CN114410643A - FcRn基因人源化的非人动物及其构建方法和应用 - Google Patents

FcRn基因人源化的非人动物及其构建方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种人源化FcRn基因、靶向载体以及FcRn基因人源化的非人动物的构建方法及其构建的非人动物在生物医药领域的应用，利用同源重组的方式将部分编码人FcRn蛋白的核苷酸序列导入非人动物基因组中，该动物体内能正常表达人源化FcRn蛋白，可以作为人FcRn信号机理研究、肿瘤及免疫性疾病药物筛选的动物模型，对免疫靶点的新药研发具有重要的应用价值。

Description

FcRn基因人源化的非人动物及其构建方法和应用
技术领域
本发明属于动物基因工程和基因遗传修饰领域，具体地说，涉及一种FcRn基因修饰人源化动物模型的构建方法及其在生物医药领域的应用。
背景技术
FcRn(neonatal Fc receptor for IgG)也称为FCGRT(Fc fragment of IgGreceptor and transporter)，在不同物种中统称为FcRn，是一种MHCI类分子的细胞内运输受体，具有多种关键免疫系统功能。通过和IgG的Fc片段结合，FcRn能够延长循环系统和血清中IgG的半衰期。由于FcRn在控制IgG的药代动力学(pharmacokinetics，PK)中的关键作用，在开发和测试治疗性抗体和其它相关生物大分子药物方面具有非常重要的应用价值。
能结合抗体Fc的受体(Fc receptor，FcR)有很多，根据所结合抗体的类型不同可分为FcgR(结合IgG)、FceR(结合IgE)、FcaR(结合IgA)和FcA/MR(结合IgA和IgM)，每类可能包括一个到多个不等的分子。FcRn是特异结合IgG的FcR，但与其他FcgR并不是严格意义上的同家族成员。相比其他FcR，FcRn的主要作用在于保持血清中IgG的稳态。另外，FcRn还能结合血清白蛋白，保护其在溶酶体中免遭降解，延长其体内半衰期，是机体IgG和白蛋白自我调节和守恒的重要因素，贯穿于整个生命周期。
实验动物疾病模型对于研究人类疾病发生的病因、发病机制、开发防治技术和开发药物是不可缺少的研究工具。但由于动物与人类的生理结构和代谢系统本身的差异，例如人FcRn和小鼠FcRn蛋白序列的一致性为66.57％，传统的动物模型并不能很好的反映人体的真实状况。而且，已有研究表明小鼠FcRn与人FcRn对人免疫球蛋白IgG的结合能力存在很大的不同，难以更加准确地评价抗人抗体的药代动力学，在动物体内建立更接近人类的生理特征的疾病模型是生物医药行业的迫切需求。
鉴于FcRn在开发和测试治疗性抗体和其它相关生物大分子药物方面的重要应用价值，为进一步研究其相关生物学特性，提高临床前期药效试验的有效性，提高研发成功率，使临床前期的试验更有效并使研发失败最小化，本领域亟需开发涉及FcRn信号通路的非人动物模型。
发明内容
本发明的第一方面，提供了一种人源化FcRn蛋白，所述的人源化FcRn蛋白包含人FcRn蛋白的全部或部分。
优选的，所述的人源化FcRn蛋白包含人FcRn蛋白的信号肽、跨膜区、胞质区和/或胞外区的全部或部分。进一步优选的，所述的人源化FcRn蛋白包含与SEQ ID NO：2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的氨基酸序列或者包含与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列一致的氨基酸序列。
优选的，所述的人源化FcRn蛋白包含人FcRn核苷酸序列的1号至6号外显子编码的氨基酸序列的全部或部分，进一步优选的，所述的人源化FcRn蛋白包含人FcRn核苷酸序列的1号至6号外显子中的任一种、两种、三种以上、连续两种或连续三种以上外显子的组合编码的氨基酸序列的全部或部分。更优选的，所述的人源化FcRn蛋白至少包含SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：23编码的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：23具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的核苷酸编码的氨基酸序列。
本发明的第二方面，提供了一种人源化FcRn基因，所述的人源化FcRn基因包含人FcRn核苷酸序列的部分。
优选的，所述的人源化FcRn基因包含编码人FcRn蛋白的全部或部分核苷酸序列；优选的，包含编码人FcRn信号肽、跨膜区、胞质区和/或胞外区的全部或部分核苷酸序列；进一步优选的，包含编码与SEQ ID NO：2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的核苷酸序列或者包含编码SEQ ID NO：2的核苷酸序列。
优选的，所述的人源化FcRn基因编码上述的人源化FcRn蛋白。
优选的，所述的人源化FcRn基因包含人FcRn核苷酸序列的1号外显子至6号外显子的全部或部分，进一步优选的，所述的人源化FcRn基因包含人FcRn核苷酸序列的1号至6号外显子中的任一种、两种、三种以上、连续两种或连续三种以上外显子的组合的全部或部分，更优选的，所述的人源化FcRn基因包含从人FcRn核苷酸序列的起始密码子至终止密码子为止的核苷酸序列，或者，所述的人源化FcRn基因包含人FcRn的CDS或cDNA序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因包含人FcRn的核苷酸序列的1号外显子的部分、2号至5号外显子的全部、6号外显子的部分核苷酸序列，优选还包含1-2号内含子和/或5-6号内含子。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因包含人FcRn核苷酸序列的1号外显子的部分、2号外显子的全部、3号外显子的全部、4号外显子的全部、5号外显子的全部、6号外显子的部分核苷酸序列。
其中，所述的人FcRn核苷酸序列的1号外显子的部分至少包含编码区核苷酸序列。或者，所述的人FcRn核苷酸序列的1号外显子的部分至少包含50、60、70、73、80、90、100、150、200或208bp的核苷酸。人FcRn核苷酸序列的6号外显子的部分至少包含编码区的核苷酸序列，或者，人FcRn核苷酸序列的6号外显子的部分至少包含80、90、100、110、150、200、250、300、350、400、419bp的核苷酸。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因包含与SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23所示核苷酸序列的同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的核苷酸序列或者包含SEQ ID NO：5或SEQID NO：23所示核苷酸序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因中至少包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8所示核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的核苷酸序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因中至少包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10所示核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的核苷酸序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因中至少包含SEQ ID NO：26或SEQ ID NO：27所示核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：26或SEQ ID NO：27具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的核苷酸序列。
在本发明的另一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因中至少包含SEQ IDNO：24或SEQ ID NO：25所示核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的核苷酸序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因还包括非人动物FcRn基因的1号外显子的全部、2号外显子的部分和/或7号外显子的部分；优选的，所述的非人动物FcRn基因的1号外显子的全部、2号外显子的部分和/或7号外显子的部分与NC_000073.6相应的1号外显子、2号外显子、7号外显子至少具有70％、80％、90％或至少95％的同一性。
在本发明的另一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因还包括非人动物FcRn基因的1号外显子的全部、2号外显子的部分、5号外显子的全部、6号外显子的全部和/或7号外显子的全部；优选的，所述的非人动物FcRn基因的1号外显子的全部、2号外显子的部分、5号外显子的全部、6号外显子的全部和/或7号外显子的全部与NC_000073.6相应的1号至7号外显子至少具有70％、80％、90％或至少95％的同一性。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因的核苷酸序列包含下列组中的一种：
(a)转录的mRNA为SEQ ID NO：11所示核苷酸序列的全部或部分；
(b)转录的mRNA与SEQ ID NO：11所示核苷酸序列的同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的核苷酸序列；
(c)转录的mRNA与SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸的核苷酸序列；或
(d)转录的mRNA具有SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列。
优选的，所述的人源化FcRn基因还包含辅助序列，进一步优选的，所述的辅助序列包括PolyA序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的人源化FcRn基因从5’端至3’端依次为非人动物FcRn核苷酸序列(优选为5’UTR)、人FcRn核苷酸序列(优选为CDS或cDNA或基因组DNA序列)、非人动物FcRn核苷酸序列(优选为3’UTR，进一步优选还包括5号至7号外显子)。优选在非人动物FcRn核苷酸序列后紧邻包含辅助序列。
优选的，所述的人源化FcRn基因还包括特异性诱导物或阻遏物，进一步优选的，所述的特异性诱导物或阻遏物可以为常规可以诱导或阻遏的物质。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的特异性诱导物选自四环素系统(Tet-OffSystem/Tet-On System)或他莫昔芬系统(Tamoxifen System)。
本发明的第三方面，提供了一种人源化FcRn蛋白，所述的人源化FcRn蛋白由上述的人源化FcRn基因编码。
本发明的第四方面，提供了一种靶向载体，所述的靶向载体包含人FcRn核苷酸序列的部分。
优选的，所述的靶向载体包含编码人FcRn蛋白的全部或部分核苷酸序列；进一步优选的，所述的靶向载体包含编码人FcRn蛋白胞外区、信号肽、胞质区和/或跨膜区的全部或部分核苷酸序列；更优选的，所述的靶向载体包含编码SEQ ID NO：2所示氨基酸的核苷酸序列。
优选的，所述的靶向载体包含人FcRn核苷酸序列的1号至6号外显子的全部或部分；进一步优选的，所述的靶向载体包含人FcRn核苷酸序列的起始密码子到终止密码子为止或人FcRn的CDS或cDNA序列。
优选的，所述的靶向载体包含人FcRn的核苷酸序列的1号外显子的部分、2号至5号外显子的全部、6号外显子的部分核苷酸序列，优选还包含1-2号内含子和/或5-6号内含子。或者，所述的靶向载体包含人FcRn核苷酸序列的1号外显子的部分、2号外显子的全部、3号外显子的全部、4号外显子的全部、5号外显子的全部、6号外显子的部分核苷酸序列。其中，所述的人FcRn核苷酸序列的1号外显子的部分至少包含编码区核苷酸序列。或者，所述的人FcRn核苷酸序列的1号外显子的部分至少包含50、60、70、73、80、90、100、150、200或208bp的核苷酸。人FcRn核苷酸序列的6号外显子的部分至少包含编码区的核苷酸序列。或者，人FcRn核苷酸序列的6号外显子的部分至少包含80、90、100、110、150、200、250、300、350、400、419bp的核苷酸。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的靶向载体包含SEQ ID NO：5或SEQ IDNO：23所示核苷酸序列。
优选的，所述的靶向载体包含上述的人源化FcRn基因的核苷酸序列。
优选的，所述的靶向载体包含编码上述人源化FcRn蛋白的核苷酸序列。
优选的，所述的靶向载体还包含5’臂(5’同源臂)和/或3’臂(3’同源臂)。
所述的5’臂为与待改变的转换区5’端同源的DNA片段，其选自非人动物FcRn基因基因组DNA的100-10000个长度的核苷酸；优选的，所述的5’臂与NCBI登录号为NC_000073.6至少具有90％同源性的核苷酸；进一步优选的，所述5’臂序列与SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：21至少具有90％同源性，或者如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：21所示。
所述的3’臂为与待改变的转换区3’端同源的DNA片段，即3’臂，其选自非人动物FcRn基因基因组DNA的100-10000个长度的核苷酸；优选的，所述的3’臂与NCBI登录号为NC_000073.6至少具有90％同源性的核苷酸；进一步优选的，所述的3’臂序列与SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：22至少具有90％同源性，或者如SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：22所示。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的靶向载体包含SEQ ID NO：6或SEQ IDNO：7或SEQ ID NO：8所示核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的核苷酸序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的靶向载体包含SEQ ID NO：9或SEQ IDNO：10所示核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的核苷酸序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的靶向载体包含SEQ ID NO：26或SEQ IDNO：27所示核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：26或SEQ ID NO：27具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的核苷酸序列。
在本发明的另一个具体实施方式中，所述的靶向载体包含SEQ ID NO：24或SEQ IDNO：25所示核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的核苷酸序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的靶向载体从5’到3’依次包含5’臂、人FcRn核苷酸序列的部分、辅助序列、Neo盒、3’臂。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的靶向载体从5’到3’依次包含5’臂、人FcRn核苷酸序列的部分、Neo盒、3’臂。
优选的，所述的待改变的转换区位于非人动物FcRn基因座上，进一步优选的，所述的待改变的转换区位于非人动物FcRn基因2号至7号外显子上，或者，所述的待改变的转换区位于非人动物FcRn基因2号至4号外显子上。
优选的，所述的靶向载体还包含标记基因，进一步优选的，所述标记基因为负筛选标记的编码基因，更进一步优选的，所述负筛选标记的编码基因为白喉毒素A亚基的编码基因(DTA)。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的靶向载体中还包括阳性克隆筛选的抗性基因，进一步优选的，所述阳性克隆筛选的抗性基因为新霉素磷酸转移酶编码序列Neo。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的靶向载体中还包括特异性重组系统，进一步优选的，所述特异性重组系统为Frt重组位点(也可选择常规的LoxP重组系统)，所述的特异性重组系统为具有两个Frt重组位点，分别同向连接在抗性基因的两侧。
本发明的第五方面，提供了一种包含上述靶向载体的细胞。
本发明的第六方面，提供了上述靶向载体，或者上述的细胞在FcRn基因修饰中的应用，优选的，所述的应用包括但不限于敲除、插入或替换。
本发明的第七方面，提供了一种FcRn基因人源化的非人动物或其构建方法，所述的非人动物体内表达人FcRn蛋白或人源化FcRn蛋白，或者，所述的非人动物的基因组中包含人FcRn核苷酸序列的部分。
优选的，所述的非人动物的内源FcRn蛋白表达降低或缺失。
优选的，所述的人源化FcRn蛋白包含人FcRn蛋白的全部或部分。进一步优选为上述第一方面所述人源化FcRn蛋白。
优选的，所述的非人动物基因组中包含编码人FcRn蛋白的全部或部分核苷酸序列；进一步优选的，包含编码人FcRn蛋白的信号肽、跨膜区、胞质区和/或胞外区的全部或部分核苷酸序列；进一步优选的，包含编码上述人源化FcRn蛋白的核苷酸序列。更优选的，包含编码与SEQ ID NO：2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的核苷酸序列或者包含编码SEQ ID NO：2的核苷酸序列。
优选的，所述的非人动物基因组中包含人FcRn核苷酸序列的1号外显子至6号外显子的全部或部分，进一步优选的，包含人FcRn核苷酸序列的1号至6号外显子中的任一种、两种、三种以上、连续两种或连续三种以上外显子的组合的全部或部分，更优选的，包含从人FcRn核苷酸序列的起始密码子至终止密码子为止的核苷酸序列，或者，包含人FcRn的CDS或cDNA序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的非人动物的基因组中包含人FcRn的核苷酸序列的1号外显子的部分、2号外显子的全部、3号外显子的全部、4号外显子的全部、5号外显子的全部、6号外显子的部分核苷酸序列，优选的，所述的人FcRn核苷酸序列的1号外显子的部分、2号外显子的全部、3号外显子的全部、4号外显子的全部、5号外显子的全部、6号外显子的部分核苷酸序列，与NC_000019.10的相应1号至6号外显子的全部或部分至少具有70％、75％、80％、85％、90％或至少95％的同一性，进一步优选的，所述的人FcRn核苷酸序列的1号外显子的部分、2号外显子的全部、3号外显子的全部、4号外显子的全部、5号外显子的全部、6号外显子的部分，与NM_004107.5的相应1号至6号外显子的全部或部分一致。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的非人动物的基因组中包含与SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23所示核苷酸序列的同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的核苷酸序列或者包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23所示核苷酸序列。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的非人动物基因组中包含上述的人源化FcRn基因。
优选的，所述的非人动物基因组中还包含辅助序列，进一步优选的，所述的辅助序列包括PolyA序列。
优选的，所述的人FcRn核苷酸序列的部分或者人或人源化FcRn基因在非人动物体内可操作地连接至内源调控元件。
优选的，所述的人FcRn核苷酸序列的部分或人源化FcRn基因在非人动物体内通过内源或外源调控元件进行调控。进一步优选的，所述的调控元件为启动子。
优选的，所述的构建方法包括将包含下列任一种的核苷酸序列导入非人动物FcRn基因座：
A)人FcRn核苷酸序列的部分，优选包含人FcRn核苷酸序列的1号至6号外显子的全部或部分，进一步优选包含从人FcRn核苷酸序列的起始密码子到终止密码子为止，或，包含人FcRn的CDS序列；更进一步优选包含与SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23所示核苷酸序列的同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的核苷酸序列或者包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23所示核苷酸序列；或，
B)编码人FcRn蛋白的全部或部分的核苷酸序列，优选包含编码人FcRn蛋白的信号肽、跨膜区、胞质区和/或胞外区的全部或部分核苷酸序列，进一步优选包含编码与SEQ IDNO：2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的核苷酸序列或者包含编码与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列一致的核苷酸序列；
C)编码人源化FcRn蛋白的核苷酸序列；或，
D)人源化FcRn基因的核苷酸序列。
所述的导入为插入或替换。优选的，所述的插入或替换的位点为FcRn基因的内源调控元件之后。
其中，所述的插入为在不删除核苷酸的前提下，将目的片段直接置于相邻两个碱基之间。其中，目的片段例如人FcRn核苷酸序列、人源化FcRn基因、编码人或人源化FcRn蛋白的核苷酸序列、人FcRn与非人FcRn核苷酸序列拼接获得的核苷酸序列。当然也可以为人FcRn核苷酸序列的部分，优选为在非人动物FcRn基因的x号外显子紧邻插入人FcRn的x+1号外显子至6号外显子；例如在非人动物FcRn基因1号外显子紧邻插入人FcRn的2号至6号外显子，在非人动物FcRn基因的2号外显子紧邻插入人FcRn的3号至6号外显子，在非人动物的3号外显子紧邻插入人FcRn的4号至6号外显子，在非人动物4号外显子紧邻插入人FcRn的5号至6号外显子等等。优选可以直接在起始密码子位置、其前或其后插入人FcRn基因的CDS或cDNA或基因组DNA序列。
优选的，根据具体实施方案的需要，所述的插入还可能包括破坏非人动物内源FcRn基因的编码框或者破坏插入序列之后的内源FcRn基因的编码框，随后进行插入操作。或者所述的插入步骤即可给内源FcRn基因造成移码突变又可以实现插入人源序列的步骤。
进一步优选的，根据具体实施方案的需要，所述的插入还可能在插入的目的片段后加入辅助序列(例如终止密码子或含有终止功能的序列等)或其他方法(例如，翻转序列，或敲除序列)使得插入位点后的非人动物内源FcRn蛋白不能正常表达。
其中，所述的替换包括相应位置的替换或不相应位置的替换。所述相应位置的替换并不仅仅机械的代表人与非人动物FcRn基因碱基位点直接对应的替换，还包括相应功能区的替换，例如用编码人FcRn蛋白的胞外区的核苷酸序列替换编码非人动物FcRn蛋白的胞外区的核苷酸序列，用编码人FcRn蛋白的信号肽、胞外区、胞质区和跨膜区的核苷酸序列替换编码非人动物FcRn蛋白的信号肽、胞外区、胞质区和跨膜区的核苷酸序列。所述的不相应位置的替换包括外显子位置不相对应或不同功能区的替换，例如用人FcRn的1号至6号外显子替换非人动物FcRn的2号至7号外显子的全部或部分。例如用人FcRn的1号至6号外显子替换非人动物FcRn的2号至4号外显子的全部或部分等等。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的导入非人动物FcRn基因座上为替换非人动物FcRn基因的2号至4号外显子的全部或部分或2号至7号外显子的全部或部分。
优选的，所述的构建方法包括用包含人FcRn核苷酸序列的部分插入或替换到非人动物FcRn基因座上；优选的，用包含人FcRn核苷酸序列的1号至6号外显子的全部或部分插入或替换到非人动物FcRn基因座上，进一步优选的，用包含人FcRn核苷酸序列的1号至6号外显子中的任一种、两种、三种以上、连续两种或连续三种以上外显子的组合的全部或部分插入或替换到非人动物FcRn基因座上，更优选的，用包含人FcRn的核苷酸序列的1号外显子的部分、2号至5号外显子的全部、6号外显子的部分插入或替换至非人动物基因座上；其中，所述的1号外显子的部分至少包含从起始密码子开始至1号外显子最后一个核苷酸为止，所述的1号外显子的部分至少包含50、60、70、73、80、90、100、150、200或208bp的核苷酸，优选的，所述的1号外显子的部分包含73bp核苷酸，6号外显子的部分至少包含从6号外显子第一个核苷酸开始至终止密码子为止，所述的6号外显子的部分至少包含80、90、100、110、150、200、250、300、350、400、419bp的核苷酸，优选的，所述的6号外显子的部分包含110bp核苷酸，进一步优选的，用包含从人FcRn核苷酸序列的起始密码子到终止密码子为止，或，用包含人FcRn的CDS序列插入或替换至非人动物基因座上。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的构建方法包括用人FcRn的cDNA序列插入或替换非人动物基因座上；优选的，用包含SEQ ID NO：5的核苷酸序列插入或替换至非人动物基因座上。
优选的，所述的构建方法包括用包含人FcRn的cDNA序列插入或替换非人动物FcRn核苷酸序列的2号至4号外显子的全部或部分，进一步优选的，用包含SEQ ID NO：5的核苷酸序列插入或替换至非人动物基因座上替换非人动物FcRn核苷酸序列的2号至4号外显子的全部或部分；所述非人动物FcRn核苷酸序列包含编码非人动物2号外显子的部分、3号至4号外显子的全部核苷酸序列，优选的，包含非人动物2-3号内含子，其中，所述非人动物FcRn核苷酸序列的2号外显子的部分至少包含从非人动物FcRn核苷酸序列的起始密码子开始至2号外显子最后1个核苷酸为止。
在本发明的另一个具体实施方式中，所述的构建方法包括用包含人FcRn的基因组DNA的1号至6号外显子全部或部分插入或替换非人动物基因座上，优选的，用包含人FcRn的基因组DNA的1号外显子的部分、2号至5号外显子的全部、6号外显子的部分核苷酸序列插入或替换至非人动物基因座上，进一步优选的，包含1-2号内含子和/或5-6号内含子；其中，所述人FcRn的核苷酸序列的1号外显子的部分至少包含从起始密码子开始至1号外显子最后一个核苷酸为止，所述的1号外显子的部分至少包含50bp(例如50、55、60、65、66、67、68、69、70、71、72、73bp)的核苷酸，优选的，所述的1号外显子的部分包含73bp核苷酸，6号外显子的部分至少包含从6号外显子第一个核苷酸开始至终止密码子为止，所述的6号外显子的至少包含80bp(例如80、85、90、95、100、105、106、107、108、109、110bp)的核苷酸，优选的，所述的6号外显子的部分包含110bp核苷酸，进一步优选的，用包含SEQ ID NO：23的核苷酸序列插入或替换至非人动物基因座上。
优选的，所述的构建方法包括用包含人FcRn的基因组DNA的核苷酸序列的1号至6号外显子全部或部分插入非人动物FcRn核苷酸序列的2号至7号外显子的全部或部分；其中，所述人FcRn的核苷酸序列的1号外显子的部分至少包含从起始密码子开始至1号外显子最后一个核苷酸为止，6号外显子的部分至少包含从6号外显子第一个核苷酸开始至终止密码子为止，进一步优选的，用包含SEQ ID NO：23的核苷酸序列替换非人动物FcRn核苷酸序列的2号至7号外显子的全部或部分；所述非人动物FcRn核苷酸序列包含编码非人动物2号外显子的部分、3号至6号外显子的全部、7号外显子的部分核苷酸序列，优选的，包含1-2号内含子和/或5-6号内含子，其中，所述非人动物FcRn核苷酸序列的2号外显子的部分至少包含从非人动物FcRn核苷酸序列的起始密码子开始至2号外显子最后1个核苷酸为止，7号外显子的部分至少包含从7号外显子第一个核苷酸开始至第107个核苷酸为止。
优选的，所述的构建方法包括用包含编码人FcRn蛋白的全部或部分的核苷酸序列插入或替换到非人动物FcRn基因座上，进一步优选的，包括用包含编码人FcRn蛋白的信号肽、跨膜区、胞质区和/或胞外区的全部或部分核苷酸序列插入或替换到非人动物FcRn基因座上，更优选的，用包含编码与SEQ ID NO：2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的核苷酸序列或者包含编码与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列一致的核苷酸序列插入或替换到非人动物基因座上。
在本发明的一个具体实施方式中，用包含编码与SEQ ID NO：2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的核苷酸序列或者包含编码与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列一致的核苷酸序列插入或替换到非人动物FcRn基因中编码SEQ ID NO：1的核苷酸序列。
优选的，所述的构建方法包括用包含所述人FcRn核苷酸序列的部分或人源化FcRn基因的核苷酸序列插入或替换到非人动物FcRn基因座上。
优选的，所述的构建方法包括用包含编码所述人源化FcRn蛋白的核苷酸序列插入或替换到非人动物FcRn基因座上。
优选的，所述的非人动物是纯合或者杂合的。
优选的，所述非人动物的基因组中至少一个染色体上包含人FcRn的核苷酸序列或人源化FcRn基因。
优选的，所述的非人动物中至少一个细胞表达人FcRn蛋白或人源化FcRn蛋白。
优选的，所述的非人动物中至少一个细胞转录SEQ ID NO：11所示或与SEQ ID NO：11所示核苷酸序列的同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的核苷酸序列的mRNA。
优选的，使用基因编辑技术进行非人动物的构建，所述的基因编辑技术包括利用胚胎干细胞的基因打靶技术、CRISPR/Cas9技术、锌指核酸酶技术、转录激活子样效应因子核酸酶技术、归巢核酸内切酶或其他分子生物学技术。
优选的，使用上述靶向载体进行非人动物的构建。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的构建方法包括将上述靶向载体导入非人动物细胞中，培养该细胞(优选为胚胎干细胞)，然后将培养后的细胞移植至雌性非人动物输卵管内，允许其发育，鉴定筛选获得FcRn基因人源化的非人动物。
优选的，所述的构建方法还包括将FcRn基因人源化的非人动物与其他基因修饰的非人动物交配、体外受精或直接进行基因编辑，并进行筛选，得到多基因修饰的非人动物。所述的其他基因修饰的非人动物包括基因H2-D、B2M、PD-1、PD-L1、CTLA4、B7H3、B7H4、CD47、IL23A修饰的非人动物。
优选的，所述的非人动物可以选自啮齿类动物、猪、兔子、猴子等任何可以进行基因编辑制备基因人源化的非人动物。
优选的，所述的非人动物为非人哺乳动物，进一步优选的，所述的非人哺乳动物为啮齿类动物，更进一步优选的，所述的啮齿类动物为大鼠或小鼠。
优选的，所述的非人动物是免疫缺陷的非人哺乳动物，进一步优选的，所述的免疫缺陷的非人哺乳动物为免疫缺陷的啮齿类动物、免疫缺陷的猪、免疫缺陷的兔子或免疫缺陷的猴子，更优选的，所述的免疫缺陷的啮齿类动物为免疫缺陷的小鼠或大鼠，更进一步优选的，所述免疫缺陷鼠是NOD-Prkdcscid IL-2rγnull小鼠、NOD-Rag 1-/--IL2rg-/-(NRG)小鼠、Rag 2-/--IL2rg-/-(RG)小鼠、NOD/SCID小鼠或者裸鼠。
本发明的第八方面，提供了一种多基因修饰的非人动物的构建方法，包括如下步骤：
I)提供上述的FcRn基因人源化的非人动物或FcRn基因敲除的非人动物，或者采用上述的构建方法获得的FcRn基因人源化的非人动物；
II)将步骤I)提供的非人动物与其他基因修饰的非人动物交配、体外受精或直接进行基因编辑，并进行筛选，得到多基因修饰的非人动物。
优选的，所述的其他基因修饰的非人动物包括但不限于基因H2-D、B2M、PD-1、PD-L1、CTLA4、B7H3、B7H4、CD47、或IL23A修饰的非人动物。
优选的，所述的多基因修饰的非人动物为双基因人源化非人动物、三基因人源化非人动物、四基因人源化非人动物、五基因人源化非人动物、六基因人源化非人动物、七基因人源化非人动物、八基因人源化非人动物或九基因人源化非人动物。
优选的，所述的多基因修饰的非人动物的基因组中人源化的多个基因中的每一个基因均可以是纯合或杂合的。
本发明的第九方面，提供了一种上述构建方法获得的非人动物或其子代，所述的非人动物或其子代选自FcRn基因人源化的非人动物或者多基因修饰的非人动物。
本发明的第十方面，提供了一种动物的药代动力学模型，所述的药代动力学模型来源于上述的非人动物、上述的构建方法获得的非人动物，或者，上述的非人动物或其子代。
本发明的第十一方面，提供了一种动物的荷瘤或炎症模型或免疫相关疾病模型，所述的荷瘤或炎症模型或免疫相关疾病模型来源于上述的非人动物、上述的构建方法获得的非人动物，或者，上述的非人动物或其子代。
本发明的第十二方面，提供了一种动物的荷瘤或炎症模型的制备方法，所述的制备方法包括上述FcRn基因人源化的非人动物、FcRn基因敲除的非人动物或多基因修饰的非人动物的步骤；优选的，还包括植入肿瘤细胞的步骤。
本发明的第十三方面，提供了一种动物的药代动力学模型的制备方法，所述的制备方法包括上述FcRn基因人源化的非人动物、FcRn基因敲除的非人动物或多基因修饰的非人动物的步骤。
本发明的第十四方面，提供了上述FcRn基因人源化的非人动物、上述FcRn基因敲除的非人动物、上述构建方法获得的FcRn基因人源化的非人动物、上述FcRn基因敲除的非人动物或多基因修饰的非人动物或其子代在制备动物的荷瘤或炎症模型中的应用。
本发明的第十五方面，提供了上述FcRn基因人源化的非人动物、上述FcRn基因敲除的非人动物、上述构建方法获得的FcRn基因人源化的非人动物、上述FcRn基因敲除的非人动物或多基因修饰的非人动物或其子代在制备动物的药代动力学模型中的应用。
本发明的第十六方面，提供了上述的非人动物或其子代、上述的构建方法获得的非人动物或上述的荷瘤或炎症模型在制备治疗免疫相关疾病、肿瘤和/或炎症的药物中的应用。
本发明的第十七方面，提供了一种细胞、组织或器官，所述的细胞、组织或器官的基因组中包含人FcRn核苷酸序列的全部或部分，优选包含上述的人源化FcRn基因；或者，所述的细胞、组织或器官体内表达上述的人源化FcRn蛋白；或者，所述的细胞、组织或器官来源于上述的述的构建方法获得的非人动物、
上述的荷瘤或炎症模型，或者上述的药代动力学模型。
本发明的第十八方面，提供了一种荷瘤后的瘤组织，所述的瘤组织来源于上述的构建方法获得的非人动物或其子代，或者上述的荷瘤或炎症模型。
本发明的第十九方面，提供了一种FcRn基因人源化的细胞，所述的细胞表达人FcRn蛋白或人源化FcRn蛋白。
优选的，所述的人源化FcRn蛋白选自上述的人源化FcRn蛋白。
优选的，所述的细胞中内源FcRn蛋白的表达降低或缺失。
优选的，所述的细胞的基因组中包含人FcRn核苷酸序列的部分。进一步优选的，所述的细胞包含上述的人源化FcRn基因。
本发明的第二十方面，提供了一种FcRn基因敲除的细胞，所述的细胞中缺失FcRn基因的全部或部分核苷酸序列。
优选的，所述的细胞缺失FcRn基因的2号至4号或2号至7号外显子的全部或部分核苷酸序列。
本发明的第二十一方面，提供了来源于上述的人源化FcRn蛋白、上述的人源化FcRn基因、上述的构建方法获得的非人动物或其子代、上述的荷瘤或炎症模型、上述的药代动力学模型、上述的细胞、组织或器官、上述的荷瘤后的瘤组织、上述的细胞的应用，所述的应用包括：
A)涉及人类细胞的免疫过程的产品开发中的应用；所述的产品优选为抗体；
B)作为药理学、免疫学、微生物学或医学研究的模型系统中的应用；
C)涉及生产和利用动物实验疾病模型用于病原学研究和/或用于开发诊断策略和/或用于开发治疗策略中的应用；
D)筛选、验证、评价或研究FcRn通路功能；优选为人FcRn通路信号机理；或，E)筛选和评估人用药及药效研究方面的应用。所述的药物优选为抗体、免疫相关药物。
优选的，所述的应用为与FcRn基因或蛋白相关的应用。
优选的，所述的应用为非疾病的诊断和治疗方法。
本发明的第二十二方面，提供了上述FcRn基因人源化的非人动物、上述构建方法获得的FcRn基因人源化的非人动物、上述FcRn基因敲除的非人动物或多基因修饰的非人动物或其子代在制备人FcRn特异性调节剂或者筛选人FcRn特异性调节剂的产品中的应用。
本发明的第二十三方面，提供了一种人FcRn特异性调节剂的筛选方法，所述的筛选方法包括向植入肿瘤细胞的个体施加调节剂，检测肿瘤抑制性；其中，所述的个体选自上述的非人动物、上述的构建方法获得的非人动物、上述的非人动物或其子代，或者上述的荷瘤或炎症模型。
优选的，所述的调节剂选自CAR-T、药物。进一步优选的，所述的药物为抗体。
优选的，所述的调节剂为单抗或双特异性抗体或两种及两种以上药物的联合使用。
优选的，所述检测包括测定肿瘤细胞的大小和/或增殖速率。
优选的，所述检测的方法包括游标卡尺测量、流式细胞检测和/或动物活体成像检测。
优选的，所述的检测包括评估个体体重、脂肪量、活化途径、神经保护活性或代谢变化，所述的代谢变化包括食物消耗或水消耗的变化。
优选的，所述的肿瘤细胞来源于人或非人动物。
优选的，所述人FcRn特异性调节剂的筛选方法不是治疗方法。该方法用来筛选或评价药物，对候选药物的药效进行检测和比较，以确定哪些候选药物可以作为药物，哪些不能作为药物，或者，比较不同药物的药效敏感程度，即治疗效果不是必然的，只是一种可能性。
本发明的第二十四方面，提供了一种干预方案的评价方法，所述的评价方法包括向个体植入肿瘤细胞，向植入肿瘤细胞的个体施加干预方案，对施加干预方案后的个体进行肿瘤抑制效果检测和评价；其中，所述的个体选自上述的非人动物，上述的构建方法获得的非人动物，上述的非人动物或其子代，或者上述的荷瘤或炎症模型。
优选的，所述的干预方案选自CAR-T、药物治疗。进一步优选的，所述的药物为抗原结合蛋白。所述的抗体结合蛋白为抗体。
优选的，所述的肿瘤细胞来源于人或非人动物。
优选的，所述干预方案的评价方法不是治疗方法。该评价方法对干预方案的效果进行检测和评价，以确定该干预方案是否有治疗效果，即治疗效果不是必然的，只是一种可能性。
本发明的第二十五方面，提供了一种来源于上述的非人动物、上述的构建方法获得的非人动物、上述的非人动物或其子代、上述的药代动力学模型在开发和测试治疗性抗体和其它相关生物大分子药物中的用途。
本发明的第二十六方面，提供了一种来源于上述的非人动物、上述的构建方法获得的非人动物、上述的非人动物或其子代、上述的药代动力学或肿瘤或炎症模型或免疫相关疾病模型在制备治疗肿瘤、炎症或自身免疫疾病的药物中的用途。
本发明的第二十七方面，提供了一种评估药物药代动力学的方法，所述的方法包括使用上述的非人动物、上述构建方法获得非人动物，或者，上述的非人动物或其子代；其中，向非人动物或其子代施加药物，测量药代动力学参数。
所述药代动力学参数包括但不限于半衰期(T1/2)、药峰浓度(Cmax)、0-30天的血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-30)、从给药开始到理论外推无穷远的时间的血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-obs)、表观分布容积(Vd)以及清除率(Cl)。
本发明的第二十八方面，提供了一种确定靶向FcRn的治疗剂治疗疾病的有效性的方法，所述的方法包括向个体施加靶向FcRn的治疗剂，然后确定靶向FcRn的治疗剂对个体疾病的影响。
优选的，所述的个体选自上述的非人动物、上述的构建方法获得的非人动物或者上述的动物模型。
优选的，所述的疾病为免疫相关疾病。
优选的，所述的靶向FcRn的治疗剂包括但不限于CAR-T、药物(优选为抗体)。
本发明所述的“肿瘤”包括但不限于淋巴瘤、B细胞肿瘤、T细胞肿瘤、骨髓/单核细胞肿瘤、非小细胞肺癌、白血病、卵巢癌、鼻咽癌、乳腺癌、子宫内膜癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、膀胱癌、肺癌、支气管癌、骨癌、前列腺癌、胰腺癌、肝和胆管癌、食管癌、肾癌、甲状腺癌、头颈部癌、睾丸癌、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、骨髓增生异常综合征、以及肉瘤。其中，所述的白血病选自急性淋巴细胞性(成淋巴细胞性)白血病、急性骨髓性白血病、髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、以及慢性骨髓性白血病；所述淋巴瘤选自霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，包括B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；所述肉瘤选自骨肉瘤、尤文肉瘤、平滑肌肉瘤、滑膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、及软骨肉瘤。在本发明的一个具体实施方式中，所述的肿瘤选自B细胞肿瘤、T细胞肿瘤、骨髓/单核细胞肿瘤。优选包括B或T细胞急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞白血病(AML)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和多发性骨髓瘤(MM)、鼻咽癌、肺癌。
本发明所述的“免疫相关疾病”包括但不限于过敏、哮喘、心肌炎、肾炎、肝炎、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病、甲状腺功能亢进、原发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、溃疡性结肠炎、自身免疫性肝病、糖尿病、疼痛或神经障碍等。在本发明的一个具体实施方式中。所述的免疫相关疾病为类风湿性关节炎。
本发明所述的“炎症”包括急性炎症，也包括慢性炎症。具体的，包括但不限于变质性炎症、渗出性炎症(浆液性炎、纤维素性炎、化脓性炎、出血性炎、坏死性炎、卡他性炎)、增生性炎症、特异性炎症(结核、梅毒、麻疯、淋巴肉芽肿等)。
本发明保护的主题“细胞”、“组织”或“器官”均不能发育为动物，其中，所述的细胞不是干细胞或受精卵细胞，所述的细胞可以是体细胞、淋巴细胞(优选为T细胞或B细胞)或肿瘤细胞等等，所述的组织可以是脾脏、淋巴结、骨髓、肿瘤或其培养物等等。
本发明所述的FcRn基因人源化的非人动物体内可以正常表达人FcRn蛋白或人源化FcRn蛋白。可用于针对人FcRn靶位点的药物筛选、药效评估、免疫疾病和肿瘤治疗，可以加快新药研发过程、节约时间和成本。对于研究FcRn蛋白功能及相关疾病药物筛选提供了有效的保障。
本发明所述的“全部或部分”，“全部”为整体，“部分”为整体中的局部，或者组成整体的个体。
本发明所述的“人源化FcRn蛋白”，包含来源于人FcRn蛋白的部分。其中，所述的“人FcRn蛋白”同“人FcRn蛋白的全部”，即其氨基酸序列与人FcRn蛋白的全长氨基酸序列一致。所述的“人FcRn蛋白的部分”，为连续或间隔的5-365个(优选为10-365个)氨基酸序列与人FcRn蛋白的氨基酸序列一致或与人FcRn蛋白的氨基酸序列具有70％以上同源性。
本发明所述的人FcRn蛋白的“信号肽”的全部、人FcRn蛋白的“跨膜区”的全部、人FcRn蛋白的“胞质区”的全部或人FcRn蛋白的“胞外区”的全部，代表其氨基酸序列分别与人FcRn蛋白的信号肽、跨膜区、胞质区或胞外区的全长氨基酸序列一致。
本发明所述的人FcRn蛋白的“信号肽”的部分，为连续或间隔5-23个氨基酸序列与人FcRn蛋白的信号肽氨基酸序列一致，或与人FcRn蛋白的信号肽氨基酸序列具有70％以上同源性。
本发明所述的人FcRn蛋白的“跨膜区”的部分，为连续或间隔5-24个氨基酸序列与人FcRn蛋白的胞外区氨基酸序列一致，或与人FcRn蛋白的胞外区氨基酸序列一致具有70％以上同源性。
本发明所述的人FcRn蛋白的“胞外区”的部分，为连续或间隔5-274个氨基酸序列与人FcRn蛋白的胞外区氨基酸序列一致，或与人FcRn蛋白的胞外区氨基酸序列具有70％以上同源性。
本发明所述的人FcRn蛋白的“胞质区”的部分，为连续或间隔5-44个氨基酸序列与人FcRn蛋白的胞外区氨基酸序列一致，或与人FcRn蛋白的胞外区氨基酸序列具有70％以上同源性。
本发明所述的“人源化FcRn基因”，包含来源于人FcRn核苷酸序列的部分和非人FcRn基因的部分。其中，所述的“人FcRn核苷酸序列”同“人FcRn核苷酸序列的全部”，即其核苷酸序列与人FcRn核苷酸序列的全长核苷酸序列一致。所述的“人FcRn核苷酸序列的部分”为连续或间隔的20-13768bp(优选为20-1098或20-1542bp)个核苷酸序列与人FcRn核苷酸序列一致，或与人FcRn核苷酸序列具有70％以上同源性。
本发明所述的“xx号至xxx号外显子”或“xx号至xxx号外显子的全部”包含外显子及其期间的内含子的核苷酸序列，例如所述的“1号至6号外显子”包含1号外显子、1-2号内含子、2号外显子、2-3号内含子、3号外显子、3-4号内含子、4号外显子、4-5号内含子、5号外显子、5-6号内含子、6号外显子的全部核苷酸序列。
本发明所述的“x-xx号内含子”表示x号外显子与xx号外显子之间的内含子。例如“1-2号内含子”表示1号外显子与2号外显子之间的内含子。
本发明所述的“外显子的部分”表示连续或间隔几个、几十个或几百个核苷酸序列与全部的外显子核苷酸序列一致。例如人FcRn核苷酸序列的1号外显子的部分，包含连续或间隔的5-208bp个，优选10-73bp个核苷酸序列与人FcRn核苷酸序列的1号外显子核苷酸序列一致。在本发明的一个具体实施方式中，所述的“人源化FcRn基因”中包含的“1号外显子的部分”至少包括从1号外显子编码氨基酸序列的第1个核苷酸开始至1号外显子的最后一个核苷酸序列为止。
本发明所述的“基因座”广义上讲代表基因在染色体上所占的位置，狭义上讲代表某一基因上的一段DNA片段，即可以是一个基因也可以是一个基因的一部分。例如所述的“FcRn基因座”表示FcRn基因1号至7号外显子上的任选一段的DNA片段。优选为1号外显子、2号外显子、3号外显子、4号外显子、5号外显子、6号外显子、7号外显子或其期间的内含子中的任一个或两个或多个的组合，或一个或两个或多个的全部或部分。
本发明所述的“核苷酸序列”包含天然的或经过修饰的核糖核苷酸序列、脱氧核糖核苷酸序列。优选为DNA、cDNA、pre-mRNA、mRNA、rRNA、hnRNA、miRNAs、scRNA、snRNA、siRNA、sgRNA、tRNA。
本发明所述的“治疗”表示减缓、中断、阻止、控制、停止、减轻、或逆转一种体征、症状、失调、病症、或疾病的进展或严重性，但不一定涉及所有疾病相关体征、症状、病症、或失调的完全消除，且是指在疾病已开始发展后改善疾病或病理状态的体征、症状等等的治疗干预。
本发明所述的“同源性”，是指在使用氨基酸序列或核苷酸序列的方面，本领域技术人员在保证与已知序列相似结构或功能的前提下，可以根据实际工作需要对序列进行调整，使使用序列与现有技术获得的序列相比，具有(包括但不限于)1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，21％，22％，23％，24％，25％，26％，27％，28％，29％，30％，31％，32％，33％，34％，35％，36％，37％，38％，39％，40％，41％，42％，43％，44％，45％，46％，47％，48％，49％，50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，70％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.1％，99.2％，99.3％，99.4％，99.5％，99.6％，99.7％，99.8％，99.9％的同一性。
本领域的技术人员能够确定并比较序列元件或同一性程度，以区分另外的小鼠和人序列。
除非特别说明，本发明的实践将采取细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的传统技术。这些技术在以下文献中进行了详细的解释。例如：Molecular Cloning A Laboratory Manual，2ndEd.，ed.By Sambrook，FritschandManiatis(Cold Spring Harbor Laboratory Press：1989)；DNA Cloning，Volumes Iand II(D.N.Glovered.，1985)；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gaited.，1984)；Mullisetal.U.S.Pat.No.4，683，195；Nucleic Acid Hybridization(B.D.Hames&S.J.Higginseds.1984)；Transcription And Translation(B.D.Hames&S.J.Higginseds.1984)；Culture Of Animal Cells(R.I.Freshney，AlanR.Liss，Inc.，1987)；Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press，1986)；B.Perbal，A PracticalGuide To Molecular Cloning(1984)；the series，Methods In ENZYMOLOGY(J.Abelsonand M.Simon，eds.inchief，Academic Press，Inc.，New York)，specifically，Vols.154and 155(Wuetal.eds.)and Vol.185，″Gene Expression Technology″(D.Goeddel，ed.)；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells(J.H.Miller andM.P.Caloseds.，1987，Cold Spring Harbor Laboratory)；Immunochemical Methods InCell And Molecular Biology(Mayer and Walker，eds.，Academic Press，London，1987)；Handbook Of Experimental Immunology，Volumes V(D.M.Weir and C.C.Blackwell，eds.，1986)；and Manipulating the Mouse Embryo，(Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，N.Y.，1986)。
在一个方面，所述非人动物是哺乳动物。优选的，所述非人动物是小型哺乳动物，例如跳鼠科。在一个实施方式中，所述非人动物是啮齿动物。在一个实施方式中，所述啮齿动物选自小鼠、大鼠和仓鼠。在一个实施方式中，所述啮齿动物选自鼠家族。在一个实施方式中，所述基因修饰的动物来自选自丽仓鼠科(例如小鼠样仓鼠)、仓鼠科(例如仓鼠、新世界大鼠和小鼠、田鼠)、鼠总科(真小鼠和大鼠、沙鼠、刺毛鼠、冠毛大鼠)、马岛鼠科(登山小鼠、岩小鼠、有尾大鼠、马达加斯加大鼠和小鼠)、刺睡鼠科(例如多刺睡鼠)和鼹形鼠科(例如摩尔大鼠、竹大鼠和鼢鼠)家族。在一个特定实施方式中，所述基因修饰的啮齿动物选自真小鼠或大鼠(鼠总科)、沙鼠、刺毛鼠和冠毛大鼠。在一个实施方式中，所述基因修饰的小鼠来自鼠科家族成员。在一个实施方式中，所述动物是啮齿动物。在一个特定实施方式中，所述啮齿动物选自小鼠和大鼠。在一个实施方式中，所述非人动物是小鼠。
在一个特定实施方式中，所述非人动物是啮齿动物，其为选自BALB/c、A、A/He、A/J、A/WySN、AKR、AKR/A、AKR/J、AKR/N、TA1、TA2、RF、SWR、C3H、C57BR、SJL、C57L、DBA/2、KM、NIH、ICR、CFW、FACA、C57BL/A、C57BL/An、C57BL/GrFa、C57BL/KaLwN、C57BL/6、C57BL/6J、C57BL/6ByJ、C57BL/6NJ、C57BL/10、C57BL/10ScSn、C57BL/10Cr和C57BL/Ola的C57BL、C58、CBA/Br、CBA/Ca、CBA/J、CBA/st、CBA/H品系的小鼠及NOD、NOD/SCID、NOD-Prkdcscid IL-2rgnull背景的小鼠。
以上只是概括了本发明的一些方面，不是也不应该认为是在任何方面限制本发明。
本说明书提到的所有专利和出版物都是通过参考文献作为整体而引入本发明的。本领域的技术人员应认识到，对本发明可作某些改变并不偏离本发明的构思或范围。
下面的实施例进一步详细说明本发明，不能认为是限制本发明或本发明所说明的具体方法的范围。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施例，其中：
图1：小鼠FcRn基因座和人FcRn基因座对比示意图(非按比例)；
图2：小鼠FcRn基因人源化改造示意图一，其中，chiExon1对应mExon1，chiExon2对应mExon2部分和人FcRn片段，chiExon 3、4、5分别对应mExon5、6、7(非按比例)；
图3：FcRn基因打靶策略设计示意图一(非按比例)；
图4：FcRn重组后细胞Southern blot结果，其中WT为野生型对照，1-G2、2-A7、2-A8、2-D3、3-B2、3-D4、3-G11、4-B9和4-D9为克隆编号；
图5：人源化FcRn小鼠FRT重组过程示意图(非按比例)；
图6：FcRn人源化小鼠F1代基因型鉴定结果，其中，WT为野生型，H2O为水对照，PC为阳性对照，F1-01为小鼠编号；
图7：小鼠FcRn基因人源化改造示意图二，其中chiExon1、2、3、4、5、6、7分别对应mExon1、mExon2和hExon1的部分、hExon2、hExon3、hExon4、hExon5、mExon7和hExon6的部分(非按比例)；
图8：FcRn基因打靶策略设计示意图二(非按比例)；
图9：FcRn重组后细胞Southern blot结果图二，其中WT为野生型对照，2-D03、2-D08、2-E05、2-F09、2-G08、3-B12和3-H08为克隆编号；
图10：人源化FcRn小鼠FRT重组过程示意图二(非按比例)；
图11：FcRn人源化小鼠F1代基因型鉴定结果图二，其中，WT为野生型，H2O为水对照，PC为阳性对照，F1-01到F1-09为小鼠编号；
图12：抗人PD-1抗体在B-hFcRn小鼠和C57BL/6野生型小鼠体内的药物浓度-时间曲线；
图13：抗人CTLA4抗体在B-hFcRn小鼠和C57BL/6野生型小鼠体内的药物浓度-时间曲线；
图14：C57BL/6野生型小鼠(+/+)和FcRn基因人源化纯合子小鼠(H/H)肾脏组织中FcRn mRNA检测结果，其中H2O为水对照，GAPDH为甘油醛-3-磷酸脱氢酶内参；
图15：C57BL/6野生型小鼠(+/+)、实施例1与2制备的FcRn基因人源化纯合子小鼠(H/H)的Western blot检测结果，β-Actin为β肌动蛋白内参；
图16：实施例1(H/H(V1))与实施例2(H/H(V2))制备的FcRn基因人源化纯合子小鼠在不同组织中的蛋白表达检测，β-Actin为β肌动蛋白内参；
图17：实施例1中制备的FcRn基因人源化纯合子小鼠不同组织中蛋白表达水平；
图18：突变抗体在实施例1制得的FcRn基因人源化纯合子小鼠体内的药物浓度-时间曲线；
图19：抗人抗体在实施例1制得的FcRn基因人源化纯合子小鼠体内的药物浓度-时间曲线；
图20：人鼠蛋白FcRn序列比对示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
在下述每一实施例中，设备和材料是从以下所指出的几家公司获得：
ScaI、BamHI、XbaI、StuI、XmnI酶购自NEB，货号分别为R3122、R3136、R0145、R0187、R0194；
Lipopolysaccharides from Escherichia coli O111：B4购自Sigma，货号：L2630；
Attune Nxt Acoustic Focusing Cytometer购自Thermo Fisher，型号AttuneNxt；
Prime Script 1stStrand cDNA Synthesis Kit购自TAKARA，型号6110A；
HeraeusTMFrescoTM21 Microcentrifuge购自Thermo Fisher，型号Fresco 21；
Figure BDA0003495306590000221
(Pembrolizumab)来源于Merck Sharp&Dohme；
Figure BDA0003495306590000222
(Ipilimumab)来源于Bristol-Myers Squibb；
抗鼠FCRN抗体Mouse FCRN Antibody，购自R&D，型号AF6775；
抗人FCRN抗体FCRN/FCGRTAntibody，购自NovusBiologicals，型号NBP1-89128；
羊抗人IgG抗体PeroxidaseAffiniPureF(ab′)2FragmentGoatAnti-HumanIgG,Fcγfragmentspecific，购自Jacksonimmuno，型号109-036-098；
亲和纯化山羊抗人IgG抗体AffiniPure Goat Anti-Human IgG(H+L)，购自Jacksonimmuno，型号109-005-088。
实施例1 FcRn基因人源化小鼠的构建(方法一)
本实施例对非人动物(如小鼠)进行改造，使该非人动物体内包含编码人FcRn蛋白的核苷酸序列，得到经遗传修饰的非人动物体内可表达人FcRn蛋白。小鼠FcRn基因(NCBIGene ID：14132，Primary source：MGI：103017，UniProt ID：Q61559，位于7号染色体NC_000073.6的第45092993至45103822位，基于转录本NM_010189.3及其编码蛋白NP_034319.2(SEQ ID NO：1))和人FcRn基因(NCBI Gene ID：2217，Primary source：HGNC:3621，UniProtID：P55899，位于19号染色体NC_000019.10的第49512661至49526428位，基于转录本NM_004107.5及其编码蛋白NP_004098.1(SEQ ID NO：2))，小鼠FcRn基因座与人FcRn基因座对比示意图如图1所示，人鼠FcRn蛋白序列比对见图20。
为了达到本发明的目的，可在小鼠内源FcRn基因座引入编码人FcRn蛋白的核苷酸序列(例如基因组DNA序列或cDNA序列或CDS序列)，使得该小鼠表达人FcRn蛋白。本实施例以引入人cDNA序列为例，具体来说，可以通过基因编辑技术将小鼠FcRn基因的2号外显子部分序列至4号外显子的1184bp核苷酸序列用人FcRn的核苷酸序列进行替换，得到人源化FcRn基因序列(示意图如图2所示)，实现对小鼠FcRn基因的人源化改造。
进一步设计如图3所示的打靶策略，图中显示了靶向载体上含有小鼠FcRn基因上游和下游的同源臂序列，以及包含人FcRn序列的A1片段。其中，上游同源臂序列(5’同源臂，SEQ ID NO：3)与NCBI登录号为NC_000073.6的第45103070至45107547位核苷酸序列相同，下游同源臂序列(3’同源臂，SEQ ID NO：4)与NCBI登录号为NC_000073.6的第45095276至45101885位核苷酸序列相同；A1片段上包含人FcRn的编码序列(SEQ ID NO：5)，该序列与NCBI登录号为NM_004107.5的第136-1233位核苷酸序列相同；人FcRn序列上游与小鼠的连接设计为
Figure BDA0003495306590000231
Figure BDA0003495306590000232
其中序列“tcgga”中的“a”是小鼠的最后一个核苷酸，序列“
Figure BDA0003495306590000233
”中的“a”是人的第一个核苷酸；人FcRn序列下游与小鼠的连接设计为
Figure BDA0003495306590000234
Figure BDA0003495306590000235
其中序列“gcctga”中的“a”是人的最后一个核苷酸，序列“
Figure BDA00034953065900002310
”中的“t”是小鼠的第一个核苷酸；小鼠序列与polyA(SEQ ID NO：50)的连接设计为
Figure BDA0003495306590000236
Figure BDA0003495306590000237
其中序列“TGCTT”中的最后一个“T”是小鼠的最后一个核苷酸，序列“
Figure BDA0003495306590000238
”中的第一个“A”是polyA序列的第一个核苷酸。
靶向载体上还包括用于阳性克隆筛选的抗性基因，即新霉素磷酸转移酶编码序列Neo，并在抗性基因的两侧装上两个同向排列的位点特异性重组系统Frt重组位点，组成Neo盒(Neo cassette)。其中Neo盒5’端与polyA的连接设计为
Figure BDA0003495306590000239
Figure BDA0003495306590000247
其中序列“cccttc”中的最后一个“c”是polyA的最后一个核苷酸，序列“
Figure BDA0003495306590000242
”中的“g”是Neo盒的第一个核苷酸；Neo盒3’端与小鼠的连接设计为
Figure BDA0003495306590000243
Figure BDA0003495306590000244
Figure BDA0003495306590000245
其中序列“ggatc”中的“c”是Neo盒的最后一个核苷酸，序列“
Figure BDA0003495306590000246
”中的“c”是小鼠的第一个核苷酸。此外，还在靶向载体3’同源臂下游构建了具有负筛选标记的编码基因(白喉毒素A亚基的编码基因(DTA))。改造后的人源化小鼠FcRn的mRNA序列如SEQ ID NO：11所示，表达的蛋白序列如SEQ ID NO：2所示。
靶向载体构建可采用常规方法进行，如酶切连接等。构建好的靶向载体通过酶切进行初步验证后，再送测序公司进行测序验证。将测序验证正确的靶向载体电穿孔转染入C57BL/6小鼠的胚胎干细胞中，利用阳性克隆筛选标记基因对得到的细胞进行筛选，并利用PCR和Southern Blot技术进行检测确认外源基因的整合情况，筛选出正确的阳性克隆细胞，经PCR鉴定为阳性的克隆再进行Southern Blot(分别用ScaI或BamHI消化细胞DNA并使用2个探针进行杂交，探针及目的片段长度如表1所示)检测，结果如图4所示，检测结果表明9个经PCR验证为阳性的克隆，经测序进一步验证，除2-A8外，其余8个均为阳性克隆且无随机插入，具体编号为1-G2、2-A7、2-D3、3-B2、3-D4、3-G11、4-B9和4-D9。
表1具体探针及目的片段长度
限制性内切酶 探针 野生型片段大小 重组序列片段大小
ScaI 5’Probe 9.9kb 8.0kb
BamHI 3’Probe 10.2kb 8.7kb
其中，PCR测定包括的引物如表2所示。
表2 PCR测定引物序列及目的片段长度
Figure BDA0003495306590000241
Southern Blot检测包括如下探针引物：
5’探针(5’Probe)：
5’Probe-F：5’-AGGCAGGCAGATTTCTGACA-3’(SEQ ID NO：14)，
5’Probe-R：5’-TCCAGAAGCCTGAGTTTAGCT-3’(SEQ ID NO：15)；
3’探针(3’Probe)：
3’Probe-F：5’-CGGTTCTTATATTCAGTGAGGAAAC-3’(SEQ ID NO：16)，
3’Probe-R：5’-CCAATCCTGCACACAGCTAC-3’(SEQ ID NO：17)；
将筛选出的正确阳性克隆细胞(黑色鼠)按照本领域已知的技术导入已分离好的囊胚中(白色鼠)，得到的嵌合囊胚转移至培养液中短暂培养后移植至受体母鼠(白色鼠)的输卵管，可生产F0代嵌合体鼠(黑白相间)。将F0代嵌合鼠与野生型鼠回交获得F1代鼠，再将F1代杂合小鼠互相交配即可获得F2代纯合子鼠。还可将阳性鼠与Flp工具鼠交配去除阳性克隆筛选标记基因(该过程示意图见图5)后，再通过互相交配即可得到人源化FcRn基因纯合子小鼠。可通过PCR鉴定子代小鼠体细胞的基因型(引物如表3所示)，示例性的F1代小鼠(已去除Neo标记基因)的鉴定结果见图6，其中，编号为F1-01的小鼠为阳性杂合小鼠。这表明使用本方法能构建出可稳定传代且无随机插入的人源化FcRn基因工程小鼠。
表3引物名称及具体序列
Figure BDA0003495306590000251
可通过常规检测方法确认阳性小鼠体内人源化FcRnmRNA的表达情况，例如RT-PCR等。具体来说，分别取6周龄雌性C57BL/6野生型小鼠和本实施例制得的FcRn基因人源化纯合子小鼠各1只，脱颈安乐死后取肾脏组织，研磨制备细胞悬液，按照TRIzol试剂盒说明书抽提细胞RNA，反转录成cDNA后进行RT-PCR检测，检测结果如图14所示。从图中可以看出，在C57BL/6野生型小鼠肾脏中检测到鼠FcRnmRNA(图14A)，没有检测到人源化FcRnmRNA(图14B)；在FcRn基因人源化纯合子小鼠肾脏组织中仅检测到人源化FcRnmRNA(图14B)，没有检测到鼠FcRnmRNA(图14A)。
RT-PCR引物序列包括：
mFcRn-F：5’-ATCTACGGGGCTTCCCTCTT-3’(SEQ ID NO：44)
mFcRn-R：5’-GCAACAGGTCACCAGAGTCA-3’(SEQ ID NO：45)
hFcRn-F：5’-CTCCTGTACCACCTTACCGC-3’(SEQ ID NO：46)
hFcRn-R：5’-ACACCGATGACGATTCCCAC-3’(SEQ ID NO：47)
GAPDH-F：5’-TCACCATCTTCCAGGAGCGAGA-3’(SEQ ID NO：48)
GAPDH-R：5’-GAAGGCCATGCCAGTGAGCTT-3’(SEQ ID NO：49)
实施例2 FcRn基因人源化小鼠的构建(方法二)
还可以通过基因编辑技术将小鼠FcRn基因组DNA序列的2号外显子部分序列至7号外显子部分序列的9824bp核苷酸序列用对应的人FcRn基因组DNA的1号外显子部分序列至6号外显子部分序列的12719bp核苷酸序列替换，得到人源化FcRn基因序列(示意图如图7所示)，实现对小鼠FcRn基因的人源化改造。
进一步设计如图8所示的打靶策略，图中显示了靶向载体上含有小鼠FcRn基因上游和下游的同源臂序列，以及包含人FcRn序列的A2片段。其中，上游同源臂序列(5’同源臂，SEQ ID NO：21)与NCBI登录号为NC_000073.6的第45103070至45106859位核苷酸序列相同，下游同源臂序列(3’同源臂，SEQ ID NO：22)与NCBI登录号为NC_000073.6的第45088115至45092654位核苷酸序列相同；A2片段上包含人FcRn序列的1号外显子部分序列至6号外显子部分序列的基因组DNA序列(SEQ ID NO：23)，该DNA序列与NCBI登录号为NC_000019.10的第49513401至49526119位核苷酸序列相同；A2片段中人FcRn序列上游与小鼠的连接设计为
Figure BDA0003495306590000261
Figure BDA0003495306590000262
其中序列“tcgga”中的“a”是小鼠的最后一个核苷酸，序列“
Figure BDA0003495306590000263
”中的“a”是人的第一个核苷酸；人FcRn序列下游与小鼠的连接设计为
Figure BDA0003495306590000264
Figure BDA0003495306590000265
其中序列“gcctga”中的“a”是人的最后一个核苷酸，序列“
Figure BDA0003495306590000266
”中的“t”是小鼠的第一个核苷酸。
靶向载体上还包括用于阳性克隆筛选的抗性基因，即新霉素磷酸转移酶编码序列Neo，并在抗性基因的两侧装上两个同向排列的位点特异性重组系统Frt重组位点，组成Neo盒(Neo cassette)。其中Neo盒5’端与小鼠基因的连接设计为
Figure BDA0003495306590000267
Figure BDA0003495306590000268
Figure BDA0003495306590000269
其中序列“gtggtt”中的最后一个“t”是小鼠的最后一个核苷酸，序列“
Figure BDA00034953065900002610
”中的第一个“G”是Neo盒的第一个核苷酸；Neo盒3’端与小鼠的连接设计为
Figure BDA00034953065900002611
Figure BDA00034953065900002612
Figure BDA00034953065900002613
其中序列“GATCC”中的最后一个“C”是Neo盒的最后一个核苷酸，序列“
Figure BDA00034953065900002614
Figure BDA0003495306590000272
”中的第一个“g”是小鼠的第一个核苷酸。此外，还在靶向载体3’同源臂下游构建了具有负筛选标记的编码基因(白喉毒素A亚基的编码基因(DTA))。改造后的人源化小鼠FcRn的mRNA序列如SEQ ID NO：11所示，表达的蛋白序列如SEQ ID NO：2所示。
靶向载体构建可采用常规方法进行，如酶切连接等。构建好的靶向载体通过酶切进行初步验证后，再送测序公司进行测序验证。将测序验证正确的靶向载体电穿孔转染入C57BL/6小鼠的胚胎干细胞中，利用阳性克隆筛选标记基因对得到的细胞进行筛选，并利用PCR和Southern Blot技术进行检测确认外源基因的整合情况，筛选出正确的阳性克隆细胞，经PCR(测定引物及目的片段长度如表5所示)鉴定为阳性的克隆再进行Southern Blot(分别用XbaI或StuI或XmnI消化细胞DNA并使用3个探针进行杂交，探针及目的片段长度如表4所示)检测，结果见如图9所示，检测结果表明7个经PCR验证为阳性的克隆，经测序进一步验证均为阳性克隆且无随机插入，具体编号为2-D03、2-D08、2-E05、2-F09、2-G08、3-B12和3-H08。
表4具体探针及目的片段长度
限制性内切酶 探针 野生型片段大小 重组序列片段大小
XbaI 5’Probe 13.2kb 18.3kb
StuI 3’Probe 17.4kb 9.2kb
XmnI Neo Probe(3’) — 12.7kb
表5 PCR测定引物及目的片段长度
Figure BDA0003495306590000271
Southern Blot检测包括如下探针引物：
5’探针(5’Probe)：
5’Probe-F：5’-AACCTGGAGCTCACTGGTCAGCAAA-3’(SEQ ID NO：32)，
5’Probe-R：5’-CACGGGCAGACTCTCAGTTCCATC-3’(SEQ ID NO：33)；
3’探针(3’Probe)：
3’Probe-F：5’-ATAGCCCAGAGCTCAAGGATAGGCA-3’(SEQ ID NO：34)，
3’Probe-R：5’-CCCAGTCTGCTTTCTGTCCTGTCAC-3’(SEQ ID NO：35)；
Neo探针(Neo Probe(3’))：
Neo Probe(3’)-F：5’-GGATCGGCCATTGAACAAGAT-3’(SEQ ID NO：36)，
Neo Probe(3’)-R：5’-CAGAAGAACTCGTCAAGAAGGC-3’(SEQ ID NO：37)。
将筛选出的正确阳性克隆细胞(黑色鼠)按照本领域已知的技术导入已分离好的囊胚中(白色鼠)，得到的嵌合囊胚转移至培养液中短暂培养后移植至受体母鼠(白色鼠)的输卵管，可生产F0代嵌合体鼠(黑白相间)。将F0代嵌合鼠与野生型鼠回交获得F1代鼠，再将F1代杂合小鼠互相交配即可获得F2代纯合子鼠。还可将阳性鼠与Flp工具鼠交配去除阳性克隆筛选标记基因(该过程示意图见图10)后，再通过互相交配即可得到人源化FcRn基因纯合子小鼠。可通过PCR鉴定子代小鼠体细胞的基因型(引物如表6所示)，示例性的F1代小鼠(已去除Neo标记基因)的鉴定结果见图11，其中，编号为F1-01到F1-09的9只小鼠均为阳性杂合小鼠。这表明使用本方法能构建出可稳定传代且无随机插入的人源化FcRn基因工程小鼠。
表6引物名称及具体序列
Figure BDA0003495306590000281
实施例3 Western Blot蛋白检测
进一步采用Western Blot方法检测FcRn基因人源化小鼠体内人FcRn蛋白的表达情况。分别选取8周龄雌性野生型C57BL/6小鼠(+/+)和实施例1制备的FcRn基因人源化纯合子小鼠(V1，H/H)，实施例2制备的FcRn基因人源化纯合子小鼠(V2，H/H)各1只，脱颈安乐死后取肝脏、心脏、脾脏、肺、肾脏和肠道组织，并使用抗人FcRn抗体(hFcRn)和抗鼠FcRn抗体(mFcRn)进行Western Blot检测，检测结果如图15-图16所示。
从图15中可以看出，在野生型C57BL/6小鼠肝脏组织中仅检测出鼠FcRn的表达，未检测出人FcRn，在FcRn基因人源化纯合子小鼠(V1和V2)的肝脏组织中仅检测到人FcRn的表达，未检测出鼠FcRn的表达；图16结果显示，FcRn基因人源化纯合子小鼠(V1和V2)的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏和肠道组织中均检测到人FcRn蛋白。结果表明，FcRn基因人源化小鼠体内可成功表达人FcRn蛋白；图17示出实施例1制备的FcRn基因人源化小鼠在肝脏、脾脏、肺、肾脏和肠道组织中人FcRn蛋白表达的相对水平。
实施例4不同抗体在小鼠体内药代动力学过程
采用双抗夹心ELISA方法检测不同的抗人PD-1抗体
Figure BDA0003495306590000291
(Pembrolizumab)和AB1(Pembrolizumabbiosimilar)在实施例1制得的FcRn基因人源化纯合子小鼠(H/H)和C57BL/6野生型小鼠(+/+)体内的PK行为。具体来说，分别选取8只8周龄雌性FcRn基因人源化小鼠和4只C57BL/6野生型小鼠，禁食不禁水饲养12h，之后用不同的抗人PD-1抗体
Figure BDA0003495306590000292
或AB1经尾静脉注射处理，并按照给药前4天，给药后0.25天、3天、5天、7天、9天、12天、16天、19天、22天、26天、30天的时间点对每只小鼠进行眼眶静脉窦采血60μL，离心取血清，冻存备用。具体分组及给药方案如表7所示。
表7分组与给药方案
Figure BDA0003495306590000293
采用双抗夹心ELISA方法检测各血清样本中抗人PD-1抗体
Figure BDA0003495306590000294
或AB1的浓度。采用亲和纯化山羊抗人IgG捕获抗体AffiniPure Goat Anti-Human IgG(H+L)包被96孔ELISA板，用PBS洗涤液除去多余捕获抗体后加入血清样本，之后用辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体Peroxidase AffiniPure F(ab’)2 Fragment Goat Anti-HumanIgG Fc结合显色剂进行检测，并根据检测数据绘制血药浓度-时间曲线。3个组别中各时间点小鼠血清中抗人PD-1抗体浓度随时间变化曲线如图12所示。从图中可以看出，
Figure BDA0003495306590000295
在FcRn基因人源化小鼠体内的代谢趋势与C57BL/6小鼠基本一致(G1和G2)，而不同PD-1抗体
Figure BDA0003495306590000296
或AB1在B-hFcRn小鼠体内的代谢趋势也是一致的(G1和G3)，表明抗人PD-1抗体在FcRn基因人源化小鼠的PK结果符合药代动力学特征。
采用Phoenix Winnolin 8.0建立非房室模型(Non-Compartmental Analysis，NCA)计算PK参数：半衰期(T1/2)、药峰浓度(Cmax)、0-30天的血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-30)、从给药开始到理论外推无穷远的时间的血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-obs)、表观分布容积(Vd)、清除率(Cl)。抗人PD-1抗体在G1、G2、G3三个组别小鼠体内的总体药代参数如表8所示。
表8抗人PD-1抗体总体药代参数
Figure BDA0003495306590000301
从表中可以看出，
Figure BDA0003495306590000302
在FcRn基因人源化小鼠和C57BL/6小鼠体内的半衰期分别为7.18天和10.83天，AB1在FcRn基因人源化小鼠体内的半衰期为7.43天，整体来看，抗人PD-1抗体在C57BL/6小鼠体内的半衰期要高于FcRn基因人源化小鼠；而不同抗人PD-1抗体在FcRn基因人源化小鼠体内的半衰期表现出细微的差别，清除率方面，
Figure BDA0003495306590000303
的清除率为6.92mL/day/kg，显著小于AB1的15.27mL/day/kg。由于给药方式、给药剂量、动物品系均相同，由于药物不同导致此种差异，表明FcRn基因人源化小鼠能够用于很好地评价不同抗人抗体的药代动力学过程。
采用同样的方法检测抗人CTLA4抗体
Figure BDA0003495306590000304
(Ipilimumab)或AB2(Ipilimumabbiosimilar)在FcRn基因人源化纯合子小鼠(H/H)和C57BL/6野生型小鼠(+/+)体内的PK行为。具体分组及给药方案如表9所示。
表9分组与给药方案
Figure BDA0003495306590000305
同样采用双抗夹心ELISA方法检测各血清样本中抗人CTLA4抗体
Figure BDA0003495306590000306
或AB2的浓度，并根据检测数据绘制血药浓度-时间曲线(如图13所示)。从图中可以看出，抗人CTLA4抗体
Figure BDA0003495306590000307
和AB2在FcRn基因人源化小鼠体内的代谢趋势与C57BL/6小鼠基本一致，表明抗人CTLA4抗体在FcRn基因人源化小鼠的PK结果符合药代动力学特征。
采用Phoenix Winnolin 8.0建立NCA模型计算PK总体药代参数，具体如表10所示。
表10抗人CTLA4抗体总体药代参数
Figure BDA0003495306590000311
从表中可以看出，抗人CTLA4抗体
Figure BDA0003495306590000314
在FcRn基因人源化小鼠和C57BL/6小鼠体内的半衰期分别为9.12天和9.13天，AB2在FcRn基因人源化小鼠体内的半衰期为6.96天，整体来看，抗人CTLA4抗体在C57BL/6小鼠体内的半衰期略高于FcRn基因人源化小鼠，清除率相对较低，为8.11mL/day/kg；不同抗人CTLA4抗体在FcRn基因人源化小鼠体内的半衰期和清除率也表现出一些差别，
Figure BDA0003495306590000315
在FcRn基因人源化小鼠体内的半衰期大于AB2，清除率9.75mL/day/kg显著低于AB2的18.81mL/day/kg，同样由于给药方式、给药剂量和动物品系均相同，药物的不同导致了此种差异。再次证实FcRn基因人源化小鼠能够评价出不同抗人抗体的药代动力学过程。
实施例5不同抗体亚型在人源化小鼠体内的药代动力学过程
采用与实施例4相同的方法检测抗体AB3(使用常规方法免疫小鼠得到，参见Janeway′s Immunobiology(9thEdition))不同亚型(AB3-IgG1、AB3-IgG2、AB3-IgG4)在FcRn基因人源化纯合子小鼠(H/H)和C57BL/6小鼠(+/+)体内的药代动力学过程。具体分组及给药方案如表11所示。
表11分组与给药方案
Figure BDA0003495306590000312
抗体在各组小鼠体内的总体药代参数如表12所示。
表12抗体AB3的IgG1、IgG2和IgG4亚型总体药代参数
Figure BDA0003495306590000313
Figure BDA0003495306590000321
由表中可知，整体来看，抗体AB3的IgG1、IgG2和IgG4亚型在C57BL/6小鼠体内的半衰期要高于FcRn基因人源化小鼠，而不同亚型抗体在FcRn基因人源化小鼠体内的半衰期表现出细微的差别；相应地，FcRn基因人源化小鼠的清除速率高于C57BL/6小鼠。由于给药方式、给药剂量、动物品系均相同，药物不同导致此种差异，表明FcRn基因人源化小鼠能够用于很好地评价不同亚型抗体的药代动力学过程。
实施例6YTE突变抗体Ab1和Ab2在小鼠体内的药代动力学检测
采用与实施例4相同的方法检测抗人抗体Ab1、Ab1-YTE、Ab2、Ab2-YTE(使用常规方法免疫小鼠得到，参见Janeway′s Immunobiology(9thEdition))在FcRn基因人源化小鼠体内的药代动力学过程。YTE突变是指抗体Fc恒定区第252位蛋氨酸突变为酪氨酸(M252Y)，第254位丝氨酸突变为苏氨酸(S254T)和第256位苏氨酸突变为谷氨酸(T256E)。
每组5只小鼠，按照100ug/mL的剂量尾静脉注射给药，单次给药。
4个组别中各时间点小鼠血清中抗体浓度随时间变化曲线如图18所示。从图中可以看出，抗体Ab1-YTE和Ab2-YTE在FcRn基因人源化小鼠体内的代谢趋势与Ab1、Ab2基本一致，但代谢速率低于Ab1和Ab2。表明Ab1-YTE和Ab2-YTE抗体在突变后有助于延长抗体在体内的循环时间。
抗体Ab1、Ab1-YTE、Ab2和Ab2-YTE四个组别小鼠体内的总体药代参数如表13所示。
表13抗体Ab1、Ab1-YTE、Ab2和Ab2-YTE总体药代参数
Figure BDA0003495306590000322
由表中可知，整体来看，抗人Ab1、Ab1-YTE、Ab2和Ab2-YTE抗体在FcRn基因人源化小鼠体内的半衰期表现出一定的差别，但突变抗体的半衰期均较长；突变抗体的清除速较低。结果表明，FcRn基因人源化小鼠能够很好地评价抗体及突变抗体的药代动力学过程。
实施例7AB4在不同小鼠体内的药代动力学检测
采用与实施例4相同的方法检测抗人抗体AB4(使用常规方法免疫小鼠得到，参见Janeway′s Immunobiology(9thEdition)，AB4不限于IgG1、IgG2和IgG4)在FcRn基因人源化小鼠体内的药代动力学过程。分别选取8-10周龄实施例1制备的FcRn基因人源化纯合子雌性小鼠(V1，H/H)和实施例2制备的FcRn基因人源化纯合子雌性小鼠(V2，H/H)，按照表14分组和给药。给药后15分钟、24小时、4天、7天、10天、14天、17天、21天、28天、35天的时间点对每只小鼠进行眼眶静脉窦采血80-100μL，离心取血清，冻存备用，检测。
表14分组与给药方案
组别 动物品系/数量 药物 剂量 给药方式 给药频率及次数
G1 V1，H/H/10只 AB4 3mg/kg 静脉注射 单次给药
G2 V2，H/H/10只 AB4 3mg/kg 静脉注射 单次给药
抗体AB4在G1和G2组中小鼠体内的总体药代参数如表15所示，示例性单只小鼠的抗体药物浓度-时间曲线(G1组)如图19所示。
表15抗体Ab4的总体药代参数
Figure BDA0003495306590000331
由表15及图19可知，G1组和G2组小鼠的半衰期和最高血药浓度相差不大；相对而言，G2组小鼠具有更大的表观分布容积和相对较快的清除率，相应地，G2组中AUC面积较G1组低。这表明，G1和G2组小鼠的药代参数符合药代动力学规律，说明实施例1和实施例2制备的FcRn基因人源化小鼠可以很好地评价抗体药物的药代动力学过程。
实施例8双重人源化或多重双人源化小鼠的制备
利用本方法或制得的FcRn小鼠还可以制备双人源化或多人源化小鼠模型。如，前述实施例1或2中，囊胚显微注射使用的胚胎干细胞可选择来源于含有H2-D、B2M、PD-1、PD-L1、CTLA4、B7H3、B7H4、CD47、IL23A等其它基因修饰的小鼠，或者，也可在人源化FcRn小鼠的基础上，利用分离小鼠ES胚胎干细胞和基因重组打靶技术，获得FcRn与其它基因修饰的双基因或多基因修饰的小鼠模型。也可将本方法得到的FcRn小鼠纯合子或杂合子与其它基因修饰的纯合或杂合小鼠交配，对其后代进行筛选，根据孟德尔遗传规律，可有一定机率得到人源化FcRn与其它基因修饰的双基因或多基因修饰的杂合小鼠，再将杂合子相互交配可以得到双基因或多基因修饰的纯合子，利用这些双基因或多基因修饰的小鼠可以进行靶向人FcRn和其它基因调节剂的体内药效验证等。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
序列表
<110> 百奥赛图（北京）医药科技股份有限公司
<120> FcRn基因人源化的非人动物及其构建方法和应用
<130> BHFCRN.002CN1-P0102020070564Z
<150> 2021101406510
<151> 2021-02-02
<160> 50
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 365
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 1
Met Gly Met Pro Leu Pro Trp Ala Leu Ser Leu Leu Leu Val Leu Leu
1 5 10 15
Pro Gln Thr Trp Gly Ser Glu Thr Arg Pro Pro Leu Met Tyr His Leu
20 25 30
Thr Ala Val Ser Asn Pro Ser Thr Gly Leu Pro Ser Phe Trp Ala Thr
35 40 45
Gly Trp Leu Gly Pro Gln Gln Tyr Leu Thr Tyr Asn Ser Leu Arg Gln
50 55 60
Glu Ala Asp Pro Cys Gly Ala Trp Met Trp Glu Asn Gln Val Ser Trp
65 70 75 80
Tyr Trp Glu Lys Glu Thr Thr Asp Leu Lys Ser Lys Glu Gln Leu Phe
85 90 95
Leu Glu Ala Leu Lys Thr Leu Glu Lys Ile Leu Asn Gly Thr Tyr Thr
100 105 110
Leu Gln Gly Leu Leu Gly Cys Glu Leu Ala Ser Asp Asn Ser Ser Val
115 120 125
Pro Thr Ala Val Phe Ala Leu Asn Gly Glu Glu Phe Met Lys Phe Asn
130 135 140
Pro Arg Ile Gly Asn Trp Thr Gly Glu Trp Pro Glu Thr Glu Ile Val
145 150 155 160
Ala Asn Leu Trp Met Lys Gln Pro Asp Ala Ala Arg Lys Glu Ser Glu
165 170 175
Phe Leu Leu Asn Ser Cys Pro Glu Arg Leu Leu Gly His Leu Glu Arg
180 185 190
Gly Arg Arg Asn Leu Glu Trp Lys Glu Pro Pro Ser Met Arg Leu Lys
195 200 205
Ala Arg Pro Gly Asn Ser Gly Ser Ser Val Leu Thr Cys Ala Ala Phe
210 215 220
Ser Phe Tyr Pro Pro Glu Leu Lys Phe Arg Phe Leu Arg Asn Gly Leu
225 230 235 240
Ala Ser Gly Ser Gly Asn Cys Ser Thr Gly Pro Asn Gly Asp Gly Ser
245 250 255
Phe His Ala Trp Ser Leu Leu Glu Val Lys Arg Gly Asp Glu His His
260 265 270
Tyr Gln Cys Gln Val Glu His Glu Gly Leu Ala Gln Pro Leu Thr Val
275 280 285
Asp Leu Asp Ser Ser Ala Arg Ser Ser Val Pro Val Val Gly Ile Val
290 295 300
Leu Gly Leu Leu Leu Val Val Val Ala Ile Ala Gly Gly Val Leu Leu
305 310 315 320
Trp Gly Arg Met Arg Ser Gly Leu Pro Ala Pro Trp Leu Ser Leu Ser
325 330 335
Gly Asp Asp Ser Gly Asp Leu Leu Pro Gly Gly Asn Leu Pro Pro Glu
340 345 350
Ala Glu Pro Gln Gly Ala Asn Ala Phe Pro Ala Thr Ser
355 360 365
<210> 2
<211> 365
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Gly Val Pro Arg Pro Gln Pro Trp Ala Leu Gly Leu Leu Leu Phe
1 5 10 15
Leu Leu Pro Gly Ser Leu Gly Ala Glu Ser His Leu Ser Leu Leu Tyr
20 25 30
His Leu Thr Ala Val Ser Ser Pro Ala Pro Gly Thr Pro Ala Phe Trp
35 40 45
Val Ser Gly Trp Leu Gly Pro Gln Gln Tyr Leu Ser Tyr Asn Ser Leu
50 55 60
Arg Gly Glu Ala Glu Pro Cys Gly Ala Trp Val Trp Glu Asn Gln Val
65 70 75 80
Ser Trp Tyr Trp Glu Lys Glu Thr Thr Asp Leu Arg Ile Lys Glu Lys
85 90 95
Leu Phe Leu Glu Ala Phe Lys Ala Leu Gly Gly Lys Gly Pro Tyr Thr
100 105 110
Leu Gln Gly Leu Leu Gly Cys Glu Leu Gly Pro Asp Asn Thr Ser Val
115 120 125
Pro Thr Ala Lys Phe Ala Leu Asn Gly Glu Glu Phe Met Asn Phe Asp
130 135 140
Leu Lys Gln Gly Thr Trp Gly Gly Asp Trp Pro Glu Ala Leu Ala Ile
145 150 155 160
Ser Gln Arg Trp Gln Gln Gln Asp Lys Ala Ala Asn Lys Glu Leu Thr
165 170 175
Phe Leu Leu Phe Ser Cys Pro His Arg Leu Arg Glu His Leu Glu Arg
180 185 190
Gly Arg Gly Asn Leu Glu Trp Lys Glu Pro Pro Ser Met Arg Leu Lys
195 200 205
Ala Arg Pro Ser Ser Pro Gly Phe Ser Val Leu Thr Cys Ser Ala Phe
210 215 220
Ser Phe Tyr Pro Pro Glu Leu Gln Leu Arg Phe Leu Arg Asn Gly Leu
225 230 235 240
Ala Ala Gly Thr Gly Gln Gly Asp Phe Gly Pro Asn Ser Asp Gly Ser
245 250 255
Phe His Ala Ser Ser Ser Leu Thr Val Lys Ser Gly Asp Glu His His
260 265 270
Tyr Cys Cys Ile Val Gln His Ala Gly Leu Ala Gln Pro Leu Arg Val
275 280 285
Glu Leu Glu Ser Pro Ala Lys Ser Ser Val Leu Val Val Gly Ile Val
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Ile Gly Val Leu Leu Leu Thr Ala Ala Ala Val Gly Gly Ala Leu Leu
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Trp Arg Arg Met Arg Ser Gly Leu Pro Ala Pro Trp Ile Ser Leu Arg
325 330 335
Gly Asp Asp Thr Gly Val Leu Leu Pro Thr Pro Gly Glu Ala Gln Asp
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Ala Asp Leu Lys Asp Val Asn Val Ile Pro Ala Thr Ala
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<210> 3
<211> 4478
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<211> 6610
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tagctctgta attaattaac taaagtggat caaatgagaa ggtgaaagtt cacagaggaa 240
cactcctgtc tgtcgtcttg gactgggtct ccatcccacc atccagcgtc ctggtctacg 300
aagagtccac agggaccttg tgaagaatca acaaggcggg gtccagagga gtcacgtgtc 360
ccttccactc cgggtcaccc tgtcggaatg ggggtcccgc ggcctcagcc ctgggcgctg 420
gggctcctgc tctttctcct tcctgggagc ctgggcgcag aaagccacct ctccctcctg 480
taccacctta ccgcggtgtc ctcgcctgcc ccggggactc ctgccttctg ggtgtccggc 540
tggctgggcc cgcagcagta cctgagctac aatagcctgc ggggcgaggc ggagccctgt 600
ggagcttggg tctgggaaaa ccaggtgtcc tggtattggg agaaagagac cacagatctg 660
aggatcaagg agaagctctt tctggaagct ttcaaagctt tggggggaaa aggtccctac 720
actctgcagg gcctgctggg ctgtgaactg ggccctgaca acacctcggt gcccaccgcc 780
aagttcgccc tgaacggcga ggagttcatg aatttcgacc tcaagcaggg cacctggggt 840
ggggactggc ccgaggccct ggctatcagt cagcggtggc agcagcagga caaggcggcc 900
aacaaggagc tcaccttcct gctattctcc tgcccgcacc gcctgcggga gcacctggag 960
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agcagccctg gcttttccgt gcttacctgc agcgccttct ccttctaccc tccggagctg 1080
caacttcggt tcctgcggaa tgggctggcc gctggcaccg gccagggtga cttcggcccc 1140
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cactactgct gcattgtgca gcacgcgggg ctggcgcagc ccctcagggt ggagctggaa 1260
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gatgctgatt tgaaggatgt aaatgtgatt ccagccaccg cctgatgcag actcgggccc 1500
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ttcttaatgt acatggttgt tttccatctc cacataaatt tggccccaaa tctgtgtgtg 1680
catcgttatt ctcaagtttc aagcagctgg aataaattga acgcgtctgg gaaagatc 1738
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
tgtcaagtac gaatgtgtat gc 22
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
atgacgattc ccaccacgag 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
aggcaggcag atttctgaca 20
<210> 15
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
tccagaagcc tgagtttagc t 21
<210> 16
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
cggttcttat attcagtgag gaaac 25
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
ccaatcctgc acacagctac 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
ccagcgtcct ggtctacgaa 20
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
ggtggcctct tacctgagcc 20
<210> 20
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
ggctattgta gctcaggtac tgc 23
<210> 21
<211> 3790
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
caagccaggg catccccata gtcccagcac tcaggaggga gaaggttaag gttagtgtct 60
tctgcctctc tctttttcta ccccctcccc tttccccctc tcccctccct ccatctttgt 120
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ggacaaaggt tccggactga tttgtaagtt tggggtttcc atatgggaag aaaaaggtta 540
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ctccgaagtg ctgggattaa aggcgtgtgc caccatgccc agcccctgct aacttcattg 780
tggcttgact ctcagctgtc cgcagacttt agactctggt gtgacaggct ttccatgaac 840
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tttaaacttt ctatgtaatt gaggatgacc ttgaactctg ttgtcctgcg tgctagacaa 1020
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ttgtgaagaa tcaacaaggc ggggtccaga ggagtcacgt gtcccttcca ctccgggtca 3780
ccctgtcgga 3790
<210> 22
<211> 4540
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
gctgggactt gaactctggt cctctggaag aacagtcagt gctcttaatt gcagagccat 60
ctctccagcc gcgctccccc cccacccccc cctttttttt ttaaagacaa gggtctctct 120
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caactatgct ctgctcttta ttattattat tattattatt attattatta ttattattat 3360
catcatcatc atctaattaa aaaagattta tttatatgag tgtgggtatt ttttttcttt 3420
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<210> 23
<211> 12719
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
atgggggtcc cgcggcctca gccctgggcg ctggggctcc tgctctttct ccttcctggg 60
agcctgggcg caggtgaggg ccgctccggg ccagggccct gctgcaggcg ggcggcggga 120
ggcggcccca ggcaggcagg ggcgaagcca gcgggacccg agttccccgc gagcccctgg 180
cgctgccttc tccgctcaat taactttctc aacgtctcct gctgggcctg aggctgggaa 240
ccacctgtcg cctcttgtgt ctgtttccct ctctctctct gggtctctgt ccccctctct 300
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gccccgctta cctgtgtttg ggcgccccag gtccctacac tctgcagggc ctgctgggct 840
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cctggctaat ttttgtttgt tttttttttt ttagtaaaga cagggtttta ccatgttggc 3060
cgggatggtc tcgatctttt gacctcgtga tctgcctgcc tcggcctccc aaagtgctgg 3120
aattacagac gtgagccact gctcctggcc tttgttgttg ttgttgttgt ttttgagaca 3180
gactcttgca ctgtcgccca gactgcagta ctgtggcgca atcttggctc actgcaacct 3240
ccgcctccca ggttcaagca attctcctac ctcagcctcc cgagtagctg ggattacagg 3300
cacacaccac catgcctggc taatttttgt atttttagta gagacggggg cttcaccatg 3360
ctggccaggc tggtctcgaa ctcctgatct cgtgatctgc ctaccttggc ctcccaaagt 3420
gctgggatta caggcatgag ccaccactcc tggcttaagg agggaaagtt tcaaaccaca 3480
cttaagtaga aacaatagta taaaacggac cagacacggt ggctcacgcc tataatccca 3540
gaactttggg aggccgaggc aggtggattg cttgatccca ggagttcaag accagcctgg 3600
gcaacatagt aagaccgcat ctctactaaa aactcaaaaa attagcctgg catggtggta 3660
tgtgcctcta gtcccagcca ctggggaggc tatggcagga ggatcgcttg agctcaggag 3720
tttgaggctg tagtgaactg attgcaactc tgcactccag cccagatgac agagccagac 3780
cctgtctcaa aaagaaaaaa aatatggtgg ccaggtgcag tggctcacgc ctgtaattcc 3840
aacactttgg gaggccgagg tgggcagatc acttaaggtc aggagtttga gataagcctg 3900
gccaacagag tgaaacccca tctctactaa acatacaaaa attagccggg tgcggtggtg 3960
ggtgcttgta attccagcta ttcgggaggc tgaggcagga gaatcacttg atcccgggaa 4020
gcagaggttg cagtgagccg agatcaagcc actgcactcc agcctgggca acaaagcaag 4080
actctgtctc aaagaaagaa ggaaagaaag agagaggaga gggagagaga aagaggaagg 4140
aaaggaagga aggaaggaag gaagcgagca tcccatcact gagacttaat aattatcaac 4200
ccatggtttt ttgaatttca cgcacatcct cactcacttc cccaccccac ttcacatcaa 4260
gctttggtaa atctcagaca tcacagtgtt tttttctttg tttgtttgta ttttgagatg 4320
gagtctcact ctgtcatgcg ggagtgtagt ggctcagtct cggctcactg caagcttcgc 4380
ctcccaggtt caaacaattc tcctgcctca gcctcctgag tagctgggat tacaggtgcc 4440
cgccacctcg cccagccaat ttttgtattt ttagtagaga tgaggtttca ccatattggc 4500
caggctggtc ttgaactcct gacctcgtga tccacccacc ttggcctccc aaagtgctgg 4560
gattacaggc ataagccacc gcgcctggcc aatttttgta tttttagtag agacgggatt 4620
tcactatgtt ggccaggctg gtctcgaacc ctccacctca agtgatctgc cctcctcagc 4680
ctcccaaagt gcgggagtca ccgtgcccag ccagactgtt ttgttgataa gtcctttagt 4740
atgtaactct actaggtaag ggcatttaaa aaaaattaat accaaaacca tcatcacacc 4800
tacaaccaat taactcttta atggcatcag atgtccagtt tttgttccca tattcctgac 4860
tgtaaatgtt ttttaaagtt tgaatcagca tccagcaagg tccacacatt ttgttgtctt 4920
ttcagtgtct ttttctgatt gttgaatttt tctttctttc tttttttttt tttttttcct 4980
ttttgagaca gggtcttgct ctgtcaccag actggagtcc agtggtgcaa tcatagctca 5040
ctgcagtctg aacttcctgg gctcaagtaa ttctcccact tcagcctccc cagtaggtag 5100
gaccacaggt gcacgccatc aggcctagct atttttgttt gtttgttttt tgagacaaag 5160
tcttactctg tcgcccagac tggagtgcag aggcacgaac tcggctcact gcaacttctg 5220
cctcccgggt tcaagcaatt ctcctgcctc agcgtcccaa gtagctggga ttacaggcgc 5280
aagccaccac gccctgctaa ttttttgtat ctttagtaga gacagagttt caccatgttg 5340
gccaggctgg tttcgaactc ccgaccccag gtgatccacc cacctcggcc tcccaaagtg 5400
ctgggattac aggcgtgagc caccgcgctc ggccgtattt ttgttttttt cttttttttg 5460
gagacggagt ctcgctctgt cacccaggct ggggtgcagt ggcgcgatct cagctcattg 5520
caacctccac ctcccaagtt gcaccaattc tcctgcctca gcctcccgag tggctgggac 5580
tacaggcgcc caccaccacg cccggctaat tttttgtatt tttagtagag acagagtttc 5640
actgtgttag gcaggatggt ctcgatctcc tgacctcctg atccgcctgc ctcagcctcc 5700
caaagtactg ggattacagg cttgagccac cgcgcccggc cggattccaa ttttttacca 5760
gataggtgtt ttgcaaatat ttcttccact ctctaggttg tcttttcatt gttttaactg 5820
tgcctttcac aaagcaaaag tttttaactt tgatgaaatc cagtttattc tttttttttt 5880
ttctatcgtg gattatgctt ttggtgttta atctcagaag taatcaccaa acccaaagtc 5940
agctagatct tctcctgtgt attttaagag ttttaaagtt ttgcatttta cagttaggtc 6000
tgtgattcat tttcaggtaa tttgagttac ttgtgatctt gagtgtcttt tgatttacag 6060
gtttcccatt ttctttttgt tttttttccc cctgtaattg tggtttgaag aaagtcagtt 6120
tatgtcctat tgagtttctc ctagactgga ttttgccctt tgcatcctgt gatgttgctg 6180
gaaatagtcc tccttctctt ctttaaagga gcagctccat ctagaagctt ggtcagattc 6240
tggttcaatt tttatggcaa gaaaactttc tgggtagttg gtgcgtatgt ctgtgtgcat 6300
aggctgcaaa catctgcttg cttctgtgct gttctgtgga ccactggatt cgggtgttgt 6360
tatgaagttc tttgtcaggt tttctcctga tggttttagc ggatagcaat ggccattgcc 6420
ttaatctttt tttttttttt ttttttttga gatggagtct tgctctgtcg cccaggctgg 6480
agtgcagtgt tgcgatcttg gctcactgca acctccgcct cccaggttca agcgattctg 6540
ctgcctcagc ctcctgagta gctgggatta caggtgcgtg ccaccatgcc tggctaattt 6600
ttgtattttt tttggagaga tggggtttca ctatgttggg caggctggtc ttgaactcct 6660
gaccttgtga tccacttgcc tcggcctccc aaagtgctgg gattacaggc gtgagccacc 6720
gcgcccgggc tttttttttt ttttttttga gagggcgtct ccctctgtca ccaggctgga 6780
gtgcagtagc acgatctcgg ctcactgcaa cctccacctc ccaggttcaa gtgatcctcc 6840
tgcctcagcc tccttagtag ctggaattac aggcacacac caccacaccc agctaatttt 6900
tgtattttta gtacagacag ggtttcacca tgttggccag gatggatttt tttttttttt 6960
ttgagatgga gtttcactct tattgcgcag gctggagtac aatggcatga tctcagctca 7020
ctgcaacctc cgcctcctgg attcaagtga tcctcctgcc tcagcctcca gggtagctgg 7080
gactacaggc atgcgctgcc atgcctagct aatttttata tgtttagtag agatggagtt 7140
tcaccatgtt ggcgaagctg gtcttgaact cctgacatca ggtgatctgc ctgcctcagc 7200
ctcccaaagt gctggggtta cagacgtgag ccaccatgcc tgacctggtt tggtattttg 7260
ttaaacagaa ccaaaggcca gacagatttt ctgtgcttgg atttagtcta tattggaagt 7320
accttgaggc tgaaggcacg tggctgtgag cacgacacag gaagatacag atttgctgaa 7380
aagaatagtg aacataaagc agaagccaga actgctgatg gccgtcagcc cggtccctcc 7440
attccacctg acggtgcagc aaattctgcc gacttgccag agaggcagct ccaggaggga 7500
gaagctgctg tgctttcctg aagcagcaaa tgtgttttct gctgagcaac caaaaccaag 7560
atcccagcca agacccacga ttgcccagat ccaccctccc tgaaaggaac ttgggcagta 7620
atgcccagtc ctaggcagtt gctgaaatct ttgcctttta ttttcttttt tgagctggga 7680
tcttgctctg tcgcccagac tggagtggag tgcagtggca cagtcatagc gccatgtagc 7740
cttggactcc caagctcaag agatcctccc gcctcagcct tacaagtagc tgggactata 7800
ggtacacgtc accatgcctg gctaacattt tctatttttt gtagagatgg ggtatttgtt 7860
gccaaggctg gtctagaagt cctgggcttg gccgggcaca gtgactcacg cctgtaatcc 7920
cagcactttg ggaggctgag gcaggcggat cacgaggtca ggagttcaag accagcctgg 7980
ccaatatggt gaaaccctgt ttctactaaa aatagaaaaa ttagctgggc gtggtggtgt 8040
gcgcctgtaa tcccagctac tctggaggct gaggcaggag aatcgcttga ccccaggagg 8100
cggaggttgc agtgacccaa gattgtgcca ctgtactcca gcctgggcga cagagactcc 8160
gtctcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaggaaaa gaaagcctgg gcgtaaggat ccttctgcct 8220
tgacctccca agtgctggaa ttgcaggcat gagccattgc acccggcttt tttttttttt 8280
tttctttgag acaggcactt gcactgttgc ctagactgga gtgcagtagc gggattagag 8340
ttcactgcag cctcaacctc ccaagctcaa gcgatcctcc caccttaccc ttcctgaatg 8400
gatggggcca caggtgtgta ccatcacacg tagttaattt ttaaactttt tcagagacgg 8460
ggtttctcca tgttgcccag gctggtcttg aactcccggc ttccagtgat cctcctgcct 8520
cagcttccca aagtgctggg attacaggca tgaaccactg cacccaacct tttttcattc 8580
ccttaacgaa acctttggat gaacaaaaat tcttaatttc agtgaagttc agtttatcga 8640
cttcaattta tacattttat aaagtttatg aatttttttt ttttttttta gacggagtct 8700
tgctctgtcg cccaggctgg agtgcagtgg ctatacccag gtgtgatcat aactcactcc 8760
agcctcaaac tcctgggctc aaggattcct cctgcctcag tctccagagt aggtgggacc 8820
acaggcacat ccaccacact ggctaatttt ttttatttgt agtggagact acgtcttact 8880
gtttgcccag gctggtctcc aactcctggg ttcaagtgat ccacctcatt ctcccaaagc 8940
gctgggattg taggagtgag ccactgcacc cagcctgtct gctaatatta tgtttaagag 9000
ttctgaatct ttttttaaat tttttaaaat ttttaatttt ttattttttt tgagacagtc 9060
ttgctctgtc gcccaggctg gagtgcaatg gtgcaatctt ggctcaatgc aacctccgcc 9120
ttctgggttc aagcgattct cctgccttag cctcctgagt agctgggatt acaggtacac 9180
gccaccatgc ctggctaatt tttttgtatt tttagtagag atgggatttc accatgttgg 9240
tcaggctggt ctcgacctcc tgacctcgtg atcctcctgc ctccaccccc caaagcgcca 9300
ggattctagg tgtgagccac cacacctgtc ctgaatctat atttatgaga gacattggcc 9360
ttaagctctc tttttttttt tttttttttt tttttgagat ggagtctcgc tctgtcaccc 9420
aggctggagt gcagtggcgc aatctcggct cactgcaagc tccgcctccc gggttcacgc 9480
cattctcctg cctcagcctc ccaagtggct gggactacag gcgccggcca ccacgcccgg 9540
ctaatttttt gtatttttag tagagatggg gtttcaccgt gttagccggg atagtctcaa 9600
tctcctgacc tcgtgatccg cctgcctcgg cctcccaaag tgctgggatt acaggcgtga 9660
gccaccgcgc ctggccaagt tctctttctt ataatgtgct ttgttgtcaa gatgatgctg 9720
acctcataaa atatgctggg agagtgtttc ctctgtttta tggcctgaag agttagtgta 9780
ggaatagaat catttctaca ttggaagaat tcactaattg atgtcttctg gacctggaat 9840
tttagttttt ggaaagtttt aaactatgga ttaaaaattt taaataggcc gggtgtggtg 9900
catcatgcct gtaatcccag cactttggga ggctgaggca ggtagatcac aatgtcagga 9960
atttgagacc agcctggcca atatggtgaa acaccgtctc tactaaaaat aaaaaaatta 10020
cccggcatgg tggtgcatgc acctgtagtc ccagccactc gggaggctgt ggaagaagaa 10080
actcttgaac ccaggaagtg ggggttgcag tgagtcgaga tcgtgccact gcactccagc 10140
ctgggtgaca gagcgagact cttatctcaa aaacaaaagg ctaggcgtgg tggctcacac 10200
ctgtaatccc aacactttgg gaggcccagg cggatggatc atgaggtcag gagattgaga 10260
ccatcctggc taagacggtg aaaccccgtc tctactaaaa atacaaaaaa ttagccaagt 10320
gtggtggtgg gcacctatag tcccagctac tcaggaggct gaggcaggag aatggcgtga 10380
acccaggagg cggagcttgc agtgagccga gatcgcgcca ctgcactcca gcctgggaga 10440
cagagcaaga ttccatctca aaaaaaaaaa aaaaatttaa atagttatag gactacagac 10500
gttttaaatt tcctcttgtg tcagtttaga aggttgtatt tatcaggaat gtgttcagtt 10560
catctaaatt ttcaaatgtg ttgctgtgga atttttcata attatcctct atcttttttt 10620
ttttttcttt ttttctgaga cggggtctca ctctgtcgcc caggctggag tgcagtggca 10680
cgatcctggc tcactgcaac atctgcctcc caggttcaag caattctcct gcctcagcct 10740
cctgagtagc tgggactaca ggtgcccggc taatttttgt atttttagta gagatggggt 10800
ttcaccatgt tggccagtgt ggtctcgaac tcctgacctc aggtgatcca cccactttgg 10860
cctcccaaag tgttgcgatt acaggcgtga gccaacatgc ccagcccaag gaggtgacat 10920
cttgagggga caccttcggg gtggacaggt tgagtctctg tcacctagga agtgcctccc 10980
cttttaccac tgtattatct gcggttagca cagtgcaaac atggaggcct ctttctgtcc 11040
ctatccagcc ctggctctgg gagtggtggg ctcgcgactt aggcctgtct gcctgatttc 11100
ctgcagagcc cccctccatg cgcctgaagg cccgacccag cagccctggc ttttccgtgc 11160
ttacctgcag cgccttctcc ttctaccctc cggagctgca acttcggttc ctgcggaatg 11220
ggctggccgc tggcaccggc cagggtgact tcggccccaa cagtgacgga tccttccacg 11280
cctcgtcgtc actaacagtc aaaagtggcg atgagcacca ctactgctgc attgtgcagc 11340
acgcggggct ggcgcagccc ctcagggtgg agctgggtga ggtcccgcca ggtggtgatg 11400
ctcctggttt cccgttgcct tgtctcactg ctgcgccggt ccttcctgag tctgaccttc 11460
ctccccactg ctgccacctc cttgaatctg actgccttga acctcacgcc tgtcagtgcc 11520
cccaaaacct gatggcttgt ccttcccaag gccaactgcc ttccgtctcc tgctgcttct 11580
ggcctcactg agtctgaaga gctgttaact accatggcca gtcctccctg agtctgacca 11640
tcttccatcc tgctgctgct gctgctgctg ctgcgggtct tcctggaatc tgaccattcg 11700
ttgtctgcta tgcccgtcct caccaagact gactgcctgc tgctttgcta ctgcccgggc 11760
ccatgagact gacttcccac tgctctgcct gcctctcccc actgcactgg cacagccccg 11820
ccttgccgct gctgatccat tgccggtgtg accgcggccg ctcgtgctgt agctggttct 11880
tacgtccaac ctgggggcag tctgcccaga tcgcctgcct ggcctcgcct ctgcccatca 11940
gacacttggt gctggaatct ccgaggctgg gagggactgg gagcgcccca gttctgtgtc 12000
ctgactgggt ggggtggagg ggctgctcca catctcacag cgttctctgg ctgcagaatc 12060
tccagccaag tcctccgtgc tcgtggtggg aatcgtcatc ggtgtcttgc tactcacggc 12120
agcggctgta ggaggagctc tgttgtggag aaggatgagg agtgggctgc caggtggggg 12180
gcagcgggag gaagagcctc tgagagaggg acagagaccc caagagaggg gcacacagac 12240
ctgggaggac agagacccag agagggggga cagagatcag agagaggtgg agacagaaac 12300
ccagagatgg gagaacagag gtgcagagag agggggacgg agacagagac ccagagacgg 12360
gggaacagag acccagaggg gacagagaga ggtgcggaca gagggagggg gagacagacc 12420
cagaggaggg aggcaaagat gtagaaagag gggggacgga aaattgggag aaggggagac 12480
aaaggcccag aaggaagggg atagagactg aggaagagtg tgtgagacac acacacaaat 12540
gggggacgcc agtcagaccc agagcgcctc agagattctg atgacctctc cctctctctc 12600
tctcctcagc cccttggatc tcccttcgtg gagacgacac cggggtcctc ctgcccaccc 12660
caggggaggc ccaggatgct gatttgaagg atgtaaatgt gattccagcc accgcctga 12719
<210> 24
<211> 80
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
agtcacgtgt cccttccact ccgggtcacc ctgtcggaat gggggtcccg cggcctcagc 60
cctgggcgct ggggctcctg 80
<210> 25
<211> 81
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
gctgatttga aggatgtaaa tgtgattcca gccaccgcct gatgcagact cgggccccct 60
gcccactgca gcctttcggg c 81
<210> 26
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
attggattcc attacagatg gttagccacc atgtggttgt cgacggtatc gataagcttg 60
atatcgaatt ccgaagttcc tattctctag aaagtatagg aactt 105
<210> 27
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
aagttcctat tctctagaaa gtataggaac ttcatcagtc aggtacataa tggtggatcc 60
gctgggactt gaactctggt cctctggaag aacagt 96
<210> 28
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
cagatagagc aagccgtgga gag 23
<210> 29
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
ctcccaggaa ggagaaagag cagg 24
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
aactgttcgc caggctcaag 20
<210> 31
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
cacctctcaa gtgctgagac tgag 24
<210> 32
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
aacctggagc tcactggtca gcaaa 25
<210> 33
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
cacgggcaga ctctcagttc catc 24
<210> 34
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
atagcccaga gctcaaggat aggca 25
<210> 35
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
cccagtctgc tttctgtcct gtcac 25
<210> 36
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
ggatcggcca ttgaacaaga t 21
<210> 37
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
cagaagaact cgtcaagaag gc 22
<210> 38
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
tgagaaggtg aaagttcaca gagga 25
<210> 39
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
cccacagtga gatttccatg aaggc 25
<210> 40
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
tcgataagct tgatatcgaa ttccgaag 28
<210> 41
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
tccgtttcag aaaagaggag gtcgg 25
<210> 42
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
gacaagcgtt agtaggcaca tatac 25
<210> 43
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
gctccaattt cccacaacat tagt 24
<210> 44
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
atctacgggg cttccctctt 20
<210> 45
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
gcaacaggtc accagagtca 20
<210> 46
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
ctcctgtacc accttaccgc 20
<210> 47
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
acaccgatga cgattcccac 20
<210> 48
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
tcaccatctt ccaggagcga ga 22
<210> 49
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
gaaggccatg ccagtgagct t 21
<210> 50
<211> 920
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
ctagagctcg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct gttgtttgcc 60
cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt tcctaataaa 120
atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg ggtggggtgg 180
ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg gatgcggtgg 240
gctctatggc ttctgaggcg gaaagaacca gctggggctc gactagagct tgcggaaccc 300
ttcactagtc tagagctcgc tgatcagcct cgactgtgcc ttctagttgc cagccatctg 360
ttgtttgccc ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt 420
cctaataaaa tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg 480
gtggggtggg gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg 540
atgcggtggg ctctatggct tctgaggcgg aaagaaccag ctggggctcg actagagctt 600
gcggaaccct tctgcagcta gagctcgctg atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca 660
gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac 720
tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat 780
tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca 840
tgctggggat gcggtgggct ctatggcttc tgaggcggaa agaaccagct ggggctcgac 900
tagagcttgc ggaacccttc 920

Claims (14)

1.一种人源化FcRn基因，其特征在于，所述的人源化FcRn基因包含人FcRn核苷酸序列的部分。
2.根据权利要求1所述的人源化FcRn基因，其特征在于，所述的人源化FcRn基因包含编码人FcRn蛋白的全部或部分核苷酸序列；优选的，包含编码与SEQ ID NO：2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的核苷酸序列或者包含编码SEQ ID NO：2的核苷酸序列；或者，所述的人源化FcRn基因包含人FcRn核苷酸序列的1号外显子至6号外显子的全部或部分，优选的，包含与SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23所示核苷酸序列的同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的核苷酸序列或者包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23所示核苷酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的人源化FcRn基因，其特征在于，所述的人源化FcRn基因的核苷酸序列包含下列组中的一种：
(a)转录的mRNA为SEQ ID NO：11所示核苷酸序列的全部或部分；
(b)转录的mRNA与SEQ ID NO：11所示核苷酸序列的同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的核苷酸序列；
(c)转录的mRNA与SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸的核苷酸序列；或，
(d)转录的mRNA具有SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列。
4.一种靶向载体，其特征在于，所述的靶向载体包含人FcRn核苷酸序列的部分；
优选的，所述的靶向载体包含人FcRn核苷酸序列的1号至6号外显子的全部或部分；进一步优选的，所述的靶向载体包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23所示核苷酸序列；或者，
优选的，所述的靶向载体包含编码人FcRn蛋白的全部或部分核苷酸序列；进一步优选的，所述的靶向载体包含编码SEQ ID NO：2所示氨基酸的核苷酸序列。
5.根据权利要求4所述的靶向载体，其特征在于，所述的靶向载体还包含5’臂和/或3’臂；
所述的5’臂与NCBI登录号为NC_000073.6至少具有90％同源性的核苷酸；优选的，所述5’臂序列与SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：21至少具有90％同源性，或者如SEQ ID NO：3或SEQID NO：21所示；
所述的3’臂与NCBI登录号为NC_000073.6至少具有90％同源性的核苷酸；优选的，所述的3’臂序列与SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：22至少具有90％同源性，或者如SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：22所示。
6.一种FcRn基因人源化的非人动物的构建方法，其特征在于，所述的非人动物体内表达人FcRn蛋白，或者，所述的非人动物的基因组中包含人或人源化FcRn基因；优选的，所述的人源化FcRn基因为权利要求1-3任一所述的人源化FcRn基因。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括将包含下列任一核苷酸序列导入非人动物FcRn基因座：
A)人FcRn核苷酸序列的部分，优选包含人FcRn核苷酸序列的1号至6号外显子的全部或部分；进一步优选包含与SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23所示核苷酸序列的同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的核苷酸序列或者包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23所示核苷酸序列；或，
B)编码人FcRn蛋白的全部或部分的核苷酸序列，优选包含编码与SEQ ID NO：2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的核苷酸序列或者包含编码与SEQID NO：2所示氨基酸序列一致的核苷酸序列；
优选的，所述的导入为插入或替换，进一步优选的，所述的导入非人动物FcRn基因座上为替换非人动物FcRn基因的2号至4号外显子的全部或部分，或，2号至7号外显子的全部或部分。
8.根据权利要求6-7任一所述的构建方法，其特征在于，所述人或人源化FcRn基因在非人动物体内可操作地连接至内源调控元件。
9.根据权利要求6-8任一所述的构建方法，其特征在于，使用权利要求4-5任一所述的靶向载体进行非人动物的构建。
10.根据权利要求6-9任一所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法还包括将FcRn基因人源化的非人动物与其他基因修饰的非人动物交配、体外受精或直接进行基因编辑，并进行筛选，得到多基因修饰的非人动物；
优选的，所述的其他基因修饰的非人动物包括基因H2-D、B2M、PD-1、PD-L1、CTLA4、B7H3、B7H4、CD47、IL23A修饰的非人动物。
11.根据权利要求6-10任一所述的构建方法，其特征在于，所述的非人动物为小鼠或大鼠。
12.一种评估药物药代动力学的方法，其特征在于，所述的方法包括：向权利要求6-11任一所述构建方法获得的非人动物施加药物，测量药代动力学参数。
13.来源于权利要求1-3任一所述的人源化FcRn基因、权利要求6-11任一所述的构建方法获得的非人动物的应用，其特征在于，所述的应用包括：
A)涉及人类细胞的免疫过程的产品开发中的应用；
B)作为药理学、免疫学、微生物学或医学研究的模型系统中的应用；
C)涉及生产和利用动物实验疾病模型用于病原学研究和/或用于开发诊断策略和/或用于开发治疗策略中的应用；
D)筛选、验证、评价或研究FcRn通路功能；或，
E)筛选和评估人用药及药效研究方面的应用。
14.一种确定靶向FcRn的治疗剂治疗疾病的有效性的方法，其特征在于，所述的方法包括向个体施加靶向FcRn的治疗剂，然后确定靶向FcRn的治疗剂对个体疾病的影响；其中，所述的个体选自权利要求6-11任一所述的构建方法获得的非人动物；
所述的治疗剂选自CAR-T、药物；优选的，所述的药物为抗体。
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