CN105084998A - 一种土壤环境生物清毒剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种土壤环境生物清毒剂，是由选自至少以下三种不同类微生物制备而成的微生物菌剂：酵母菌、乳酸菌、放线菌、光合细菌和真菌；该一次发酵菌剂物质还可与无机营养增产物质、海洋藻类生物激素物质二次混合发酵后制成的清毒剂成品。经过多项试验表明，该清毒剂具有较快、较强的清除降解土壤中多种残毒和有害重金属的作用，同时又有明显的促进农作物增产的作用。

Description

一种土壤环境生物清毒剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种农业土壤微生物解毒剂，尤其涉及一种土壤环境生物清毒剂及其制备方法。

背景技术

上世纪50-60年代以来，有机磷、有机氯农药大量应用，严重地污染了我国28个省区的大部分土地。据国家农药残留普查数据显示，单一农药残留检出率达90.9％，其中8个省区超标率达75％，也就是说我们土壤中不仅仅是只残留有286.5亿公斤的六六六农药，而是多种农药，多种有害的化学物质及农药残毒仍留着在现在的耕地里，仍在继续破坏着土壤原生状态，仍在继续不断的危害着现代人们的生存和健康。国内外科学家试途用几种微生物来清除土壤中的有机氯、有机磷及重金属等有害物质，但选定有效菌种和保持其有效活性是技术成功的关键因素。

世界人口不断增长，对农副产品的索取不断增加，据有关调查，全世界危害农作物害虫有10000多种，病原菌8000多种，线虫1500多种，杂草2000多种。调查表明进行农药防治以后，还要再损失收成达42％，其中草害损失13.2％，虫害损失15.6％，病害损失13.3％。所以人类与害虫的“战争”是长期的持久性的，因此农药的生产和应用就成为现代人们不可缺少的重要生产资料。我国现有农药厂1700多家，每年生产约35万吨原药，加工制剂80～100万吨，农药有效成分品种40多个，产品约7000多个，而且还进口大量的国外已不再使用的剧毒农药，施入国内土地。大量的农药生产出来，在为人类利用的同时，又在毒害着人类自己。特别是大部分农药是具有内吸性毒素的农药，毒性被直接吸收到农作物茎、叶、根的组织细胞内，并进入果实、种子内部，造成毒害的长久性、顽固性。

“土壤是无限生命之源”。从上世纪40年代美国因化学废弃物的倾倒而异到严重的土壤污染以来，至今，关于土壤污染的问题研究，正普及世界五大洲，主要集中在欧洲，其次是亚洲和美洲，大洋洲和非洲土壤污染问题也不少，污染已成为全球性环境破坏的大问题。

我国从20世纪50年代开始进行土地资源开发利用，着重提高生产力有关土壤肥力研究；60年代一方面开展水土保持，盐碱地改良工作，进行土地环境资源的保护研究。另一方面针对污水灌田，施用农药等农作实践，开展土壤环境污染防治调查研究；70年代进行区域性土壤环境评价及污染综合防治研究；80年代针对土壤-植物系统和土壤环境背景容量及基准开展了净化功能及应用研究，90年代应用土地-植物系统污染生物地球化学原理，无公害农业及绿色食品生产技术和流域，湖泊水污染治理共建技术，进行长期定位研究与应用技术研究。

土壤作为地球上不可再生的资源，近几百年里人类大规模战争化学污染侵入土壤，城市工业化区域性污染和公路、铁路矿物燃料尾气大地网络性污染侵入土壤，也同农药一样，向土壤中不断注入了更多更杂的有毒物质。这些物质波其南、北极和高山海洋。

多年来科学界试途研究用生物制剂，无二次污染的有机物及其复合性物质对复杂的有害毒素进行治理或修复，但仍未见到有效良好的技术报导和产品问世。

发明内容

本发明提供了一种土壤环境生物清毒剂及其制备方法，克服了现有技术缺点，利用具有降解有害毒素能力的微生物制备的一种土壤环境生物清毒剂，能促进农作物增产和消除土壤中的有害毒素。

本发明原理是在筛选出五类具有较强降解多种毒素的菌类，组成“最佳组合”菌团，而且使其具有长时间保持较高的有效活性特征，并有效的清除土壤中残留毒素。所述清毒剂是将无机营养物质和可清除土壤毒素的微生物菌团结合在一起的一种液体肥料型土壤清毒剂。

这种消毒剂，在喷施农药后，待农药对害虫发生毒杀有效作用后1～2周内，能将残留在植物体内、果实、叶子及种子内的农药残留毒素清除干净，施入土壤中能将土壤中有害毒素清除干净。

本发明消毒剂及其制备是一种复合产品和方法，具有多种功能，解决多种污染。利用复合性能内的活性剂，促进增产剂和清除土壤中残毒剂等成份组成的高科技生物制剂，是目前改善生态环境的有效的新方法和新产品。

由于土壤污染的成分复杂多样，世界上对土壤修复的方法也分类较多，包括(1)植物根际生态富集修复技术，(2)螯合诱导修复技术，(3)化学-生物联合修复技术，(4)植物-微生物联合修复技术，(5)生态阻控新方法与新技术。其中：污染土壤的植物-微生物联合修复方法与污染土壤的生态阻控都主要采用微生物技术为主题的一个效果好，成本低，种类多，反复少的微生物与其它技术相结合的综合治理技术。

污染土壤的植物-微生物联合修复技术是：运用农业技术使污染的土壤易于种植，植物会直接或间接的吸收、分离或降解污染物。在有植物生长时，其根系提供了微生物旺盛生长的最佳场所，反过来，微生物的旺盛生长，增强了对有机污染物的快速降解、矿化。其基本原理为：(1)植物根区的菌根真菌与植物形成共生作用，并有着独特的酶途径，用以降解不能被细菌单独转化的有机物；(2)植物根区分泌物刺激了细菌的转化作用；(3)植物还可以为微生物提供生存场所并可转移氧化，使根区的好氧转化作用能够正常进行。

土壤污染生态阻控新方法与新技术是：如何通过陆生植物、土壤微生物的生态化学过程，来阻滞、消除土壤中污染物的毒性效应：(1)通过改变水土界面pH值，产生H₂S和各种有机物质来影响污染物在水土界面的生态化学行为，如某些微生物能代谢产生柠檬酸、草酸等物质，这些代谢产物能够与污染物生成螯合物或形成草酸盐沉底，而导致污染物毒性下降；(2)微生物的细胞壁及黏液层也可以直接吸收、固定一些化学污染物，如一些微生物及某些藻类能够产生胞外聚合物，其主要成分为多聚糖、糖蛋白、脂多糖等，这些物质具有大量阴离子基团，从而可以与金属离子结合解毒，(3)微生物分解有机物时释放出原来固定的重金属等污染物来影响其在根土界面的化学行为；(4)根际微生物也可通过改善根土面土壤的团粒结构，改变根际环境理化性质和根系分泌物质的组成等过程，间接地作用用于污染物的迁移和转化，促进根际微区中持久性有机污染物的降解。

本发明所要解决的技术问题是基于上述原理，通过以下技术方案来实现的：、一种多功能土壤环境生物清毒剂，是选自至少以下三种不同类微生物制备而成的微生物菌剂：酵母菌Sccharomycessp、乳酸菌Acerobacterlinium、放线菌Actinomycesalbocrustisus和光合细菌Rhodopsendnoonaspalustris和真菌PhanerocheeleChrsosporium。

所述微生物菌分别是酵母菌Cyptococcushumicolus(Daszewska)Golubev土生隐球酵母(ACCC20248←中国农科院土肥所←美国典型培养物中心ATCC3699)、嗜酸乳酸菌Lactobacillusacidophilus(Moro)Bergeyetal.(ACCC10637←中国农科院土肥所←轻工业食品发酵研究所IFFI6006)、放线菌Nocardiacoralline(Bergeyetal.)WaksmanandHenrici珊瑚色诺卡氏菌(ACCC40100←中国科学院微生物研究所：＝AS4.1037)、光合细菌Agrobacteriumradiobacter(BetjerinckandvanDelden1902)Conn1942放射形土壤杆菌(ACCC02525←南京农业大学环境微生物菌种保藏中心；原始编号：X9，NAECC1701；)、真菌TrichodermakoningiiOuden.康宁木酶(ACCC30388←中国农业科学院土肥所←山东梁山石棉厂)。

所述多功能土壤环境生物清毒剂，还包括以下重量份无机营养组分：硼砂1-3，硝酸铵3-5，硝酸钾2-4，所述无机营养组分占清毒剂总含量的6-9％。

所述多功能土壤环境生物清毒剂，还包括以下重量份无机营养组分：硼砂2，硝酸铵4，硝酸钾3。

所述多功能土壤环境生物清毒剂，还包括海洋藻类植物制品海藻精(Sargassum)，占生物清毒剂总含量的10％。

所述多功能土壤环境生物清毒剂，还包括海洋藻类植物制品海藻精(Sargassum)，占生物清毒剂总含量的60％。

本发明提供了一种多功能土壤环境生物清毒剂，包括以下重量份组分：权利要求1-2之一的微生物菌剂18-24；无机营养组分8-10，所述无机营养组分包括硼砂1-3，硝酸铵3-5，硝酸钾2-4；、海洋生物制品海藻精(Sargassum)8-12；糖蜜助剂50-70。

优选微生物菌剂21；无机营养组分9，所述无机营养组分包括硼砂2，硝酸铵4，硝酸钾3、海洋生物制品海藻精(Sargassum)10；糖蜜助剂50-70。

本发明还提供一种多功能土壤环境生物清毒剂的制备方法，包括

(1)一级液体微生物剂的培养和配制：

把获得的酵母菌(Cyptococcushumicolus(Daszewska)Golubev土生隐球酵母ACCC20248)乳酸菌(Lactobacillusacidophilus(Moro)Bergeyetal.ACCC10637)放线菌(Nocardiacoralline珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100)光合菌(Agrobacteriumradiobacter放射形土壤杆菌ACCC02525)和真菌(TrichodermakoningiiOuden.康宁木酶ACCC30388)进行平板分离和镜检，进行分类培养；

所述培养方法是：先将适宜的培养基原料清精选后，按比例配制，加热溶为一起，搅拌均匀后装瓶；再经过高压灭菌，接菌种，将制备好的斜面菌种进行培养一周；再进入摇床三角瓶液体菌种培养，液体菌种温度保持在25℃-28℃的培养室内进行摇动培养；五-六天菌液达到2亿/克菌孢数量后，再进行菌类混合发酵的第一次发酵进程；发酵好的多菌液可作为二级液体发酵时所需要的液体种用菌液；

或将10％的菌液以上方法进二次、三次扩大培养，以满足二级液体生产的需要数量；

(2)二级扩大发酵及清毒剂制备的方法：

配料：A首先将硼砂，硝酸铵和硝酸钾结晶固体物质磨成粉，按比例混合。

B取海洋藻类制品的海藻酸纳液体，将所述三种无机营养剂的混合粉与其混合搅拌均匀，使其溶解；

C.将50％经过消毒的无菌水与10％的糖蜜进行混合，进行搅拌均匀，使其溶解，再与上两种混合物混合；

D.将总量79％三种ABC成分的混合物，放入发酵灌里，加入21％的一级菌种，进行二次发酵。发酵温度控制在25-28℃，经过96小时培养，待菌孢数达到2亿/克时，亦可停止发酵，待温度自然降至15℃左右，质量已达标准的成品，可以放入贮存罐中保存；

E.将成品装入贮罐内放置20天，在常温下使其进行后发酵过程，加入稳定剂再进行小包装成品分装入库。

所述步骤还包括：筛选细菌类、放线菌类，真菌类，酵母菌类和乳酸菌类菌种；试管斜面菌种培养；摇床三角瓶液体菌种培养，单类菌种10升玻璃发酵罐培养，第一次多菌种混合100升发酵-无机营养物制备-海洋海藻物质制备，，第二次1000升混合物发酵，质检镜检，贮存大罐后自然后期发酵，添加稳定剂，装瓶入库。

本发明清毒剂是将无机营养物质和可清除土壤毒素的微生物菌团结合在一起的一种液体肥料型土壤清毒剂。

本微生物产品修复土壤的机理是：土壤遭有机污染物侵蚀后，降解过程有生物和非生物降解两个途径。这些过程包括光解作用，化学分解，植物根系和土壤微生物的生物转化。参与生物修复作用的土壤微生物量可达几千万/克以上，并有多种酶系统参与。本产品是用大量的活性菌起作用，促使有机污染物快速降解。微生物修复的主要机理为矿化作用、共代谢作用和氧化偶合作用反应。微生物需要有机或无机碳源、氧、氮、磷、硫一些微量元素，水分和能源以维持其自身活性和繁殖，扩大菌体的同时利用了有害污染物作为营养物，消化及分解。

大部分进入土壤的农药和工业有害物质都是微生物可利用的营养和能源。所以微生物能对它们通过矿化作用、共代谢作用和氧化偶合作用将其分解和消化。在微生物分解有害物质时产生不同的酶参与分解的反应。例如真菌、放线菌和细菌的部分菌类可以产生过氧化物酶、漆酶和酪氨和酪氨酸酶。过氧化物酶包括一个复合的血红蛋白基因，在有过氧化氢的条件下氧化酚类、芳香族类和各种化合物。上述3种酶在生物反应过程中能将有害污染消除或转化为无毒物质，从而净化土壤。

本发明提供的土壤环境生物清毒剂，还含有一定量的无机营养物质，以提高土壤缺乏的有益农作物的营养元素，在清除土壤残毒的同时，增强植物旺盛生长，促进生态平衡和生态恢复。

无机营养物质是：硼砂2％，硝酸铵4％，硝酸钾3％，占总含量为9％。硼砂属微量元素，除供给植物营养体外，还可以对土壤中分解尿素的尿酶起到控制作用，减速尿素类肥料的分解流失，并起到缓释长效的作用。硝酸铵含有36％氮素是植物必需的大量营养元素，对作物生长是重要作用。硝酸钾也是大量元素，可增加产品外观色泽，增加甜度和抗倒伏等作用。

本发明还提供一种海洋藻类植物制品——海藻精(Sargassum)，它含有较强的植物激素、活性碘，海藻多糖，酚类多聚化合物，甘露醇等，能够有效的促进植物细胞分裂与生长。还含有氮、鳞、钾、钙、镁、锌、钴、硼、钼等微量元素，对提高植物抗寒、抗盐碱、抗倒伏，提高产量和品质有明显作用。海藻精内还富含红藻和褐藻(phaeodactylum)等海藻胶酸(Alginicacid)可作为土壤环境生物清毒剂产品的稳定剂和凝聚剂。

具体实施方式

实施例1

土壤环境生物清毒剂的制备

(一)一级液体微生物菌剂的培养和配制。

本发明筛选出酵母菌Cyptococcushumicolus(Daszewska)Golubev土生隐球酵母(无性阶段为土生假丝酵母Candidahumicola(Daszewska)Diddensetlodder)(ACCC20248←中国农科院土肥所←美国典型培养物中心ATCC36992，用于生产赖氨酸，培养基13，26℃)、嗜酸乳酸菌Lactobacillusacidophilus(Moro)Bergeyetal.(ACCC10637←中国农科院土肥所←轻工业食品发酵研究所IFFI6006。培养基5，37℃)、放线菌Nocardiacoralline(Bergeyetal.)WaksmanandHenrici珊瑚色诺卡氏菌(ACCC40100←中国科学院微生物研究所：＝AS4.1037；工业污水净化(氧化丙烯腈)；培养基：0012；培养温度：28℃。)、光合细菌Agrobacteriumradiobacter(BetjerinckandvanDelden1902)Conn1942放射形土壤杆菌(ACCC02525←南京农业大学环境微生物菌种保藏中心；原始编号：X9，NAECC1701；在无机盐培养基中降解30mg/L西维因，降解率为100％，且能继续降解1-奈酚，降解率为100％；分离地点：江苏省徐州；培养基0033；30℃)、真菌TrichodermakoningiiOuden.康宁木酶(ACCC30388←中国农业科学院土肥所←山东梁山石棉厂；纤维素酶生产用菌；培养基：0015；培养温度：25～28℃)。

具体地：把获得的酵母菌(Cyptococcushumicolus(Daszewska)Golubev土生隐球酵母ACCC20248)乳酸菌(Lactobacillusacidophilus(Moro)Bergeyetal.ACCC10637)放线菌(Nocardiacoralline珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100)光合菌(Agrobacteriumradiobacter放射形土壤杆菌ACCC02525)和真菌(TrichodermakoningiiOuden.康宁木酶ACCC30388)进行平板分离和镜检，确认纯度合格以后，进行分类培养。

培养方法是：先将适宜的培养基原料清精选后，按比例配制，加热溶为一起，搅拌均匀后装瓶。在经过高压灭菌，菌种接种等工序，将制备好的斜面菌种进行培养一周。再进入摇床三角瓶液体菌种培养，液体菌种温度保持在25℃-28℃的培养室内进行摇动培养。五-六天菌液达到2亿/克菌孢数量后，再进行菌类混合发酵的第一次发酵进程。发酵的菌液亦可作为二级液体发酵时所需要的液体种用菌液。

也可将10％的菌液以上方法进二次、三次扩大培养，以满足二级液体生产的需要数量。

(2)二级扩大发酵及清毒剂制备的方法。

配料：首先将硼砂，硝酸铵和硝酸钾结晶固体物质磨成粉，便于在以后工艺和生产过程中溶解。再按比例称量混合。具体比例是：硼砂含2％，硝酸铵含4％，硝酸钾含3％。混合粉总重量9％。

B将海洋藻类制品的海藻酸纳液体，称量为10％。再将A的三种无机营养剂的混合粉与其混合搅拌均匀，使其溶解。

C.将50％经过消毒的无菌水与10％的糖蜜进行混合，进行搅拌均匀，使其溶解，再与上两种混合物混合。糖蜜是蔗糖生产中的副产品，可以食用，品质可靠。

D.将总量79％三种ABC成分的混合物，放入发酵灌里，加入21％的一级菌种，进行二次发酵。发酵温度控制在25-28℃，经过96小时培养，待菌孢数达到2亿/克时，亦可停止发酵，待温度自然降至15℃左右，质量已达标准的成品，可以放入贮存罐中保存。

E.将成品装入贮罐内放置20天，在常温下使其进行后发酵过程，加入稳定剂再进行小包装成品分装入库。

(3)工艺流程：

筛选细菌类、放线菌类，真菌类，酵母菌类和乳酸菌类菌种，试管斜面菌种培养，摇床三角瓶液体菌种培养，单类菌种10升玻璃发酵罐培养，第一次多菌种混合100升发酵，无机营养物制备-海洋海藻物质制备，第二次1000升混合物发酵，质检镜检，贮存大罐后自然后期发酵，添加稳定剂，装小瓶，入库。

实施例2

一种土壤环境生物清毒剂配方，单位kg：包括实施例1的微生物菌剂21，无机营养物质9，海藻精10。糖蜜助剂60；所述无机营养物质为硼砂∶硝酸铵∶硝酸钾2∶4∶3。

实施例3

验证实施例1制备的土壤环境生物清毒剂的使用效果

A、实施例1本发明生物消毒剂对重金属等有毒物质的消除作用：

对玉米生产中的重金属测试结果原平基点实验

玉米试验结果表明：施用土壤环境生物清毒剂的玉米，果穗含有毒重金属镉、铬、铅分别减少了0.0166、0.077和0.050，分别下降了1.66％、7.7％、5％。

对马铃薯中重金属测试结果神池基点实验

马铃薯试验表明：施用土壤环境生物清毒剂的马铃薯含重金属镉、铬、铅和酮分别减少了0.0175、0.1305、0.0475和0.0725，分别下降了1.75％、13.05％、4.75％、7.25％。

B、实施例1本发明生物消毒剂对玉米马铃薯增产作用试验效果

对玉米田肥效试验结果表代县西关试点

试验经方差分析，处理间F值＝51.809，大于F_0.01＝29.46，经L、S、D、检验，实清毒剂的马铃薯比不施的差异达到极为显著水平。

本发明选取的五种具有较强清除土壤中有毒污染成分的菌种，使其保持较强的活性。试验调查表明，施用土壤环境生物清毒剂肥料以后，在30天-50天时间内，农药等有害物质残留可消失85～90％，连续使用几次亦可清除100％。

对马铃薯田肥效试验结果表苛岚阳蒿试点

试验经方差分析，处理间F值＝51.809，大于F_0.01＝29.46，经L、S、D、检验，实清毒剂的马铃薯比不施的差异达到极为显著水平。

Claims (10)

1.一种多功能土壤环境生物清毒剂，是选自至少以下三种不同类微生物制备而成的微生物菌剂：酵母菌Sccharomycessp、乳酸菌Acerobacterlinium、放线菌Actinomycesalbocrustisus、光合细菌Rhodopsendnoonaspalustris和真菌PhanerocheeleChrsosporiuru。

2.根据权利要求1的多功能土壤环境生物清毒剂，所述微生物菌分别是酵母菌Cyptococcushumicolus(Daszewska)Golubev土生隐球酵母(ACCC20248←中国农科院土肥所←美国典型培养物中心ATCC3699)、嗜酸乳酸菌Lactobacillusacidophilus(Moro)Bergeyetal.(ACCC10637←中国农科院土肥所←轻工业食品发酵研究所IFFI6006)、放线菌Nocardiacoralline(Bergeyetal.)WaksmanandHenrici珊瑚色诺卡氏菌(ACCC40100←中国科学院微生物研究所：＝AS4.1037)、光合细菌Agrobacteriumradiobacter(BetjerinckandvanDelden1902)Conn1942放射形土壤杆菌(ACCC02525←南京农业大学环境微生物菌种保藏中心；原始编号：X9，NAECC1701；)、真菌TrichodermakoningiiOuden.康宁木酶(ACCC30388←中国农业科学院土肥所←山东梁山石棉厂)。

3.根据权利要求1或2的多功能土壤环境生物清毒剂，还包括以下重量份无机营养组分：硼砂1-3，硝酸铵3-5，硝酸钾2-4，所述无机营养组分占清毒剂总含量的6-9％。

4.根据权利要求3的多功能土壤环境生物清毒剂，还包括以下重量份无机营养组分：硼砂2，硝酸铵4，硝酸钾3。

5.根据权利要求1、2或3的多功能土壤环境生物清毒剂，还包括海洋藻类植物制品海藻精(Sargassum)，占生物清毒剂总含量的10％。

6.根据权利要求5的多功能土壤环境生物清毒剂，还包括海洋藻类植物制品海藻精(Sargassum)，占生物清毒剂总含量的60％。

7.一种多功能土壤环境生物清毒剂，包括以下重量份组分：权利要求1-2之一的微生物菌剂18-24；无机营养组分8-10，所述无机营养组分包括硼砂1-3，硝酸铵3-5，硝酸钾2-4；、海洋生物制品海藻精(Sargassum)8-12；糖蜜助剂50-70。

8.根据权利要求7的一种多功能土壤环境生物清毒剂，包括以下重量份组分：权利要求1-2之一的微生物菌剂21；无机营养组分9，所述无机营养组分包括硼砂2，硝酸铵4，硝酸钾3、海洋生物制品海藻精(Sargassum)10；糖蜜助剂50-70。

9.一种权利要求1-8之一的多功能土壤环境生物清毒剂的制备方法，包括

(1)一级液体微生物剂的培养和配制：

把获得的酵母菌(Cyptococcushumicolus(Daszewska)Golubev土生隐球酵母ACCC20248)乳酸菌(Lactobacillusacidophilus(Moro)Bergeyetal.ACCC10637)放线菌(Nocardiacoralline珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100)光合菌(Agrobacteriumradiobacter放射形土壤杆菌ACCC02525)和真菌(TrichodermakoningiiOuden.康宁木酶ACCC30388)进行平板分离和镜检，进行分类培养；

所述培养方法是：先将适宜的培养基原料精选后，按比例配制，加热溶为一起，搅拌均匀后装瓶；再经过高压灭菌，菌种接，将制备好的斜面菌种进行培养一周；再进入摇床三角瓶液体菌种培养，液体菌种温度保持在25℃-28℃的培养室内进行摇动培养；五-六天菌液达到2亿/克菌孢数量后，再进行菌类混合发酵的第一次发酵进程；发酵好的多菌液可作为二级液体发酵时所需要的液体种用菌液；

或将10％的菌液以上方法进二次、三次扩大培养，以满足二级液体生产的需要数量；

(2)二级扩大发酵及清毒剂制备的方法：

配料：A首先将硼砂，硝酸铵和硝酸钾结晶固体物质磨成粉，按比例混合。

B取海洋藻类制品的海藻酸纳液体，将所述三种无机营养剂的混合粉与其混合搅拌均匀，使其溶解；

C.将50％经过消毒的无菌水与10％的糖蜜进行混合，进行搅拌均匀，使其溶解，再与上两种混合物混合；

D.将总量79％三种ABC成分的混合物，放入发酵灌里，加入21％的一级菌种，进行二次发酵。发酵温度控制在25-28℃，经过96小时培养，待菌孢数达到2亿/克时，亦可停止发酵，待温度自然降至15℃左右，质量已达标准的成品，可以放入贮存罐中保存；

E.将成品装入贮罐内放置20天，在常温下使其进行后发酵过程，加入稳定剂再进行小包装成品分装入库。

10.根据权利要求9的多功能土壤环境生物清毒剂的制备方法，所述步骤包括：筛选细菌类、放线菌类，真菌类，酵母菌类和乳酸菌类菌种；试管斜面菌种培养；摇床三角瓶液体菌种培养，单类菌种10升玻璃发酵罐培养，第一次多菌种混合100升发酵-无机营养物制备-海洋海藻物质制备，，第二次1000升混合物发酵，质检镜检，贮存大罐后自然后期发酵，添加稳定剂，装瓶入库。