CN114350556A - 果蔬废水资源化菌剂及其在制备微生物复合肥料中的应用 - Google Patents

果蔬废水资源化菌剂及其在制备微生物复合肥料中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114350556A
CN114350556A CN202111662799.7A CN202111662799A CN114350556A CN 114350556 A CN114350556 A CN 114350556A CN 202111662799 A CN202111662799 A CN 202111662799A CN 114350556 A CN114350556 A CN 114350556A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus
cctcc
hqy
microbial inoculum
microbial
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111662799.7A
Other languages
English (en)
Inventor
朱胜杰
杨帆
陆雨春
曹彪
朱勤华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Huaqingyuan Biological Technology Co ltd
Original Assignee
Zhejiang Huaqingyuan Biological Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Huaqingyuan Biological Technology Co ltd filed Critical Zhejiang Huaqingyuan Biological Technology Co ltd
Priority to CN202111662799.7A priority Critical patent/CN114350556A/zh
Publication of CN114350556A publication Critical patent/CN114350556A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05C—NITROGENOUS FERTILISERS
    • C05C9/00—Fertilisers containing urea or urea compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F17/00—Preparation of fertilisers characterised by biological or biochemical treatment steps, e.g. composting or fermentation
    • C05F17/20—Preparation of fertilisers characterised by biological or biochemical treatment steps, e.g. composting or fermentation using specific microorganisms or substances, e.g. enzymes, for activating or stimulating the treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F17/00—Preparation of fertilisers characterised by biological or biochemical treatment steps, e.g. composting or fermentation
    • C05F17/70—Controlling the treatment in response to process parameters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G5/00—Fertilisers characterised by their form
    • C05G5/20—Liquid fertilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W30/00—Technologies for solid waste management
    • Y02W30/40—Bio-organic fraction processing; Production of fertilisers from the organic fraction of waste or refuse

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一组果蔬废水资源化菌剂，包括好氧菌剂HQY‑hyd‑003和好氧菌剂HQY‑of‑003。本发明微生物菌剂中的菌种选用《微生物肥料生物安全通用技术准则（NY1109‑2006）》中免作毒理学试验的菌种及卫生部印发关于《可用于食品的菌种名单》的通知中的菌种，不含重金属和有毒害化学物质，实体产品无毒无刺激性。本发明果蔬废水资源化菌剂能分解果蔬中多糖、蛋白、纤维等物质的菌种将其转化为植物可吸收的氨基酸、速效磷、有效钾、水溶性氮及多种微量元素，制备得到复合微生物肥料富含植物生长所需的大量及微量元素，对植物生长具有促进作用。

Description

果蔬废水资源化菌剂及其在制备微生物复合肥料中的应用
技术领域
本发明涉及一组果蔬废水资源化菌剂及其在微生物处理果蔬废水制备微生物复合肥料中的应用。
背景技术
我国是一个果蔬废弃物产生大国，果蔬废弃物含水高达90%以上，果蔬废弃物在实现无害化、减量化、资源化的过程中必然会产生大量高浓度废水。其所产废水中COD高达50000mg/L，氨氮800mg/L，总磷150mg/L，如果作为污水处理，不论是达到地表水排放标准还是达到纳管标准，都面临巨大的处理压力。
微生物作为自然界分解者，果蔬残体分解为植物可吸收的成分返还给土壤，因此如果采用能分解果蔬中多糖、蛋白、纤维等物质的菌种将其转化为植物可吸收的氨基酸、速效磷、有效钾、水溶性氮及多种微量元素，因此若采用能分解尾菜中多糖、蛋白、纤维等物质的菌种将其转化为植物可吸收的物质制成微生物复合肥料，将大大减轻环境压力，且可变废为宝，对蔬菜产业具有重要意义。
发明内容
本发明目的是提供一组果蔬废水资源化菌剂，及其在微生物处理果蔬废水制备微生物复合肥料中的应用。
本发明采用的技术方案是：
一组果蔬废水资源化菌剂，包括好氧菌剂HQY-hyd-003和好氧菌剂HQY-of-003，所述好氧菌剂HQY-hyd-003由地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis ）ACCC 01050、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CCTCC NO：M 2017040、蔬菜芽孢杆菌（Bacillus oleronius）CCTCC NO：M2017039和凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）CCTCC NO：WB2008523组成；所述好氧菌剂HQY-of-003由褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）CCTCCNO：JB 2008159、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）CCTCC NO：KB 2008858、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientails）CCTCC NO：DY 20081398、毕赤酵母（Pichia farinose）CCTCC NO：M 2017044和固氮类芽孢杆菌（Paenibacillus azotofixans）ACCC10251组成。
本发明微生物菌剂中的菌种选用《微生物肥料生物安全通用技术准则（NY1109-2006）》中免作毒理学试验的菌种及卫生部印发关于《可用于食品的菌种名单》的通知中的菌种，不含重金属和有毒害化学物质，实体产品无毒无刺激性。实际应用不会对环境造成二次污染，不会额外造成负担，属于环境友好亲和型微生物菌剂产品，并且，本菌剂储运和投放简便高效。本工艺操作简单，无外部化学药品添加，且发酵完成的植物营养液无外部化学药品添加，富含植物生长所需的大量及微量元素，对植物生长具有促进作用。
本发明微生物菌剂中的菌种选用《微生物肥料生物安全通用技术准则（NY1109-2006）》中免作毒理学试验的菌种及卫生部印发关于《可用于食品的菌种名单》的通知中的菌种，再经过特定的培养基活化，按照不同比例将各菌种复合配制成果蔬废水发酵菌剂HQY-hyd -003和HQY-of-003。
优选的，以培养至对数中后期的活菌数量占比计，好氧菌剂HQY-hyd-003组成如下：地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis ）ACCC 01050 25~35%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CCTCC NO：M 2017040 30%~40%、蔬菜芽孢杆菌（Bacillus oleronius）CCTCC NO：M 2017039 20%~30%，凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）CCTCCNO：WB 2008523 10%~20%；好氧菌剂HQY-of-003组成如下：褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）CCTCC NO：JB 2008159 20~30%、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）CCTCC NO：KB 2008858 20%~30%、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientails）CCTCC NO：DY20081398 20%~30%、毕赤酵母（Pichia farinose）CCTCC NO：M 2017044 5%~10%和固氮类芽孢杆菌（Paenibacillus azotofixans）ACCC 10251 15%~25%。
优选的，以单个纯菌培养到对数中后期的活菌数量比（cfu/cfu）计，好氧菌剂HQY-hyd-003组成如下：地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis ）ACCC 01050 30%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CCTCC NO：M 2017040 30%、蔬菜芽孢杆菌（Bacillus oleronius）CCTCC NO：M 2017039 25%，凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）CCTCC NO：WB 2008523 15%；好氧菌剂HQY-of-003组成如下：褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）CCTCC NO：JB 2008159 25%、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）CCTCC NO：KB 2008858 25%、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientails）CCTCC NO：DY20081398 22%、毕赤酵母（Pichia farinose）CCTCC NO：M 2017044 8%和固氮类芽孢杆菌（Paenibacillus azotofixans）ACCC 10251 20%。
本发明好氧菌剂HQY-hyd-003的制备方法如下：将各菌种接入到液体菌种活化培养基，30℃~35℃好氧活化12h~18h制作进行活化，再以1%~3%的接种量接入到种子培养基，30℃~35℃好氧发酵20h~24h制作成种子液。然后将种子液按照各菌种比例混合后以3%~5%的接种量接入到菌体发酵培养基，30℃~35℃好氧发酵30h~36h制作菌剂HQY-hyd -003。
好氧菌剂HQY-hyd-003的菌种活化培养基组成如下：0.8%~1.2%（w/v，1%表示100mL培养基中含有1g该物质，下同）蛋白胨，0.4%~0.6%酵母膏，1.8%~2.2%葡萄糖，0.8~1.2%氯化钠，1.8‰~2.2‰磷酸氢二钾，0.8‰~1.2‰氯化铵，0.18‰~0.22‰七水硫酸镁，0.048‰~0.052‰硫酸锰，pH调至约7.0，115℃条件下灭菌30分钟。种子培养基组成如下：1.8%~2.2%蛋白胨，0.8%~1.2%葡萄糖，0.8%~1.2%糖蜜，0.8~1.2%氯化钠， 1.8‰~2.2‰磷酸氢二钾，1.8‰~2.2‰氯化铵，0.18‰~0.22‰七水硫酸镁，0.048‰~0.052‰硫酸锰，pH调至约7.0，115℃条件下灭菌30分钟。发酵培养基组成特征在于：60%~70%果蔬废水，0.8~1.2 % 糖蜜，0.4~0.6 % 蛋白胨，0.5~0.8%氯化钠，1.8‰~2.2‰磷酸氢二钾，0.18‰~0.22‰七水硫酸镁，且调pH到约7.0，115℃条件下灭菌30分钟。
菌剂HQY-of-003的制备方法如下：将各菌种接入到液体菌种活化培养基，30℃~36℃好氧活化10h~16h制作成种子液进行活化，再以1%~3%的接种量接入到种子培养基，30℃~36℃好氧发酵12h~18h制作成种子液。然后将种子液按照各菌种比例混合后以3%~5%的接种量接入到菌体发酵培养基，30℃~35℃好氧发酵18h~24h制作成菌剂HQY-of-003。
本发明还涉及所述果蔬废水资源化菌剂在资源化微生物处理果蔬废水制备微生物复合肥料中的应用。
采用此工艺发酵的果蔬废水可使活菌数量达到1×108cfu/ml以上，经过离心浓缩后再根据目标土壤营养情况，添加所需的氮肥、磷肥、钾肥，使总养分达到5%以上，可达到农业部《复合微生物肥料（NYT798-2015）》标准。该产品富含固氮、解钾、释磷、杀虫等活性微生物菌种及其代谢产物。
具体的，所述应用为：在植物废水中添好氧菌剂HQY-hyd-003，在32℃~37℃、pH4~7条件下，进行好氧发酵，控制溶解氧2~3mg/L，发酵2~3天；之后再添加好氧菌剂HQY-of-003，在32℃~37℃、pH5~8条件下，进行好氧发酵，控制溶解氧3~4mg/L，发酵2~3天，所得发酵液搅拌过程中添加8%~10%尿素，使尿素完全溶解，溶解后得到的混合液即为液态复合微生物肥料。
本发明的有益效果主要体现在：本发明果蔬废水资源化菌剂能分解果蔬中多糖、蛋白、纤维等物质的菌种将其转化为植物可吸收的氨基酸、速效磷、有效钾、水溶性氮及多种微量元素，制备得到复合微生物肥料富含植物生长所需的大量及微量元素，对植物生长具有促进作用。
附图说明
图1为实施例5种子发芽率测试效果；
图2为实施例5种子发芽指数测试效果；
图3为实施例7种子发芽率测试效果。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解，下面将结合具体实施例对本发明做进一步详细描述，该实施例仅用于解释本发明，并不对本发明的保护范围构成限定。
实施例1：果蔬废水资源化菌剂HQY-hyd-003的制备
该菌剂是经过以下步骤制备的：
（1）-80℃冰箱中取出甘油冻管保藏的各菌种，在经紫外灭菌的超净工作台中融解，移液枪无菌吸取1 ml接入已灭菌的10 ml液体菌种活化培养基中，进行活化。
（2）本菌剂制备步骤（1）中所用液体菌种活化培养基其配制方法为：1.0%蛋白胨，0.5%酵母膏，2.0%葡萄糖，1.0%氯化钠，2.0‰磷酸氢二钾，1.0‰氯化铵，0.2‰七水硫酸镁，0.05‰硫酸锰，pH调至约7.0。并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（3）本菌剂制备步骤（1）中菌种接入活化培养基后，在32℃~36℃好氧活化12h即可制作成活化液。
（4）无菌条件下吸取（3）中活化好的菌种活化液，以3%的接种量接入到种子培养基，30℃~36℃好氧发酵12h制作成种子液。
（5）步骤（4）中所用种子培养基其配制方法为：2.0%蛋白胨，1.0%葡萄糖，1.0%糖蜜，1.0 %氯化钠， 2.0 ‰磷酸氢二钾，2.0‰氯化铵0.2‰七水硫酸镁，0.05‰硫酸锰，pH调至约7.0。并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（6）无菌条件下吸取（4）中发酵完成的种子液，种子液按照地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis ）ACCC 01050 30%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CCTCC NO：M2017040 30%、蔬菜芽孢杆菌（Bacillus oleronius）CCTCCNO：M2017039 25%，凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）CCTCC NO：WB 2008523 15%比例混合后以5%的接种量接入到菌体发酵培养基, 30℃~35℃好氧发酵24h即可制作成菌剂HQY-hyd-003。
（7）步骤（6）中所用菌体发酵培养基其配制方法为：70%果蔬废水，1.0 % 糖蜜，0.5% 蛋白胨，0.6%氯化钠，2.0‰磷酸氢二钾，0.2‰七水硫酸镁，且调pH到约7.0，并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（8）步骤（6）中发酵完成的菌剂HQY-hyd-003，活菌数量>108CFU/mL，室温下能稳定保存6个月，能适应多种果蔬废弃物，最佳应用条件温度：30~40℃；pH：3.5~7.5。
实施例2：果蔬废水资源化菌剂HQY-of-003的制备
该菌剂是经过以下步骤制备的：
（1）-80℃冰箱中取出甘油冻管保藏的各菌种，在经紫外灭菌的超净工作台中融解，移液枪无菌吸取1 ml接入已灭菌的10 ml液体菌种活化培养基中，进行活化。
（2）本菌剂制备步骤（1）中所用液体菌种活化培养基其配制方法为：1.0%蛋白胨，0.5%酵母膏，2.0%葡萄糖，1.0%氯化钠，2.0‰磷酸氢二钾，1.0‰氯化铵，0.2‰七水硫酸镁，0.05‰硫酸锰，pH调至约7.0。并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（3）本菌剂制备步骤（1）中菌种接入活化培养基后，在30℃~36℃好氧活化10h~16h即可制作成活化液。
（4）无菌条件下吸取（3）中活化好的菌种活化液，以3%的接种量接入到种子培养基，30℃~36℃好氧发酵12h制作成种子液。
（5）步骤（4）中所用种子培养基其配制方法为：2.0%蛋白胨，1.0%葡萄糖，1.0%糖蜜，1.0 %氯化钠， 2.0 ‰磷酸氢二钾，2.0‰氯化铵0.2‰七水硫酸镁，0.05‰硫酸锰，pH调至约7.0。并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（6）无菌条件下吸取（4）中发酵完成的种子液，种子液按照褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）CCTCC NO：JB 2008159 25%、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）CCTCC NO：KB 2008858 25%、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientails）CCTCC NO：DY 20081398 22%、毕赤酵母（Pichia farinose）CCTCC NO：M2017044 8%、固氮类芽孢杆菌（Paenibacillus azotofixans）ACCC 10251 20%比例混合后以5%的接种量接入到菌体发酵培养基， 30℃~35℃好氧发酵24h即可制作成菌剂HQY-of-003。
（7）步骤（6）中所用菌体发酵培养基其配制方法为：70%果蔬废水，1.0 % 糖蜜，0.5% 蛋白胨，0.6%氯化钠，2.0‰磷酸氢二钾，0.2‰七水硫酸镁，且调pH到约7.0，并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（8）步骤（6）中发酵完成的菌剂HQY-of-003，活菌数量>108CFU/mL，室温下能稳定保存6个月，最佳应用条件温度：25~45℃；pH：4~8.5。
实施例3：果蔬废水资源化菌剂HQY-hyd-004的制备
该菌剂是经过以下步骤制备的：
（1）-80℃冰箱中取出甘油冻管保藏的各菌种，在经紫外灭菌的超净工作台中融解，移液枪无菌吸取1 ml接入已灭菌的10 ml液体菌种活化培养基中，进行活化。
（2）本菌剂制备步骤（1）中所用液体菌种活化培养基其配制方法为：1.0%蛋白胨，0.5%酵母膏，2.0%葡萄糖，1.0%氯化钠，2.0‰磷酸氢二钾，1.0‰氯化铵，0.2‰七水硫酸镁，0.05‰硫酸锰，pH调至约7.0。并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（3）本菌剂制备步骤（1）中菌种接入活化培养基后，在32℃~36℃好氧活化12h即可制作成活化液。
（4）无菌条件下吸取（3）中活化好的菌种活化液，以3%的接种量接入到种子培养基，30℃~36℃好氧发酵12h制作成种子液。
（5）步骤（4）中所用种子培养基其配制方法为：2.0%蛋白胨，1.0%葡萄糖，1.0%糖蜜，1.0 %氯化钠， 2.0 ‰磷酸氢二钾，2.0‰氯化铵0.2‰七水硫酸镁，0.05‰硫酸锰，pH调至约7.0。并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（6）无菌条件下吸取（4）中发酵完成的种子液，种子液按照地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis ）ACCC 01050 50%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CCTCC NO：M2017040 30%、蔬菜芽孢杆菌（Bacillus oleronius）CCTCCNO：M2017039 20%比例混合后以5%的接种量接入到菌体发酵培养基, 30℃~35℃好氧发酵24h即可制作成菌剂HQY-hyd-004。
（7）步骤（6）中所用菌体发酵培养基其配制方法为：70%果蔬废水，1.0 % 糖蜜，0.5% 蛋白胨，0.6%氯化钠，2.0‰磷酸氢二钾，0.2‰七水硫酸镁，且调pH到约7.0，并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（8）步骤（6）中发酵完成的菌剂HQY-hyd-004，活菌数量>108CFU/mL，最佳应用条件温度：30~40℃；pH：5.5~7.5。
实施例4：果蔬废水资源化菌剂HQY-of-004的制备
该菌剂是经过以下步骤制备的：
（1）-80℃冰箱中取出甘油冻管保藏的各菌种，在经紫外灭菌的超净工作台中融解，移液枪无菌吸取1 ml接入已灭菌的10 ml液体菌种活化培养基中，进行活化。
（2）本菌剂制备步骤（1）中所用液体菌种活化培养基其配制方法为：1.0%蛋白胨，0.5%酵母膏，2.0%葡萄糖，1.0%氯化钠，2.0‰磷酸氢二钾，1.0‰氯化铵，0.2‰七水硫酸镁，0.05‰硫酸锰，pH调至约7.0。并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（3）本菌剂制备步骤（1）中菌种接入活化培养基后，在30℃~36℃好氧活化10h~16h即可制作成活化液。
（4）无菌条件下吸取（3）中活化好的菌种活化液，以3%的接种量接入到种子培养基，30℃~36℃好氧发酵12h制作成种子液。
（5）步骤（4）中所用种子培养基其配制方法为：2.0%蛋白胨，1.0%葡萄糖，1.0%糖蜜，1.0 %氯化钠， 2.0 ‰磷酸氢二钾，2.0‰氯化铵0.2‰七水硫酸镁，0.05‰硫酸锰，pH调至约7.0。并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（6）无菌条件下吸取（4）中发酵完成的种子液，种子液按照解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CCTCC NO：M 2017040 40%，蔬菜芽孢杆菌（Bacillus oleronius）CCTCC NO：M 2017039 30%，毕赤酵母（Pichia farinose）CCTCC NO：M 201704430%比例混合后以5%的接种量接入到菌体发酵培养基, 30℃~35℃好氧发酵24h即可制作成菌剂HQY-of-004。
（7）步骤（6）中所用菌体发酵培养基其配制方法为：70%尾菜废水，1.0 % 糖蜜，0.5% 蛋白胨，0.6%氯化钠，2.0‰磷酸氢二钾，0.2‰七水硫酸镁，且调pH到约7.0，并将培养基在115℃条件下灭菌30分钟。
（8）步骤（6）中发酵完成的菌剂HQY-of-004，活菌数量>108CFU/mL，室温下能稳定保存6个月，最佳应用条件温度：25~45℃；pH：4~8.5。
实施例5：
采用本工艺处理菜库所产果蔬：大娃菜、娃娃菜、西兰花、黄瓜、胡萝卜、西瓜、苹果、橘子等混合果蔬废水（该废水COD值48000 mg/L，氨氮含量750 mg/L，总磷134 mg/L），在废水中添加3‰菌剂HQY-hyd-003，35℃，pH：4~7，溶解氧控制在2mg/L~3mg/L条件下好氧发酵1天。之后再添加3‰菌剂HQY-of-003，35℃，pH：5~8，溶解氧控制在3mg/L~4mg/L条件下好氧发酵3天，发酵完成后添加8%尿素，得到富含氮素的复合微生物肥料。
采用浙江省嘉兴市嘉丰种子有限公司的四季快菜（小白菜）种子，挑选出里面籽粒饱满种子进行测试。测试方法参考农业行业标准《蔬菜废弃物高温堆肥无害化处理技术规程（NY/T3441-2019）》中的种子发芽指数，发芽法试验进行操作。吸取稀释100倍后的10ml复合微生物肥料于铺好滤纸的9cm培养皿中，每皿均匀放入50粒种子，之后放入30℃培养箱，发芽6d，统计发芽率及根长。每个样品做3个重复，以蒸馏水为对照组。
测种子发芽率达到100%（参见图1），种子发芽指数达到121%（参见图2）。
实施例6：
采用本工艺处理菜库所产果蔬：大娃菜、娃娃菜、西兰花、黄瓜、胡萝卜、西瓜、苹果、橘子等混合果蔬废水（该废水COD值52000 mg/L，氨氮含量780 mg/L，总磷145 mg/L），在废水中添加3‰菌剂HQY-hyd-004，35℃，pH：4~7，溶解氧控制在2mg/L~3mg/L条件下好氧发酵1天。之后再添加3‰菌剂HQY-of-004，35℃，pH：5~8，溶解氧控制在3mg/L~4mg/L条件下好氧发酵3天，发酵完成后添加8%尿素，得到富含氮素的复合微生物肥料。
采用浙江省嘉兴市嘉丰种子有限公司的四季快菜（小白菜）种子，挑选出里面籽粒饱满种子进行测试。测试方法参考农业行业标准《蔬菜废弃物高温堆肥无害化处理技术规程（NY/T3441-2019）》中的种子发芽指数，发芽法试验进行操作。吸取稀释100倍后的10ml复合微生物肥料铺好滤纸的9cm培养皿中，每皿均匀放入50粒种子，之后放入30℃培养箱，避光发芽48h，统计发芽率及根长。每个样品做3个重复，以蒸馏水为对照组。
测种子发芽率达到87%，种子发芽指数达到92%。
实施例7：
采用本工艺处理菜库所产果蔬：大娃菜、娃娃菜、西兰花、黄瓜、胡萝卜、西瓜、苹果、橘子等混合果蔬废水（该废水COD值52000 mg/L，氨氮含量780 mg/L，总磷145 mg/L），在废水中添加3‰菌剂HQY-hyd-003，35℃，pH：4~7，溶解氧控制在2mg/L~3mg/L条件下好氧发酵1天。之后再添加3‰菌剂HQY-of-003，35℃，pH：5~8，溶解氧控制在3mg/L~4mg/L条件下好氧发酵3天，发酵完成后发酵液添加8%尿素，得到富含氮素的复合微生物肥料。
采用浙江省嘉兴市嘉丰种子有限公司的四季快菜（小白菜）种子，挑选出里面籽粒饱满种子进行测试。测试方法参考农业行业标准《蔬菜废弃物高温堆肥无害化处理技术规程（NY/T3441-2019）》中的种子发芽指数，发芽法试验进行操作。吸取稀释100倍后的10ml复合微生物肥料铺好滤纸的9cm培养皿中，每皿均匀放入50粒种子，之后放入30℃培养箱，避光发芽6d，统计发芽率及根长。每个样品做3个重复，以蒸馏水为对照组。
测种子发芽率达到100%，种子发芽指数达到133%。
上述说明已经充分揭示了本发明的具体实施方式。需要指出的是，熟悉该领域的技术人员对本发明的具体实施方式所做的任何改动均不脱离本发明的权利要求书的范围。相应地，本发明的权利要求的范围也并不仅仅局限于前述具体实施方式。

Claims (5)

1.一组果蔬废水资源化菌剂，包括好氧菌剂HQY-hyd-003和好氧菌剂HQY-of-003，所述好氧菌剂HQY-hyd-003由地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）ACCC 01050、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CCTCC NO：M 2017040、蔬菜芽孢杆菌（Bacillus oleronius）CCTCC NO：M 2017039和凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）CCTCC NO：WB2008523组成；所述好氧菌剂HQY-of-003由褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）CCTCCNO：JB 2008159、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）CCTCC NO：KB 2008858、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientails）CCTCC NO：DY 20081398、毕赤酵母（Pichia farinose）CCTCC NO：M 2017044和固氮类芽孢杆菌（Paenibacillus azotofixans）ACCC10251组成。
2.如权利要求1所述的果蔬废水资源化菌剂，其特征在于，以培养至对数中后期的活菌数量占比计，好氧菌剂HQY-hyd-003组成如下：地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis ）ACCC 01050 25~35%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CCTCC NO：M2017040 30%~40%、蔬菜芽孢杆菌（Bacillus oleronius）CCTCC NO：M 2017039 20%~30%，凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）CCTCC NO：WB 2008523 10%~20%；好氧菌剂HQY-of-003组成如下：褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）CCTCC NO：JB 2008159 20~30%、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）CCTCC NO：KB 2008858 20%~30%、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientails）CCTCC NO：DY 20081398 20%~30%、毕赤酵母（Pichia farinose）CCTCC NO：M 2017044 5%~10%和固氮类芽孢杆菌（Paenibacillus azotofixans）ACCC 10251 15%~25%。
3.如权利要求2所述的果蔬废水资源化菌剂，其特征在于，以培养至对数中后期的活菌数量占比计，好氧菌剂HQY-hyd-003组成如下：地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis ）ACCC 01050 30%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CCTCC NO：M 201704030%、蔬菜芽孢杆菌（Bacillus oleronius）CCTCC NO：M 2017039 25%，凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）CCTCC NO：WB 2008523 15%；好氧菌剂HQY-of-003组成如下：褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）CCTCC NO：JB 2008159 25%、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）CCTCC NO：KB 2008858 25%、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientails）CCTCC NO：DY 20081398 22%、毕赤酵母（Pichia farinose）CCTCC NO：M 2017044 8%、固氮类芽孢杆菌（Paenibacillus azotofixans）ACCC 10251 20%。
4.权利要求1~3之一所述果蔬废水资源化菌剂在资源化微生物处理果蔬废水制备微生物复合肥料中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述应用为：在植物废水中添好氧菌剂HQY-hyd-003，在32℃~37℃、pH4~7条件下，进行好氧发酵，控制溶解氧2~3mg/L，发酵2~3天；之后再添加好氧菌剂HQY-of-003，在32℃~37℃、pH5~8条件下，进行好氧发酵，控制溶解氧3~4mg/L，发酵2~3天，所得发酵液搅拌过程中添加8%~10%尿素，使尿素完全溶解，溶解后得到的混合液即为液态复合微生物肥料。
CN202111662799.7A 2021-12-31 2021-12-31 果蔬废水资源化菌剂及其在制备微生物复合肥料中的应用 Pending CN114350556A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111662799.7A CN114350556A (zh) 2021-12-31 2021-12-31 果蔬废水资源化菌剂及其在制备微生物复合肥料中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111662799.7A CN114350556A (zh) 2021-12-31 2021-12-31 果蔬废水资源化菌剂及其在制备微生物复合肥料中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114350556A true CN114350556A (zh) 2022-04-15

Family

ID=81104803

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111662799.7A Pending CN114350556A (zh) 2021-12-31 2021-12-31 果蔬废水资源化菌剂及其在制备微生物复合肥料中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114350556A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114540220A (zh) * 2021-12-31 2022-05-27 浙江华庆元生物科技有限公司 果蔬废水资源化菌剂及其在制备植物酵素中的应用
CN114606154A (zh) * 2021-12-31 2022-06-10 浙江华庆元生物科技有限公司 尾菜废水资源化菌剂及其在制备植物营养液中的应用

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102153380A (zh) * 2010-12-15 2011-08-17 沈阳科丰牧业科技有限公司 一种复合益生菌喷施剂的制备方法
CN107435032A (zh) * 2017-06-30 2017-12-05 浙江华庆元生物科技有限公司 一种餐厨垃圾降解复合菌及其应用
CN107435031A (zh) * 2017-06-30 2017-12-05 浙江华庆元生物科技有限公司 一种生活垃圾降解复合菌及其应用
CN108795816A (zh) * 2018-07-02 2018-11-13 浙江华庆元生物科技有限公司 一种微生物菌剂及该微生物菌剂的制备、使用工艺
CN111333440A (zh) * 2020-03-11 2020-06-26 北京建筑大学 一种车载式有机垃圾快速腐解和肥料化系统及方法
CN112458000A (zh) * 2019-09-06 2021-03-09 中科元生生物技术(天津)有限公司 一种秸秆还田的复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN114058540A (zh) * 2021-11-04 2022-02-18 上海玖霖环保科技有限公司 一种处理果蔬有机垃圾的环保生物菌剂
CN114540219A (zh) * 2021-12-31 2022-05-27 浙江华庆元生物科技有限公司 尾菜废水资源化菌剂及其在制备植物酵素中的应用
CN114540220A (zh) * 2021-12-31 2022-05-27 浙江华庆元生物科技有限公司 果蔬废水资源化菌剂及其在制备植物酵素中的应用
CN114606154A (zh) * 2021-12-31 2022-06-10 浙江华庆元生物科技有限公司 尾菜废水资源化菌剂及其在制备植物营养液中的应用
CN116444313A (zh) * 2023-04-24 2023-07-18 海南希源生态农业股份有限公司 一种提高芒果甜度肥料及其制备方法

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102153380A (zh) * 2010-12-15 2011-08-17 沈阳科丰牧业科技有限公司 一种复合益生菌喷施剂的制备方法
CN107435032A (zh) * 2017-06-30 2017-12-05 浙江华庆元生物科技有限公司 一种餐厨垃圾降解复合菌及其应用
CN107435031A (zh) * 2017-06-30 2017-12-05 浙江华庆元生物科技有限公司 一种生活垃圾降解复合菌及其应用
CN108795816A (zh) * 2018-07-02 2018-11-13 浙江华庆元生物科技有限公司 一种微生物菌剂及该微生物菌剂的制备、使用工艺
CN112458000A (zh) * 2019-09-06 2021-03-09 中科元生生物技术(天津)有限公司 一种秸秆还田的复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN111333440A (zh) * 2020-03-11 2020-06-26 北京建筑大学 一种车载式有机垃圾快速腐解和肥料化系统及方法
CN114058540A (zh) * 2021-11-04 2022-02-18 上海玖霖环保科技有限公司 一种处理果蔬有机垃圾的环保生物菌剂
CN114540219A (zh) * 2021-12-31 2022-05-27 浙江华庆元生物科技有限公司 尾菜废水资源化菌剂及其在制备植物酵素中的应用
CN114540220A (zh) * 2021-12-31 2022-05-27 浙江华庆元生物科技有限公司 果蔬废水资源化菌剂及其在制备植物酵素中的应用
CN114606154A (zh) * 2021-12-31 2022-06-10 浙江华庆元生物科技有限公司 尾菜废水资源化菌剂及其在制备植物营养液中的应用
CN116444313A (zh) * 2023-04-24 2023-07-18 海南希源生态农业股份有限公司 一种提高芒果甜度肥料及其制备方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MAN DEOK KIM等: "Growth condition and bacterial community for maximum hydrolysis of suspended organic materials in anaerobic digestion of food waste-recycling wastewater", APPL MICROBIOL BIOTECHNOL, vol. 85, no. 5, pages 1611 - 1618, XP019778605 *
YUXIANG ZHAO等: "Core fungal species strengthen microbial cooperation in a food-waste composting proces", ENVIRONMENTAL SCIENCE AND ECOTECHNOLOGY, pages 1 - 8 *
周营等: "微生物菌剂复配及强化厨余垃圾好氧堆肥效果分析", 环境工程学报, vol. 12, no. 1, pages 294 - 303 *
朱勤华等: "蔬菜尾菜叶资源化技术和设备", 环境科学与资源利用, pages 1 - 2 *
迟青山等: "生物炭与细菌微生物互作对小白菜生长的影响及益生菌的分离表征", 中国博士学位论文全文数据库农业科技辑（电子期刊）, pages 048 - 5 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114540220A (zh) * 2021-12-31 2022-05-27 浙江华庆元生物科技有限公司 果蔬废水资源化菌剂及其在制备植物酵素中的应用
CN114606154A (zh) * 2021-12-31 2022-06-10 浙江华庆元生物科技有限公司 尾菜废水资源化菌剂及其在制备植物营养液中的应用
CN114540220B (zh) * 2021-12-31 2024-03-12 浙江华庆元生物科技有限公司 果蔬废水资源化菌剂及其在制备植物酵素中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114540220B (zh) 果蔬废水资源化菌剂及其在制备植物酵素中的应用
CN114540219B (zh) 尾菜废水资源化菌剂及其在制备植物酵素中的应用
CN109022327B (zh) 一种微生物混合菌剂的制备方法及在高温堆肥中的应用
CN101935236A (zh) 一种定向发酵有机废弃物制备酸性有机肥料的方法
CN101244955A (zh) 一种生物肥及其制备方法
CN109762765B (zh) 一种腐熟固体发酵菌剂及其在农业废弃物中的应用
CN114350556A (zh) 果蔬废水资源化菌剂及其在制备微生物复合肥料中的应用
CN105936881A (zh) 一种用于降解褐藻酸的嗜糖芽孢杆菌及其应用方法
CN107857664A (zh) 一种有机种植土壤改良用微生物酶复合菌肥及其制备方法
CN108795816A (zh) 一种微生物菌剂及该微生物菌剂的制备、使用工艺
CN109721421A (zh) 一种含海藻多糖和黄腐酸复合增效磷肥的制备及应用
CN108147919A (zh) 微生物海藻复合肥及其制备方法
CN110423166A (zh) 一种盐碱地改良的水稻专用微生物肥料
CN114606154A (zh) 尾菜废水资源化菌剂及其在制备植物营养液中的应用
CN113906979A (zh) 茎秆及藤蔓类尾菜的资源化处理方法及其制备的育苗基质
CN101215532B (zh) 一种巨大芽孢杆菌及其在酵素菌中的应用和应用方法
CN111253030A (zh) 经臭氧水处理后的生活污泥种植食叶草生产有机肥的方法
CN108117415A (zh) 一种复合微生物菌液及家禽尿液腐熟方法
CN108947679B (zh) 一种微生物有机肥及其制备方法
CN102533594A (zh) 一种死谷芽孢杆菌的发酵培养及复合微生物肥料生产方法
CN105084998A (zh) 一种土壤环境生物清毒剂及其制备方法
CN111440738A (zh) 一种抑制烟草连作障碍的微生物菌剂
KR102070511B1 (ko) 혐기소화액 및 감귤착즙박 혼합 배지를 이용하여 배양한 바실러스 균주 배양액을 함유하는 악취 제거용 조성물의 제조방법
CN112522164B (zh) 一种林果枝条腐熟菌剂及其制备方法和应用
CN113526990B (zh) 一种以紫茎泽兰为基质的有机肥的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination