CN114395558A - 一种磁珠-dna探针、mc-lr检测生物传感器及制备方法与应用 - Google Patents

一种磁珠-dna探针、mc-lr检测生物传感器及制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物传感器及环境监测领域，公开了一种磁珠‑DNA探针、MC‑LR检测生物传感器及制备方法与应用。本发明生物传感器包括磁珠‑DNA探针、Cas12a‑crRNA和信号链Reporter。当MC‑LR存在时，的DNA双链Probe上的DNA双链Probe中的Blocker链与MC‑LR竞争结合Aptamer，进而释放Blocker链，释放的Blocker链来激活Cas12a‑crRNA，Cas12a核酸酶被激活后，可非特异性切断信号链Reporter链，产生荧光。该生物传感器对MC‑LR具有高特异性和灵敏性，并且成本低廉，可用于真实环境水样的检测。

Description

一种磁珠-DNA探针、MC-LR检测生物传感器及制备方法与应用
技术领域
本发明属于生物传感器及环境监测领域，具体涉及一种磁珠-DNA探针、MC-LR检测生物传感器及制备方法与应用。
背景技术
随着水体富营养化的逐步加剧，蓝藻水华和赤潮的发生逐步增加。越来越多的水源受到蓝藻水华的次生代谢产物-微囊藻毒素(MCs)的污染，对水体环境和人群健康构成巨大的威胁。而MC-LR是其中最普遍、最具毒性的微囊藻毒素同源物，能够强烈抑制蛋白磷酸酶的活性，还是强烈的肝脏肿瘤促进剂。考虑到其强毒性，中国生活饮用水卫生标准(GB5749-2006)的颁布，将饮用水中微囊藻毒素含量限制为1μg/L。因此，在水环境中监测MC-LR对环境安全与人体健康至关重要。
检测MC-LR的传统方法包括高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱与质谱联用(LC-MS)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白磷酸酶抑制试验(PPIA)、以及光学和电化学传感器。HPLC-MS虽然有较高的灵敏度和特异性，但是其需要庞大而昂贵的机器设备，这对现场检测MC-LR造成了一定的阻碍。ELISA和PPIA虽然利用了酶的特异性，然而其需要多步骤冗长的检测过程。电化学传感器虽然有极灵敏的检测效果，但是需要合适的电极材料以及适宜的电极修饰。光学传感器操作简单，但是也受到了灵敏度和特异性的限制。
通过查阅文献知道，原核生物已经开发出一种成簇规则间隔短回文重复序列(CRISPR)的适应性免疫系统。过去的几年里，CRISPR-Cas9酶经过各种重新设计，引起了基因编辑热潮。而CRISPR-Cas12a是一种新的RNA引导的核酸酶，正在成为基因编辑最常用的工具，其对DNA识别的特异性、灵敏性和可编程性在分子诊断领域备受关注，做为一些强大诊断工具的核心，其有望解决生物传感器在灵敏度和特异性等方面的问题。
传统的抗原-抗体反应灵敏度、特异性均好，但是蛋白质做为探针分子容易变性，而且价格昂贵，适配体由DNA分子构成，经SELEX富集筛选，可以具有与抗原-抗体相匹敌的灵敏度，同时更易合成，稳定性更好。所以我们在生物传感器的基础上，结合DNA适配体的特异性、酶的特异性，构建出一种操作简单同时高灵敏度的MC-LR检测平台，同时通过对信号链的设计，利用侧向流动试纸条直接检测MC-LR，操作简单，省去现场检测时机器设备带来的不便。
发明内容
本发明要解决的技术问题是构建一种可现场检测MC-LR的磁珠-DNA探针、包含该磁珠-DNA探针的生物传感器，该生物传感器具有高特异性和灵敏性，并且成本低廉，操作步骤简便。
本发明提供了一种磁珠-DNA探针，所述磁珠-DNA探针由适配体Aptamer和其互补链Blocker结合得到的DNA双链Probe结合在链霉亲和素磁珠表面所构成，所述链霉亲和素磁珠为表面偶联有链霉亲和素的磁珠，所述适配体Aptamer的序列如SEQ NO.1所示，所述适配体Aptamer的5’端连接生物素-Biotin，所述互补链Blocker的序列如SEQ NO.2所示。
进一步的，上述磁珠-DNA探针的制备方法，包括以下步骤：
a)将适配体Aptamer和互补链Blocker加入TAMg缓冲液中混合摇匀得反应液，将所述反应液95℃加热5min，然后逐渐冷却至4℃，形成DNA双链Probe；所述反应液中，Aptamer的浓度优选为1v/v％，Blocker的浓度优选为1v/v％。
b)将链霉亲和素磁珠溶液分散在2×B&W缓冲溶液中，加入所述DNA双链Probe，室温孵育1h后，磁分离收集获得磁珠-DNA探针。获得磁珠-DNA探针采用1×PBS缓冲液漂洗5次。优选的，链霉亲和素磁珠溶液、2×B&W缓冲溶液和DNA双链Probe的体积比为1:50:50。链霉亲和素磁珠溶液的浓度优选为30mg/mL。
1×PBS缓冲液(pH为7.2-7.4)中，NaCl的浓度为136.89mM；KCl的浓度为2.67mM；Na2HPO4的浓度为8.10mM；KH2PO4的浓度为1.76mM。
TAMg缓冲液(pH为8.0)中，Tris的浓度为45mM；MgCl2的浓度为7.6mM。
2×B&W缓冲液(pH为7.5)中，Tris-HCl的浓度为10mM；EDTA的浓度为1mM；NaCl的浓度为2.0M。
本发明还提供了一种MC-LR检测生物传感器，包括上述磁珠-DNA探针、Cas12a-crRNA复合物和信号链Reporter。其中，Cas12a-crRNA复合物由crRNA和Cas12a孵育结合得到，crRNA的序列与互补链Blocker互补配对，所述crRNA的序列如SEQ NO.3所示；信号链Reporter一端为荧光素FAM，另一端为荧光淬灭剂BHQ1。
进一步的，上述Cas12a-crRNA复合物的制备方法为：将Cas12a溶液和crRNA溶液加入10×NEBuffer2.1缓冲液中恒温孵育得到，其中，Cas12a溶液的浓度为1μM，crRNA溶液的浓度为1μM，Cas12a溶液和crRNA溶液的体积比为1:2。恒温孵育的温度优选为37℃，所述恒温孵育的时间优选为10min。
10×NEBuffer 2.1缓冲液(pH为7.9)中，NaCl的浓度为500Mm；Tris-HCl的浓度为100mM；MgCl2的浓度为100mM；BSA的浓度为1mg/mL。
所述的核酸序列如下：
Figure BDA0003473745280000021
本发明还提供了一种上述的MC-LR检测生物传感器在MC-LR检测中的应用，Aptamer能够与Blocker通过部分碱基配对结合成DNA双链Probe。本发明提供的磁珠-DNA探针是由DNA双链Probe偶联在磁珠表面构成，当MC-LR存在时，DNA双链Probe中的Blocker链与MC-LR竞争结合Aptamer，进而释放Blocker链，同MC-LR浓度形成对应关系。本发明通过释放的Blocker链来激活Cas12a-crRNA(即crRNA导向的Cas12a，其中，crRNA用来特异性识别Blocker链)，Cas12a核酸酶被激活后，可非特异性切断信号链Reporter链，使BHQ1与FAM从一条DNA链上分开，产生游离的FAM基团，从而使荧光信号增强，通过检测荧光信号强度可得到MC-LR的浓度。本发明提供的MC-LR检测生物传感器的检测下限为0.000003μg/L。
进一步的，MC-LR检测可为现场水样检测，具体的，用含MC-LR的水样与磁珠-DNA探针孵育后，所述磁珠-DNA探针上的互补链Blocker被竞争性释放后特异性地激活Cas12a-crRNA复合物的核酸酶活性，从而切割信号链Reporter，产生信号。
与现有技术相比，本发明提供的生物传感器具有高特异性和灵敏性，并且成本低廉，可用于真实环境水样的检测，利用适配体与MC-LR的特异性识别，实现了对目标物MC-LR的高特异性检测，且检测下限为0.000003μg/L；MC-LR的Aptamer也可被替换成其它需要检测物质的适配体，扩大了生物传感器的检测范围。
附图说明
图1为本发明中生物传感器的构建原理示意图；
图2为磁珠-DNA探针与MC-LR不同孵育时间运行的荧光强度连线图；
图3为磁珠-DNA探针与MC-LR在不同温度下运行的荧光强度柱状图；
图4为磁珠-DNA探针与MC-LR在不同浓度PBS缓冲液中运行的荧光强度柱状图；
图5为Cas12a-crRNA复合物浓度对生物传感器运行影响的荧光强度柱状图；
图6为生物传感器响应不同浓度MC-LR的荧光图谱；
图7为生物传感器响应不同浓度MC-LR的荧光强度与MC-LR浓度的线性关系图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。
1×PBS缓冲液为NaCl(136.89mM)；KCl(2.67mM)；Na2HPO4(8.10mM)；KH2PO4(1.76mM)，pH值为7.2-7.4
TAMg缓冲液为Tris(45mM)；MgCl2(7.6mM)，用乙酸将其pH调节至8.0。
2×B&W缓冲液为Tris-HCl(10mM)；EDTA(1mM)；NaCl(2.0M)，pH值为7.5。
10×NEBuffer 2.1缓冲液为NaCl(500Mm)；Tris-HCl(100mM)；MgCl2(100mM)；BSA(100μg/mL)，pH值为7.9。
链霉亲和素磁珠溶液为将磁珠是分散在保存液里得到，链霉亲和素磁珠的浓度为30mg/mL；保存液为包含20％乙醇的PBS。
下面结合具体实施例进一步阐述本发明的技术方案。
图1为本发明中生物传感器的构建原理示意图。Aptamer能够与Blocker通过部分碱基配对结合成DNA双链Probe。磁珠-DNA探针是由DNA双链Probe偶联在磁珠表面构成，当MC-LR存在时，DNA双链Probe中的Blocker链与MC-LR竞争结合Aptamer，进而释放Blocker链，释放的Blocker链来激活Cas12a-crRNA(即crRNA导向的Cas12a，其中，crRNA用来特异性识别Blocker链)，Cas12a核酸酶被激活后，可非特异性切断信号链Reporter链，使BHQ1与FAM从一条DNA链上分开。FAM基团与荧光淬灭剂BHQ1分离后产生荧光，通过荧光光度计检测产生荧光的强度。
实施例1：磁珠-DNA探针的构建
a)将1μL 100μM的Aptamer和1μL 100μΜ的Blocker，在98μL TAMg缓冲液中混合摇匀得反应液。将反应液95℃加热5min，然后逐渐冷却至4℃，形成DNA双链Probe。
b)将2μL链霉亲和素磁珠溶液分散在100μL 2×B&W缓冲溶液中，加入100μL Probe室温孵育1h后，磁分离收集磁珠。用100μL PBS缓冲液洗涤5次，获得磁珠-DNA探针。
实施例2：磁珠-DNA探针与MC-LR不同孵育时间对检测效果的影响
(1)将实施例1得到的全部磁珠-DNA探针用40℃的PBS溶液冲洗以减少背景信号。
(2)将清洗后的磁珠-DNA探针与84μL 1×PBS稀释的0.1μg/L的MC-LR标准溶液混合。38℃孵育不同时间(0.1，0.5，1，1.5，2，2.5，3h)后进行磁分离，留上清。
(3)加2μL 1μM的Cas12a、4μL 1μM的crRNA以及0.7μL的10×NEBuffer 2.1缓冲液，37℃孵育10min后，得到含有Cas12a-crRNA复合物的溶液；
(4)向含有Cas12a-crRNA复合物的溶液中加入9.3μL的10×NEBuffer 2.1缓冲液以及84μL步骤(2)得到的上清，37℃孵育20min后，加入1μL 100μM的Reporter，再37℃孵育20min，然后进行荧光光谱测试，取光谱峰值。
以磁珠-DNA探针与MC-LR孵育的时间为横坐标，以测得的荧光强度为纵坐标，作磁珠-DNA探针与MC-LR不同孵育时间得到的生物传感器运行的荧光强度连线图。如图2，随着孵育时间从0.1h增加到1.5h，荧光强度急剧增加，荧光强度在2h后趋于稳定。可见，孵育时间为2h时，检测效果最好。
实施例3：磁珠-DNA探针与MC-LR不同孵育温度对检测效果的影响
(1)将实施例1得到的全部磁珠-DNA探针用40℃的PBS溶液冲洗以减少背景信号。
(2)将清洗后的磁珠-DNA探针与84μL 1×PBS稀释的0.1μg/L的MC-LR标准溶液混合，将磁珠-DNA探针与84μL 1×PBS缓冲液混合得到的混合溶液做为阴性对照，不同温度(32，34，36，38，40℃)下孵育2h后进行磁分离，留上清。
(3)加2μL 1μM的Cas12a、4μL 1μM的crRNA以及0.7μL的10×NEBuffer 2.1，37℃孵育10min后，得到含有Cas12a-crRNA复合物的溶液；
(4)向含有Cas12a-crRNA复合物的溶液中加入9.3μL的10×NEBuffer 2.1以及84μL步骤(2)得到的上清，37℃孵育20min后，加入1μL 100μM的Reporter，再37℃孵育20min，进行荧光光谱测试，取光谱峰值。
以磁珠-DNA探针与MC-LR孵育的温度为横坐标，以测得的荧光强度为纵坐标，作磁珠-DNA探针与MC-LR不同孵育温度生物传感器运行的荧光强度柱状图。如图3，在较低的孵育温度下，磁珠-DNA探针中的核酸适配体与MC-LR之间的相互作用较弱或者反应较慢，不能有效替代Blocker链，因此得到较低的荧光强度。随着孵育温度增加，荧光强度相应增加。然而，在40℃时，由于DNA双链Probe在高温下的不稳定性，阴性对照组的荧光强度也增加了。因此，磁珠-DNA探针与MC-LR孵育的温度选择38℃为最佳。
实施例4：磁珠-DNA探针与MC-LR在不同浓度PBS缓冲液孵育对检测效果的影响
(1)将实施例1得到的全部磁珠-DNA探针用40℃的PBS溶液冲洗以减少背景信号。
(2)将清洗后的磁珠-DNA探针与84μL不同浓度PBS缓冲液(0.8，0.9，1.0，1.1，1.2和1.3M)稀释的0.1μg/L的MC-LR标准溶液混合，磁珠-DNA探针与84μL不同浓度PBS(0.8，0.9，1.0，1.1，1.2和1.3M)缓冲液混合做为阴性对照。38℃下孵育2h后进行磁分离，留上清。
(3)加2μL 1μM的Cas12a、4μL 1μM的crRNA以及0.7μL的10×NEBuffer 2.1，37℃孵育10min后，得到含有Cas12a-crRNA复合物的溶液；
(4)向含有Cas12a-crRNA复合物的溶液中加入9.3μL的10×NEBuffer 2.1以及84μL步骤(2)得到的上清，37℃孵育20min后，加入1μL 100μM的Reporter，再37℃孵育20min。进行荧光光谱测试，取光谱峰值。
以磁珠-DNA探针与MC-LR孵育的PBS浓度为横坐标，以测得的荧光强度为纵坐标，作磁珠-DNA探针与MC-LR不同浓度PBS缓冲液孵育生物传感器运行的荧光强度柱状图。如图4，低浓度的PBS缓冲液不利于DNA双链Probe的稳定，导致背景信号偏高。但是高的PBS浓度影响了DNA双链Probe的稳定性以及适配体Aptamer与MC-LR之间的相互作用，导致互补链Blocker释放较少，荧光信号较低。因此，选择0.1M PBS缓冲液做为后续磁珠-DNA探针与MC-LR孵育缓冲液最佳。
实施例5：CRISPR-Cas12a系统中Cas12a-crRNA复合物浓度对检测效果的影响
该实施例中，Cas12a溶液和crRNA溶液的初始浓度为1μM。
(1)将实施例1得到的全部磁珠-DNA探针用40℃的PBS溶液冲洗以减少背景信号。
(2)将清洗后的磁珠-DNA探针与84μL 1×PBS稀释的0.1μg/L的MC-LR标准溶液混合。38℃下孵育2h后进行磁分离，留上清。
(3)分别将0.5μL Cas12a与1μL crRNA(对应浓度为5nM的Cas12a-crRNA复合物)，1μL Cas12a与2μL crRNA(对应浓度为10nM的Cas12a-crRNA复合物)，2μL Cas12a与4μLcrRNA(对应浓度为20nM的Cas12a-crRNA复合物)，4μL Cas12a与8μL crRNA(对应浓度为40nM的Cas12a-crRNA复合物)，6μLCas12a与12μL crRNA(对应浓度为60nM的Cas12a-crRNA复合物)，以及0.7μL的10×NEBuffer 2.1，37℃孵育10min后，得到不同浓度的含有Cas12a-crRNA复合物的溶液；
(4)向各浓度的含有Cas12a-crRNA复合物的溶液中加入9.3μL的10×NEBuffer2.1以及84μL步骤(2)得到的上清，37℃孵育20min后，加入1μL 100μM的Reporter，再37℃孵育20min。进行荧光光谱测试，取光谱峰值。
以Cas12a-crRNA复合物浓度为横坐标，以测得的荧光强度为纵坐标，作不同Cas12a-crRNA复合物浓度生物传感器运行的荧光强度柱状图。如图5，我们发现荧光强度在增加，到20nM之后，变化就不明显了。因此，采用浓度为的20nM Cas12a-crRNA复合物进行后续的检测可达最佳效果。
实施例6：对MC-LR进行检测
(1)将实施例1得到的全部磁珠-DNA探针用40℃的PBS溶液冲洗以减少背景信号。
(2)将清洗后的磁珠-DNA探针与84μL 1×PBS稀释的不同浓度(10，1，0.1，10-2，10-3，10-4，10-5，0μg/L)的MC-LR标准溶液混合。38℃孵育2h后进行磁分离，留上清。
(3)加2μL 1μM的Cas12a、4μL 1μM的crRNA以及0.7μL的10×NEBuffer 2.1，37℃孵育10min后，得到含有Cas12a-crRNA复合物的溶液；
(4)向含有Cas12a-crRNA复合物的溶液中加入9.3μL的10×NEBuffer 2.1以及84μL步骤(2)得到的上清，37℃孵育20min后，加入1μL 100μM的Reporter，再37℃孵育20min，进行荧光光谱测试。
如图6，以MC-LR的浓度为横坐标，以测得的荧光为纵坐标，做生物传感器响应不同浓度MC-LR的荧光图谱。用不同浓度MC-LR的荧光图谱的峰值减去阴性(0μg/L)荧光图谱的峰值作线性拟合曲线，如图7所示，可以看到MC-LR的浓度和荧光强度有很好的线性关系，相关系数R2为0.9954，根据3σ方法，可以计算出检测限为0.000003μg/L。
实施例7：真实水样检测
A)为了确认该生物传感器是否能在真实水样下运行，真实水样分别取自长江江水和张家港河河水，将1mL水样先通过0.45μm水系滤膜，加入0.11mL 10×PBS，与真实水样混合。混匀后即可直接使用，无需进一步处理。考虑到真实水样内MC-LR比较低，采用加样回收法，验证可行性，加入不同量的MC-LR，得到含MC-LR浓度为0，1，0.1，和0.01μg/L的真实水样
(1)将实施例1得到的全部磁珠-DNA探针用40℃的PBS溶液冲洗以减少背景信号。
(2)将清洗后的磁珠-DNA探针与84μL真实水样混合。38℃孵育2h后进行磁分离，留上清。
(3)加2μL 1μM的Cas12a、4μL 1μM的crRNA以及0.7μL的10×NEBuffer 2.1，37℃孵育10min后，得到含有Cas12a-crRNA复合物的溶液；
(4)向含有Cas12a-crRNA复合物的溶液中加入9.3μL的10×NEBuffer 2.1以及84μL步骤(2)得到的上清，37℃孵育20min后，加入1μL 100μM的Reporter，再37℃孵育20min，进行荧光光谱测试，取光谱峰值，根据线性拟合曲线，计算MC-LR的浓度。
表1
Figure BDA0003473745280000051
表1为真实水样中测得的MC-LR的荧光峰值计算的MC-LR浓度及回收率。可以看出，该法可以检测真实水样中MC-LR，此外加样回收实验也得到了较满意的回收率，在91.6％-107.2％范围内，这些都说明在真实水样中该生物传感器依旧可以很好地运行。
本发明通过DNA适配体的互补链与MC-LR的竞争结合，实现检测物质的转换，以及CRISPR-Cas12a系统对DNA识别的高灵敏度和特异性，实现生物传感器的高特异性和灵敏性，并且成本低廉；DNA分子传感器上用于偶联磁珠和特异性识别MC-LR的Aptamer也可被替换成其他需要检测的物质的适配体，扩大了生物传感器的检测范围。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 南通大学
<120> 一种磁珠-DNA探针、MC-LR检测生物传感器及制备方法与应用
<130> 20220112
<141> 2022-01-17
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggcgccaaac aggaccacca tgacaattac ccataccacc tcattatgcc ccatctccgc 60
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cgagcggaga tggggcatga 20
<210> 3
<211> 41
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
uaauuucuac uaaguguaga uucaugcccc aucuccgcuc g 41

Claims (10)

1.一种磁珠-DNA探针，其特征在于，所述磁珠-DNA探针由适配体Aptamer和其互补链Blocker结合得到的DNA双链Probe结合在链霉亲和素磁珠表面所构成，所述链霉亲和素磁珠为表面偶联有链霉亲和素的磁珠，所述适配体Aptamer的序列如SEQ NO.1所示，所述适配体Aptamer的5’端连接生物素-Biotin，所述互补链Blocker的序列如SEQ NO.2所示。
2.一种权利要求1所述的磁珠-DNA探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a)将适配体Aptamer和互补链Blocker加入TAMg缓冲液中混合摇匀得反应液，将所述反应液95℃加热5min，然后逐渐冷却至4℃，形成DNA双链Probe；
b)将链霉亲和素磁珠溶液分散在2×B&W缓冲溶液中，加入所述DNA双链Probe，室温孵育1h后，磁分离收集获得磁珠-DNA探针。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述反应液中，Aptamer的浓度为1v/v％，Blocker的浓度为1v/v％。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤b)中，链霉亲和素磁珠溶液、2×B&W缓冲溶液和DNA双链Probe的体积比为1:50:50，其中，所述链霉亲和素磁珠溶液的浓度为30mg/mL。
5.一种MC-LR检测生物传感器，其特征在于，包括磁珠-DNA探针、Cas12a-crRNA复合物、信号链Reporter；
所述磁珠-DNA探针由适配体Aptamer和其互补链Blocker结合得到的DNA双链Probe结合在链霉亲和素磁珠表面所构成，所述链霉亲和素磁珠为表面偶联有链霉亲和素的磁珠，所述适配体Aptamer的序列如SEQ NO.1所示，所述适配体Aptamer的一端修饰有生物素Biotin，所述互补链Blocker的序列如SEQ NO.2所示；
所述Cas12a-crRNA复合物由crRNA和Cas12a孵育结合得到，所述crRNA的序列如SEQNO.3所示；
所述信号链Reporter一端为荧光素FAM，另一端为生物素BHQ1。
6.根据权利要求5所述的MC-LR检测生物传感器，其特征在于，所述Cas12a-crRNA复合物的制备方法为：将Cas12a溶液和crRNA溶液加入10×NEBuffer 2.1缓冲液中恒温孵育得到，其中，Cas12溶液的浓度为1μM，crRNA溶液的浓度为1μM，Cas12a溶液和crRNA溶液的体积比为1:2。
7.根据权利要求6所述的MC-LR检测生物传感器，其特征在于，所述Cas12a-crRNA复合物的制备方法中，恒温孵育的温度为37℃，恒温孵育的时间为10min。
8.权利要求5-7任一项所述的MC-LR检测生物传感器在MC-LR检测中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述MC-LR检测生物传感器的检测限度为0.000003μg/L。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述MC-LR检测为现场水样检测，所述现场水样检测具体为：用含MC-LR的水样与磁珠-DNA探针孵育后，所述磁珠-DNA探针上的互补链Blocker被竞争性释放后特异性地激活Cas12a-crRNA复合物的核酸酶活性，从而切割信号链Reporter，产生信号。
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