CN114369629B - 一种1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成方法 - Google Patents

一种1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种1‑棕榈酸‑2‑油酸‑3‑硬脂酸甘油三酯的酶法合成方法，属于结构脂加工技术领域。本发明以1‑棕榈酸‑2‑油酸甘油二酯为酰基受体，硬脂酸或其衍生物为酰基供体，以脂肪酶为催化剂，在20～70℃下反应2～10h后，得到富含1‑棕榈酸‑2‑油酸‑3‑硬脂酸甘油三酯的粗产物，其中，反应体系为无溶剂或者有机溶剂反应体系。本发明提供了一种高效、高含量的POS的酶法合成方法，解决了目前结构脂合成产物中POS含量低，应用有限的缺点，本发明所采用的技术在制备类可可脂过程中有一定的应用前景。

Description

一种1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成方法
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，涉及一种功能脂质的制备方法，具体涉及一种1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成方法。
背景技术
可可脂来源于可可树，它是制备巧克力的重要原料之一。可可树对种植环境及气候条件有较高要求，这种植物原产于美洲中部及南部，广泛栽培于全世界的热带地区，有些地区则不适宜种植可可树，当环境气候不适宜以及遭遇病虫害的时候，全球的可可脂产量就会急剧下降，这造成了天然的可可脂价格十分昂贵，因此，利用廉价的原料制备可可脂中富含的甘油三酯显得尤为重要。
可可脂中的主要甘油三酯为1,3-二棕榈酸-2-油酸甘油三酯(POP)、1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯(POS)和1,3-二硬脂酸-2-油酸甘油三酯(SOS)，这三种甘油三酯在可可脂中的含量接近80％，因此，人工制备类可可脂主要是获得这三种甘油三酯，一些天然油脂原料中富含POP，例如棕榈油中熔点分提物；而另一些天然油脂中富含SOS，例如乳木果油等，但是富含POS的天然油脂很少，因此，能否获得与可可脂组成相似的类可可脂，关键在于如何制备出POS。
目前，人工制备POS的方法主要为酶法酸解法，即通过富含POP的甘油三酯和硬脂酸或者硬脂酸甲酯或者乙酯进行酶促反应，制备富含POS的结构脂，但是这种方法得到的酶促产物中含有多种甘油三酯，不仅含有POS，同时含有POP和SOS，产物经分子蒸馏后，POS的含量较低。
因此，本领域仍然需一种酶法合成POS的方法，以提高粗产物中POS的含量和合成效率。
发明内容
鉴于上述和/或现有酶法制备POS方法中存在的技术问题，提出了本发明。
本发明提供了一种酶法制备POS的方法，利用脂肪酶作为催化剂，1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯和硬脂酸(或其衍生物)为反应物合成POS，与酶法酸解法制备POS相比，本发明所采用的方法合成效率高，粗产物中POS的含量高。
具体的本发明提供了如下技术方案：一种酶法合成POS的方法，所述方法包括：以1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯为酰基受体，硬脂酸或其衍生物为酰基供体，以脂肪酶为催化剂，在20～70℃下反应2～10h后，得到富含1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的粗产物，其中，反应体系为无溶剂或者有机溶剂反应体系。
在一个或多个实施方案中，所述脂肪酶包括以南极假丝酵母(Candidaantarctica)为来源、以米黑根霉菌(Rhizomucor miehei)为来源、以葱伯克霍尔德菌(Burkaholderia cepacia)为来源、以米根霉(Rhizopus oryzae)为来源中的脂肪酶的任一种或几种。
在一个或多个实施方案中，所述脂肪酶包括以南极假丝酵母(Candidaantarctica)为来源的Novozym 435、以米黑根霉菌(Rhizomucor miehei)为来源的Lipozyme RM IM、以葱伯克霍尔德菌(Burkaholderia cepacia)为来源的Lipase PS、以米根霉(Rhizopus oryzae)为来源中的Lipase DF IM。
在一个或多个实施方案中，所述酶法合成POS的反应体系中的有机溶剂为非极性有机溶剂，包括己烷、石油醚、二氯甲烷等的一种或几种。
在一个或多个实施方案中，所述的1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯可以通过棕榈油分提物的酶法水解或者醇解制备得到。
在一个或多个实施方案中，所述酶法醇解所用的脂肪酶包括来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)或南极假丝酵母(Candidaantarctica)为来源的脂肪酶的一种或几种，所述酶法水解所用的脂肪酶包括来源于米根霉(Rhizopus oryzae)或疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)为来源的脂肪酶的一种或几种。
在一个或多个实施方案中，所述酶法醇解所用的脂肪酶包括LipaseCL“Amano”IM、LipozymeTLIM、LipaseTL100L、Lipozyme TL 100L中的一种或多种。
在一个或多个实施方案中，所述酶法水解所用的脂肪酶包括来源于疏棉状嗜热丝孢菌的Lipozyme TL 100L、Lipozyme TL IM，以及来源于米根霉的Lipase DF IM。
在一个或多个实施方案中，酶法水解或者醇解制备1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯的反应条件为：反应温度为25～50℃，反应时间为2～10h。
在一个或多个实施方案中，酶法醇解制备1-棕榈酸-2油酸甘油二酯的反应条件为：所述反应底物棕榈油分提物和乙醇的摩尔比为1:60～1:10；所述棕榈油分提物与有机溶剂(除反应底物乙醇外)的比例为1:3～1:0.5(w/v，g/mL)。
在一个或多个实施方案中，酶法醇解制备1,2-甘油二酯的反应条件为：所述有机溶剂包括乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮中的一种或多种混合而成的溶剂。
在一个或多个实施方案中，所述酶法醇解反应的体系水分活度为0.1～0.55，优选0.3～0.55。
在一个或多个实施方案中，所述酶法水解反应体系中水的添加量为棕榈油分提物重量的5％以上。
本发明还提供了上述制备方法在制备类可可脂中的应用。
本发明的有益效果：
本发明以1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯或者富含1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯的油脂为酰基受体，硬脂酸或其衍生物为酰基供体，在脂肪酶的催化下制备POS，酶促反应产物中其他种类的甘油三酯含量较少，产物中POS的含量较高，因此能提高POS的制备效率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明的实施方式不限于此。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
【检测方法】：
甘油二酯的检测方法：参考张瑜的博士学位论文(DHA和2-DHA-单甘酯的制备纯化及调节HepG2细胞脂质代谢的比较研究)的方法。
POS的检测方法：参考金俊的博士学位论文(芒果仁油基耐热型巧克力油脂的制备及其抗霜性能研究)的方法。
甘油二酯得率的计算方法：即实际上得到的甘油二酯(或者POS)的重量与理论上应该能得到的甘油二酯(或者POS)的重量之比。
一、1,2-甘油二酯的酶促醇解制备
实施例1：(溶剂种类的选择)
将2.0mmol软棕榈油中间分提物融化后与80mmol无水乙醇混合，加入2mL有机溶剂，调节反应体系的水分活度为0.53，随后加入脂肪酶Lipozyme TL IM(来源于疏棉状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus)，酶添加量(相对于油脂的质量分数)为8％，在30℃下进行酶促反应，磁力搅拌300r/min反应7h。反应结束后离心除酶，取上清液，检测得到反应粗产物中脂质组成，计算1,2-甘油二酯的得率，结果如表1所示。
由表可知，当加入丙酮、三氯甲烷或二氯甲烷作为醇解反应体系的有机溶剂时，均有较高的1,2-甘油二酯得率，尤其当加入丙酮时，反应体系中1,2-甘油二酯的得率最高，达到65.8％，较单独用乙醇(1,2-甘油二酯得率为54.3％)时提高了21.2％，有了显著的提高。而当加入其他的溶剂，例如正己烷和叔丁醇作为反应溶剂时，1,2-甘油二酯的得率明显较低。可见，不同的反应溶剂会影响酶促醇解制备1,2-甘油二酯的得率。因此，有机溶剂优选丙酮、三氯甲烷、二氯甲烷和乙醇。
表1.醇解反应中不同有机溶剂的种类对1,2-甘油二酯得率的影响
实施例2：(溶剂添加量)
将2.0mmol软棕榈油中间分提物融化后与80mmol无水乙醇混合，加入一定量的丙酮作为有机溶剂，调节反应体系的水分活度为0.53，随后加入脂肪酶Lipozyme TL 100L(来源于Thermomyces lanuginosus)，酶添加量(相对于油脂的质量分数)为4％，在30℃下进行酶促反应，磁力搅拌300r/min反应8h。反应结束后离心除酶，取上清液，经检测得到反应粗产物中脂质组成，计算1,2-甘油二酯的得率，结果如表2所示。
表2.醇解反应中丙酮添加量对1,2-甘油二酯得率的影响
丙酮添加量 1mL 2mL 3mL
1,2-甘油二酯得率 62.7％ 65.2％ 64.8％
实施例3：(水分活度)
将2.0mmol硬棕榈油中间分提物融化后与80mmol无水乙醇混合，加入2mL丙酮作为有机溶剂，用不同的饱和盐溶液调节反应体系的水分活度，随后加入脂肪酶Lipase CL“Amano”IM(来源于南极假丝酵母Candidaantarctica)，酶添加量(相对于油脂的质量分数)为10％，在35℃下进行酶促反应，磁力搅拌300r/min反应7h。反应结束后离心除酶，取上清液，检测得到反应粗产物中脂质组成，计算甘油二酯的得率，结果如表3所示。可见，不同的水分活度对1,2-甘油二酯的得率有较明显的影响，水分活度过高会明显降低1,2-甘油二酯的得率。
表3.醇解反应中不同水分活度对1,2-甘油二酯得率的影响
水分活度 0.11 0.33 0.43 0.53 0.97(对比例3)
1,2-甘油二酯得率 47.6％ 57.7％ 60.9％ 62.1％ 38.5％
实施例4：(底物摩尔比)
将2.0mmol硬棕榈油中间分提物融化后与一定量的无水乙醇混合，加入2mL丙酮作为有机溶剂，用饱和盐溶液调节反应体系的水分活度至0.53，随后加入脂肪酶Lipozyme TLIM(来源于Thermomyces lanuginosus)，酶添加量(相对于油脂的质量分数)为6％，在45℃下进行酶促反应，磁力搅拌300r/min反应3h。反应结束后离心除酶，取上清液，检测得到反应粗产物中脂质组成，计算1,2-甘油二酯的得率，结果如表4所示。
表4.醇解反应中不同底物摩尔比对1,2-甘油二酯得率的影响
实施例5：(酶的种类)
将2.0mmol软棕榈油中间分提物融化后与80mmol无水乙醇混合，加入2mL丙酮作为有机溶剂，用饱和盐溶液调节反应体系的水分活度至0.53，随后加入不同来源的脂肪酶，酶添加量(相对于油脂的质量分数)为6％，在30℃下进行酶促反应，磁力搅拌300r/min反应8h。反应结束后离心除酶，取上清液，检测得到反应粗产物中脂质组成，计算1,2-甘油二酯的得率，结果如表5所示。
表5.醇解反应中不同酶的种类对1,2-甘油二酯得率的影响
二、甘油二酯的酶促水解制备
实施例6(水添加量)
称取融化后的软棕榈油中间分提物样品10.0g，添加不同量的水于酶法反应器中，随后加入5％(w/w，酶/油)Lipozyme TL IM脂肪酶(来源于Thermomyces lanuginosus)，反应温度控制在35℃，在磁力搅拌的条件下反应4h。反应结束后，离心除去水和脂肪酶，得到富含甘油二酯的混合物，结果见表6。
表6不同水分含量对甘油二酯的得率的影响
水添加量 5％ 9％ 20％ 30％ 2％(对比例)
1,2-甘油二酯得率 42.6％ 51.8％ 49.5％ 48.7％ 25.3％
实施例7(温度和时间)
称取融化后的软棕榈油中间分提物样品10.0g，添加9％的水于酶法水解反应体系中，随后加入2％(酶/油，w/w)Lipozyme TL 100L脂肪酶(来源于Thermomyceslanuginosus)，反应温度控制在一定的温度，在磁力搅拌的条件下反应一段时间。反应结束后，离心除去水和脂肪酶，得到富含1,2甘油二酯的混合物，结果见表7。
表7不同温度和时间对1,2-甘油二酯的得率的影响
实施例8(酶种类)
称取融化后的软棕榈油中间分提物样品10.0g，添加9％的水于酶法水解反应体系中，随后分别加入5％(w/w，酶/油)的不同来源的脂肪酶，分别为Lipozyme TL IM(来源于Thermomyces lanuginosus)、Lipase DF IM(来源于Rhizopus oryzea)、Lipase AY"Amano"30SD(来源于Candida cylindracea)、Lipozyme RM IM(来源于Rhizomucor miehei)。反应温度控制在35℃，在磁力搅拌的条件下反应4h。反应结束后，离心除去水和脂肪酶，得到富含1,2-甘油二酯的混合物，结果见表8。
表8酶促反应体系中的脂肪酶对1,2-甘油二酯得率的影响
对由上述实施例1～8得到的富含1,2-甘油二酯的混合物进行纯化，得到高纯度的1,2-甘油二酯。纯化方法采用溶剂萃取和结晶，即10g富含1,2-甘油二酯的粗产物和正己烷混合(30mL～60mL)充分混合后，在-4℃～-10℃进行结晶，当出现大量的晶体后，摇动混合物，过滤后得富含1,2-甘油二酯的白色晶体；随后，将得到1,2-甘油二酯晶体和15mL，95％的乙腈水溶液或者84％的乙醇水溶液在常温下混合，并添加15mL正己烷进行萃取，待分层后，收集正己烷层，最终得到95％以上含量的1,2-甘油二酯。
三、1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯(POS)的酶法制备
实施例9(反应温度)
在实施例1条件下，以软棕榈油中间分提物为底物，以2mL丙酮为反应溶剂酶促醇解制备1,2-甘油二酯，反应后的粗产物经溶剂结晶和萃取法纯化后，得到95％以上纯度的1,2-甘油二酯，其中1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯是其中含量最高的一种1,2-甘油二酯。
称取2mmol上述条件下制备和纯化的1,2-甘油二酯，加入2.2mmol的硬脂酸乙烯酯，随后添加6％的Novozym 435脂肪酶(来源于Candidaantarctica)作为催化剂和1mL二氯甲烷，上述反应混合物在一定温度下反应一段时间。反应后，采用分子蒸馏(蒸馏温度180℃，压力2Pa)去除未反应的硬脂酸乙烯酯和偏甘油酯，分析粗产物中甘油三酯的含量和POS型甘油三酯的含量，结果如表9所示。
表9.不同反应温度和时间对分子蒸馏后产物中POS含量的影响
由表9可知，在不同的反应温度和时间下，经分子蒸馏后，纯化产物中甘油三酯的含量都大于97％，其中1-棕榈酸-2油酸-3-硬脂酸甘油三酯(POS)的含量在40％左右。目前发现的天然油脂中，除了可可脂中富含40％左右的POS以外，其他天然油脂中的POS含量一般不超过10％。
实施例10(反应体系)
在实施例1条件下，以硬棕榈油中间分提物为底物，以2mL丙酮为反应溶剂酶促醇解制备1,2-甘油二酯，反应后的粗产物经溶剂结晶和萃取法纯化后，得到95％以上纯度的1,2-甘油二酯。
称取2mmol上述条件下制备和纯化的1,2-甘油二酯，加入4mmol的硬脂酸乙酯，随后添加8％的Lipase DF IM脂肪酶(来源于Rhizopus oryzea)作为催化剂，反应体系中添加或者不添加1mL有机溶剂，上述反应混合物在60℃反应7h。反应后，采用分子蒸馏(蒸馏温度185℃，压力1Pa)去除未反应的硬脂酸乙酯和偏甘油酯，分析粗产物中甘油三酯的含量和POS型甘油三酯的含量，结果如表10所示。反应粗产物经蒸馏后，纯化产物中甘三酯的含量大于93％，其中甘油三酯中POS的含量大于47％。
表10反应体系对分子蒸馏后产物中POS含量的影响
实施例11(反应体系压力)
在实施例8条件下，以硬棕榈油中间分提物为底物，以Lipase DF IM为水解酶酶促水解制备1,2-甘油二酯，反应后的粗产物经溶剂结晶和萃取法纯化后，得到95％以上纯度的1,2-甘油二酯。
称取2mmol上述条件下制备和纯化的1,2-甘油二酯，加入3mmol的硬脂酸，随后添加8％的Lipase DF IM脂肪酶(来源于Rhizopus oryzea)作为催化剂，反应体系中不添加有机溶剂，上述反应混合物在一定的压力下，60℃反应7h。反应后，采用分子蒸馏(蒸馏温度175℃，压力0.8Pa)去除未反应的硬脂酸和偏甘油酯，分析粗产物中甘油三酯的含量和POS型甘油三酯的含量，结果如表11所示。
反应粗产物经蒸馏后，纯化产物中甘三酯的含量大于93％，其中甘油三酯中POS的含量大于50％。当酶促反应在一定的真空度下进行反应的时候，纯化后产物中POS的含量更高。
表11反应体系压力对分子蒸馏后产物中POS含量的影响
实施例12(脂肪酶种类)
在实施例8条件下，以硬棕榈油中间分提物为底物，以Lipase DF IM为水解酶酶促水解制备1,2-甘油二酯，反应后的粗产物经溶剂结晶和萃取法纯化后，得到95％以上纯度的1,2-甘油二酯。
称取2mmol上述条件下制备和纯化的1,2-甘油二酯，加入3mmol的硬脂酸，随后添加10％的不同来源的脂肪酶作为催化剂，选用的脂肪酶包括：来源于Rhizopus oryzea的Lipase DF IM、来源于Rhizomucor miehei的Lipozyme RM IM、来源于Burkaholderiacepacia的Lipase PS、来源于Thermomyces lanuginosus的Lipozyme TL IM、来源于Candida cylindracea的Lipase AY 30SD，反应体系中不添加有机溶剂，上述反应混合物在300Pa压力下，60℃反应7h。反应后，采用分子蒸馏(蒸馏温度185℃，压力3Pa)去除未反应的硬脂酸和偏甘油酯，分析粗产物中甘油三酯的含量和POS型甘油三酯的含量，结果如表12所示。
反应粗产物经蒸馏后，实验组中甘油三酯中POS的含量大于43％。对使用LipozymeTL IM和Lipase AY 30SD作为催化剂的对比组，其产物中POS的含量不超过26％。
表12脂肪酶种类对分子蒸馏后产物中POS含量的影响
实施例13(不同的油脂制备1,2-甘油二酯)
在实施例8条件下，分别以硬棕榈油中间分提物、大豆油和花生油为底物，以Lipase DF IM为水解酶酶促水解制备相应的1,2-甘油二酯，反应后的粗产物经溶剂结晶和萃取法纯化后，得到95％以上纯度的1,2-甘油二酯。
分别称取2mmol上述条件下制备和纯化的1,2-甘油二酯，加入4mmol的硬脂酸，随后添加10％的Lipase DF IM(来源于Rhizopus oryzea)作为催化剂，反应体系中不添加有机溶剂，上述反应混合物在300Pa压力下，60℃反应7h。反应后，采用分子蒸馏(蒸馏温度185℃，压力3Pa)去除未反应的硬脂酸和偏甘油酯，分析粗产物中甘油三酯的含量和POS型甘油三酯的含量，结果如表13所示。
反应粗产物经蒸馏后，纯化产物中甘三酯的含量大于96％，实验组中甘油三酯中POS的含量大于55％。当使用Lipozyme TL IM和Lipase AY 30SD作为催化剂时，其产物中POS的含量不超过10％。
表13油脂种类对分子蒸馏后产物中POS含量的影响
实施例14(不同来源1,2-甘油二酯)
在实施例1条件下，以软棕榈油中间分提物为底物，以2mL丙酮为反应溶剂酶促醇解制备1,2-甘油二酯，反应后的粗产物经溶剂结晶和萃取法纯化后，得到95％以上纯度的1,2-甘油二酯，使用合成的以软棕榈油中间分提物为原料合成的1,2-甘油二酯，或者使用市售1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯为反应底物合成POS。
分别称取2mmol上述合成的1,2-甘油二酯和市售的1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯，加入2.2mmol的硬脂酸乙烯酯，随后分别添加6％的Novozym 435脂肪酶(来源于Candidaantarctica)作为催化剂和1mL二氯甲烷，上述反应混合物在40℃下反应5h。反应后，采用分子蒸馏(蒸馏温度180℃，压力2Pa)去除未反应的硬脂酸乙烯酯和偏甘油酯，分析粗产物中甘油三酯的含量和POS型甘油三酯的含量，结果如表14所示。由表可知，由天然油脂制备的1,2-甘油二酯中1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯的含量相对较低，如果使用纯度较高的1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯作为底物合成POS，可以得到更高含量的POS，但是市售纯品1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯价格极其昂贵，且不能大量供应，因此使用市售1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯作为反应底物合成POS，应用前景小。
表14不同来源1,2-甘油二酯对分子蒸馏后产物中POS含量的影响
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (8)

1. 一种1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成方法，其特征在于，以1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯为酰基受体，硬脂酸或硬脂酸乙烯酯为酰基供体，以脂肪酶为催化剂，在20~60℃下反应2～8h后，得到富含1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的粗产物，其中，所述脂肪酶包括以Novozym 435、Lipozyme RM IM、Lipase PS、Lipase DF IM的任一种或几种；反应体系为无溶剂或者有机溶剂反应体系，所述有机溶剂为二氯甲烷、正己烷或乙醚；
所述1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯通过棕榈油分提物的酶法水解或者醇解制备得到；
酶法醇解制备1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯的反应条件为：将2.0mmol软棕榈油中间分提物融化后与80mmol无水乙醇混合，加入1~3mL丙酮，调节反应体系的水分活度为0.43~0.53，随后加入油脂的质量的8%脂肪酶Lipozyme TL IM或油脂的质量的6%脂肪酶Lipase TL100L，在30℃下进行酶促反应，磁力搅拌300r/min反应7h；
酶法水解制备1-棕榈酸-2-油酸甘油二酯的反应条件为：称取融化后的硬棕榈油中间分提物样品10.0g，添加9%的水于酶法水解反应体系中，以油脂的质量的5%脂肪酶LipozymeTL IM或Lipase DF IM为水解酶酶促水解制备1,2甘油二酯，反应温度控制在35-40℃，在磁力搅拌的条件下反应2-5h。
2.根据权利1中所述的方法，其特征在于，1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成中，温度20℃下反应时间为5-8h。
3.根据权利1中所述的方法，其特征在于，1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成中，温度20℃下反应时间为8h。
4.根据权利1中所述的方法，其特征在于，1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成中，温度40℃下反应时间为5-8h。
5.根据权利1中所述的方法，其特征在于，1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成中，温度40℃下反应时间为5h。
6.根据权利1中所述的方法，其特征在于，1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成中，温度60℃下反应时间为2-5h。
7.根据权利1中所述的方法，其特征在于，1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯的酶法合成中，温度60℃下反应时间为2h。
8.权利要求1~7任一项所述的酶法合成方法在制备类可可脂领域中的应用。
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