CN115812645A - 一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，属于水产养殖技术领域。本发明提供的大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，包括亲鱼培育、人工授精、鱼卵孵化和鱼苗饲养，严格控制亲鱼培育环境参数和饲料种类，为大眼圆吻鲴和鲢模拟良好的生存条件，有利于野生大眼圆吻鲴和鲢较快适应人工养殖环境，同时避免催产剂使用实现人工环境下自然产精产卵，为人工杂交提供质量、数量俱佳的卵子精子,同时还限定孵化时的关键参数(包括孵化水温、水流速度、pH值、溶解氧以及受精卵消毒等)，为受精卵的顺利孵化提供适宜的环境条件。该方法为高档淡水水产养殖业培育出了一种便于人工规模养殖的杂交新品种。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法。
背景技术
大眼圆吻鲴(Distoechodon macrophthalmus)，隶属于鲤形目、鲤科、鲴亚科、圆吻鲴属，是程海特有种，曾占程海渔产量的30％，因水环境变化等原因，大眼圆吻鲴种群数量急剧下降，为保护和利用这一重要经济鱼类，中国科学院昆明动物研究所于2016年开始开展大眼圆吻鲴的保护和可持续利用研究。
鲢(Hypophthalmichthys molitrix)，隶属于鲤形目、鲤科、鲢亚科、鲢属，是我国水产养殖六大当家品种之一(青、草、鲢、鳙、鲤、鲫)，2021年年产量380余万吨，位居淡水养殖品种第二位，具有生长周期短、成活率高等特点。而大眼圆吻鲴与鲢远缘杂交后代较大眼圆吻鲴生长快、体型大、抗病力强，且较鲢肉质更细嫩，有效改善了大眼圆吻鲴和鲢的生产性能。然而经文献检索，未有大眼圆吻鲴和鲢杂交的相关报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，为远缘杂交育种提供新的研究素材。
本发明提供了一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，包括以下步骤：
将大眼圆吻鲴和鲢分别进行亲鱼培养；
大眼圆吻鲴的亲鱼培养的环境条件为：水温15～26℃，水流的流速5～20cm/s，水质透明度60-90cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值8.0～9.5；
鲢的亲鱼培养的环境条件为：水温16～28℃，水流的流速10～30cm/s，水质透明度20～40cm，水的溶解氧5.0～8.0mg/L，水的pH值6.5～7.0；
在大眼圆吻鲴和鲢的亲鱼培养期间，每天投喂颗粒饲料两次，每次投喂量按饵料系数为3％～5％的比例添加，所述颗粒饲料包括含质量浓度20％～35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物；所述含质量浓度20％～35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的质量比为(200～250):(10～20):(20～30)：(10～20):300；
将性腺发育成熟的大眼圆吻鲴亲鱼和鲢雌雄亲鱼分别收集精子和卵子，人工授精，将得到的受精卵孵化，孵出的鱼苗进行饲养，得到大眼圆吻鲴和鲢杂交种。
优选的，所述大眼圆吻鲴的亲鱼培养的环境条件按照以下要求进行节律性调节：
在1～3月，水温15～22℃，水流的流速10～15cm/s，水质透明度70cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值8.5～9.0；
在4～7月，水温19～26℃，水流的流速15～20cm/s，水质透明度80cm，水的溶解氧6.5～7.0mg/L，水的pH值8.0～9.0；
在8～12月，水温16～24℃，水流的流速5～10cm/s，水质透明度60cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值8.0～9.5。
优选的，所述鲢的亲鱼培养的环境条件按照以下要求进行节律性调节：
在1～3月，水温16～24℃，水流的流速15～25cm/s，水质透明度20～30cm，水的溶解氧5.5～7.5mg/L，水的pH值6.8～7.0；
在4～7月，水温20～26℃，水流的流速25～40cm/s，水质透明度20～30cm，水的溶解氧7.0～8.0mg/L，水的pH值6.8～7.0；
在8～12月，水温18～24℃，水流的流速40～45cm/s，水质透明度20～40cm，水的溶解氧5.0～7.5mg/L，水的pH值6.5～7.0。
优选的，在大眼圆吻鲴和鲢的亲鱼培养期间，所述颗粒饲料根据以下要求节律性调节：
在1～3月，投喂饵料DMF1，所述饵料DMF1为质量比200:10:20:20:300的含质量浓度30％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物；
在4～7月，投喂饵料DMF2，所述饵料DMF2为质量比250:20:30:20:300的含质量浓度35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物；
在8～12月，投喂饵料DMF3，所述饵料DMF3为质量比220:10:20:10:300含质量浓度20％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
优选的，所述人工授精包括大眼圆吻鲴为母本×鲢为父本和大眼圆吻鲴为父本×鲢为母本。
优选的，所述人工授精时，卵子和精子的数量比为(1～5)：(1～5)×104；
在所述人工授精后，用生理盐水冲洗受精卵1～2次；所述生理盐水的渗透压为280～320mOsm/L，温度为24～26℃。
优选的，所述孵化池的孵化参数如下：水位1.2m，水流的流速20～30cm/s，无光源直射，水温24～26℃，水的pH值6.8～7.5，水的溶解氧7.0～8.0mg/L；
在孵化期间，每天将受精卵置于高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒2天，第3天开始有鱼苗孵出，第4天孵化结束；
优选的，所述鱼苗破膜后3天开始投喂饲料。
优选的，所述饲料的投喂方法根据鱼苗不同生长时期进行调整：
进食的第1～10天投喂浆状饵料DHF1，每日投喂4次，每次投喂量为8～10mL/m2，所述浆状饵料DHF1为质量比100:100:20:10:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物；
第11～20天投喂饵料DHF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，所述饵料DHF2为质量比200:200:30:15:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物；
第21～60天投喂饵料DHF3，每日投喂2次，每次投喂量为10～12g/m2，所述饵料DHF3为质量比250:20:250:10:20:750的现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物；
进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％～4％的量投喂，每次投喂量在15～30min内吃完。
优选的，在鱼苗饲养期间，每天用硝化细菌按15～20g/m2的量来调节水质。
本发明提供了一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，本发明对大眼圆吻鲴亲鱼和鲢亲鱼进行亲鱼培养，严格控制培育过程的环境参数和饲喂用人工颗粒饲料种类，为大眼圆吻鲴和鲢模拟了良好的生存条件，各种条件的刺激下，有利于野生大眼圆吻鲴和野生鲢更快的适应人工养殖条件，同时，可促进亲鱼性成熟从而实现在人工环境下自然产精产卵，为后续人工杂交提供质量和数量俱佳的卵子精子；同时本发明将受精卵进行孵化出鱼苗。亲鱼培养、人工授精和人工孵育三个步骤共同干预大眼圆吻鲴和鲢杂交过程，打破亚科水平的物种生殖隔离，创造性地培育得到兼具两种亲本各自特征的杂交鱼种类。
同时，本发明在亲鱼培育过程中通过模拟两种鱼的各自生存环境，在不使用催产素的情况下，仅在人工环境条件下实现自然产精产卵的效果。因此，本发明提供的方法降低了生产成本、使操作更加简便易行。
进一步的，本发明具体限定了根据不同季节节律性调整亲鱼培育的各自参数和饲料的种类，有利于更加精细模拟自然环境，同时减少野生鱼类对人工环境的应激，利于其对人工环境的适应性，避免因环境的改变造成鱼类的生长和生殖方面的紊乱，使产精产卵的数量和质量更佳。
进一步的，本发明具体限定了在鱼苗饲养阶段根据不同季节节律性调整饲料的种类和投喂方法、投喂量等，该方法是根据不同鱼苗不同生长时期的特点设置的，有利于鱼苗生长，同时提高鱼苗的成活率和减少鱼苗的畸形率。
具体实施方式
本发明提供了一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，包括以下步骤：
将大眼圆吻鲴和鲢分别进行亲鱼培养；
大眼圆吻鲴的亲鱼培养的环境条件为：水温15～26℃，水流的流速5～20cm/s，水质透明度60-90cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值8.0～9.5；
鲢的亲鱼培养的环境条件为：水温16～28℃，水流的流速10～30cm/s，水质透明度20～40cm，水的溶解氧5.0～8.0mg/L，水的pH值6.5～7.0；
在大眼圆吻鲴和鲢的亲鱼培养期间，每天投喂颗粒饲料两次，每次投喂量按饵料系数为3％～5％的比例添加，所述颗粒饲料包括含质量浓度20％～35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物；所述含质量浓度20％～35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的质量比为(200～250):(10～20):(20～30)：(10～20):300；
将性腺发育成熟的大眼圆吻鲴亲鱼和鲢雌雄亲鱼分别收集精子和卵子，人工授精，将得到的受精卵孵化，孵出的鱼苗进行饲养，得到大眼圆吻鲴和鲢杂交种。
本发明将大眼圆吻鲴和鲢分别进行亲鱼培养。
本发明对所述大眼圆吻鲴和鲢的来源为野生型大眼圆吻鲴和鲢。本发明对野生型大眼圆吻鲴和鲢的捕捞地点不做具体限制，在本领域所熟知的两种鱼的野生生存区捕获即可。本发明对大眼圆吻鲴和鲢的品种不做具体限定，采用本领域常见的大眼圆吻鲴和鲢品种即可。在本发明实施例中，大眼圆吻鲴亲鱼系2018年在金沙江流域程海采集获得，鲢亲鱼系2019年在云南省糯扎渡采集获得。
在本发明中，所述大眼圆吻鲴的亲鱼培养的环境条件优选按照以下要求进行节律性调节：在1～3月，水温15～22℃，水流的流速10～15cm/s，水质透明度60～80cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值8.5～9.0；在4～7月，水温19～26℃，水流的流速15～20cm/s，水质透明度80～90cm，水的溶解氧6.5～7.0mg/L，水的pH值8.0～9.0；在8～12月，水温16～24℃，水流的流速5～10cm/s，水质透明度60～90cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值8.0～9.5；更优选为在1～3月，水温17～20℃，水流的流速11～14cm/s，水质透明度60～70cm，水的溶解氧6.2～6.8mg/L，水的pH值8.6～8.9；在4～7月，水温21～24℃，水流的流速16～18cm/s，水质透明度80～85cm，水的溶解氧6.6～6.9mg/L，水的pH值8.2～8.8；在8～12月，水温18～22℃，水流的流速7～9cm/s，水质透明度70～80cm，水的溶解氧6.4～6.7mg/L，水的pH值8.4～9.2；最优选为在1～3月，水温18℃，水流的流速12cm/s，水质透明度70cm，水的溶解氧6.5mg/L，水的pH值8.7；在4～7月，水温23℃，水流的流速17cm/s，水质透明度80cm，水的溶解氧6.8mg/L，水的pH值8.5；在8～12月，水温20℃，水流的流速8cm/s，水质透明度80cm，水的溶解氧6.57mg/L，水的pH值8.7。
在本发明中，所述鲢的亲鱼培养的环境条件优选按照以下要求进行节律性调节：在1～3月，水温16～24℃，水流的流速15～25cm/s，水质透明度20～30cm，水的溶解氧5.5～7.5mg/L，水的pH值6.8～7.0；在4～7月，水温20～26℃，水流的流速25～40cm/s，水质透明度20～30cm，水的溶解氧7.0～8.0mg/L，水的pH值6.8～7.0；在8～12月，水温18～24℃，水流的流速40～45cm/s，水质透明度20～40cm，水的溶解氧5.0～7.5mg/L，水的pH值6.5～7.0；更优选为在1～3月，水温18～22℃，水流的流速17～23cm/s，水质透明度23～27cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值6.9；在4～7月，水温21～25℃，水流的流速28～37cm/s，水质透明度23～27cm，水的溶解氧7.2～7.8mg/L，水的pH值6.9；在8～12月，水温20～22℃，水流的流速41～43cm/s，水质透明度25～35cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值6.6～6.9，最优选为在1～3月，水温20℃，水流的流速20cm/s，水质透明度25cm，水的溶解氧6.5mg/L，水的pH值6.9；在4～7月，水温23℃，水流的流速32cm/s，水质透明度25cm，水的溶解氧7.5mg/L，水的pH值6.9；在8～12月，水温21℃，水流的流速42cm/s，水质透明度30cm，水的溶解氧6.5mg/L，水的pH值6.8。亲鱼培养条件是根据大眼圆吻鲴和鲢本身的生物学特性决定的。
在本发明中，在大眼圆吻鲴和鲢的亲鱼培养期间，所述颗粒饲料优选根据以下要求节律性调节：在1～3月，投喂饵料DMF1，所述饵料DMF1为质量比200:10:20:20:300的含质量浓度30％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物；在4～7月，投喂饵料DMF2，所述饵料DMF2为质量比250:20:30:20:300的含质量浓度35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物；在8～12月，投喂饵料DMF3，所述饵料DMF3为质量比220:10:20:10:300含质量浓度20％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。不同季节对应性腺发育的不同阶段，所需营养也就不同。一般情况下，鱼两岁性成熟，性成熟后，每年产卵一次。
亲鱼培养后，本发明将性腺发育成熟的大眼圆吻鲴亲鱼和鲢雌雄亲鱼分别收集精子和卵子，人工授精，将得到的受精卵孵化，孵出的鱼苗进行饲养，得到大眼圆吻鲴和鲢杂交种。
在本发明中，性腺发育成熟的大眼圆吻鲴亲鱼和鲢亲鱼雌雄体色并无显著区别，只是外观雌性因怀卵腹部膨大而圆，轻压腹部会有精子或卵子流出。所述卵子和精子的收集方法优选如下：擦掉鱼体上多余水分，一手握住鱼体背部，一手用拇指和食指沿着卵巢和精巢轮廓轻推鱼体腹部并挤出鱼卵与精液。挤出的鱼卵和精液，盛于干净的容器中。
在本发明中，所述人工授精优选包括大眼圆吻鲴为母本×鲢为父本和/或大眼圆吻鲴为父本×鲢为母本。所述人工授精时，卵子和精子的数量比优选为(1～5)：(1～5)×104；更优选为1：1×104。在所述人工授精后，用生理盐水冲洗受精卵1～2次；所述生理盐水的渗透压为280～320mOsm/L，温度为24～26℃；更优选的，所述生理盐水的渗透压为300mOsm/L，温度为25℃。所述生理盐水冲洗受精卵的作用是在收集精卵的过程中难免会混入尿、屎等杂质，冲洗掉，以免污染受精卵。
在本发明中，所述孵化的参数优选如下：水位1.2m，水流的流速20～30cm/s，无光源直射，水温24～26℃，水的pH值6.8～7.5，水的溶解氧7.0～8.0mg/L；更优选为水流的流速25cm/s，水温25℃，水的pH值7.2，水的溶解氧7.5mg/L。
在本发明中，在孵化期间，每天将受精卵置于高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒2天，第3天开始有鱼苗孵出，第4天孵化结束。
在本发明中，所述鱼苗破膜后3天优选开始投喂饲料。所述饲料的投喂方法优选根据鱼苗不同生长时期进行调整：进食的第1～10天投喂浆状饵料DHF1，每日投喂4次，每次投喂量为8～10mL/m2，所述浆状饵料DHF1为质量比100:100:20:10:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物；第11～20天投喂饵料DHF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，所述饵料DHF2为质量比200:200:30:15:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物；第21～60天投喂饵料DHF3，每日投喂2次，每次投喂量为10～12g/m2，所述饵料DHF3为质量比250:20:250:10:20:750的现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物；进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％～4％的量投喂，每次投喂量在15～30min内吃完。
一般幼鱼饵料都是鸡蛋蛋黄和豆浆，而在本发明中，新加了螺旋藻、多维元素片和维生素C，该鱼偏素食性，所以加了螺旋藻，多维元素片和维生素C可提高免疫力。
在本发明中，在鱼苗饲养期间，优选每天用硝化细菌按15～20g/m2的量来调节水质。所述硝化细菌的添加量优选为16g/m2。本发明对所述硝化细菌的来源不做具体限定，采用本领域所熟知的硝化细菌的来源即可。
下面结合实施例对本发明提供的一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法
1.构建养殖系统
大眼圆吻鲴养殖系统：
建立亲鱼培育池，培育池内的水温、水流强度及水质情况参数均可根据季节节律性进行调节，即在1～3月，水温15℃，水流的流速10cm/s，水质透明度70cm，水的溶解氧6.0mg/L，水的pH值8.5；在4～7月，水温19℃，水流的流速15cm/s，水质透明度80cm，水的溶解氧6.5mg/L，水的pH值8.0；在8～12月，水温16℃，水流的流速5cm/s，水质透明度60cm，水的溶解氧6.0mg/L，水的pH值8.0。
鲢养殖系统：
建立亲鱼培育池，培育池内的光照、水温、水流强度及水质情况参数均可根据季节节律性进行调节，即在1～3月，水温16℃，水流的流速15cm/s，水质透明度20cm，水的溶解氧5.5mg/L，水的pH值6.8；
在4～7月，水温20℃，水流的流速25cm/s，水质透明度20cm，水的溶解氧7.0mg/L，水的pH值6.8；
在8～12月，水温18℃，水流的流速40cm/s，水质透明度20cm，水的溶解氧5.0mg/L，水的pH值6.5。
2.饵料配制
饵料DMF1：含质量比200:10:20:20:300的含质量浓度30％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
饵料DMF2：为质量比250:20:30:20:300的含质量浓度35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
饵料DMF3：质量比220:10:20:10:300含质量浓度20％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
饵料DHF1：质量比100:100:20:10:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物。
饵料DHF2：质量比200:200:30:15:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物。
饵料DHF3：质量比250:20:250:10:20:750的现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物。
3.亲鱼来源
大眼圆吻鲴亲鱼系系2018年在金沙江流域程海采集获得，共180尾，体长的平均值为16.8cm，体重的平均值为59.5g，鲢亲本系2019年在云南省糯扎渡采集获得，共190尾，体长的平均值为26.6cm，体重平均值为2.38kg。亲鱼装入水箱冲氧后带回养殖基地。
4.亲鱼驯养
将野外采集来的亲鱼消毒后放入经消毒清洗的亲鱼培育池中暂时养殖，并对培育池调节环境参数，水温20℃，水流的流速15cm/s，水质透明度75cm，水的溶解氧6.5mg/L，水的pH值8.7。每天10:00、16:00各投喂DMF1饵料一次，驯养1周后，共死亡亲鱼5尾，其中大眼圆吻鲴3尾，鲢2尾。
5.亲鱼强化培育
2020年12月3日09:00，选取形态正常、生长良好、无疾病的大眼圆吻鲴和鲢雌雄亲鱼分别置于培育池中，每天投喂自制颗粒饲料两次，投喂量按饵料系数为3％，饲料配方根据要求节律性调节，即在12月～次年3月，投喂饵料DMF1，在4～7月，投喂饵料DMF2，在8～11月，投喂饵料DMF3。培育池中构建的养殖系统为大眼圆吻鲴和鲢模拟了良好的生存条件，各种条件的刺激下，有利于野生大眼圆吻鲴和鲢更快的适应人工养殖条件，同时，可促进亲鱼性成熟从而产卵。生殖季节，雌、雄均无珠星出现，用手触摸亦无明显的粗糙感，只是外观雌性因怀卵腹部膨大而圆，轻压腹部会有精子或卵子流出。
人工授精2021年5月12日16:00，选取形态正常、无疾病、性腺发育良好的大眼圆吻鲴和鲢雌雄亲鱼分别作为父本和母本，即大眼圆吻鲴为父本×鲢为母本，进行人工授精。擦掉鱼体上多余水分，一手握住鱼体背部，一手用拇指和食指沿着卵巢和精巢轮廓轻推鱼体腹部并挤出鱼卵与精液。挤出的鱼卵和精液，盛于干净的容器中，卵子和精子的数量比为1：1×104，即刻用鸡毛轻轻搅拌30s，再用渗透压300mOsm/L，温度25℃的水轻轻冲洗精卵混合物，边冲洗边用鸡毛沿着顺时针方向轻轻搅拌鱼卵精液混合物以去除多余精液。冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
6.鱼卵孵化将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水流的流速20cm/s，无光源直射，水温25℃，pH 7.2，溶解氧7.5mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒2天，第3天开始有鱼苗孵出，第4天孵化结束。
7.鱼苗饲养
鱼苗破膜后3天开始投喂饲料。饲料的投喂方法根据鱼苗不同生长时期进行调整：进食的第1～10天投喂浆状饵料DHF1，每日投喂4次，每次投喂量为8mL/m2；第11～20天投喂饵料DHF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，所述饵料DHF2投喂量为8g/m2；第21～60天投喂饵料DHF3，每日投喂2次，每次投喂量为10g/m2；进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％的量投喂，每次投喂量在15～30min内吃完。在鱼苗饲养期间，每天用硝化细菌按15g/m2的量添加来调节水质。
实施例2
一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法
1.构建养殖系统
大眼圆吻鲴养殖系统：
建立亲鱼培育池，培育池内的水温、水流强度及水质情况参数均可根据季节节律性进行调节，即在1～3月，水温22℃，水流的流速15cm/s，水的溶解氧7.0mg/L，水的pH值9.0；在4～7月，水温26℃，水流的流速20cm/s，水的溶解氧7.0mg/L，水的pH值9.0；在8～12月，水温24℃，水流的流速10cm/s，水的溶解氧7.0mg/L，水的pH值9.5。
鲢养殖系统：
建立亲鱼培育池，培育池内的光照、水温、水流强度及水质情况参数均可根据季节节律性进行调节，即在1～3月，水温24℃，水流的流速25cm/s，水质透明度30cm，水的溶解氧7.5mg/L，水的pH值7.0；
在4～7月，水温26℃，水流的流速40cm/s，水质透明度30cm，水的溶解氧8.0mg/L，水的pH值7.0；
在8～12月，水温24℃，水流的流速45cm/s，水质透明度40cm，水的溶解氧7.5mg/L，水的pH值7.0。
2.饵料配制
饵料DMF1：含质量比200:10:20:20:300的含质量浓度30％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
饵料DMF2：为质量比250:20:30:20:300的含质量浓度35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
饵料DMF3：质量比220:10:20:10:300含质量浓度20％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
饵料DHF1：质量比100:100:20:10:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物。
饵料DHF2：质量比200:200:30:15:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物。
饵料DHF3：质量比250:20:250:10:20:750的现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物。
3.亲鱼来源
同实施例1
4.亲鱼强化培育
2021年3月15日09:00，选取形态正常、生长良好、无疾病的大眼圆吻鲴和鲢雌雄亲鱼分别置于培育池中，每天投喂自制颗粒饲料两次，投喂量按饵料系数为3％，饲料配方根据要求节律性调节，即在12月～次年3月，投喂饵料DMF1，在4～7月，投喂饵料DMF2，在8～11月，投喂饵料DMF3。培育池中构建的养殖系统为大眼圆吻鲴和鲢模拟了良好的生存条件，各种条件的刺激下，有利于野生大眼圆吻鲴和鲢更快的适应人工养殖条件，同时，可促进亲鱼性成熟从而产卵。生殖季节，雌、雄均无珠星出现，用手触摸亦无明显的粗糙感，只是外观雌性因怀卵腹部膨大而圆，轻压腹部会有精子或卵子流出。
5.人工授精
6月10日16:00，选取形态正常、无疾病、性腺发育良好的大眼圆吻鲴和鲢雌雄亲鱼分别作为母本和父本，即大眼圆吻鲴为母本×鲢为父本，进行人工授精。擦掉鱼体上多余水分，一手握住鱼体背部，一手用拇指和食指沿着卵巢和精巢轮廓轻推鱼体腹部并挤出鱼卵与精液。挤出的鱼卵和精液，盛于干净的容器中，卵子和精子的数量比为1：1×104，即刻用鸡毛轻轻搅拌30s，再用渗透压300mOsm/L，温度25℃的水轻轻冲洗精卵混合物，边冲洗边用鸡毛沿着顺时针方向轻轻搅拌鱼卵精液混合物以去除多余精液。冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
6.鱼卵孵化
将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水流的流速30cm/s，无光源直射，水温26℃，pH 7.2，溶解氧7.5mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒2天，第3天开始有鱼苗孵出，第4天孵化结束。
7.鱼苗饲养
鱼苗破膜后3天开始投喂饲料。饲料的投喂方法根据鱼苗不同生长时期进行调整：进食的第1～10天投喂浆状饵料DHF1，每日投喂4次，每次投喂量为8mL/m2，所述浆状饵料DHF1为质量比100:100:20:10:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物；第11～20天投喂饵料DHF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，所述饵料DHF2为质量比200:200:30:15:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物；第21～60天投喂饵料DHF3，每日投喂2次，每次投喂量为12g/m2，所述饵料DHF3为质量比250:20:250:10:20:750的现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物；进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数4％的量投喂，每次投喂量在15～30min内吃完。在鱼苗饲养期间，每天用硝化细菌按15～20g/m2的量添加来调节水质。
将实施例1～2中从父本和母本亲鱼中收集的卵子和精子进行质量检测，其中，核偏位率为鱼卵放置于10％醋酸溶液后，发生核偏离的鱼卵数量占所测鱼卵总数的百分比；精子活力为精液激活后，运动精子的数量占所测精子总数的百分比。大眼圆吻鲴的卵核偏位率85％～95％，大眼圆吻鲴精子活力85％～93％，鲢卵核偏位率8％～90％，鲢的精子活力85％～95％。同时根据不同培育阶段的生长发育情况，分别统计受精率、孵化率、苗种存活率和畸形率。结果见表1。
表1实施例1～2两种杂交方法的培育结果
1.构建养殖系统
建立亲鱼培育池，培育池内的水温、水流强度及水质情况参数为：水温20℃，水流的流速10cm/s，水质透明度50cm，水的溶解氧6.0mg/L，水的pH值8.5。
2.饵料配制
种鱼饲料：含30％粗蛋白的颗粒饲料。
饵料DHF1：质量比100:100:20:10:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物。
饵料DHF2：质量比200:200:30:15:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物。
饵料DHF3：质量比250:20:250:10:20:750的现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物。
3.亲鱼来源
同实施例1
4.亲鱼培育
2020年12月25日09:00，选取形态正常、生长良好、无疾病的大眼圆吻鲴和鲢雌雄亲鱼分别置于培育池中，每天投喂种鱼颗粒饲料两次，投喂量按饵料系数为3％。
5.人工授精
2021年5月26日16:00，选取形态正常、无疾病、性腺发育良好的大眼圆吻鲴和鲢雌雄亲鱼分别作为父本和母本，即大眼圆吻鲴为父本×鲢为母本，进行人工授精。擦掉鱼体上多余水分，一手握住鱼体背部，一手用拇指和食指沿着卵巢和精巢轮廓轻推鱼体腹部并挤出鱼卵与精液。挤出的鱼卵和精液，盛于干净的容器中，卵子和精子的数量比为1：1×104，即刻用鸡毛轻轻搅拌30s，再用渗透压300mOsm/L，温度25℃的水轻轻冲洗精卵混合物，边冲洗边用鸡毛沿着顺时针方向轻轻搅拌鱼卵精液混合物以去除多余精液。冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
6.鱼卵孵化
将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水流的流速20cm/s，无光源直射，水温25℃，pH 7.2，溶解氧7.5mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒2天，第3天开始有鱼苗孵出，第5天孵化结束。
7.鱼苗饲养
鱼苗破膜后3天开始投喂饲料。饲料的投喂方法根据鱼苗不同生长时期进行调整：进食的第1～10天投喂浆状饵料DHF1，每日投喂4次，每次投喂量为8mL/m2；第11～20天投喂饵料DHF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，DHF2投喂量为8g/m2；第21～60天投喂饵料DHF3，每日投喂2次，每次投喂量为10g/m2；进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％的量投喂，每次投喂量在15～30min内吃完。在鱼苗饲养期间，每天用硝化细菌按15g/m2的量添加来调节水质。
根据上述方案，因养殖系统未及时根据大眼圆吻鲴和鲢性腺发育情况及时调整，大眼圆吻鲴和鲢性腺发育良好的个体较少，尤其是鲢，不能自然产卵产精或自然产卵产精的精卵质量不佳，其中，大眼圆吻鲴卵核偏位率＜70％，大眼圆吻鲴精子活力＜75％，鲢卵核偏位率＜60％，鲢精子活力＜60％。杂交受精率＜60％，孵化率＜40％，苗种存活率＜50％，畸形率＞25％。
对比例2
1.构建养殖系统
建立亲鱼培育池，培育池内的水温、水流强度及水质情况参数为：水温20℃，水流的流速15cm/s，水质透明度70cm，水的溶解氧6.0mg/L，水的pH值7.2。
2.饵料配制
种鱼饲料：含30％粗蛋白的颗粒饲料。
饵料DHF1：质量比100:100:20:10:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物。
饵料DHF2：质量比200:200:30:15:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物。
饵料DHF3：质量比250:20:250:10:20:750的现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物。
3.亲鱼来源
同实施例1
4.亲鱼培育
2021年3月31日09:00，选取形态正常、生长良好、无疾病的大眼圆吻鲴和鲢雌雄亲鱼分别置于培育池中，每天投喂种鱼颗粒饲料两次，投喂量按饵料系数为3％。
5.人工授精
2021年5月23日16:00，选取形态正常、无疾病、性腺发育良好的大眼圆吻鲴和鲢雌雄亲鱼分别作为父本和母本，即大眼圆吻鲴为父本×鲢为母本，进行人工授精。擦掉鱼体上多余水分，一手握住鱼体背部，一手用拇指和食指沿着卵巢和精巢轮廓轻推鱼体腹部并挤出鱼卵与精液。挤出的鱼卵和精液，盛于干净的容器中，卵子和精子的数量比为1：1×104，即刻用鸡毛轻轻搅拌30s，再用渗透压300mOsm/L，温度25℃的水轻轻冲洗精卵混合物，边冲洗边用鸡毛沿着顺时针方向轻轻搅拌鱼卵精液混合物以去除多余精液。冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
6.鱼卵孵化
将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水流的流速20cm/s，无光源直射，水温25℃，pH7.2，溶解氧7.5mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒2天，第3天开始有鱼苗孵出，第4天孵化结束。
7.鱼苗饲养
鱼苗破膜后3天开始投喂饲料。饲料的投喂方法根据鱼苗不同生长时期进行调整：进食的第1～10天投喂浆状饵料DHF1，每日投喂4次，每次投喂量为8mL/m2；第11～20天投喂饵料DHF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，所述饵料DHF2投喂量为8g/m2；第21～60天投喂饵料DHF3，每日投喂2次，每次投喂量为10g/m2；进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％的量投喂，每次投喂量在15～30min内吃完。在鱼苗饲养期间，每天用硝化细菌按15g/m2的量添加来调节水质。
根据上述方案，因养殖系统未及时根据大眼圆吻鲴和鲢性腺发育情况及时调整，大眼圆吻鲴和鲢性腺发育良好的个体较少，尤其是大眼圆吻鲴，不能自然产卵产精或自然产卵产精的精卵质量不佳，其中，大眼圆吻鲴卵核偏位率＜50％，大眼圆吻鲴精子活力＜60％，鲢卵核偏位率＜60％，鲢精子活力＜70％。杂交受精率＜60％，孵化率＜40％，苗种存活率＜50％，畸形率＞25％。
对比例3
1.构建养殖系统
同实施例1
2.饵料配制
饵料DMF1：含质量比200:10:20:20:300的含质量浓度30％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
饵料DMF2：为质量比250:20:30:20:300的含质量浓度35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
饵料DMF3：质量比220:10:20:10:300含质量浓度20％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
3.亲鱼来源
同实施例1
4.亲鱼培育
选取形态正常、生长良好、无疾病的大眼圆吻鲴和鲢雌雄亲鱼分别置于培育池中，每天投喂自制颗粒饲料两次，投喂量按饵料系数为3％，饲料配方根据要求节律性调节，即在12月～次年3月，投喂饵料DMF1，在4～7月，投喂饵料DMF2，在8～11月，投喂饵料DMF3。
5.人工授精
选取形态正常、无疾病、性腺发育良好的大眼圆吻鲴和鲢雌雄亲鱼分别作为母本和父本，即大眼圆吻鲴为母本×鲢为父本，进行人工授精。擦掉鱼体上多余水分，一手握住鱼体背部，一手用拇指和食指沿着卵巢和精巢轮廓轻推鱼体腹部并挤出鱼卵与精液。挤出的鱼卵和精液，盛于干净的容器中，卵子和精子的数量比为1：1×104，即刻用鸡毛轻轻搅拌30s，再用渗透压300mOsm/L，温度25℃的水轻轻冲洗精卵混合物，边冲洗边用鸡毛沿着顺时针方向轻轻搅拌鱼卵精液混合物以去除多余精液。冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
6.鱼卵孵化
将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水流的流速30cm/s，无光源直射，水温26℃，pH 7.2，溶解氧7.5mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒2天，第3天开始有鱼苗孵出，第4天孵化结束。
7.鱼苗饲养
鱼苗破膜后3天开始投喂饲料。饲料的投喂方法根据鱼苗不同生长时期进行调整：进食的第1～60天投喂浆状饵料，每日投喂4次，每次投喂量为8mL/m2，浆状饵料为质量比250:250:750的现磨黄豆豆浆、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料和水的混合物；进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％的量投喂，每次投喂量在15～30min内吃完。在鱼苗饲养期间，每天用硝化细菌按20g/m2的量添加来调节水质。
根据上述方案，因鱼苗饲养阶段未根据鱼苗生长情况及时调整适口饵料，虽然大眼圆吻鲴和鲢性腺发育和精卵质量尚可，受精率和孵化率也均在80％以上，但孵化后，苗种存活率＜50％，畸形率＞40％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，其特征在于，包括以下步骤：
将大眼圆吻鲴和鲢分别进行亲鱼培养；
大眼圆吻鲴的亲鱼培养的环境条件为：水温15～26℃，水流的流速5～20cm/s，水质透明度60-90cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值8.0～9.5；
鲢的亲鱼培养的环境条件为：水温16～28℃，水流的流速10～30cm/s，水质透明度20～40cm，水的溶解氧5.0～8.0mg/L，水的pH值6.5～7.0；
在大眼圆吻鲴和鲢的亲鱼培养期间，每天投喂颗粒饲料两次，每次投喂量按饵料系数为3％～5％的比例添加，所述颗粒饲料包括含质量浓度20％～35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物；所述含质量浓度20％～35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的质量比为(200～250):(10～20):(20～30)：(10～20):300；
将性腺发育成熟的大眼圆吻鲴亲鱼和鲢雌雄亲鱼分别收集精子和卵子，人工授精，将得到的受精卵孵化，孵出的鱼苗进行饲养，得到大眼圆吻鲴和鲢杂交种。
2.根据权利要求1所述大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，其特征在于，所述大眼圆吻鲴的亲鱼培养的环境条件按照以下要求进行节律性调节：
在1～3月，水温15～22℃，水流的流速10～15cm/s，水质透明度70cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值8.5～9.0；
在4～7月，水温19～26℃，水流的流速15～20cm/s，水质透明度80cm，水的溶解氧6.5～7.0mg/L，水的pH值8.0～9.0；
在8～12月，水温16～24℃，水流的流速5～10cm/s，水质透明度60cm，水的溶解氧6.0～7.0mg/L，水的pH值8.0～9.5。
3.根据权利要求1所述大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，其特征在于，所述鲢的亲鱼培养的环境条件按照以下要求进行节律性调节：
在1～3月，水温16～24℃，水流的流速15～25cm/s，水质透明度20～30cm，水的溶解氧5.5～7.5mg/L，水的pH值6.8～7.0；
在4～7月，水温20～26℃，水流的流速25～40cm/s，水质透明度20～30cm，水的溶解氧7.0～8.0mg/L，水的pH值6.8～7.0；
在8～12月，水温18～24℃，水流的流速40～45cm/s，水质透明度20～40cm，水的溶解氧5.0～7.5mg/L，水的pH值6.5～7.0。
4.根据权利要求1所述大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，其特征在于，在大眼圆吻鲴和鲢的亲鱼培养期间，所述颗粒饲料根据以下要求节律性调节：
在1～3月，投喂饵料DMF1，所述饵料DMF1为质量比200:10:20:20:300的含质量浓度30％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物；
在4～7月，投喂饵料DMF2，所述饵料DMF2为质量比250:20:30:20:300的含质量浓度35％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物；
在8～12月，投喂饵料DMF3，所述饵料DMF3为质量比220:10:20:10:300含质量浓度20％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、螺旋藻粉、多维元素片和水的混合物。
5.根据权利要求1所述大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，其特征在于，所述人工授精包括大眼圆吻鲴为母本×鲢为父本和大眼圆吻鲴为父本×鲢为母本。
6.根据权利要求1所述大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，其特征在于，所述人工授精时，卵子和精子的数量比为(1～5)：(1～5)×104；
在所述人工授精后，用生理盐水冲洗受精卵1～2次；所述生理盐水的渗透压为280～320mOsm/L，温度为24～26℃。
7.根据权利要求1所述大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，其特征在于，所述孵化池的孵化参数如下：水位1.2m，水流的流速20～30cm/s，无光源直射，水温24～26℃，水的pH值6.8～7.5，水的溶解氧7.0～8.0mg/L；
在孵化期间，每天将受精卵置于高锰酸钾溶液中消毒15min，连续消毒2天，第3天开始有鱼苗孵出，第4天孵化结束。
8.根据权利要求1～7任意一项所述大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，其特征在于，所述鱼苗破膜后3天开始投喂饲料。
9.根据权利要求8所述大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，其特征在于，所述饲料的投喂方法根据鱼苗不同生长时期进行调整：
进食的第1～10天投喂浆状饵料DHF1，每日投喂4次，每次投喂量为8～10mL/m2，所述浆状饵料DHF1为质量比100:100:20:10:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物；
第11～20天投喂饵料DHF2和轮虫，每日投喂3次，轮虫的每次投喂量为150万个/m2，所述饵料DHF2为质量比200:200:30:15:10:750的煮熟蛋黄、现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、维生素C、多维元素片和水的混合物；
第21～60天投喂饵料DHF3，每日投喂2次，每次投喂量为10～12g/m2，所述饵料DHF3为质量比250:20:250:10:20:750的现磨黄豆豆浆、螺旋藻粉、含质量浓度28％粗蛋白的粉状饲料、维生素C、多维元素片和水的混合物；
进食60天后，投喂亲鱼培育期间颗粒饵料，投喂量按饵料系数3％～4％的量投喂，每次投喂量在15～30min内吃完。
10.根据权利要求9所述大眼圆吻鲴和鲢的远缘杂交方法，其特征在于，在鱼苗饲养期间，每天用硝化细菌按15～20g/m2的量来调节水质。
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