CN114364392A

CN114364392A - 涉及tert激活疗法的方法和组合物

Info

Publication number: CN114364392A
Application number: CN202080048942.0A
Authority: CN
Inventors: 罗纳德·A·德皮尼奥; 王耀旗; 沈弘锡; 詹姆斯·W·霍纳
Original assignee: University of Texas System
Current assignee: University of Texas System
Priority date: 2019-05-02
Filing date: 2020-04-30
Publication date: 2022-04-15
Also published as: KR20220022126A; WO2020223475A1; US20220313782A1; EP3962514A4; JP2022531296A; EP3962514A1

Abstract

本公开内容提供了用于治疗早衰症或神经系统变性疾病，特别是与淀粉样蛋白沉积和神经元死亡相关的神经系统变性疾病，例如阿尔茨海默病的方法和组合物。因此，本公开的方面涉及用于治疗有需要的对象的早衰症的方法，其包括向对象施用TERT激活疗法。其他方面涉及用于治疗对象的神经系统变性疾病的方法，其包括向对象施用TERT激活疗法。

Description

涉及TERT激活疗法的方法和组合物

发明背景

本申请要求于2019年5月2日提交的美国临时申请第62/842323号的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。

本发明是在美国国立卫生研究院颁发的授权号为CA084628的政府支持下完成的。政府对本发明享有一定的权利。

I.技术领域

本发明涉及医学领域。具体而言，本发明提供了用于治疗阿尔茨海默病的方法和组合物。

II.背景

阿尔茨海默病(AD)是一种进行性和退行性疾病。它的特点是特别是在海马体中促炎细胞因子水平的增加和毒性β-淀粉样蛋白沉积的积累，逐渐破坏记忆和学习能力。尽管医学取得了进步，但尚无针对AD的明确疗法。FDA批准的药物只能暂时减缓症状的恶化，而且只有大约一半的患者服用这些药物。这意味着AD和其他痴呆症每年给医疗保险、医疗补助和企业带来的直接和间接成本超过1480亿美元。

目前批准的用于AD的认知症状的药物治疗包括胆碱酯酶抑制剂，而对AD的行为症状的“标签外”治疗包括抗抑郁药；这两类药物除了增加神经递质的可用性外，还会引起不良副作用并抑制肿瘤坏死因子的产生。AD的治疗需要解决成本高、副作用大、疗效有限的问题。需要解决与AD相关的问题的疗法，例如高成本、不良副作用的高发生率以及有效治疗AD的现有限制。

发明内容

本公开提供了用于治疗早衰症或神经系统变性疾病，特别是与淀粉样蛋白沉积和神经元死亡相关的那些疾病，例如阿尔茨海默病的方法和组合物。因此，本公开的方面涉及用于治疗有需要的对象的早衰症的方法，其包括向对象施用TERT激活疗法。其他方面涉及用于治疗对象的神经系统变性疾病的方法，其包括向对象施用TERT激活疗法。其他方面涉及在有需要的对象中产生新神经元的方法，其包括向对象施用TERT激活疗法。其他方面涉及用于减少有需要的对象的β-淀粉样肽的方法，其包括向对象施用TERT激活疗法。更进一步的方面涉及包含纳米囊泡的组合物，所述纳米囊泡包含TERT多肽和/或编码TERT多肽的核酸。TERT激活疗法是指可以实现增加内源性TERT蛋白的表达、增加细胞中TERT蛋白的浓度、增加TERT蛋白的活性(内源性添加的TERT蛋白或外源性添加的TERT蛋白)、和稳定TERT蛋白和/或mRNA中的一种或多于一种的疗法。

在一些实施方案中，早衰症包括哈钦森-吉尔福德早衰综合征(HGPS)、内斯托-吉列尔莫早衰综合征、成人早老综合征、科凯恩氏综合症、布卢姆综合征、色素性干皮病、共济失调毛细血管扩张症、毛发低硫营养不良、先天性角化不良症或嵌合异倍体综合征。在一些实施方案中，神经系统变性疾病包括阿尔茨海默病。在一些实施方案中，早衰症不包括哈钦森-吉尔福德早衰综合征(HGPS)、内斯托-吉列尔莫早衰综合征、成人早老综合征、科凯恩氏综合症、布卢姆综合征、色素性干皮病、共济失调毛细血管扩张症、毛发低硫营养不良、先天性角化不良症或嵌合异倍体综合征。在一些实施方案中，神经系统变性疾病不包括阿尔茨海默病。在一些实施方案中，阿尔茨海默病包括早发性阿尔茨海默病或为早发性阿尔茨海默病。在一些实施方案中，阿尔茨海默病包括晚发性阿尔茨海默病或为晚发性阿尔茨海默病。在一些实施方案中，排除早发性阿尔茨海默病或晚发性阿尔茨海默病。在一些实施方案中，神经系统变性疾病包括与淀粉样蛋白沉积相关的神经系统变性疾病。在一些实施方案中，神经系统变性被定义为包括神经细胞变性和/或死亡的疾病。在一些实施方案中，神经系统变性疾病是一种导致神经元细胞死亡的疾病。在一些实施方案中，治疗包括增加树突棘的形成。在一些实施方案中，树突棘形成的增加是在皮质神经元中。在一些实施方案中，治疗包括增加或增强神经网络。在一些实施方案中，治疗包括增强或增加突触途径激活，其促进分子伴侣表达并降低AD风险基因的表达。在一些实施方案中，治疗包括减少淀粉样斑块。在一些实施方案中，对象已被诊断患有病症。在一些实施方案中，对象先前已接受过病症治疗。在一些实施方案中，对象已被确定为对先前的治疗没有反应。在一些实施方案中，对象之前没有接受过病症治疗。在一些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，对象小于50岁。在一些实施方案中，对象小于或大于30岁、31岁、32岁、33岁、34岁、35岁、36岁、37岁、38岁、39岁、40岁、41岁、42岁、43岁、44岁、45岁、46岁、47岁、48岁、49岁、50岁、51岁、52岁、53岁、54岁、55岁、56岁、57岁、58岁、59岁、60岁、61岁、62岁、63岁、64岁、65岁、66岁、67岁、68岁、69岁、70岁、71岁、72岁、73岁、74岁、75岁、76岁、77岁、78岁、79岁、80岁、81岁、82岁、83岁、84或85岁(或其中可推导出的任何范围)。

在一些实施方案中，方法进一步包括施用附加疗法。在一些实施方案中，附加疗法包括胆碱酯酶抑制剂，例如多奈哌齐、加兰他敏或卡巴拉汀。在一些实施方案中，附加疗法包括美金刚。在一些实施方案中，本公开的方法和组合物不包括多奈哌齐、加兰他敏、卡巴拉汀或美金刚中的一种或多于一种。

在一些实施方案中，TERT激活疗法包括递送编码TERT多肽的核酸。在一些实施方案中，TERT核酸包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9的核酸或其片段，或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7或SEQ IDNO:9中的一种或其片段具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一些实施方案中，TERT激活疗法包含向对象施用编码TERT多肽的DNA或RNA。在一些实施方案中，TERT激活疗法包含TERT多肽。在一些实施方案中，TERT多肽包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10的多肽或其片段，或与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10中的一种或其片段具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一些实施方案中，TERT激活疗法包含无催化活性的TERT多肽，例如能够反式激活基因但缺乏端粒酶逆转录酶活性的TERT多肽。在一些实施方案中，TERT多肽包含D712A突变。在一些实施方案中，TERT多肽不具有D712A突变。

在一些实施方案中，TERT激活疗法包括包含TERT多肽或编码TERT多肽的核酸的纳米囊泡。在一些实施方案中，纳米囊泡包含胞外体。在一些实施方案中，纳米囊泡的直径为10nm至1000nm。在一些实施方案中，纳米囊泡的直径为至少或至多10nm、20nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、110nm、120nm、130nm、140nm、150nm、160nm、170nm、180nm、190nm、200nm、210nm、220nm、230nm、240nm、250nm、260nm、270nm、280nm、290nm、300nm、310nm、320nm、330nm、340nm、350nm、360nm、370nm、380nm、390nm、400nm、410nm、420nm、430nm、440nm、450nm、460nm、470nm、480nm、490nm、500nm、510nm、520nm、530nm、540nm、550nm、560nm、570nm、580nm、590nm、600nm、610nm、620nm、630nm、640nm、650nm、660nm、670nm、680nm、690nm、700nm、710nm、720nm、730nm、740nm、750nm、760nm、770nm、780nm、790nm、800nm、810nm、820nm、830nm、840nm、850nm、860nm、870nm、880nm、890nm、900nm、910nm、920nm、930nm、940nm、950nm、960nm、970nm、980nm、990nm、或1000nm(或其中可推导出的任何范围)。在一些实施方案中，纳米囊泡包含CD47。在一些实施方案中，纳米囊泡包含在纳米囊泡表面上和/或膜内的CD47表达。在一些实施方案中，纳米囊泡包含狂犬病毒糖蛋白肽。可用于本公开内容的实施方案的示例性狂犬病毒糖蛋白肽包括如下：

dR＝D-精氨酸

狂犬病毒糖蛋白肽可包含1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个或42个(或其中可推导出的任何范围)或多于42个的变异的氨基酸或与SEQ ID No:11至SEQ IDNo:14中的至少或至多3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41或42个或多于42个，或其中可推导出的任何范围的连续氨基酸具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的相似性、同一性或同源性。

狂犬病毒糖蛋白肽可包含SEQ ID NO:11至SEQ ID No:14中的3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个或42个或多于42个，或其中可推导出的任何范围的连续氨基酸。

在一些实施方案中，狂犬病毒糖蛋白肽包含SEQ ID NO:11至SEQ ID No:14中的1个至2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、或42个(或其中可推导出的任何范围)的氨基酸。

狂犬病毒糖蛋白肽可包含至少、至多或恰好1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个或42个置换。

在一些实施方案中，组合物和方法不包括胞外体或纳米囊泡作为TERT的递送方法。

置换可以在氨基酸位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41或42。

本文所述的多肽可以具有至少、至多或恰好5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41或42个氨基酸(或其中可推导出的任何范围)的固定长度。

在一些实施方案中，TERT激活疗法包括组蛋白H3K9甲基转移酶(HMT)的调节。在一些实施方案中，调节包括对HMT基因或蛋白质的抑制。在一些实施方案中，抑制包括一种或多于一种HMT基因的遗传沉默。遗传沉默的方法是本领域已知的。例如，如同源性定向修复和基因编辑的方法可用于突变对象细胞中的一种或多于一种HMT基因，例如神经元细胞或支持细胞中。在一些实施方案中，使用基因编辑技术例如CRISPR来降低对象中一种或多于一种的HMT的表达。在一些实施方案中，一种或多于一种HMT基因包含SUV39H1/KMT1A、SUV39H2/KMT1B、SETDB1/KMT1E、SETDB2/KMT1F、PRDM2、G9A/KMT1C、GLP/KMT1D、EHMT1和RIZ1/KMT8中的一种或多于一种。在一些实施方案中，HMT的实施方案排除SUV39H1/KMT1A、SUV39H2/KMT1B、SETDB1/KMT1E、SETDB2/KMT1F、PRDM2、G9A/KMT1C、GLP/KMT1D、EHMT1和RIZ1/KMT8中的一种或多于一种。在一些实施方案中，TERT激活疗法包含HMT抑制剂。在一些实施方案中，HMT抑制剂包含毛壳菌素、BIX-01294、BIX-01338、UNC0638和BRD4770中的一种或多于一种。在一些实施方案中，排除毛壳菌素、BIX-01294、BIX-01338、UNC0638和BRD4770中的一种或多于一种。在一些实施方案中，TERT激活疗法包含毛壳菌素。在一些实施方案中，TERT激活疗法包括施用组蛋白H3K9脱甲基酶(HMT)多肽或编码HDM的核酸。在一些实施方案中，HDM多肽包含具有脱甲基酶活性的多肽。在一些实施方案中，HDM多肽包含KDM1A/LSD1、KDM3A/JHDM2A、KDM3B/JHDM2B、KDM4A/JHDM3A、KDM4B/JMJD2B、KDM4C/JMJD2C、KDM4D/JMJD2D、KDM7/JHDM1D和PHF8中的一种或多于一种的多肽。在一些实施方案中，HMT的实施方案排除KDM1A/LSD1、KDM3A/JHDM2A、KDM3B/JHDM2B、KDM4A/JHDM3A、KDM4B/JMJD2B、KDM4C/JMJD2C、KDM4D/JMJD2D、KDM7/JHDM1D和PHF8中的一种或多于一种。

狂犬病毒糖蛋白的其他实施方案在Oswald等人,Mol.Pharmaceutics,2017,14(7),pp 2177–2196中被进一步描述，该文献通过引用并入本文。

在一些实施方案中，纳米囊泡源自成纤维细胞或骨髓树突细胞。在一些实施方案中，纳米囊泡源自人细胞。在一些实施方案中，纳米囊泡源自非人细胞。

在一些实施方案中，TERT激活疗法通过静脉注射施用。在一些实施方案中，全身施用TERT激活疗法。在一些实施方案中，TERT激活疗法通过本文所述的施用途径施用。

在一些实施方案中，治疗包括β-淀粉样肽的减少、学习能力的改善、记忆力的改善和神经元的生成中的一种或多于一种。减少或改善可以是至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％，或其中可推导出的任何范围。

在一些实施方案中，TERT多肽包含具有端粒酶活性的多肽。当提及基因产物时，术语“蛋白质”、“多肽”和“肽”在本文中可互换使用。

术语“对象”、“哺乳动物”和“患者”可互换使用。在一些实施方案中，对象是哺乳动物。在一些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，对象是小鼠、大鼠、兔、狗、驴或实验室测试动物，例如蝇、斑马鱼等。

在一些实施方案中，对象先前已经接受过疾病或病症的治疗。在一些实施方案中，对象对先前的治疗具有抗性。在一些实施方案中，确定对象为对先前治疗是不良反应者。

预期方法和组合物包括排除本文所述的任何实施方案。

在本申请中，术语“约”根据其在细胞和分子生物学领域中的简单和普通含义使用，以表示包括用于确定该值的装置或方法的误差标准偏差的值。

当与术语“包括”一起使用时，不使用数量词可以表示“一个”，但也可能与“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的含义一致。

如本文所用，术语“或”和“和/或”用于描述相互组合或相互排斥的多个组分。例如，“x、y和/或z”可以指单独的“x”、单独的“y”、单独的“z”、“x、y和z”、“(x和y)或z”、“x或(y和z)”或“x或y或z”。特别考虑到可以从实施方案特别地排除x、y或z。

“包含”、“具有”、“包括”、“特征在于”或“含有”是包含性的或开放式的，不排除额外的、未列举的元素或方法步骤。

组合物和方法的用途可以“包括”在整个说明书中公开的任何成分或步骤、“基本上由”或“由”在整个说明书中公开的任何成分或步骤“组成”。短语“由……组成”不包括未指定的任何元素、步骤或成分。短语“基本上由……组成”将所述主题的范围限制为指定的材料或步骤，以及不会对其基本特征和新颖特征产生实质性影响的材料或步骤。预期在术语“包括”的上下文中描述的实施方案也可以在术语“由……组成”或“基本上由……组成”的上下文中实施。

特别考虑的是，关于本发明的一个实施方案所讨论的任何限制都可以适用于本发明的任何其他实施方案。此外，本发明的任何组合物可用于本发明的任何方法中，并且本发明的任何方法可用于生产或利用本发明的任何组合物。实施例中实施方案的各方面也可以实施于别处所讨论的不同实施例或申请的实施方案，例如发明内容、具体实施方式、权利要求和附图说明。

本发明的其他目的、特征和优点将由以下详细描述中变得明显。然而应当理解，详细的描述和具体的实施例虽然表明本发明的具体实施方案，但仅作为说明给出，因为由该详细的描述，本发明的精神和范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员将变得明显。

附图说明

下列附图构成本说明书的一部分，并被包括在内以进一步说明本发明的某些方面。通过参考这些附图中的一幅或多于一幅并结合在此呈现的具体实施方案的详细描述，可以更好地理解本发明。

图1A-1I。Tert在两种不同的小鼠阿尔茨海默病神经元中被下调。(A)3xTg-AD和野生型对照组(B6129SF2/J)小鼠(n＝4；3个月大)皮质中的Tert mRNA水平。(B)5xFAD和野生型同窝对照组小鼠(n＝4；2至3个月大)海马中的Tert mRNA水平。(C)在DIV 14(n＝3)从3xTg-AD和对照组小鼠中分离出的原代皮层和海马神经元中的Tert mRNA水平。(D)在DIV14(n＝3)从5xFAD和对照组小鼠中分离出的原代皮层和海马神经元中的Tert mRNA水平。(E)从5xFAD和对照组小鼠(n＝4；2至3个月大)中分离的海马神经元中的端粒酶活性。(F)H3K9me3抑制性组蛋白标记在5xFAD的Tert基因和对照组小鼠原代神经元中的占有率的代表性视图，并在DIV 14处控制小鼠原代神经元。(G)5xFAD和野生型同窝对照组小鼠(n＝4；2至3个月大)的皮质和海马神经元中组蛋白去甲基化酶Kdm1a、Kdm4b和Kdm4c基因的mRNA水平。(H)5xFAD和野生型同窝对照组小鼠(2至3个月大)的CA1海马亚区中的KDM1A免疫染色。(I)用毛壳素或BIX-01294处理的5xFAD小鼠的皮层和海马中的Tert mRNA水平。

图2A-2C。Cre诱导Tert敲入小鼠(R26-CAG-LSL-mTert-IRES-eGFP-pA)的生成。(A)用于将CAG-LSL-mTert-IRES-eGFP-pA引入Rosa26基因座的构造方案。(B)携带R26-CAG-LSL-mTert-IRES-eGFP-pA等位基因的原始ES靶向系的基因分型结果。(C)从靶向ES细胞获得的嵌合小鼠的代表性照片。

图3A-3D。Tert激活减轻了新型诱导型TERT-AD小鼠模型中的淀粉样蛋白病理。(A)3xTg-AD或5xFAD的R26-CAG-LSL-mTert小鼠以及Camk2a-CreERT2小鼠的繁殖策略。(B)成年鼠(8个月大)对照组和Tert激活的R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2小鼠的CA1海马亚区中的Aβ免疫染色。(C)CA1区域中Aβ免疫反应性锥体神经元的定量比较(每组n＝6；8个月大)。(D)成年鼠(7个月大)对照组和Tert激活的R26-CAG-LSL-mTert；5xFAD；Camk2a-CreERT2小鼠海马中的Aβ免疫染色。

图4A-4F。AD神经元中的Tert激活增强了促进分子伴侣表达并降低AD风险基因表达的各种突触通路。(A)R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2小鼠大脑的Tert激活神经元中Tert和Terc的mRNA水平。(B)维恩图示出了对比于对照组的、基于RNA-Seq结果的上调生物过程的交叉点，该RNA-Seq结果来自于R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2小鼠的Tert激活的皮层和海马神经元。(C)在Tert激活的皮层和海马神经元中上调的前5条重叠通路。(D)基因集富集分析(GSEA)图示出了与对照组神经元相比，Tert激活的皮质和海马神经元中突触信号基因的相对上调。(E、F)有或没有Tert诱导的App、ApoE、Hsp70-1和Hsp70-2基因的mRNA水平。

图5A-5C。Tert激活增强了AD小鼠模型中的脊柱形态和神经网络。(A)来自老年鼠(18个月)对照组和Tert激活的R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2小鼠的高尔基体染色皮层神经元的代表性图像。(B)老年对照组和Tert激活的R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2小鼠的浸渍锥体皮质神经元中树突棘的高放大倍数。(C)树突棘密度的量化(n＝每组20个树突，每组n＝4只小鼠；18个月大)。用于两组比较的t检验。****P<0.0001；平均值±s.e.m.

图6A-6D。HMT抑制剂激活人TERT基因和人AD神经元中的基因沉默。(A)H3K9me3抑制性组蛋白标记在神经元的TERT基因中占有率的代表性图像，该神经元从APP^DP患者和非痴呆对照组(NDC)个体衍生的iPSC分化而来。(B、C)毛壳素处理的人类AD神经元中的TERTmRNA水平(B)和TERT蛋白水平(C)。(D)用靶向组蛋白甲基转移酶基因G9A或SETDB1的siRNA处理的人类AD神经元中TERT蛋白水平的免疫印迹。

图7A-7E。TERT激活减轻了人类AD神经元中的淀粉样蛋白病理。(A)Flag标记的人类TERT慢病毒表达构建体的克隆。(B、C)通过EGFP或TERT转导的神经元中的夹心ELISA测量的Aβ_1-40水平(n＝3)，该神经元从APP^DP患者衍生的iPSC分化而来。(D)EGFP或TERT转导的APP^DP神经元中所示的内源性蛋白质的免疫印迹。微管蛋白用作内参。(E)通过将EGFP或TERT转导的APP^DP神经元中的RT-PCR定量而得的相对基因表达(n＝4)。

图8A-8C。TERT的反式激活功能与其催化活性无关。(A)无催化活性(CI)人类TERT慢病毒表达构建体的示意图。白色星号表示单突变D712A的位置，这使蛋白质催化失活。(B)用于确认HEK293细胞中Flag标记的催化失活TERT表达的免疫印迹。(C)所示的每个基因的mRNA表达水平。转录水平被标准化为HPRT1 mRNA。

图9A-9D。神经元TERT的激活触发了与AD神经元学习过程相关的特定基因的反式激活。(A)维恩图示出了对比于每个对照组的、基于三个独立的RNA-Seq结果的上调生物过程的交叉点，该RNA-Seq结果来自于R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2小鼠的Tert激活的小鼠皮层和海马神经元(每组n＝4)和TERT激活的人类APP^DP神经元(n＝3)(所有p<0.05)。(B)所有Tert激活的小鼠皮层和海马AD神经元以及TERT激活的人类AD神经元中上调的13条重叠通路的列表。(C)GSEA图示出了与每个对照组相比，Tert激活的皮质和海马AD神经元以及TERT激活的人类AD神经元中学习相关基因的相对上调。(D)训练日期间Barnes迷宫中的老年鼠(22至26个月)对照组和Tert激活的R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2小鼠的逃逸潜伏期。(每组n＝9)。带有Sidak多重比较检验的双向方差分析；用于两组比较的t检验；1个、2个、3个或4个符号分别表示P<0.05、0.01、0.0005、0.0001；平均值±s.e.m.

图10A-10C。神经元TERT与β-连环蛋白转录因子和RNA聚合酶II复合物核心成分发生物理性相互作用。(A)人类AD神经元中通过质谱法鉴定的TERT相互作用的蛋白的列表。(B)EGFP和TERT转导的人类AD神经元中WNT信号通路基因的RNA-Seq热图(n＝3)。(C)来自人类AD神经元的内源性β-连环蛋白(活性的)、CREBBP、POLR2A和TERT的共免疫沉淀。

图11A-11C。TERT和β-连环蛋白/TCF7在基因组水平上的关联的全局富集。(A)TERT、β-连环蛋白(活性的)和TCF7跨越人类AD神经元基因启动子的ChIP-Seq密度热图。(B)染色质状态图示出了WNT9B、ATP1A3、HSPA12A、HSPA6和MYC基因座的β-连环蛋白(活性的)、TCF7和TERT结合峰，由ChIP-Seq确定。(C)AD神经元转录激活中的TERT作用模型。在神经元细胞中，TERT水平在AD的早期病理阶段下降。神经元TERT的激活触发了与AD神经元突触信号和学习过程相关的特定基因的转录诱导，从而减轻认知缺陷。

具体实施方式

端粒酶逆转录酶(TERT)是端粒酶的催化亚基，据报道其在啮齿动物和人类的多种组织中具有多种有益和保护功能。然而，端粒酶和淀粉样蛋白病理学之间的关系是AD病理学的主要标志，且尚未被研究。AD是一种进行性和成人发病的神经系统变性疾病。为了测试TERT再激活在大脑中的影响，发明人建立了可诱导的端粒酶激活AD(TERT-AD)小鼠模型来控制TERT基因表达的时间调控。如实施例1所示，端粒酶激活可以通过其直接调节AD中受影响的关键神经元转录网络来减轻小鼠和人AD模型中的AD病理。提高大脑中的TERT水平和活性为预防和治疗阿尔茨海默病淀粉样蛋白神经病理学提供了治疗策略。

I.TERT多肽

TERT，在人类中也称为CMM9、DKCA2、DKCB4、EST2、PFBMFT1、TCS1、TP2、TRT、hEST2和hTRT，在小鼠中也称为EST2、TCS1、TP2、TR和TRT，是本领域已知的，并通过本文描述的以下mRNA和蛋白质序列进行说明。

例如，人类TERT基因的实例为智人端粒酶逆转录酶(TERT)，转录变体2，mRNA(NCBI参考序列：NM_001193376.1)：

人端粒酶逆转录酶同种型2，NCBI参考序列：P_001180305.1:

智人端粒酶逆转录酶(TERT)，转录变体1，mRNA，NCBI参考序列：NM_198253.2:

人端粒酶逆转录酶异构体1，NCBI参考序列：NP_937983.2:

小家鼠端粒酶逆转录酶(Tert)，转录变体2，mRNA，NCBI参考序列：NM_001362387.1:

小家鼠端粒酶逆转录酶同种型2，NCBI参考序列：NP_001349316.1:

小家鼠端粒酶逆转录酶(Tert)，转录变体3，mRNA，NCBI参考序列：NM_001362388.1:

小家鼠端粒酶逆转录酶同种型3，NCBI参考序列：NP_001349317.1:

小家鼠端粒酶逆转录酶(Tert)，转录变体1，mRNA，NCBI参考序列：NM_009354.2:

小家鼠端粒酶逆转录酶同种型1，NCBI参考序列：NP_033380.1:

在一些实施方案中，TERT多肽或核酸包括人TERT多肽或人TERT核酸。在一些实施方案中，TERT多肽或TERT核酸是非人类的。在一些实施方案中，TERT多肽或TERT核酸来自小鼠、马、狗、兔或山羊。

本公开的多肽或多核苷酸，例如那些包含或编码TERT多肽的，可以包含1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个、107个、108个、109个、110个、111个、112个、113个、114个、115个、116个、117个、118个、119个、120个、121个、122个、123个、124个、125个、126个、127个、128个、129个、130个、131个、132个、133个、134个、135个、136个、137个、138个、139个、140个、141个、142个、143个、144个、145个、146个、147个、148个、149个、150个、151个、152个、153个、154个、155个、156个、157个、158个、159个、160个、161个、162个、163个、164个、165个、166个、167个、168个、169个、170个、171个、172个、173个、174个、175个、176个、177个、178个、179个、180个、181个、182个、183个、184个、185个、186个、187个、188个、189个、190个、191个、192个、193个、194个、195个、196个、197个、198个、199个、200个、201个、202个、203个、204个、205个、206个、207个、208个、209个、210个、211个、212个、213个、214个、215个、216个、217个、218个、219个、220个、221个、222个、223个、224个、225个、226个、227个、228个、229个、230个、231个、232个、233个、234个、235个、236个、237个、238个、239个、240个、241个、242个、243个、244个、245个、246个、247个、248个、249个、250个、251个、252个、253个、254个、255个、256个、257个、258个、259个、260个、261个、262个、263个、264个、265个、266个、267个、268个、269个、270个、271个、272个、273个、274个、275个、276个、277个、278个、279个、280个、281个、282个、283个、284个、285个、286个、287个、288个、289个、290个、291个、292个、293个、294个、295个、296个、297个、298个、299个、300个、301个、302个、303个、304个、305个、306个、307个、308个、309个、310个、311个、312个、313个、314个、315个、316个、317个、318个、319个、320个、321个、322个、323个、324个、325个、326个、327个、328个、329个、330个、331个、332个、333个、334个、335个、336个、337个、338个、339个、340个、341个、342个、343个、344个、345个、346个、347个、348个、349个、350个、351个、352个、353个、354个、355个、356个、357个、358个、359个、360个、361个、362个、363个、364个、365个、366个、367个、368个、369个、370个、371个、372个、373个、374个、375个、376个、377个、378个、379个、380个、381个、382个、383个、384个、385个、386个、387个、388个、389个、390个、391个、392个、393个、394个、395个、396个、397个、398个、399个、400个、401个、402个、403个、404个、405个、406个、407个、408个、409个、410个、411个、412个、413个、414个、415个、416个、417个、418个、419个、420个、421个、422个、423个、424个、425个、426个、427个、428个、429个、430个、431个、432个、433个、434个、435个、436个、437个、438个、439个、440个、441个、442个、443个、444个、445个、446个、447个、448个、449个、450个、451个、452个、453个、454个、455个、456个、457个、458个、459个、460个、461个、462个、463个、464个、465个、466个、467个、468个、469个、470个、471个、472个、473个、474个、475个、476个、477个、478个、479个、480个、481个、482个、483个、484个、485个、486个、487个、488个、489个、490个、491个、492个、493个、494个、495个、496个、497个、498个、499个、500个、501个、502个、503个、504个、505个、506个、507个、508个、509个、510个、511个、512个、513个、514个、515个、516个、517个、518个、519个、520个、521个、522个、523个、524个、525个、526个、527个、528个、529个、530个、531个、532个、533个、534个、535个、536个、537个、538个、539个、540个、541个、542个、543个、544个、545个、546个、547个、548个、549个、550个、551个、552个、553个、554个、555个、556个、557个、558个、559个、560个、561个、562个、563个、564个、565个、566个、567个、568个、569个、570个、571个、572个、573个、574个、575个、576个、577个、578个、579个、580个、581个、582个、583个、584个、585个、586个、587个、588个、589个、590个、591个、592个、593个、594个、595个、596个、597个、598个、599个、600个、601个、602个、603个、604个、605个、606个、607个、608个、609个、610个、611个、612个、613个、614个、615个、616个、617个、618个、619个、620个、621个、622个、623个、624个、625个、626个、627个、628个、629个、630个、631个、632个、633个、634个、635个、636个、637个、638个、639个、640个、641个、642个、643个、644个、645个、646个、647个、648个、649个、650个、651个、652个、653个、654个、655个、656个、657个、658个、659个、660个、661个、662个、663个、664个、665个、666个、667个、668个、669个、670个、671个、672个、673个、674个、675个、676个、677个、678个、679个、680个、681个、682个、683个、684个、685个、686个、687个、688个、689个、690个、691个、692个、693个、694个、695个、696个、697个、698个、699个、700个、701个、702个、703个、704个、705个、706个、707个、708个、709个、710个、711个、712个、713个、714个、715个、716个、717个、718个、719个、720个、721个、722个、723个、724个、725个、726个、727个、728个、729个、730个、731个、732个、733个、734个、735个、736个、737个、738个、739个、740个、741个、742个、743个、744个、745个、746个、747个、748个、749个、750个、751个、752个、753个、754个、755个、756个、757个、758个、759个、760个、761个、762个、763个、764个、765个、766个、767个、768个、769个、770个、771个、772个、773个、774个、775个、776个、777个、778个、779个、780个、781个、782个、783个、784个、785个、786个、787个、788个、789个、790个、791个、792个、793个、794个、795个、796个、797个、798个、799个、800个、801个、802个、803个、804个、805个、806个、807个、808个、809个、810个、811个、812个、813个、814个、815个、816个、817个、818个、819个、820个、821个、822个、823个、824个、825个、826个、827个、828个、829个、830个、831个、832个、833个、834个、835个、836个、837个、838个、839个、840个、841个、842个、843个、844个、845个、846个、847个、848个、849个、850个、851个、852个、853个、854个、855个、856个、857个、858个、859个、860个、861个、862个、863个、864个、865个、866个、867个、868个、869个、870个、871个、872个、873个、874个、875个、876个、877个、878个、879个、880个、881个、882个、883个、884个、885个、886个、887个、888个、889个、890个、891个、892个、893个、894个、895个、896个、897个、898个、899个、900个、901个、902个、903个、904个、905个、906个、907个、908个、909个、910个、911个、912个、913个、914个、915个、916个、917个、918个、919个、920个、921个、922个、923个、924个、925个、926个、927个、928个、929个、930个、931个、932个、933个、934个、935个、936个、937个、938个、939个、940个、941个、942个、943个、944个、945个、946个、947个、948个、949个、950个、951个、952个、953个、954个、955个、956个、957个、958个、959个、960个、961个、962个、963个、964个、965个、966个、967个、968个、969个、970个、971个、972个、973个、974个、975个、976个、977个、978个、979个、980个、981个、982个、983个、984个、985个、986个、987个、988个、989个、990个、991个、992个、993个、994个、995个、996个、997个、998个、999个或1000个(或其中可推导出的任何范围)或多于1000个变异的氨基酸或核酸置换，或与SEQ ID No:1至SEQ ID No:10中至少或至多3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个、107个、108个、109个、110个、111个、112个、113个、114个、115个、116个、117个、118个、119个、120个、121个、122个、123个、124个、125个、126个、127个、128个、129个、130个、131个、132个、133个、134个、135个、136个、137个、138个、139个、140个、141个、142个、143个、144个、145个、146个、147个、148个、149个、150个、151个、152个、153个、154个、155个、156个、157个、158个、159个、160个、161个、162个、163个、164个、165个、166个、167个、168个、169个、170个、171个、172个、173个、174个、175个、176个、177个、178个、179个、180个、181个、182个、183个、184个、185个、186个、187个、188个、189个、190个、191个、192个、193个、194个、195个、196个、197个、198个、199个、200个、201个、202个、203个、204个、205个、206个、207个、208个、209个、210个、211个、212个、213个、214个、215个、216个、217个、218个、219个、220个、221个、222个、223个、224个、225个、226个、227个、228个、229个、230个、231个、232个、233个、234个、235个、236个、237个、238个、239个、240个、241个、242个、243个、244个、245个、246个、247个、248个、249个、250个、251个、252个、253个、254个、255个、256个、257个、258个、259个、260个、261个、262个、263个、264个、265个、266个、267个、268个、269个、270个、271个、272个、273个、274个、275个、276个、277个、278个、279个、280个、281个、282个、283个、284个、285个、286个、287个、288个、289个、290个、291个、292个、293个、294个、295个、296个、297个、298个、299个、300个、301个、302个、303个、304个、305个、306个、307个、308个、309个、310个、311个、312个、313个、314个、315个、316个、317个、318个、319个、320个、321个、322个、323个、324个、325个、326个、327个、328个、329个、330个、331个、332个、333个、334个、335个、336个、337个、338个、339个、340个、341个、342个、343个、344个、345个、346个、347个、348个、349个、350个、351个、352个、353个、354个、355个、356个、357个、358个、359个、360个、361个、362个、363个、364个、365个、366个、367个、368个、369个、370个、371个、372个、373个、374个、375个、376个、377个、378个、379个、380个、381个、382个、383个、384个、385个、386个、387个、388个、389个、390个、391个、392个、393个、394个、395个、396个、397个、398个、399个、400个、401个、402个、403个、404个、405个、406个、407个、408个、409个、410个、411个、412个、413个、414个、415个、416个、417个、418个、419个、420个、421个、422个、423个、424个、425个、426个、427个、428个、429个、430个、431个、432个、433个、434个、435个、436个、437个、438个、439个、440个、441个、442个、443个、444个、445个、446个、447个、448个、449个、450个、451个、452个、453个、454个、455个、456个、457个、458个、459个、460个、461个、462个、463个、464个、465个、466个、467个、468个、469个、470个、471个、472个、473个、474个、475个、476个、477个、478个、479个、480个、481个、482个、483个、484个、485个、486个、487个、488个、489个、490个、491个、492个、493个、494个、495个、496个、497个、498个、499个、500个、501个、502个、503个、504个、505个、506个、507个、508个、509个、510个、511个、512个、513个、514个、515个、516个、517个、518个、519个、520个、521个、522个、523个、524个、525个、526个、527个、528个、529个、530个、531个、532个、533个、534个、535个、536个、537个、538个、539个、540个、541个、542个、543个、544个、545个、546个、547个、548个、549个、550个、551个、552个、553个、554个、555个、556个、557个、558个、559个、560个、561个、562个、563个、564个、565个、566个、567个、568个、569个、570个、571个、572个、573个、574个、575个、576个、577个、578个、579个、580个、581个、582个、583个、584个、585个、586个、587个、588个、589个、590个、591个、592个、593个、594个、595个、596个、597个、598个、599个、600个、601个、602个、603个、604个、605个、606个、607个、608个、609个、610个、611个、612个、613个、614个、615个、616个、617个、618个、619个、620个、621个、622个、623个、624个、625个、626个、627个、628个、629个、630个、631个、632个、633个、634个、635个、636个、637个、638个、639个、640个、641个、642个、643个、644个、645个、646个、647个、648个、649个、650个、651个、652个、653个、654个、655个、656个、657个、658个、659个、660个、661个、662个、663个、664个、665个、666个、667个、668个、669个、670个、671个、672个、673个、674个、675个、676个、677个、678个、679个、680个、681个、682个、683个、684个、685个、686个、687个、688个、689个、690个、691个、692个、693个、694个、695个、696个、697个、698个、699个、700个、701个、702个、703个、704个、705个、706个、707个、708个、709个、710个、711个、712个、713个、714个、715个、716个、717个、718个、719个、720个、721个、722个、723个、724个、725个、726个、727个、728个、729个、730个、731个、732个、733个、734个、735个、736个、737个、738个、739个、740个、741个、742个、743个、744个、745个、746个、747个、748个、749个、750个、751个、752个、753个、754个、755个、756个、757个、758个、759个、760个、761个、762个、763个、764个、765个、766个、767个、768个、769个、770个、771个、772个、773个、774个、775个、776个、777个、778个、779个、780个、781个、782个、783个、784个、785个、786个、787个、788个、789个、790个、791个、792个、793个、794个、795个、796个、797个、798个、799个、800个、801个、802个、803个、804个、805个、806个、807个、808个、809个、810个、811个、812个、813个、814个、815个、816个、817个、818个、819个、820个、821个、822个、823个、824个、825个、826个、827个、828个、829个、830个、831个、832个、833个、834个、835个、836个、837个、838个、839个、840个、841个、842个、843个、844个、845个、846个、847个、848个、849个、850个、851个、852个、853个、854个、855个、856个、857个、858个、859个、860个、861个、862个、863个、864个、865个、866个、867个、868个、869个、870个、871个、872个、873个、874个、875个、876个、877个、878个、879个、880个、881个、882个、883个、884个、885个、886个、887个、888个、889个、890个、891个、892个、893个、894个、895个、896个、897个、898个、899个、900个、901个、902个、903个、904个、905个、906个、907个、908个、909个、910个、911个、912个、913个、914个、915个、916个、917个、918个、919个、920个、921个、922个、923个、924个、925个、926个、927个、928个、929个、930个、931个、932个、933个、934个、935个、936个、937个、938个、939个、940个、941个、942个、943个、944个、945个、946个、947个、948个、949个、950个、951个、952个、953个、954个、955个、956个、957个、958个、959个、960个、961个、962个、963个、964个、965个、966个、967个、968个、969个、970个、971个、972个、973个、974个、975个、976个、977个、978个、979个、980个、981个、982个、983个、984个、985个、986个、987个、988个、989个、990个、991个、992个、993个、994个、995个、996个、997个、998个、999个或1000个或多于1000个或其可推导出的任何范围的连续的氨基酸或核酸具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的相似性、同一性或同源性。

本公开的多肽或多核苷酸，例如那些包含或编码TERT多肽的，可以包含SEQ IDNO:1至SEQ ID NO:10中的3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个、107个、108个、109个、110个、111个、112个、113个、114个、115个、116个、117个、118个、119个、120个、121个、122个、123个、124个、125个、126个、127个、128个、129个、130个、131个、132个、133个、134个、135个、136个、137个、138个、139个、140个、141个、142个、143个、144个、145个、146个、147个、148个、149个、150个、151个、152个、153个、154个、155个、156个、157个、158个、159个、160个、161个、162个、163个、164个、165个、166个、167个、168个、169个、170个、171个、172个、173个、174个、175个、176个、177个、178个、179个、180个、181个、182个、183个、184个、185个、186个、187个、188个、189个、190个、191个、192个、193个、194个、195个、196个、197个、198个、199个、200个、201个、202个、203个、204个、205个、206个、207个、208个、209个、210个、211个、212个、213个、214个、215个、216个、217个、218个、219个、220个、221个、222个、223个、224个、225个、226个、227个、228个、229个、230个、231个、232个、233个、234个、235个、236个、237个、238个、239个、240个、241个、242个、243个、244个、245个、246个、247个、248个、249个、250个、251个、252个、253个、254个、255个、256个、257个、258个、259个、260个、261个、262个、263个、264个、265个、266个、267个、268个、269个、270个、271个、272个、273个、274个、275个、276个、277个、278个、279个、280个、281个、282个、283个、284个、285个、286个、287个、288个、289个、290个、291个、292个、293个、294个、295个、296个、297个、298个、299个、300个、301个、302个、303个、304个、305个、306个、307个、308个、309个、310个、311个、312个、313个、314个、315个、316个、317个、318个、319个、320个、321个、322个、323个、324个、325个、326个、327个、328个、329个、330个、331个、332个、333个、334个、335个、336个、337个、338个、339个、340个、341个、342个、343个、344个、345个、346个、347个、348个、349个、350个、351个、352个、353个、354个、355个、356个、357个、358个、359个、360个、361个、362个、363个、364个、365个、366个、367个、368个、369个、370个、371个、372个、373个、374个、375个、376个、377个、378个、379个、380个、381个、382个、383个、384个、385个、386个、387个、388个、389个、390个、391个、392个、393个、394个、395个、396个、397个、398个、399个、400个、401个、402个、403个、404个、405个、406个、407个、408个、409个、410个、411个、412个、413个、414个、415个、416个、417个、418个、419个、420个、421个、422个、423个、424个、425个、426个、427个、428个、429个、430个、431个、432个、433个、434个、435个、436个、437个、438个、439个、440个、441个、442个、443个、444个、445个、446个、447个、448个、449个、450个、451个、452个、453个、454个、455个、456个、457个、458个、459个、460个、461个、462个、463个、464个、465个、466个、467个、468个、469个、470个、471个、472个、473个、474个、475个、476个、477个、478个、479个、480个、481个、482个、483个、484个、485个、486个、487个、488个、489个、490个、491个、492个、493个、494个、495个、496个、497个、498个、499个、500个、501个、502个、503个、504个、505个、506个、507个、508个、509个、510个、511个、512个、513个、514个、515个、516个、517个、518个、519个、520个、521个、522个、523个、524个、525个、526个、527个、528个、529个、530个、531个、532个、533个、534个、535个、536个、537个、538个、539个、540个、541个、542个、543个、544个、545个、546个、547个、548个、549个、550个、551个、552个、553个、554个、555个、556个、557个、558个、559个、560个、561个、562个、563个、564个、565个、566个、567个、568个、569个、570个、571个、572个、573个、574个、575个、576个、577个、578个、579个、580个、581个、582个、583个、584个、585个、586个、587个、588个、589个、590个、591个、592个、593个、594个、595个、596个、597个、598个、599个、600个、601个、602个、603个、604个、605个、606个、607个、608个、609个、610个、611个、612个、613个、614个、615个、616个、617个、618个、619个、620个、621个、622个、623个、624个、625个、626个、627个、628个、629个、630个、631个、632个、633个、634个、635个、636个、637个、638个、639个、640个、641个、642个、643个、644个、645个、646个、647个、648个、649个、650个、651个、652个、653个、654个、655个、656个、657个、658个、659个、660个、661个、662个、663个、664个、665个、666个、667个、668个、669个、670个、671个、672个、673个、674个、675个、676个、677个、678个、679个、680个、681个、682个、683个、684个、685个、686个、687个、688个、689个、690个、691个、692个、693个、694个、695个、696个、697个、698个、699个、700个、701个、702个、703个、704个、705个、706个、707个、708个、709个、710个、711个、712个、713个、714个、715个、716个、717个、718个、719个、720个、721个、722个、723个、724个、725个、726个、727个、728个、729个、730个、731个、732个、733个、734个、735个、736个、737个、738个、739个、740个、741个、742个、743个、744个、745个、746个、747个、748个、749个、750个、751个、752个、753个、754个、755个、756个、757个、758个、759个、760个、761个、762个、763个、764个、765个、766个、767个、768个、769个、770个、771个、772个、773个、774个、775个、776个、777个、778个、779个、780个、781个、782个、783个、784个、785个、786个、787个、788个、789个、790个、791个、792个、793个、794个、795个、796个、797个、798个、799个、800个、801个、802个、803个、804个、805个、806个、807个、808个、809个、810个、811个、812个、813个、814个、815个、816个、817个、818个、819个、820个、821个、822个、823个、824个、825个、826个、827个、828个、829个、830个、831个、832个、833个、834个、835个、836个、837个、838个、839个、840个、841个、842个、843个、844个、845个、846个、847个、848个、849个、850个、851个、852个、853个、854个、855个、856个、857个、858个、859个、860个、861个、862个、863个、864个、865个、866个、867个、868个、869个、870个、871个、872个、873个、874个、875个、876个、877个、878个、879个、880个、881个、882个、883个、884个、885个、886个、887个、888个、889个、890个、891个、892个、893个、894个、895个、896个、897个、898个、899个、900个、901个、902个、903个、904个、905个、906个、907个、908个、909个、910个、911个、912个、913个、914个、915个、916个、917个、918个、919个、920个、921个、922个、923个、924个、925个、926个、927个、928个、929个、930个、931个、932个、933个、934个、935个、936个、937个、938个、939个、940个、941个、942个、943个、944个、945个、946个、947个、948个、949个、950个、951个、952个、953个、954个、955个、956个、957个、958个、959个、960个、961个、962个、963个、964个、965个、966个、967个、968个、969个、970个、971个、972个、973个、974个、975个、976个、977个、978个、979个、980个、981个、982个、983个、984个、985个、986个、987个、988个、989个、990个、991个、992个、993个、994个、995个、996个、997个、998个、999个、1000个、1001个、1002个、1003个、1004个、1005个、1006个、1007个、1008个、1009个、1010个、1011个、1012个、1013个、1014个、1015个、1016个、1017个、1018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在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中的1个至2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个、107个、108个、109个、110个、111个、112个、113个、114个、115个、116个、117个、118个、119个、120个、121个、122个、123个、124个、125个、126个、127个、128个、129个、130个、131个、132个、133个、134个、135个、136个、137个、138个、139个、140个、141个、142个、143个、144个、145个、146个、147个、148个、149个、150个、151个、152个、153个、154个、155个、156个、157个、158个、159个、160个、161个、162个、163个、164个、165个、166个、167个、168个、169个、170个、171个、172个、173个、174个、175个、176个、177个、178个、179个、180个、181个、182个、183个、184个、185个、186个、187个、188个、189个、190个、191个、192个、193个、194个、195个、196个、197个、198个、199个、200个、201个、202个、203个、204个、205个、206个、207个、208个、209个、210个、211个、212个、213个、214个、215个、216个、217个、218个、219个、220个、221个、222个、223个、224个、225个、226个、227个、228个、229个、230个、231个、232个、233个、234个、235个、236个、237个、238个、239个、240个、241个、242个、243个、244个、245个、246个、247个、248个、249个、250个、251个、252个、253个、254个、255个、256个、257个、258个、259个、260个、261个、262个、263个、264个、265个、266个、267个、268个、269个、270个、271个、272个、273个、274个、275个、276个、277个、278个、279个、280个、281个、282个、283个、284个、285个、286个、287个、288个、289个、290个、291个、292个、293个、294个、295个、296个、297个、298个、299个、300个、301个、302个、303个、304个、305个、306个、307个、308个、309个、310个、311个、312个、313个、314个、315个、316个、317个、318个、319个、320个、321个、322个、323个、324个、325个、326个、327个、328个、329个、330个、331个、332个、333个、334个、335个、336个、337个、338个、339个、340个、341个、342个、343个、344个、345个、346个、347个、348个、349个、350个、351个、352个、353个、354个、355个、356个、357个、358个、359个、360个、361个、362个、363个、364个、365个、366个、367个、368个、369个、370个、371个、372个、373个、374个、375个、376个、377个、378个、379个、380个、381个、382个、383个、384个、385个、386个、387个、388个、389个、390个、391个、392个、393个、394个、395个、396个、397个、398个、399个、400个、401个、402个、403个、404个、405个、406个、407个、408个、409个、410个、411个、412个、413个、414个、415个、416个、417个、418个、419个、420个、421个、422个、423个、424个、425个、426个、427个、428个、429个、430个、431个、432个、433个、434个、435个、436个、437个、438个、439个、440个、441个、442个、443个、444个、445个、446个、447个、448个、449个、450个、451个、452个、453个、454个、455个、456个、457个、458个、459个、460个、461个、462个、463个、464个、465个、466个、467个、468个、469个、470个、471个、472个、473个、474个、475个、476个、477个、478个、479个、480个、481个、482个、483个、484个、485个、486个、487个、488个、489个、490个、491个、492个、493个、494个、495个、496个、497个、498个、499个、500个、501个、502个、503个、504个、505个、506个、507个、508个、509个、510个、511个、512个、513个、514个、515个、516个、517个、518个、519个、520个、521个、522个、523个、524个、525个、526个、527个、528个、529个、530个、531个、532个、533个、534个、535个、536个、537个、538个、539个、540个、541个、542个、543个、544个、545个、546个、547个、548个、549个、550个、551个、552个、553个、554个、555个、556个、557个、558个、559个、560个、561个、562个、563个、564个、565个、566个、567个、568个、569个、570个、571个、572个、573个、574个、575个、576个、577个、578个、579个、580个、581个、582个、583个、584个、585个、586个、587个、588个、589个、590个、591个、592个、593个、594个、595个、596个、597个、598个、599个、600个、601个、602个、603个、604个、605个、606个、607个、608个、609个、610个、611个、612个、613个、614个、615个、616个、617个、618个、619个、620个、621个、622个、623个、624个、625个、626个、627个、628个、629个、630个、631个、632个、633个、634个、635个、636个、637个、638个、639个、640个、641个、642个、643个、644个、645个、646个、647个、648个、649个、650个、651个、652个、653个、654个、655个、656个、657个、658个、659个、660个、661个、662个、663个、664个、665个、666个、667个、668个、669个、670个、671个、672个、673个、674个、675个、676个、677个、678个、679个、680个、681个、682个、683个、684个、685个、686个、687个、688个、689个、690个、691个、692个、693个、694个、695个、696个、697个、698个、699个、700个、701个、702个、703个、704个、705个、706个、707个、708个、709个、710个、711个、712个、713个、714个、715个、716个、717个、718个、719个、720个、721个、722个、723个、724个、725个、726个、727个、728个、729个、730个、731个、732个、733个、734个、735个、736个、737个、738个、739个、740个、741个、742个、743个、744个、745个、746个、747个、748个、749个、750个、751个、752个、753个、754个、755个、756个、757个、758个、759个、760个、761个、762个、763个、764个、765个、766个、767个、768个、769个、770个、771个、772个、773个、774个、775个、776个、777个、778个、779个、780个、781个、782个、783个、784个、785个、786个、787个、788个、789个、790个、791个、792个、793个、794个、795个、796个、797个、798个、799个、800个、801个、802个、803个、804个、805个、806个、807个、808个、809个、810个、811个、812个、813个、814个、815个、816个、817个、818个、819个、820个、821个、822个、823个、824个、825个、826个、827个、828个、829个、830个、831个、832个、833个、834个、835个、836个、837个、838个、839个、840个、841个、842个、843个、844个、845个、846个、847个、848个、849个、850个、851个、852个、853个、854个、855个、856个、857个、858个、859个、860个、861个、862个、863个、864个、865个、866个、867个、868个、869个、870个、871个、872个、873个、874个、875个、876个、877个、878个、879个、880个、881个、882个、883个、884个、885个、886个、887个、888个、889个、890个、891个、892个、893个、894个、895个、896个、897个、898个、899个、900个、901个、902个、903个、904个、905个、906个、907个、908个、909个、910个、911个、912个、913个、914个、915个、916个、917个、918个、919个、920个、921个、922个、923个、924个、925个、926个、927个、928个、929个、930个、931个、932个、933个、934个、935个、936个、937个、938个、939个、940个、941个、942个、943个、944个、945个、946个、947个、948个、949个、950个、951个、952个、953个、954个、955个、956个、957个、958个、959个、960个、961个、962个、963个、964个、965个、966个、967个、968个、969个、970个、971个、972个、973个、974个、975个、976个、977个、978个、979个、980个、981个、982个、983个、984个、985个、986个、987个、988个、989个、990个、991个、992个、993个、994个、995个、996个、997个、998个、999个、1000个、1001个、1002个、1003个、1004个、1005个、1006个、1007个、1008个、1009个、1010个、1011个、1012个、1013个、1014个、1015个、1016个、1017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在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个、107个、108个、109个、110个、111个、112个、113个、114个、115个、116个、117个、118个、119个、120个、121个、122个、123个、124个、125个、126个、127个、128个、129个、130个、131个、132个、133个、134个、135个、136个、137个、138个、139个、140个、141个、142个、143个、144个、145个、146个、147个、148个、149个、150个、151个、152个、153个、154个、155个、156个、157个、158个、159个、160个、161个、162个、163个、164个、165个、166个、167个、168个、169个、170个、171个、172个、173个、174个、175个、176个、177个、178个、179个、180个、181个、182个、183个、184个、185个、186个、187个、188个、189个、190个、191个、192个、193个、194个、195个、196个、197个、198个、199个、200个、201个、202个、203个、204个、205个、206个、207个、208个、209个、210个、211个、212个、213个、214个、215个、216个、217个、218个、219个、220个、221个、222个、223个、224个、225个、226个、227个、228个、229个、230个、231个、232个、233个、234个、235个、236个、237个、238个、239个、240个、241个、242个、243个、244个、245个、246个、247个、248个、249个、250个、251个、252个、253个、254个、255个、256个、257个、258个、259个、260个、261个、262个、263个、264个、265个、266个、267个、268个、269个、270个、271个、272个、273个、274个、275个、276个、277个、278个、279个、280个、281个、282个、283个、284个、285个、286个、287个、288个、289个、290个、291个、292个、293个、294个、295个、296个、297个、298个、299个、300个、301个、302个、303个、304个、305个、306个、307个、308个、309个、310个、311个、312个、313个、314个、315个、316个、317个、318个、319个、320个、321个、322个、323个、324个、325个、326个、327个、328个、329个、330个、331个、332个、333个、334个、335个、336个、337个、338个、339个、340个、341个、342个、343个、344个、345个、346个、347个、348个、349个、350个、351个、352个、353个、354个、355个、356个、357个、358个、359个、360个、361个、362个、363个、364个、365个、366个、367个、368个、369个、370个、371个、372个、373个、374个、375个、376个、377个、378个、379个、380个、381个、382个、383个、384个、385个、386个、387个、388个、389个、390个、391个、392个、393个、394个、395个、396个、397个、398个、399个、400个、401个、402个、403个、404个、405个、406个、407个、408个、409个、410个、411个、412个、413个、414个、415个、416个、417个、418个、419个、420个、421个、422个、423个、424个、425个、426个、427个、428个、429个、430个、431个、432个、433个、434个、435个、436个、437个、438个、439个、440个、441个、442个、443个、444个、445个、446个、447个、448个、449个、450个、451个、452个、453个、454个、455个、456个、457个、458个、459个、460个、461个、462个、463个、464个、465个、466个、467个、468个、469个、470个、471个、472个、473个、474个、475个、476个、477个、478个、479个、480个、481个、482个、483个、484个、485个、486个、487个、488个、489个、490个、491个、492个、493个、494个、495个、496个、497个、498个、499个、500个、501个、502个、503个、504个、505个、506个、507个、508个、509个、510个、511个、512个、513个、514个、515个、516个、517个、518个、519个、520个、521个、522个、523个、524个、525个、526个、527个、528个、529个、530个、531个、532个、533个、534个、535个、536个、537个、538个、539个、540个、541个、542个、543个、544个、545个、546个、547个、548个、549个、550个、551个、552个、553个、554个、555个、556个、557个、558个、559个、560个、561个、562个、563个、564个、565个、566个、567个、568个、569个、570个、571个、572个、573个、574个、575个、576个、577个、578个、579个、580个、581个、582个、583个、584个、585个、586个、587个、588个、589个、590个、591个、592个、593个、594个、595个、596个、597个、598个、599个、600个、601个、602个、603个、604个、605个、606个、607个、608个、609个、610个、611个、612个、613个、614个或615个(或其中可推导出的任何范围)的连续氨基酸。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个、107个、108个、109个、110个、111个、112个、113个、114个、115个、116个、117个、118个、119个、120个、121个、122个、123个、124个、125个、126个、127个、128个、129个、130个、131个、132个、133个、134个、135个、136个、137个、138个、139个、140个、141个、142个、143个、144个、145个、146个、147个、148个、149个、150个、151个、152个、153个、154个、155个、156个、157个、158个、159个、160个、161个、162个、163个、164个、165个、166个、167个、168个、169个、170个、171个、172个、173个、174个、175个、176个、177个、178个、179个、180个、181个、182个、183个、184个、185个、186个、187个、188个、189个、190个、191个、192个、193个、194个、195个、196个、197个、198个、199个、200个、201个、202个、203个、204个、205个、206个、207个、208个、209个、210个、211个、212个、213个、214个、215个、216个、217个、218个、219个、220个、221个、222个、223个、224个、225个、226个、227个、228个、229个、230个、231个、232个、233个、234个、235个、236个、237个、238个、239个、240个、241个、242个、243个、244个、245个、246个、247个、248个、249个、250个、251个、252个、253个、254个、255个、256个、257个、258个、259个、260个、261个、262个、263个、264个、265个、266个、267个、268个、269个、270个、271个、272个、273个、274个、275个、276个、277个、278个、279个、280个、281个、282个、283个、284个、285个、286个、287个、288个、289个、290个、291个、292个、293个、294个、295个、296个、297个、298个、299个、300个、301个、302个、303个、304个、305个、306个、307个、308个、309个、310个、311个、312个、313个、314个、315个、316个、317个、318个、319个、320个、321个、322个、323个、324个、325个、326个、327个、328个、329个、330个、331个、332个、333个、334个、335个、336个、337个、338个、339个、340个、341个、342个、343个、344个、345个、346个、347个、348个、349个、350个、351个、352个、353个、354个、355个、356个、357个、358个、359个、360个、361个、362个、363个、364个、365个、366个、367个、368个、369个、370个、371个、372个、373个、374个、375个、376个、377个、378个、379个、380个、381个、382个、383个、384个、385个、386个、387个、388个、389个、390个、391个、392个、393个、394个、395个、396个、397个、398个、399个、400个、401个、402个、403个、404个、405个、406个、407个、408个、409个、410个、411个、412个、413个、414个、415个、416个、417个、418个、419个、420个、421个、422个、423个、424个、425个、426个、427个、428个、429个、430个、431个、432个、433个、434个、435个、436个、437个、438个、439个、440个、441个、442个、443个、444个、445个、446个、447个、448个、449个、450个、451个、452个、453个、454个、455个、456个、457个、458个、459个、460个、461个、462个、463个、464个、465个、466个、467个、468个、469个、470个、471个、472个、473个、474个、475个、476个、477个、478个、479个、480个、481个、482个、483个、484个、485个、486个、487个、488个、489个、490个、491个、492个、493个、494个、495个、496个、497个、498个、499个、500个、501个、502个、503个、504个、505个、506个、507个、508个、509个、510个、511个、512个、513个、514个、515个、516个、517个、518个、519个、520个、521个、522个、523个、524个、525个、526个、527个、528个、529个、530个、531个、532个、533个、534个、535个、536个、537个、538个、539个、540个、541个、542个、543个、544个、545个、546个、547个、548个、549个、550个、551个、552个、553个、554个、555个、556个、557个、558个、559个、560个、561个、562个、563个、564个、565个、566个、567个、568个、569个、570个、571个、572个、573个、574个、575个、576个、577个、578个、579个、580个、581个、582个、583个、584个、585个、586个、587个、588个、589个、590个、591个、592个、593个、594个、595个、596个、597个、598个、599个、600个、601个、602个、603个、604个、605个、606个、607个、608个、609个、610个、611个、612个、613个、614个、615个、616个、617个、618个、619个、620个、621个、622个、623个、624个、625个、626个、627个、628个、629个、630个、631个、632个、633个、634个、635个、636个、637个、638个、639个、640个、641个、642个、643个、644个、645个、646个、647个、648个、649个、650个、651个、652个、653个、654个、655个、656个、657个、658个、659个、660个、661个、662个、663个、664个、665个、666个、667个、668个、669个、670个、671个、672个、673个、674个、675个、676个、677个、678个、679个、680个、681个、682个、683个、684个、685个、686个、687个、688个、689个、690个、691个、692个、693个、694个、695个、696个、697个、698个、699个、700个、701个、702个、703个、704个、705个、706个、707个、708个、709个、710个、711个、712个、713个、714个、715个、716个、717个、718个、719个、720个、721个、722个、723个、724个、725个、726个、727个、728个、729个、730个、731个、732个、733个、734个、735个、736个、737个、738个、739个、740个、741个、742个、743个、744个、745个、746个、747个、748个、749个、750个、751个、752个、753个、754个、755个、756个、757个、758个、759个、760个、761个、762个、763个、764个、765个、766个、767个、768个、769个、770个、771个、772个、773个、774个、775个、776个、777个、778个、779个、780个、781个、782个、783个、784个、785个、786个、787个、788个、789个、790个、791个、792个、793个、794个、795个、796个、797个、798个、799个、800个、801个、802个、803个、804个、805个、806个、807个、808个、809个、810个、811个、812个、813个、814个、815个、816个、817个、818个、819个、820个、821个、822个、823个、824个、825个、826个、827个、828个、829个、830个、831个、832个、833个、834个、835个、836个、837个、838个、839个、840个、841个、842个、843个、844个、845个、846个、847个、848个、849个、850个、851个、852个、853个、854个、855个、856个、857个、858个、859个、860个、861个、862个、863个、864个、865个、866个、867个、868个、869个、870个、871个、872个、873个、874个、875个、876个、877个、878个、879个、880个、881个、882个、883个、884个、885个、886个、887个、888个、889个、890个、891个、892个、893个、894个、895个、896个、897个、898个、899个、900个、901个、902个、903个、904个、905个、906个、907个、908个、909个、910个、911个、912个、913个、914个、915个、916个、917个、918个、919个、920个、921个、922个、923个、924个、925个、926个、927个、928个、929个、930个、931个、932个、933个、934个、935个、936个、937个、938个、939个、940个、941个、942个、943个、944个、945个、946个、947个、948个、949个、950个、951个、952个、953个、954个、955个、956个、957个、958个、959个、960个、961个、962个、963个、964个、965个、966个、967个、968个、969个、970个、971个、972个、973个、974个、975个、976个、977个、978个、979个、980个、981个、982个、983个、984个、985个、986个、987个、988个、989个、990个、991个、992个、993个、994个、995个、996个、997个、998个、999个或1000个(或其中可推导出的任何范围)的连续氨基酸，其与SEQ IDNO:1至SEQ ID NO:10中的一个具有至少或至多或恰好60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的相似性、同一性或同源性。

本公开的多肽或多核苷酸可以包含至少、至多或恰好1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个、107个、108个、109个、110个、111个、112个、113个、114个、115个、116个、117个、118个、119个、120个、121个、122个、123个、124个、125个、126个、127个、128个、129个、130个、131个、132个、133个、134个、135个、136个、137个、138个、139个、140个、141个、142个、143个、144个、145个、146个、147个、148个、149个、150个、151个、152个、153个、154个、155个、156个、157个、158个、159个、160个、161个、162个、163个、164个、165个、166个、167个、168个、169个、170个、171个、172个、173个、174个、175个、176个、177个、178个、179个、180个、181个、182个、183个、184个、185个、186个、187个、188个、189个、190个、191个、192个、193个、194个、195个、196个、197个、198个、199个、200个、201个、202个、203个、204个、205个、206个、207个、208个、209个、210个、211个、212个、213个、214个、215个、216个、217个、218个、219个、220个、221个、222个、223个、224个、225个、226个、227个、228个、229个、230个、231个、232个、233个、234个、235个、236个、237个、238个、239个、240个、241个、242个、243个、244个、245个、246个、247个、248个、249个、250个、251个、252个、253个、254个、255个、256个、257个、258个、259个、260个、261个、262个、263个、264个、265个、266个、267个、268个、269个、270个、271个、272个、273个、274个、275个、276个、277个、278个、279个、280个、281个、282个、283个、284个、285个、286个、287个、288个、289个、290个、291个、292个、293个、294个、295个、296个、297个、298个、299个、300个、301个、302个、303个、304个、305个、306个、307个、308个、309个、310个、311个、312个、313个、314个、315个、316个、317个、318个、319个、320个、321个、322个、323个、324个、325个、326个、327个、328个、329个、330个、331个、332个、333个、334个、335个、336个、337个、338个、339个、340个、341个、342个、343个、344个、345个、346个、347个、348个、349个、350个、351个、352个、353个、354个、355个、356个、357个、358个、359个、360个、361个、362个、363个、364个、365个、366个、367个、368个、369个、370个、371个、372个、373个、374个、375个、376个、377个、378个、379个、380个、381个、382个、383个、384个、385个、386个、387个、388个、389个、390个、391个、392个、393个、394个、395个、396个、397个、398个、399个、400个、401个、402个、403个、404个、405个、406个、407个、408个、409个、410个、411个、412个、413个、414个、415个、416个、417个、418个、419个、420个、421个、422个、423个、424个、425个、426个、427个、428个、429个、430个、431个、432个、433个、434个、435个、436个、437个、438个、439个、440个、441个、442个、443个、444个、445个、446个、447个、448个、449个、450个、451个、452个、453个、454个、455个、456个、457个、458个、459个、460个、461个、462个、463个、464个、465个、466个、467个、468个、469个、470个、471个、472个、473个、474个、475个、476个、477个、478个、479个、480个、481个、482个、483个、484个、485个、486个、487个、488个、489个、490个、491个、492个、493个、494个、495个、496个、497个、498个、499个、500个、501个、502个、503个、504个、505个、506个、507个、508个、509个、510个、511个、512个、513个、514个、515个、516个、517个、518个、519个、520个、521个、522个、523个、524个、525个、526个、527个、528个、529个、530个、531个、532个、533个、534个、535个、536个、537个、538个、539个、540个、541个、542个、543个、544个、545个、546个、547个、548个、549个、550个、551个、552个、553个、554个、555个、556个、557个、558个、559个、560个、561个、562个、563个、564个、565个、566个、567个、568个、569个、570个、571个、572个、573个、574个、575个、576个、577个、578个、579个、580个、581个、582个、583个、584个、585个、586个、587个、588个、589个、590个、591个、592个、593个、594个、595个、596个、597个、598个、599个或600个置换。

置换可以位于SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10之一的氨基酸位置或核酸位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、524、525、526、527、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、717、718、719、720、721、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743、744、745、746、747、748、749、750、751、752、753、754、755、756、757、758、759、760、761、762、763、764、765、766、767、768、769、770、771、772、773、774、775、776、777、778、779、780、781、782、783、784、785、786、787、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813、814、815、816、817、818、819、820、821、822、823、824、825、826、827、828、829、830、831、832、833、834、835、836、837、838、839、840、841、842、843、844、845、846、847、848、849、850、851、852、853、854、855、856、857、858、859、860、861、862、863、864、865、866、867、868、869、870、871、872、873、874、875、876、877、878、879、880、881、882、883、884、885、886、887、888、889、890、891、892、893、894、895、896、897、898、899、900、901、902、903、904、905、906、907、908、909、910、911、912、913、914、915、916、917、918、919、920、921、922、923、924、925、926、927、928、929、930、931、932、933、934、935、936、937、938、939、940、941、942、943、944、945、946、947、948、949、950、951、952、953、954、955、956、957、958、959、960、961、962、963、964、965、966、967、968、969、970、971、972、973、974、975、976、977、978、979、980、981、982、983、984、985、986、987、988、989、990、991、992、993、994、995、996、997、998、999或1000。

本文所述的多肽可以是固定长度为至少、至多或恰好5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个、107个、108个、109个、110个、111个、112个、113个、114个、115个、116个、117个、118个、119个、120个、121个、122个、123个、124个、125个、126个、127个、128个、129个、130个、131个、132个、133个、134个、135个、136个、137个、138个、139个、140个、141个、142个、143个、144个、145个、146个、147个、148个、149个、150个、151个、152个、153个、154个、155个、156个、157个、158个、159个、160个、161个、162个、163个、164个、165个、166个、167个、168个、169个、170个、171个、172个、173个、174个、175个、176个、177个、178个、179个、180个、181个、182个、183个、184个、185个、186个、187个、188个、189个、190个、191个、192个、193个、194个、195个、196个、197个、198个、199个、200个、201个、202个、203个、204个、205个、206个、207个、208个、209个、210个、211个、212个、213个、214个、215个、216个、217个、218个、219个、220个、221个、222个、223个、224个、225个、226个、227个、228个、229个、230个、231个、232个、233个、234个、235个、236个、237个、238个、239个、240个、241个、242个、243个、244个、245个、246个、247个、248个、249个、250个、251个、252个、253个、254个、255个、256个、257个、258个、259个、260个、261个、262个、263个、264个、265个、266个、267个、268个、269个、270个、271个、272个、273个、274个、275个、276个、277个、278个、279个、280个、281个、282个、283个、284个、285个、286个、287个、288个、289个、290个、291个、292个、293个、294个、295个、296个、297个、298个、299个、300个、301个、302个、303个、304个、305个、306个、307个、308个、309个、310个、311个、312个、313个、314个、315个、316个、317个、318个、319个、320个、321个、322个、323个、324个、325个、326个、327个、328个、329个、330个、331个、332个、333个、334个、335个、336个、337个、338个、339个、340个、341个、342个、343个、344个、345个、346个、347个、348个、349个、350个、351个、352个、353个、354个、355个、356个、357个、358个、359个、360个、361个、362个、363个、364个、365个、366个、367个、368个、369个、370个、371个、372个、373个、374个、375个、376个、377个、378个、379个、380个、381个、382个、383个、384个、385个、386个、387个、388个、389个、390个、391个、392个、393个、394个、395个、396个、397个、398个、399个、400个、401个、402个、403个、404个、405个、406个、407个、408个、409个、410个、411个、412个、413个、414个、415个、416个、417个、418个、419个、420个、421个、422个、423个、424个、425个、426个、427个、428个、429个、430个、431个、432个、433个、434个、435个、436个、437个、438个、439个、440个、441个、442个、443个、444个、445个、446个、447个、448个、449个、450个、451个、452个、453个、454个、455个、456个、457个、458个、459个、460个、461个、462个、463个、464个、465个、466个、467个、468个、469个、470个、471个、472个、473个、474个、475个、476个、477个、478个、479个、480个、481个、482个、483个、484个、485个、486个、487个、488个、489个、490个、491个、492个、493个、494个、495个、496个、497个、498个、499个或500个或多于500个氨基酸(或其中可推导出的任何范围)。

置换变体通常包含在蛋白质或多肽内的一个或多于一个位点处一种氨基酸与另一种氨基酸的交换，并且可以设计用来调节多肽的一种或多于一种特性，其他功能或特性保留或损失。置换可以是保守的，即一个氨基酸被一个具有相似形状和电荷的氨基酸所取代。保守置换是本领域众所周知的，包括例如以下变化：丙氨酸到丝氨酸；精氨酸到赖氨酸；天冬酰胺谷氨酰胺或组氨酸；天冬氨酸到谷氨酸；半胱氨酸到丝氨酸；谷氨酰胺到天冬酰胺；谷氨酸到天冬氨酸；甘氨酸到脯氨酸；组氨酸到天冬酰胺或谷氨酰胺；异亮氨酸到亮氨酸或缬氨酸；亮氨酸到缬氨酸或异亮氨酸；赖氨酸到精氨酸；蛋氨酸到亮氨酸或异亮氨酸；苯丙氨酸到酪氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸；丝氨酸到苏氨酸；苏氨酸到丝氨酸；色氨酸到酪氨酸；酪氨酸到色氨酸或苯丙氨酸；和缬氨酸到异亮氨酸或亮氨酸。或者，置换可以是非保守的，从而影响多肽的功能或活性。非保守性改变通常涉及用化学性质不同的残基替换残基，例如用极性或带电氨基酸代替非极性或不带电氨基酸，反之亦然。

蛋白质可以是重组的，也可以是体外合成的。或者，可以从细菌中分离非重组或重组蛋白质。还预期可以在组合物和方法中实施含有这种变体的细菌。因此，不需要分离蛋白质。

术语“功能等效密码子”在本文中用于指对相同氨基酸进行编码的密码子，例如精氨酸或丝氨酸的六个密码子，也指对生物学等效氨基酸进行编码的密码子。

还应理解，氨基酸和核酸序列可分别包括额外的残基，例如额外的N或C末端氨基酸，或5'或3'序列，但仍与本文公开的序列中的一个基本相同，只要该序列符合上述标准，包括蛋白质表达所涉及的生物蛋白质活性的维持。末端序列的添加特别适用于核酸序列，例如包括位于编码区的5′端或3′端两侧的各种非编码序列。

以下是基于改变蛋白质的氨基酸以创建等效甚至改进的第二代分子的讨论。例如，某些氨基酸可以被蛋白质结构中的其他氨基酸置换掉，且不会明显地丧失交互结合能力。诸如酶催化结构域或交互作用组分的这种结构可以具有被置换的氨基酸从而维持这种功能。由于是蛋白质的交互作用能力和性质决定了该蛋白质的生物功能活性，因此可以在蛋白质序列及其潜在的DNA编码序列中进行某些氨基酸置换，但是仍会产生具有类似特性的蛋白质。因此，本发明人预期可以在基因的DNA序列中进行各种改变而不会明显损失其生物学效用或活性。

在其他实施方案中，通过引入一个或多于一个置换实现多肽功能的改变。例如，某些氨基酸可以置换蛋白质结构中的其他氨基酸，以期改变交互作用组分的交互结合能力。诸如蛋白质交互作用结构域、核酸交互作用结构域和催化位点的结构可以具有置换的氨基酸以改变这种功能。由于蛋白质的交互作用能力和性质决定了该蛋白质的生物功能活性，因此可以在蛋白质序列及其潜在的DNA编码序列中进行某些氨基酸置换，但是仍会产生具有不同特性的蛋白质。因此，本发明人预期可以在基因的DNA序列中进行各种改变，并显著改变其生物学效用或活性。

在进行此类改变时，可以考虑氨基酸的亲水指数。亲水氨基酸指数在赋予蛋白质交互生物学功能中的重要性是本领域普遍理解的(Kyte和Doolittle，1982)。氨基酸的相对亲水特性有助于生成蛋白质的二级结构，这是公认的，这反过来又定义了蛋白质与其他分子的交互作用，例如酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原等。

本领域还理解，基于亲水性可以有效地进行类似氨基酸的置换。美国专利4554101(通过引用并入本文)指出，蛋白质的最大局部平均亲水性(由其相邻氨基酸的亲水性控制)与蛋白质的生物学特性相关。可以理解的是，一个氨基酸可以被另一个具有相似亲水性值的氨基酸取代，并且仍然产生生物学等效和免疫学等效的蛋白质。

如上所述，氨基酸的置换通常基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如，它们的疏水性、亲水性、电荷、大小等。考虑到各种前述特征的示例性置换是众所周知的，并且包括：精氨酸和赖氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；丝氨酸和苏氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；和缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。

在具体的实施方案中，还可以根据常规技术在溶液中或在固体支持物上合成本文所述的全部或部分蛋白质。各种自动合成器是可商购的并且可以根据已知方法使用。例如，参见Stewart and Young,(1984)；Tam et al.,(1983)；Merrifield,(1986)；and Baranyand Merrifield(1979)，每个都通过引用并入本文。或者，可以采用重组DNA技术，其中将编码肽或多肽的核苷酸序列插入表达载体中，转化或转染到合适的宿主细胞中并在适合表达的条件下培养。一个实施方案包括将基因转移至细胞的应用，包括微生物，以制备和/或呈递蛋白质。可以将目的蛋白质的基因转移到合适的宿主细胞中，然后在合适的条件下培养细胞。可以使用可对几乎任何多肽进行编码的核酸。本文讨论了重组表达载体的产生以及其中所包含的元件。或者，要制备的蛋白质可以是通常用于蛋白质制备的细胞所合成的内源蛋白质。

II.基因传递

本公开的某些方面包括对对象施用TERT激活疗法。这可以包括向对象施用TERT核酸和/或多肽。TERT核酸可以包括在DNA或RNA上编码的TERT基因、蛋白质或mRNA。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用编码TERT多肽的DNA。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用编码TERT多肽的RNA。与将核酸转移到细胞中有关的技术是本领域普通技术人员众所周知的。下面讨论示例性技术。

A.病毒载体

在某些实施方案中，将表达构建体转移到细胞中是使用病毒载体完成的。使用“病毒载体”的技术是本领域众所周知的。病毒载体旨在包括那些含有足以(a)支持表达盒的包装和(b)最终表达已在其中克隆的重组基因构建体的病毒序列的构建体。

在特定实施方案中，病毒载体是慢病毒载体。慢病毒载体已成功用于感染干细胞并提供长期表达。

另一种核酸递送方法涉及使用腺病毒载体。众所周知，腺病毒载体整合到基因组DNA中的能力很低。腺病毒载体导致高效的基因转移。

腺病毒是目前临床环境中最常用的基因转移载体。这些病毒的优点之一是它们可以有效地将基因传递给非分裂细胞和分裂细胞，并且可以大量生产。该载体包含基因工程形式的腺病毒(Grunhaus等人,1992)。与逆转录病毒相反，宿主细胞的腺病毒感染不会导致染色体整合，因为腺病毒DNA可以以游离方式复制而没有潜在的遗传毒性。此外，腺病毒结构稳定，在广泛扩增后未检测到基因组重排。

腺病毒因其中等大小的基因组、易于操作、高滴度、广泛的靶细胞范围和高传染性而特别适合用作基因转移载体。本领域普通技术人员对使用腺病毒载体的实验方法是熟知的。

腺病毒载体可能是复制缺陷型，或至少是条件复制缺陷型，并且认为腺病毒载体的性质对于本发明的成功实践不是关键的。腺病毒可以是42种不同的已知血清型或亚组A-F中的任何一种，并且可以设想其他血清型或亚组。亚组C的5型腺病毒是获得用于本发明的条件复制缺陷型腺病毒载体的起始材料。这是因为5型腺病毒是已知的大量生化和遗传信息的人类腺病毒，并且在历史上它已被用于大多数使用腺病毒作为载体的构建体。腺病毒生长和操作是本领域技术人员已知的，并且在体外和体内表现出广泛的宿主范围。也可以使用修饰的病毒，例如CAR结构域发生改变的腺病毒。还设想了用于增强递送或逃避免疫反应的方法，例如病毒的脂质体包封。逆转录病毒是一组单链RNA病毒，其特征在于能够通过逆转录过程将其RNA在感染细胞中转化为双链DNA(Coffin,1990年)。产生的DNA然后作为原病毒稳定整合到细胞染色体中，并指导病毒蛋白的合成。整合导致病毒基因序列保留在受体细胞及其后代中。逆转录病毒基因组包含存在于病毒基因组5′和3′端的两个长末端重复(LTR)序列。它们包含强启动子和增强子序列，并且也是整合到宿主细胞基因组中所必需的(Coffin，1990)。

为了构建逆转录病毒载体，将对感兴趣的核酸或基因进行编码的核酸插入病毒基因组中代替某些病毒序列以产生复制缺陷型病毒。本领域普通技术人员熟悉可用于构建逆转录病毒载体的众所周知的技术。

腺相关病毒(AAV)是用于本发明的有吸引力的载体系统，因为它具有高整合频率并且可以感染非分裂细胞，从而使其可用于将基因递送到组织培养中的哺乳动物细胞中(Muzyczka,1992)。AAV具有广泛的感染宿主范围(Tratschin等人,1984；Laughlin等人,1986；Lebkowski等人,1988；McLaughlin等人,1988)，这意味着它适用于本发明。在美国专利5139941和4797368中描述了关于rAAV载体的产生和使用的细节，这些专利均通过引用并入本文。

通常，重组AAV(rAAV)病毒是通过共转染含有感兴趣基因的质粒和表达质粒来制备的没有末端重复的野生型AAV编码序列，例如pIM45(McCarty等人,1991；通过引用并入本文)。本领域普通技术人员熟悉可用于使用AAV病毒产生载体的技术。

单纯疱疹病毒(HSV)由于其对神经元细胞的趋向性而在治疗神经系统疾病方面产生了相当大的兴趣，但鉴于其广泛的宿主范围，该载体也可用于其他组织。使HSV成为有吸引力的载体的另一个因素是基因组的大小和组织。由于HSV很大，与其他较小的病毒系统相比，多个基因或表达盒掺入的问题较少。此外，具有不同性能(时间、强度等)的不同病毒控制序列的可用性使其可以比其他系统在更大程度上对表达进行控制。该病毒的剪接信息相对较少，这进一步简化了基因操作，这也是一个优势。

HSV也相对容易操作并且可以生长到高滴度。因此，就获得足够MOI所需的体积和减少重复施用的需求而言，递送不是问题。有关HSV作为基因治疗载体的综述，请参阅Glorioso等人,(1995)。本领域普通技术人员熟悉使用HSV作为载体的众所周知的技术。

痘苗病毒载体因其易于构建、所获表达水平的相对高、广泛的宿主范围和大容量携带DNA而被广泛使用。牛痘含有约186kb的线性双链DNA基因组，表现出明显的“A-T”偏好。大约10.5kb的反向末端重复位于基因组的两侧。

其他病毒载体可用作本发明中的构建体。例如，可以使用源自病毒如痘病毒的载体。委内瑞拉马脑炎(VEE)病毒的分子克隆株已被遗传改良，作为表达异源病毒蛋白的有复制能力的疫苗载体(Davis等人,1996)。研究表明VEE感染会刺激有效的CTL反应，并且有人认为VEE可能是一种非常有用的免疫载体(Caley等人,1997)。本发明预期VEE病毒可用于靶向树突细胞。

多核苷酸可容纳在病毒载体中，该载体已被设计以表达特异性结合配体。因此，病毒颗粒将与靶细胞的同源受体特异性结合并将内容物递送至细胞。基于通过将乳糖残基化学添加到病毒包膜以对逆转录病毒进行化学修饰，开发了一种旨在允许特定靶向逆转录病毒载体的新方法。这种修饰可以允许通过唾液酸糖蛋白受体对肝细胞的特异性感染。

设计了另一种靶向重组逆转录病毒的方法，其中使用了针对逆转录病毒包膜蛋白和针对特定细胞受体的生物素化抗体。使用链霉亲和素通过生物素成分偶联抗体(Roux等人,1989)。使用针对主要组织相容性复合体I类和II类抗原的抗体，他们证明了同向性病毒在体外感染了带有这些表面抗原的各种人类细胞(Roux等人,1989)。

B.非病毒基因转移

本发明的某些方面还考虑了几种用于将核酸转移到细胞中的非病毒方法。这些包括磷酸钙沉淀(Graham and Van Der Eb,1973；Chen and Okayama,1987；Rippe等人,1990)DEAE-葡聚糖(Gopal，1985年)、电穿孔(Tur-Kaspa等人,1986；Potter等人,1984)、核转染(Trompeter等人,2003)、直接显微注射(Harland and Weintraub,1985)、DNA负载脂质体(Nicolau and Sene,1982；Fraley等人,1979)和脂质转染胺-DNA复合物、聚氨基酸、细胞声波(Fechheimer等人,1987)、使用高速微粒的基因轰击(Yang等人,1990)、聚阳离子(Boussif等人,1995)和受体介导的转染(Wu and Wu,1987；Wu and Wu,1988)。其中一些技术可以成功地适合体内或体外使用。本领域普通技术人员将熟悉与非病毒载体的使用有关的技术，并且将理解本发明涵盖除本文公开的那些之外的其他类型的非病毒载体。在本发明的另一个实施方案中，表达盒可以被包裹在脂质体或脂质制剂中。脂质体是一种以磷脂双层膜和内部含水介质为特征的囊泡结构。多层脂质体具有由含水介质隔开的多个脂质层。还考虑了与Lipofectamine(Gibco BRL)复合的基因构建体。本领域普通技术人员熟悉利用脂质体和脂质制剂的技术。

C.基于脂质的纳米囊泡

在一些实施方案中，在本公开的方法中采用基于脂质的纳米囊泡，例如脂质体、胞外体、脂质制剂、基于脂质的囊泡(例如，DOTAP：胆固醇囊泡)。在一些实施方案中，将包含TERT多肽或者编码TERT多肽的核酸的纳米囊泡施用于对象。基于脂质的纳米囊泡可以带正电、带负电或电中性。

1.脂质体

“脂质体”是一个通用术语，包括通过产生封闭的脂质双层或聚集体而形成的各种单层和多层脂质载体。脂质体的特征在于具有双层膜的囊泡结构、通常包含磷脂以及通常包含含水组合物的内部介质。本文提供的脂质体包括单层脂质体、多层脂质体和多泡脂质体。本文提供的脂质体可以带正电、带负电或电中性。在某些实施方案中，脂质体是电中性。

多层脂质体具有由含水介质隔开的多个脂质层。当包含磷脂的脂质悬浮在过量的水溶液中时，这种脂质体自发形成。脂质成分在形成封闭结构之前进行自我重排，并在脂质双层之间截留水和溶解的溶质。亲脂性分子或具有亲脂性区域的分子也可以溶解在脂双层中或与脂双层结合。

例如，在一些实施方案中，多肽、核酸或小分子药物可以包裹在脂质体的含水内部，散布在脂质体的脂质双层内，通过与脂质体和多肽/核酸相关的连接分子连接到脂质体，包裹在脂质体中，与脂质体复合等等。

根据本实施方案使用的脂质体可以通过本领域普通技术人员已知的不同方法制备。例如，磷脂(比如中性磷脂二油酰磷脂酰胆碱(DOPC))溶解在叔丁醇中。然后将脂质与多肽、核酸和/或其他组分混合。将吐温20添加到脂质混合物中，使得吐温20为组合物质量的约5％。将过量的叔丁醇加入到该混合物中，使得叔丁醇的体积至少为95％。将混合物涡旋，在干冰/丙酮浴中冷冻并冻干过夜。冻干制剂在-20℃下储存，最多可使用三个月。当需要时，冻干的脂质体在0.9％盐水中重构。

或者，脂质体可以通过在容器例如梨形玻璃烧瓶中将脂质与溶剂混合来制备。容器的体积应是预期的脂质体悬浮液体积的十倍。使用旋转蒸发仪，在大约40℃和负压下除去溶剂。根据所需的脂质体体积，溶剂通常在约5分钟至2小时内除去。该组合物可以在真空下于干燥器中进一步干燥。干燥的脂质通常在大约1周后被丢弃，因为它会随时间变质。

干燥的脂质可以在约25nM至50nM磷脂的无菌、无热原水中通过摇动至所有脂质膜重新悬浮来进行水合。然后可以将含水脂质体分成等份，每份放入小瓶中，冻干并在真空下密封。

如上所述制备的干燥脂质或冻干脂质体可以脱水并在蛋白质或肽的溶液中重构，并用合适的溶剂例如DPBS稀释至合适的浓度。然后在涡旋混合器中剧烈摇动混合物。通过以29000×g离心除去未包封的附加材料，例如包括但不限于激素、药物、核酸构建体等的试剂，并洗涤脂质体小丸。洗涤后的脂质体以适当的总磷脂浓度例如约50nM至200nM进行重悬。包封的附加材料或活性剂的量可以根据标准方法确定。包封在脂质体制剂中的附加材料或活性剂的量确定后，可以将脂质体稀释至合适的浓度并在4℃下储存直至使用。包含脂质体的药物组合物通常包括无菌的、药学上可接受的载体或稀释剂，例如水或盐水溶液。

可用于本公开内容的实施方案的另外的脂质体包括阳离子脂质体，例如WO02/100435A1、美国专利第5962016号中所述。美国申请2004/0208921、WO03/015757A1、WO04029213A2、美国专利第5030453号和美国专利第6680068号，所有这些在此通过引用整体并入本文而没有免责声明。

在制备此类脂质体时，可使用本文所述的或本领域普通技术人员已知的任何方法。制备脂质体的另外的非限制性实例描述于美国专利第4728578号、第4728575号、第4737323号、第4533254号、第4162282号、第4310505号和第4921706号、国际申请PCT/US85/01161以及PCT/US89/05040中，均通过引用并入本文。

在某些实施方案中，基于脂质的纳米囊泡是中性脂质体(例如，DOPC脂质体)。如本文所用，“中性脂质体”或“不带电的脂质体”被定义为具有一种或多于一种可产生基本上中性的净电荷(基本上不带电)的脂质成分的脂质体。“基本上中性”或“基本上不带电”是指在给定群体(例如，脂质体群体)中很少(如果有的话)包含未被另一组分的相反电荷抵消的电荷(即，少于10％的组分包括未抵消的电荷，更优选地少于5％，最优选地少于1％)。在某些实施方案中，中性脂质体可主要包括本身在生理条件下(即，在约pH 7下)呈中性的脂质和/或磷脂。

本实施方案的脂质体和/或基于脂质的纳米囊泡可包含磷脂。在某些实施方案中，单一种类的磷脂可用于制备脂质体(例如，中性磷脂如DOPC可用于制备中性脂质体)。在其他实施方案中，可以使用多于一种的磷脂来产生脂质体。磷脂可以来自天然或合成来源。磷脂包括例如磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺；因为磷脂酰乙醇胺和磷脂酰胆碱在生理条件下(即约pH 7)不带电，所以这些化合物可能特别适用于产生中性脂质体。在某些实施方案中，磷脂DOPC用于制备不带电的脂质体。在某些实施方案中，可以使用非磷脂的脂质(例如，胆固醇)。

磷脂包括甘油磷脂和某些鞘脂。磷脂包括但不限于二油酰磷脂酰胆碱(“DOPC”)，卵磷脂酰胆碱(“EPC”)，二月桂酰磷脂酰胆碱(“DLPC”)，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(“DMPC”)，二棕榈酰磷脂酰胆碱(“DPPC”)，二硬脂酰磷脂酰胆碱(“DSPC”)，1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱(“MPPC”)，1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(“PMPC”)，1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱(“PSPC”)，1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱(“SPPC”)，二月桂酰磷脂酰甘油(“DLPG”)，二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(“DMPG”)，二棕榈酰磷脂酰甘油(“DPPG”)，二硬脂酰磷脂酰甘油(“DSPG”)，二硬脂酰鞘磷脂(“DSSP”)，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(“DSPE”)，二油酰磷脂酰甘油(“DOPG”)，二肉豆蔻酰磷脂酸(“DMPA”)，二棕榈酰磷脂酸(“DPPA”)，二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(“DMPE”)，二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(“DPPE”)，二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸(“DMPS”)，二棕榈酰磷脂酰丝氨酸(“DPPS”)，脑磷脂酰丝氨酸(“BPS”)，脑鞘磷脂(“BSP”)，二棕榈酰鞘磷脂(“DPSP”)，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(“DMPC”)，1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(“DAPC”)，1,2-二花生酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(“DBPC”)，1,2-二二十碳烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(“DEPC”)，二油酰磷脂酰乙醇胺(“DOPE”)，棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(“POPC”)，棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺(“POPE”)，溶血磷脂酰胆碱，溶血磷脂酰乙醇胺和二亚油酰磷脂酰胆碱。

2.胞外体

如本文所用，术语“纳米囊泡”和“胞外体”是指具有约10nm至约1000nm、更典型地在30nm和1000nm之间、以及最典型地在约50nm和750nm之间的直径(或当颗粒不是球状体时的最大尺寸)的膜状颗粒，其中胞外体的膜的至少一部分直接从细胞获得。最常见的是，胞外体的大小(平均直径)高达供体细胞大小的5％。因此，特别考虑的胞外体包括那些从细胞脱落的胞外体。

胞外体可在任何合适的样品类型中检测或分离，例如体液。如本文所用，术语“分离的”是指从其自然环境中分离出来并且旨在包括至少部分纯化并且可以包括基本纯化。如本文所用，术语“样品”是指适用于本发明提供的方法的任何样品。样品可以是包括适用于检测或分离的胞外体的任何样品。样本来源包括血液、骨髓、胸水、腹腔液、脑脊液、尿液、唾液、羊水、恶性腹水、支气管肺泡灌洗液、滑液、母乳、汗液、眼泪、关节液和支气管冲洗液。一方面，样品是血液样品，包括例如全血或其任何部分或组分。适用于本发明的血样可从任何已知来源提取，包括血细胞或其组分，例如静脉、动脉、外周、组织、脐带等。例如，可以使用众所周知的常规临床方法(例如，抽取和处理全血的程序)获得和处理样品。一方面，示例性样品可以是抽取自患有疾病的对象的外周血。

胞外体可以从新鲜收集的样品或冷冻或冷藏的样品中分离出来。在一些实施方案中，胞外体可以从细胞培养基中分离。虽然不是必需的，但如果流体样品在用体积排除聚合物沉淀之前澄清，以除去样品中的任何碎片，则可以获得更高纯度的胞外体。澄清方法包括离心、超速离心、过滤或超滤。最典型地，可以通过本领域熟知的多种方法分离胞外体。一种优选的方法是从体液或细胞培养上清液中差速离心。用于分离胞外体的示例性方法描述于(Losche等人,2004；Mesri and Altieri,1998；Morel等人,2004)中。或者，胞外体也可以通过流式细胞术分离，如(Combes等人,1997)中所述。

一种公认的胞外体分离方法包括超速离心，通常与蔗糖密度梯度或蔗糖垫相结合，以使相对低密度的胞外体漂浮起来。由于尺寸分布可能与其他微囊泡或大分子复合物重叠，因此通过顺序差速离心分离胞外体变得复杂。此外，根据微囊泡的大小，离心可能无法提供足够的方法来分离囊泡。然而，连续离心与蔗糖梯度超速离心相结合时，可以提供胞外体的高度富集。

根据大小分离胞外体，使用超速离心途径的替代方法，是另一种选择。已经报道了使用超滤程序成功纯化胞外体，该程序比超速离心耗时少，并且不需要使用特殊设备。类似地，可以使用商业试剂盒(EXOMIRTMBioo Scientific)，它可以除去一个微过滤器上的细胞、血小板和细胞碎片，并使用正压驱动流体在第二个微过滤器上捕获大于30nm的囊泡。然而，在这个过程中，胞外体不会被回收，它们的RNA含量是直接从第二个微滤器上捕获的材料中提取的，然后可以用于PCR分析。基于HPLC的方法可能允许人们获得高纯度的胞外体，尽管这些过程需要专用设备并且难以扩大规模。一个重要的问题是血液和细胞培养基都含有大量与胞外体大小范围相同的纳米颗粒(一些非囊泡)。例如，一些miRNA可能包含在细胞外蛋白质复合物中而不是胞外体中；然而，可以进行蛋白酶(例如蛋白酶K)处理以消除任何可能的“胞外体”蛋白污染。

a.从细胞培养物中收集胞外体的示例性方案

在第1天，在T225烧瓶中含有10％FBS的培养基中接种足够的细胞(例如，约500万个细胞)，以便第二天细胞融合约70％。在第2天，吸出细胞上的培养基，用PBS清洗细胞两次，然后将25mL至30mL基础培养基(即，无PenStrep或FBS)添加到细胞中。孵育细胞24小时至48小时。孵育48小时是首选，但一些细胞系对无血清培养基更敏感，因此孵育时间应减少到24小时。请注意，FBS包含会严重扭曲NanoSight结果的胞外体。

在第3/4天，收集培养基并在室温下以800×g离心5分钟，以沉淀死细胞和大碎片。将上清液转移到新的锥形管中，再次以2000×g离心10分钟以除去其他大碎片和大囊泡。将介质通过0.2μm过滤器，然后使用每管35mL等分进入超离心管(例如，25×89mm BeckmanUltra-Clear)。如果每管的介质体积小于35mL，则填充PBS管的剩余部分以达到35mL。使用SW 32Ti转子(k因子266.7，RCF最大值133907)在4℃下以28000rpm的速度超速离心培养基2至4小时。小心地吸出上清液，直到大约有1英寸的液体剩余。倾斜管，让剩余的介质慢慢进入吸管。如果需要，可以将胞外体颗粒重新悬浮在PBS中，并以28000rpm的速度重复超速离心1小时至2小时，以进一步纯化胞外体群体。

最后，在210μL PBS中重新悬浮胞外体颗粒。如果每个样品有多个超速离心管，请使用相同的210μL PBS连续重悬每个胞外体颗粒。对于每个样品，取10μL并添加到990μLH₂O中以用于纳米粒子跟踪分析。将剩余的200μL含胞外体悬浮液用于下游工艺或立即储存在-80℃下。

b.从血清样品中提取胞外体的示例性方法

首先，让血清样品在冰上解冻。然后，在11mL PBS中稀释250μL的无细胞血清样品；通过0.2μm孔过滤器过滤。将稀释后的样品在4℃下以150000×g超速离心过夜。第二天，小心丢弃上清液并在11mL PBS中清洗胞外体沉淀。在4℃下以150000×g进行第二轮超速离心2小时。最后，小心地丢弃上清液，并在100μL PBS中重新悬浮胞外体颗粒以进行分析。

c.胞外体和脂质体电穿孔的示例性方法

将1×10⁸胞外体(通过NanoSight分析测量)或100nm脂质体(例如，从EncapsulaNano Sciences购买)和1μg siRNA(Qiagen)或shRNA混合在400μL电穿孔缓冲液中(1.15mM磷酸钾、pH 7.2、25mM氯化钾、21％Optiprep)。使用4mm比色皿对胞外体或脂质体进行电穿孔(参见，例如，Alvarez-Erviti等人,2011；El-Andaloussi等人,2012)。电穿孔后，用无蛋白酶的RNase处理胞外体或脂质体，然后加入10倍浓缩的RNase抑制剂。最后，如上所述，在超速离心方法下用PBS清洗胞外体或脂质体。

d.治疗性胞外体的施用

本公开的某些方面提供用表达或包含治疗剂(例如TERT多肽或核酸)的胞外体治疗患者。由于已知胞外体包含完成mRNA转录和蛋白质翻译所必需的机制(参见PCT/US2014/068630，其通过引用整体并入本文)，因此可以将编码治疗性蛋白质的mRNA或DNA核酸转染到胞外体中。或者，治疗性蛋白质本身可以被电穿孔到胞外体中或直接掺入脂质体中。在一些实施方案中，胞外体进一步包含额外的治疗剂，例如本文所述的治疗剂。

本文提供使用工程化脂质体和胞外体作为用于治疗疾病的递送系统的方法和药物。

3.表达CD47的纳米囊泡

在一些实施方案中，提供了药物组合物，其包含在其表面上包含CD47的基于脂质的纳米囊泡，并且其中基于脂质的纳米囊泡包含TERT多肽或编码TERT多肽的核酸。

在一些方面，基于脂质的纳米颗粒是脂质体或胞外体。在某些方面，胞外体是从过度表达CD47的细胞中分离出来的。在一些方面，从需要治疗的患者中分离胞外体。在一些方面，胞外体与成纤维细胞分离。在一些方面，脂质体是单层脂质体。在一些方面，脂质体是多层脂质体。

在一些方面，组合物被配制用于肠胃外施用，例如静脉内、肌肉内、皮下或腹膜内注射。

在一些方面，组合物包含抗微生物剂。抗微生物剂可以是苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲醇、溴硝醇、溴棕三甲铵、氯化十六烷基吡啶、氯己定、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲酚、甲酚、乙醇、甘油、艾西替丁、亚氨脲、苯酚、苯氧乙醇、硝酸盐、苯乙脲丙二醇或硫柳汞。

在一些方面，单个基于脂质的纳米囊泡包含多于一种药剂，例如TERT多肽或核酸和一种或多于一种本文所述的另外的治疗剂。

在一个实施方案中，提供了向患者施用TERT激活疗法的方法，其中所述TERT激活疗法治疗剂包含胞外体。在一些方面，本公开内容涉及用编码TERT多肽的核酸(例如，DNA或RNA)转染胞外体，在允许TERT在胞外体内表达的条件下孵育转染的胞外体，以及提供孵育的胞外体以患者，从而对患者进行TERT激活疗法。

III.治疗组合物的施用

本文提供的治疗可包括治疗剂的组合施用，例如第一次TERT激活疗法和第二次治疗。治疗可以以本领域已知的任何合适的方式施用。例如，第一次和第二次治疗可以依次(不同时)或同时(在同一次)施用。在一些实施方案中，第一次和第二次治疗在单独的组合物中施用。在一些实施方案中，第一次和第二次治疗在相同的组合物中。在一些实施方案中，本公开内容的方法和组合物包括施用额外的治疗。在一些实施方案中，附加疗法包括胆碱酯酶抑制剂，例如多奈哌齐、加兰他敏或卡巴拉汀。在一些实施方案中，附加疗法包括美金刚。

本公开的实施方案涉及组合物以及包含治疗组合物的方法。可以以一种组合物或多于一种组合物，例如2种组合物、3种组合物或4种组合物来施用不同的治疗。可以使用药剂的各种组合，例如，第一次治疗是“A”，第二次治疗是“B”：

本公开的治疗剂可以通过相同的施用途径或通过不同的施用途径施用。在一些实施方案中，治疗是静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、经皮、腹膜内、眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内施用。在一些实施方案中，通过静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、经皮、腹膜内、眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内施用抗生素。适当的剂量可以根据所治疗疾病的类型、疾病的严重程度和病程、个体的临床状况、个体的临床病史和对治疗的反应以及主治医师的判断来确定。

治疗可能包括各种“单位剂量”。单位剂量定义为含有预定量的治疗组合物。施用量、具体途径和制剂在临床领域的技术人员的能力范围内。单位剂量不需要作为单次注射施用，但可以包括在设定的时间段内连续输注。在一些实施方案中，单位剂量包括单一可施用剂量。

根据治疗次数和单位剂量，施用量取决于所需的治疗效果。有效剂量应理解为是指实现特定效果所需的量。在某些实施方案的实践中，预期10mg/kg至200mg/kg范围内的剂量可影响这些药剂的保护能力。因此，预期剂量包括约0.1、0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195和200、300、400、500、1000μg/kg、mg/kg、μg/天或mg/天或其中可推导出的任何范围的剂量。此外，这样的剂量可以在一天内和/或在多天、数周或数月内多次施用。

在某些实施方案中，药物组合物的有效剂量是可提供约1μM至150μM的血液水平的剂量。在另一个实施方案中，有效剂量提供约4μM至100μM；或约1μM至100μM；或约1μM至50μM；或约1μM至40μM；或约1μM至30μM；或约1μM至20μM；或约1μM至10μM；或约10μM至150μM；或约10μM至100μM；或约10μM至50μM；或约25μM至150μM；或约25μM至100μM；或约25μM至50μM；或约50μM至150μM；或约50μM至100μM(或其中可推导出的任何范围)的血液水平。在其他实施方案中，该剂量可提供由向对象施用治疗剂产生的以下药剂的血液水平：约、至少约或至多约1μM、2μM、3μM、4μM、5μM、6μM、7μM、8μM、9μM、10μM、11μM、12μM、13μM、14μM、15μM、16μM、17μM、18μM、19μM、20μM、21μM、22μM、23μM、24μM、25μM、26μM、27μM、28μM、29μM、30μM、31μM、3μM、33μM、34μM、35μM、36μM、37μM、38μM、39μM、40μM、41μM、42μM、43μM、44μM、45μM、46μM、47μM、48μM、49μM、50μM、51μM、52μM、53μM、54μM、55μM、56μM、57μM、58μM、59μM、60μM、61μM、62μM、63μM、64μM、65μM、66μM、67μM、68μM、69μM、70μM、71μM、72μM、73μM、74μM、75μM、76μM、77μM、78μM、79μM、80μM、81μM、83μM、84μM、85μM、86μM、87μM、88μM、89μM、90μM、91μM、92μM、93μM、94μM、95μM、96μM、97μM、98μM、99μM或100μM或或其中可推导出的任何范围。在某些实施方案中，施用给对象的治疗剂在体内代谢为代谢的治疗剂，在这种情况下，血液水平可以指该药剂的量。或者，就治疗剂未被对象代谢的程度而言，本文讨论的血液水平可以指未代谢的治疗剂。

治疗组合物的精确量还取决于从业者的判断并且因每个人而异。影响剂量的因素包括患者的身体状况和临床状态、施用途径、治疗和效力的预期目标(缓解症状对治愈)、以及特殊治疗物质的稳定性和毒性，或者其他对象可能正在接受的疗法。

本领域技术人员将理解并意识到，μg/kg或mg/kg的体重剂量单位可以转换并表示为μg/ml或mM(血液水平)这样可以比较浓度的单位，例如4μM至100μM。还应理解，吸收情况取决于病种和器官/组织。有关摄取和浓度测量的适用转换因子和生理学假设是众所周知的，并且允许本领域技术人员将一种浓度测量转换为另一种，并就本文所述的剂量、功效和结果做出合理的比较和结论。

IV.疾病治疗

本公开的方法可用于治疗或预防某些与年龄相关的疾病、病症或障碍。与年龄相关的疾病、病症或障碍的非限制性实例包括胰岛素抵抗(即，糖耐量受损)、良性前列腺增生、听力损失、骨质疏松症、与年龄相关的黄斑变性、神经系统变性疾病、皮肤病、皮肤老化、或癌症。神经系统变性疾病的非限制性实例包括阿尔茨海默病；癫痫；亨廷顿氏病；帕金森病；中风；脊髓损伤；创伤性脑损伤；路易体痴呆症；皮克氏病；尼曼-匹克病；淀粉样血管病；脑淀粉样血管病；系统性淀粉样变性；荷兰型淀粉样变性的遗传性脑出血；包涵体肌炎；轻度认知障碍；唐氏综合症；和神经肌肉疾病，包括肌萎缩侧索硬化症(ALS)、多发性硬化症和肌营养不良症(包括迪谢内肌营养不良、贝克肌营养不良、面肩肱型肌营养不良症和肢带肌营养不良症(LGMD))。还包括由于中风、头部外伤、脊髓损伤或其他脑、外周神经、中枢神经或神经肌肉系统损伤引起的神经系统变性疾病。

在此阐述的方法的某些实施方案涉及在对象中预防疾病或健康相关病症的方法。预防策略在当今医学中至关重要。

在一些实施方案中，治疗是针对早衰症或与早衰症相关的疾病。早衰症的例子包括哈钦森-吉尔福德早衰综合征(HGPS)、内斯托-吉列尔莫早衰综合征、成人早老综合征、科凯恩氏综合症、布卢姆综合征、色素性干皮病、共济失调毛细血管扩张症、毛发低硫营养不良、先天性角化不良症或嵌合异倍体综合征。在一些实施方案中，本文所述的早衰症、与早衰症相关的疾病、年龄相关疾病、神经系统变性疾病或病症中的一种或多于一种被排除在本公开内容的方法之外。

V.试剂盒

某些方面涉及包含本文所述组合物或用于实施本文所述方法的组合物的试剂盒。

在各个方面，设想包含治疗剂和/或其他治疗剂和递送剂的试剂盒。在一些实施方案中，可以提供用于制备和/或施用本文所述的治疗的试剂盒。该试剂盒可包括一个或多于一个密封小瓶，该小瓶含有任何药物组合物、治疗剂和/或其他治疗剂和递送剂。在一些实施方案中，脂质在一个小瓶中，而治疗剂在单独的小瓶中。该试剂盒可包括例如至少一种TERT激活疗法、一种或多于一种脂质成分，以及用于制备、配制和/或施用本文所述的成分或进行该方法的一个或多于一个步骤的试剂。在一些实施方案中，试剂盒还可以包括合适的容器装置，该容器是不会与试剂盒的组分反应的容器，例如埃彭道夫管、测定板、注射器、瓶子或管。容器可由可消毒材料制成，例如塑料或玻璃。

该试剂盒还可包括概述本文所述方法的程序步骤的说明书，并且将遵循与本文所述或普通技术人员已知的基本相同的程序。指令信息可以在包含机器可读指令的计算机可读介质中，当使用计算机执行该指令时，导致显示递送药学有效量的治疗剂的真实或虚拟程序。

在一些实施方案中，可以提供试剂盒来评估TERT或相关分子的表达。这种试剂盒可以由容易获得的材料和试剂制备。例如，此类试剂盒可包含以下材料中的任何一种或多于一种：酶、反应管、缓冲液、去污剂、引物和探针、核酸扩增和/或杂交剂。在特定的实施方案中，这些试剂盒允许从业者获得血液、眼泪、精液、唾液、尿液、组织、血清、粪便、结肠、直肠、痰、脑脊液和来自细胞裂解物的上清液中的样品。在另一个实施方案中，这些试剂盒包括进行RNA提取、RT-PCR和凝胶电泳所需的装置。试剂盒中还可以包含进行检测的说明。

试剂盒可包括可单独包装或放置在容器中的组件，例如管、瓶、小瓶、注射器或其他合适的容器装置。组分可包括探针、引物、抗体、阵列、阴性和/或阳性对照组。单个组分也可以以浓缩量提供在试剂盒中；在一些实施方案中，组分以与在含有其他组分的溶液中相同的浓度单独提供。组分的浓度可以提供为1x、2x、5x、10x或20x或多于20x。

该试剂盒还可包含用于标记样品中TERT的试剂。该试剂盒还可包括标记试剂，其包括胺修饰的核苷酸、聚(A)聚合酶和聚(A)聚合酶缓冲液中的至少一种。标记试剂可包括胺反应性染料或本领域已知的任何染料。

试剂盒的成分可以以含水介质或冻干形式包装。试剂盒的容器装置通常包括至少一个小瓶、试管、烧瓶、瓶子、注射器或其他容器装置，可将组分放入其中并优选地适当等分。当试剂盒中有不止一种成分时(标记试剂和标签可以包装在一起)，该试剂盒通常还包含第二个、第三个或其他额外的容器，额外的成分可以单独放置在其中。然而，小瓶中可以包含各种组分的组合。试剂盒还可包括用于容纳核酸、抗体或任何其他试剂容器的装置，该容器密闭以用于商业销售。这种容器可以包括注射或吹塑塑料容器，所需的小瓶保存在其中。

当试剂盒的组分以一种和/或多于一种液体溶液提供时，液体溶液是水溶液，特别优选无菌水溶液。

或者，试剂盒的组分可以作为干燥粉末提供。当试剂和/或组分以干粉形式提供时，可以通过添加合适的溶剂来重构粉末。设想溶剂也可以提供在另一种容器装置中。在一些实施方案中，标记染料作为干燥粉末提供。预期10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、120μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、400μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg、1000μg或至少或至多这些量的干染料在某些方面提供在试剂盒中。然后可以将染料重新悬浮在任何合适的溶剂中，例如DMSO。

容器装置通常包括至少一个小瓶、试管、烧瓶、瓶子、注射器和/或其他容器装置，核酸制剂被放置在其中，优选地被适当地分配。试剂盒还可以包括用于容纳无菌的、药学上可接受的缓冲液和/或其他稀释剂的第二容器装置。

试剂盒可以包括用于将小瓶容纳在密闭空间中用于商业销售的装置，例如注射和/或吹塑塑料容器，所需小瓶被保留在其中。

试剂盒还可以包括使用试剂盒组分以及未包括在试剂盒中的任何其他试剂的使用说明书。说明书可以包括可以实施的变体。

VI.实施例

包括以下实施例以说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应当理解，以下实施例中公开的技术代表了发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术，因此可以认为构成了其实践的优选模式。然而，本领域技术人员根据本公开内容应当理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以在所公开的具体实施例中进行许多改变并且仍然获得相似或相似的结果。

实施例1-使用新型诱导型TERT-AD小鼠模型鉴定端粒酶激活作为缓解阿尔茨海默病病理的治疗策略。

发明人观察到，Tert基因表达在两种不同且完善的AD小鼠模型的脑组织中显著下调，3xTg-AD发生淀粉样蛋白病理和tau病理(Oddo等人,Neuron,2003)，5xFAD仅在3个月大的小鼠中发生淀粉样病理(Oakley等人,J Neurosci,2006)，表现出Aβ水平升高但神经系统变性的迹象最小(图1A、图1B)。特别关注神经元群，发明人从E18.5至E19.5 AD小鼠脑中分离并培养了原代皮层和海马神经元，并在体外(DIV)14天检查了Tert mRNA水平，此时突触网络成熟。与先前来自体内小鼠脑组织的结果一致，相对于野生型对照组，Tert在3xTg-AD和5xFAD原代神经元中的表达均下调(图1C、图1D)。相应地，与野生型对照组相比，来自5xFAD大脑的新鲜分离的海马神经元中的端粒酶活性也较低(图1E)。更有趣的是，发明人在5xFAD小鼠神经元的Tert基因体和启动子区域观察到抑制性表观遗传标记H3K9me3的高占有率，H3K9me3已知主要积累在基因体中并对神经元基因的基因抑制至关重要(图1F)。组蛋白甲基化是可逆的，组蛋白去甲基化酶介导从组蛋白上的赖氨酸残基中除去甲基(Greerand Shi,Nat Rev Genet,2012)。有趣的是，发明人检查了组蛋白甲基转移酶和去甲基化酶的水平，并揭示了与野生型对照组相比，H3K9去甲基化酶Kdm1a、Kdm4b和Kdm4c在小鼠AD大脑的皮质和海马神经元中显著下调(图1G、图1H)。为了研究可逆H3K9甲基化是否涉及Tert的抑制，本发明人评估了组蛋白甲基转移酶抑制剂毛壳素和BIX-01294(即非选择性辅因子竞争性抑制剂和选择性底物竞争性抑制剂)在AD小鼠模型中的影响(Greiner等人,NatChem Biol,2005；Kubicek等人,Mol Cell,2007；Yuan等人,ACS Chem Biol,2012)。这些化合物的外周施用已被证明可以减少中枢神经系统中的H3K9甲基化标记(Dixit等人,CellDeath Dis,2014；Chase等人,PLoS One,2019)。两种小分子组蛋白甲基转移酶抑制剂都导致AD小鼠皮层和海马中Tert基因表达的去抑制(图1I)。结合之前的工作表明这种表观遗传标记在基因体中积累并且对神经元基因的转录抑制至关重要(Liu等人,J Neurosci,2015)，发明人证实了可溶性Aβ可以通过改变AD小鼠神经元中H3K9脱甲基酶或甲基转移酶的表达来负调节Tert基因表达的可能性。

鉴于在AD小鼠模型中淀粉样蛋白积累早期Tert基因表达的抑制，本发明人测试了AD神经元中增加的Tert基因表达是否可以改善或预防淀粉样蛋白病理生理。为此，发明人产生了Cre诱导型Tert敲入等位基因，其由普遍表达的CAG启动子组成，后跟loxP侧翼终止盒和小鼠Tert开放阅读框(R26-CAG-LSL-mTert)。通过电穿孔将线性化构建体靶向到C57BL/6衍生的JM8F6胚胎干(ES)细胞的Rosa 26基因座(图2A)。发明人使用以下引物通过长距离PCR(New England Biolabs)鉴定阳性克隆：左臂5′-GGT CGT GTG GTT CGG TGT CTCTTT-3′和5′-ATG GGC TAT GAA CTA ATG ACC CCG-3′右臂5′-CAC TAC CAG CAG AAC ACCCCC ATC-3′和5′-GTG CCA CTA GTA CCA ACA GCC TCT-3′(图2B)。本发明人通过测序和核型分析确认了正确的重组。最终，发明人鉴定了两个独立的克隆并注射到C57BL/6白化囊胚中以产生嵌合小鼠，并且来自每个克隆的嵌合小鼠都能够产生种系传递(图2C)。

为了进一步研究端粒酶激活在AD小鼠模型中的作用，发明人首先将这种新的Cre诱导型Tert敲入等位基因与3xTg-AD或5xFAD杂交。随后，为了选择性地驱动AD小鼠模型的神经元群中的Tert表达，发明人并入了神经元特异性Cre等位基因，该等位基因受钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II型α启动子的控制(Camk2a-CreERT2)(Madisen等人,Nat Neurosci,2010)。发明人成功建立了R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2和R26-CAG-LSL-mTert；5xFAD；Camk2a-CreERT2品系导致他莫昔芬施用后loxP位点侧翼的终止序列的缺失，导致每个AD小鼠品系神经元中mTert基因表达的开启(图3A)。这些模型能够在两个独立且广泛研究的AD(3xTg-AD和5xFAD)小鼠模型中实现对Tert基因表达的空间(神经元特异性)和时间(他莫昔芬诱导)控制。

为了检查端粒酶激活对体内AD病理的潜在影响，在2-3个月时，发明人用他莫昔芬处理了R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2，此时细胞内和细胞毒性Aβ寡聚体开始在大脑中积累，并评估了增强的Tert表达对淀粉样蛋白病理的影响。发明人揭示了海马中Tert激活的R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2小鼠模型的Aβ沉积的显著下降(图3B、图3C)。在R26-CAG-LSL-mTert；5xFAD；Camk2a-CreERT2模型中观察到类似的淀粉样蛋白负荷减少(图3D)。

发明人接下来研究了驱动淀粉样斑块负荷减少的分子机制。为了全面了解Tert在神经元群体中的作用，发明人进行了全基因组RNA测序(RNA-Seq)分析。发明人研究了R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2小鼠用他莫昔芬在体内诱导AD神经元中的Tert表达，并在他莫昔芬治疗后从成年小鼠大脑中分别分离皮质和海马神经元，以探测端粒酶激活的早期转录反应。该图谱证实了在他莫昔芬处理后，模型的分离神经元中Tert基因表达增加，并且编码端粒酶RNA成分的Terc基因表达没有变化(图4A)。计算分析表明，皮层和海马AD神经元中的Tert诱导与与突触信号传导、突触结构或活性的调节、突触组装的调节、突触组装的正调节和突触组织的调节相关的多个信号通路的激活相关(图4B、图4C)。基因集富集分析(GSEA)还表明，在Tert诱导后，参与突触信号传导的基因在两个神经元群中均上调(图4D)。发明人还检查了AD生物学不可或缺的基因的表达。令人惊讶的是，发明人发现App(β-淀粉样蛋白前体蛋白)和ApoE(载脂蛋白E，AD的强遗传风险因素)基因的表达在Tert激活的AD神经元中显著降低(图4E)。同时，Hsp70是一种分子伴侣，可以降低Aβ诱导的细胞毒性，并已被证明在各种AD动物模型中能有效保护神经元，在Tert诱导下显著诱导了基因表达(图4F)。通过利用这些无偏的转录组学分析，本发明人确定了神经元中的Tert诱导可以影响体内有丝分裂后神经元中大量基因的表达，这些基因与AD病理生物学密切相关，并且对突触形成和神经元活动至关重要。

突触丧失和功能障碍是AD认知能力下降的主要相关因素(Palop and Mucke,NatNeurosci,2010；Hong等人,Science,2016；Selkoe and Hardy,EMBO Mol Med,2016)。为了测试神经元Tert的诱导是否可以导致针对AD脑中突触和网络功能障碍的保护，发明人使用Golgi-Cox染色检查了体内神经元形态。本发明人观察到相对于对照组，Tert诱导与Tert激活的R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2小鼠的老年大脑皮层中神经元复杂性的增加以及树突棘密度的增加有关(图5A、图5B、图5C)。发明人得出结论，神经元中升高的Tert表达激活突触信号级联并减少小鼠AD脑神经元中的脊柱收缩和突触损失。

连同这些鼠科动物的观察结果，发明人还试图评估在人类AD背景下TERT诱导的生物学影响。本发明人采用了成熟的诱导多能干细胞(iPSC)，其源自携带APP基因组重复的家族性AD患者(APP^DP)(Israel等人,Nature,2012)。与发明人在鼠模型中的发现一致，发明人发现相对于非痴呆对照组，源自APP^DP患者的人AD神经元也具有较高的TERT基因体中抑制性表观遗传标记H3K9me3的占有率(图6A)。为了进一步探究人TERT表达对H3K9甲基化的要求，本发明人接下来研究了人AD神经元中H3K9甲基转移酶的抑制作用。与小鼠体内发现(图1I)一致，抑制H3K9甲基化也恢复了人类AD神经元中的TERT mRNA和蛋白质的表达(图6B、图6C、图6D)。

为了检查TERT激活是否也会影响人类环境中的Aβ病理，发明人在EF1a启动子下生成了慢病毒人TERT构建体，并测量了TERT诱导对感染了表达TERT或EGFP的慢病毒载体的分化人AD神经元中Aβ积累的影响(图7A)。与鼠类研究相似，发明人发现，通过夹心ELISA(酶联免疫吸附测定)测量，TERT诱导导致人AD神经元细胞内Aβ积累在剂量和时间依赖性的显著减少(图7B、图7C)。为了进一步了解神经元中TERT介导的淀粉样蛋白负荷衰减的潜在机制，发明人试图确定可能的分子靶标。除了减少Aβ积累外，TERT诱导不仅降低了APP蛋白水平，还触发了抗衰老基因(SIRT1)、分子伴侣和压力传感器基因(HSP70和HSF1)、突触可塑性相关基因(BDNF和PSD-95)和抗氧化基因(NRF2和HO1)(图7D、图7E)，众所周知，这些基因对于减少Aβ加工和细胞毒性以及改善成人大脑中的突触可塑性和记忆的形成至关重要(Evans等人,JBiol Chem,2006；Qin等人,J Biol Chem,2006；Herskovits and Guarente,Neuron,2014；Lackie等人,Front Neurosci-Switz,2017)。发明人的发现表明，TERT激活不仅可以减少Aβ的产生，而且可以通过神经保护介质的产生在AD神经元中发挥神经保护作用。

为了进一步确定转录水平上的TERT依赖性基因调控是否需要催化活性，本发明人通过使用定点诱变与丙氨酸替换第712位残基处的天冬氨酸以产生无催化活性的(CI)TERT表达构建体(Weinrich等人,Nat Genet,1997)(图8A、图8B)。发明人揭示了催化失活的TERT突变体也导致这些基因的上调(图8C)，表明TERT的反式激活功能与其催化活性无关。

为了深入了解AD中神经元TERT激活的功能意义，发明人对小鼠AD皮质神经元、小鼠AD海马神经元和人类AD神经元的RNA-seq转录谱和通路分析进行了交叉分析。使用这种神经元TERT激活网络的综合跨物种分析，发明人确定了多个神经元特异性通路(图9A)与学习过程的重叠作为最显著富集的通路(所有p<0.001)，然后是膜去极化、谷氨酸受体信号、动作电位和突触信号作为TERT激活的下游结果(图9B)。发明人还发现，来自三个组的所有富集谱显示出对参与小鼠和人类AD神经元学习过程的基因集的高度一致调节(图9C)，表明TERT调节AD脑中关键疾病的相关通路。

由于TERT在细胞和组织水平上诱导树突棘形成并在分子水平上激活学习过程基因，发明人接下来研究了TERT激活是否可以改善体内AD模型的学习缺陷。为此，在R26-CAG-LSL-mTert；3xTg-AD；Camk2a-CreERT2模型中评估了空间学习和记忆与AD的控制。虽然AD对照组显示老年在Barnes迷宫中空间学习的获得受损，但年龄和性别匹配的Tert激活AD小鼠在学习能力和记忆力方面取得了显著改善，这表现为进入逃逸洞的延迟时间减少(图9D)。与上述细胞和分子数据一致，发明人的发现表明Tert激活减弱了AD小鼠与年龄相关的学习障碍。

发明人进一步研究了TERT在终末分化的有丝分裂后神经元中的作用背后的机制细节。为了确定TERT激活和基因调控的机制基础，发明人对神经元中TERT的潜在相互作用伙伴进行了全蛋白质组分析。通过质谱法对含TERT的蛋白质复合物的表征确定了转录调节因子CREB结合蛋白(CREBBP)和RELA、RNA聚合酶II最大和催化亚基POLR2A，以及多种介质复合物亚基(MED1、MED4、MED12、MED15、MED16、MED23、MED24)其将转录调节因子与人类神经元中的RNA聚合酶II联系起来(图10A)。本发明人还揭示了通过RNA-Seq分析(图10B)在TERT激活的AD神经元中各种WNT通路成分的升高，鉴于WNT信号传导在神经系统变性疾病中的已知神经保护作用，这获得了额外的重要性。基于这些观察，发明人评估了有丝分裂后神经元中的内源性TERT是否与包含β-连环蛋白的转录调控复合物进行物理性相互作用，β-连环蛋白是WNT信号转导的关键参与者。共免疫沉淀试验确实证实了神经元TERT蛋白在完全分化的人类神经元中与内源性水平的β-连环蛋白以及CREBBP和POLR2A的活化核形式进行物理性相互作用(图10C)。

发明人进一步评估了在基因组水平上TERT和β-连环蛋白/TCF7关联的可能的全局富集。本发明人使用特异性抗体通过ChIP-Seq确定了人类神经元中TERT和β-连环蛋白/TCF7的全基因组分布，并发现TERT和β-连环蛋白以及作为转录复合物伴侣的TCF7主要占据了人类神经元中基因启动子的转录起始位点(TSS)(图11A)。发明人还确定了TERT结合位点在高度相关基因的启动子区域被β-连环蛋白和TCF7占据，所述高度相关基因包括WNT家族成员WNT9B、Na+/K+-ATPase催化亚基ATP1A3(在研究中，在TERT激活的人和小鼠神经元中上调的5个重叠基因之一)，HSP70家族成员HSPA12A和HSPA6，以及TERT的正向前馈调节因子MYC(图11B)。本发明人关于在AD神经元中TERT和β-连环蛋白/TCF转录复合物的物理关联以及AD神经元中β-连环蛋白/TCF转录活性的TERT增强的发现(图11C)指出了TERT和WNT信号传导在AD疾病的进展中的重要角色。

在本发明中，发明人发现来自基于淀粉样蛋白的AD模型的鼠和人神经元表现出神经元TERT表达的表观遗传抑制，促使探索淀粉样蛋白积累与TERT基因表达之间的关系以及TERT表达的恢复是否会影响疾病轨迹。本发明人观察到，TERT激活导致两种AD小鼠模型大脑中海马和皮层神经元以及培养的具有基因组APP重复的人iPSC衍生的AD神经元中的Aβ水平显着降低。从机制上讲，TERT诱导基因表达，并与关键神经元基因转录起始位点的核心转录和β-连环蛋白/TCF7复合成分相互作用，这些基因控制突触信号传导和学习途径，并保护小鼠和人类神经元的神经元健康。神经元TERT表达改善了老年AD小鼠模型中的树突棘形成和认知功能。总之，这些发现支持开发体细胞TERT激活疗法作为AD的潜在疾病修饰策略。

实施例2-阿尔茨海默病大脑中胞外体介导的TERT mRNA递送

胞外体是从细胞中释放出来并存在于大多数生物体液中的细胞外小囊泡(40nM至100nM)，其为将核酸和蛋白质等大分子传递到靶细胞中提供了有用的手段。胞外体疗法已在抗癌临床试验中得到探索，由于它们能够轻松穿过血脑屏障，因此也可用于治疗神经系统变性疾病，而脂质体在它们递送至目标部位之前优先被酶、机械应变和/或吞噬细胞攻击降解。与脂质体相对比，CD47和RVG脑靶向肽在胞外体表面的展示不仅可以通过保护它们免于降解来增加生物稳定性，而且可以提高生物活性胞外体核酸向脑中靶细胞的整体递送效率。表现将TERT mRNA递送至大脑的卓越能力的靶向胞外体可以作为AD治疗的有效治疗策略。

A.步骤

1.用于生成胞外体的细胞制备

人成纤维细胞和/或骨髓树突细胞(BMDC)可用作胞外体的来源。这些细胞可以在补充有10％去除胞外体的FBS和1％青霉素-链霉素的DMEM中培养。

2.通过显示RVG脑靶向肽和CD47“别吃我”信号生成靶向胞外体

可以使用X-tremeGENE转染试剂(Roche)或Lipofectamine 2000试剂(Invitrogen)用编码CD47和RVG(狂犬病毒糖蛋白)衍生肽的质粒转染细胞。CD47配体蛋白可与信号调节蛋白α(SIRPα)相互作用，然后启动“别吃我”信号，保护胞外体免于吞噬作用。胞外体表面靶标上的RVG衍生肽可以引导胞外体与表达乙酰胆碱受体的神经元细胞结合，并允许靶向胞外体经血管递送至中枢神经系统。

3.通过微滤和超速离心分离靶向胞外体

靶向胞外体可以通过差速离心步骤进行纯化。可以从细胞中收集补充有除去胞外体的FBS的上清液，使用0.2μm过滤器过滤，在4℃下以120000×g超速离心70分钟。然后可以将胞外体颗粒重新悬浮在PBS中，随后在4℃下以120000×g超速离心70分钟。胞外体颗粒可以重新悬浮在电穿孔缓冲液中。

4.通过电穿孔负载具有TERT mRNA的胞外体

分离的胞外体可以与电穿孔缓冲液中的TERT mRNA混合，并在400mV和125μF电容下进行电穿孔。然后可以将所有胞外体重新悬浮在PBS中，并在4℃下以120000×g超速离心70分钟。

5.将胞外体全身(i.v.)施用于阿尔茨海默病对象

负载的胞外体可以重新悬浮在PBS中，然后静脉注射至阿尔茨海默病对象中。

6.胞外体介导的TERT mRNA递送对阿尔茨海默病病理的治疗作用的表征

可以定期评估用负载有对照组核酸或TERT mRNA的靶向胞外体治疗的AD对象的学习任务和记忆任务。预期治疗性胞外体的施用将改善治疗对象的学习和记忆和/或增加对象大脑中β淀粉样蛋白的清除。

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根据本公开内容，可以在没有过度实验的情况下做出和执行本文公开和要求保护的所有方法。虽然本发明的组合物和方法已经根据优选实施方案进行了描述，但对本领域技术人员来说明显的是，在不脱离本发明的概念、精神和范围的情况下，可以对所述方法和所述方法的步骤或步骤顺序进行变化。更具体地，明显的是，某些化学和生理学相关的药剂可以替代本文所述的药剂，同时获得相同或相似的结果。所有这些对本领域技术人员来说明显的类似替代和修改都被认为在所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念之内。

本文公开的参考文献，在它们提供对在此阐述的那些的示例性过程或其他细节的补充的范围内，通过引用具体并入本文。

Claims

1.一种在有需要的对象中产生新神经元的方法，所述方法包括向对象施用TERT激活疗法。

2.一种治疗对象神经系统变性疾病的方法，所述方法包括向对象施用TERT激活疗法。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述神经系统变性疾病包括阿尔茨海默病。

4.一种在有需要的对象中减少β-淀粉样肽的方法，所述方法包括向对象施用TERT激活疗法。

5.一种治疗有需要的对象的早衰症的方法，所述方法包括向对象施用TERT激活疗法。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述早衰症包括哈钦森-吉尔福德早衰综合征(HGPS)、内斯托-吉列尔莫早衰综合征、成人早老综合征、科凯恩氏综合症、布卢姆综合征、色素性干皮病、共济失调毛细血管扩张症、毛发低硫营养不良、先天性角化不良症或嵌合异倍体综合征。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述对象已被诊断患有所述病症。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述对象先前已经针对所述病症进行过治疗。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述对象已被确定为对先前的治疗没有反应。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述对象是人。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述对象小于50岁。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述方法还包括施用附加疗法。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述TERT激活疗法包含一种或多于一种编码TERT多肽的核酸。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述TERT激活疗法包括向所述对象施用编码TERT多肽的DNA或RNA。

15.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述TERT激活疗法包含TERT多肽。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述TERT激活疗法包括包含TERT多肽或编码TERT多肽的核酸的纳米囊泡。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述纳米囊泡包含CD47。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述纳米囊泡包含狂犬病毒糖蛋白肽。

19.根据权利要求16至18中任一项所述的方法，其中所述纳米囊泡源自成纤维细胞或骨髓树突细胞。

20.根据权利要求16至19中任一项所述的方法，其中所述纳米囊泡源自人细胞。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述TERT激活疗法包括调节组蛋白H3K9甲基转移酶(HMT)。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述调节包括抑制HMT基因或蛋白质。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述抑制包括一种或多于一种HMT基因的遗传沉默。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述一种或多于一种HMT基因包括SUV39H1/KMT1A、SUV39H2/KMT1B、SETDB1/KMT1E、SETDB2/KMT1F、PRDM2、G9A/KMT1C、GLP/KMT1D、EHMT1和RIZ1/KMT中的一种或多于一种。

25.根据权利要求22所述的方法，其中所述TERT激活疗法包括HMT抑制剂。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述HMT抑制剂包括毛壳素、BIX-01294、BIX-01338、UNC0638和BRD4770中的一种或多于一种。

27.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述TERT激活疗法包括施用组蛋白H3K9脱甲基酶(HDM)多肽或编码HDM的核酸。

28.根据权利要求27所述的方法，其中HDM多肽包括来自KDM1A/LSD1、KDM3A/JHDM2A、KDM3B/JHDM2B、KDM4A/JHDM3A、KDM4B/JMJD2B、KDM4C/JMJD2C、KDM4D/JMJD2D、KDM7/JHDM1D和PHF8中的一种或多于一种的多肽。

29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中通过静脉注射施用所述TERT激活疗法。

30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其中治疗包括减少β淀粉样肽、改善学习能力、改善记忆力和生成神经元中的一种或多于一种。

31.根据权利要求15至30中任一项所述的方法，其中所述TERT多肽包括具有端粒酶活性的多肽。