CN114354828A - 短穗兔耳草特征图谱及其构建方法和短穗兔耳草的质量检测方法 - Google Patents

短穗兔耳草特征图谱及其构建方法和短穗兔耳草的质量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于中药检测技术领域，具体提供了短穗兔耳草药材特征图谱及其构建方法和短穗兔耳草药材的质量检测方法，所述短穗兔耳草药材特征图谱的构建方法中，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为含磷酸的水溶液‑甲醇，梯度洗脱，在本发明的洗脱条件下得到6个共有特征峰，并实现了共有特征峰的有效分离，16min即可完成检测，所得特征峰专属性强，具有操作简单、快速、检测成本低、重现性好和信息量大等优点，能较全面地反映短穗兔耳草所含化学成分的种类与数量，对于有效控制短穗兔耳草及其提取物的质量具有重要意义。

Description

短穗兔耳草特征图谱及其构建方法和短穗兔耳草的质量检测 方法
技术领域
本发明属于中药检测技术领域，具体涉及一种短穗兔耳草特征图谱及其构建方法和短穗兔耳草的质量检测方法。
背景技术
短穗兔耳草为玄参科植物短穗兔耳草Lagotis brachystachya Maxim.的干燥全草。花期采收，除去杂质及根须，晾干。性味：味苦；须根多数，淡黄色，质脆，易折。多年生矮小草本。清肺止咳；降压调经。主肺热咳嗽；高血压；月经不调。主产于我国青海、甘肃、西藏及四川西北部。《晶珠本草》记载短穗兔耳草味苦、平，能清肺胃瘀血、排脓，治疗肺痈咳逆、胸满吐脓血等证，具有清热去火、满炎解毒的功效。
目前，短穗兔耳草相关文献研究较薄弱，尤其缺乏质量标准方面的研究，特征图谱方法是新增的控制中药药材质量的一种方法，目前对短穗兔耳草进行特征图谱相关研究较少，其中中国专利CN106324116A公开了一种短穗兔耳草的HPLC特征图谱检测方法及图谱，然而该方法分析时间过长，导致检测所需的溶剂成本与时间成本较高，而且还存在特征峰的分离度差的问题。
发明内容
因此，本发明的目的在于解决现有技术中短穗兔耳草特征图谱的构建方法分析时间长、溶剂成本与时间成本高以及分离效果差的问题，提供了一种短穗兔耳草特征图谱及其构建方法，利用该特征图谱可对短穗兔耳草质量进行整体描述和评价，从而保证产品质量可控、稳定。
本发明提供了一种短穗兔耳草特征图谱的构建方法，包括如下步骤：
(1)短穗兔耳草供试品溶液的制备；
(2)取短穗兔耳草供试品溶液采用液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以含磷酸的水溶液为流动相B，梯度洗脱，梯度洗脱程序包括：0→2.5min，流动相A的体积百分比为20％，流动相B的体积百分比为80％；2.5→5min，流动相A的体积百分比为25％→30％，流动相B的体积百分比为75％→70％；5→7.5min，流动相A的体积百分比为30％，流动相B的体积百分比为70％；7.5→9min，流动相A的体积百分比为30％→32％，流动相B的体积百分比为70％→68％；9→10min，流动相A的体积百分比为32％，流动相B的体积百分比为68％；10→16min，流动相A的体积百分比为32％→35％，流动相B的体积百分比为68％→65％。
进一步地，步骤(1)包括：
1)称取短穗兔耳草，加溶剂提取，得到提取液；
2)将提取液固液分离，取液体，即为供试品溶液。
进一步地，步骤(1)还满足如下A-C中的任意一项或者多项：
A、步骤1)中，溶剂乙醇、甲醇、乙醇水溶液或者甲醇水溶液中的至少一种；和/或，短穗兔耳草的质量与溶剂的体积之比为0.1-1：30-70，质量与体积关系为g/mL；
B、步骤1)中，提取方式为回流提取或者超声提取，提取时间为10min-5h；
C、步骤2)中，所述固液分离为离心或者过滤。
溶剂优选采用体积百分数不低于30％的甲醇水溶液或纯甲醇。
短穗兔耳草供试品溶液的制备方法包括如下步骤：取短穗兔耳草细粉(50目)0.1-1g，精密称定，置15-35mL容量瓶中，加入纯甲醇或体积百分数≥50％甲醇水溶液15-35mL，称定重量，超声处理15-120min，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液微孔滤膜滤过，即得。
步骤(2)液相色谱法的色谱条件还包括：检测波长为200-380nm，流速为0.1-0.6mL/min，柱温20-45℃，进样量为1-10μl。
进一步地，步骤(2)液相色谱法中以含体积百分数为0.08％-0.12％磷酸的水溶液为流动相B；
进一步地，所述梯度洗脱程序还包括16→17min，流动相A的体积百分比为35％→70％，流动相B的体积百分比为65％→30％；17→17.6min，流动相A的体积百分比为70％→20％，流动相B的体积百分比为30％→80％。
进一步地，所述的构建方法还包括采用溶剂溶解大车前苷制备对照品溶液的步骤，以及按照权利要求1-4中任一所述的构建方法中的液相色谱法检测对照品溶液得到对照品特征图谱的步骤。
优选的，对照品溶液中大车前苷的浓度为0.3-0.8mg/mL；
更优选的，所述溶剂选自正己烷、甲醇水溶液或者纯甲醇；所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数不小于60％。
对照品溶液的制备方法包括如下步骤：
取大车前苷对照品加甲醇制成每1mL各含0.3-0.8mg大车前苷对照品溶液。
本发明还提供了任一所述的构建方法构建得到短穗兔耳草特征图谱。
本发明还提供了一种短穗兔耳草对照特征图谱，所述短穗兔耳草对照特征图谱选自如下(1)-(4)中的任意一项：
(1)其具有6个共有特征峰，各特征峰与3号峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.670(1号峰)、0.800(2号峰)、1.00(3号峰)、1.139(4号峰)、1.197(5号峰)、1.486(6号峰)；
(2)其具有6个共有特征峰，各特征峰与3号峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.670(1号峰)、0.800(2号峰)、1.00(3号峰)、1.139(4号峰)、1.197(5号峰)、1.486(6号峰)；而且3号特征峰与对照品特征图谱中的特征峰的保留时间相同或者3号特征峰的保留时间与对照品特征图谱中特征峰的保留时间的RSD<3％、<1％、<0.5％或者<0.1％，所述对照品特征图谱为权利要求5所述的对照品特征图谱；
(3)使用单批次或者多批次短穗兔耳草按照本发明中任一所述的构建方法得到的短穗兔耳草特征图谱；
(4)使用多批次短穗兔耳草按照本发明任一所述的构建方法得到的特征图谱通过平均值或者中位数法制成对照特征图谱。
本发明任一项所述的短穗兔耳草特征图谱的构建方法和/或所述的短穗兔耳草特征图谱和/或所述的短穗兔耳草对照特征图谱在短穗兔耳草产品的质量检测和/或鉴别中的用途。
本发明还提供了一种短穗兔耳草的质量检测方法，包括将待测短穗兔耳草产品的特征图谱与短穗兔耳草对照特征图谱进行比较的步骤；所述待测短穗兔耳草产品的特征图谱为使用待测短穗兔耳草产品按照本发明任一所述的构建方法得到，所述短穗兔耳草对照特征图谱为所述的短穗兔耳草对照特征图谱。
本发明还提供了一种短穗兔耳草的鉴别方法，其特征在于，包括将待测样品的特征图谱与短穗兔耳草对照特征图谱进行比较的步骤；所述待测样品的特征图谱为使用待测样品按照权利要求上述任一所述的构建方法得到，所述短穗兔耳草对照特征图谱为所述的短穗兔耳草对照特征图谱。
本发明中，0.1％磷酸均是指体积百分数为0.1％的磷酸水溶液。类似地，80％甲醇均是指体积百分数为80％的甲醇水溶液。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明所述的短穗兔耳草特征图谱的构建方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为磷酸的水溶液-甲醇梯度洗脱，并通过反复试验得到洗脱程序，在本发明的洗脱条件下可以得到包括大车前苷在内的6个共有特征峰，并实现了共有特征峰的有效分离，峰形良好且无干扰，大大缩短分析时间至16min，能够快速、全面、清楚、有效的对短穗兔耳草进行质量检测和鉴别的缺陷，检测成本低，适用于对短穗兔耳草真伪和品质进行检测，能够更加全面的对原料药短穗兔耳草进行质量监控。
2.本发明所述的短穗兔耳草特征图谱的构建方法，通过采用大车前苷为对照品构建对照品特征图谱，特异性大大提高，可以实现对短穗兔耳草特征图谱中共有峰进行定位，侧面说明采用本发明的色谱条件可以实现短穗兔耳草中有效成分的有效分离，构建的特征图谱具有高度的可靠性。
3.本发明所述的短穗兔耳草的质量检测方法，通过待测短穗兔耳草产品的特征图谱与短穗兔耳草对照特征图谱进行比较，对短穗兔耳草的特征有效成分进行质量检测，使得对所述短穗兔耳草相关制剂的质量检测更全面，保证了所述短穗兔耳草相关制剂质量的有效性和可控性。
4.本发明所述的短穗兔耳草的鉴别方法，通过将待测样品的特征图谱与短穗兔耳草对照特征图谱进行比较，可以有效鉴别短穗兔耳草的真伪。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实验例2中6个特征峰的紫外图；
图2为实验例2中不同梯度条件下的色谱图；
图3为实验例3中11批短穗兔耳草的特征图谱；
图4为实验例3中短穗兔耳草的对照特征图谱；
图5为实验例3中大车前苷对照品的色谱图。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1
本实施例提供了一种短穗兔耳草药材特征图谱的构建方法，包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备：取大车前苷对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。
(2)供试品溶液的制备：短穗兔耳草样品(20200508005)细粉(50目)0.5g，精密称定，置25mL容量瓶中，加入80％甲醇25mL，称定重量，超声处理(375W，53kHz)30min，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液用0.22μm的微孔滤膜滤过，即得。
(3)分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入超高效液相色谱仪，测定。色谱柱采用BEH C18(2.1×100mm，1.7μm)柱；以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按下表的规定进行梯度洗脱；检测波长为334nm，进样量1μl，流速为0.3mL/min，柱温30℃。
表1梯度洗脱程序表
Figure BDA0003444116830000051
得到特征图谱，该特征图谱具有6个共有特征峰，各特征峰与3号峰的相对保留时间为：0.670(1号峰)、0.800(2号峰)、1.00(3号峰)、1.139(4号峰)、1.197(5号峰)、1.486(6号峰)。
实验例1提取工艺的考察
1、仪器与药品：
仪器和药品：超高液相Waters ACQUITY UPLC自动进样器，二极管阵列检测器。精密天平BSA224S-CW(塞多利斯科学仪器有限公司)，超声波清洗机器SK82OOHP(上海科导超声仪器有限公司的)。台式高速离心机TG20G(江苏高科离心机)；
色谱纯甲醇(成都市联合化工试剂研究所)；分析纯甲醇(成都市联合化工试剂研究所)；纯净水(成都娃哈哈昌盛饮料集团有限公司，生产许可证编号：SC10661042200185)；磷酸(重庆川东化工(集团)有限公司)；乙醇(成都市联合化工试剂研究所)；
大车前苷(Lot：JOT-10529)：成都格利普生物科技有限公司，纯度≥98.58％；
短穗兔耳草药材共11批，来自西藏安多、丁青、青海果洛、西宁等地；其它试剂为色谱纯或分析纯。
表2 11批短穗兔耳草样品批号及来源信息
Figure BDA0003444116830000061
2、供试品溶液的制备
精密称取干燥的短穗兔耳草药材粉末0.5g，置于25mL容量瓶中，用甲醇定容至25mL，称定重量，超声处理15min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液用0.22μm的微孔滤膜滤过，即得。
2.1提取溶剂的选择
以提取溶剂为变量，分别采用甲醇、乙醇、50％甲醇、80％甲醇按以下方法对短穗兔耳草药材进行提取制备供试品溶液：取短穗兔耳草样品细粉12份，各0.5g，精密称定，置25mL容量瓶中，分别加入(甲醇、乙醇、50％甲醇、80％甲醇)各25mL(平行3份)，称定重量，超声处理30min，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液用0.22μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
精密吸取各供试品溶液1μl，分部注入超高效液相色谱仪，按照实施例1步骤(3)相同的色谱条件建立供试品溶液的色谱图。记录大车前苷峰面积，以大车前苷相对峰面积平均值为指标比较不同溶剂的提取效果，结果见表下表。其中相对峰面积＝峰面积/称样量。
表3不同提取溶剂的大车前苷相对峰面积
Figure BDA0003444116830000071
由上表可知，80％甲醇的提取效果最好。故优选80％甲醇作为提取溶剂。
2.2提取方式考察
以提取时间为变量，考察回流提取和超声提取，即取短穗兔耳草样(20200508005)品细粉6份，各0.5g，精密称定，置25mL容量瓶中，加入80％甲醇25mL，称定重量，分别超声和回流提取(平行3份)120min(375W，53kHz)，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液用0.22μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
精密吸取各供试品溶液1μl，分部注入超高效液相色谱仪，按照实施例1步骤(3)相同的色谱条件建立供试品溶液的色谱图。记录大车前苷峰面积，以大车前苷相对峰面积平均值为指标比较不同溶剂的提取效果，结果见表下表。
表4短穗兔耳草提取方法考察表
Figure BDA0003444116830000081
结论：从回流的峰面积数值可以看出，回流提取方法稳定性差于超声提取，超声的提取方法操作简便且数值稳定，故优选超声提取作为短穗兔耳草的提取方法。
2.3提取时间的选择
以提取时间为变量，考察提取时间为15、30、45、60、120min(平行3份)，即取短穗兔耳草样品细粉15份，各0.5g，精密称定，置25mL容量瓶中，加入80％甲醇25mL，称定重量，分别超声处理15、30、45、60、120min(平行3份)，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，上清液用0.22μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
精密吸取各供试品溶液1μl，分部注入超高效液相色谱仪，按照实施例1步骤(3)相同的色谱条件建立供试品溶液的色谱图。记录大车前苷峰面积，以大车前苷相对峰面积平均值为指标比较不同溶剂的提取效果，结果见表下表。
表5提取时间考察表
Figure BDA0003444116830000082
Figure BDA0003444116830000091
由上表可知，80％甲醇超声30min时提取效果最佳，故优选超声时间为30min。
实验例2色谱条件的确定
1、检测波长的选择
取短穗兔耳草样品细粉，各0.5g，精密称定，置25mL容量瓶中，加入80％甲醇25mL，称定重量，分别超声处理30min，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，上清液用0.22μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
采用超高效液相色谱法对供试品溶液进行扫描测试大车前苷色谱峰及五种未知峰的最大紫外吸收波长。结果显示见图1，大车前苷色谱峰及五种未知主要峰的最大吸收波长分别是317nm、349nm、326nm、346nm、351nm、328nm，为了能够更好的呈现特征峰，因此确定最佳波长为334nm。
2、流动相及梯度的选择
除了梯度程序外，其余条件均与实施例1相同，以流动相和梯度程序作为变量，采用了不同的洗脱梯度(梯度1-梯度4，见表6-9)对同一份供试品溶液(按照实施例1的方法制备得到)进行测定，结果见图2。
表6梯度1
时间(min) A％(甲醇) B％(0.1％磷酸水)
0～2.5 20 80
2.5～5 25→30 75→70
5～7.5 30 70
7.5～9 30→32 70→68
9～10 32 68
10～16 32→35 68→65
16～17 35→70 65→30
17～17.6 70→20 30→80
表7梯度2
时间(min) A％(乙腈) B％(0.1％磷酸水)
0 12 88
5 15 85
7 17 83
9 18 82
10 20 80
13.5 21 79
14 12 88
表8梯度3
时间(min) A％(乙腈) B％(0.1％磷酸水)
0 12 88
5 15 85
8 15 85
11 20 80
11.4 17 83
12.4 17 83
14 15 85
15 12 88
表9梯度4
Figure BDA0003444116830000101
Figure BDA0003444116830000111
由图2可知，梯度1分离条件最佳，梯度2-3在保留时间7-8min处主要峰分离度较差，不能达到很好的分离，梯度4在5-6min及7-8min处主要峰不能达到基线分离。
实验例3：短穗兔耳草药材特征图谱的建立与验证
1、短穗兔耳草药材特征图谱方法的建立
供试品溶液的制备：取短穗兔耳草细粉约0.5g，精密称定，置25mL容量瓶中，加入甲醇25mL，称定重量，超声处理(功率375W，频率53kHz)15min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液用0.22μm的微孔滤膜滤过，即得。
采用超高效液相色谱法检测供试品溶液，色谱条件如下：色谱柱采用BEH C18(2.1×100mm，1.7μm)柱；以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按下表的规定进行梯度洗脱；检测波长为334nm，进样量1μl，流速为0.3mL/min，柱温30℃，理论板数按大车前苷峰计算应不低于60000。梯度洗脱见下表所示：
表10梯度洗脱程序
Figure BDA0003444116830000112
得到短穗兔耳草药材特征图谱，根据相对保留时间的稳定性、分离度及峰型良好的原则选择6个特征峰，见图3。
该特征图谱具有6个共有特征峰，各特征峰与3号峰的相对保留时间为：0.670(1号峰)、0.800(2号峰)、1.00(3号峰)、1.139(4号峰)、1.197(5号峰)、1.486(6号峰)。这6个特征峰构成了短穗兔耳草药材的指纹特征，可作为短穗兔耳草药材的对照特征图谱。
2、样品测定与共有峰的比对
大车前苷精密称定5.02mg，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混合均匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，即得大车前苷对照品溶液，采用第1项的方法构建对照品图谱，见图4所示，通过与对照品图谱进行比对，对部分共有峰进行了归属研究，图3中3号峰为大车前苷。
以大车前苷为参照峰(S峰)，计算6个共有峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围内，规定值为：0.670(1号峰)、0.800(2号峰)、1.00(3号峰)、1.139(4号峰)、1.197(5号峰)、1.486(6号峰)。11批短穗兔耳草药材特征图谱6个共有峰的相对保留时间见表11。
表11短穗兔耳草样品特征峰相对保留时间
Figure BDA0003444116830000121
3、相似度评价
取短穗兔耳草对照药材及实验例1中不同来源的11批短穗兔耳草细粉，精密称定，按选定的方法制备供试品溶液，使用超高效液相色谱仪按确定的色谱条件测定，建立11批短穗兔耳草药材样品的特征图谱，均存在6个特征峰，11批样品根据中位数法生成的特征图谱如图3所示。其中R(6)为对照药材，S2～S12为11批短穗兔耳草。
采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012)”进行数据分析处理，将对照药材作为参照图谱，再与11个样品的图谱匹配选择特征峰并标记，从而生成对照图谱，，结果如图4所示。
并运用“中药色谱特征图谱相似度评价系统2012版”对11批短穗兔耳草样品与对照图谱进行相似度评价，结果显示，其中有11批样品相似度均＞0.558(见表12)，说明短穗兔耳草药材特征图谱相似度较高，可作为短穗兔耳草药材的鉴别方法。
表12 11批短穗兔耳草样品相似度图
Figure BDA0003444116830000131
4、方法学考察
(1)精密度实验
取短穗兔耳草同一份供试品溶液(按照实施例1的方法制备得到)，按实施例1项下色谱条件，重复进样6次，测定大车前苷的峰面积，结果可知，大车前苷保留时间和峰面积RSD值均＜2％，表明精密度较好。
(2)重复性实验
取同一批短穗兔耳草细粉供试品6份，各0.5g，按实施例1的方法分别测大车前苷的峰面积，测得大车前苷保留时间和峰面积RSD值均＜2％，表明该方法重复性良好。
(3)稳定性实验
取同一批短穗兔耳草细粉供试品6份，各0.5g，按实施例1的方法操作，分别在2、4、6、8、10、12小时进样，测定大车前苷的峰面积，结果可知，大车前苷保留时间和峰面积RSD值均＜2％，表明供试品溶液在12小时内稳定，符合测定要求。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种短穗兔耳草特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤，
(1)短穗兔耳草供试品溶液的制备；
(2)取短穗兔耳草供试品溶液采用液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以含磷酸的水溶液为流动相B，梯度洗脱，梯度洗脱程序包括：0→2.5min，流动相A的体积百分比为20％，流动相B的体积百分比为80％；2.5→5min，流动相A的体积百分比为25％→30％，流动相B的体积百分比为75％→70％；5→7.5min，流动相A的体积百分比为30％，流动相B的体积百分比为70％；7.5→9min，流动相A的体积百分比为30％→32％，流动相B的体积百分比为70％→68％；9→10min，流动相A的体积百分比为32％，流动相B的体积百分比为68％；10→16min，流动相A的体积百分比为32％→35％，流动相B的体积百分比为68％→65％。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)包括：
1)称取短穗兔耳草，加溶剂提取，得到提取液；
2)将提取液固液分离，取液体，即为供试品溶液。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)还满足如下A-C中的任意一项或者多项：
A、步骤1)中，溶剂选自乙醇、甲醇、乙醇水溶液或者甲醇水溶液中的至少一种，和/或，短穗兔耳草的质量与溶剂的体积之比为0.1-1：30-70；
B、步骤1)中，提取方式为回流提取或者超声提取，提取时间为10min-5h；
C、步骤2)中，所述固液分离为离心或者过滤。
4.根据权利要求1-3中任一所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)液相色谱法的色谱条件还包括：检测波长为200-380nm，流速为0.1-0.6mL/min，柱温20-45℃，进样量为1-10μl；
和/或，步骤(2)液相色谱法中以含体积百分数为0.08％-0.12％磷酸的水溶液为流动相B；
和/或，所述梯度洗脱程序还包括16→17min，流动相A的体积百分比为35％→70％，流动相B的体积百分比为65％→30％；17→17.6min，流动相A的体积百分比为70％→20％，流动相B的体积百分比为30％→80％。
5.根据权利要求1-4中任一所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法还包括采用溶剂溶解大车前苷制备对照品溶液的步骤，以及按照权利要求1-4中任一所述的构建方法中的液相色谱法检测对照品溶液得到对照品特征图谱的步骤；
优选的，对照品溶液中大车前苷的浓度为0.3-0.8mg/mL；
更优选的，所述溶剂选自正己烷、甲醇水溶液或者纯甲醇；所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数不小于60％。
6.权利要求1-5中任一所述的构建方法构建得到短穗兔耳草特征图谱。
7.一种短穗兔耳草对照特征图谱，其特征在于，所述短穗兔耳草对照特征图谱选自如下(1)-(4)中的任意一项：
(1)其具有6个共有特征峰，各特征峰与3号峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.670(1号峰)、0.800(2号峰)、1.00(3号峰)、1.139(4号峰)、1.197(5号峰)、1.486(6号峰)；
(2)其具有6个共有特征峰，各特征峰与3号峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.670(1号峰)、0.800(2号峰)、1.00(3号峰)、1.139(4号峰)、1.197(5号峰)、1.486(6号峰)；而且3号特征峰与对照品特征图谱中的特征峰的保留时间相同或者3号特征峰的保留时间与对照品特征图谱中特征峰的保留时间的RSD<3％、<1％、<0.5％或者<0.1％，所述对照品特征图谱为权利要求5所述的对照品特征图谱；
(3)使用单批次或者多批次短穗兔耳草按照权利要求1-5中任一所述的构建方法得到的短穗兔耳草特征图谱；
(4)使用多批次短穗兔耳草按照权利要求1-5中任一所述的构建方法得到的特征图谱通过平均值或者中位数法制成对照特征图谱。
8.权利要求1-5中任一项所述的短穗兔耳草特征图谱的构建方法和/或权利要求6所述的短穗兔耳草特征图谱和/或权利要求7所述的短穗兔耳草对照特征图谱在短穗兔耳草产品的质量检测和/或鉴别中的用途。
9.一种短穗兔耳草的质量检测方法，其特征在于，包括将待测短穗兔耳草产品的特征图谱与短穗兔耳草对照特征图谱进行比较的步骤；所述待测短穗兔耳草产品的特征图谱为使用待测短穗兔耳草产品按照权利要求1-5中任一所述的构建方法得到，所述短穗兔耳草对照特征图谱为权利要求7所述的短穗兔耳草对照特征图谱。
10.一种短穗兔耳草的鉴别方法，其特征在于，包括将待测样品的特征图谱与短穗兔耳草对照特征图谱进行比较的步骤；所述待测样品的特征图谱为使用待测样品按照权利要求1-5中任一所述的构建方法得到，所述短穗兔耳草对照特征图谱为权利要求7所述的短穗兔耳草对照特征图谱。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114354828B (zh) * 2021-12-29 2023-11-03 甘肃奇正藏药有限公司 短穗兔耳草特征图谱及其构建方法和短穗兔耳草的质量检测方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106324116A (zh) * 2015-07-07 2017-01-11 山东金诃药物研究开发有限公司 一种短穗兔耳草的hplc特征图谱检测方法及图谱
WO2017148426A1 (zh) * 2016-03-03 2017-09-08 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114354828B (zh) * 2021-12-29 2023-11-03 甘肃奇正藏药有限公司 短穗兔耳草特征图谱及其构建方法和短穗兔耳草的质量检测方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106324116A (zh) * 2015-07-07 2017-01-11 山东金诃药物研究开发有限公司 一种短穗兔耳草的hplc特征图谱检测方法及图谱
WO2017148426A1 (zh) * 2016-03-03 2017-09-08 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴正平 等: "杏香兔耳风高效液相色谱指纹图谱研究", 光谱实验室, vol. 28, no. 4, pages 2031 - 2034 *
王海霞;苑祥;邢书银;曹长年;赵红平;: "藏药短管兔耳草质量控制方法研究", 时珍国医国药, vol. 27, no. 10, pages 2353 - 2356 *
高必兴 等: "多基原兔耳草HPLC 指纹图谱对比研究", 中草药, vol. 51, no. 15, pages 4019 - 4024 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114354828B (zh) * 2021-12-29 2023-11-03 甘肃奇正藏药有限公司 短穗兔耳草特征图谱及其构建方法和短穗兔耳草的质量检测方法

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