JP3839994B2 - ビタミン類の製造方法 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ステロール−脂肪酸エステル類又はビタミン類、特にトコフェロール類、トコトリエノール類の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
天然油脂、特に植物油脂には、ビタミン類（ビタミンＡ類、ビタミンＤ類、トコフェロール類、トコトリエノール類等）及びステロール類が多く含まれており、植物油脂の製造に際し、脱臭処理工程の副産物である、いわゆるスカムの中にかなりの量が分配されてくる。
【０００３】
従来、スカムからのトコフェロール類及びステロール類の分離回収法は、まず、スカム中の脂肪酸類及び脂肪酸エステル類（主としてグリセリド）を化学触媒の存在下で脂肪酸メチルに変換する。その後、（１）ステロール類を有機溶媒中で結晶化させて分離する、（２）脂肪酸メチルを蒸留により留去し、蒸留残渣に含まれているステロール類を有機溶媒中で結晶化して分離する、あるいは、（３）（２）の脂肪酸メチルを留去した蒸留残渣からステロール類とトコフェロール類を蒸留留分（以下、単に留分ということがある）として回収し、ステロール類を有機溶媒中で結晶化して分離する、等のステロール類の分離操作の後、トコフェロール類を高真空蒸留による濃縮、およびイオン交換クロマトグラフィー等により、分離、精製することにより、トコフェロール類及びステロール類が分離回収されている。
【０００４】
最近、特開平７−２８２７号公報には、スカムを１５０℃〜２５０℃で加熱して、スカム中に存在する脂肪酸類とステロール類のエステル（以下、ステロール−脂肪酸エステルという）を合成し、ついで蒸留することにより、トコフェロール類を回収し、蒸留残渣中のステロール−脂肪酸エステル類を分解後、ステロール類を回収することが記載されている。
【０００５】
しかし、この方法は、スカムを１５０℃〜２５０℃で加熱しなければならないため、エネルギー消費型の反応であるとともに、加熱による反応でトコフェロール類が変性したり、トコフェロール−脂肪酸エステル類等の副生物を生じるので、トコフェロール類の分離には好ましくない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、エネルギー非消費型であり、かつ有機溶媒をほとんど使用することなく、種々の夾雑物が含まれるスカム中で、選択的にステロール−脂肪酸エステル類を生成させ、ビタミン類とステロール−脂肪酸エステル類を分離する方法が望まれている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記課題を解決するためになされたものであり、本発明により上記課題が解決される。
【０００８】
すなわち、本発明は水酸基を有するビタミン類と、ステロール類と、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類とを含む混合物にエステラーゼを作用させて、ステロール−脂肪酸エステル類を選択的に製造させる工程；及び
得られたステロール−脂肪酸エステル類を分離する工程；
を含む、ステロール−脂肪酸エステル類の製造方法に関する。
【０００９】
好ましい実施態様においては、前記製造方法における分離工程が、蒸留、溶媒分画、膜分離又はイオン交換クロマトグラフィーであるか、もしくはこれらを組合せて分離する工程である。
【００１０】
好ましい実施態様においては、前記製造方法に用いる混合物が、油脂の製造工程において得られるスカム及び／又は回収物である。
【００１１】
より好ましい実施態様において、前記製造方法に用いる混合物が、スカムを蒸留して得られる留分である。
【００１２】
本発明はまた、水酸基を有するビタミン類と、ステロール類と、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類とを含む混合物にエステラーゼを作用させて、ステロール−脂肪酸エステル類を選択的に合成する工程；及び
得られた脂肪酸エステル類と水酸基を有するビタミン類とを分離する工程；
を含む、水酸基を有するビタミン類の製造方法に関する。
【００１３】
好ましい実施態様においては、前記製造方法の分離工程が、蒸留、溶媒分画、膜分離又はイオン交換クロマトグラフィーであるか、もしくはこれらを組合せて分離する工程である。
【００１４】
より好ましい実施態様においては、前記水酸基を有するビタミン類がトコフェロール類及び／又はトコトリエノール類である。
【００１５】
【発明の実施の形態】
本発明に用いられる水酸基を有するビタミン類としては、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ６（ピリドキサル、ピリドキシン、ピリドキサミン）、ビオチン、パントテン酸、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ（α−、β−、γ−、δ−トコフェロール及びα−、β−、γ−、δ−トコトリノール）等が挙げられる。ビタミン類というときは、ビタミンの混合物のみならず、１種類のビタミンのみの場合も含む。
【００１６】
ステロール類は、ステロイド骨格に水酸基を有する物質をいい、コレステロール、ブラシカステロール、カンペステロール、スチグマステロール、β−シトステロール、エルゴステロール等が挙げられる。ステロール類というときは、ステロールの混合物のみならず、１種類のステロールのみの場合も含む。
【００１７】
脂肪酸は、特に制限がなく、遊離の酸でもよく、塩であってもよい。中でも、炭素数が６〜２４程度の、飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐の脂肪酸が好ましい。脂肪酸類というときは、脂肪酸の混合物のみならず、１種類の脂肪酸のみの場合も含む。
【００１８】
脂肪酸エステル類は、脂肪酸とアルコールとのエステルであり、アルコールは一価のアルコールのみならず、多価アルコールを含んでもよい。従って、グリセロールの脂肪酸エステル（モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド）であってもよい。脂肪酸エステル類というときは、脂肪酸エステルの混合物のみならず、１種類の脂肪酸エステルのみの場合も含む。
【００１９】
エステラーゼとは、エステルを分解する酵素の総称であり、リパーゼ、エステラーゼを生産する微生物が含まれる。エステラーゼとしては、水酸基を有するビタミン類の存在下においても、選択的にステロール類と脂肪酸類とからステロール−脂肪酸エステル類を合成できるものであれば、どのような酵素でもよく、微生物、動物、植物など、いずれの起源の酵素であってもよい。リパーゼの場合、トリグリセリドのエステル結合の位置に対して非特異的であることが好ましいが、１，３−特異的であってもよい。市販のリパーゼも使用できる。酵素の形態は遊離型であっても、固定化したものであってもよく、酵素を保持した微生物菌体又はその固定化菌体であってもよい。固定化したリパーゼあるいは固定化した菌体は回収して再利用できるので、より好ましい。また、耐熱性、好熱性のリパーゼも好適に用いられる。
【００２０】
混合物中に、ビタミン類と、ステロール類と、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類とは任意の割合で存在できる。混合物中、ビタミン類は約１〜８０重量％、ステロール類は約１〜６０重量％、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類は約１〜９０重量％含まれていてもよい。エステラーゼは、ステロール類、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類の含量に応じて適切な量を選択すればよい。
【００２１】
反応は、適切な条件下、例えば、約１０℃〜８０℃、約ｐＨ２〜１０、水分約０〜８０％を含んだ系で行うことができる。有機溶媒は特に添加する必要はない。添加するとすれば、メタノール、エタノール等のアルコール類、アセトン、ヘキサン等の有機溶媒が用いられる。
【００２２】
本発明において、出発原料としては、油脂の製造工程の一つである脱臭工程において得られる副産物（スカム）及び脱酸工程における回収物が好適である。ここで、回収物とは、蒸留脱酸の回収物（蒸留物）及びアルカリ脱酸における回収物（いわゆるダーク油）をいう。スカム及び回収物には、水酸基を有するビタミン類と、ステロール類と、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類とが含まれており、本発明は、このスカム及び回収物中のステロール類をステロール−脂肪酸エステル類に変換し、このステロール−脂肪酸エステル類とビタミン類とを効率よく分離するのに有効である。
【００２３】
なお、特公平５−３３７１２号公報には、リパーゼを用いてステロール−脂肪酸エステル類が製造された例が報告されている。しかし、この反応は、反応基質がステロール類と脂肪酸類だけであるのに対し、本発明は、他の水酸基を有する化合物（ここでは、主としてビタミン類）が存在する場合、特に、ビタミン類等の種々の水酸基を含む化合物が存在する場合において、ステロール−脂肪酸エステル類の合成が効率よく進行するが、ビタミン類は、全くあるいはほとんど脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類と反応しないことを初めて明らかにしたものである。
【００２４】
以下、スカム及び回収物を例に挙げて、本発明のステロール−脂肪酸エステル類の製造方法及び、ビタミン類、特にトコフェロール類の分離方法を説明する。
【００２５】
スカム及び回収物は、食用油脂の製造工程における副生物である。植物油脂のスカム及び回収物中には、ビタミン類、特にトコフェロール類、トコトリエノール類、ステロール類が多く含まれるので、植物油脂のスカム及び回収物が好ましい。植物油脂としては、大豆油、米糠油、パーム油、サフラワー油、コーン油、菜種油、綿実油、オリーブ油、落花生油等が挙げられる。これらのスカム及び回収物の中には、ビタミン類（特に、トコフェロール類、トコトリエノール類）、ステロール類（ブラシカステロール、カンペステロール、スチグマステロール、β−シトステロール等）、遊離脂肪酸類、脂肪酸エステル類（トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド）、その他炭化水素類等が多く含まれている。
【００２６】
このスカム又は回収物にエステラーゼ（好ましくはリパーゼ）と必要に応じて水を添加して攪拌しながら反応させると、ステロール類と脂肪酸類とが選択的に反応して、ステロール−脂肪酸エステル類が生成する。
【００２７】
スカムにリパーゼを添加する前に、スカムを約０．００５〜０．５ｍｍＨｇ、好ましくは約０．０５〜０．１ｍｍＨｇの真空下で、約１５０℃〜２５０℃、好ましくは約２２０℃〜２４０℃で蒸留すると、スカムに含まれる有臭物質、グリセリド、炭化水素、高沸点物質等が除去され、次のエステル化反応がスムーズに進み、例えば、スカム中に含まれているステロール類の約７０〜９０％がステロール−脂肪酸エステル類に変換される。さらに、ステロール−脂肪酸エステル類の回収も効率よく行われる。
【００２８】
エステル化反応終了後、約０．００５〜０．５ｍｍＨｇ、好ましくは約０．０５〜０．１ｍｍＨｇの真空下で、約１００℃〜２７０℃、好ましくは約１５０℃〜２４０℃で蒸留する。ビタミン類、未反応の脂肪酸類、未反応のステロール類を留分に回収し、合成されたステロール−脂肪酸エステル類は、蒸留残渣から回収することができる。
【００２９】
回収した留分に、ビタミン類、未反応の脂肪酸類、未反応のステロール類等が含有されている場合は、さらにエステラーゼ（リパーゼ）と、必要に応じて水を添加して、エステル化反応を行うこともでき、反応後、蒸留画分（留分）にビタミン類、未反応の脂肪酸類、未反応のステロール類を回収し、ついで、残渣からステロール−脂肪酸エステル類を回収することもできる。
【００３０】
ビタミン類は、留分から回収される。留分に含まれているビタミン類、未反応の脂肪酸類、未反応のステロール類等を、例えば、蒸留により分離する。ビタミン類がトコフェロール類あるいはトコトリエノール類である場合、まず、約０．００５ｍｍＨｇ〜０．５ｍｍＨｇの真空条件下、約１４０℃〜２３０℃、好ましくは約１６０℃〜２００℃で蒸留することにより、まず、脂肪酸類が留分として回収される。ついで、やや温度を上げて、約１７０℃〜２６０℃、好ましくは約１８０℃〜２５５℃で蒸留することにより、ビタミン類（トコフェロール類、トコトリエノール類）が留分として回収される。混在していたステロール−脂肪酸エステル類は、残渣として回収される。なお、蒸留条件は真空度と温度により変化させることができる。
【００３１】
また、蒸留方法、装置は問わない。例えば、流下薄膜式蒸留装置、遠心式分子蒸留装置、精密蒸留装置等が用いられる。
【００３２】
エステル化反応終了後、蒸留操作のみならず、蒸留操作、溶媒分画、イオン交換クロマトグラフィー、膜分離などの分離操作を単独で、あるいは組合せて用いて、ステロール−脂肪酸エステル類、ビタミン類を分離、回収することができる。溶媒分画は、メタノール、エタノール等の有機溶媒を用いて行うことができる。イオン交換クロマトグラフィーは、カラムを用いる方法が一般的であり、ヘキサン、メタノール、エタノール等の有機溶媒を用いて行うことができる。
【００３３】
例えば、エステル化反応−蒸留−イオン交換クロマトグラフィー−蒸留、エステル化反応−蒸留−溶媒分画−イオン交換クロマトグラフィー、エステル化反応−イオン交換クロマトグラフィー−蒸留等、適切に組合せて行えばよい。
【００３４】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づいて説明するが、本発明はこの実施例に限定されない。
（実施例１）
大豆油スカムを原料として使用した。大豆油スカムは以下の組成を有していた。単位は重量％である。
遊離脂肪酸類 ３６．０％
ステロール類 １２．７％
トコフェロール類 １１．８％
（酸価：７１．９）
【００３５】
この大豆油スカム４ｇ、水１ｇの反応混液に、反応混液１ｇ当り、２００Ｕのリパーゼを添加して、３５℃、２０時間、５００ｒｐｍで振盪しながら、反応させた。なお、リパーゼ１Ｕは、１分間にオリーブ油から１μｍｏｌの脂肪酸を遊離させる酵素量をいう。反応終了後、遠心分離して油分を回収し、トリカプロインを内部標準とするガスクロマトグラフィーにより、トコフェロール類及びトコトリエノール類の合計含量を測定し、トコフェロール類重量とした。エステル化率は、反応前後の全ステロール含量から、以下の式で求めた。
【００３６】
【数１】
【００３７】
結果を表１に示す。なお、表１において、LIPOSAMは、昭和電工（株）製のリパーゼであり、Candidaは、Candida cylindracea由来のリパーゼ（以下、Candidaリパーゼという）であり、名糖産業（株）から販売されている。
【００３８】
【表１】
【００３９】
この結果より、Candidaリパーゼによりトコフェロール類は全くエステル化されず、ステロール類だけが選択的にエステル化されることが分かった。ステロール類が脂肪酸類でエステル化されると酸価は減少するはずであるが、本反応で酸価の上昇が認められた。この現象は、スカムに含まれていた脂肪酸エステル類（モノグリセリドを含む）が、リパーゼによる加水分解を受け、脂肪酸類が遊離したことによるものと考えられる。
【００４０】
（実施例２）
実施例１で使用した大豆油スカムを、流下薄膜式蒸留装置を用いて、０．２ｍｍＨｇ、２４０℃で蒸留し、留分を集めて蒸留大豆油スカムを得た。１７．７重量％の高沸点物質が蒸留残渣として除去された。蒸留大豆油スカムは以下の組成を有していた。単位は重量％である。
遊離脂肪酸類 ４１．５％
ステロール類 １６．６％
トコフェロール類 １４．５％
（酸価：８３．１）
【００４１】
この蒸留大豆油スカムと原料の大豆油スカムの酵素処理結果を比較した。反応条件は実施例１と同じであった。結果を表２に示す。
【００４２】
【表２】
【００４３】
この結果から、未蒸留スカム（原料のスカム）と比較して、蒸留大豆油スカムを原料として用いる方が、わずかではあるが、ステロール類がエステル化されやすいこと、および高いエステル化率が達成できることが示され、蒸留大豆油スカムが反応性の向上に寄与することが示された。また、蒸留大豆油スカムを用いてもその中に含まれるトコフェロール類はCandidaリパーゼによって全くエステル化されないことが認められた。さらに、分子量の大きな高沸点不純物が予め除去されるので、酵素反応によって合成されるステロール−脂肪酸エステル類の精製に有利である。
【００４４】
（実施例３）
スカム中のステロール−脂肪酸エステル類合成に対する水分の影響について検討した。実施例２で得られた蒸留大豆油スカムと水分の合計が５ｇとなるように混合し、Candidaリパーゼを１０００Ｕ加えて、３５℃、２０時間、５００ｒｐｍで攪拌しながら反応させた。結果を表３に示す。
【００４５】
【表３】
【００４６】
この結果から、ステロール類のエステル化反応には水分量はあまり影響しないこと及び水分量が変化してもトコフェロール類はCandidaリパーゼによってエステル化されなかったことが示された。
【００４７】
（実施例４）
スカム中のステロール−脂肪酸エステル類合成に対する温度の影響について検討した。実施例２の蒸留大豆油スカムを４ｇ、水１ｇ、Candidaリパーゼを１０００Ｕを加えて混合し、表４に記載の温度で、３．５時間及び２３時間、５００ｒｐｍで攪拌しながら反応させた。結果を表４に示す。
【００４８】
【表４】
【００４９】
反応初期（３．５時間）のステロール類のエステル化率は温度に依存したが、平衡状態に達したとき（２３時間）のエステル化率は３０〜３５℃のときに最大値を示した。この結果は、４０℃以上で反応を行うと酵素は徐々に失活することを示している。なお、温度を変化させてもトコフェロール類はCandidaリパーゼによってエステル化されないこともわかった。
【００５０】
（実施例５）
Candidaリパーゼによるスカム中のステロール類のエステル化反応におよぼす酵素量および反応時間の影響について検討した。実施例２で得られた蒸留大豆油スカムを４ｇ、水１ｇにCandidaリパーゼを反応混液１ｇ当り５０Ｕ、２００Ｕ、８００Ｕになるように加えて、３５℃で攪拌しながら反応させた。その結果を表５に示す。
【００５１】
【表５】
【００５２】
この結果より、酵素量を増加するとステロール類のエステル化速度の上昇が観察され、平衡状態に達する時間が短縮されることがわかった。しかし、最終的に到達するステロール類のエステル化率は、酵素量に依存しないことがわかった。また、酵素量を変えても、また、反応時間を延長してもトコフェロールの量の変化は認められなかった。
【００５３】
（実施例６）
実施例１で使用した大豆油スカム１０Ｋｇを出発原料として、トコフェロール類およびステロール−脂肪酸エステル類を分離、精製した。この精製操作における物質収支を表６に示す。
【００５４】
【表６】
【００５５】
まず、原料大豆油スカムを流下薄膜式蒸留装置を用いて、０．２ｍｍＨｇ、２４０℃で蒸留し、蒸留大豆油スカムを８．２３Ｋｇ得た（留分−１）。この蒸留大豆油スカム中のステロール類およびトコフェロール類の含量は、それぞれ、１３．３重量％と１３．７重量％であった。蒸留大豆油スカム（留分−１）を２０重量％の水と、この反応混液１ｇ当り５０ＵのCandidaリパーゼを加えて、３５℃、２４時間、攪拌しながら反応させた。この酵素処理により、遊離ステロール類の含有量は１３．３％から２．５％に減少した（エステル化率８１．２％）が、トコフェロール類の含有量の減少は、ほとんど認められなかった。なお、反応スケールが大きくなったことにより攪拌効率がよくなり、小スケールの場合に比べて反応効率が向上した。
【００５６】
酵素反応液から油分を回収し、脱水した後、０．２ｍｍＨｇ、２５０℃で蒸留して留分−２を回収した。この留分には、なお遊離のステロール類が混在していたので、再度、上記と同条件で酵素処理を行った。その結果、トコフェロール類の損失はほとんどなく、遊離ステロール類の含有量を０．５重量％まで減らすことができた（ステロール類のエステル化率は８１．５％）。
【００５７】
２回目の酵素処理を行った反応液から油分を回収し、脱水した後、０．２ｍｍＨｇ、１６０℃で蒸留し、留分３−１を回収した。ついで温度を２００℃に上げて留分３−２を回収し、さらに真空度０．０４ｍｍＨｇ、２３０℃で留分３−３を回収した後、最後に温度を２５５℃まで上げて留分３−４を回収した。この一連の蒸留工程における残渣を残渣−３とした。留分３−３は０．９５Ｋｇ回収され、この留分３−３の遊離ステロール類の含量及びトコフェロール類の含量は、それぞれ、２．９重量％と６５．３重量％であった。また、この留分３−３の中に初発の大豆油スカムに含まれていたトコフェロール類の５２．５％を回収することができた。
【００５８】
なお、留分３−２および留分３−４にもそれぞれ１７．１％と２３．８％のトコフェロールが含まれていた。実際の工業生産プロセスを想定すると、これらの留分は、次回の酵素処理の画分と混合して蒸留を行うことができるので、トコフェロール類の損失は留分３−１及び残渣の分だけということになる。従って、大豆油スカムからのトコフェロール類の精製において、酵素反応の工程を導入することにより、有機溶媒を全く使用せず、蒸留法と組合せるだけで、少なくとも８０％以上の高収率でトコフェロール類の含量を６５重量％以上に高められることが実証できた。
【００５９】
次に、上記工程で、残渣２と残渣３とを混合した画分（合計１．８４Ｋｇ）の遊離脂肪酸類の量、遊離ステロール類の量及びトコフェロール類の量はそれぞれ、１．１重量％、１．２重量％、及び２．２重量％であった。この画分を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析によると、ステロール−脂肪酸エステル類の展開位置に単一のスポットが検出された。なお、展開溶媒は、ヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝９０：１０：１（体積）であり、硫酸発色法で検出した。また、この画分をナトリウムメチラートの存在下で脂肪酸類をメチル化した後、ガスクロマトグラフィーにより分析した。その結果、脂肪酸メチル類とステロール類のみが１：１のモル比で検出できた。このことから、残渣２と残渣３との混合画分には、少なくとも９０％かそれ以上の純度を有するステロール−脂肪酸エステル類が含まれていることが推定された。
【００６０】
（実施例７）
実施例２で得られた蒸留大豆油スカム２００ｇを、再度０．２ｍｍＨｇ、２００℃で蒸留し、脱酸大豆油スカム（以下、脱酸スカムという）を蒸留残渣として４８．１ｇ回収した。脱酸スカムの組成は、以下の通りであった。
遊離脂肪酸類 １．４重量％
ステロール類 ３１．８重量％
トコフェロール類 ２７．３重量％
モノグリセリド類 ０．４重量％ （酸価 ２．８）
【００６１】
この脱酸スカムに、表７に示す組成で、モノオレイングリセリド及びオレイン酸、水、リパーゼを加えて、反応系１〜５の反応混液を作成した。
【００６２】
【表７】
【００６３】
この反応混液を３５℃、２４時間攪拌しながら反応させ、反応前後の酸価、モノグリセリド類含量、ステロール類含量、トコフェロール類含量を測定した。結果を表８に示す
【００６４】
【表８】
【００６５】
反応系１にはほとんど遊離脂肪酸類が含まれていないにも係わらず、ステロール類は効率よくエステル化されていた。また、反応によりモノグリセリドが加水分解されていることから、加水分解によって生じた脂肪酸類がステロール類とのエステル化反応の基質として使用されていることが示唆された。なお、反応系中の遊離脂肪酸類が多いほど、ステロール類のエステル化率が上昇することが認められたが、これは、反応混液の流動性と関連していると思われる。
【００６６】
【発明の効果】
本発明により、リパーゼを触媒として用いると、水酸基を有するビタミン類が存在しても、ステロール類と脂肪酸類とのエステル化反応が選択的に進行する。特に、植物油などの脱臭工程において生じるスカム中でもこの酵素反応が効率よく進行することを初めて明らかにした。従来ビタミン類の分別を困難にしていたステロール類を、有機溶媒を全く使用することなく除去できるので、ビタミン類、特に、トコフェロール類を安全かつ収率よく、高純度に回収するのに有益である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、ステロール−脂肪酸エステル類又はビタミン類、特にトコフェロール類、トコトリエノール類の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
天然油脂、特に植物油脂には、ビタミン類（ビタミンＡ類、ビタミンＤ類、トコフェロール類、トコトリエノール類等）及びステロール類が多く含まれており、植物油脂の製造に際し、脱臭処理工程の副産物である、いわゆるスカムの中にかなりの量が分配されてくる。
【０００３】
従来、スカムからのトコフェロール類及びステロール類の分離回収法は、まず、スカム中の脂肪酸類及び脂肪酸エステル類（主としてグリセリド）を化学触媒の存在下で脂肪酸メチルに変換する。その後、（１）ステロール類を有機溶媒中で結晶化させて分離する、（２）脂肪酸メチルを蒸留により留去し、蒸留残渣に含まれているステロール類を有機溶媒中で結晶化して分離する、あるいは、（３）（２）の脂肪酸メチルを留去した蒸留残渣からステロール類とトコフェロール類を蒸留留分（以下、単に留分ということがある）として回収し、ステロール類を有機溶媒中で結晶化して分離する、等のステロール類の分離操作の後、トコフェロール類を高真空蒸留による濃縮、およびイオン交換クロマトグラフィー等により、分離、精製することにより、トコフェロール類及びステロール類が分離回収されている。
【０００４】
最近、特開平７−２８２７号公報には、スカムを１５０℃〜２５０℃で加熱して、スカム中に存在する脂肪酸類とステロール類のエステル（以下、ステロール−脂肪酸エステルという）を合成し、ついで蒸留することにより、トコフェロール類を回収し、蒸留残渣中のステロール−脂肪酸エステル類を分解後、ステロール類を回収することが記載されている。
【０００５】
しかし、この方法は、スカムを１５０℃〜２５０℃で加熱しなければならないため、エネルギー消費型の反応であるとともに、加熱による反応でトコフェロール類が変性したり、トコフェロール−脂肪酸エステル類等の副生物を生じるので、トコフェロール類の分離には好ましくない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、エネルギー非消費型であり、かつ有機溶媒をほとんど使用することなく、種々の夾雑物が含まれるスカム中で、選択的にステロール−脂肪酸エステル類を生成させ、ビタミン類とステロール−脂肪酸エステル類を分離する方法が望まれている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記課題を解決するためになされたものであり、本発明により上記課題が解決される。
【０００８】
すなわち、本発明は水酸基を有するビタミン類と、ステロール類と、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類とを含む混合物にエステラーゼを作用させて、ステロール−脂肪酸エステル類を選択的に製造させる工程；及び
得られたステロール−脂肪酸エステル類を分離する工程；
を含む、ステロール−脂肪酸エステル類の製造方法に関する。
【０００９】
好ましい実施態様においては、前記製造方法における分離工程が、蒸留、溶媒分画、膜分離又はイオン交換クロマトグラフィーであるか、もしくはこれらを組合せて分離する工程である。
【００１０】
好ましい実施態様においては、前記製造方法に用いる混合物が、油脂の製造工程において得られるスカム及び／又は回収物である。
【００１１】
より好ましい実施態様において、前記製造方法に用いる混合物が、スカムを蒸留して得られる留分である。
【００１２】
本発明はまた、水酸基を有するビタミン類と、ステロール類と、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類とを含む混合物にエステラーゼを作用させて、ステロール−脂肪酸エステル類を選択的に合成する工程；及び
得られた脂肪酸エステル類と水酸基を有するビタミン類とを分離する工程；
を含む、水酸基を有するビタミン類の製造方法に関する。
【００１３】
好ましい実施態様においては、前記製造方法の分離工程が、蒸留、溶媒分画、膜分離又はイオン交換クロマトグラフィーであるか、もしくはこれらを組合せて分離する工程である。
【００１４】
より好ましい実施態様においては、前記水酸基を有するビタミン類がトコフェロール類及び／又はトコトリエノール類である。
【００１５】
【発明の実施の形態】
本発明に用いられる水酸基を有するビタミン類としては、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ６（ピリドキサル、ピリドキシン、ピリドキサミン）、ビオチン、パントテン酸、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ（α−、β−、γ−、δ−トコフェロール及びα−、β−、γ−、δ−トコトリノール）等が挙げられる。ビタミン類というときは、ビタミンの混合物のみならず、１種類のビタミンのみの場合も含む。
【００１６】
ステロール類は、ステロイド骨格に水酸基を有する物質をいい、コレステロール、ブラシカステロール、カンペステロール、スチグマステロール、β−シトステロール、エルゴステロール等が挙げられる。ステロール類というときは、ステロールの混合物のみならず、１種類のステロールのみの場合も含む。
【００１７】
脂肪酸は、特に制限がなく、遊離の酸でもよく、塩であってもよい。中でも、炭素数が６〜２４程度の、飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐の脂肪酸が好ましい。脂肪酸類というときは、脂肪酸の混合物のみならず、１種類の脂肪酸のみの場合も含む。
【００１８】
脂肪酸エステル類は、脂肪酸とアルコールとのエステルであり、アルコールは一価のアルコールのみならず、多価アルコールを含んでもよい。従って、グリセロールの脂肪酸エステル（モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド）であってもよい。脂肪酸エステル類というときは、脂肪酸エステルの混合物のみならず、１種類の脂肪酸エステルのみの場合も含む。
【００１９】
エステラーゼとは、エステルを分解する酵素の総称であり、リパーゼ、エステラーゼを生産する微生物が含まれる。エステラーゼとしては、水酸基を有するビタミン類の存在下においても、選択的にステロール類と脂肪酸類とからステロール−脂肪酸エステル類を合成できるものであれば、どのような酵素でもよく、微生物、動物、植物など、いずれの起源の酵素であってもよい。リパーゼの場合、トリグリセリドのエステル結合の位置に対して非特異的であることが好ましいが、１，３−特異的であってもよい。市販のリパーゼも使用できる。酵素の形態は遊離型であっても、固定化したものであってもよく、酵素を保持した微生物菌体又はその固定化菌体であってもよい。固定化したリパーゼあるいは固定化した菌体は回収して再利用できるので、より好ましい。また、耐熱性、好熱性のリパーゼも好適に用いられる。
【００２０】
混合物中に、ビタミン類と、ステロール類と、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類とは任意の割合で存在できる。混合物中、ビタミン類は約１〜８０重量％、ステロール類は約１〜６０重量％、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類は約１〜９０重量％含まれていてもよい。エステラーゼは、ステロール類、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類の含量に応じて適切な量を選択すればよい。
【００２１】
反応は、適切な条件下、例えば、約１０℃〜８０℃、約ｐＨ２〜１０、水分約０〜８０％を含んだ系で行うことができる。有機溶媒は特に添加する必要はない。添加するとすれば、メタノール、エタノール等のアルコール類、アセトン、ヘキサン等の有機溶媒が用いられる。
【００２２】
本発明において、出発原料としては、油脂の製造工程の一つである脱臭工程において得られる副産物（スカム）及び脱酸工程における回収物が好適である。ここで、回収物とは、蒸留脱酸の回収物（蒸留物）及びアルカリ脱酸における回収物（いわゆるダーク油）をいう。スカム及び回収物には、水酸基を有するビタミン類と、ステロール類と、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類とが含まれており、本発明は、このスカム及び回収物中のステロール類をステロール−脂肪酸エステル類に変換し、このステロール−脂肪酸エステル類とビタミン類とを効率よく分離するのに有効である。
【００２３】
なお、特公平５−３３７１２号公報には、リパーゼを用いてステロール−脂肪酸エステル類が製造された例が報告されている。しかし、この反応は、反応基質がステロール類と脂肪酸類だけであるのに対し、本発明は、他の水酸基を有する化合物（ここでは、主としてビタミン類）が存在する場合、特に、ビタミン類等の種々の水酸基を含む化合物が存在する場合において、ステロール−脂肪酸エステル類の合成が効率よく進行するが、ビタミン類は、全くあるいはほとんど脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類と反応しないことを初めて明らかにしたものである。
【００２４】
以下、スカム及び回収物を例に挙げて、本発明のステロール−脂肪酸エステル類の製造方法及び、ビタミン類、特にトコフェロール類の分離方法を説明する。
【００２５】
スカム及び回収物は、食用油脂の製造工程における副生物である。植物油脂のスカム及び回収物中には、ビタミン類、特にトコフェロール類、トコトリエノール類、ステロール類が多く含まれるので、植物油脂のスカム及び回収物が好ましい。植物油脂としては、大豆油、米糠油、パーム油、サフラワー油、コーン油、菜種油、綿実油、オリーブ油、落花生油等が挙げられる。これらのスカム及び回収物の中には、ビタミン類（特に、トコフェロール類、トコトリエノール類）、ステロール類（ブラシカステロール、カンペステロール、スチグマステロール、β−シトステロール等）、遊離脂肪酸類、脂肪酸エステル類（トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド）、その他炭化水素類等が多く含まれている。
【００２６】
このスカム又は回収物にエステラーゼ（好ましくはリパーゼ）と必要に応じて水を添加して攪拌しながら反応させると、ステロール類と脂肪酸類とが選択的に反応して、ステロール−脂肪酸エステル類が生成する。
【００２７】
スカムにリパーゼを添加する前に、スカムを約０．００５〜０．５ｍｍＨｇ、好ましくは約０．０５〜０．１ｍｍＨｇの真空下で、約１５０℃〜２５０℃、好ましくは約２２０℃〜２４０℃で蒸留すると、スカムに含まれる有臭物質、グリセリド、炭化水素、高沸点物質等が除去され、次のエステル化反応がスムーズに進み、例えば、スカム中に含まれているステロール類の約７０〜９０％がステロール−脂肪酸エステル類に変換される。さらに、ステロール−脂肪酸エステル類の回収も効率よく行われる。
【００２８】
エステル化反応終了後、約０．００５〜０．５ｍｍＨｇ、好ましくは約０．０５〜０．１ｍｍＨｇの真空下で、約１００℃〜２７０℃、好ましくは約１５０℃〜２４０℃で蒸留する。ビタミン類、未反応の脂肪酸類、未反応のステロール類を留分に回収し、合成されたステロール−脂肪酸エステル類は、蒸留残渣から回収することができる。
【００２９】
回収した留分に、ビタミン類、未反応の脂肪酸類、未反応のステロール類等が含有されている場合は、さらにエステラーゼ（リパーゼ）と、必要に応じて水を添加して、エステル化反応を行うこともでき、反応後、蒸留画分（留分）にビタミン類、未反応の脂肪酸類、未反応のステロール類を回収し、ついで、残渣からステロール−脂肪酸エステル類を回収することもできる。
【００３０】
ビタミン類は、留分から回収される。留分に含まれているビタミン類、未反応の脂肪酸類、未反応のステロール類等を、例えば、蒸留により分離する。ビタミン類がトコフェロール類あるいはトコトリエノール類である場合、まず、約０．００５ｍｍＨｇ〜０．５ｍｍＨｇの真空条件下、約１４０℃〜２３０℃、好ましくは約１６０℃〜２００℃で蒸留することにより、まず、脂肪酸類が留分として回収される。ついで、やや温度を上げて、約１７０℃〜２６０℃、好ましくは約１８０℃〜２５５℃で蒸留することにより、ビタミン類（トコフェロール類、トコトリエノール類）が留分として回収される。混在していたステロール−脂肪酸エステル類は、残渣として回収される。なお、蒸留条件は真空度と温度により変化させることができる。
【００３１】
また、蒸留方法、装置は問わない。例えば、流下薄膜式蒸留装置、遠心式分子蒸留装置、精密蒸留装置等が用いられる。
【００３２】
エステル化反応終了後、蒸留操作のみならず、蒸留操作、溶媒分画、イオン交換クロマトグラフィー、膜分離などの分離操作を単独で、あるいは組合せて用いて、ステロール−脂肪酸エステル類、ビタミン類を分離、回収することができる。溶媒分画は、メタノール、エタノール等の有機溶媒を用いて行うことができる。イオン交換クロマトグラフィーは、カラムを用いる方法が一般的であり、ヘキサン、メタノール、エタノール等の有機溶媒を用いて行うことができる。
【００３３】
例えば、エステル化反応−蒸留−イオン交換クロマトグラフィー−蒸留、エステル化反応−蒸留−溶媒分画−イオン交換クロマトグラフィー、エステル化反応−イオン交換クロマトグラフィー−蒸留等、適切に組合せて行えばよい。
【００３４】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づいて説明するが、本発明はこの実施例に限定されない。
（実施例１）
大豆油スカムを原料として使用した。大豆油スカムは以下の組成を有していた。単位は重量％である。
遊離脂肪酸類 ３６．０％
ステロール類 １２．７％
トコフェロール類 １１．８％
（酸価：７１．９）
【００３５】
この大豆油スカム４ｇ、水１ｇの反応混液に、反応混液１ｇ当り、２００Ｕのリパーゼを添加して、３５℃、２０時間、５００ｒｐｍで振盪しながら、反応させた。なお、リパーゼ１Ｕは、１分間にオリーブ油から１μｍｏｌの脂肪酸を遊離させる酵素量をいう。反応終了後、遠心分離して油分を回収し、トリカプロインを内部標準とするガスクロマトグラフィーにより、トコフェロール類及びトコトリエノール類の合計含量を測定し、トコフェロール類重量とした。エステル化率は、反応前後の全ステロール含量から、以下の式で求めた。
【００３６】
【数１】
結果を表１に示す。なお、表１において、LIPOSAMは、昭和電工（株）製のリパーゼであり、Candidaは、Candida cylindracea由来のリパーゼ（以下、Candidaリパーゼという）であり、名糖産業（株）から販売されている。
【００３８】
【表１】
この結果より、Candidaリパーゼによりトコフェロール類は全くエステル化されず、ステロール類だけが選択的にエステル化されることが分かった。ステロール類が脂肪酸類でエステル化されると酸価は減少するはずであるが、本反応で酸価の上昇が認められた。この現象は、スカムに含まれていた脂肪酸エステル類（モノグリセリドを含む）が、リパーゼによる加水分解を受け、脂肪酸類が遊離したことによるものと考えられる。
【００４０】
（実施例２）
実施例１で使用した大豆油スカムを、流下薄膜式蒸留装置を用いて、０．２ｍｍＨｇ、２４０℃で蒸留し、留分を集めて蒸留大豆油スカムを得た。１７．７重量％の高沸点物質が蒸留残渣として除去された。蒸留大豆油スカムは以下の組成を有していた。単位は重量％である。
遊離脂肪酸類 ４１．５％
ステロール類 １６．６％
トコフェロール類 １４．５％
（酸価：８３．１）
【００４１】
この蒸留大豆油スカムと原料の大豆油スカムの酵素処理結果を比較した。反応条件は実施例１と同じであった。結果を表２に示す。
【００４２】
【表２】
この結果から、未蒸留スカム（原料のスカム）と比較して、蒸留大豆油スカムを原料として用いる方が、わずかではあるが、ステロール類がエステル化されやすいこと、および高いエステル化率が達成できることが示され、蒸留大豆油スカムが反応性の向上に寄与することが示された。また、蒸留大豆油スカムを用いてもその中に含まれるトコフェロール類はCandidaリパーゼによって全くエステル化されないことが認められた。さらに、分子量の大きな高沸点不純物が予め除去されるので、酵素反応によって合成されるステロール−脂肪酸エステル類の精製に有利である。
【００４４】
（実施例３）
スカム中のステロール−脂肪酸エステル類合成に対する水分の影響について検討した。実施例２で得られた蒸留大豆油スカムと水分の合計が５ｇとなるように混合し、Candidaリパーゼを１０００Ｕ加えて、３５℃、２０時間、５００ｒｐｍで攪拌しながら反応させた。結果を表３に示す。
【００４５】
【表３】
この結果から、ステロール類のエステル化反応には水分量はあまり影響しないこと及び水分量が変化してもトコフェロール類はCandidaリパーゼによってエステル化されなかったことが示された。
【００４７】
（実施例４）
スカム中のステロール−脂肪酸エステル類合成に対する温度の影響について検討した。実施例２の蒸留大豆油スカムを４ｇ、水１ｇ、Candidaリパーゼを１０００Ｕを加えて混合し、表４に記載の温度で、３．５時間及び２３時間、５００ｒｐｍで攪拌しながら反応させた。結果を表４に示す。
【００４８】
【表４】
反応初期（３．５時間）のステロール類のエステル化率は温度に依存したが、平衡状態に達したとき（２３時間）のエステル化率は３０〜３５℃のときに最大値を示した。この結果は、４０℃以上で反応を行うと酵素は徐々に失活することを示している。なお、温度を変化させてもトコフェロール類はCandidaリパーゼによってエステル化されないこともわかった。
【００５０】
（実施例５）
Candidaリパーゼによるスカム中のステロール類のエステル化反応におよぼす酵素量および反応時間の影響について検討した。実施例２で得られた蒸留大豆油スカムを４ｇ、水１ｇにCandidaリパーゼを反応混液１ｇ当り５０Ｕ、２００Ｕ、８００Ｕになるように加えて、３５℃で攪拌しながら反応させた。その結果を表５に示す。
【００５１】
【表５】
この結果より、酵素量を増加するとステロール類のエステル化速度の上昇が観察され、平衡状態に達する時間が短縮されることがわかった。しかし、最終的に到達するステロール類のエステル化率は、酵素量に依存しないことがわかった。また、酵素量を変えても、また、反応時間を延長してもトコフェロールの量の変化は認められなかった。
【００５３】
（実施例６）
実施例１で使用した大豆油スカム１０Ｋｇを出発原料として、トコフェロール類およびステロール−脂肪酸エステル類を分離、精製した。この精製操作における物質収支を表６に示す。
【００５４】
【表６】
まず、原料大豆油スカムを流下薄膜式蒸留装置を用いて、０．２ｍｍＨｇ、２４０℃で蒸留し、蒸留大豆油スカムを８．２３Ｋｇ得た（留分−１）。この蒸留大豆油スカム中のステロール類およびトコフェロール類の含量は、それぞれ、１３．３重量％と１３．７重量％であった。蒸留大豆油スカム（留分−１）を２０重量％の水と、この反応混液１ｇ当り５０ＵのCandidaリパーゼを加えて、３５℃、２４時間、攪拌しながら反応させた。この酵素処理により、遊離ステロール類の含有量は１３．３％から２．５％に減少した（エステル化率８１．２％）が、トコフェロール類の含有量の減少は、ほとんど認められなかった。なお、反応スケールが大きくなったことにより攪拌効率がよくなり、小スケールの場合に比べて反応効率が向上した。
【００５６】
酵素反応液から油分を回収し、脱水した後、０．２ｍｍＨｇ、２５０℃で蒸留して留分−２を回収した。この留分には、なお遊離のステロール類が混在していたので、再度、上記と同条件で酵素処理を行った。その結果、トコフェロール類の損失はほとんどなく、遊離ステロール類の含有量を０．５重量％まで減らすことができた（ステロール類のエステル化率は８１．５％）。
【００５７】
２回目の酵素処理を行った反応液から油分を回収し、脱水した後、０．２ｍｍＨｇ、１６０℃で蒸留し、留分３−１を回収した。ついで温度を２００℃に上げて留分３−２を回収し、さらに真空度０．０４ｍｍＨｇ、２３０℃で留分３−３を回収した後、最後に温度を２５５℃まで上げて留分３−４を回収した。この一連の蒸留工程における残渣を残渣−３とした。留分３−３は０．９５Ｋｇ回収され、この留分３−３の遊離ステロール類の含量及びトコフェロール類の含量は、それぞれ、２．９重量％と６５．３重量％であった。また、この留分３−３の中に初発の大豆油スカムに含まれていたトコフェロール類の５２．５％を回収することができた。
【００５８】
なお、留分３−２および留分３−４にもそれぞれ１７．１％と２３．８％のトコフェロールが含まれていた。実際の工業生産プロセスを想定すると、これらの留分は、次回の酵素処理の画分と混合して蒸留を行うことができるので、トコフェロール類の損失は留分３−１及び残渣の分だけということになる。従って、大豆油スカムからのトコフェロール類の精製において、酵素反応の工程を導入することにより、有機溶媒を全く使用せず、蒸留法と組合せるだけで、少なくとも８０％以上の高収率でトコフェロール類の含量を６５重量％以上に高められることが実証できた。
【００５９】
次に、上記工程で、残渣２と残渣３とを混合した画分（合計１．８４Ｋｇ）の遊離脂肪酸類の量、遊離ステロール類の量及びトコフェロール類の量はそれぞれ、１．１重量％、１．２重量％、及び２．２重量％であった。この画分を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析によると、ステロール−脂肪酸エステル類の展開位置に単一のスポットが検出された。なお、展開溶媒は、ヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝９０：１０：１（体積）であり、硫酸発色法で検出した。また、この画分をナトリウムメチラートの存在下で脂肪酸類をメチル化した後、ガスクロマトグラフィーにより分析した。その結果、脂肪酸メチル類とステロール類のみが１：１のモル比で検出できた。このことから、残渣２と残渣３との混合画分には、少なくとも９０％かそれ以上の純度を有するステロール−脂肪酸エステル類が含まれていることが推定された。
【００６０】
（実施例７）
実施例２で得られた蒸留大豆油スカム２００ｇを、再度０．２ｍｍＨｇ、２００℃で蒸留し、脱酸大豆油スカム（以下、脱酸スカムという）を蒸留残渣として４８．１ｇ回収した。脱酸スカムの組成は、以下の通りであった。
遊離脂肪酸類 １．４重量％
ステロール類 ３１．８重量％
トコフェロール類 ２７．３重量％
モノグリセリド類 ０．４重量％ （酸価 ２．８）
【００６１】
この脱酸スカムに、表７に示す組成で、モノオレイングリセリド及びオレイン酸、水、リパーゼを加えて、反応系１〜５の反応混液を作成した。
【００６２】
【表７】
この反応混液を３５℃、２４時間攪拌しながら反応させ、反応前後の酸価、モノグリセリド類含量、ステロール類含量、トコフェロール類含量を測定した。結果を表８に示す
【００６４】
【表８】
反応系１にはほとんど遊離脂肪酸類が含まれていないにも係わらず、ステロール類は効率よくエステル化されていた。また、反応によりモノグリセリドが加水分解されていることから、加水分解によって生じた脂肪酸類がステロール類とのエステル化反応の基質として使用されていることが示唆された。なお、反応系中の遊離脂肪酸類が多いほど、ステロール類のエステル化率が上昇することが認められたが、これは、反応混液の流動性と関連していると思われる。
【００６６】
【発明の効果】
本発明により、リパーゼを触媒として用いると、水酸基を有するビタミン類が存在しても、ステロール類と脂肪酸類とのエステル化反応が選択的に進行する。特に、植物油などの脱臭工程において生じるスカム中でもこの酵素反応が効率よく進行することを初めて明らかにした。従来ビタミン類の分別を困難にしていたステロール類を、有機溶媒を全く使用することなく除去できるので、ビタミン類、特に、トコフェロール類を安全かつ収率よく、高純度に回収するのに有益である。
Claims (7)
- 水酸基を有するビタミン類と、ステロール類と、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類とを含む混合物にエステラーゼを作用させて、ステロール−脂肪酸エステル類を選択的に製造させる工程；及び
得られたステロール−脂肪酸エステル類を分離する工程；
を含む、ステロール−脂肪酸エステル類の製造方法。 - 前記分離工程が、蒸留、溶媒分画、膜分離又はイオン交換クロマトグラフィーであるか、もしくはこれらを組合せて分離する工程である、請求項１に記載のステロール−脂肪酸エステル類の製造方法。
- 前記混合物が油脂の製造工程において得られるスカム及び／又は回収物である、請求項１または２に記載の方法。
- 前記混合物がスカムを蒸留して得られる留分である、請求項１ないし３のいずれかの項に記載の方法。
- 水酸基を有するビタミン類と、ステロール類と、脂肪酸類及び／又は脂肪酸エステル類とを含む混合物にエステラーゼを作用させて、ステロール−脂肪酸エステル類を選択的に合成する工程；及び
得られたステロール脂肪酸エステル類と水酸基を有するビタミン類とを分離する工程；
を含む、水酸基を有するビタミン類の回収方法。 - 前記分離工程が、蒸留、溶媒分画、膜分離又はイオン交換クロマトグラフィーであるか、もしくはこれらを組合せて分離する工程である、請求項５に記載の水酸基を有するビタミン類の回収方法。
- 前記ビタミン類がトコフェロール類及び／又はトコトリエノール類である、請求項５または６に記載の水酸基を有するビタミン類の回収方法。
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