CN114342876A - 一种非洲爪蟾的人工繁殖方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种非洲爪蟾的人工繁殖方法，属于水产动物繁殖技术领域。非洲爪蟾人工繁殖的方法，通过严格控制亲蛙培育的环境条件和饲喂方法使非洲爪蟾在人工培育条件且不使用催产素的情况下实现自然产精产卵的目的，且可获得较高的受精率和孵化率，从根本上解决了塘养环境下非洲爪蟾雌雄不发育或发育不同步的问题；减少了对非洲爪蟾蛙种蛙的损耗，特别是雄蛙杀蛙取精消耗雄蛙的问题，同时大幅度降低了养殖成本；更加合理、高效，提高了孵化率并减少了蛙卵资源的浪费，满足用户对不同发育时期蛙卵和不同时期蝌蚪的需求；经过特殊的孵化和蝌蚪饲养步骤大大提高了受精卵的孵化率和蝌蚪的存活率和变态率，同时也降低了蝌蚪的畸形率。

Description

一种非洲爪蟾的人工繁殖方法

技术领域

本发明属于水产动物繁殖技术领域，具体涉及一种非洲爪蟾的人工繁殖方法。

背景技术

非洲爪蟾(Xenopus laevis)，又名光滑爪蟾，是一种原产于南非的水生无尾两栖类，是一种重要的研究发育生物学的模式生物。非洲爪蟾最大体长可达120mm，头部及身体扁平，没有外耳或舌头。后肢有3趾短爪，是用来挖泥以躲避捕食者。由于没有舌头只能利用其前肢捕食水中的水生动物。非洲爪蟾主要以小鱼、小虾、蟹和水生昆虫为食，觅食时常用前肢的长爪不断将食物拨入嘴中。终身水栖，广栖于淡水水域中，尤其喜好静止水域的环境。白天多潜藏于水底深处，夜晚则会爬至浅滩。初春至晚夏间为繁殖期。

虽然无尾两栖类人工繁殖技术具有悠久的历史，但仍未解决无尾两栖类进入塘养环境后所出现的一系列生殖功能紊乱问题，塘养环境下很难观察到非洲爪蟾产卵前相互发情追逐、抱对或者抱对后不产卵和自然产卵的现象，塘养环境下，不可能完全模仿无尾两栖类繁殖季节的生态环境，因此，常需注射高效催产剂诱导无尾两栖类产卵产精。催产剂的使用在很大程度上解决了无尾两栖类人工繁殖的问题，可使无尾两栖类产卵产精并能正常受精，获得正常后代，但却未能解决根本问题，非洲爪蟾同样如此，只能寄希望于种蛙培育，使得非洲爪蟾在塘养环境下能自然产卵产精，以期获得高质量的非洲爪蟾受精卵。

现有的专利和文献中虽提及种蛙培育，但仍停留在种蛙培育是为催产剂的使用服务的初级阶段，从某种意义上来说，这种培育方式是不成功的，成功的种蛙培育是建立在对无尾两栖类野外生态和繁殖习性极度了解的基础之上，并具有多年池塘养殖经验，以实现无尾两栖类在塘养环境下能自然产卵产精，为实现非洲爪蟾的自我繁衍奠定基础。经文献检索，并未有相关报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种非洲爪蟾的人工繁殖方法，以实现非洲爪蟾在塘养环境下自然产卵产精，通过不断完善的种蛙培育，不使用催产剂仍可获得较高的受精率。

本发明提供了一种非洲爪蟾的人工繁殖方法，包括以下步骤：

将雌雄种蛙投入培育池中进行培育，得到产卵的雌种蛙和产精的雄种蛙；所述雌雄种蛙的养殖密度为10.5～15.5kg/m³；

所述培育的条件为光照周期10～14h，温度14～22℃，水流的流速100～120L/min，水质透明度50～95cm，水的溶解氧4.2～6.5mg/L，pH值6.8～7.6，渗透压2.8～5.3mOsm/L；

从产卵期的雌种蛙的腹部挤出卵子，从产精的雄种蛙的腹部挤出精子，将所述卵子和精子混合，搅拌，再用渗透压290-310mOsm/L，温度20～23℃的生理盐水轻轻冲洗精卵混合物，经孵化、蝌蚪饲养后，得到非洲爪蟾。

优选的，所述培育的条件根据要求进行节律性调节：

在每年11月份至第二年6月，光照周期10～12h，温度14～18℃，流速50～80L/min，水质透明度50～60cm，水的溶解氧4.2～5.0mg/L，pH值6.8～7.4，渗透压2.8～4.9mOsm/L；

在7月～10月，光照周期12～14，温度18～22℃，流速100～120L/min，水质透明度70～95cm，溶解氧5.6～6.5mg/L，pH值7.0～7.6，渗透压3.2～5.3mOsm/L。

优选的，所述雌雄种蛙的选择标准：形态正常、生长良好、无疾病的雌雄种蛙。

优选的，雌种蛙和雄种蛙的数量比为3～5:1。

优选的，所述培育期间，每天投喂人工配合漂浮饲料两次；

所述人工配合漂浮饲料的每次投喂量为按饵料系数为1％～2％投喂。

优选的，在培育后期，在雌种蛙产卵期前，于培育池塘角落设置产卵床；所述产卵床的规格为50cm×50cm，所述产卵床悬浮于水中且鱼床面距离水面5～10cm。

优选的，所述孵化的方法如下：

所述受精卵置于水面的下方3～5cm，孵化期间无强光源照射，水温16～22℃，pH值7.5～7.8，溶解氧7.2～8.0mg/L。

优选的，在孵化阶段，采用直径150cm的圆形孵化玻璃缸进行孵化；

在圆形孵化玻璃缸内悬挂有一块厚10mm的透明塑料板，塑料板距缸底面5cm，距缸壁2cm，板中空且一侧有一直径为5mm的注气口，塑料板上有呈网格状分布的光滑弧形凹槽，光滑弧形凹槽的上边缘直径为5mm，相邻凹槽间均有一直径为1.5mm的小孔，所述小孔与透明塑料板的中空内部相通，孵化缸底部垫有一黑布；

每个圆形孵化玻璃缸放置受精卵40000～50000粒。

优选的，所述蝌蚪饲养在孵化得到的蝌蚪破膜后3天开始开口，开口后分阶段投喂饲料：在开口第1～15天投喂浆状饵料nbf1，每日投喂4次，每次投喂量均为3～5mL/m²；

所述浆状饵料nbf1包括煮熟蛋黄、鱼虾、多维元素片、酵母和水，煮熟蛋黄、鱼虾、多维元素片、酵母和水的质量比为250:10:8:2:750；

在开口第16～30天投喂混合饵料nbf2和轮虫，每日投喂3次，混合饵料nbf2的每次投喂量均为5～8mL/m²，轮虫投喂量为50～80万个/m²；

所述混合饵料nbf2包括煮熟蛋黄、小鱼、小虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片、酵母和水，煮熟蛋黄、鱼虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片、酵母和水的质量比为250:10:250:8:2:500；

在开口第31～60天投喂混合饵料nbf3，投喂量为10～15g/m²；

所述混合饵料nbf3包括现磨黄豆豆浆、鱼虾、含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片、酵母和水，现磨黄豆豆浆、鱼虾、含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片、酵母和水的质量比为250:10:250:10:8:2:500；

待蝌蚪变态后，用111鲤鱼幼鱼配合漂浮饲料投喂，每日投喂次数为2次，投喂量按饵料系数为1％～2％来投喂，每次投喂量以在10～20min内吃完。

本发明供了一种非洲爪蟾的人工繁殖方法，具有以下有益效果：

1.未使用催产剂，非洲爪蟾不仅能在养殖环境下产卵产精，且可获得较高的受精率和孵化率；

2.非洲爪蟾种蛙培育的成功从根本上解决了塘养环境下非洲爪蟾雌雄不发育或发育不同步的问题；

3.催产剂的零使用不仅减少了对非洲爪蟾种蛙，特别是雄蛙的消耗的损害还降低了养殖成本，操作更为简便快捷。

本发明进一步限定了孵化方法，孵化是针对非洲爪蟾卵孵化中常见问题而设置，更加合理、高效，提高了孵化率并减少了蛙卵资源的浪费；

本发明进一步限定了饲养方法，蝌蚪的分阶段饲养是根据非洲爪蟾蝌蚪各阶段的不同生长特点而设，不仅提高了蝌蚪的存活率同时也降低了蝌蚪的畸形率。

具体实施方式

本发明提供了一种非洲爪蟾的人工繁殖方法，包括以下步骤：

将雌雄种蛙投入培育池中进行培育，得到产卵的雌种蛙和产精的雄种蛙。

在本发明中，所述雌雄种蛙的选择标准优选如下：形态正常、生长良好、无疾病的雌雄种蛙。所述雌雄种蛙的来源为商品途径购买，具体为通过上海茂生生物科技发展有限公司代购美国NASCO公司提供的非洲爪蟾。

在本发明中，所述雌雄种蛙的养殖密度为10.5～15.5kg/m³；优选为12.5kg/m³。雌种蛙和雄种蛙的数量比优选为3～5:1，更优选为4:1。

在本发明中，所述培育池优选预先进行消毒清洗。培育池的消毒清洗方法优选如下：长刷清洗培育池后，用高锰酸钾溶液消毒浸泡1天，然后清水清洗3次，每次10～15min，清洗完成。所述高锰酸钾溶液的浓度优选为50～150g/m³，更优选为100g/m³。本发明对所述培育池的规格没有特殊限制，采用本领域所熟知的培育池的规格即可。在本发明实施例中，所述培育池的规格为长10m×宽5m×高1.5m。消毒清洗后向所述培育池注入水，所述水的高度优选为1.2m。

所述培育的条件为光照周期10～14h，温度14～22℃，水流的流速100～120L/min，水质透明度50～95cm，水的溶解氧4.2～6.5mg/L，pH值6.8～7.6，渗透压2.8～5.3mOsm/L。所述培育的条件优选根据要求进行节律性调节，使种蛙的生存环境更加符合自然环境的变化，使种蛙的性腺发育自然成熟和产卵：在每年11月份至第二年6月，光照周期10～12h，温度14～18℃，流速50～80L/min，水质透明度50～60cm，水的溶解氧4.2～5.0mg/L，pH值6.8～7.4，渗透压2.8～4.9mOsm/L；在7月～10月，光照周期12～14，温度18～22℃，流速100～120L/min，水质透明度70～95cm，溶解氧5.6～6.5mg/L，pH值7.0～7.6，渗透压3.2～5.3mOsm/L。所述培育优选为遮光培育。所述遮光培育的方法优选在培育池上空设置黑色遮光网，避免光线直接照射在培育池上。

在本发明中，所述培育期间，每天投喂人工配合漂浮饲料两次。所述人工配合漂浮饲料优选为昆明黄龙山(饲料)工贸有限公司漂浮料。所述人工配合漂浮饲料的每次投喂量优选为按饵料系数为1％～2％投喂，更优选为按饵料系数为1.5％投喂。

在本发明中，在培育后期雌种蛙产卵期前，优选于培育池塘角落设置产卵床；所述产卵床的规格优选为50cm×50cm，所述产卵床悬浮于水中且床面距离水面优选5～10cm。所述产卵床的设置有利于雌雄蛙抱对后，鼻腔露出水面，模拟自然环境中自然产卵的过程。种蛙性腺发育成熟至产卵前，便会雌雄抱对跃至产床上自然产卵，待雌雄蛙跃上产卵床后，将产床上的蛙收集，留待人工繁殖用。所述培育的时间优选10～30天得到性成熟的亲蛙。

得到产卵期的雌种蛙和产精的雄种蛙后，本发明从产卵期的雌种蛙的腹部挤出卵子，从产精的雄种蛙的腹部挤出精子，将所述卵子和精子混合搅拌进行人工授精，再用渗透压290-310mOsm/L，温度20～23℃的生理盐水轻轻冲洗精卵混合物，经孵化、蝌蚪饲养后，得到非洲爪蟾。

在本发明中，所述搅拌优选采用羽毛轻轻搅拌30s。所述卵子和精子的数量比优选为1～5：10⁴～10⁶，更优选为1：10⁵。采用所述生理盐水冲洗的作用是去除多余精液和污染物，并保持渗透压平衡。

在本发明中，所述孵化的方法优选如下：所述受精卵置于水面的下方3～5cm，孵化期间无强光源照射，水温16～22℃，pH值7.5～7.8，溶解氧7.2～8.0mg/L；更优选为所述受精卵置于水面的下方4cm，水温18～20℃，pH值7.6～7.7，溶解氧7.4～7.8mg/L。该孵化方法有利于提高受精卵的孵化率，减少畸形率。

在本发明中，在孵化阶段，优选采用直径150cm的圆形孵化玻璃缸进行孵化；在圆形孵化玻璃缸内悬挂有一块厚10mm的透明塑料板，防止沉性卵因水流堆积和霉菌的滋生，塑料板距缸底面5cm，距缸壁2cm，板中空且一侧有一直径为5mm的注气口，塑料板上有呈网格状分布的光滑弧形凹槽，避免摩擦使蛙卵卵膜破裂及孵化时因蛙苗扭动而成堆。光滑弧形凹槽的上边缘直径为5mm，相邻凹槽间均有一直径为1.5mm的小孔，所述小孔与透明塑料板的中空内部相通，避免因局部溶解氧含量的不同而降低孵化率，孵化缸底部垫有一黑布，便于在孵化过程中通过透明塑料板挑出死卵。每个圆形孵化玻璃缸优选放置受精卵40000～50000粒，更优选42000～48000粒。所述孵化优选持续60～70h开始破膜。

在本发明中，所述蝌蚪饲养优选在孵化得到的蝌蚪破膜后3天开始开口，开口后分阶段投喂饲料：在开口第1～15天投喂浆状饵料nbf1，每日投喂4次，每次投喂量均为3～5mL/m³；

所述浆状饵料nbf1包括煮熟蛋黄、鱼虾、多维元素片、酵母和水，所述煮熟蛋黄、鱼虾、多维元素片、酵母和水的质量比为250:10:8:2:750；

在开口第16～30天投喂混合饵料nbf2和轮虫，每日投喂3次，混合饵料nbf2的每次投喂量均为5～8mL/m²，轮虫投喂量为50～80万个/m²；

所述混合饵料nbf2包括煮熟蛋黄、鱼虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片、酵母和水，所述煮熟蛋黄、鱼虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片、酵母和水的质量比为250:10:250:8:2:500；

在开口第31～60天投喂混合饵料nbf3，投喂量为10～15g/m²；

所述混合饵料nbf3包括现磨黄豆豆浆、鱼虾、含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片、酵母和水，所述现磨黄豆豆浆、鱼虾、含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片、酵母和水的质量比为250:10:250:10:8:2:500；

待蝌蚪变态后，用111鲤鱼幼鱼配合漂浮饲料(昆明黄龙山(饲料)工贸有限公司)投喂，每日投喂次数为2次，投喂量按饵料系数为1％～2％来投喂，每次投喂量以在10～20min内吃完。

在本发明中，每天用硝化细菌按15～17g/m²调节水质，以保持饲养期间的水质透明度。

下面结合实施例对本发明提供的一种非洲爪蟾的人工繁殖方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

1.构建养殖系统

建立种蛙培育池，构建养殖系统，在11月份至第二年6月，将光照周期控制在11小时，温度控制在16℃，流速控制在60L/min，水质透明度控制在55cm，溶解氧控制在4.6mg/L，pH值控制在7.0。

2.饵料配制

浆状饵料nbf1的原料如下:煮熟蛋黄、鱼虾、多维元素片、酵母和水，煮熟蛋黄：虾：多维元素片：酵母：水＝250:10:8:2:750(质量比)。

混合饵料nbf2的原料如下：煮熟蛋黄、鱼虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片、酵母和水，煮熟蛋黄：虾：现磨黄豆豆浆：多维元素片：酵母：水＝250:10:250:8:2:500(质量比)。

混合饵料nbf3的原料如下现磨黄豆豆浆、鱼虾、含45％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片、酵母和水，现磨黄豆豆浆：虾：含45％粗蛋白的粉状饲料：维生素D3钙片：多维元素片：酵母：水＝250:10:250:10:8:2:500(质量比)。

3.种蛙来源

非洲爪蟾种蛙于2011年3月通过上海茂生生物科技发展有限公司代购美国NASCO公司提供的LM00535MX、LM00715MX、LM00823MX和LM00822MX非洲爪蟾，合计305只。

4.种蛙驯养

将长10m、宽5m、高1.5m的培育池提前清空并暴晒3天，接着用长刷清洗池壁，并用100g/m³浓度的高锰酸钾溶液浸泡1天，然后用清水清洗3次，每次30min。清洗完成后，向培育池中注水，使培育池中水位达到1.5m，种蛙经消毒后放入培育池，池上盖有黑色遮光网，池内水位与池外排水通道高度均为1.2m，流速为50L/min，水质透明度50cm。池内安装有供氧设备，溶解氧4.6mg/L，pH值7.0，温度20℃。每天10:00与16:00各投喂人工配合漂浮饲料一次。驯养30天后，共死亡种蛙1只。

5.种蛙选择

2019年7月12日上午9时，从培育池内选取形态正常、无明显畸形、生长良好、无疾病的非洲爪蟾雌雄种蛙共120尾，消毒后转移至新的培育池，养殖密度6.5kg/m³。雌雄比例为3:1，并在培育池上加盖黑色遮光网，每天投喂人工配合漂浮饲料两次。

6.种蛙培育

培育池中构建的养殖系统为种蛙模拟了良好的产卵条件。各种条件的刺激下，可促进种蛙性成熟从而产卵。性成熟的种蛙主要表现在：产卵前雌性泄殖腔唇明显地突出变成红色，而雄性前臂内侧有黑色粗条纹的“婚垫”产生。

7.设置产卵床

种蛙抱对产卵期前，在水池水流平缓处设置产卵床，以诱导种蛙产卵，产床面50cm×50cm，悬浮于水中且产床面距离水面5cm。

8.人工授精

种蛙性腺发育成熟至产卵前，便会跃至产床上自然产卵，待种蛙跃上产床后，将产床上的种蛙收集。2019年12月5日，人工授精前，对非洲爪蟾精子进行质量评价，精子密度平均为19.4×10⁹个/mL，平均活力为92.3％，平均寿命为102.5s。

将收集的种蛙进行人工授精，分别将种蛙的卵子和精子从其腹部轻轻挤压在预先准备好的容器中，即刻用鸡毛轻轻搅拌30s，再用渗透压300mOsm/L，温度20℃的生理盐水轻轻冲洗精卵混合物，边冲洗边用鸡毛沿着顺时针方向轻轻搅拌蛙卵精液混合物以去除多余精液。冲洗3次后，将精卵混合物放置于孵化缸中孵化。

9.蛙卵孵化

采用直径150cm的圆形孵化玻璃缸，缸内悬挂有一块厚10mm的透明塑料板，塑料板距缸底面5cm，距缸壁2cm，板中空且一侧有一直径为5mm的注气口。塑料板上有呈网格状分布的光滑弧形凹槽，避免摩擦使蛙卵卵膜破裂及孵化时因蝌蚪扭动而成堆。凹槽上边缘直径为5mm，相邻凹槽间均有一直径为1.5mm的小孔，小孔与透明塑料板的中空内部相通，蛙卵孵化时，氧气由注气口进入，经网状分布的小孔流出，避免因局部溶解氧含量的不同而降低孵化率。每粒鱼卵互不接触且独占一凹槽，可防止蛙卵因水流堆积和霉菌的滋生。孵化缸底部垫有一黑布，便于在孵化过程中通过透明塑料板挑出死卵。孵化时，缸壁上的进水口与缸底出水口流速一致，呈流水孵化状态。每缸放鱼卵4000粒。将蛙卵置入孵化玻璃缸，注入清水，水面在蛙卵上方3cm，孵化玻璃缸内无强光源照射，水温16℃，pH值7.5，溶解氧7.2mg/L。为避免蛙卵胚胎受强光辐射而产生畸形蝌蚪，孵化室内无强光源照射。

受精蛙卵共12976粒，受精率为99.8％，蛙卵孵化60小时后，蝌蚪开始孵出，孵化72小时后，蛙卵孵化结束，共获得蝌蚪12902尾，孵化率为99.4％，出膜时蝌蚪畸形率为0.92％。

10.蝌蚪饲养

蝌蚪破膜后3天开始进食，进食期分阶段投喂不同饲料，进食期的第1-15天投喂浆状饵料nbf1，每日投喂4次，投喂量均为8-10mL/m²。第16-30天投喂混合饵料nbf2和轮虫，每日投喂3次，轮虫投喂量为150万个/m²；同时每天上午10:00用硝化细菌按15-17g/m²调节水质。第31-60天投喂混合饵料nbf3，投喂量为10-12g/m²；同时每天上午10:00用硝化细菌按15-17g/m2调节水质。开口60天后，可只投喂111鲤鱼幼鱼配合漂浮饲料，投喂量按饵料系数为1％-2％来投喂，每次投喂量以在15-20min内吃完为宜。

养殖60天后，获得非洲爪蟾12850尾，存活率99.6％。

实施例2

1.构建养殖系统

建立种蛙培育池，构建养殖系统，在7-10月，将光照周期控制在13小时，温度控制在120℃，流速控制在110m/min，水质透明度控制在85cm，溶解氧控制在6.0mg/L，pH值控制在7.2。

2.饵料配制

浆状饵料nbf1的原料如下:煮熟蛋黄、鱼虾、多维元素片、酵母和水，煮熟蛋黄：虾：多维元素片：酵母：水＝250:10:8:2:750(质量比)。

混合饵料nbf2的原料如下：煮熟蛋黄、鱼虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片、酵母和水，煮熟蛋黄：虾：现磨黄豆豆浆：多维元素片：酵母：水＝250:10:250:8:2:500(质量比)。

混合饵料nbf3的原料如下现磨黄豆豆浆、鱼虾、含45％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片、酵母和水，现磨黄豆豆浆：虾：含45％粗蛋白的粉状饲料：维生素D3钙片：多维元素片：酵母：水＝250:10:250:10:8:2:500(质量比)。

3.种蛙来源

非洲爪蟾种蛙于2012年4月通过上海茂生生物科技发展有限公司代购美国NASCO公司提供的LM00535MX、LM00715MX、LM00823MX和LM00822MX非洲爪蟾，合计300只。

4.种蛙驯养

将长10m、宽5m、高1.5m的培育池提前清空并暴晒3天，接着用长刷清洗池壁，并用100g/m³浓度的高锰酸钾溶液浸泡1天，然后用清水清洗3次，每次30-40min。清洗完成后，向培育池中注水，使培育池中水位达到1.5m，种蛙经消毒后放入培育池，池上盖有黑色遮光网，池内水位与池外排水通道高度均为1.2m，流速为80L/min，水质透明度80cm。池内安装有供氧设备，溶解氧5.0mg/L，pH值7.4，温度22℃。每天10:00与16:00各投喂人工配合漂浮饲料一次。驯养30天后，共死亡种蛙1只。

5.种蛙选择

2019年7月12日上午9时，从培育池内选取形态正常、无明显畸形、生长良好、无疾病的非洲爪蟾雌雄种蛙共120尾，消毒后转移至新的培育池，养殖密度8.8kg/m³。雌雄比例为3:1，并在培育池上加盖黑色遮光网，每天投喂人工配合漂浮饲料两次。

6.种蛙培育

培育池中构建的养殖系统为种蛙模拟了良好的产卵条件。各种条件的刺激下，可促进种蛙性成熟从而产卵。性成熟的种蛙主要表现在：产卵前雌性泄殖腔唇明显地突出变成红色，而雄性前臂内侧有黑色粗条纹的“婚垫”产生。

7.设置产卵床

种蛙抱对产卵期前，在水池水流平缓处设置产卵床，以诱导种蛙产卵，产床面50cm×50cm，悬浮于水中且产床面距离水面10cm。

8.人工授精

种蛙性腺发育成熟至产卵前，便会跃至产床上自然产卵，待种蛙跃上产床后，将产床上的种蛙收集。2019年12月5日，人工授精前，对非洲爪蟾精子进行质量评价，精子密度平均为6×10⁹个/mL，平均活力为95％，平均寿命为39s。将收集的种蛙进行人工授精，分别将种蛙的卵子和精子从其腹部轻轻挤压在预先准备好的容器中，即刻用鸡毛轻轻搅拌30s，再用渗透压310mOsm/L，温度23℃的生理盐水轻轻冲洗精卵混合物，边冲洗边用鸡毛沿着顺时针方向轻轻搅拌蛙卵精液混合物以去除多余精液。冲洗3次后，将精卵混合物放置于孵化缸中孵化。

9.蛙卵孵化

采用直径150cm的圆形孵化玻璃缸，缸内悬挂有一块厚10mm的透明塑料板，塑料板距缸底面5cm，距缸壁2cm，板中空且一侧有一直径为5mm的注气口。塑料板上有呈网格状分布的光滑弧形凹槽，避免摩擦使蛙卵卵膜破裂及孵化时因蝌蚪扭动而成堆。凹槽上边缘直径为5mm，相邻凹槽间均有一直径为1.5mm的小孔，小孔与透明塑料板的中空内部相通，蛙卵孵化时，氧气由注气口进入，经网状分布的小孔流出，避免因局部溶解氧含量的不同而降低孵化率。每粒鱼卵互不接触且独占一凹槽，可防止蛙卵因水流堆积和霉菌的滋生。孵化缸底部垫有一黑布，便于在孵化过程中通过透明塑料板挑出死卵。孵化时，缸壁上的进水口与缸底出水口流速一致，呈流水孵化状态。每缸放鱼卵5000粒。将蛙卵置入孵化玻璃缸，注入清水，水面在蛙卵上方5cm，孵化玻璃缸内无强光源照射，水温22℃，pH值7.8，溶解氧8.0mg/L。为避免蛙卵胚胎受强光辐射而产生畸形蝌蚪，孵化室内无强光源照射。

受精蛙卵共13556粒，受精率为99.6％，蛙卵孵化60小时后，蝌蚪开始孵出，孵化72小时后，蛙卵孵化结束，共获得蝌蚪13528尾，孵化率为99.8％，出膜时蝌蚪畸形率为0.44％。

10.蝌蚪饲养

蝌蚪破膜后3天开始进食，进食期分阶段投喂不同饲料，进食期的第1-15天投喂浆状饵料nbf1，每日投喂4次，投喂量均为10mL/m²。第16-30天投喂混合饵料nbf2和轮虫，每日投喂3次，轮虫投喂量为150万个/m²；同时每天上午10:00用硝化细菌按17g/m²调节水质。第31-60天投喂混合饵料nbf3，投喂量为12g/m²；同时每天上午10:00用硝化细菌按17g/m²调节水质。开口60天后，可只投喂111鲤鱼幼鱼配合漂浮饲料，投喂量按饵料系数为2％来投喂，每次投喂量以在15min内吃完为宜。

养殖60天后，获得非洲爪蟾12000尾，存活率98.4％。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种非洲爪蟾的人工繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

将雌雄种蛙投入培育池中进行培育，得到产卵的雌种蛙和产精的雄种蛙；所述雌雄种蛙的养殖密度为10.5～15.5kg/m³；

所述培育的条件为光照周期10～14h，温度14～22℃，水流的流速100～120L/min，水质透明度50～95cm，水的溶解氧4.2～6.5mg/L，pH值6.8～7.6，渗透压2.8～5.3mOsm/L；

从产卵期的雌种蛙的腹部挤出卵子，从产精的雄种蛙的腹部挤出精子，将所述卵子和精子混合，搅拌，再用渗透压290-310mOsm/L，温度20～23℃的生理盐水轻轻冲洗精卵混合物，经孵化、蝌蚪饲养后，得到非洲爪蟾。

2.根据权利要求1所述非洲爪蟾的人工繁殖方法，其特征在于，所述培育的条件根据要求进行节律性调节：

在每年11月份至第二年6月，光照周期10～12h，温度14～18℃，流速50～80L/min，水质透明度50～60cm，水的溶解氧4.2～5.0mg/L，pH值6.8～7.4，渗透压2.8～4.9mOsm/L；

在7月～10月，光照周期12～14，温度18～22℃，流速100～120L/min，水质透明度70～95cm，溶解氧5.6～6.5mg/L，pH值7.0～7.6，渗透压3.2～5.3mOsm/L。

3.根据权利要求1所述非洲爪蟾的人工繁殖方法，其特征在于，所述雌雄种蛙的选择标准：形态正常、生长良好、无疾病的雌雄种蛙。

4.根据权利要求1所述非洲爪蟾的人工繁殖方法，其特征在于，雌种蛙和雄种蛙的数量比为3～5:1。

5.根据权利要求1所述非洲爪蟾的人工繁殖方法，其特征在于，所述培育期间，每天投喂人工配合漂浮饲料两次；

所述人工配合漂浮饲料的每次投喂量按饵料系数为1％～2％投喂。

6.根据权利要求1所述非洲爪蟾的人工繁殖方法，其特征在于，在培育后期，在雌种蛙产卵期前，于培育池塘角落设置产卵床；所述产卵床的规格为50cm×50cm，所述产卵床悬浮于水中且鱼床面距离水面5～10cm。

7.根据权利要求1～6任意一项所述非洲爪蟾的人工繁殖方法，其特征在于，所述孵化的方法如下：

所述受精卵置于水面的下方3～5cm，孵化期间无强光源照射，水温16～22℃，pH值7.5～7.8，溶解氧7.2～8.0mg/L。

8.根据权利要求7所述非洲爪蟾的人工繁殖方法，其特征在于，在孵化阶段，采用直径150cm的圆形孵化玻璃缸进行孵化；

在圆形孵化玻璃缸内悬挂有一块厚10mm的透明塑料板，塑料板距缸底面5cm，距缸壁2cm，板中空且一侧有一直径为5mm的注气口，塑料板上有呈网格状分布的光滑弧形凹槽，光滑弧形凹槽的上边缘直径为5mm，相邻凹槽间均有一直径为1.5mm的小孔，所述小孔与透明塑料板的中空内部相通，孵化缸底部垫有一黑布；

每个圆形孵化玻璃缸放置受精卵40000～50000粒。

9.根据权利要求1～6任意一项所述非洲爪蟾的人工繁殖方法，其特征在于，所述蝌蚪饲养在孵化得到的蝌蚪破膜后3天开始开口，开口后分阶段投喂饲料：在开口第1～15天投喂浆状饵料nbf1，每日投喂4次，每次投喂量均为3～5mL/m²；

所述浆状饵料nbf1包括煮熟蛋黄、鱼虾、多维元素片、酵母和水，所述煮熟蛋黄、鱼虾、多维元素片、酵母和水的质量比为250:10:8:2:750；

在开口第16～30天投喂混合饵料nbf2和轮虫，每日投喂3次，混合饵料nbf2的每次投喂量均为5～8mL/m²，轮虫投喂量为50～80万个/m²；

所述混合饵料nbf2包括煮熟蛋黄、鱼虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片、酵母和水，煮熟蛋黄、鱼虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片、酵母和水的质量比为250:10:250:8:2:500；

在开口第31～60天投喂混合饵料nbf3，投喂量为10～15g/m²；

所述混合饵料nbf3包括现磨黄豆豆浆、鱼、虾、含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片、酵母和水，现磨黄豆豆浆、鱼、虾、含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片、酵母和水的质量比为250:10:250:10:8:2:500；

待蝌蚪变态后，用111鲤鱼幼鱼配合漂浮饲料投喂，每日投喂次数为2次，投喂量按饵料系数为1％～2％来投喂，每次投喂量以在10～20min内吃完。

10.根据权利要求8或9所述非洲爪蟾的人工繁殖方法，其特征在于，蝌蚪饲养期间，每天用硝化细菌按15～17g/m²调节水质。