CN114395594A - 一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用 - Google Patents
一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114395594A CN114395594A CN202210113401.2A CN202210113401A CN114395594A CN 114395594 A CN114395594 A CN 114395594A CN 202210113401 A CN202210113401 A CN 202210113401A CN 114395594 A CN114395594 A CN 114395594A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- oyster
- fermentation
- aspergillus niger
- filtering
- small molecule
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 title claims abstract description 94
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 title claims abstract description 94
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 48
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 50
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 50
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims abstract description 31
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims abstract description 29
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 28
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 26
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 10
- 235000003239 Guizotia abyssinica Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 12
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 8
- 230000001877 deodorizing effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000019643 salty taste Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims 1
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004332 deodorization Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 238000007696 Kjeldahl method Methods 0.000 description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 3
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000020786 mineral supplement Nutrition 0.000 description 1
- 229940029985 mineral supplement Drugs 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 235000005974 protein supplement Nutrition 0.000 description 1
- 229940116540 protein supplement Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 235000019195 vitamin supplement Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
- A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
- A61Q17/005—Antimicrobial preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Abstract
本发明公开了一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用。本发明公开的一种牡蛎小分子肽的制备方法包括以下步骤：S1、取牡蛎肉并清洗干净；S2、将牡蛎肉制成牡蛎肉匀浆液；S3、调节牡蛎肉匀浆液中的蛋白质浓度至14wt％～16wt％，然后调节其pH值至6.5～7.5，加入黑曲霉种子液，搅拌均匀制成发酵液，将发酵液转移至发酵容器中进行发酵，发酵结束得到发酵产物；S4、将发酵产物离心，取上清液，将上清液加热至70℃～85℃并保温10～20min以灭酶活性；之后冷却至40℃以下，过滤取滤液，即得到黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液；S5、将黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液脱色去腥；S6、将脱色去腥后的黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液过滤得到牡蛎小分子肽溶液，冷冻干燥，得到的冻干粉即为所述牡蛎小分子肽。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用。
背景技术
牡蛎是我国首批列为药食同源的食品之一，素有“海底牛奶”之美称，其丰富的蛋白质库为制备小分子活性肽提供了可能。目前主要利用蛋白酶对牡蛎蛋白质进行水解，使其释放出小分子肽，再进行分离纯化及活性研究。现常用的酶解方法有单酶酶解法、复合酶解法、两步酶解法。但商品蛋白酶价格较昂贵，生产成本较高，难以实现规模化生产；同时，商品蛋白酶种类较少，无法通过酶解获得更多新结构的小分子肽。
发明内容
因此，本发明实施例提供了一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用，以解决上述背景技术中存在的问题。
为了实现上述目的，本发明实施例提供了以下技术方案：
第一方面，本发明实施例提供了一种牡蛎小分子肽的制备方法，其包括以下步骤：
S1、取新鲜牡蛎，取肉，用35℃以下的水多次清洗牡蛎肉直至清洗后的水没有咸味；
S2、将S1中清洗后的牡蛎肉制成牡蛎肉匀浆液，测定牡蛎肉匀浆液中的蛋白质浓度；
S3、向S2中得到的牡蛎肉匀浆液中加入水直至牡蛎肉匀浆液中蛋白质浓度为14wt％～16wt％，然后调节其pH值至6.5～7.5，加入黑曲霉种子液，搅拌均匀制成发酵液，将发酵液转移至发酵容器中进行发酵，发酵开始时，发酵液占发酵容器总容积的15％～20％；发酵结束得到发酵产物；
S4、将S3中得到的发酵产物离心，取上清液，将上清液加热至70℃～85℃并保温10～20min以灭酶活性；之后冷却至40℃以下，过滤取滤液，即得到黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液；
S5、将S4中得到的黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液脱色去腥；
S6、将S5中脱色去腥后的黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液过滤得到牡蛎小分子肽溶液，冷冻干燥，得到的冻干粉即为牡蛎小分子肽。
优选地，S2中，使用低温高速匀浆机将S1中清洗后的牡蛎肉制成牡蛎肉匀浆液，匀浆转速为8000～10000rpm，温度为0～10℃。
优选地，S3中，黑曲霉种子液的菌体浓度107CFU·mL-1以上，接种量为S3中加水后的牡蛎肉匀浆液体积的5％。
优选地，S3中，发酵温度为30℃恒温，发酵时间为45～50h，120～140rpm的转速转动发酵罐发酵。
优选地，S4中，离心发酵产物时的离心转速为8000rpm，离心时间为15～20min。
优选地，S4中，过滤的操作具体是：用0.25μm微孔滤膜过滤。
优选地，S5的操作具体是：向黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液中加入其体积10％～15％的活性炭，搅拌均匀后静置3～4h，然后离心去除活性炭。
优选地，S6中过滤的操作具体是：将S5中脱色去腥后的黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液用截留分子量3000的超滤膜过滤后，得到的滤液再用截留分子量1000的超滤膜过滤。
第二方面，本发明实施例提供了一种牡蛎小分子肽，其是由上述制备方法得到，且其平均分子量为500～1500。
第三方面，本发明实施例提供了上述牡蛎小分子肽在制备药品、功能食品、保健品、化妆品方面的应用。
与现有技术相比，本发明实施例至少具有以下有益效果：
(1)本发明实施例提供的制备方法与酶解法等现有技术相比，用食用菌-黑曲霉发酵牡蛎肉匀浆，黑曲霉产蛋白酶丰富，可通过水解牡蛎蛋白质得到种类更多、结构不同、活性各异的小分子肽，具有更好的技术效果。
(2)本发明实施例提供的制备方法用黑曲霉发酵牡蛎肉匀浆，黑曲霉所产生的丰富的酶，可同时对牡蛎中丰富的多糖进行水解，可同时得到功能寡糖。与酶解法等现有技术相比，具有更好的技术效果。
(3)本发明实施例提供的制备方法与现有的酶解法相比，黑曲霉发酵可实现工业化大规模，发酵成本低，是获得海洋生物来源活性小分子肽的发展新趋势。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明请进行进一步详细说明。应当理解，此处描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
在本发明的描述中，若存在术语“包括”、“具有”以及它们的任何变形，其意图皆在于覆盖不排他的包含，例如，包括了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于已明确列出的那些步骤或单元，而是还可包含虽然并未明确列出的但对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元，或者基于本发明构思进一步的优化方案所增加的步骤或单元。
实施例1
本实施例提供了一种牡蛎小分子肽，其制备与检测方法包括以下步骤：
S1、原料预处理：取新鲜牡蛎，取肉，以温水(不超过35℃)多次清洗直至清洗液无咸味为止。低温高速匀浆机制备牡蛎肉匀浆液。采用凯氏定氮法测定所述牡蛎浆液中总蛋白含量，计算蛋白质浓度(wt％)；
S2、发酵培养：向步骤S1制得的牡蛎匀浆液中加入2倍质量的水，使匀浆液中蛋白质浓度为15％左右；调节pH值为6.5。加入黑曲霉种子液(菌体浓度107CFU·mL-1以上)，接种量5％，发酵罐装液量15％。30℃、转速120rpm发酵培养45h。
S3、发酵结束后，将步骤S2所得发酵液以8000rpm离心15min，取上清液。上清液加热至70℃保持10min以灭酶活性。冷却至40℃以下，用0.25μm微孔滤膜过滤，取滤液，即得到黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液；
S4、脱色去腥处理。步骤S3所得滤液中加入料液含量10％的活性炭，搅拌均匀后，静置3h以脱色去腥。离心，去除活性炭；
S5、纯化处理制备牡蛎小分子肽溶液。将步骤S4所得经脱色去腥处理的牡蛎蛋白水解液用截留分子量3000的超滤膜过滤后，滤液再用截留分子量1000的超滤膜过滤，2次过滤所得滤液即为牡蛎小分子肽溶液，冷冻干燥，即得到成品牡蛎小分子肽冻干粉。冻干粉以pH 7.2、0.1mol·L-1的PBS溶解，用Sephadex LH-20凝胶色谱柱分离。
S6、小分子肽检测。接收的洗脱液用RP-HPLC与EMS联用检测小分子肽并测定其分子量。测得分子量为500～1500。
实施例2
本实施例提供了一种牡蛎小分子肽，其制备与检测方法包括以下步骤：
S1、原料预处理：取新鲜牡蛎，取肉，以温水(不超过35℃)多次清洗直至清洗液无咸味为止。低温高速匀浆机制备牡蛎肉匀浆液。采用凯氏定氮法测定所述牡蛎浆液中总蛋白含量，计算蛋白质浓度(wt％)；
S2、发酵培养：向步骤S1制得的牡蛎匀浆液中加入3倍质量的水,使匀浆液中蛋白质浓度为15％左右；调节pH值为7。加入黑曲霉种子液(菌体浓度107CFU·mL-1以上)，接种量5％，发酵罐装液量17.5％。30℃、转速130rpm发酵培养47.5h。
S3、发酵结束后，将步骤S2所得发酵液以8000rpm离心17.5min，取上清液。上清液加热至77.5℃保持15min以灭酶活性。冷却至40℃以下，用0.25μm微孔滤膜过滤，取滤液，即得到黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液；
S4、脱色去腥处理。步骤S3所得滤液中加入料液含量12.5％的活性炭，搅拌均匀后，静置3.5h以脱色去腥。离心，去除活性炭；
S5、纯化处理制备牡蛎小分子肽溶液。将步骤S4所得经脱色去腥处理的牡蛎蛋白水解液用截留分子量3000的超滤膜过滤后，滤液再用截留分子量1000的超滤膜过滤，2次过滤所得滤液即为牡蛎小分子肽溶液，冷冻干燥。冻干粉以pH 7.2、0.1mol·L-1的PBS溶解，用Sephadex LH-20凝胶色谱柱分离。
S6、小分子肽检测。接收的洗脱液用RP-HPLC与EMS联用检测小分子肽并测定其分子量。测得分子量为500～1500。
实施例3
本实施例提供了一种牡蛎小分子肽，其制备与检测方法包括以下步骤：
S1、原料预处理：取新鲜牡蛎，取肉，以温水(不超过35℃)多次清洗直至清洗液无咸味为止。低温高速匀浆机制备牡蛎肉匀浆液。采用凯氏定氮法测定所述牡蛎浆液中总蛋白含量，计算蛋白质浓度(wt％)；
S2、发酵培养：向步骤S1制得的牡蛎匀浆液中加入4倍质量的水,使匀浆液中蛋白质浓度为15％左右；调节pH值为7.5。加入黑曲霉种子液(菌体浓度107CFU·mL-1以上)，接种量5％，发酵罐装液量20％。30℃、转速140rpm发酵培养50h。
S3、发酵结束后，将步骤S2所得发酵液以8000rpm离心20min，取上清液。上清液加热至85℃保持20min以灭酶活性。冷却至40℃以下，用0.25μm微孔滤膜过滤，取滤液，即得到黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液；
S4、脱色去腥处理。步骤S3所得滤液中加入料液含量15％的活性炭，搅拌均匀后，静置4h以脱色去腥。离心，去除活性炭；
S5、纯化处理制备牡蛎小分子肽溶液。将步骤S4所得经脱色去腥处理的牡蛎蛋白水解液用截留分子量3000的超滤膜过滤后，滤液再用截留分子量1000的超滤膜过滤，2次过滤所得滤液即为牡蛎小分子肽溶液，冷冻干燥。冻干粉以pH 7.2、0.1mol·L-1的PBS溶解，用Sephadex LH-20凝胶色谱柱分离。
S6、小分子肽检测。接收的洗脱液用RP-HPLC与EMS联用检测小分子肽并测定其分子量。测得分子量为500～1500。
实施例1～3提供的牡蛎小分子肽，均可添加在食品、保健品或化妆品、药物等中，具有包括补充营养、提高抵抗力、抗菌消炎、补充矿物质、蛋白质、维生素等在内的多重功效。
以上实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述；这些未明确写出的实施例，也都应当认为是本说明书记载的范围。
上文中通过一般性说明及具体实施例对本发明作了较为具体和详细的描述。应当指出的是，在不脱离本发明构思的前提下，显然还可以对此具体实施例作出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种牡蛎小分子肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取新鲜牡蛎，取肉，用35℃以下的水多次清洗牡蛎肉直至清洗后的水没有咸味；
S2、将S1中清洗后的所述牡蛎肉制成牡蛎肉匀浆液，测定所述牡蛎肉匀浆液中的蛋白质浓度；
S3、向S2中得到的所述牡蛎肉匀浆液中加入水直至所述牡蛎肉匀浆液中蛋白质浓度为14wt％～16wt％，然后调节其pH值至6.5～7.5，加入黑曲霉种子液，搅拌均匀制成发酵液，将所述发酵液转移至发酵容器中进行发酵，发酵开始时，所述发酵液占所述发酵容器总容积的15％～20％；发酵结束得到发酵产物；
S4、将S3中得到的所述发酵产物离心，取上清液，将所述上清液加热至70℃～85℃并保温10～20min以灭酶活性；之后冷却至40℃以下，过滤取滤液，即得到黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液；
S5、将S4中得到的所述黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液脱色去腥；
S6、将S5中脱色去腥后的所述黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液过滤得到牡蛎小分子肽溶液，冷冻干燥，得到的冻干粉即为所述牡蛎小分子肽。
2.根据权利要求1所述的一种牡蛎小分子肽的制备方法，其特征在于，S2中，使用低温高速匀浆机将S1中清洗后的所述牡蛎肉制成牡蛎肉匀浆液，匀浆转速为8000～10000rpm，温度为0～10℃。
3.根据权利要求1所述的一种牡蛎小分子肽的制备方法，其特征在于，S3中，所述黑曲霉种子液的菌体浓度107CFU·mL-1以上，接种量为S3中加水后的所述牡蛎肉匀浆液体积的5％。
4.根据权利要求1所述的一种牡蛎小分子肽的制备方法，其特征在于，S3中，发酵温度为30℃恒温，发酵时间为45～50h，120～140rpm的转速转动发酵罐发酵。
5.根据权利要求1所述的一种牡蛎小分子肽的制备方法，其特征在于，S4中，离心所述发酵产物时的离心转速为8000rpm，离心时间为15～20min。
6.根据权利要求1所述的一种牡蛎小分子肽的制备方法，其特征在于，S4中，过滤的操作具体是：用0.25μm微孔滤膜过滤。
7.根据权利要求1所述的一种牡蛎小分子肽的制备方法，其特征在于，S5的操作具体是：向所述黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液中加入其体积10％～15％的活性炭，搅拌均匀后静置3～4h，然后离心去除所述活性炭。
8.根据权利要求1所述的一种牡蛎小分子肽的制备方法，其特征在于，S6中过滤的操作具体是：将S5中脱色去腥后的所述黑曲霉发酵牡蛎蛋白水解液用截留分子量3000的超滤膜过滤后，得到的滤液再用截留分子量1000的超滤膜过滤。
9.一种牡蛎小分子肽，其特征在于，是由权利要求1所述的制备方法得到，且其平均分子量为500～1500。
10.权利要求9所述的一种牡蛎小分子肽在制备药品、功能食品、保健品、化妆品方面的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210113401.2A CN114395594B (zh) | 2022-01-30 | 2022-01-30 | 一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210113401.2A CN114395594B (zh) | 2022-01-30 | 2022-01-30 | 一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114395594A true CN114395594A (zh) | 2022-04-26 |
| CN114395594B CN114395594B (zh) | 2023-11-10 |
Family
ID=81232565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210113401.2A Active CN114395594B (zh) | 2022-01-30 | 2022-01-30 | 一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114395594B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114717287A (zh) * | 2022-05-07 | 2022-07-08 | 广东还珠海洋生物科技有限公司 | 一种在贝类中提取肽类的工艺 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002088098A (ja) * | 2000-09-11 | 2002-03-27 | Senmi Ekisu Co Ltd | アコヤ貝由来のａｃｅ阻害ペプチド |
| CN102250997A (zh) * | 2011-05-17 | 2011-11-23 | 钦州学院 | 一种用复合酶水解牡蛎蛋白制备活性肽的方法 |
| CN106107635A (zh) * | 2016-06-29 | 2016-11-16 | 大连深蓝肽科技研发有限公司 | 利用牡蛎鲜肉制备牡蛎低聚肽的方法 |
| CN110684816A (zh) * | 2019-10-11 | 2020-01-14 | 广东海洋大学深圳研究院 | 一种高品质牡蛎蛋白肽的制备方法及其应用 |
-
2022
- 2022-01-30 CN CN202210113401.2A patent/CN114395594B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002088098A (ja) * | 2000-09-11 | 2002-03-27 | Senmi Ekisu Co Ltd | アコヤ貝由来のａｃｅ阻害ペプチド |
| CN102250997A (zh) * | 2011-05-17 | 2011-11-23 | 钦州学院 | 一种用复合酶水解牡蛎蛋白制备活性肽的方法 |
| CN106107635A (zh) * | 2016-06-29 | 2016-11-16 | 大连深蓝肽科技研发有限公司 | 利用牡蛎鲜肉制备牡蛎低聚肽的方法 |
| CN110684816A (zh) * | 2019-10-11 | 2020-01-14 | 广东海洋大学深圳研究院 | 一种高品质牡蛎蛋白肽的制备方法及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BINGJUN QIAN ET.AL: "Antioxidant and anti-inflammatory peptide fraction from oyster soft tissue by enzymatic hydrolysis" * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114717287A (zh) * | 2022-05-07 | 2022-07-08 | 广东还珠海洋生物科技有限公司 | 一种在贝类中提取肽类的工艺 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114395594B (zh) | 2023-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107868808B (zh) | 一种提高燕窝唾液游离酸的方法 | |
| CN110684816A (zh) | 一种高品质牡蛎蛋白肽的制备方法及其应用 | |
| CN104513843B (zh) | 一种多糖和蛋白肽的联合制备方法 | |
| CN102660436A (zh) | 一种牡蛎黄酒 | |
| CN103053899B (zh) | 一种海带提取物营养强化剂及其制备方法 | |
| CN101606649B (zh) | 一种蜂王浆多肽液制备方法 | |
| CN111084346A (zh) | 一种海参压片的制备工艺及其制得的海参压片 | |
| CN102978268A (zh) | 从卵蛋白粉中酶法制取卵白蛋白多肽的方法 | |
| CN112790392A (zh) | 一种海参肽的制备方法 | |
| CN109371088A (zh) | 一种海参活性肽的制备方法 | |
| CN107319093A (zh) | 一种酶解鱼溶浆蛋白粉的加工方法 | |
| CN114395594A (zh) | 一种牡蛎小分子肽的制备方法及其应用 | |
| CN107712019A (zh) | 延长冷冻水产品优质货架期的方法 | |
| CN107604029A (zh) | 利用深海鱼鱼肉制备活性多肽的方法 | |
| CN113647599A (zh) | 一种通过酶降解牲畜骨生产调味剂中骨素的制备方法 | |
| CN107529554A (zh) | 一种猪血球肽的生产工艺 | |
| CN113349356A (zh) | 一种冰岛红极参肠卵营养果冻及其制备方法 | |
| CN101982113A (zh) | 一种长牡蛎肉抗疲劳功能营养液的制备方法 | |
| CN109576331B (zh) | 一种小麦胚芽肽的提取方法 | |
| CN107412136A (zh) | 用于化妆品原料的羊胎盘酶解发酵浓缩液及制备工艺 | |
| CN101507485A (zh) | 一种甘薯茎叶泡菜的制备方法及其产品 | |
| CN107348274B (zh) | 利用海蜇胶原蛋白肽发酵制备功能饮料的方法 | |
| CN103937858A (zh) | 一种从裂壶藻藻粕制备抗氧化剂的方法 | |
| CN111789235B (zh) | 一种基于岩藻聚糖酶与蛋白酶的海参复合酶解方法 | |
| CN108396048A (zh) | 牡蛎活性多肽的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| OL01 | Intention to license declared |