CN112352712A - 一种犀角金线鲃人工繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种犀角金线鲃人工繁殖方法，属于水产繁殖技术领域。一种犀角金线鲃人工繁殖方法是将犀角金线鲃雌雄亲本置于预先放置有黑色洞穴模拟物的培育容器中，严格控制亲鱼培育条件，使犀角金线鲃在人工条件下自然产卵产精，从根本上解决了洞穴鱼类从野外洞穴环境到人工模拟环境的应激和适应性以及人工条件下洞穴鱼类生殖功能紊乱的双重问题，而且人工繁殖过程不使用催产剂，不仅能获得较高的受精率和孵化率而且降低生产成本使操作更加简便；同时鱼苗饲养阶段根据犀角金线鲃鱼苗各阶段不同生长特点设置分阶段投喂不同饲料，从而提高鱼苗的存活率的同时也降低了鱼苗的畸形率，因此本发明提供的方法实现高效人工繁育犀角金线鲃的目的。
Description
技术领域
本发明属于水产繁殖技术领域，具体涉及一种犀角金线鲃人工繁殖方法。
背景技术
金线鲃属(Sinocyclocheilus)隶属于鲤形目(Cypriniformes)、鲤科(Cyprinidae)，是局限分布于我国西南喀斯特地区的中国特有鱼类。该属是我国鲤科鱼类第一大属，有50多个不同的物种，也是我国洞穴生物的代表类群，约50％的种是洞穴鱼类。这些洞穴鱼类具有高度特化的洞穴特征，如眼睛退化、皮肤白化、鳞片消失等，他们长期生活于黑暗无光的洞穴深处，是研究生物在极端环境下生存适应的绝佳素材，也是研究人类疾病如眼病、白化病、代谢病等的理想模式动物。相比于地表种类，如滇池金线鲃、抚仙金线鲃等，洞穴种类驯养及人工繁殖难度更高，至今未有人工繁殖成功的案例，因此，严重限制了上述人类疾病研究的开展。
犀角金线鲃(Sinocyclocheilus rhinocerous Regan)，是1994年发现的一种金线鲃属洞穴新种。目前，犀角金线鲃已知的分布点为云南罗平县环城乡的地下河，属南盘江水系，犀角金线鲃种群数量较小，且野外采集不易，对它的研究仅见于其分类特征的描述、分类地位的确认、系统发育关系及其全基因组研究。2004年开始，中国科学院昆明动物研究所一直致力于犀角金线鲃的人工繁殖研究，经过长期驯养和亲鱼培育，不使用催产剂的条件下，最终实现犀角金线鲃的人工繁殖，成为首个实现人工繁殖的洞穴鱼类，犀角金线鲃的人工繁殖为中国洞穴鱼类的洞穴适应性研究创造更多可能。然而经文献检索，未有犀角金线鲃人工繁殖的相关报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种犀角金线鲃人工繁殖方法，实现犀角金线鲃在人工条件下自然产卵产精，且不使用催产剂的情况下仍可获得较高的受精率。
本发明提供了一种犀角金线鲃人工繁殖方法，包括以下步骤：
将雌亲鱼和雄亲鱼置于消毒的培育容器中亲鱼培育，所述培育容器中预先放置黑色洞穴模拟物；亲鱼培育期间的环境参数如下：水温为16～20℃，水流的流速为5～20cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为6.8～7.2，保持水质清洁；培养环境保持黑暗、无噪音；
在所述亲鱼培育期间，每天投喂颗粒饲料2次，每次的投喂量按饵料系数为3％～4％的比例投加，所述颗粒饲料为质量比为250～280：80～100：10～20：10～20：8～20：300的质量浓度40％～50％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
待雌亲鱼和雄亲鱼的性腺发育成熟后收集卵子和精子进行人工授精，用渗透压280～320mOsm/L，温度18～20℃的生理盐水冲洗精卵混合物3～4次后，将精卵混合物泼洒在消毒的棕片上，将粘附着受精卵的棕片置于孵化池中孵化7～8d，孵化得到鱼苗经饲养得到犀角金线鲃成鱼。
优选的，所述亲鱼培育的环境参数进行节律性调节：
在1～4月，水温为16～20℃，水流的流速为10～20cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为6.8～7.0；
在5～8月，水温为18～20℃，水流的流速为5～15cm/s，水的溶解氧为6.0～6.5mg/L，水的pH值为6.8～7.2；
在9～12月，水温为16～18℃，水的流速为5～15cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为6.8～7.2。
优选的，所述颗粒饲料的种类根据培育月份的不同节律性调节：
在1～4月投喂饵料SRF1，所述饵料SRF1包括质量比为250：100：20：10：8：300的含质量浓度50％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
在5～8月投喂饵料SRF2，所述饵料SRF2包括质量比为280：80：10：20：10：300的含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
在9～12月投喂饵料SRF3，所述饵料SRF3包括质量比为250:100:10:20:20:300的含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物。
优选的，所述孵化的环境条件如下：
孵化池的水位为1.2m，水面在鱼卵上方40～80cm，无光源直射，水温18～20℃，水的pH值6.8～7.5，水的溶解氧7.0～8.0mg/L。
优选的，所述孵化期间对受精卵进行消毒；
所述消毒的方法将受精卵置于80～120ppm的高锰酸钾溶液中消毒15～25min，连续消毒4天。
优选的，在所述饲养期间，每天按15～17g/m2的添加量添加硝化细菌来调节水质。
优选的，所述鱼苗破膜后7天开始进食，进食期分阶段投喂饲料。
优选的，在进食的第1～7天投喂浆状饵料SRF4，每日投喂4次，每次投喂量为8～10mL/m2，所述浆状饵料SRF4包括煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、多维元素片和水，所述煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、多维元素片和水质量比为300：20：20：10：750；
在进食的第8～20天投喂饵料SRF5和轮虫，每日投喂3次，饵料SRF5的每次投喂量为10～15mL/m2；轮虫每次投喂量为150万个/m2，所述饵料SRF5包括煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水，所述煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水的质量比为250：20：20：250：10：750；
在进食的第21～60天投喂饵料SRF6，每日投喂2次，每次投喂量为10～12g/m2，所述饵料SRF6包括现磨黄豆豆浆、蚯蚓、虾、含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片和水，所述现磨黄豆豆浆、蚯蚓、虾、含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片和水的质量比为250:10:10:250:10:10:750；
进食60天后，每天投喂所述颗粒饲料2次，每次投喂量按饵料系数为3％～4％的比例投加。
本发明提供的犀角金线鲃人工繁殖方法，在培育容器中预先放置黑色洞穴模拟物；同时严格控制亲鱼培育期间的环境参数，完善亲鱼培育过程，从根本上解决了洞穴鱼类从野外洞穴环境到人工模拟环境的应激和适应以及人工条件下洞穴鱼类生殖功能紊乱的双重问题，同时使雌亲鱼和雄亲鱼在不使用催产剂的情况下实现在人工条件下自然产卵产精，且可以获得较高的受精率和孵化率。催产剂的零使用不仅减少了对犀角金线鲃亲鱼的损害还降低了养殖成本，操作更为简便快捷。
进一步的，本发明具体限定了亲鱼培育期间的环境参数以及饲喂方法的节律性调控，使亲鱼的生存环境更加接近自然环境，保证亲鱼的正常发育和产精产卵的繁殖性能。
进一步的，本发明具体限定了孵化方法，孵化环境参数的设定以及孵化期间消毒步骤的限定有利于进一步提高孵化率和孵化速度。
进一步的，本发明具体限定了鱼苗的分阶段饲养，根据犀角金线鲃鱼苗各阶段的不同生长特点设置不同生长阶段的饲料配方和饲喂量，不仅提高了鱼苗的存活率同时也降低了鱼苗的畸形率。
具体实施方式
本发明提供了一种犀角金线鲃人工繁殖方法，包括以下步骤：
将雌亲鱼和雄亲鱼置于消毒的培育容器中亲鱼培育，所述培育容器中预先放置黑色洞穴模拟物；亲鱼培育期间的环境参数如下：水温为16～20℃，水流的流速为5～20cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为6.8～7.2，保持水质清洁；培养环境保持黑暗、无噪音；
在所述亲鱼培育期间，每天投喂颗粒饲料2次，每次的投喂量按饵料系数为3％～4％的比例投加，所述颗粒饲料为质量比为250～280：80～100：10～20：10～20：8～20：300的质量浓度40％～50％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
待雌亲鱼和雄亲鱼的性腺发育成熟后收集卵子和精子进行人工授精，用渗透压280～320mOsm/L，温度18～20℃的生理盐水冲洗精卵混合物3～4次后，将精卵混合物泼洒在消毒的棕片上，将粘附着受精卵的棕片置于孵化池中孵化7～8d，孵化得到鱼苗经饲养得到犀角金线鲃成鱼。
本发明向培育容器中预先放置黑色洞穴模拟物。所述黑色洞穴模拟物优选为管状黑色部件，以便于满足亲鱼的洞穴生存习性。本发明对所述管状黑色部件的种类不做具体限定，采用本领域所熟知的种类即可，例如黑色PVC管。所述管状黑色部件的内径优选为15cm，长度优选为30cm。所述培养缸和黑色洞穴模拟物优选先消毒，再进行亲鱼培养。本发明对所述消毒的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的消毒方法即可。所述培育容器优选为培育缸或培育池等，所述培育缸的规格优选为1m×0.8m×1m，每个培育缸中优选放置1～2个黑色洞穴模拟物。
在本发明中，所述亲鱼培育的环境参数优选进行节律性调节：在1～4月，水温为16～20℃，水流的流速为10～20cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为6.8～7.0；在5～8月，水温为18～20℃，水流的流速为5～15cm/s，水的溶解氧为6.0～6.5mg/L，水的pH值为6.8～7.2；在9～12月，水温为16～18℃，水的流速为5～15cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为6.8～7.2。主要是根据不同阶段的实际需求设置了3个时期，1～4月是繁殖季节，5～8月产后恢复期，9～12月性腺成熟期即怀卵期。实验证明，高于或低于这些环境参数进行亲鱼培育会造成亲鱼性腺发育不佳或精卵质量不好。每天需要把食物残渣、粪便等清除，以便保持水体清洁。培育容器每天清洗水体过滤装置。所述培育容器全年保持黑暗，周边无噪音，以减少亲鱼对环境的应激性，使其适应人工培育环境，避免生殖功能紊乱。
在本发明中，所述颗粒饲料的种类优选根据培育月份的不同节律性调节：在1～4月投喂饵料SRF1，所述饵料SRF1包括质量比为250：100：20：10：8：300的含质量浓度50％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
在5～8月投喂饵料SRF2，所述饵料SRF2包括质量比为280：80：10：20：10：300的含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
在9～12月投喂饵料SRF3，所述饵料SRF3包括质量比为250:100:10:20:20:300的含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物。本发明创造性制备适合不同亲鱼生长阶段所需的人工配合饲料，与其他种类的常规原料混合相比，本发明提供的饵料SRF1～SRF3更能促进使亲鱼快速生长发育和自然产卵产精。
待雌亲鱼和雄亲鱼的性腺发育成熟后收集卵子和精子进行人工授精。
在本发明中，性腺发育成熟后的雌亲鱼和雄亲鱼的选择标准优选如下：性腺发育良好、无疾病的雌雄亲鱼进行受精。生殖季节的雌、雄亲鱼均无珠星出现，用手触摸亦无明显的粗糙感；形态上，亲鱼因怀卵或精腹部膨大而圆，轻压腹部会有精子或卵子流出。本发明对卵子和精子采集方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的采集方法即可。所述人工授精优选将混合后的精子卵子混合液用羽毛顺时针轻轻搅拌30s。在人工授精后，采用渗透压280～320mOsm/L，温度18～20℃的生理盐水轻轻冲洗精卵混合物，冲洗3次，有利于降低受精卵霉菌感染率。将人工授精得到的精卵混合液均匀泼洒在消毒的棕片上，以便受精卵在棕片上实现固着，为后续孵化做准备。
在本发明中，所述孵化的环境条件优选如下：孵化池的水位为1.2m，水面在鱼卵上方40～80cm，无光源直射，水温18～20℃，水的pH值6.8～7.5，水的溶解氧7.0～8.0mg/L。所述孵化期间优选对受精卵进行消毒；所述消毒的方法优选将受精卵置于80～120ppm的高锰酸钾溶液中消毒15～25min，连续消毒4天，第5天开始有鱼苗孵出，第8天孵化结束。高锰酸钾溶液的浓度更优选为100ppm，所述消毒的时间优选为20min。所述孵化的条件有利于受精卵快速孵化为育苗。
在本发明中，在所述饲养期间，优选每天按15～17g/m2的添加量添加硝化细菌来调节水质。所述硝化细菌为常规商品途径购买得到。硝化细菌的添加量优选为16g/m2。
优选在所述鱼苗破膜后7天开始进食，进食期分阶段投喂饲料：优选在进食的第1～7天投喂浆状饵料SRF4，每日投喂4次，每次投喂量为8～10mL/m2，所述浆状饵料SRF4包括煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、多维元素片和水，所述煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、多维元素片和水质量比为300：20：20：10：750；在进食的第8～20天投喂饵料SRF5和轮虫，每日投喂3次，饵料SRF5的每次投喂量为10～15mL/m2；轮虫每次投喂量为150万个/m2，所述饵料SRF5包括煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水，所述煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水的质量比为250：20：20：250：10：750；进食8～20d小鱼苗开始吸收外源营养，开口饵料至关重要，过早投喂，小鱼苗还不需要吃，洒到水里，污染水体；过晚，没有适宜饵料，导致鱼苗基本全部死亡。在进食的第21～60天投喂饵料SRF6，每天投喂2次，每次投喂量为10～12g/m2，所述饵料SRF6包括现磨黄豆豆浆、蚯蚓、虾、含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片和水，所述现磨黄豆豆浆、蚯蚓、虾、含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片和水的质量比为250:10:10:250:10:10:750；进食60天后，每天投喂所述颗粒饲料两次，每次投喂量按饵料系数为3％～4％的比例投加。本发明对所述饵料的原料来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的原料即可。
下面结合实施例对本发明提供的一种犀角金线鲃人工繁殖方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
1.构建养殖系统
建立亲鱼培育缸，培育缸的规格为1m×0.8m×1m(长×宽×高)，全年黑暗，周边无噪音，培育缸内水温、水流强度及水质情况参数需根据要求节律性调节：在1～4月时，温度控制在18℃，流速控制在15cm/s，溶解氧控制在6.5mg/L，pH控制在6.9；在5～8月，将温度控制在19℃，流速控制在10cm/s，溶解氧控制在6.3mg/L，pH值控制在7.0；在9～12月，温度控制在17℃，流速控制在10cm/s，溶解氧控制在6.5mg/L，pH值控制在7.0；培育缸每天清洗过滤装置，保持水质清洁。
2.饵料配制
SRF1饵料包括：含50％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含50％粗蛋白的粉状饲料:蚯蚓:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:100:20:10:8:300(质量比)。
SRF2饵料包括含40％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含40％粗蛋白的粉状饲料:蚯蚓:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝280:80:10:20:10:300(质量比)。
SRF3饵料包括含45％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含45％粗蛋白的粉状饲料:蚯蚓:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:100:10:20:20:300(质量比)。
SRF4包括：煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、多维元素片和水，煮熟蛋黄:蚯蚓:虾:多维元素片:水＝300:20:20:10:750(质量比)。
SRF5包括煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水，煮熟蛋黄:蚯蚓:虾:现磨黄豆豆浆:多维元素片:水＝250:20:20:250:10:750(质量比)。
SRF6包括现磨黄豆豆浆、蚯蚓、虾、含40％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片和水，现磨黄豆豆浆:蚯蚓:虾:含40％粗蛋白的粉状饲料:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:10:10:250:10:10:750(质量比)。
3.亲鱼来源
亲鱼于2019年3月南盘江水系云南省宜良县柴石滩水库旁一洞穴采集，采用地笼捕获，共15尾。亲鱼装入长80cm、宽50cm塑料鱼苗袋冲氧后带回养殖基地。
4.亲鱼培育
将野外采集来的亲鱼消毒后放入经消毒清洗的亲鱼培育缸中，并在培育缸内放置长30cm，直径15cm的黑色PVC管，水温18℃，流速12cm/s，溶解氧6.5mg/L，pH值7.0。每天10:00、16:00各投喂SRF1饵料一次，驯养1周后，共死亡亲鱼2尾。
生殖季节，雌、雄亲鱼均无珠星出现，用手触摸亦无明显的粗糙感，只是外观雌性因怀卵腹部膨大而圆，轻压腹部会有卵子流出。
5.人工授精
繁殖季节，选取性腺发育良好、无疾病的雌雄亲鱼进行人工授精，分别将亲鱼的卵子和精子从其腹部轻轻挤压在预先准备好的容器中，即刻用鸡毛顺时针轻轻搅拌30s，再用渗透压300mOsm/L，温度19℃的水轻轻冲洗精卵混合物，冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
6.鱼卵孵化
将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水面在鱼卵上方60cm，用遮光网覆盖，保证无光源直射，水温19℃，pH值7.2，溶解氧7.5mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒20min，连续消毒4天，第5天开始有鱼苗孵出，第8天孵化结束。
7.鱼苗饲养
鱼苗破膜后7天开始进食，每天用硝化细菌按16g/m2调节水质，进食期分阶段投喂不同饲料，其中，在鱼苗饲养阶段：
进食的第1～7天投喂浆状饵料SRF4，每日投喂4次，每次投喂量均为9mL/m2。
第8～20天投喂饵料SRF5和轮虫，每日投喂3次，轮虫投喂量为150万个/m2，饵料SRF5投喂量为10mL/m2。
第21～60天投喂饵料SRF6，投喂量为11g/m2。
进食60天后，按上述亲鱼培育饵料投喂，投喂量按饵料系数为4％，每次投喂量以在20min内吃完为宜，饲喂1年得到犀角金线鲃成鱼。
实施例2
1.构建养殖系统
建立亲鱼培育缸，培育缸的规格为1m×0.8m×1m(长×宽×高)，全年黑暗，周边无噪音，培育缸内水温、水流强度及水质情况参数需根据要求节律性调节：在1～4月时，温度控制在20℃，流速控制在10cm/s，溶解氧控制在7.0mg/L，pH控制在6.8；在5～8月，将温度控制在20℃，流速控制在5cm/s，溶解氧控制在6.5mg/L，pH值控制在6.8；在9～12月，温度控制在18℃，流速控制在5cm/s，溶解氧控制在7.0mg/L，pH值控制在6.8培育缸每天清洗过滤装置，保持水质清洁。
2.饵料配制
SRF1饵料包括：含50％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含50％粗蛋白的粉状饲料:蚯蚓:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:100:20:10:8:300(质量比)。
SRF2饵料包括含40％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含40％粗蛋白的粉状饲料:蚯蚓:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝280:80:10:20:10:300(质量比)。
SRF3饵料包括含45％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含45％粗蛋白的粉状饲料:蚯蚓:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:100:10:20:20:300(质量比)。
SRF4包括：煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、多维元素片和水，煮熟蛋黄:蚯蚓:虾:多维元素片:水＝300:20:20:10:750(质量比)。
SRF5包括煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水，煮熟蛋黄:蚯蚓:虾:现磨黄豆豆浆:多维元素片:水＝250:20:20:250:10:750(质量比)。
SRF6包括现磨黄豆豆浆、蚯蚓、虾、含40％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片和水，现磨黄豆豆浆:蚯蚓:虾:含40％粗蛋白的粉状饲料:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:10:10:250:10:10:750(质量比)。
3.亲鱼来源
亲鱼于2019年3月南盘江水系云南省宜良县柴石滩水库旁一洞穴采集，采用地笼捕获，共15尾。亲鱼装入长80cm、宽50cm塑料鱼苗袋冲氧后带回养殖基地。
4.亲鱼培育
将野外采集来的亲鱼消毒后放入经消毒清洗的亲鱼培育缸中，并在培育缸内放置长30cm，直径15cm的黑色PVC管，水温20℃，流速10cm/s，溶解氧7.0mg/L，pH值6.8。每天10:00、16:00各投喂SRF1饵料一次，驯养1周后，共死亡亲鱼2尾。
生殖季节，雌、雄亲鱼均无珠星出现，用手触摸亦无明显的粗糙感，只是外观雌性因怀卵腹部膨大而圆，轻压腹部会有卵子流出。
5.人工授精
繁殖季节，选取性腺发育良好、无疾病的雌雄亲鱼进行人工授精，分别将亲鱼的卵子和精子从其腹部轻轻挤压在预先准备好的容器中，即刻用鸡毛顺时针轻轻搅拌30s，再用渗透压320mOsm/L，温度20℃的水轻轻冲洗精卵混合物，冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
6.鱼卵孵化
将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水面在鱼卵上方80cm，用遮光网覆盖，保证无光源直射，水温18℃，pH值7.5，溶解氧7.0mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒20min，连续消毒4天，第5天开始有鱼苗孵出，第8天孵化结束。
7.鱼苗饲养
鱼苗破膜后7天开始进食，每天用硝化细菌按17g/m2调节水质，进食期分阶段投喂不同饲料，其中，在鱼苗饲养阶段：
进食的第1～7天投喂浆状饵料SRF4，每日投喂4次，每次投喂量均为10mL/m2。
第8～20天投喂饵料SRF5和轮虫，每日投喂3次，轮虫投喂量为150万个/m2，饵料SRF5投喂量为15mL/m2。
第21～60天投喂饵料SRF6，投喂量为12g/m2。
进食60天后，按上述亲鱼培育饵料投喂，投喂量按饵料系数为4％，每次投喂量以在30min内吃完为宜，饲喂1年得到犀角金线鲃成鱼。
实施例3
1.构建养殖系统
建立亲鱼培育缸，培育缸的规格为1m×0.8m×1m(长×宽×高)，全年黑暗，周边无噪音，培育缸内水温、水流强度及水质情况参数需根据要求节律性调节：在1～4月时，温度控制在16℃，流速控制在20cm/s，溶解氧控制在6.0mg/L，pH控制在7.0；在5～8月，将温度控制在18℃，流速控制在15cm/s，溶解氧控制在6.0mg/L，pH值控制在7.2；在9～12月，温度控制在16℃，流速控制在15cm/s，溶解氧控制在6.0mg/L，pH值控制在7.2；培育缸每天清洗过滤装置，保持水质清洁。
2.饵料配制
SRF1饵料包括：含50％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含50％粗蛋白的粉状饲料:蚯蚓:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:100:20:10:8:300(质量比)。
SRF2饵料包括含40％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含40％粗蛋白的粉状饲料:蚯蚓:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝280:80:10:20:10:300(质量比)。
SRF3饵料包括含45％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含45％粗蛋白的粉状饲料:蚯蚓:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:100:10:20:20:300(质量比)。
SRF4包括：煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、多维元素片和水，煮熟蛋黄:蚯蚓:虾:多维元素片:水＝300:20:20:10:750(质量比)。
SRF5包括煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水，煮熟蛋黄:蚯蚓:虾:现磨黄豆豆浆:多维元素片:水＝250:20:20:250:10:750(质量比)。
SRF6包括现磨黄豆豆浆、蚯蚓、虾、含40％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片和水，现磨黄豆豆浆:蚯蚓:虾:含40％粗蛋白的粉状饲料:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:10:10:250:10:10:750(质量比)。
3.亲鱼来源
亲鱼于2019年3月南盘江水系云南省宜良县柴石滩水库旁一洞穴采集，采用地笼捕获，共15尾。亲鱼装入长80cm、宽50cm塑料鱼苗袋冲氧后带回养殖基地。
4.亲鱼培育
将野外采集来的亲鱼消毒后放入经消毒清洗的亲鱼培育缸中，并在培育缸内放置长30cm，直径15cm的黑色PVC管，水温16℃，流速20cm/s，溶解氧6.0mg/L，pH值7.0。每天10:00、16:00各投喂SRF1饵料一次，驯养1周后，共死亡亲鱼2尾。
生殖季节，雌、雄亲鱼均无珠星出现，用手触摸亦无明显的粗糙感，只是外观雌性因怀卵腹部膨大而圆，轻压腹部会有卵子流出。
5.人工授精
繁殖季节，选取性腺发育良好、无疾病的雌雄亲鱼进行人工授精，分别将亲鱼的卵子和精子从其腹部轻轻挤压在预先准备好的容器中，即刻用鸡毛顺时针轻轻搅拌30s，再用渗透压280-mOsm/L，温度20℃的水轻轻冲洗精卵混合物，冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
6.鱼卵孵化
将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水面在鱼卵上方40cm，用遮光网覆盖，保证无光源直射，水温20℃，pH值6.8，溶解氧8.0mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒20min，连续消毒4天，第5天开始有鱼苗孵出，第8天孵化结束。
7.鱼苗饲养
鱼苗破膜后7天开始进食，每天用硝化细菌按15g/m2调节水质，进食期分阶段投喂不同饲料，其中，在鱼苗饲养阶段：
进食的第1～7天投喂浆状饵料SRF4，每日投喂4次，每次投喂量均为8mL/m2。
第8～20天投喂饵料SRF5和轮虫，每日投喂3次，轮虫投喂量为150万个/m2，饵料SRF5投喂量为12mL/m2。
第21～60天投喂饵料SRF6，投喂量为10g/m2。
进食60天后，按上述亲鱼培育饵料投喂，投喂量按饵料系数为3％，每次投喂量以在15min内吃完为宜，饲喂1年得到犀角金线鲃成鱼。
分别统计实施例1～3培育过程中精卵质量、受精率、孵化率、存活率和畸形率。结果见表1。
表1实施例1～3统计指标结果一览表
对比例1
1.构建养殖系统
建立亲鱼培育缸，培育缸的规格为1m×0.8m×1m(长×宽×高)，全年黑暗，周边无噪音，培育缸内水温、水流强度及水质情况按统一参数，即温度控制在18℃，流速控制在15cm/s，溶解氧控制在6.5mg/L，pH控制在7.0，培育缸每天清洗过滤装置，保持水质清洁。
2.饵料配制
SRF1饵料包括：含50％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水，含50％粗蛋白的粉状饲料:蚯蚓:虾:维生素D3钙片:多维元素片:水＝250:100:20:10:8:300(质量比)。
3.亲鱼来源
亲鱼于2012年5月南盘江水系云南省宜良县柴石滩水库旁一洞穴采集，采用地笼捕获，共12尾。亲鱼装入长80cm、宽50cm塑料鱼苗袋冲氧后带回养殖基地。
4.亲鱼培育
将野外采集来的亲鱼消毒后放入经消毒清洗的亲鱼培育缸中，并在培育缸内放置长30cm，直径15cm的黑色PVC管，水温18℃，流速15cm/s，溶解氧6.5mg/L，pH值7.0。每天10:00、16:00各投喂SRF1饵料一次，驯养1周后，共死亡亲鱼5尾。
按照以上方案，犀角金线鲃生长状态尚可，但至2015年4月，仍未见到性腺发育良好，可产卵产精的个体。
对比例2
1.构建养殖系统
同实施例1养殖系统。
2.饵料配制
种鱼饲料包括：111鲤种鱼饲料、含30％粗蛋白的粉状饲料、多维元素片和水，111鲤种鱼饲料:含30％粗蛋白的粉状饲料:多维元素片:水＝100:150:50:300(质量比)。
浆状饵料包括：煮熟蛋黄、虾、多维元素片和水，煮熟蛋黄:虾:多维元素片:水＝200:200:20:750(质量比)。
3.亲鱼来源
亲鱼于2015年2月南盘江水系云南省宜良县柴石滩水库旁一洞穴采集，采用地笼捕获，共13尾。亲鱼装入长80cm、宽50cm塑料鱼苗袋冲氧后带回养殖基地。
4.亲鱼培育
将野外采集来的亲鱼消毒后放入经消毒清洗的亲鱼培育缸中，并在培育缸内放置长30cm，直径15cm的黑色PVC管，水温16℃，流速20cm/s，溶解氧6.0mg/L，pH值7.0。每天10:00、16:00各投喂种鱼饲料一次，驯养1周后，共死亡亲鱼3尾。
生殖季节，雌、雄亲鱼均无珠星出现，用手触摸亦无明显的粗糙感，只是外观雌性因怀卵腹部膨大而圆，轻压腹部会有卵子流出。
5.人工授精
繁殖季节，选取性腺发育良好、无疾病的雌雄亲鱼进行人工授精，分别将亲鱼的卵子和精子从其腹部轻轻挤压在预先准备好的容器中，即刻用鸡毛顺时针轻轻搅拌30s，再用渗透压280-mOsm/L，温度20℃的水轻轻冲洗精卵混合物，冲洗3次后，将精卵混合物均匀泼洒在经消毒清洗的棕片上。
6.鱼卵孵化
将粘附着受精卵的棕片置于经消毒清洗的孵化池中孵化，孵化池5m×4m×1.5m，水位1.2m，水面在鱼卵上方40cm，用遮光网覆盖，保证无光源直射，水温20℃，pH值6.8，溶解氧8.0mg/L；每天将鱼卵至于100ppm的高锰酸钾溶液中消毒20min，连续消毒4天，第5天开始有鱼苗孵出，第8天孵化结束。
7.鱼苗饲养
鱼苗破膜后7天开始进食，每天用硝化细菌按15g/m2调节水质，进食期投喂浆状饵料，进食60天后，按上述亲鱼培育饵料投喂，投喂量按饵料系数为3％，每次投喂量以在15min内吃完为宜。
分别统计对比例1～2培育过程中精卵质量、受精率、孵化率、存活率和畸形率。结果见表2。
表2对比例1～2统计指标结果一览表
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种犀角金线鲃人工繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
将雌亲鱼和雄亲鱼置于消毒的培育容器中亲鱼培育，所述培育容器中预先放置黑色洞穴模拟物；亲鱼培育期间的环境参数如下：水温为16～20℃，水流的流速为5～20cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为6.8～7.2，保持水质清洁；培养环境保持黑暗、无噪音；
在亲鱼培育期间，每天投喂颗粒饲料2次，每次投喂量按饵料系数为3％～4％的比例投加，所述颗粒饲料为质量比250～280：80～100：10～20：10～20：8～20：300的质量浓度40％～50％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
待雌亲鱼和雄亲鱼的性腺发育成熟后收集卵子和精子进行人工授精，用渗透压280～320mOsm/L、温度18～20℃的生理盐水冲洗精卵混合物3～4次后，将精卵混合物泼洒在消毒的棕片上，将粘附着受精卵的棕片置于孵化池中孵化7～8d，孵化得到的鱼苗经饲养得到犀角金线鲃成鱼。
2.根据权利要求1所述犀角金线鲃人工繁殖方法，其特征在于，所述亲鱼培育的环境参数进行节律性调节：
在1～4月，水温为16～20℃，水流的流速为10～20cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为6.8～7.0；
在5～8月，水温为18～20℃，水流的流速为5～15cm/s，水的溶解氧为6.0～6.5mg/L，水的pH值为6.8～7.2；
在9～12月，水温为16～18℃，水的流速为5～15cm/s，水的溶解氧为6.0～7.0mg/L，水的pH值为6.8～7.2。
3.根据权利要求1所述犀角金线鲃人工繁殖方法，其特征在于，所述颗粒饲料的种类根据培育月份的不同节律性调节：
在1～4月投喂饵料SRF1，所述饵料SRF1包括质量比为250：100：20：10：8：300的含质量浓度50％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
在5～8月投喂饵料SRF2，所述饵料SRF2包括质量比为280：80：10：20：10：300的含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物；
在9～12月投喂饵料SRF3，所述饵料SRF3包括质量比为250:100:10:20:20:300的含质量浓度45％粗蛋白的粉状饲料、蚯蚓、虾、维生素D3钙片、多维元素片和水的混合物。
4.根据权利要求1～3任意一项所述犀角金线鲃人工繁殖方法，其特征在于，所述孵化的环境条件如下：
孵化池的水位为1.2m，水面在鱼卵上方40～80cm，无光源直射，水温18～20℃，水的pH值6.8～7.5，水的溶解氧7.0～8.0mg/L。
5.根据权利要求4所述犀角金线鲃人工繁殖方法，其特征在于，所述孵化期间对受精卵进行消毒；
所述消毒的方法将受精卵置于80～120ppm的高锰酸钾溶液中消毒15～25min，连续消毒4天。
6.根据权利要求1～3任意一项所述犀角金线鲃人工繁殖方法，其特征在于，在饲养期间，每天按15～17g/m2的添加量添加硝化细菌来调节水质。
7.根据权利要求6所述犀角金线鲃人工繁殖方法，其特征在于，所述鱼苗破膜后7天开始进食，进食期分阶段投喂饲料。
8.根据权利要求7所述犀角金线鲃人工繁殖方法，其特征在于，在进食的第1～7天投喂浆状饵料SRF4，每日投喂4次，每次投喂量为8～10mL/m2，所述浆状饵料SRF4包括煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、多维元素片和水，所述煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、多维元素片和水质量比为300：20：20：10：750；
在进食的第8～20天投喂饵料SRF5和轮虫，每日投喂3次，饵料SRF5的每次投喂量为10～15mL/m2；轮虫每次投喂量为150万个/m2，所述饵料SRF5包括煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水，所述煮熟蛋黄、蚯蚓、虾、现磨黄豆豆浆、多维元素片和水的质量比为250：20：20：250：10：750；
在进食的第21～60天投喂饵料SRF6，每日投喂2次，每次投喂量为10～12g/m2，所述饵料SRF6包括现磨黄豆豆浆、蚯蚓、虾、含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片和水，所述现磨黄豆豆浆、蚯蚓、虾、含质量浓度40％粗蛋白的粉状饲料、维生素D3钙片、多维元素片和水的质量比为250:10:10:250:10:10:750；
进食60天后，每天投喂所述颗粒饲料2次，每次投喂量按饵料系数为3％～4％的比例投加。
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