CN111440738A - 一种抑制烟草连作障碍的微生物菌剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抑制烟草连作障碍的微生物菌剂，该菌剂由固氮菌菌剂、解钾菌菌剂、解磷菌菌剂和苯甲酸降解菌菌剂按照1：1：1：1的比例均匀混合而成；固氮菌菌剂为圆褐固氮菌菌株培养后制成的粉末状菌剂，解钾菌菌剂为胶冻样芽孢杆菌菌株培养后制成的粉末状菌剂，解磷菌菌剂为假单胞杆菌菌株培养后制成的粉末状混合菌剂，苯甲酸降解菌菌剂为黄曲霉菌菌株培养后制成的粉末状菌剂。该菌剂为复合菌剂，可快速恢复烟草连作导致的土壤菌落失衡的问题，同时可改善烟草连作根系分泌物对烟草自身的化感和自毒作用，克服烟叶连作障碍效果更佳。

Description

一种抑制烟草连作障碍的微生物菌剂

技术领域

本发明涉及烟草种植技术领域，具体涉及一种抑制烟草连作障碍的微生物菌剂。

背景技术

烟草是我国重要的经济作物之一，吸引了众多农户种植。由于我国的现状为人多地少，加上粮烟土地的竞争等状况，连作成了我国烟草生产的障碍。

土壤中的微生物主要由真菌、细菌、放线菌、藻类等活的有机体构成，并且随着土层深度及成土环境的变化，土壤中微生物的种类和数量也有着显著的差异。土壤微生物通过矿化、硝化、氨化以及氧化等理化反应，进一步加速土壤中有机物质的分解和养分的迁移。细菌、真菌和放线菌作为三大主要土壤微生物体，能够表征土壤肥力及活性的微弱变化。

研究发现，随着连作年限的增加，土壤中细菌数量减少而真菌和放线菌的数量增加，但土壤中微生物的总量却呈下降趋势。烟草连作会导致烟根部位土壤微生物群落的失衡，使土壤微域环境恶化。土壤中的细菌和真菌的比例失衡对烟草连作造成极大的影响，而烟草连作对微生物种类的影响程度由高到低为细菌＞真菌＞放线菌。

烟草连作过程中，其根系分泌物的化感与自毒作用会随着根系分泌物数量的增加而呈上升趋势，进而成为烟草连作障碍的因素之一。在烟草根系分泌物中，酚酸类分泌物会抑制土壤硝化过程和氮素形态的转化，破坏细胞的完整性，抑制过氧化氢酶与过氧化物酶的活性，抑制烟草根系对土壤氧化的吸收，减少烟草光合产物与叶绿素含量。

综上所述，造成烟草连作障碍的因素有两种：一是烟田土壤中细菌和放线菌菌落的减少，土壤微生物菌群的失衡；二是烟草土壤根系分泌物造成其化感与自毒作用，尤其是酚酸类分泌物。

发明内容

本发明为了解决上述问题，提供了一种抑制烟草连作障碍的微生物菌剂，将该菌剂添加至烟草施用肥料中可克服烟草连作造成的烟田土壤微生物失衡而难以实现烟草连作的问题。

一种抑制烟草连作障碍的微生物菌剂，包括：

固氮菌菌剂，通过自身固氮功能为烟草提供氮肥；

解钾菌菌剂，将土壤中的有机磷降解为无机磷，为烟草提供磷素；

解磷菌菌剂，将土壤中的有机钾降解为无机钾，为烟草提供钾素；

苯甲酸降解菌菌剂，将烟草连作根系产生的酚酸类物质进行降解，降低烟草根系连作的化感与自毒作用。

固氮菌菌剂为圆褐固氮菌菌株培养后制成的粉末状菌剂；

解钾菌菌剂为胶冻样芽孢杆菌菌株培养后制成的粉末状菌剂；

解磷菌菌剂为假单胞杆菌菌株培养后制成的粉末状混合菌剂；

苯甲酸降解菌菌剂为黄曲霉菌菌株培养后制成的粉末状菌剂。

其中，固氮菌菌剂的制备方法如下：

步骤1、配制无氮培养基：蔗糖10份、磷酸氢二钾0.2份、硫酸镁0.2份、氯化钠0.2份、硫酸钙0.2份、碳酸钙5份、琼脂20份、无菌蒸馏水1000份制成pH7.0-7.2的液体无氮培养基；

步骤2、接种：配制的液体无氮培养基灭菌后于超净工作台接种圆褐固氮菌菌株，接种数按1×10³个/mL的用量接种圆褐固氮菌，封口后放入摇床中28℃-37℃培养5-7天，得到固氮菌菌液；

步骤3、配制固氮菌菌剂制备培养基：面粉30份、蛋白胨10份、稻壳20份、锯末40份、蒸馏水80份搅拌均匀，封口、灭菌；

步骤4、将固氮菌菌液加入固氮菌菌剂制备培养基中，28℃～37℃培养5-7天，每隔3天搅拌一次，发酵完成后于烘干箱中28℃-37℃烘干，粉末粉碎机中粉碎，得到固氮菌菌剂。

其中，解钾菌菌剂的制备方法如下：

步骤1、配制解钾菌培养基：蔗糖2份、蛋白胨0.5份、硫酸镁0.1份、磷酸氢二钾0.2份、碳酸钙0.2份、琼脂20份、无菌蒸馏水1000份制成pH7.5的液体解钾菌培养基；

步骤2、接种：配制的液体解钾菌培养基灭菌后于超净工作台接种胶冻样芽孢杆菌菌株，接种量1×10³个/mL封口后放入摇床中28℃-37℃培养5-7天，得到解钾菌菌液；

步骤3、配制解钾菌菌剂制备培养基：面粉30份、蛋白胨10份、稻壳20份、锯末40份、蒸馏水80份搅拌均匀，封口、灭菌；

步骤4、将解钾菌菌液加入解钾菌菌剂制备培养基中，28℃～37℃培养5-7天，每隔3天搅拌一次，发酵完成后于烘干箱中28℃-37℃烘干，粉末粉碎机中粉碎，得到解钾菌菌剂。

其中，解磷菌菌剂的制备方法如下：

步骤1、配制解磷菌培养基：葡萄糖2份份、蛋白胨0.5份、硫酸镁0.1份、磷酸氢二钾0.2份、碳酸钙0.2份、琼脂20份、无菌蒸馏水1000份制成pH7.5的液体解钾菌培养基；

步骤2、接种：配制的液体解钾菌培养基灭菌后于超净工作台接种假单胞杆菌，接种量均为1×10³个/mL，封口后放入摇床中28℃-37℃培养5-7天，得到假单胞杆菌菌液；

步骤3、配制解钾菌菌剂制备培养基：面粉30份、蛋白胨10份、稻壳20份、锯末40份、蒸馏水80份搅拌均匀，封口、灭菌，得到解钾菌菌剂制备培养基；

步骤4、将假单胞杆菌菌液加入解钾菌菌剂制备培养基中，28℃～37℃培养5-7天，每隔3天搅拌一次，发酵完成后于烘干箱中28℃-37℃烘干，粉末粉碎机中粉碎，得到假单胞杆菌菌剂。

其中，苯甲酸降解菌菌剂的制备方法如下：

步骤1、配制苯甲酸降解菌培养基：葡萄糖2份份、牛肉胨0.5份、硫酸镁0.1份、磷酸氢二钾0.2份、碳酸钙0.2份、无菌蒸馏水1000份制成pH7.5的液体苯甲酸降解菌培养基；

步骤2、接种：配制的液体苯甲酸降解菌培养基灭菌后于超净工作台接种黄曲霉菌，接种量均为1×10³个/mL封口后放入摇床中28℃-37℃培养5-7天，得到苯甲酸降解菌菌液；

步骤3、配制苯甲酸降解菌菌剂制备培养基：面粉30份、牛肉胨10份、稻壳20份、锯末40份、蒸馏水80份搅拌均匀，封口、灭菌，得到苯甲酸降解菌菌剂制备培养基；

步骤4、将苯甲酸降解菌菌液加入苯甲酸降解菌菌剂制备培养基中，28℃～37℃培养5-7天，每隔3天搅拌一次，发酵完成后于烘干箱中28℃-37℃烘干，粉末粉碎机中粉碎，得到苯甲酸降解菌菌剂。

一种抑制烟草连作障碍的微生物菌剂为固氮菌菌剂、解钾菌菌剂、解磷菌菌剂和苯甲酸降解菌菌剂按1：1：1：1的比例混合得到的复合微生物菌剂。

本发明的有益效果：该菌剂为复合菌剂，可快速恢复烟草连作导致的土壤菌落失衡的问题，同时可改善烟草连作根系分泌物对烟草自身的化感和自毒作用，克服烟叶连作障碍效果更佳。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

圆褐固氮菌具有较强的固氮能力，并且能够分泌生长素，促进植株的生长和果实的发育,因此，将圆褐固氮菌制成菌剂，施用到土壤中，可以提高农作物的产量。

胶冻样芽孢杆菌在土壤中能繁殖生长，可起到固氮、解磷、解钾的作用，并释放出可溶性钙、硫、镁、铁、锌、钼、锰等中微量元素，既增进了土壤肥力，又为作物提供了可吸收利用的全面营养元素，化肥利用率明显提高。

假单胞杆菌可通过竞争占据有利位置，并吸收烟草根系分泌物，从而抑制烟草根病发生，烟草根部的表皮、表层细胞构成所谓“根际内部”，假单胞杆菌通过占据“根际内部”这一战略位置就能够限制可溶性物质向根际的渗透。

黄曲霉菌为一种真菌，对烟草根系分泌物，尤其是苯甲酸类具有良好的降解作用，与上述菌种支撑的菌剂混合使用，不仅可快速恢复烟草连作的烟田土壤微生物菌落的平衡，还可抑制烟草连作期间根系的分泌物对其自身的化感和自毒作用。

实施例

1、试验设备及材料的选择

本试验所选用的烟草品种为云97；

固氮菌菌株、解钾菌菌株、解磷菌菌株和苯甲酸降解菌菌株购自于广州市微元生物科技有限公司；

烟草专用复合肥料选购于山东汉大生物科技公司生产的25kg袋装复合肥；

烟草追肥、农药、抑芽剂和施肥的操作按照云南省烟草公司烟叶生产操作规程执行；

烟田选址于云南省红河州红河的某烟厂试验田，该试验田为同等条件下烟草连作5年的试验田。

2、试验设计

采用小区试验方法，小区面积0.1公顷，烟株距0.55，行距1.2m,15000株/公顷，小区划分为3个等面积片区并分3组进行，各组的施用组分如下：

D1组：施用复合肥。

D2组：50％复合肥+50％微生物菌剂。

D3组：微生物菌剂。

3、结果分析

表1不同时期各处理烤烟田间农艺性状比较

由表1可知，在烟草植株的3个生长期，D1组、D2组和D3组对烟叶农艺性状具有不同程度影响，D1组烟草植株的株高、茎围、节距、有效叶数、最大叶长和最大叶宽从团棵期至打顶期的整个生长周期是逐渐增加的，说明施用全素复合肥对烟草仍然具有正向的生长促进作用，说明全素复合肥中各种营养元素对烟草具有正向促进作用，D2组和D3组的趋势与D1组相同；D1组与D2组相比，复合肥与微生物菌剂混合使用对烟草植株的生长促进作用更加明显，进一步说明了微生物菌剂对烟草连作障碍的克服具有正效益；D3与D2相比，单纯使用微生物菌剂并不能为烟草的正常生长提供营养元素，因此效果比D2组稍弱，但是对烟草的连作障碍消除的效果强于D1组。

综上所述，使用该微生物菌剂与复合肥联合使用可有效消除烟草连作障碍，且效果也最佳。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (7)

1.一种抑制烟草连作障碍的微生物菌剂，其特征在于，包括：

固氮菌菌剂，通过自身固氮功能为烟草提供氮肥；

解钾菌菌剂，将土壤中的有机磷降解为无机磷，为烟草提供磷素；

解磷菌菌剂，将土壤中的有机钾降解为无机钾，为烟草提供钾素；

苯甲酸降解菌菌剂，将烟草连作根系产生的酚酸类物质进行降解，降低烟草根系连作的化感与自毒作用。

2.根据权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于，所述的固氮菌菌剂为圆褐固氮菌菌株培养后制成的粉末状菌剂；

解钾菌菌剂为胶冻样芽孢杆菌菌株培养后制成的粉末状菌剂；

解磷菌菌剂为假单胞杆菌菌株培养后制成的粉末状混合菌剂；

苯甲酸降解菌菌剂为黄曲霉菌菌株培养后制成的粉末状菌剂。

3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，由固氮菌菌剂、解钾菌菌剂、解磷菌菌剂和苯甲酸降解菌菌剂按1：1：1：1的比例混合。

4.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，所述的固氮菌菌剂的制备方法如下：

步骤1、配制无氮培养基：蔗糖10份、磷酸氢二钾0.2份、硫酸镁0.2份、氯化钠0.2份、硫酸钙0.2份、碳酸钙5份、琼脂20份、无菌蒸馏水1000份制成pH7.0-7.2的液体无氮培养基；

步骤2、接种：配制的液体无氮培养基灭菌后于超净工作台接种圆褐固氮菌菌株，接种数按1×10³个/mL的用量接种圆褐固氮菌，封口后放入摇床中28℃-37℃培养5-7天，得到固氮菌菌液；

步骤3、配制固氮菌菌剂制备培养基：面粉30份、蛋白胨10份、稻壳20份、锯末40份、蒸馏水80份搅拌均匀，封口、灭菌；

步骤4、将固氮菌菌液加入固氮菌菌剂制备培养基中，28℃～37℃培养5-7天，每隔3天搅拌一次，发酵完成后于烘干箱中28℃-37℃烘干，粉末粉碎机中粉碎，得到固氮菌菌剂。

5.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，所述的解钾菌菌剂的制备方法如下：

步骤1、配制解钾菌培养基：蔗糖2份、蛋白胨0.5份、硫酸镁0.1份、磷酸氢二钾0.2份、碳酸钙0.2份、琼脂20份、无菌蒸馏水1000份制成pH7.5的液体解钾菌培养基；

步骤2、接种：配制的液体解钾菌培养基灭菌后于超净工作台接种胶冻样芽孢杆菌菌株，接种量1×10³个/mL封口后放入摇床中28℃-37℃培养5-7天，得到解钾菌菌液；

步骤3、配制解钾菌菌剂制备培养基：面粉30份、蛋白胨10份、稻壳20份、锯末40份、蒸馏水80份搅拌均匀，封口、灭菌；

步骤4、将解钾菌菌液加入解钾菌菌剂制备培养基中，28℃～37℃培养5-7天，每隔3天搅拌一次，发酵完成后于烘干箱中28℃-37℃烘干，粉末粉碎机中粉碎，得到解钾菌菌剂。

6.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，所述的解磷菌菌剂的制备方法如下：

步骤1、配制解磷菌培养基：葡萄糖2份份、蛋白胨0.5份、硫酸镁0.1份、磷酸氢二钾0.2份、碳酸钙0.2份、琼脂20份、无菌蒸馏水1000份制成pH7.5的液体解钾菌培养基；

步骤2、接种：配制的液体解钾菌培养基灭菌后于超净工作台接种假单胞杆菌，接种量均为1×10³个/mL，封口后放入摇床中28℃-37℃培养5-7天，得到假单胞杆菌菌液；

步骤3、配制解钾菌菌剂制备培养基：面粉30份、蛋白胨10份、稻壳20份、锯末40份、蒸馏水80份搅拌均匀，封口、灭菌，得到解钾菌菌剂制备培养基；

步骤4、将假单胞杆菌菌液加入解钾菌菌剂制备培养基中，28℃～37℃培养5-7天，每隔3天搅拌一次，发酵完成后于烘干箱中28℃-37℃烘干，粉末粉碎机中粉碎，得到假单胞杆菌菌剂。

7.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，所述的苯甲酸降解菌菌剂的制备方法如下：

步骤1、配制苯甲酸降解菌培养基：葡萄糖2份份、牛肉胨0.5份、硫酸镁0.1份、磷酸氢二钾0.2份、碳酸钙0.2份、无菌蒸馏水1000份制成pH7.5的液体苯甲酸降解菌培养基；

步骤2、接种：配制的液体苯甲酸降解菌培养基灭菌后于超净工作台接种黄曲霉菌，接种量均为1×10³个/mL封口后放入摇床中28℃-37℃培养5-7天，得到苯甲酸降解菌菌液；

步骤3、配制苯甲酸降解菌菌剂制备培养基：面粉30份、牛肉胨10份、稻壳20份、锯末40份、蒸馏水80份搅拌均匀，封口、灭菌，得到苯甲酸降解菌菌剂制备培养基；

步骤4、将苯甲酸降解菌菌液加入苯甲酸降解菌菌剂制备培养基中，28℃～37℃培养5-7天，每隔3天搅拌一次，发酵完成后于烘干箱中28℃-37℃烘干，粉末粉碎机中粉碎，得到苯甲酸降解菌菌剂。