CN116076404A - 一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法 - Google Patents

一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，属于水产繁殖技术领域。本发明提供的滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，包括亲鱼培育、人工授精、鱼卵孵化和鱼苗饲养，严格控制亲鱼培育环境参数和饲料种类，为滇池金线鲃和犀角金线鲃模拟良好的生存条件，有利于野生滇池金线鲃和犀角金线鲃较快适应人工养殖环境，同时避免催产剂使用实现人工环境下自然产精产卵，为人工杂交提供质量、数量俱佳的卵子精子，同时还限定孵化时的关键参数(包括孵化水位、水温、水流速度、pH值、溶解氧以及受精卵消毒等)，为受精卵的顺利孵化提供适宜的环境条件。该方法为洞穴鱼类研究提供了优良的研究素材。

Description

一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法。
背景技术
洞穴鱼类被称为地质演变和生物进化的“活化石”，在自然状态下，它们的整个生活史或其中某一阶段必须在洞穴或地下水中进行。洞穴鱼类具有高度特化的洞穴特征，如眼睛退化、皮肤白化、鳞片消失、感觉器官的形态进一步发展或功能增强等。目前世界上有超过350种洞穴鱼类，而中国是世界上洞穴鱼类物种数量、特有种最多的国家。其中，中国特有金线鲃属鱼类仅分布于我国西南喀斯特地区。该属也是我国鲤科鱼类第一大属，有50多个不同的物种，约50％的种是洞穴鱼类。金线鲃鱼类的血糖低而稳定，它可望成为研究人类眼睛视力退化、白癜风、高血糖病分子机制的模式动物。
滇池金线鲃(Sinocyclocheilusgrahami)，是1904年英国人Regan描述的新种，是金线鲃属第一个种，是滇池流域的特有鱼类，2007年中国科学院昆明动物研究所突破滇池金线鲃人工繁殖，也是金线鲃属中最先实现人工繁殖的种类。犀角金线鲃(Sinocyclocheilus rhinocerous)，是1994年发现的一种金线鲃属洞穴新种，2019年突破其人工繁殖技术。根据赵亚辉和张春光(2009)洞穴鱼类的定义，滇池金线鲃属非典型洞穴鱼类，犀角金线鲃属典型洞穴鱼类，滇池金线鲃与犀角金线鲃的杂交成功，将为中国洞穴鱼类的洞穴适应性研究和推进作为研究人类疾病的模式动物创造条件。然而经文献检索，未有滇池金线鲃和犀角金线鲃杂交的相关报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，为洞穴鱼类的研究提供新的研究素材。
本发明提供了一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，包括以下步骤：
1)将滇池金线鲃和犀角金线鲃分别进行亲鱼培育；
所述滇池金线鲃的亲鱼培育期间的环境参数如下：水温16～22℃，水流的流速8～20cm/s，水的溶解氧6.0～7.5mg/L，水的pH值7.0～7.5；
所述犀角金线鲃的亲鱼培育期间的环境参数如下：水温为16～22℃，水流的流速为10～20cm/s，水的溶解氧为6.0～7.5mg/L，水的pH值为7.0～7.2，保持水质清洁；培养环境保持黑暗、无噪音；
在滇池金线鲃和犀角金线鲃的亲鱼培育期间，每天投喂颗粒饲料两次，每次投喂量按饵料系数为3％～4％的比例添加，所述颗粒饲料包括含质量浓度40％～45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；所述质量浓度40％～45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的质量比为(250～280):(20～50)：(10～20):(8～20):300；
2)将性腺发育成熟的滇池金线鲃亲鱼和犀角金线鲃雌雄亲鱼分别收集精子和卵子，人工授精，得到精卵混合物；
3)将精卵混合物进行孵化，孵出的鱼苗进行饲养，得到滇池金线鲃和犀角金线鲃杂交种。
优选的，所述滇池金线鲃的亲鱼培育的环境参数按照以下要求进行节律性调节：
在12月～次年3月，水温16～20℃，水流的流速10～20cm/s，水的溶解氧7.0～8.0mg/L，水的pH值7.0～7.2；
在4～8月，水温18～22℃，水流的流速8～15cm/s，水的溶解氧7.0～7.5mg/L，水的pH值7.2～7.5；
在9～11月，水温16～20℃，水流的流速8～15cm/s，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值7.0～7.5。
优选的，所述犀角金线鲃的亲鱼培育的环境参数按照以下要求进行节律性调节：
在12月～次年3月，水温为16～20℃，水流的流速为15～20cm/s，水的溶解氧为7.0～7.5mg/L，水的pH值为7.0～7.2；
在4～8月，水温为18～22℃，水流的流速为10～15cm/s，水的溶解氧为6.0～6.5mg/L，水的pH值为7.0～7.2；
在9～12月，水温为16～20℃，水的流速为10～15cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为7.0～7.2。
优选的，在滇池金线鲃和犀角金线鲃的亲鱼培育期间，所述颗粒饲料的种类根据以下要求节律性调节：
在12月～次年3月，投喂饵料SF1，所述饵料SF1为质量比250:50:10:8:300的含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
在4～8月，投喂饵料SF2，所述饵料SF2为质量比280:30:20:10:300的含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
在9～11月，投喂饵料SF3，所述饵料SF3为质量比250:20:20:20:300含质量浓度42％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、维生素C和水的混合物。
优选的，所述人工授精包括滇池金线鲃为母本×犀角金线鲃为父本和/或滇池金线鲃为父本×犀角金线鲃为母本。
优选的，所述人工授精时，卵子和精子的数量比为(1～5)：(1～10)×105；
所述人工授精后，用渗透压280～300mOsm/L、温度18～20℃的生理盐水冲洗精卵混合物3～4次后，将精卵混合物泼洒在载体上，形成粘附有载体的精卵混合物。
优选的，所述孵化的条件为：水位1.2m，水面在受精卵上方60～80cm，无光源直射，水温18～20℃，水的pH值7.0～7.2，水的溶解氧7.0～8.0mg/L；在孵化期间，每天将受精卵置于高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒5天，第6天开始有鱼苗孵出，第9天孵化结束。
优选的，所述鱼苗破膜后7天开始投喂饲料。
优选的，所述饲料的投喂方法根据鱼苗不同生长时期进行调整：
进食的第1～15天投喂浆状饵料SGRF1，每日投喂4次，每次投喂量为8～10mL/m2，所述浆状饵料SGRF1为质量比300:200:30:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、虾、多维元素片和水的混合物；
第15～30天投喂饵料SGRF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，所述饵料SGRF2为质量比250:30:250:10:750的煮熟蛋黄、虾、黄豆豆浆、多维元素片和水的混合物；
第31～60天投喂饵料SGRF3，每日投喂2次，每次投喂量为10～12g/m2，所述饵料SGRF3为质量比250:20:250:10:10:750的现磨黄豆豆浆、虾、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物；
进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％～4％的量投加，每次投喂量在15～30min内吃完。
优选的，在鱼苗饲养期间，每天用硝化细菌按15～20g/m2的量添加来调节水质。
本发明提供了一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，本发明对滇池金线鲃亲鱼和犀角金线鲃亲鱼进行亲鱼培养，通过严格控制亲鱼培育过程的环境参数和饲喂用人工颗粒饲料种类，为滇池金线鲃和犀角金线鲃模拟了良好的生存条件，各种条件的刺激下，有利于野生滇池金线鲃和野生犀角金线鲃更快的适应人工养殖条件，同时，可促进亲鱼性成熟从而实现在人工环境下自然产精产卵，为后续人工杂交提供质量和数量俱佳的卵子精子；同时本发明经过人工授精后，将受精卵进行孵化获得孵化的鱼苗。本发明通过亲鱼培养、人工授精和人工孵育三个步骤共同干预滇池金线鲃和犀角金线鲃杂交过程，打破种水平的物种生殖隔离，创造性地培育得到兼具两种亲本各自特征的杂交鱼种类。
同时，本发明在亲鱼培育过程中通过模拟两种鱼的各自生存环境，在不使用催产素的情况下，仅在人工环境条件下实现自然产精产卵的效果。因此，本发明提供的方法降低了生产成本、使操作更加简便易行。
进一步的，本发明具体限定了根据不同季节节律性调整亲鱼培育的各自参数和饲料的种类，有利于更加精细模拟自然环境，同时减少野生鱼类对人工环境的应激，利于其对人工环境的适应性，避免因环境的改变造成鱼类的生长和生殖方面的紊乱，使产精产卵的数量和质量更佳。
进一步的，本发明具体限定了在鱼苗饲养阶段根据不同季节节律性调整饲料的种类和投喂方法、投喂量等，该方法是根据不同鱼苗不同生长时期的特点设置的，有利于鱼苗生长，同时提高鱼苗的成活率和减少鱼苗的畸形率。
具体实施方式
本发明提供了一种滇池金线鲃和犀角金线鲃杂交方法，包括以下步骤：
1)将滇池金线鲃和犀角金线鲃分别进行亲鱼培育；
所述滇池金线鲃的亲鱼培育期间的环境参数如下：水温16～22℃，水流的流速8～20cm/s，水的溶解氧6.0～7.5mg/L，水的pH值7.0～7.5；
所述犀角金线鲃的亲鱼培育期间的环境参数如下：水温为16～22℃，水流的流速为10～20cm/s，水的溶解氧为6.0～7.5mg/L，水的pH值为7.0～7.2，保持水质清洁；培养环境保持黑暗、无噪音；
在滇池金线鲃和犀角金线鲃的亲鱼培育期间，每天投喂颗粒饲料两次，每次投喂量按饵料系数为3％～4％的比例添加，所述颗粒饲料包括含质量浓度40％～45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；所述质量浓度40％～45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的质量比为(250～280):(20～50)：(10～20):(8～20):300；
2)将性腺发育成熟的滇池金线鲃亲鱼和犀角金线鲃雌雄亲鱼分别收集精子和卵子，人工授精，得到精卵混合物；
3)将精卵混合物进行孵化，孵出的鱼苗进行饲养，得到滇池金线鲃和犀角金线鲃杂交种。
本发明将滇池金线鲃和犀角金线鲃分别进行亲鱼培育。
本发明对所述滇池金线鲃和犀角金线鲃的来源为野生型滇池金线鲃和犀角金线鲃。本发明对野生型滇池金线鲃和犀角金线鲃的捕捞地点不做具体限制，在本领域所熟知的两种鱼的野生生存区捕获即可。本发明对滇池金线鲃和犀角金线鲃的品种不做具体限定，采用本领域常见的滇池金线鲃和犀角金线鲃品种即可。在本发明实施例中，滇池金线鲃亲鱼系2004年在金沙江水系云南省昆明市滇池流域采集获得，犀角金线鲃亲鱼系2011年在南盘江水系云南省曲靖市罗平县采集获得。
在本发明中，滇池金线鲃的亲鱼培育的环境参数如下：培育池中预先放置黑色洞穴模拟物。所述滇池金线鲃的亲鱼培育的环境参数优选进行节律性调节：在12月～次年3月，水温16～20℃，水流的流速10～20cm/s，水的溶解氧7.0～8.0mg/L，水的pH值7.0～7.2；在4～8月，水温18～22℃，水流的流速8～15cm/s，水的溶解氧7.0～7.5mg/L，水的pH值7.2～7.5；在9～11月，水温16～20℃，水流的流速8～15cm/s，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值7.0～7.5；更优选为在12月～次年3月，水温17～19℃，水流的流速12～18cm/s，水的溶解氧7.2～7.8mg/L，水的pH值7.1～7.2；在4～8月，水温19～21℃，水流的流速10～14cm/s，水的溶解氧7.1～7.4mg/L，水的pH值7.3～7.4；在9～11月，水温17～19℃，水流的流速10～13cm/s，水的溶解氧6.3～6.8mg/L，水的pH值7.2～7.4，最优选为在12月～次年3月，水温18℃，水流的流速15cm/s，水的溶解氧7.5mg/L，水的pH值7.2；在4～8月，水温20℃，水流的流速13cm/s，水的溶解氧7.2mg/L，水的pH值7.3；在9～11月，水温18℃，水流的流速12cm/s，水的溶解氧6.5mg/L，水的pH值7.3。
在本发明中，犀角金线鲃的亲鱼培育的环境参数如下：培育池中预先放置黑色洞穴模拟物。所述犀角金线鲃的亲鱼培育的环境参数优选进行节律性调节：在12月～次年3月，水温为16～20℃，水流的流速为15～20cm/s，水的溶解氧为7.0～7.5mg/L，水的pH值为7.0～7.2；在4～8月，水温为18～22℃，水流的流速为10～15cm/s，水的溶解氧为6.0～6.5mg/L，水的pH值为7.0～7.2；在9～12月，水温为16～20℃，水的流速为10～15cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为7.0～7.2，更优选为在12月～次年3月，水温为17～18℃，水流的流速为16～18cm/s，水的溶解氧为7.2～7.4mg/L，水的pH值为7.1～7.2；在4～8月，水温为19～21℃，水流的流速为11～14cm/s，水的溶解氧为6.2～6.4mg/L，水的pH值为7.1～7.2；在9～12月，水温为17～19℃，水的流速为12～14cm/s，水的溶解氧为6.2～6.8mg/L，水的pH值为7.1～7.2；最优选为在12月～次年3月，水温为18℃，水流的流速为17cm/s，水的溶解氧为7.3mg/L，水的pH值为7.2；在4～8月，水温为20℃，水流的流速为12cm/s，水的溶解氧为6.3mg/L，水的pH值为7.2；在9～12月，水温为18℃，水的流速为13cm/s，水的溶解氧为6.58mg/L，水的pH值为7.2。亲鱼培养条件是根据滇池金线鲃和犀角金线鲃本身的生物学特性决定的。
在本发明中，在滇池金线鲃和犀角金线鲃的亲鱼培养期间，由于不同阶段的亲鱼对蛋白的吸收能力不同，且粗蛋白高，成本就高，在满足需求的同时尽量控制成本。在滇池金线鲃和犀角金线鲃的亲鱼培育期间，颗粒饲料优选根据要求节律性调节：在12月～次年3月，投喂饵料SF1，所述饵料SF1为质量比250:50:10:8:300的含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物。在4～8月，投喂饵料SF2，所述饵料SF2为质量比280:30:20:10:300的含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物。在9～11月，投喂饵料SF3，所述饵料SF3为质量比250:20:20:20:300含质量浓度42％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、维生素C和水的混合物。不同季节对应性腺发育的不同阶段，所需营养也就不同。一般情况下，鱼两岁性成熟，性成熟后，每年产卵一次。
经亲鱼培育后，本发明将性腺发育成熟的滇池金线鲃亲鱼和犀角金线鲃亲鱼分别捞出取出精子和卵子进行人工授精。
在本发明中，性腺发育成熟的滇池金线鲃亲鱼和犀角金线鲃亲鱼表现如下：雌、雄性亲鱼均无珠星出现，用手触摸亦无明显的粗糙感，只是外观雌性因怀卵腹部膨大而圆，轻压腹部会有精子或卵子流出。所述卵子和精子的收集方法优选如下：擦掉鱼体上多余水分，一手握住鱼体背部，一手用拇指和食指沿着卵巢和精巢轮廓轻推鱼体腹部并挤出鱼卵与精液。挤出的鱼卵和精液，盛于干净的容器中。所述人工授精优选包括滇池金线鲃优选为母本×犀角金线鲃为父本和滇池金线鲃为父本×犀角金线鲃为母本。所述人工授精为将卵子和精子混合，用羽毛轻轻搅拌30s，保证充分混合。所述人工授精时，卵子和精子的数量比优选为(1～5)：(1～10)×105，更优选为1：2×105。
在本发明中，人工授精后，优选用渗透压280～300mOsm/L、温度18～20℃的生理盐水冲洗精卵混合物3～4次后，将精卵混合物泼洒在棕片上。所述生理盐水冲洗精卵混合物的作用是在收集精卵的过程中难免会混入尿、屎等杂质，冲洗掉，以免污染受精卵。
在本发明中，将粘附着受精卵的棕片在孵化池中孵化，孵化池的孵化条件优选为：水位1.2m，水面在受精卵上方60～80cm，无光源直射，水温18～20℃，水的pH值7.0～7.2，水的溶解氧7.0～8.0mg/L；在孵化期间，每天将受精卵置于高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒5天，第6天开始有鱼苗孵出，第9天孵化结束。水面在受精卵上方优选60～70cm，更优选为70cm，以便保证受精卵不发生沉积，保证充足的溶解氧，无光源直射的方法优选在孵化池上方设置黑色遮光网。所述高锰酸钾溶液的浓度优选为100ppm。所述消毒在起到杀菌的前提下，将对受精卵的影响降至最低，保证胚胎存活率。实验证明，当不在上述孵化条件下进行孵化，使孵化率低、存活率低、畸形率高。
本发明将孵出的鱼苗进行饲养，得到滇池金线鲃和犀角金线鲃杂交种。
在本发明中，所述鱼苗优选破膜后7天开始投喂饲料，投喂方法优选如下：进食的第1～15天投喂浆状饵料SGRF1，每日投喂4次，每次投喂量为8～10mL/m2，所述浆状饵料SGRF1为质量比300:200:30:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、虾、多维元素片和水的混合物；
第16～30天投喂饵料SGRF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，所述饵料SGRF2为质量比250:30:250:10:750的煮熟蛋黄、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水的混合物；
第31～60天投喂饵料SGRF3，每日投喂2次，每次投喂量为10～12g/m2，所述饵料SGRF3为质量比250:20:250:10:10:750的现磨黄豆豆浆、虾、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物；
进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％～4％的量投加，每次投喂量在15～30min内吃完。
一般幼鱼饵料都是鸡蛋蛋黄和豆浆，而在本发明中，新加了虾、多维元素片和维生素C，该鱼偏肉食性，所以加了虾，且虾是高蛋白，多维元素片和维生素C可提高免疫力。
在本发明中，在鱼苗饲养期间，优选每天用硝化细菌按15～20g/m2的量添加来调节水质。所述硝化细菌的添加量优选为16g/m2。本发明对所述硝化细菌的来源不做具体限定，采用本领域所熟知的硝化细菌的来源即可。
下面结合实施例对本发明提供的一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法
1.构建养殖系统
滇池金线鲃养殖系统：
建立亲鱼培育池，培育池内的光照、水温、水流强度及水质情况参数均可根据季节节律性进行调节，即在12月～次年3月，将温度控制在16℃，流速控制在16cm/s，溶解氧控制在7.5mg/L，pH值控制在7.0；在4～8月，将温度控制在20℃，流速控制在10cm/s，溶解氧控制在7.5mg/L，pH值控制在7.2；在9～11月，将温度控制在18℃，流速控制在12cm/s，溶解氧控制在6.5mg/L，pH值控制在7.2。
犀角金线鲃养殖系统：
建立亲鱼培育池，培育池内的光照、水温、水流强度及水质情况参数均可根据季节节律性进行调节，即在12月～次年3月，水温为16℃，水流的流速为15cm/s，水的溶解氧为7.0mg/L，水的pH值为7.0；在4～8月，水温为20℃，水流的流速为15cm/s，水的溶解氧为6.0mg/L，水的pH值为7.0；在9～12月，水温为20℃，水的流速为10cm/s，水的溶解氧为6.5mg/L，水的pH值为7.0。
2.饵料配制
饵料SF1：含45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含45％粗蛋白的粉状饲料:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:50:10:8:300(质量比)。
饵料SF2：含40％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含40％粗蛋白的粉状饲料:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝280:30:20:10:300(质量比)。
饵料SF3：含42％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、维生素C和水，含42％粗蛋白的粉状饲料:虾:维生素D3钙片:维生素C:水＝250:20:20:20:300(质量比)。
饵料SGRF1：煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、虾、多维元素片和水，煮熟蛋黄:现磨黄豆豆浆:虾:多维元素片:水＝300:200:30:10:750(质量比)。
饵料SGRF2：煮熟蛋黄、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水，煮熟蛋黄:虾:现磨黄豆豆浆:多维元素片:水＝250:30:250:10:750(质量比)。
饵料SGRF3：现磨黄豆豆浆、虾、含28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水，现磨黄豆豆浆:虾:含28％粗蛋白的粉状饲料:维生素C:多维元素片:水＝250:20:250:10:10:750(质量比)。
3.亲鱼来源
滇池金线鲃亲鱼系系2004年在金沙江水系云南省昆明市滇池流域采集获得，采用地笼捕获，共68尾，体长的平均值为13.6cm，体重的平均值为12.1g，犀角金线鲃亲本系2011年在南盘江水系云南省曲靖市罗平县采集获得，采用地笼捕获，共22尾，体长的平均值为10.8cm，体重平均值为10.9g。亲鱼装入长80cm、宽50cm塑料鱼苗袋冲氧后带回养殖基地。
4.亲鱼驯养
将野外采集来的亲鱼消毒后放入经消毒清洗的亲鱼培育池中，并在培育池内放置长30cm，直径15cm的黑色PVC管，水温20℃，流速20cm/s，溶解氧6.5mg/L，pH值7.0。每天10:00、16:00各投喂SF1饵料一次，驯养1周后，共死亡亲鱼3尾。
5.亲鱼强化培育
2020年1月16日09:00，选取形态正常、生长良好、无疾病的滇池金线鲃和犀角金线鲃雌雄亲鱼分别置于培育池中，每天投喂自制颗粒饲料两次，投喂量按饵料系数为3％～4％，饲料配方根据要求节律性调节，即在12月～次年3月，投喂饵料SF1，在4～7月，投喂饵料SF2，在8～11月，投喂饵料SF3。培育池中构建的养殖系统为滇池金线鲃和犀角金线鲃模拟了良好的生存条件，各种条件的刺激下，有利于野生滇池金线鲃和犀角金线鲃更快的适应人工养殖条件，同时，可促进亲鱼性成熟从而产卵。生殖季节，雌、雄均无珠星出现，用手触摸亦无明显的粗糙感，只是外观雌性因怀卵腹部膨大而圆，轻压腹部会有精子或卵子流出。
人工授精2月18日16:00，选取形态正常、无疾病、性腺发育良好的滇池金线鲃和犀角金线鲃雌雄亲鱼分别作为父本和母本，即滇池金线鲃为父本×犀角金线鲃为母本，进行人工授精。擦掉鱼体上多余水分，一手握住鱼体背部，一手用拇指和食指沿着卵巢和精巢轮廓轻推鱼体腹部并挤出鱼卵与精液。挤出的鱼卵和精液，盛于干净的容器中，卵子和精子的数量比为1：2×105，即刻用鸡毛轻轻搅拌30s，再用渗透压280mOsm/L，温度20℃的水轻轻冲洗精卵混合物，边冲洗边用鸡毛沿着顺时针方向轻轻搅拌鱼卵精液混合物以去除多余精液。冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
6.鱼卵孵化
将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水面在鱼卵上方70cm，无光源直射，水温20℃，pH 7.2，溶解氧7.5mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒5天，第6天开始有鱼苗孵出，第9天孵化结束。
7.鱼苗饲养
鱼苗破膜后7天开始进食，每天用硝化细菌按16g/m2调节水质，进食期分阶段投喂不同饲料，其中，在鱼苗饲养阶段：
进食期的第1～15天投喂浆状饵料SGRF1，每日投喂4次，投喂量均为8mL/m2。
第16～30天投喂饵料SGRF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫投喂量为150万个/m2。
第31～60天投喂饵料SGRF3，投喂量为10g/m2。
开口60天后，按上述亲鱼培育饵料投喂，投喂量按饵料系数为4％，每次投喂量以在20min内吃完为宜。
实施例2
一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法
1.构建养殖系统滇池金线鲃养殖系统：
建立亲鱼培育池，培育池内的光照、水温、水流强度及水质情况参数均可根据季节节律性进行调节，即在12月～次年3月，将温度控制在18℃，流速控制在20cm/s，溶解氧控制在7.8mg/L，pH值控制在7.2；在4～8月，将温度控制在22℃，流速控制在15cm/s，溶解氧控制在7.2mg/L，pH值控制在7.2；在9～11月，将温度控制在20℃，流速控制在10cm/s，溶解氧控制在7.0mg/L，pH值控制在7.4。
犀角金线鲃养殖系统：建立亲鱼培育池，培育池内的光照、水温、水流强度及水质情况参数均可根据季节节律性进行调节，即在12月～次年3月，水温为18℃，水流的流速为18cm/s，水的溶解氧为7.2mg/L，水的pH值为7.2；在4～8月，水温为22℃，水流的流速为15cm/s，水的溶解氧为6.5mg/L，水的pH值为7.2；在9～12月，水温为18℃，水的流速为12cm/s，水的溶解氧为7.0mg/L，水的pH值为7.2。
2.饵料配制
饵料SF1：含45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含45％粗蛋白的粉状饲料:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝
250:50:10:8:300(质量比)。
饵料SF2：含40％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含40％粗蛋白的粉状饲料:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝280:30:20:10:300(质量比)。
饵料SF3：含42％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、维生素C和水，含42％粗蛋白的粉状饲料:虾:维生素D3钙片:维生素C:水＝250:20:20:20:300(质量比)。
饵料SGRF1：煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、虾、多维元素片和水，煮熟蛋黄:现磨黄豆豆浆:虾:多维元素片:水＝300:200:30:10:750(质量比)。
饵料SGRF2：煮熟蛋黄、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水，煮熟蛋黄:虾:现磨黄豆豆浆:多维元素片:水＝250:30:250:10:750(质量比)。
饵料SGRF3：现磨黄豆豆浆、虾、含28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水，现磨黄豆豆浆:虾:含28％粗蛋白的粉状饲料:维生素C:多维元素片:水＝250:20:250:10:10:750(质量比)。
3.亲鱼来源
滇池金线鲃亲鱼系系2004年在金沙江水系云南省昆明市滇池流域采集获得，采用地笼捕获，共68尾，体长的平均值为13.6cm，体重的平均值为12.1g，犀角金线鲃亲本系2011年在南盘江水系云南省曲靖市罗平县采集获得，采用地笼捕获，共22尾，体长的平均值为10.8cm，体重平均值为10.9g。亲鱼装入长80cm、宽50cm塑料鱼苗袋冲氧后带回养殖基地。
4.亲鱼驯养
将野外采集来的亲鱼消毒后放入经消毒清洗的亲鱼培育池中，并在培育池内放置长30cm，直径15cm的黑色PVC管，水温20℃，流速10-20cm/s，溶解氧6.5mg/L，pH值7.0。每天10:00、16:00各投喂SF1饵料一次，驯养1周后，共死亡亲鱼3尾。
5.亲鱼强化培育
2020年1月16日09:00，选取形态正常、生长良好、无疾病的滇池金线鲃和犀角金线鲃雌雄亲鱼分别置于培育池中，每天投喂自制颗粒饲料两次，投喂量按饵料系数为3％～4％，饲料配方根据要求节律性调节，即在12月～次年3月，投喂饵料SF1，在4～7月，投喂饵料SF2，在8～11月，投喂饵料SF3。培育池中构建的养殖系统为滇池金线鲃和犀角金线鲃模拟了良好的生存条件，各种条件的刺激下，有利于野生滇池金线鲃和犀角金线鲃更快的适应人工养殖条件，同时，可促进亲鱼性成熟从而产卵。生殖季节，雌、雄均无珠星出现，用手触摸亦无明显的粗糙感，只是外观雌性因怀卵腹部膨大而圆，轻压腹部会有精子或卵子流出。
6.人工授精
2月18日16:00，选取形态正常、无疾病、性腺发育良好的滇池金线鲃和犀角金线鲃雌雄亲鱼分别作为母本和父本，即滇池金线鲃为母本×犀角金线鲃为父本，进行人工授精。擦掉鱼体上多余水分，一手握住鱼体背部，一手用拇指和食指沿着卵巢和精巢轮廓轻推鱼体腹部并挤出鱼卵与精液。挤出的鱼卵和精液，盛于干净的容器中，卵子和精子的数量比为1：1×105，即刻用鸡毛轻轻搅拌30s，再用渗透压300mOsm/L，温度22℃的水轻轻冲洗精卵混合物，边冲洗边用鸡毛沿着顺时针方向轻轻搅拌鱼卵精液混合物以去除多余精液。冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
7.鱼卵孵化
将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水面在鱼卵上方60cm，无光源直射，水温20℃，pH 7.5，溶解氧7.0～8.0mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒5天，第6天开始有鱼苗孵出，第9天孵化结束。
8.鱼苗饲养
鱼苗破膜后7天开始进食，每天用硝化细菌按20g/m2调节水质，进食期分阶段投喂不同饲料，其中，在鱼苗饲养阶段：进食期的第1～15天投喂浆状饵料SGRF1，每日投喂4次，投喂量均为10mL/m2。第16～30天投喂饵料SGRF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫投喂量为150万个/m2。第31～60天投喂饵料SGRF3，投喂量为12g/m2。开口60天后，按上述亲鱼培育饵料投喂，投喂量按饵料系数为4％，每次投喂量以在25min内吃完为宜。
将实施例1～2中从父本和母本亲鱼中收集的卵子和精子进行质量检测，其中，核偏位率为鱼卵放置于10％醋酸溶液后，发生核偏离的鱼卵数量占所测鱼卵总数的百分比；精子活力为精液激活后，运动精子的数量占所测精子总数的百分比。滇池金线鲃的卵核偏位率95％，滇池金线鲃精子活力93％，犀角金线鲃卵核偏位率90％，犀角金线鲃的精子活力85％。同时根据不同培育阶段的生长发育情况，分别统计受精率、孵化率、苗种存活率和畸形率。结果见表1。
表1实施例1～2两种杂交方法的培育结果
Figure BDA0003974992720000141
Figure BDA0003974992720000151
对比例1
一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法
1.构建养殖系统滇池金线鲃和犀角金线鲃养殖系统：
建立亲鱼培育池，培育池内的水温、水流强度及水质情况参数为，温度控制在18℃，流速控制在20cm/s，溶解氧控制在7.8mg/L，pH值控制在7.2。
2.饵料配制
饵料SF1：含45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含45％粗蛋白的粉状饲料:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝
250:50:10:8:300(质量比)。
饵料SF2：含40％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含40％粗蛋白的粉状饲料:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝280:30:20:10:300(质量比)。
饵料SF3：含42％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、维生素C和水，含42％粗蛋白的粉状饲料:虾:维生素D3钙片:维生素C:水＝250:20:20:20:300(质量比)。
饵料SGRF1：煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、虾、多维元素片和水，煮熟蛋黄:现磨黄豆豆浆:虾:多维元素片:水＝300:200:30:10:750(质量比)。
饵料SGRF2：煮熟蛋黄、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水，煮熟蛋黄:虾:现磨黄豆豆浆:多维元素片:水＝250:30:250:10:750(质量比)。
饵料SGRF3：现磨黄豆豆浆、虾、含28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水，现磨黄豆豆浆:虾:含28％粗蛋白的粉状饲料:维生素C:多维元素片:水＝250:20:250:10:10:750(质量比)。
3.亲鱼来源
同实施例1
4.亲鱼驯养
同实施例1
5.人工授精
2020年3月18日16:00，选取形态正常、无疾病、性腺发育良好的滇池金线鲃和犀角金线鲃雌雄亲鱼分别作为母本和父本，即滇池金线鲃为母本×犀角金线鲃为父本，进行人工授精。擦掉鱼体上多余水分，一手握住鱼体背部，一手用拇指和食指沿着卵巢和精巢轮廓轻推鱼体腹部并挤出鱼卵与精液。挤出的鱼卵和精液，盛于干净的容器中，卵子和精子的数量比为1：2×105，即刻用鸡毛轻轻搅拌30s，再用渗透压300mOsm/L，温度22℃的水轻轻冲洗精卵混合物，边冲洗边用鸡毛沿着顺时针方向轻轻搅拌鱼卵精液混合物以去除多余精液。冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
7.鱼卵孵化
同实施例1
8.鱼苗饲养
同实施例1
根据上述方案，受养殖系统和亲鱼培育方式的影响，滇池金线鲃和犀角金线鲃能产精产卵的亲本数量明显减少，且精卵质量不佳，主要体现在，滇池金线鲃卵核偏位率≤70％，精子活力≤75％，犀角金线鲃卵核偏位率≤60％，精子活力≤70％。杂交受精率较低，≤30％，未有鱼苗成功孵化出膜。
对比例2
一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法
1.构建养殖系统
同实施例1养殖系统。
2.饵料配制
种鱼饲料包括：111鲤种鱼饲料、含35％粗蛋白的粉状饲料、多维元素片和水，111鲤种鱼饲料:含35％粗蛋白的粉状饲料:多维元素片:水＝150:100:10:300(质量比)。
浆状饵料包括：煮熟蛋黄、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水，煮熟蛋黄:虾:现磨黄豆豆浆:多维元素片:水＝200:20:300:10:750(质量比)。
3.亲鱼来源
同实施例1亲鱼来源。
4.亲鱼驯养
同实施例1亲鱼驯养。
5.亲鱼强化培育
2020年1月16日09:00，选取形态正常、生长良好、无疾病的滇池金线鲃和犀角金线鲃雌雄亲鱼分别置于培育池中，每天投喂种鱼饲料两次，投喂量按饵料系数为3％。
6.人工授精
同实施例1人工授精方案。
7.鱼卵孵化
同实施例1鱼卵孵化方案。
根据上述方案，受食物营养的影响，滇池金线鲃和犀角金线鲃性腺发育不佳，能产精产卵的个体明显减少，即使有成熟的精卵产出，精卵质量也不佳，主要体现在，滇池金线鲃卵核偏位率≤80％，精子活力≤80％，犀角金线鲃卵核偏位率≤75％，精子活力≤70％。杂交受精率≤70％，孵化率≤60％，苗种存活率≤50％，畸形率≥20％。
表2对比例1～2两种杂交方法的培育结果
Figure BDA0003974992720000171
Figure BDA0003974992720000181
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将滇池金线鲃和犀角金线鲃分别进行亲鱼培育；
所述滇池金线鲃的亲鱼培育期间的环境参数如下：水温16～22℃，水流的流速8～20cm/s，水的溶解氧6.0～7.5mg/L，水的pH值7.0～7.5；
所述犀角金线鲃的亲鱼培育期间的环境参数如下：水温为16～22℃，水流的流速为10～20cm/s，水的溶解氧为6.0～7.5mg/L，水的pH值为7.0～7.2，保持水质清洁；培养环境保持黑暗、无噪音；
在滇池金线鲃和犀角金线鲃的亲鱼培育期间，每天投喂颗粒饲料两次，每次投喂量按饵料系数为3％～4％的比例添加，所述颗粒饲料包括含质量浓度40％～45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；所述质量浓度40％～45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的质量比为(250～280):(20～50)：(10～20):(8～20):300；
2)将性腺发育成熟的滇池金线鲃亲鱼和犀角金线鲃雌雄亲鱼分别收集精子和卵子，人工授精，得到精卵混合物；
3)将精卵混合物进行孵化，孵出的鱼苗进行饲养，得到滇池金线鲃和犀角金线鲃杂交种。
2.根据权利要求1所述滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，其特征在于，所述滇池金线鲃的亲鱼培育的环境参数按照以下要求进行节律性调节：
在12月～次年3月，水温16～20℃，水流的流速10～20cm/s，水的溶解氧7.0～8.0mg/L，水的pH值7.0～7.2；
在4～8月，水温18～22℃，水流的流速8～15cm/s，水的溶解氧7.0～7.5mg/L，水的pH值7.2～7.5；
在9～11月，水温16～20℃，水流的流速8～15cm/s，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值7.0～7.5。
3.根据权利要求1所述滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，其特征在于，所述犀角金线鲃的亲鱼培育的环境参数按照以下要求进行节律性调节：
在12月～次年3月，水温为16～20℃，水流的流速为15～20cm/s，水的
溶解氧为7.0～7.5mg/L，水的pH值为7.0～7.2；
在4～8月，水温为18～22℃，水流的流速为10～15cm/s，水的溶解氧为6.0～6.5mg/L，水的pH值为7.0～7.2；
在9～12月，水温为16～20℃，水的流速为10～15cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为7.0～7.2。
4.根据权利要求1所述滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，其特征在于，在滇池金线鲃和犀角金线鲃的亲鱼培育期间，所述颗粒饲料根据以下要求节律性调节：
在12月～次年3月，投喂饵料SF1，所述饵料SF1为质量比250:50:10:8:300的含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
在4～8月，投喂饵料SF2，所述饵料SF2为质量比280:30:20:10:300的含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
在9～11月，投喂饵料SF3，所述饵料SF3为质量比250:20:20:20:300含质量浓度42％粗蛋白的粉状饲料、虾、维生素D3钙片、维生素C和水的混合物。
5.根据权利要求1所述滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，其特征在于，所述人工授精包括滇池金线鲃为母本×犀角金线鲃为父本和/或滇池金线鲃为父本×犀角金线鲃为母本。
6.根据权利要求1所述滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，其特征在于，所述人工授精时，卵子和精子的数量比为(1～5)：(1～10)×105；
所述人工授精后，用渗透压280～300mOsm/L、温度18～20℃的生理盐水冲洗精卵混合物3～4次后，将精卵混合物泼洒在载体上，形成粘附有载体的精卵混合物。
7.根据权利要求1所述滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，其特征在于，所述孵化的条件为：水位1.2m，水面在受精卵上方60～80cm，无光源直射，水温18～20℃，水的pH值7.0～7.2，水的溶解氧7.0～8.0mg/L；在孵化期间，每天将受精卵置于高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒5天，第6天开始有鱼苗孵出，第9天孵化结束。
8.根据权利要求1所述滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，其特征在于，所述鱼苗破膜后7天开始投喂饲料。
9.根据权利要求8所述滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，其特征在于，所述饲料的投喂方法根据鱼苗不同生长时期进行调整：
进食的第1～15天投喂浆状饵料SGRF1，每日投喂4次，每次投喂量为8～10mL/m2，所述浆状饵料SGRF1为质量比300:200:30:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、虾、多维元素片和水的混合物；
第15～30天投喂饵料SGRF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，所述饵料SGRF2为质量比250:30:250:10:750的煮熟蛋黄、虾、黄豆豆浆、多维元素片和水的混合物；
第31～60天投喂饵料SGRF3，每日投喂2次，每次投喂量为10～12g/m2，所述饵料SGRF3为质量比250:20:250:10:10:750的现磨黄豆豆浆、虾、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物；
进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％～4％的量投加，每次投喂量在15～30min内吃完。
10.根据权利要求1～9任意一项所述滇池金线鲃和犀角金线鲃的杂交方法，其特征在于，在鱼苗饲养期间，每天用硝化细菌按15～20g/m2的量添加来调节水质。
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