4.6mm×250mm，色谱柱中的填料粒径为5μm；柱温为30～50℃。
5.根据权利要求1-4任一项所述的前列舒通胶囊指纹图谱检测方法，其特征在于：所述前列舒通胶囊指纹图谱检测方法话包括步骤3)：
配制混合对照品溶液，然后采用与供试品溶液相同的高效液相色谱条件对混合对照品溶液进行测试，得到混合对照品溶液的色谱图；将混合对照品溶液的色谱图与步骤2)得到的前列舒通胶囊指纹图谱进行对比，指认得出前列舒通胶囊指纹图谱的色谱峰。
6.根据权利要求5所述的前列舒通胶囊指纹图谱检测方法，其特征在于：所述混合对照品溶液的配制方法是，将精密称取的阿魏酸、落新妇苷和盐酸小檗碱依次加入50％乙醇中得到混合对照品溶液，所述混合对照品溶液中，阿魏酸、落新妇苷、盐酸小檗碱的质量浓度分别为5.72μg/mL、100μg/mL和49μg/mL。
7.根据权利要求6所述的前列舒通胶囊指纹图谱检测方法，其特征在于：以盐酸小檗碱色谱峰为参照时，所述前列舒通胶囊指纹图谱包括22个共有峰，各共有峰的相对保留时间分别为：
1号峰，相对保留时间为0.098；
2号峰，相对保留时间为0.1657；
3号峰，相对保留时间为0.2687；
4号峰，相对保留时间为0.2796；
5号峰，相对保留时间为0.3185；
6号峰，相对保留时间为0.5684；
7号峰，相对保留时间为0.5889；
8号峰，相对保留时间为0.6627；
9号峰，相对保留时间为0.6722；
10号峰，相对保留时间为0.6821；
11号峰，相对保留时间为0.7766；
12号峰，相对保留时间为0.8508；
13号峰，相对保留时间为0.9484；
14号峰，相对保留时间为0.9790；
15号峰，相对保留时间为0.9906；
16号峰，相对保留时间为1.0000；
17号峰，相对保留时间为1.1654；
18号峰，相对保留时间为1.2172；
19号峰，相对保留时间为1.2929；
20号峰，相对保留时间为1.3867；
21号峰，相对保留时间为1.4330；
22号峰，相对保留时间为1.4485。
8.根据权利要求7所述的前列舒通胶囊指纹图谱检测方法，其特征在于：所述22个共有峰中，8号峰为阿魏酸；11号峰为落新妇苷；16号峰为盐酸小檗碱。
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