CN114369604B

CN114369604B - 一个玉米抗盐qtl基因及其应用

Info

Publication number: CN114369604B
Application number: CN202210147584.XA
Authority: CN
Inventors: 蒋才富; 周雪雁
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2022-02-17
Filing date: 2022-02-17
Publication date: 2023-06-23
Anticipated expiration: 2042-02-17
Also published as: CN114369604A

Abstract

本申请公开了一个玉米抗盐QTL基因及其应用。所述玉米抗盐QTL基因序列为SEQ ID No.3所示的序列或其变体。在此抗盐QTL基因内，鉴定了在抗感材料间存在差异的分子标记。该标记与玉米抗盐性连锁，可作为玉米抗盐分子标记，本发明还提供了检测该抗盐分子标记的引物和方法。由于玉米抗盐属数量性状遗传，表型分析耗时费力，本发明所述的QTL基因、分子标记和引物可以应用于玉米的抗盐育种。

Description

一个玉米抗盐QTL基因及其应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及本发明涉及一个玉米抗盐QTL基因、及其分子标记与应用。

背景技术

盐碱胁迫是自然界中最常见的非生物胁迫之一,由于它分布广泛，对农业生产造成了极大的负面影响(Munns&Tester,2008；Zhu,2016)。目前，我国有近930万公顷的耕地受到盐渍化的侵害，而该现象仍在日益加剧，这已严重制约了我国的农业可持续发展(赵可夫等,2001)。因此，深入研究主要作物适应盐胁迫环境的分子机制，鉴定可用于作物抗盐改良的基因，培育抗盐农作物品种，是保障我国农业可持续发展和国家粮食安全的必要举措。

玉米自然群体有着丰富的遗传多样性，已有研究表明不同玉米自交系的抗盐性存在极大差异，这说明玉米自然群体中存在丰富的遗传变异，可应用于抗盐遗传改良(Zhanget al.,2019；Luo et al.,2019；Xie et al.,2019)。近年来，已有的研究主要集中在利用GWAS和QTL分析的方法，鉴定与抗盐性变异相关的遗传位点，而到目前为止只有为数不多的玉米抗盐QTL被精细定位或克隆，这成为玉米抗盐分子标记开发和抗盐玉米培育的主要瓶颈。因此，挖掘玉米自然群体中的抗盐遗传变异，并解析抗盐机制，开发用于抗盐玉米培育的分子标记已成为抗盐玉米改良的首要关键任务。

玉米抗盐应答过程主要包括去离子毒害和渗透调节两个方面。当生长在盐胁迫条件下，由于植物根系周围积累了过多的盐离子,会造成渗透胁迫，进而减少根系对水分的吸收；维持玉米中的Na⁺稳态，去离子毒害，可减少Na⁺由根往地上部的运输来促进地上部Na⁺排斥，其次通过将Na⁺滞留在茎秆中来减少叶片中的Na⁺积累，另外通过将Na⁺区域化到液泡中来降低细胞质中的Na⁺浓度(Zhao et al.,2010；Zhang et al.,2018,2019)。由于当前参与离子毒害和渗透胁迫调节过程的遗传位点十分有限，因此克隆与其相关的QTL基因对抗盐玉米的改良具有重要意义。

发明内容

为了克服现有技术的不足，丰富此类遗传位点。发明人对玉米自然群体的474份自交系材料的地上部Na⁺含量进行测定，GWAS分析结果显示位于4号染色体224,623,727位置的SNP(单核苷酸多态性)与地上部Na⁺含量具有较好的相关性(p＝4.52)。该SNP(单核苷酸多态性)位于基因Zm00001d053293的3’末端非编码区，本发明的发明人经生物信息学方法分析发现Zm00001d053293编码的蛋白是AtSOS3在玉米中的同源蛋白，可能参与玉米抗盐，故将其作为候选基因并克隆了该玉米抗盐QTL基因，命名为ZmCBL8,该基因编码区长度为645bp(详细序列见SEQ ID No.3)，编码214个氨基端(详细序列见SEQ ID No.4)。为了筛选适合抗盐分子标记的DNA序列变异，发明人对393份玉米自交系材料中的ZmCBL8基因组DNA进行PCR扩增，鉴定到一个抗感材料间存在差异的3096bp(具体序列见SEQ ID No.5)插入片段，将该插入片段命名为ZmCBL8-InDel。具有该插入的材料地上部Na⁺含量显著高于不含该插入的材料，该插入会导致ZmCBL8的表达水平降低，适合用于分子标记。基于此：

一方面，本申请提供了一个玉米抗盐QTL基因，所述QTL基因位于玉米4号染色体上224,621-224,623kb的位置。

进一步地，所述玉米抗盐QTL基因核苷酸序列选自：

(1)SEQ ID NO.3；

(2)与SEQ ID NO.3有至少90％序列同一性的序列；

(3)在SEQ ID NO.3的基础上经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸获得的功能或所表达蛋白功能相同的序列。

另一方面，本申请提供了上述基因所编码的蛋白。

另一方面，本申请提供了一种玉米抗盐相关的分子标记，所述分子标记为SEQ IDNo.5所示核苷酸序列在上述抗盐QTL基因中插入或缺失。

进一步地，SEQ ID No.5所示核苷酸序列在上述抗盐QTL基因第四外显子中插入或缺失。

进一步地，在所述抗盐QTL基因中插入SEQ ID No.5所示核苷酸序列的个体为盐敏感型；所述抗盐QTL基因缺失SEQ ID No.5所示核苷酸序列的个体为抗盐型。

另一方面，本申请提供了检测权利上述分子标记的引物对，所述引物对的核苷酸序列为：ZmCBL8-F：ATGGGGTGTGTGTCCTCCAA(SEQ ID No.1)；

ZmCBL8-R：CTACAACTCGTCGTCACTGG(SEQ ID No.2)。

另一方面，本申请提供了检测权利上述分子标记的试剂盒，其中包括上述引物对。

进一步地，所述试剂盒中还包含PCR扩增试剂。

进一步地，所述PCR扩增试剂可选聚合酶、缓冲液、dNTP等中的一种或多种。

另一方面，本申请提供了检测玉米是否抗盐的方法，包括检测上述分子标记。

进一步地，所述检测分子标记包括使用上述引物对或者试剂盒扩增样本，若得到1296bp的扩增片段，则所测玉米为抗盐型，如得到4387bp的扩增片段，则所测玉米为盐敏感型。

另一方面，本申请提供了上述抗盐QTL基因序列、蛋白、分子标记、引物对、试剂盒、方法在玉米抗盐育种中的应用。

有益效果

本发明提供了一个新的玉米抗盐QTL基因的核苷酸序列和其对应的蛋白质氨基酸序列，并且在此抗盐QTL基因的第4个内含子上鉴定到与玉米抗盐性连锁的片段，该片段的插入或缺失，可作为玉米抗盐分子标记。本发明还提供了一种用于检测本发明的玉米抗盐分子标记的引物对和试剂盒，以及检测玉米是否抗盐的方法。由于玉米抗盐属数量性状遗传，表型分析耗时费力，上述的玉米抗盐QTL基因及其蛋白质、分子标记、引物对和试剂盒都可以应用于玉米抗盐育种中，在玉米种子期间或子叶长出的早期阶段就可鉴定，省时而且准确，可以加速玉米抗盐品种选育进程。

附图说明

图1为抗盐QTL基因的分析图；其中(A)是以474份玉米自交系地上部Na⁺含量为表型指标进行的全基因组关联分析结果，初步确定了候选基因为Zm00001d053293；(B)生物信息学方法进一步发现ZmCBL8是AtSOS3在玉米中的同源蛋白；

图2抗盐QTL基因的遗传验证结果图；其中(A)为pBUE411-ZmCBL8载体结构示意图；(B)为利用CRSPR-Cas9敲除后的基因和原基因序列的比较；(C)为在对照或盐处理条件下生长了2周的野生型和ZmCBL8基因敲除植株(ZmCBL8^crispr-1，ZmESBL8^crispr-2)的生长情况；其中标尺大小为10cm。

图3为ZmCBL8基因的结构示意图。

图4为ZmCBL8基因全长编码序列PCR扩增的电泳图；其中1以来自B73幼苗的cDNA为模板，用ZmCBL8特异的引物(ZmCBL8-gene-F和ZmCBL8-gene-R)进行扩增获得的PCR产物(预期产物大小645bp)，M为聚合美公司DL2000 plus Marker。

图5为ZmCBL8基因编码序列连接入T载体后的载体图谱。

图6ZmCBL8蛋白功能分析图；其中(A)为pGADT7-ZmCBL8载体结构示意图；(B)pGADT7-ZmCBL8可与AtSOS2在玉米中的同源蛋白ZmCIPK24互作。(C)为pBridge-ZmCBL8载体结构示意图；(D)为在Na⁺外排缺陷酵母菌株AXT3K中，ZmCBL8与ZmCIPK24结合可以激活ZmSOS1的Na⁺转运活性；

图7为在敏感材料中鉴定到的大片段插入ZmCBL8-InDel的插入位置示意图。

图8为利用引物对ZmCBL8-F和ZmCBL8-R在郑58和SC11-1中进行PCR扩增的结果图；其中，M为聚合美公司DL2000 plus Marker。

图9为实施例4中24种玉米自交系材料的检测结果电泳图。

图10为实施例4中24种玉米自交系材料的地上部Na⁺含量差异图。

具体实施方式

以下实施例便于更好地理解本发明，但不限于此，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

除特殊说明的之外，各实施例中所用的设备和试剂均常规市售可得。

实施例1玉米抗盐QTL基因的克隆及功能分析

将玉米自然群体中的474份自交系材料，分别种植于对照和盐处理条件下，生长14天后，测定地上部Na⁺含量。本发明以地上部Na⁺含量为表型数据，通过GWAS(全基因组关联分析)在4号染色体上定位到一个效应值为4.52的SNP(单核苷酸多态性)，如图1A所示，该SNP位于4号染色体224,623,727bp的位置，位置根据玉米B73参考基因组V4确定。该SNP位于基因Zm00001d053293的3’末端非编码区，通过生物信息学方法进一步发现，Zm00001d053293编码的蛋白是AtSOS3在玉米中的同源蛋白，如图1B所示，可能参与玉米抗盐，故将其作为候选基因，命名为ZmCBL8。

为了获得ZmCBL8的突变体，发明人(1)设计了CRSPR-Cas9敲除靶点，如图2A所示；(2)用BsaI对含有靶点序列的PCR片段和pBUE411载体进行酶切、连接，连接产物转入大肠杆菌，用通用引物FD3/RD进行菌落PCR扩增，电泳检测有目的大小条带的菌落为阳性克隆，将对应的菌液送至北京美吉生物技术有限责任公司测序，获得正确的pBUE411-ZmCBL8载体(图2A),将pBUE411-ZmCBL8转入农杆菌EHA105；(3)通过幼胚侵染的方法获得转基因植株；(4)通过对包括靶点在内的基因片段进行PCR扩增、测序确定转基因阳性植株。最终获得了两个ZmCBL8候选基因的敲除材料(命名为ZmCBL8^crispr-1和ZmCBL8^crispr-2)，表型检测结果显示这两个突变体表现出盐敏感的表型，如图2B所示，表明ZmCBL8基因敲除植株对盐胁迫更敏感，表现为植株矮小，叶片黄化，说明该基因的确是抗盐QTL基因ZmCBL8。

基于MaizeGDB网站对ZmCBL8基因结构的预测，基因全长(从起始密码子到终止密码子)1296bp，包含七个外显子，六个内含子，其中编码区序列全长645bp，如图3所示。为了克隆ZmCBL8全长编码序列，以生长7天的玉米自交系B73幼苗为材料，使用天根生化科技(北京)有限公司的植物总RNA提取试剂盒(Cat.#DP432)提取总RNA，并通过使用普洛麦格(北京)生物技术有限公司的M-MLV反转录酶进行反转录获得cDNA，用ZmCBL8特异的引物(正向引物ZmCBL8-gene-F ATGGGGTGTGTGTCCTCCAA(SEQ ID No.1)；反向引物ZmCBL8-gene-RCTACAACTCGTCGTCACTGG(SEQ ID No.2))进行PCR扩增，获得了与预期大小(645bp)相符的产物，如图4所示。PCR扩增体系为50μl，包括：2×Super Multiplex PCR Mix 25μl；10μMPrimer ZmCBL8-gene-F 2μl；10μM Primer ZmCBL8-gene-R 2μl；DNA 1μl,ddH2O 20μl)。PCR扩增条件为：预变性95℃2min,变性95℃30s,退火58℃30s,延伸72℃1min,由变性到延伸进行34个循环，最后延伸72℃5min。

使用天根生化科技(北京)有限公司的凝胶回收试剂盒(Cat.#DP105-3)对PCR产物进行回收和纯化，用北京全式金生物技术有限公司的pEASY-Blunt Cloning Kit试剂盒对纯化后的产物进行T载体的连接(载体图谱见图5)，然后转入大肠杆菌感受态细胞，挑取单克隆，使用通用引物T7/SP6进行菌落PCR扩增，电泳检测有目的大小条带的菌落为阳性重组体，将对应的菌液送至北京美吉生物技术有限责任公司测序，获得了645bp的ZmCBL8外显子序列，其核苷酸序列见SEQ ID No.3，对应的蛋白质的序列为SEQ ID No.4所示。

生物信息学预测ZmCBL8是AtSOS3在玉米中的同源蛋白，通过(1)用EcoR I和Xma I对含有EcoR I和Xma I酶切位点的ZmCBL8片段和pGADT7载体进行双酶切，酶切片段通过T4连接酶连接，转入大肠杆菌，通过菌落PCR扩增筛选有目的条带的阳性克隆；(2)将对应的菌液送至北京美吉生物技术有限责任公司测序，最终获得正确的pGADT7-ZmCBL8(图谱如图6A所示)；(3)将pGADT7-ZmCBL8与其它组合转入酵母菌株AH109，在二缺培养基(缺亮氨酸和缬氨酸)上生长三天后，挑单克隆接种到2ml YPDA液体培养基在200rpm，28℃摇床培养过夜；(4)将上述过夜培养菌液在常温，1000rcf下离心1min，收集菌体；(5)用无菌水重新悬浮沉淀的酵母细胞，调节浓度OD600至0.8；(6)将其分别稀释10倍、100倍、1000倍后取5微升依次打点于二缺和四缺培养基，放置在30℃培养箱三天后拍照记录结果。结果如图6B所示，pGADT7-ZmCBL8可在酵母双杂交系统中与ZmCIPK24互作。

与此同时，通过Na⁺外排缺陷酵母菌株AXT3K确定pGADT7-ZmCBL8与ZmCIPK24结合可以激活ZmSOS1的Na⁺转运活性。具体实验流程为：(1)用KpnI和EcoR I对含有KpnI和EcoRI酶切位点的ZmCBL8回收片段和pBridge-XWD载体进行双酶切，酶切片段通过T4连接酶连接，转入大肠杆菌，通过菌落PCR扩增筛选有目的条带的阳性克隆；(2)将对应的菌液送至北京美吉生物技术有限责任公司测序，最终获得正确的pBridge-XWD-ZmCBL8(图谱如图6C所示)；(3)将pBridge-XWD-ZmCBL8与其它组合转入酵母菌株AXT3K，在三缺培养基(缺亮氨酸、缬氨酸和尿嘧啶)上生长三天后，挑单克隆接种到2ml YPDA液体培养基在200rpm，28℃摇床培养过夜；(4)将上述过夜培养菌液在常温，1000rcf下离心1min，收集菌体；(5)用无菌水重新悬浮沉淀的酵母细胞，调节浓度OD600至0.8；(6)将其分别稀释10倍、100倍、1000倍后取5微升依次打点于含0、10、20、25mM NaCl的三缺培养基上，放置在30℃培养箱三天后拍照记录结果。结果如图6D所示，pGADT7-ZmCBL8与ZmCIPK24互作可以激活ZmSOS1的Na⁺转运活性。表明抗盐基因ZmCBL8可通过参与玉米中SOS信号通路，进而参与调控玉米抗盐。

实施例2玉米抗盐QTL基因ZmCBL8外显子中插入的大片段(ZmCBL8-InDel)的获得

发明人对393份自交系材料中ZmCBL8的基因组序列进行扩增时发现，有～1.3和～4.4kb两种大小的PCR片段，于是发明人发现设计了引物ZmCBL8-F/ZmCBL8-R(引物在基因上的具体位置如图7所示)。引物序列为：

ZmCBL8-F：ATGGGGTGTGTGTCCTCCAA(SEQ ID No.1)；

ZmCBL8-R：CTACAACTCGTCGTCACTGG(SEQ ID No.2)。

以ZmCBL8-F/ZmCBL8-R为引物，以PCR片段大小～4.4kb的材料C521的基因组DNA为模板，使用康为世纪生物技术有限公司的Taq DNA聚合酶进行扩增(PCR体系50μl：2×SuperMultiplex PCR Mix 25μl,10μM Primer ZmCBL8-F 2.5μl,10μM Primer ZmCBL8-R2.5μl,DNA 2.0μl,ddH2O 18μl；PCR程序：预变性95℃2min,变性95℃30s,退火58℃30s,延伸72℃30s,由变性到延伸进行34个循环，最后延伸72℃5min)，将PCR产物送到北京擎科生物技术有限责任公司测序，获得测序结构后，通过CodonCode Aligner软件拼接，获得了ZmCBL8-InDel插入序列的长度为3096bp.ZmCBL8-InDel的具体序列如SEQ ID No.5所示。分别对含有ZmCBL8-InDel插入和不含ZmCBL8-InDel插入的自交系材料的地上部Na⁺含量进行统计，发现含有ZmCBL8-InDel插入的自交系材料地上部Na⁺含量明显较高。

实施例3玉米抗盐基因ZmCBL8中的ZmCBL8-InDel插入或缺失作为分子标记

因为含有ZmCBL8-InDel插入的自交系材料地上部Na⁺含量明显较高，因此ZmCBL8-InDel插入可以用于判断个体是否抗盐的分子标记。

利用基于ZmCBL8-InDel插入设计的引物对ZmCBL8-F(正向)和ZmCBL8-R(反向)，分别以抗盐玉米自交系郑58和盐敏感玉米自交系SC11-1的基因组DNA为模板，进行PCR扩增。PCR体系20μl：2×Super Multiplex PCR Mix 10μl,10μM Primer ZmCBL8-F 1μl,10μMPrimer ZmCBL8-R 1μl,DNA 1μl,ddH2O 7μl。PCR程序：预变性95℃2min,变性95℃30s,退火58℃30s,延伸72℃30s,由变性到延伸进行34个循环，最后延伸72℃5min。结果发现以玉米抗盐自交系郑58总DNA为模板进行PCR扩增，可获得1296bp的条带；以玉米盐敏感自交系SC11-1总DNA为模板进行PCR扩增，可获得4387bp的条带，如图8所示。因此，引物对ZmCBL8-F和ZmCBL8-R可以用于玉米抗盐分子辅助育种，把基于引物对ZmCBL8-F和ZmCBL8-R的抗盐分子标记命名为ZmCBL8。其中各引物的序列为：

ZmCBL8-F：ATGGGGTGTGTGTCCTCCAA(SEQ ID No.1)；

ZmCBL8-R：CTACAACTCGTCGTCACTGG(SEQ ID No.2)。

实施例4利用抗盐分子标记检测玉米是否抗盐

选取了24种玉米自交系材料进行检测，检测方法如实施例3所述，利用实施例3中的检测本发明抗盐分子标记的引物对，以所述待测玉米基因组DNA为模板进行PCR扩增。其结果表明：其中14份自交系引物对ZmCBL8-F和ZmCBL8-R可扩增出1296bp大小的条带，为抗盐基因型，另外10份自交系引物对ZmCBL8-F和ZmCBL8-R可扩增出4387bp大小的条带，为盐敏感基因型基因型，所用自交系名称和鉴定结果如图9所示。所鉴定出的11份盐敏感型基因型自交系材料的地上部Na⁺含量显著高于另外13份抗盐型基因型自交系材料，结果如图10所示。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国农业大学

<120> 一个玉米抗盐QTL基因及其应用

<160> 5

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> aitificial

<400> 1

atggggtgtg tgtcctccaa 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> aitificial

<400> 2

ctacaactcg tcgtcactgg 20

<210> 3

<211> 645

<212> DNA

<213> may

<400> 3

atggggtgtg tgtcctccaa ggagtccaga cgacgacctc agggatacga ggatcccaac 60

accttagcta gagagaccac gttttctgtc aacgaagtgg aggccctcta cgagctgtac 120

aagaggataa gctattccat aaccaaagac ggcctaatcc acaaggagga gttccagctc 180

gctctcttcc ggaacagtaa caagaggaac cttttcgccg atcggatatt tgacctgttc 240

gacctgaagc gcaacggagt gattgagttc ggggagttcg ttcgctccct cgacgttttc 300

cacccagata cgcccgtgga agaaaagatc gcctttgcgt ttcggctgta cgatctgaga 360

ggcactggat tcattggacg cgaagagctg aaggaaatgg tgctggccat tctgaacgaa 420

tcagaattac ttctttccga cgacgccgtc gaagaaatcg tggatcagac tttcaggcaa 480

gcggacatga acggcgacgg gaagatagat cctgatgaat ggaaggtgtt cgcgagcaaa 540

aacccggcac ttctaaagaa catgacgctc ccatacctca aggacataac catggcgttc 600

cccagctttg ttctcaactc tggagccagt gacgacgagt tgtag 645

<210> 4

<211> 214

<212> PRT

<213> may

<400> 4

Met Gly Cys Val Ser Ser Lys Glu Ser Arg Arg Arg Pro Gln Gly Tyr

1 5 10 15

Glu Asp Pro Asn Thr Leu Ala Arg Glu Thr Thr Phe Ser Val Asn Glu

20 25 30

Val Glu Ala Leu Tyr Glu Leu Tyr Lys Arg Ile Ser Tyr Ser Ile Thr

35 40 45

Lys Asp Gly Leu Ile His Lys Glu Glu Phe Gln Leu Ala Leu Phe Arg

50 55 60

Asn Ser Asn Lys Arg Asn Leu Phe Ala Asp Arg Ile Phe Asp Leu Phe

65 70 75 80

Asp Leu Lys Arg Asn Gly Val Ile Glu Phe Gly Glu Phe Val Arg Ser

85 90 95

Leu Asp Val Phe His Pro Asp Thr Pro Val Glu Glu Lys Ile Ala Phe

100 105 110

Ala Phe Arg Leu Tyr Asp Leu Arg Gly Thr Gly Phe Ile Gly Arg Glu

115 120 125

Glu Leu Lys Glu Met Val Leu Ala Ile Leu Asn Glu Ser Glu Leu Leu

130 135 140

Leu Ser Asp Asp Ala Val Glu Glu Ile Val Asp Gln Thr Phe Arg Gln

145 150 155 160

Ala Asp Met Asn Gly Asp Gly Lys Ile Asp Pro Asp Glu Trp Lys Val

165 170 175

Phe Ala Ser Lys Asn Pro Ala Leu Leu Lys Asn Met Thr Leu Pro Tyr

180 185 190

Leu Lys Asp Ile Thr Met Ala Phe Pro Ser Phe Val Leu Asn Ser Gly

195 200 205

Ala Ser Asp Asp Glu Leu

210

<210> 5

<211> 3096

<212> DNA

<213> may

<400> 5

tgttagctac tgctaatgga aggagaagat agtagagagg gagcagaggt aggagacgag 60

aataggggag gaaacaagaa cagactgtat tgatttgagt aaagttcata catggttctc 120

cctaccccaa gccaatagca tatatgcggc tacgacttag gaacgtggcc caccaactgg 180

tggccgaagg acacaaccca acacgccaga gacttacacc cagaccagac atgacaacaa 240

caacacgact gcacttagtt acacccgctc aggacccacg actcgatcat tagtgtgacg 300

catgcttctt ccacgctcac cgggatggag ttccttatat gtggagtatc tgacaatggc 360

gatgtaacat tccctcctcc ttaaaactcg acttgccctc aagtcgatgc agaatctgag 420

cacatccaga atcttgatgc cctgagtgaa gcagcatgtg ttccaaggtc ttgaactgta 480

ccatcgacac tcttttttct gaaaccagaa ttcttgcttc tgaattgtcc tttgacagca 540

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ccggagagag ttgagatgct ccagagaatc ggttgctgcg atttccttgg aaaacgatgc 1500

atgatctcca gtatacaaac tctccaacga aaagggtggt ggccatggaa ttttccaaca 1560

cagagtgggt gagaaatagc tccatatgag gatgaagcaa ttcatcaaac acttgttggg 1620

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gatagccgcc tgggtgcggc tggcaagctg cccgctgtgg tcggcgtcta agacgagtac 1740

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cggtcgttcc cctgtttcct cccacaacgc ctgcgcgttc accacgaagc cggcccaacc 1860

gtgatctggg aggcgctctc gggcgaaggt ggccggattg gcgatgtagt atgctgcgga 1920

ggaagcgcca tggaggccga cgatgtcccg ggtggaggcg agcgcgacga cggacttgtg 1980

gaagaaggcg gagaaggtgg tgtccggaac cagctgcttg gcgtcgtggt ggccgccgcc 2040

gccgcgtagg ggaactgcgg tgtggcggac tgggtcgaag gcggcatgga cgacgtcccc 2100

agccagcgtg tggtggatga ggctcgagag cgtccaaggc agcggcgagg atgctggcgg 2160

ggctgcctcc gtgtcctcgg cgtctgccca cgcgtagaag ccctcgatgt cgttggaatc 2220

ggtggagtcg tcgttgaagg cggtggggaa agcagcgtcc agcacgccag taaacacctc 2280

gtcatcgtcg gcgttggcgt cgtaggagag cgtcatcagg ctggacggct gtgcttgaag 2340

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gacatgtacc tcctccactg gatctggtac agcgcccaca tcgccgaacc cgccgacagc 2460

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gtcgatcatc gtgaaccgct tgtcaagctc agcgaggatt gtacgggtat ggtgctccag 2640

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aggaacgtgg cccaccaact ggtggccgaa ggacacaacc caacacgcca gagacttaca 2940

cccagaccag acatgacaac aacaacacga ctgcacttag ttacacccgc tcaggaccca 3000

cgactcgatc attagtgtga cgcatgcttc ttccacgctc accgggatgg agttccttat 3060

atgtggagta tctgacaatg gcgatgtaac agactc 3096

Claims

1.通过检测玉米抗盐相关分子标记ZmCBL8-InDel来检测玉米是否抗盐的方法，其特征在于，所述玉米抗盐相关分子标记ZmCBL8-InDel的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述方法包括使用序列为SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2的引物对扩增来自待测玉米的样本的步骤和电泳检测扩增结果的步骤；若电泳检测扩增结果得到1296bp的扩增片段，则待测玉米为抗盐型；若得到4387bp的扩增片段，则待测玉米为盐敏感型；所述1296bp的扩增片段为ZmCBL8基因全长序列，所述ZmCBL8基因全长序列的外显子序列如SEQ ID NO.3所示；所述4387bp的扩增片段为含有SEQ ID NO.5所示插入序列的ZmCBL8基因全长序列。