CN114340610A - 多价成纤维细胞靶向剂及使用方法 - Google Patents

Abstract

分别用于癌症和其他纤维化疾病中的活化肌成纤维细胞以及成纤维细胞活化蛋白(FAP)阳性癌症相关成纤维细胞(CAF)的成像和治疗的多价配体靶向活性剂，例如可检测剂或治疗剂。

Description

多价成纤维细胞靶向剂及使用方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年7月22日提交的美国临时专利申请No.62/877,039、于2019年10月4日提交的美国临时专利申请No.62/910,764和于2019年11月11日提交的美国临时专利申请No.62/933,655的权益，其全部在此通过引用整体并入。

技术领域

本申请涉及靶向成纤维细胞(包括癌症相关成纤维细胞(cancer-associatedfibroblast，CAF))的配体和活性剂(例如治疗剂和显像剂)的多价化合物。多价化合物的内化和停留时间在肿瘤和其他疾病位点中被增强。

背景技术

肿瘤微环境(tumor microenvironment，TME)或肿瘤周围的环境(例如，周围的血管、免疫细胞、成纤维细胞、胞外基质等)可在癌症的发展中发挥作用。TME的组分之一(例如关键组分)是癌症相关成纤维细胞(CAF)。通过分泌多种细胞因子、生长因子和胶原，CAF可支持肿瘤的存活、生长和转移。为了解决对治疗肿瘤或CAF相关疾病的新方法的需求，本文中提出了靶向CAF和/或其上布置的靶标的多价化合物。

CAF可在其细胞表面上过表达成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activationprotein，FAP)，其可用于递送分别用于治疗和检测癌症的药物和显像剂。FAP是II型膜结合丝氨酸蛋白酶，其裂解脯氨酸-氨基酸肽键。最近已报道了用于癌症和其他纤维化疾病的FAP靶向的药物和显像剂。尽管FAP配体靶向的药物和显像剂是已知的，但是其有用性受到其较差的内化和在患病部位较短的停留时间的限制。仍然需要开发在疾病部位具有提高的内化和更长的停留时间的FAP配体靶向的药物和显像剂。

发明内容

提供了具有结构(Q-L^Q)_m-Y-L^X-X的多价化合物(或缀合物)，其中

每个Q-L^Q是所述多价化合物的臂；

m是所述多价化合物中(Q-L^Q)臂的数目，并且是整数2、3、4、5或6；

Q是与靶细胞上的成纤维细胞活化蛋白(FAP)结合的配体；

L^Q是间隔基，其(i)连接Q与Y，并且(ii)为所述多价化合物的臂提供长度以到达所述靶细胞上的多个相邻FAP；

Y是与所述多价化合物的多个臂连接的多点模板；

L^X是连接X与Y的间隔基；并且

X是活性剂。

多价化合物可具有以下结构：

多价化合物可具有以下结构：

还提供了包含多价化合物和可药用载体的药物组合物。

还提供了在CAF或FAP表达细胞附近提供活性剂的方法。所述方法包括向CAF或FAP表达细胞施用化合物，并且所述化合物在所述CAF或FAP表达细胞内或者所述CAF或FAP表达细胞上保留至少24小时。

还提供了在CAF或FAP表达细胞附近提供活性剂的方法。所述方法包括向包含或怀疑包含多个CAF或FAP表达细胞的对象施用化合物，其中所述化合物在所述CAF或FAP表达细胞内保留至少24小时。

还提供了在对象中检测肿瘤或纤维化组织的方法。所述方法包括(i)向有此需要的对象施用化合物，(ii)在所述对象内检测所述化合物(例如，光学地或放射性测量地)，和(iii)在所述对象中基于所述化合物的定位来鉴定肿瘤或纤维化组织。

还提供了在对象中治疗肿瘤或纤维化组织的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的化合物。

附图说明

图1是基于由两条相同肽链构成的

分辨率晶体结构(PDB编码：1Z68)的成纤维细胞活化蛋白(FAP)的二聚体空间填充模型。

图2是基于图1所示的晶体结构衍生模型的FAP活性位点的深度。

图3是用于递送活性剂(例如治疗剂或显像剂)的(Q-L^Q)₂多点模板的实例合成。

图4A是在用活性剂X进行官能化之前叔丁氧基羰基(Boc)-保护的(Q-L^Q)₂-Y-L^X-Boc多点模板的实例合成。

图4B是在进行Boc脱保护和罗丹明偶联之后罗丹明化合物(基于罗丹明的活性剂)的合成。

图5是以基于S0456的染料作为活性剂的多价缀合物的实例合成。

图6示出了多价缀合物6b的液相色谱-质谱(liquid chromatography-massspectrometry，LC-MS)迹线。

图7示出了多价缀合物的液相色谱-质谱(LC-MS)迹线。

图8A至D示出了使用共聚焦显微术对(Q-L^Q)₁-Y-L^X-X“单-FAP”和(Q-L^Q)₂-Y-L^X-X“双-FAP”多价化合物的结合研究。在37℃下孵育1小时之后，在1小时和8小时获取的读数显示出单FAP和双FAP化合物二者在细胞中的显著保留。8小时孵育之后，双FAP化合物在细胞内保持清晰可见，而单FAP化合物在同等条件下可检测性极大降低。

图9A至C示出了在24小时和48小时孵育之后使用共聚焦显微术对单FAP和双FAP多价化合物的结合研究。双FAP缀合物在细胞中保留长达48小时。

图10A至B示出了在12.5和25nM浓度下双FAP多价化合物对非FAP HT1080细胞的结合研究，表明了双FAP化合物的结合是FAP特异性的。

图11A至D示出了在施用多价化合物6b之后18小时、24小时和48小时多价化合物6b对携带KB肿瘤的小鼠的体内成像。

图12A至C示出了在施用多价缀合物6b之后72小时、96小时和114小时多价化合物6b对携带KB肿瘤的小鼠的体内成像。

图13A至B示出了在注射之后114小时双FAP多价化合物6b的生物分布。

图14A至B示出了在小鼠中可检测多价化合物与100倍过量的未经标记多价化合物之间的竞争实验。在不存在过量的未经标记化合物(靶向)的情况下，可检测化合物的摄取显著大于在存在(竞争)过量的未经标记染料的情况。这些数据表明肿瘤的摄取是FAP介导的。靶向对象和竞争对象二者均显示出肾中的生物累积。

图15A至G示出了在携带KB肿瘤的小鼠中在48小时的时间内单FAP多价化合物的时程研究。对左侧的小鼠单独给予单-FAP化合物，而对右侧的小鼠用100倍过量的未经标记FAP配体预处理。预处理小鼠中没有可检测的信号表明FAP-介导的缀合物的保留。

图16A至D示出了带有可检测S0456活性剂的双FAP与单FAP多价化合物之间的比较。双FAP化合物保留超过48小时，而单FAP缀合物在注射之后48小时几乎检测不到。

具体实施方式

定义

为方便起见，在进一步描述之前，在此收集说明书、实施例和所附权利要求中使用的一些术语。这些定义应根据本公开内容的其余部分来阅读并且如本领域技术人员所理解。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义。

一些术语和短语在下文和整个说明书中定义。

本文中使用的未用数量词限定的名词是指一个或多于一个(即至少一个)语法对象。举例来说，“元件”意指一个元件或多于一个元件。

如本文中在说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解成意指如此连接的要素中的“之一或两者”，即在一些情况下要素共同存在，而在另一些情况下要素分别存在。用“和/或”列举的多个要素应以相同的方式理解，即这样连接的要素中的“一个或更多个”。除了由“和/或”子句具体指明的要素之外，其他要素也可任选地存在，无论与具体指明的那些要素相关还是无关。因此，作为一个非限制性实例，当与开放式语言例如“包括”结合使用时，提及“A和/或B”可仅指A(任选地包括除B之外的要素)；或仅指B(任选地包括除A之外的要素)；或者指A和B二者(任选地包括其他要素)；等等。

如本文中在说明书和权利要求书中使用的，“或/或者”应理解为具有与如上所定义的“和/或”相同的含义。例如，当分离列表中的项目时，“或”或“和/或”应当被解释为包含性的，即，包含多个要素或要素列表中的至少一个，但也包含多于一个，并且任选地包含另外未列出的项目。只有明确相反地指出的术语，例如“仅之一”或“恰好一个”，或者当在权利要求中使用时“由......组成”，是指包含多个要素或要素列表中的恰好一个要素。一般而言，当之前有排他性术语(例如“任一”、“之一”、“仅之一”或“恰好之一”)时，本文中使用的术语“或/或者”应仅被解释为表示排他性的替代方案(即“一个或另一个，而非二者”)。“基本上由......组成”当在权利要求书中使用时应具有其在专利法领域中所使用的一般含义。

如本文中在说明书和在权利要求书中使用的，在提及一个或更多个要素的列表时，短语“至少一个”应理解成意指选自要素列表中的任一个或更多个要素中的至少一个要素，但不一定包括要素列表中明确列出的各个和每个要素中的至少一个，并且不排除要素列表中要素的任意组合。该定义还允许可任选地存在要素列表中除短语“至少一个/种”所提及的具体指出的要素之外的要素，无论与具体指出的那些要素相关还是无关。因此，作为一个非限制性实例，“A和B中的至少一个”(或等同地，“A或B中的至少一个”，或等同地，“A和/或B中的至少一个”)可指至少一个A，任选地包括多于一个A，但不存在B(并且任选地包括除B之外的要素)；或指至少一个B，任选地包括多于一个B，但不存在A(并且任选地包括除A之外的要素)；或指至少一个A，任选地包括多于一个A，以及至少一个B，任选地包括多于一个B(并且任选地包括其他要素)；等等。

还应理解，除非明确相反指示，否则在本文中要求保护的包括多于一个步骤或动作的任何方法中，方法的步骤或动作的顺序不一定限于列举该方法的步骤或动作的顺序。

在权利要求中以及在以上说明书中，所有过渡性短语例如“包括”、“包含”、“带有”、“具有”、“含有”、“涉及”、“持有”、“由......构成”等都应理解为开放式的，即意指包括但不限于。

如本文中所用，术语“施用”包括将本文中所述的化合物和组合物引入宿主动物的所有方式，包括但不限于经口(po)、静脉内(iv)、肌内(im)、皮下(sc)、透皮、吸入、经颊、经眼、舌下、经阴道、经直肠等。本文中所述的化合物和组合物可以以单位剂型和/或含有常规非毒性可药用载体、辅料和/或载剂的制剂施用。

除非另有明确说明，否则术语“约”是指对于百分比加或减10％的值和对于单位值加或减1.0单位的值的范围，例如约1.0是指0.9至1.1的值的范围。

如本文中所用，术语“施用”通常是指将本文中所述的化合物引入宿主对象的任何和所有方式，包括但不限于通过经口、静脉内、肌内、皮下、透皮、吸入、经颊、经眼、舌下、经阴道、经直肠等施用途径。本文中所述的化合物可以以单位剂型和/或含有一种或更多种可药用载体、辅料、稀释剂、赋形剂、和/或载剂，及其组合的组合物施用。

作为盐施用本公开内容的化合物可以是合适的。可接受的盐的实例包括但不限于碱金属(例如钠、钾或锂)盐或碱土金属(例如钙)盐；然而，当施用于所治疗的对象时通常非毒性且有效的任何盐是可接受的。类似地，“可药用盐”是指可用于药物中的具有反荷离子的那些盐。这样的盐可包括但不限于：(1)酸加成盐，其可通过母体化合物的游离碱与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、硫酸和高氯酸等)或有机酸(例如乙酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、马来酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸等)反应获得；或者(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)替代，或与有机碱(例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、三甲胺、N-甲基葡糖胺等)配位时形成的盐。可药用盐是本领域技术人员公知的，并且可考虑与本文中所述的实施方案结合的任何这样的可药用盐。

可接受的盐可使用本领域已知的标准操作获得，包括(但不限于)使足够酸性的化合物与提供生理学上可接受的阴离子的合适的碱反应。合适的酸加成盐由形成非毒性盐的酸形成。说明性但非限制性的实例包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、蔗糖盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。本文中所述化合物的合适碱盐由形成非毒性盐的碱形成。说明性但非限制性的实例包括精氨酸、苄星(benzathine)、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸、镁、葡甲胺、乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇和锌盐。也可形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。

术语“烷基”表示碳原子的直链(即无支链)、支链或环基排列，或其任何组合。如本文中所用的烷基包括一价、二价、三价或四价基团。单价烃基的实例包括但不限于例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环丁基的基团，或(例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基等)的同系物和异构体。二价基团的实例通过非限制性实例的方式包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚环丙基等。三价和四价烷基包括三取代的和四取代的碳基团，其在取代时形成叔碳或季碳连接。除非另外具体指明，烷基不限于任何数目的原子，并且可包括单个碳原子、两个碳原子、三个碳原子、四个碳原子、五个碳原子、六个碳原子或更多个。烷基可限定在范围内，例如C₁-C₁₀，其表示烷基内包括1至10个碳原子。烷基可限定为C₁-C₆，包括6个碳原子的任何取向(例如，正己基、环己基等)。烷基可包含多个重复亚单元(例如，聚乙烯、聚丙烯等)。烷基可以是C₁-C₁₀烷基、C₁-C₉烷基、C₁-C₈烷基、C₁-C₇烷基、C₁-C₆烷基、C₁-C₅烷基、C₁-C₄烷基、C₁-C₃烷基、C₁-C₂烷基或C₁烷基。除非在说明书中另有具体说明，否则烷基任选地被例如氧代、卤素、氨基、腈、硝基、羟基、卤代烷基、烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基等取代。烷基可任选地被氧代、卤素、-CN、-CF₃、OH、-OMe、NH₂或-NO₂取代。烷基可任选地被氧代、卤素、-CN、-CF₃、OH或-OMe取代。烷基可任选地被卤素取代。

术语“烯基”表示碳原子的直链(即无支链)、支链或环基排列，或其任何组合，其中至少一个键是不饱和的，从而形成双键。该基团可以是关于双键的顺式或反式构象，并且应理解为包括两种异构体。实例包括但不限于乙烯基(CH＝CH₂)、1-丙烯基(CH₂CH＝CH₂)、异丙烯基[C(CH₃)＝CH₂]、丁烯基、1,3-丁二烯基等。每当其在本文中出现时，数值范围如“C₂-C₆烯基”意指烯基可由2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子组成，尽管本定义还涵盖其中未指定数值范围的术语“烯基”的出现。烯基可以是C₂-C₁₀烯基、C₂-C₉烯基、C₂-C₈烯基、C₂-C₇烯基、C₂-C₆烯基、C₂-C₅烯基、C₂-C₄烯基、C₂-C₃烯基或C₂烯基。除非在说明书中另有具体说明，否则烯基任选被例如氧代、卤素、氨基、腈、硝基、羟基、卤代烷基、烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基等取代。烯基可任选地被氧代、卤素、-CN、-CF₃、OH、-OMe、NH₂或-NO₂取代。烯基可任选地被氧代、卤素、-CN、-CF₃、OH或-OMe取代。烯基可任选地被卤素取代。

“炔基”是指具有一个或更多个碳-碳三键的任选地被取代的直链或任选地被取代的支链烃单价基团。实例包括但不限于乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基、1,3-丁二炔基等。每当其在本文中出现时，数值范围如“C₂-C₆炔基”意指炔基可由2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子组成，尽管本定义还涵盖其中未指定数值范围的术语“炔基”的出现。炔基可以是C₂-C₁₀炔基、C₂-C₉炔基、C₂-C₈炔基、C₂-C₇炔基、C₂-C₆炔基、C₂-C₅炔基、C₂-C₄炔基、C₂-C₃炔基或C₂炔基。除非在说明书中另有具体说明，否则炔基任选被例如氧代、卤素、氨基、腈、硝基、羟基、卤代烷基、烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基等取代。炔基可任选地被氧代、卤素、-CN、-CF₃、OH、-OMe、NH₂或-NO₂取代。炔基可任选地被氧代、卤素、-CN、-CF₃、OH或-OMe取代。炔基可任选地被卤素取代。

“氨基烷基”是指被一个或更多个胺取代的如上定义的烷基。烷基可被一个胺取代。烷基可被一个、两个或三个胺取代。羟基烷基包括例如氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、氨基丁基或氨基戊基。羟基烷基可以是氨基甲基。

“芳基”是指衍生自包含氢、6至30个碳原子和至少一个芳族环的烃环体系的基团。芳基可以是单环、双环、三环或四环的环系统，其可包括稠合(当与环烷基或杂环烷基环稠合时，芳基通过芳族环原子键合)或桥环系统。芳基可以是6至10元芳基。芳基可以是6元芳基。芳基包括但不限于衍生自以下烃环体系的芳基：亚蒽基、亚萘基、亚菲基、蒽、薁、苯、

荧蒽、芴、不对称引达省(as-indacene)、对称引达省(s-indacene)、二氢化茚、茚、萘、非那烯(phenalene)、菲、七曜烯(pleiadene)、芘和三亚苯。芳基可以是苯基。除非在说明书中另有具体说明，否则芳基可任选地被例如卤素、氨基、腈、硝基、羟基、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基等取代。芳基可任选地被卤素、甲基、乙基、-CN、-CF₃、OH、-OMe、NH₂或-NO₂取代。芳基可任选地被卤素、甲基、乙基、-CN、-CF₃、OH或-OMe取代。芳基可任选地被卤素取代。

“环烷基”是指稳定的、部分或完全饱和的单环或多环碳环的环，其可包括稠合(当与环烷基或杂环烷基环稠合时，环烷基通过非芳族环原子键合)或桥环系统。代表性的环烷基包括但不限于具有3至15个碳原子的环烷基(C₃-C₁₅环烷基)、3至10个碳原子的环烷基(C₃-C₁₀环烷基)、3至8个碳原子的环烷基(C₃-C₈环烷基)、3至6个碳原子的环烷基(C₃-C₆环烷基)、3至5个碳原子的环烷基(C₃-C₅环烷基)或3至4个碳原子的环烷基(C₃-C₄环烷基)。环烷基可以是3元至6元环烷基。环烷基可以是5元至6元环烷基。单环的环烷基包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。多环的环烷基或碳环包括例如金刚烷基、降冰片基、十氢萘基、双环[3.3.0]辛烷、双环[4.3.0]壬烷、顺式十氢萘、反式十氢萘、双环[2.1.1]己烷、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷、双环[3.2.2]壬烷和双环[3.3.2]癸烷以及7,7-二甲基-双环[2.2.1]庚烷基。部分饱和的环烷基包括例如环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。部分饱和的双环的环烷基的一些实例通过非限制性实例的方式包括四氢萘、二氢萘、二氢化茚、茚和二氢蒽。除非在说明书中另有具体说明、否则环烷基任选地被例如氧代、卤素、氨基、腈、硝基、羟基、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基等取代。环烷基可任选地被氧代、卤素、甲基、乙基、-CN、-CF₃、OH、-OMe、NH₂或-NO₂取代。环烷基可任选地被氧代、卤素、甲基、乙基、-CN、-CF₃、OH或-OMe取代。环烷基可任选地被卤素取代。

“卤代烷基”是指被一个或更多个卤素原子取代的如上定义的烷基。烷基可被一个、两个或三个卤素原子取代。烷基可被1、2、3、4、5或6个卤素取代。卤代烷基包括例如三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1,2-二氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1,2-二溴乙基等。卤代烷基可以是三氟甲基。二价烷基可被两个卤素取代形成偕二卤素取代，例如-CF₂-、-CCl₂-等。

“卤代”或“卤素”是指溴、氯、氟或碘。卤素可以是氟或氯。卤素可以是氟。

“杂烷基”是指其中烷基的一个或更多个骨架原子选自除碳以外的原子(例如，氧、氮(例如-NH-、-N(烷基)-)、硫，或其组合)的烷基。杂烷基可在杂烷基的碳原子处与分子的其余部分连接。杂烷基可以是C₁-C₆杂烷基，其中所述杂烷基包含1至5个碳原子以及一个或更多个除碳以外的原子，例如氧、氮、硫，或其组合。碳原子或杂原子可任选地被氧化(例如，-C(O)OCH₂-、-CH₂S(O)₂NHCH₂-、-NHC(O)NHCH₂、-CH₂NHC(O)CH₂)。这样的杂烷基的另一些实例为例如-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OCH₂CH₂OCH₃或-CH(CH₃)OCH₃。除非说明书中另有特别说明，杂烷基任选被例如氧代、卤素、氨基、腈、硝基、羟基、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基等取代。杂烷基可任选地被氧代、卤素、甲基、乙基、-CN、-CF₃、OH、-OMe、NH₂或-NO₂取代。杂烷基可任选地被氧代、卤素、甲基、乙基、-CN、-CF₃、OH或-OMe取代。杂烷基可任选地被卤素取代。

“杂芳基”是指包含氢原子，1至13个碳原子，1至6个选自氮、氧、磷和硫的杂原子以及至少一个芳族环的5元至14元环系统基团。杂芳基可以是单环、双环、三环或四环系统，其可包括稠合(当与环烷基或杂环烷基环稠合时，杂芳基通过芳族环原子键合)或桥环系统；并且杂芳基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化。杂芳基可以是5元至10元杂芳基。杂芳基可以是5元至6元杂芳基。实例包括但不限于氮杂

基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并吲哚基、苯并二茂基、苯并呋喃基、苯并

唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1,4]二氧杂

基、1,4-苯并二

烷基、苯并萘并呋喃基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基(苯并噻吩基)、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、噌啉基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋喃酮基、异噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、异喹啉基、吲嗪基、异

唑基、萘啶基、

二唑基、2-氧代氮杂

基、

唑基、氧杂环丙烷基、1-氧化嘧啶基、1-氧化吡嗪基、1-氧化哒嗪基、1-苯基-1H-吡咯基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩

嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、奎宁环基、异喹啉基、四氢喹啉基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基和噻吩基(即噻吩基)。除非在说明书中另有具体说明，否则杂芳基任选被例如卤素、氨基、腈、硝基、羟基、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基等取代。杂芳基可任选地被卤素、甲基、乙基、-CN、-CF₃、OH、-OMe、NH₂或-NO₂取代。杂芳基可任选地被卤素、甲基、乙基、-CN、-CF₃、OH或-OMe取代。杂芳基可任选地被卤素取代。

“杂环烷基”是指包含2至23个碳原子以及1至8个选自氮、氧、磷和硫的杂原子的稳定的3元至24元部分或完全饱和的环基团。杂环烷基可包含1或2个选自氮和氧的杂原子。除非在说明书中另有具体说明，否则杂环烷基可以是单环、双环、三环或四环的环系统，其可包括稠合(当与芳基或杂芳基环稠合时，杂环烷基通过非芳族环原子键合)或桥连环系统；并且杂环烷基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化。代表性的杂环烷基包括但不限于具有2至15个碳原子的杂环烷基(C₂-C₁₅杂环烷基)、2至10个碳原子的杂环烷基(C₂-C₁₀杂环烷基)、2至8个碳原子的杂环烷基(C₂-C₈杂环烷基)、2至6个碳原子的杂环烷基(C₂-C₆杂环烷基)、2至5个碳原子的杂环烷基(C₂-C₅杂环烷基)或2至4个碳原子的杂环烷基(C₂-C₄杂环烷基)。杂环烷基可以是3元至6元杂环烷基。环烷基可以是5元至6元杂环烷基。这样的杂环烷基的实例包括但不限于吖丙啶基、氮杂环丁烷基、二氧戊环基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异

唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、

唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、奎宁环基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、噻吗啉基(thiamorpholinyl)、1-氧代-硫代吗啉基、1,1-二氧代-硫代吗啉基、1,3-二氢异苯并呋喃-1-基、3-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-4-基、甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基和2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基。术语杂环烷基还包括碳水化合物(包括但不限于单糖、二糖和寡糖)的所有环形式。应理解，当提及杂环烷基中的碳原子数时，杂环烷基中的碳原子数与构成杂环烷基(即杂环烷基环的骨架原子)的原子(包括杂原子)的总数不同。除非在说明书中另有具体说明，杂环烷基任选被例如氧代、卤素、氨基、腈、硝基、羟基、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基等取代。杂环烷基可任选地被氧代、卤素、甲基、乙基、-CN、-CF₃、OH、-OMe、NH₂或-NO₂取代。杂环烷基可任选地被氧代、卤素、甲基、乙基、-CN、-CF₃、OH或-OMe取代。杂环烷基可任选地被卤素取代。

“治疗有效量”或“有效量”是指作为单一剂量或作为一系列剂量的一部分向对象(例如，哺乳动物，例如人)施用的有效产生期望效果的化合物的量。有效量可以是产生治疗效果所需的量。有效量可以是产生图像或其他可检测读数所需的量。有效量可以以体积、以质量计的体积、以体积计的体积、质量、以体积计的质量、以质量计的质量、浓度、放射性(例如，居里、拉德、贝可)或本领域已知的任何其他度量来测量。

“治疗剂”包括能够产生期望生理应答的任何实体。治疗剂可包括抗纤维化剂、抗癌剂、化学治疗剂、放射治疗剂等。

对象(例如，哺乳动物，例如人)的“治疗”包括在尝试改变对象的自然进程中使用的任何类型的干预。治疗可包括在病理事件开始或与致病剂接触之后施用药物组合物，并且包括稳定病症(例如，病症不恶化，例如，癌症不转移等)或缓解病症(例如，肿瘤尺寸降低、癌症缓解、不存在自身免疫病的症状等)。在另一些实施方案中，治疗还包括预防性治疗(例如，当怀疑个体患有本文中所述的病症时，施用本文中所述的组合物)。

如本文中所用，“对象”、“个体”和“患者”可互换使用。这些术语中没有一个暗示医学专业人员需要施用本文中公开的化合物。任何这些术语是指哺乳动物。哺乳动物可以是人。

除非另外指明，否则术语“多价缀合物”、“缀合物”、“多价化合物”和“化合物”可互换使用。

多价化合物

本公开内容涉及包含与多点模板缀合的两个或更多个FAP结合配体(也被称为“靶向配体”或“Q”)的多价化合物。两个或更多个FAP结合配体可被配置成以其活性形式结合FAP的两条二聚体链。二聚体FAP的激活可导致整个复合物的内化。除包含一个或更多个FAP结合配体之外，可用活性剂(“X”)进一步官能化多点模板。活性剂在FAP表达细胞内使用比布置在胞外空间中更有利。在一些替代的实施方案中，化合物不是内化的并且保持布置在胞外空间中。多价化合物还可包含一个或更多个间隔基。间隔基可例如将FAP结合配体和/或活性剂定向至期望构象或空间排列。间隔基和与间隔基连接的FAP结合配体或活性剂可被称为“臂”。多价化合物可具有多个FAP结合或活性剂臂。多价化合物可具有两个、三个、四个、五个或六个FAP结合臂，或者被称为Q臂。将FAP结合配体Q与多点模板结合的间隔基在本文中可被称为Q间隔基。在另一些实施方案中，多价化合物可包含通过间隔基(在本文中有时被称为X臂)与多点模板连接的一种或更多种活性剂(“X”)，其中间隔基本身可被称为X间隔基。一个、两个、三个或更多个X臂可布置在多价化合物内。

FAP结合配体Q可以是以1微摩尔(μM)或更大的亲和力(例如K_D、EC₅₀)与成纤维细胞活化蛋白(例如成纤维细胞活化蛋白α)结合的任何剂。应注意，较大/较高亲和力与较低解离常数(K_D)或给出半最大应答(EC₅₀)的有效浓度相关。FAP结合配体可具有10μM或更小(例如5μM、2μM、1μM、500纳摩尔(nM)、200nM、100nM、50nM、20nM、10nM、5nM、1nM、500皮摩尔(pM)、200pM、100pM等)的K_D或EC₅₀。FAP结合配体可具有1pM或更大(例如2pM、5pM、10pM、20pM、50pM、100pM、200pM、500pM、1nM、2nM、5nM、10nM、20nM、50nM、100nM、200nM、500nM、1μM、2μM、5μM等)的K_D或EC₅₀。第一FAP结合配体的结合可促进后续(例如，第二、第三等)FAP结合配体的结合。两个或更多个FAP结合配体的结合可以是协同的。第一FAP结合配体的结合可局部提高有效浓度。两个或更多个FAP结合配体可与FAP二聚体的两条链结合。三个或更多个FAP结合配体可与FAP三聚体的两条链结合。四个或更多个FAP结合配体可与FAP四聚体的四条链结合。只有一个FAP结合配体可与靶FAP结合。

FAP结合配体Q可以是与FAP缔合的任何剂。作为非限制性实例，Q可以是分子(例如，小分子、大分子、系留分子)、氨基酸(例如，天然氨基酸、非天然氨基酸、官能化氨基酸)、肽(例如，多肽、天然肽、非天然肽、线性肽、环状肽等)，或其任何组合。Q可包括吡咯烷衍生物。Q可以是氰基吡咯烷衍生物。Q可以是氟吡咯烷衍生物。Q可包括偕二氟化吡咯烷。

Q可具有结构：

其中每个R¹和R^1’独立地为氢、烷基、芳基、-CN、-COOH、-B(OH)₂、SO₃H或PO₃H；每个R²和R^2’独立地为氢、卤素、烷基、芳基或杂芳基；R³是氢、烷基、烯基、芳基或杂芳基；

在整个本公开内容中也被称为“环A”的

是3元至10元杂环或5元至10元杂芳基，其中每个杂环或杂芳基可含有一个或更多个N原子并且被R⁴取代；并且R⁴是氢、卤素、烷基、烯基、芳基或杂芳基。

每个R²和R^2’可独立地为氢、卤素或烷基。每个R²和R^2’可独立地为氢、卤素或烷基。每个R²和R^2’可独立地为氢或卤素。两个R²或两个R^2’基团可以是氢、卤素、烷基或卤代烷基。两个R²或两个R^2’基团可以是氢、卤素或烷基。两个R²或两个R^2’基团可以是氢。两个R²或两个R^2’基团可以是卤素。两个R²或两个R^2’基团可以是烷基。每个R²和R^2’可独立地为氢、氟或氯。每个R²和R^2’可独立地为氢、氟或氯。每个R²和R^2’可独立地为氢或氟。每个R²和R^2’可独立地为氟或氯。两个R²或两个R^2’基团可以是氢、氟或氯。两个R²基团可以是氢。两个R²基团可以是氟。两个R²基团可以是氯。两个R^2’基团可以是氢。两个R^2’基团可以是氟。两个R^2’基团可以是氯。

每个R¹和R^1’可独立地为氢、烷基、芳基、-CN、-COOH、-B(OH)₂、SO₃H或PO₃H。每个R¹和R^1’可独立地为氢、烷基、芳基、-CN、-COOH或-B(OH)₂。每个R¹和R^1’可独立地为氢、烷基、-CN或-B(OH)₂。每个R¹和R^1’可独立地为氢、-CN或-B(OH)₂。R¹可以是氢并且R^1’可以是-CN或-B(OH)₂。R¹可以是氢并且R^1’可以是-B(OH)₂。R¹可以是氢并且R^1’可以是-CN。R^1’可以是(S)立体化学构型。R^1’可以是(R)立体化学构型。

R³可以是氢、烷基、卤代烷基、烯基、芳基或杂芳基。R³可以是氢、烷基、烯基或芳基。R³可以是氢、烷基或烯基。R³可以是氢或烷基。R³可以是氢或CH₃。R³可以是CH₃。R³可以是(S)立体化学构型。R³可以是(R)立体化学构型。R³可以是氢。

可以是3元至10元杂环或5元至10元杂芳基，其中每个杂环或杂芳基可含有一个或更多个N原子并且任选地被R⁴取代。环A可以是任选地经取代的5元至10元杂芳基。环A可以是任选地经取代的单环5元或6元杂芳基。环A可以是任选地经取代的双环9元或10元杂芳基。环A可以是任选地经取代的吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、喹啉基、萘啶基、吡啶并哒嗪基、吡啶并嘧啶基、四氢喹啉基、二氢萘啶基、二氢吡啶并哒嗪基、二氢吡啶并嘧啶基、三唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基、

唑并吡啶基、噻二唑并嘧啶基、吡咯基、吡唑基、三唑基、咪唑基、

唑基、异

唑基、

二唑基、噻唑基、异噻唑基或噻二唑基。环A可以是吡啶基、喹啉基、萘啶基、吡啶并吡嗪基、吡啶并嘧啶基、四氢喹啉基、二氢萘啶基、二氢吡啶并哒嗪基、二氢吡啶并嘧啶基、三唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、

唑并吡啶基、噻二唑并嘧啶基、吡咯基、吡唑基、三唑基、咪唑基、

唑基或噻唑基。环A可选自以下基团：

环A可以是任选地经取代的吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、喹啉基、萘啶基(例如1,8-萘啶基、1,7-萘啶基、1,6-萘啶基、1,5-萘啶基)、吡咯并吡啶基、吡唑并吡啶基、吡咯基、吡唑基、三唑基或咪唑基。环A可以是任选地经取代的吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、吡唑基、三唑基或咪唑基。环A是任选地经取代的吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或哒嗪基。环A是任选地经取代的吡啶基或嘧啶基。环A可以是任选地经取代的嘧啶基。环A可以是任选地经取代的吡啶基。

R⁴可以是氢、卤素、烷基、烯基、芳基或杂芳基。R⁴可以是氢、卤素或烷基。R⁴可以是卤素。R⁴可以是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、CF₃、CHF₂或CH₂F。R⁴可以是H、F、Cl、Br、CH₃或CF₃。R⁴可以是Cl、CH₃或CF₃。R⁴可以是Cl或CH₃。R⁴可以是Cl或CF₃。R⁴可以是CH₃或CF₃。R⁴可以是Cl。

环A可以是氯吡啶。环A可以是2-氯吡啶。环A可以是3-氯吡啶。环A可以是4-氯吡啶。环A可以是5-氯吡啶。环A可以是6-氯吡啶。

Q可包含表1的一种或更多种结构。

表1.FAP靶向配体Q

多价缀合物对于每个Q可具有相同的FAP结合配体。每个Q是不同的FAP结合配体。多价化合物可具有两个相同的FAP结合配体(Q¹)和一个或更多个另外的FAP结合配体(Q²)。两个Q配体可以是彼此的立体异构体或区域异构体。每个Q可具有相同的间隔基L^Q。每个Q可具有不同的间隔基(例如，L^Q1，L^Q2等)。两个或更多个Q可具有相同的间隔基L^Q1，而一个或更多个另外的Q可具有不同的间隔基L^Q2。

一个或更多个Q可被W替代，前提是两个或更多个Q不是W。一个或更多个Q可被W替代，前提是两个Q是FAP结合配体。W可包含溶解度增强剂或PK/PD调节剂。W可包括聚乙二醇(PEG)、糖、肽或肽聚糖。W可包括PEG、糖、肽或肽聚糖以实现更好的可溶性和PK/PD特性。W可包括一种或更多种单糖、二糖、肽、肽聚糖、和/或血清白蛋白。W可包括一种或更多种PEG、肽、肽聚糖、或血清白蛋白。W可不包括糖。W可不包括单糖、二糖或多糖。W可不包括聚糖。W可包括糖基化氨基酸。W可包括糖基化半胱氨酸。W可包括游离羧酸。W可包括PEG。

间隔基“L”可包含任何稳定的原子排列。间隔基包含一个或更多个L’。每个L’独立地选自：酰胺、酯、脲、碳酸酯、氨基甲酸酯、二硫化物、氨基酸、胺、醚、烷基、烯烃、炔烃、杂烷基(例如，聚乙二醇)、环烷基、芳基、杂环烷基、杂芳基、碳水化合物、聚糖、肽聚糖、多肽，或其任何组合。任何间隔基可包括以下单元中的任一个或更多个：酰胺、酯、脲、碳酸酯、氨基甲酸酯、二硫化物、氨基酸、胺、醚、烷基、烯烃、炔烃、杂烷基(例如，PEG)、环烷基、芳基、杂环烷基、杂芳基、碳水化合物、聚糖、肽聚糖、多肽，或其任何组合。间隔基L或L’可包括溶解度增强剂或PK/PD调节剂W。间隔基可包括糖基化氨基酸。间隔基可包括一种或更多种单糖、二糖、多糖、聚糖或肽聚糖。间隔基可包括可释放部分(例如，二硫键、酯，或可在体内被切割的其他部分)。间隔基可包括一个或更多个单元，例如乙烯(例如聚乙烯)、乙二醇(例如PEG)、乙醇胺、乙二胺等(例如丙二醇、丙醇胺、丙二胺)。间隔基可包括寡乙烯、PEG、烷基链、寡肽、多肽、刚性官能团、肽聚糖、寡脯氨酸、寡哌啶，或其任何组合。间隔基可包括寡乙二醇或PEG。间隔基可包括寡乙二醇。间隔基可包括PEG。间隔基可包括寡肽或多肽。间隔基可包括寡肽。间隔基可包括多肽。间隔基可包括肽聚糖。间隔基可不包括聚糖。间隔基可不包括糖。刚性官能团可以是寡脯氨酸或寡哌啶。刚性官能团可以是寡脯氨酸。刚性官能团可以是寡哌啶。刚性官能团可以是寡苯基。刚性官能团可以是寡炔烃。寡脯氨酸或寡哌啶可具有约2直至并包括约50、约2至约40、约2至约30、约2至约20、约2至约15、约2至约10、或约2至约6个重复单元(例如脯氨酸或哌啶)。

间隔基(例如，L^Q或L^X)可包含以下单元中的一个或更多个：

或其任何组合，其中p为0至约20的整数，并且n为1至约32的整数。间隔基可包含结构：

Q间隔基可包含表2中所述的一种或更多种结构。

表2.Q间隔基。

间隔基(例如，L^X或L^Q)可具有

或更大的长度。间隔基可具有

或更小的长度。在以下列表中，范围应理解为包括上限和下限(例如，1至3包括1、2和3)。间隔基可具有约10至约

约10至约

约10至约

约10至约

约15至约

约15至约

约15至约

约15至约

约20至约

约20至约

约20至约

的长度。间隔基(例如，L^X或L^Q)可具有约10至约

约10至约

或约10至约

的长度。间隔基(例如，L^X或L^Q)可具有约15至约

约15至约

或约15至约

的长度。间隔基(例如，L^X或L^Q)可具有约20至约

约20至约

或约20至约

的长度。间隔基(例如，L^X或L^Q)可具有约15至约

的长度。

间隔基可将两个或更多个单元(例如，活性剂、靶向配体、多点模板)定向为特定的朝向或距离。例如，间隔基可将靶向配体和活性剂分开特定的距离，或者间隔基可将靶向配体和活性剂定向于特定的空间排列或构象。间隔基可将两个靶向配体分开特定的距离，或者间隔基可将两个靶向配体定向于特定的空间排列或构象。间隔基可将靶向配体或活性剂与多点模板分开特定的距离，或者间隔基可将靶向配体或活性剂相对于多点模板定向于特定的空间排列或构象。间隔基可包含柔性和刚性元件的组合(例如，多肽间隔基、聚酯间隔基、寡哌啶间隔基、寡脯氨酸间隔基)。间隔基还可含有构象限制。间隔基可以是基本上直的(例如，聚炔或聚苯间隔基)。间隔基可具有特定形状(例如，C形、V形、L形、S形、螺旋形)。

除间隔之外，间隔基可提供另外的实用功能。例如，间隔基可调节(例如，提高、降低、增强、减轻、优化)多价化合物或其部分的某些特性。例如，间隔基可调节物理化学、药理学、药效学、药代动力学、生物物理学、生物学、物理学或商业特性。间隔基可包括三价接头，其中配体-药物化合物的接头的第三个位置是接头中半胱氨酸的游离-COOH。-COOH基团可用于(例如，在本文中所述的位置W处)连接PEG化合物、糖、肽、肽聚糖或血清白蛋白。接头可包括PEG化合物、肽、肽聚糖或血清白蛋白。间隔基可不包括糖。间隔基可调节血浆蛋白结合、膜渗透性、可溶性、亲脂性、极性表面积、总表面积、尺寸、质量、非共价键合(例如，氢键合、离子键合、范德华相互作用)、电离(例如，酸度、碱度)、代谢、缀合、分泌(excretion)、保留，或其任何组合。间隔区可通过调节一种或更多种因素(例如，渗透性、亲脂性或蛋白质结合)来增强停留时间或内化。间隔基可包含一个或更多个赋予期望效果的基团。例如，间隔基可包含底物以促进主动转运到细胞中。间隔基可通过增强血浆蛋白结合来降低分泌。间隔基可含有一个或更多个糖部分，或者一个或更多个蛋白质或蛋白质片段(即肽，多肽)。间隔基可包含一个或更多个碳水化合物部分(例如，脂质、脂肪酸)。间隔基可以是糖基化的(例如，含有一个或更多个单糖、二糖、多糖、聚糖或糖原)。间隔基可包含糖基化氨基酸。

间隔基L^X可包含如表3所示的二价基团，其中“Y”和“X”分别表示与多点模板和活性剂的连接。

表3.X间隔基

其中n和p是0直至并包括100的整数，并且W包含一个或更多个单糖、二糖、肽、肽聚糖、溶解度增强剂、PK/PD调节剂，或其组合，并且示出X和Y仅为注意与X和Y的连接；应理解，X和Y不是L^X的一部分。

W可包含一种或更多种单糖、二糖、寡糖、多糖、肽、肽聚糖、血清白蛋白、溶解度增强剂、PK/PD调节剂，或其组合。W可调节药理学、药代动力学、药效学或物理化学特性。W可促进内化。W可改善水溶性。W可提高血浆蛋白结合。W可调节(例如降低)化合物的分泌、消除、代谢、稳定性(例如，酶稳定性、血浆稳定性)、分布、毒性，或其组合。

例如在W中发现的单糖可以以其线性和环状形式之间的平衡存在。单糖可以是线性的。单糖可以是环状的。单糖可作为D异构体存在。单糖可作为L异构体存在。作为非限制性实例，W可包含一种或更多种选自以下的单糖：核糖、半乳糖、甘露糖、葡糖果糖、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰胞壁酸，或其衍生物(例如，环状或线性形式、甲基化衍生物、乙酰化衍生物、磷酸化衍生物、胺化衍生物、氧化或还原衍生物、D或L异构体、同位素、立体异构体、区域异构体、互变异构体，或其组合)。

如可布置在W内的二糖、寡糖或多糖可含有O-键、N-键、C-键，或其组合。二糖、寡糖或多糖可含有α-或β-取向的糖苷键。W可包含寡糖、多糖或聚糖(例如，糖蛋白、糖肽、糖脂、糖原、蛋白聚糖、肽聚糖等)。

W可包含氨基酸、肽、多肽或蛋白质。氨基酸可以是天然氨基酸(例如丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和缬氨酸(Val))。或者，氨基酸可以是非天然的或经修饰的氨基酸。W可包含与氨基酸(例如谷氨酸、天冬氨酸)的侧链的共价连接的糖或糖衍生物。

W可包含糖基化氨基酸，例如：

肽或多肽可由天然和/或非天然的多个氨基酸构成。肽(或肽聚糖)可具有约2个和约20个氨基酸。氨基酸、肽、多肽或蛋白质(例如，例如布置在W内或构成W)可具有增强化合物的一种或更多种特性(例如，调节可溶性、尺寸、渗透性、蛋白质结合、靶结合、分泌、代谢、毒性、分布、半衰期和/或作用持续时间)的药理学或物理化学作用。W可以是药代动力学调节剂。药代动力学调节剂可以是可调节(例如，增强)蛋白结合的肽或蛋白。药代动力学调节剂可增强血浆蛋白结合。药代动力学调节剂降低了消除、分泌或代谢的速率。药代动力学调节剂可提高化合物的作用持续时间。

间隔基L^Q或L^X与相应的靶向配体Q或活性剂X一起可被称为Q臂、X臂或统称为“臂”。提供了具有三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个臂的多价化合物。多价化合物可具有两个Q臂和一个X臂。多价化合物可具有三个Q臂和一个X臂。多价化合物可具有四个Q臂和一个X臂。多价化合物可具有六个Q臂和一个X臂。多价化合物可具有两个Q臂和两个X臂。Q可被W替代，前提是两个或更多个Q不是W(例如，一个Q是W，两个Q是FAP结合配体)。

如本文中所述，两个至六个Q臂和一个或更多个X臂在接合点“Y”(也被称为多点模板)处连接。多点模板是可被官能化(例如，用Q臂和X臂)的分子构建体。这样的多点模板可通过非限制性实例的方式包括一个或更多个胺、酰胺、醇、酯、酸、炔、叠氮化物、三唑、杂环、硼酸、卤化物、亲电试剂、亲核试剂或参与缀合(例如通过酰胺偶联、酯合成、点击化学、Suzuki、Negishi、Buchwald、chan-lam、Ulman或用于连接两个基团的其他相关化学转化)的另外的官能团。多点模板可含有多个胺。多点模板含有多个酰胺。多点模板可含有多个醚。多点模板Y可包括基于三酸的模板、基于寡赖氨酸的模板、Trebler亚磷酰胺模板、基于寡-羟基脯氨醇的模板、基于三(2-氨基-2-(羟基甲基)-1,3-丙二醇)的模板、基于柠檬酸的模板、(2-(3,5-二乙炔基苯甲酰胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯模板或N-(2-氨基乙基)-3,5-二(1H-1,2,3-三唑-5-基)苯甲酰胺模板。多点模板Y可包括基于三酸的模板、基于寡赖氨酸的模板、Trebler亚磷酰胺模板或基于寡-羟基脯氨醇的模板。多点模板Y可包括基于三(2-氨基-2-(羟基甲基)-1,3-丙二醇)的模板。多点模板Y可包含如表4所述的结构。

表4.多点模板

其中**表示Y与L^Q之间的连接，并且***表示Y与L^X之间的连接。

多点模板Y可包括基于二酸的模板。多点模板Y可包括基于三酸的模板。多点模板Y可包括基于四酸的模板。多点模板Y可包括基于寡赖氨酸的模板。多点模板Y可包括Trebler亚磷酰胺模板。多点模板Y可包括基于寡-羟基脯氨醇的模板。多点模板可在每个Q臂中包含不同的Q。多点模板可在相应的两个或更多个Q臂中包含两个或更多个相同的Q，并且在相应的至少一个Q臂中包含至少一个另外的(即，不同的)Q。多点模板Q通过包含PEG部分的Q间隔基与两个Q连接。多点模板可以是三价的。多点模板可以是四价的。多点模板可以是五价的。多点模板可以是六价的。与其连接的多点模板或间隔基可包含可在体内被切割的可释放部分(例如，二硫键、酯)。

活性剂

如本说明书通篇所述，多价化合物可含有多种不同的活性剂(“X”)。例如，X可以是可检测剂(例如，荧光染料、近红外(near-infrared，NIR)染料、放射显像剂、螯合剂)或治疗剂(例如，药物、光动力治疗剂、放射治疗剂、化学治疗剂、抗纤维化剂、抗癌剂、螯合剂)。X可以是可用于检测或治疗肿瘤的任何实体(例如，可检测或治疗剂)。X在肿瘤的检测和治疗二者中可均有效。X可用于检测或治疗纤维化组织。X可用于治疗或检测表达成纤维细胞活化蛋白(“FAP”)的任何细胞(例如成纤维细胞或CAF)。X可以是可检测剂。X可以是治疗剂。X可以是荧光染料或放射显像剂。X可以是光动力治疗剂。X可以是放射治疗剂。X可降低或消除成纤维细胞合成或转运胞外基质组分(例如胶原、弹性蛋白、糖胺聚糖、蛋白聚糖(例如串珠蛋白聚糖)和糖蛋白)的能力。X针对癌细胞、癌症相关成纤维细胞(CAF)、肿瘤微环境因子(例如生长因子(例如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)、胰岛素样生长因子1和2(IGF1和IGF2)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)、表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)、肝素结合EGF样生长因子(heparin-binding EGF-like growth factor，HB-EGF)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF))、激素、信号传导分子、血管生成刺激剂、赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase，LOX)、胶原、弹性蛋白、糖胺聚糖、糖蛋白或蛋白聚糖(例如串珠蛋白聚糖))。

活性剂可以是荧光染料。X可以是激发和/或发射波长为200至1,000nm、200至800nm、300至1,000nm、300至800nm、400至1,000nm、400至800nm、500至1,000nm或500至800nm的荧光染料。X可以是激发和/或发射波长为200至1,000nm的荧光染料。X可以是激发或发射波长为400至1,000nm的荧光染料。X可以是激发或发射波长为400至800nm的荧光染料。X可以是激发或发射波长为500至800nm的荧光染料。X可以是激发或发射波长为500至700nm的荧光染料。X可以是激发或发射波长为650至1,050nm的荧光染料。X可以是激发或发射波长为650至850nm的荧光染料。X可以是激发或发射波长为650至750nm的荧光染料。X可以是激发或发射波长在可见光范围(例如，约400至约800nm，或约380至约740nm)内的荧光染料。X可以是激发或发射波长在近红外(“NIR”)范围(例如，约750至约1,400nm)内的荧光染料。

缀合物可包括可检测剂，例如近红外(NIR)染料或放射性显像剂。可用作根据本教导的可检测剂的代表性化合物包括但不限于染料(例如罗丹明染料、花青染料、荧光素染料等)、正电子发射体层成像(positron emission tomography，PET)显像剂、放射性标记剂等。罗丹明染料的代表性实例包括但不限于罗丹明B、罗丹明6G、罗丹明123等。X可以是罗丹明染料。花青染料的实例包括但不限于Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7、Cy7.5、磺基-Cy3、磺基-Cy5和磺基-Cy7。荧光素染料的实例包括但不限于荧光素、荧光素马来酰亚胺(fluorescein maleimide，FM)、5-氨基-荧光素、6-氨基-荧光素、异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)、荧光素酰胺(fluorescein amidite，FAM)、伊红、钙黄绿素、汞溴素(merbromin)、赤藓红、NHS-荧光素、Rose Bengal、DyLight Fluor、OregonGreen、Tokyo Green、Singapore Green、Philadelphia Green、碘花青绿等。X可以是花青或荧光素染料。X可以是荧光素马来酰亚胺或FITC。

可使用的代表性近红外染料包括但不限于Alexa

680、

5.5、

680、

680LT、Alexa

750、

7、

750、

750、

800、

800CW、Alexa

790、

680、

680R、

750、

770、

790、

800、LS288、IR800、SP054、S0121、KODAK、IRD28、S2076、S0456，及其衍生物。X可以是近红外染料。X可以是S0456。

活性剂可以是螯合剂。螯合剂可以是能够结合金属或离子的任何试剂。螯合剂可包含多个胺。螯合剂可以是环状的并且可含有三个或更多个胺。螯合剂可选自：DOTA、NOTA、NOTP、PCTA、DATA^M、TRAP、DFO、THP、HBED、DEDPA、TACN、TACN-TM、NODASA、NOTPME、PrP9、TACD、H₃NOKA、TACN-meHP、TACN-HP、TACN-TX、TACN-HB、TACN-TM-Bn、p-NO₂-Bn-NOTA、p-NO₂-Bn-Oxo、p-NO₂-Bn-DOTA和p-NO₂-Bn-PCTA。X可以是DOTA。X可以是NOTA。X可以是NOTP。X可以是PCTA。X可以是TACN。

X可包括放射性同位素。X可包含与放射性同位素结合(例如，以任何合适的方式，例如通过螯合)的螯合剂。放射性同位素可用于检测肿瘤或纤维化组织(例如，通过PET)。放射性同位素可用于治疗肿瘤或纤维化组织(例如放射治疗)。X可包含(例如，可含有与以下结合的螯合剂)^99mTc、¹¹¹In、⁶⁷Ga、¹⁰⁵Rh、¹²³I、¹⁴⁷Nd、¹⁵¹Pm、¹⁵³Sm、¹⁵⁹Gd、¹⁶¹Tb、¹⁷¹Er、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re或²⁰¹Tl。X可包含^99mTc或¹¹¹In，或其螯合络合物(例如NOTA、DOTA等)。X可包含^99mTc。X可包含¹¹¹In。X可包含¹⁸F、⁶⁸Ga，或其螯合络合物(例如，NOTA、DOTA等)。X可包含¹⁸F。X可包含⁶⁸Ga。X可与选自^99mTc、¹¹¹In,¹⁸F、⁶⁸Ga、¹²⁴I、¹²⁵I和¹³¹I的放射显像剂结合(例如以任何合适的方式，例如通过螯合)。

X可包含用于治疗癌症的金属或金属螯合剂络合物。X可包含砷、锑、铋、金、镥、钒、铁、铑、钛、镓或铂，或与螯合剂络合的任何上述金属的组合。X可包含砷螯合络合物。X可包含铋螯合络合物。X可包含铑螯合络合物。X可包含镓螯合络合物。X可包含铂螯合络合物。上述金属的任何同位素可用于X。X可用于放射性核素治疗。X可包含选自³²P、⁸⁹Sr、⁹⁰Y、^117mSn、¹³¹I、¹⁵³Sm、¹⁶⁹Er、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、¹⁴⁹Tb、²¹¹At、²¹²Bi、²¹³Bi和²²⁵Ac的放射治疗剂。X可包含放射治疗剂⁹⁰Y、¹⁷⁷Lu或²²⁵Ac，或其螯合复合物(例如，被NOTA、DOTA等螯合)。X可包含⁹⁰Y。X可包含放射治疗剂，其为¹⁷⁷Lu。X可包含²²⁵Ac。

活性剂也可以是多种形式的治疗剂。例如，X可以是抗癌或抗纤维化药物。X可以是选自抗有丝分裂剂、DNA烷化剂、蛋白质合成抑制剂、抗代谢物和抗肿瘤抗生素的治疗剂。X可以是抗有丝分裂剂。抗有丝分裂剂的非限制性实例包括紫杉醇、多西他赛、艾日布林或雌莫司汀。X可以是DNA烷化剂。通过非限制性实例的方式，X可以是选自环磷酰胺、顺铂或卡铂的DNA烷化剂。X可以是蛋白质合成抑制剂。作为非限制性实例，X可以是选自以下的蛋白质合成抑制剂：利福霉素、利奈唑胺、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素，及其衍生物。X可以是抗代谢物。例如可用于X的抗代谢物的一些实例包括但不限于5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、卡培他滨、阿糖胞苷、硫鸟嘌呤，及其衍生物或类似物。X可以是抗肿瘤抗生素。抗肿瘤抗生素的非限制性实例包括四环素、阿霉素、柔红霉素、放线菌素D，及其衍生物或类似物。

X可包括抗体、抗体片段、毒素、siRNA、miRNA、shRNA和蛋白水解靶向嵌合体(proteolysis-targeting chimera，PROTAC)。X可包含小干扰RNA(“siRNA”)。X可包含微RNA(“miRNA”)。X可包含短发夹RNA(“shRNA”)。

X可包含选自以下的治疗剂：成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growthfactor receptor，FGFR)同种型的抑制剂、血小板衍生生长因子受体(platelet-derivedgrowth factor receptor，PDGFR)同种型的抑制剂、血管内皮生长因子受体(vascularendothelial growth factor receptor，VEGFR)同种型的抑制剂、磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase，PI3K)同种型的抑制剂、rho相关蛋白激酶(Rho-associatedprotein kinase，ROCK)的抑制剂、黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)同种型的抑制剂、SMAD同种型的调节剂、干扰素基因刺激物(stimulator of interferon gene，STING)同种型的调节剂、toll样受体(toll-like receptor，TLR)同种型(例如TLR7)的抑制剂、微管溶素(tubulysin)同种型(例如微管溶素B)的抑制剂、转化生长因子β(TGFβ)受体的抑制剂、β-联蛋白/Wnt途径的调节剂以及活化B细胞的核因子κ-轻链增强子(NF-κB)的抑制剂。

X可包括选自成纤维细胞生长因子受体(FGFR)同种型的抑制剂、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)同种型的抑制剂和血管内皮生长因子受体(VEGFR)同种型的抑制剂的治疗剂。X可包括FGFR的抑制剂。FGFR抑制剂的非限制性实例包括帕那替尼(ponatinib)、多韦替尼(dovitinib)、rogaratinib，或其类似物。X可包括PDGFR抑制剂。PDGFR抑制剂的非限制性实例包括索拉非尼、伊马替尼(和甲磺酸伊马替尼)、舒尼替尼、帕那替尼、axitlinib、尼达尼布，或其类似物。X可包括VEGFR的抑制剂。VEGFR抑制剂的实例包括但不限于瑞戈非尼(regorafenib)、索拉非尼和舒尼替尼。

X可包括选自以下的治疗剂：磷酸肌醇3-激酶(PI3K)同种型的抑制剂、ROCK抑制剂、FAK同种型的抑制剂、SMAD和/或TGF-β同种型的调节剂以及STING同种型的调节剂。

X可包括为PI3K同种型抑制剂的治疗剂。X可包括为ROCK抑制剂的治疗剂。X可包括ROCK1抑制剂。X可包括ROCK2抑制剂。X可包括FAK抑制剂。FAK抑制剂的非限制性实例包括defactinib、nitidine、masitinib和conteltinib。

X可包括SMAD和/或TGF-β的抑制剂。通过非限制性实例的方式，SMAD和/或TGF-β的抑制剂可以是SRI-011381、kartogenin、吡非尼酮、(E)-SIS3或asiaticoside。X可包括表5的SMAD和/或TGF-β抑制剂或其基团。

表5.SMAD和/或TGF-β的抑制剂。

X可包括STING途径的抑制剂。STING途径抑制剂的实例包括但不限于omaveloxolone(RTA 408)、GSK690693、羰基氰化物3-氯苯腙、C-178和C-176。X可包括表6的STING抑制剂或其基团。

表6.STING途径的抑制剂。

X可包括选自以下的治疗剂：TLR同种型(例如TLR7)的调节剂(例如激活剂、激动剂、抑制剂、拮抗剂)、微管溶素同种型(例如微管溶素B)、TGFβ受体的抑制剂、β-联蛋白/Wnt途径的调节剂和NF-κB的抑制剂。X可包括TLR激动剂。X可包括TLR7的激活剂。X可包括选自表7的TLR调节剂或其基团。

表7.TLR激动剂。

X可包括微管溶素B。X可包含微管溶素B或其衍生物的基团。X可包括Wnt/β-联蛋白信号传导途径或其基团的抑制剂。Wnt/β-联蛋白抑制剂的非限制性实例包括IWR-1、IWP-2、扑蛲灵(pyrvinium pamoate)、盐霉素、adavivint和汉黄芩素。

X可包括NF-κB或其自由基的抑制剂。X可包括表8的结构或其基团。

表8.NF-κB抑制剂。

本公开内容的化合物或化合物可具有表9的结构。

表9.实施例化合物

本公开内容的化合物可具有以下结构之一：

具有以下结构的化合物：

具有以下结构的化合物：

具有以下结构的化合物：

治疗方法

化合物在检测或治疗疾病方面可以是有效的。例如，具有与γ-发射放射性核素结合(例如以任何合适的方式，例如通过螯合)的螯合剂X的化合物在检测肿瘤方面可以是有效的。类似地，具有与锶-89或镭-223金属结合的螯合剂X的化合物在治疗肿瘤方面可以是有效的。化合物在治疗或检测非肿瘤疾病、障碍或病症上也可以是有效的。化合物在治疗纤维化、特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)、慢性肾病、皮肤纤维化、纤维化肝病、心脏纤维化、癌症、黑素瘤、结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、肉瘤、食管癌、美洲锥虫病心肌病(Chagas disease cardiomyopathy，CCC)、肺癌、头颈癌、原发性未知癌(cancer ofunknown primary，CUP)、甲状腺髓样癌(medullary thyroid cancer，MTC)、胸腺癌、神经内分泌肿瘤(neuroendocrine tumor，NET)、小肠癌、前列腺癌，或其组合方面是有效的。化合物在治疗纤维化、特发性肺纤维化(IPF)、慢性肾病、皮肤纤维化、纤维化肝病、心脏纤维化，或其组合方面是有效的。化合物在治疗纤维化方面是有效的。化合物在治疗特发性肺纤维化(IPF)、皮肤纤维化、纤维化肝病、心脏纤维化，或其组合方面是有效的。化合物在治疗癌症、黑素瘤、结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、肉瘤、食管癌、CCC、肺癌、头颈癌、CUP、MTC、胸腺癌、NET、小肠癌、前列腺癌，或其组合方面是有效的。化合物在治疗癌症方面是有效的。化合物在治疗黑素瘤方面是有效的。化合物在治疗结直肠癌方面是有效的。化合物在治疗胰腺癌方面是有效的。化合物在治疗乳腺癌方面是有效的。化合物在治疗食管癌方面是有效的。化合物在治疗头颈癌方面是有效的。化合物在治疗肺癌方面是有效的。化合物在治疗小肠癌方面是有效的。化合物在治疗前列腺癌方面是有效的。化合物在治疗CCC方面是有效的。化合物在治疗CUP方面是有效的。化合物有效治疗MTC方面是有效的。化合物在治疗NET方面是有效的。化合物在治疗肉瘤方面是有效的。化合物在治疗肿瘤方面是有效的。化合物在治疗与CAF相关的肿瘤方面是有效的。化合物在治疗过表达FAP的肿瘤方面是有效的。化合物在治疗与CAF相关的疾病方面是有效的。化合物在治疗与FAP过表达相关的疾病方面是有效的。化合物在治疗以成纤维细胞的过表达、过度增殖或其他异常功能为特征的疾病方面是有效的。化合物在治疗与肌成纤维细胞或活化成纤维细胞中FAP过表达相关的纤维化疾病方面是有效的。

化合物在治疗先前是难治性或对治疗有抗性的疾病或障碍(例如癌症或纤维化病症)方面是有效的。

在一些实施方案中，化合物可被内化。化合物结合FAP二聚体的两条链。FAP的二聚化可促进催化活性，并且抗FAP抗体而非单价Fab在与FAP结合之后在FAP阳性细胞中内化。在本文中的某些情况下，含有两个或更多个FAP结合配体(例如，具有期望间隔基长度和期望生理化学特性)的配体靶向剂可用于诱导或增强与其连接的药物和/或显像剂的内化。结合FAP二聚体可促进化合物的内化。化合物在内化之后更有效。化合物可保留1、2、3、4、6、8、12、18、24、36、48小时或更长时间。化合物可在1、2、3、4、6、8、12、18、24、36、48小时或更长时间是可检测到的。双FAP化合物可比单FAP或FAP抗体更慢地被消除或被排泄。多价化合物可用于诊断疾病。疾病可以是癌症。疾病可以是纤维化疾病或障碍。多价化合物可用于鉴定疾病(例如癌症)的来源。化合物可将放射性载荷递送至细胞(例如成纤维细胞或CAF)的内部。化合物可将近红外染料递送至细胞(例如成纤维细胞或CAF)的内部。化合物可将荧光染料递送至细胞(例如成纤维细胞或CAF)的内部。化合物可将抗癌治疗剂递送至细胞(例如成纤维细胞或CAF)的内部。

还提供了在CAF或FAP表达细胞附近提供活性剂的方法。所述方法包括将化合物施用于CAF或表达FAP的细胞。化合物在CAF或FAP表达细胞内保留至少24小时。

还提供了在CAF或FAP表达细胞附近提供活性剂的另一种方法。所述方法包括向包含或怀疑包含多个CAF或FAP表达细胞的对象施用化合物。化合物可在CAF或FAP表达细胞内保留至少24小时。“在细胞内”可以是化合物可保留在细胞内或细胞膜上。

还提供了在对象中检测肿瘤或纤维化组织的方法。所述方法包括(i)向怀疑患有肿瘤或纤维化组织的对象施用化合物，(ii)在对象内检测化合物(例如，光学地或放射性测量地)，和(iii)在对象中基于化合物的定位来鉴定肿瘤或纤维化组织。

还提供了用于在对象中治疗肿瘤或纤维化组织的方法。所述方法包括向个体施用治疗有效量的上述化合物。

药物组合物、施用途径和剂量

还提供了药物组合物。在一个实施方案中，药物组合物包含化合物和可药用载体。在另一个实施方案中，药物组合物包含多种化合物和可药用载体。在又一个实施方案中，药物组合物包含单独的或与一种或更多种本文中所述的其他化合物或其前药进一步组合的化合物的前药和可药用载体。

药物组合物还可包含至少一种不同于化合物的另外的药物活性剂。所述至少一种另外的药物活性剂可以是例如可用于治疗缺血-再灌注损伤的药剂。

药物组合物可通过将一种或更多种化合物与可药用载体和任选的一种或更多种另外的药物活性剂组合来制备。

如上所述，“有效量”是指足以实现期望的生物学作用的任何量。结合本文中提供的教导，通过在多种活性化合物中进行选择并权衡例如效力、相对生物利用度、患者体重、不良副作用的严重程度和施用方式的因素，可设计有效的预防性或治疗性治疗方案，其不引起大量不需要的毒性，并且仍对治疗特定对象有效。用于任何特定应用的有效量可根据例如所治疗的疾病或病症、所施用的特定化合物、对象的尺寸、或者疾病或病症的严重程度的因素而变化。本领域普通技术人员可凭经验确定特定化合物和/或其他治疗剂的有效量，而无需过度实验。根据一些医学判断，可使用最大剂量，即最高安全剂量。考虑每天多次剂量以实现化合物的合适的全身水平。可通过例如测量患者的药物峰值或持续血浆水平来确定合适的全身水平。“剂量(Dose)”和“剂量(dosage)”在本文中可互换使用。

通常来说，对于人对象，化合物的每日经口剂量为约0.01毫克/kg/天至1000毫克/kg/天。在每天一次或更多次施用中，0.5至50毫克/kg的经口剂量可产生治疗结果。根据施用方式，可适当调整剂量以达到期望的局部或全身药物水平。例如，静脉内施用可从每天一个数量级到低数个数量级而变化。在这样的剂量下在对象中的应答不足的情况下，可采用甚至更高的剂量(或通过不同的、更局部的递送途径的有效的更高剂量)达到患者耐受性允许的程度。考虑每天多次剂量以实现化合物的合适的全身水平。

对于本文中所述的任何化合物，治疗有效量最初可从动物模型确定。治疗有效剂量还可由已经在人中测试的化合物的和已知表现出类似药理学活性的化合物(例如其他相关活性剂)的人数据确定。肠胃外施用可需要更高的剂量。给予的剂量可基于所施用化合物的相对生物利用度和效力来调节。基于上述方法和其他方法调节剂量以达到最大功效是本领域公知的，并且在普通技术人员的能力范围内。

对于临床用途，任何化合物可以以等于或等同于0.2至2,000毫克(mg)化合物/千克(kg)对象体重/天的量施用。化合物可以以等于或等同于2至2,000mg缀合物/kg对象体重/天的剂量施用。化合物可以以等于或等同于20至2,000mg缀合物/kg对象体重/天的剂量施用。化合物可以以等于或等同于50至2,000mg缀合物/kg对象体重/天的剂量施用。化合物可以以等于或等同于100至2,000mg化合物/kg对象体重/天的剂量施用。化合物可以以等于或等同于200至2,000mg缀合物/kg对象体重/天的剂量施用。当待施用化合物的前体或前药而不是化合物本身时，其以等同于(即足以)递送上述量的化合物的量施用。

化合物的制剂可以以治疗有效量施用于人对象。通常的剂量范围为约0.01微克/kg至约2mg/kg体重/天。待施用的药物的剂量可取决于如以下的变量：病症的类型和程度、特定对象的总体健康状况、所施用的特定缀合物、用于配制化合物的赋形剂及其施用途径。常规实验可用于优化任何特定化合物的剂量和给药频率。

化合物可以以约0.001微克/kg至大于约500mg/kg的浓度施用。例如，浓度可以是0.001微克/kg、0.01微克/kg、0.05微克/kg、0.1微克/kg、0.5微克/kg、1.0微克/kg、10.0微克/kg、100.0微克/kg、500微克/kg、1.0mg/kg、5.0mg/kg、10.0mg/kg、15.0mg/kg、25.0mg/kg、30.0mg/kg、35.0mg/kg、40.0mg/kg、45.0mg/kg、50.0mg/kg、60.0mg/kg、70.0mg/kg、80.0mg/kg、90.0mg/kg、100.0mg/kg、150.0mg/kg、200.0mg/kg、250.0mg/kg、300.0mg/kg、350.0mg/kg、400.0mg/kg、450.0mg/kg、至大于约500.0mg/kg或其任何增量值。应理解，旨在涵盖这些值和范围之间的所有值和范围。

化合物可以以约0.2毫克/kg/天至大于约100mg/kg/天的剂量施用。例如，剂量可以是0.2mg/kg/天至100mg/kg/天、0.2mg/kg/天至50mg/kg/天、0.2mg/kg/天至25mg/kg/天、0.2mg/kg/天至10mg/kg/天、0.2mg/kg/天至7.5mg/kg/天、0.2mg/kg/天至5mg/kg/天、0.25mg/kg/天至100mg/kg/天、0.25mg/kg/天至50mg/kg/天、0.25mg/kg/天至25mg/kg/天、0.25mg/kg/天至10mg/kg/天、0.25mg/kg/天至7.5mg/kg/天、0.25mg/kg/天至5mg/kg/天、0.5mg/kg/天至50mg/kg/天、0.5mg/kg/天至25mg/kg/天、0.5mg/kg/天至20mg/kg/天、0.5mg/kg/天至15mg/kg/天、0.5mg/kg/天至10mg/kg/天、0.5mg/kg/天至7.5mg/kg/天、0.5mg/kg/天至5mg/kg/天、0.75mg/kg/天至50mg/kg/天、0.75mg/kg/天至25mg/kg/天、0.75mg/kg/天至20mg/kg/天、0.75mg/kg/天至15mg/kg/天、0.75mg/kg/天至10mg/kg/天、0.75mg/kg/天至7.5mg/kg/天、0.75mg/kg/天至5mg/kg/天、1.0mg/kg/天至50mg/kg/天、1.0mg/kg/天至25mg/kg/天、1.0mg/kg/天至20mg/kg/天、1.0mg/kg/天至15mg/kg/天、1.0mg/kg/天至10mg/kg/天、1.0mg/kg/天至7.5mg/kg/天、1.0mg/kg/天至5mg/kg/天、2mg/kg/天至50mg/kg/天、2mg/kg/天至25mg/kg/天、2mg/kg/天至20mg/kg/天、2mg/kg/天至15mg/kg/天、2mg/kg/天至10mg/kg/天、2mg/kg/天至7.5mg/kg/天或2mg/kg/天至5mg/kg/天。

化合物可以以约0.25毫克/kg/天至约25mg/kg/天的剂量施用。例如，剂量可以是0.25mg/kg/天、0.5mg/kg/天、0.75mg/kg/天、1.0mg/kg/天、1.25mg/kg/天、1.5mg/kg/天、1.75mg/kg/天、2.0mg/kg/天、2.25mg/kg/天、2.5mg/kg/天、2.75mg/kg/天、3.0mg/kg/天、3.25mg/kg/天、3.5mg/kg/天、3.75mg/kg/天、4.0mg/kg/天、4.25mg/kg/天、4.5mg/kg/天、4.75mg/kg/天、5mg/kg/天、5.5mg/kg/天、6.0mg/kg/天、6.5mg/kg/天、7.0mg/kg/天、7.5mg/kg/天、8.0mg/kg/天、8.5mg/kg/天、9.0mg/kg/天、9.5mg/kg/天、10mg/kg/天、11mg/kg/天、12mg/kg/天、13mg/kg/天、14mg/kg/天、15mg/kg/天、16mg/kg/天、17mg/kg/天、18mg/kg/天、19mg/kg/天、20mg/kg/天、21mg/kg/天、22mg/kg/天、23mg/kg/天、24mg/kg/天、25mg/kg/天、26mg/kg/天、27mg/kg/天、28mg/kg/天、29mg/kg/天、30mg/kg/天、31mg/kg/天、32mg/kg/天、33mg/kg/天、34mg/kg/天、35mg/kg/天、36mg/kg/天、37mg/kg/天、38mg/kg/天、39mg/kg/天、40mg/kg/天、41mg/kg/天、42mg/kg/天、43mg/kg/天、44mg/kg/天、45mg/kg/天、46mg/kg/天、47mg/kg/天、48mg/kg/天、49mg/kg/天或50mg/kg/天。

化合物可以0.01微摩尔至大于或等于500微摩尔的浓度施用。例如，剂量可以是0.01微摩尔、0.02微摩尔、0.05微摩尔、0.1微摩尔、0.15微摩尔、0.2微摩尔、0.5微摩尔、0.7微摩尔、1.0微摩尔、3.0微摩尔、5.0微摩尔、7.0微摩尔、10.0微摩尔、15.0微摩尔、20.0微摩尔、25.0微摩尔、30.0微摩尔、35.0微摩尔、40.0微摩尔、45.0微摩尔、50.0微摩尔、60.0微摩尔、70.0微摩尔、80.0微摩尔、90.0微摩尔、100.0微摩尔、150.0微摩尔、200.0微摩尔、250.0微摩尔、300.0微摩尔、350.0微摩尔、400.0微摩尔、450.0微摩尔、至大于约500.0微摩尔或其任何增量值。应理解，旨在涵盖这些值和范围之间的所有值和范围。

化合物可以0.10微克/mL至500.0微克/mL的浓度施用。例如，浓度可以是0.10微克/mL、0.50微克/mL、1微克/mL、2.0微克/mL、5.0微克/mL、10.0微克/mL、20微克/mL、25微克/mL、30微克/mL、35微克/mL、40微克/mL、45微克/mL、50微克/mL、60.0微克/mL、70.0微克/mL、80.0微克/mL、90.0微克/mL、100.0微克/mL、150.0微克/mL、200.0微克/mL、250.0g/mL、250.0micro gram/mL、300.0微克/mL、350.0微克/mL、400.0微克/mL、450.0微克/mL、至大于约500.0微克/mL或其任何增量值。应理解，旨在涵盖这些值和范围之间的所有值和范围。

所述制剂可在可药用溶液中施用，所述可药用溶液可常规地含有可药用浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、相容的载体、辅料和任选的其他治疗成分。

为了用于治疗，可通过将化合物递送至期望表面的任何方式将有效量的化合物施用于对象。施用药物组合物可通过本领域技术人员已知的任何方式完成。施用途径包括但不限于静脉内、肌内、腹膜内、膀胱内(膀胱)、经口、皮下、直接注射(例如，进入肿瘤或脓肿)、黏膜(例如，眼表面)、吸入和表面。

对于静脉内和其他肠胃外施用途径，可将化合物配制成冻干制剂、脂质体嵌入或包封的活性化合物的冻干制剂、水性悬浮液中的脂质复合物、或盐复合物。冻干制剂通常在施用之前不久在合适的水溶液中(例如，在无菌水或盐水中)重构。

对于经口施用，可通过将活性化合物与本领域公知的可药用载体组合来容易地配制化合物。这样的载体使得化合物能够被配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊剂、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、浆液剂(slurry)、混悬剂等，用于被待治疗的对象经口摄取。用于经口使用的药物制剂可作为固体赋形剂获得，任选地研磨所得混合物，并且如果期望，在添加合适的助剂之后加工颗粒的混合物以获得片剂或糖衣丸芯。合适的赋形剂特别是填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素(methyl cellulose，MC)、羟丙基甲基纤维素(hydroxypropylmethyl-cellulose，HPMC)、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果期望，可添加崩解剂，例如交联PVP、琼脂、或者藻酸或其盐(例如藻酸钠)。任选地，经口制剂也可在盐水或缓冲液(例如EDTA)中配制用于中和内部酸性条件，或者可在没有任何载体的情况下施用。

还考虑了化合物的经口剂型。可对化合物进行化学修饰，使得衍生物的经口递送是有效的。通常来说，所考虑的化学修饰是至少一个部分与化合物本身的连接，其中所述部分允许(a)抑制酸水解；和(b)从胃或肠摄取到血流中。还期望提高化合物的总体稳定性和提高体内循环时间。这样的部分的实例包括PEG、乙二醇和丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和聚脯氨酸。Abuchowski and Davis,“SolublePolymer-Enzyme Adducts”,In:Enzymes as Drugs,Hocenberg and Roberts,eds.,Wiley-Interscience,New York,N.Y.,pp.367-383(1981)；Newmark et al.,J Appl Biochem 4:185-9(1982)。可使用的其他聚合物是聚-1,3-二氧戊环和聚-1,3,6-tioxocane。对于药物用途，如上所述，PEG部分是合适的。

化合物释放的位置可以是胃、小肠(十二指肠、空肠或回肠)或大肠。本领域技术人员可获得不会在胃中溶解但会在十二指肠或肠中的其他地方释放材料的制剂。释放可通过化合物的保护或通过在胃环境外(例如在肠中)释放化合物来避免胃环境的有害影响。

为了确保完全的胃抗性，至少在pH 5.0下不可渗透的包衣是必需的。用作肠溶包衣的较常见惰性成分的一些实例是乙酸纤维素偏苯三酸酯(cellulose acetatetrimellitate，CAT)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(hydroxypropylmethylcellulosephthalate，HPMCP)、HPMCP 50、HPMCP 55、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯(polyvinyl acetatephthalate，PVAP)、Eudragit L30D、Aquateric、乙酸纤维素邻苯二甲酸酯(celluloseacetate phthalate，CAP)、Eudragit L、Eudragit S和紫胶(Shellac)。这些包衣可用作混合膜。

也可在片剂上使用包衣或包衣混合物，其并非旨在保护使其免于胃的作用。这些包衣可包括糖包衣或使片剂更容易吞咽的包衣。胶囊剂可由用于递送干的治疗剂(即粉末)的硬壳(例如明胶)组成；对于液体形式，可使用软明胶壳。扁囊剂(cachet)的壳材料可以是厚的淀粉纸或其他可食用的纸。对于丸剂、锭剂、模制片剂或片剂研磨物(tablettriturate)，可使用湿聚集(moist massing)技术。

治疗剂可以以颗粒尺寸约1mm的颗粒剂或丸剂形式作为细多颗粒包含在制剂中。用于胶囊剂施用的材料的制剂也可以是散剂、轻压塞或甚至是片剂。治疗制剂也可通过压缩制备。

可包括着色剂和矫味剂。例如，可配制化合物(例如通过脂质体或微球包封)，并且然后将其进一步包含在可食用产品中，例如包含在含有着色剂和矫味剂的冷藏饮料中。

可用惰性材料稀释治疗剂或提高治疗剂的体积。这些稀释剂可包括碳水化合物，尤其是甘露醇、a-乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、改性右旋糖酐和淀粉。某些无机盐也可用作填料，包括三磷酸钙、碳酸镁和氯化钠。一些市售稀释剂是Fast-Flo、Emdex、STA-Rx1500、Emcompress和Avicell。

崩解剂可包含在将治疗剂配制成固体剂型的制剂中。用作崩解剂的材料包括但不限于淀粉，包括基于淀粉的商业崩解剂Explotab。羟基乙酸淀粉钠、安伯来特(Amberlite)、羧甲基纤维素钠、超支链淀粉(ultramylopectin)、藻酸钠、明胶、橘皮、酸性羧甲基纤维素、天然海绵和膨润土均可被使用。崩解剂的另一种形式是不溶性阳离子交换树脂。粉末胶(powdered gum)可用作崩解剂和黏合剂，并且这些可包括粉末胶，例如琼脂、刺梧桐胶或西黄蓍胶。藻酸及其钠盐也可用作崩解剂。

黏合剂可用于将治疗剂保持在一起以形成硬片剂，并且包括来自天然产物(例如阿拉伯胶、西黄蓍胶、淀粉和明胶)的材料。其他包括MC、乙基纤维素(ethyl cellulose，EC)和羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose，CMC)。PVP和HPMC均可用于醇溶液中以对治疗剂进行制粒。

抗摩擦剂可包含在治疗剂的制剂中，以阻止在制剂过程期间的黏冲。润滑剂可用作治疗剂和模圈壁之间的层，并且这些可包括但不限于：硬脂酸(包括其镁盐和钙盐)、聚四氟乙烯(polytetrafluoroethylene，PTFE)、液体石蜡、植物油和蜡。也可使用可溶性润滑剂，例如十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁、多种分子量的PEG、以及Carbowax 4000和6000。

可添加在配制期间可改善药物流动特性并在压缩期间帮助重排的助流剂。助流剂可包括淀粉、滑石、致热二氧化硅和水合硅铝酸盐。

为了帮助将治疗剂溶解到水性环境中，可添加表面活性剂作为润湿剂。表面活性剂可包含阴离子洗涤剂，例如十二烷基硫酸钠、二辛基钠磺基琥珀酸盐和二辛基钠磺酸盐。可使用的阳离子洗涤剂包括苯扎氯铵和苄索氯铵。可包含在制剂中作为表面活性剂的潜在非离子型洗涤剂包括：聚桂醇400，聚氧乙烯40硬脂酸酯(polyoxyl 40stearate)，聚氧乙烯氢化蓖麻油(polyoxyethylene hydrogenated castor oil)10、50和60，单硬脂酸甘油酯，聚山梨酸酯40、60、65和80，蔗糖脂肪酸酯，甲基纤维素和羧甲基纤维素。这些表面活性剂可单独或作为以不同比例的混合物存在于化合物或衍生物的制剂中。

可经口使用的药物制剂包括由明胶制成的推入配合胶囊(push fit capsule)，以及由明胶和增塑剂(例如甘油或山梨醇)制成的软密封胶囊。推入配合胶囊剂可包含与填充剂(例如乳糖)、黏合剂(例如淀粉)和/或润滑剂(例如滑石或硬脂酸镁)以及任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，可将活性化合物溶解或悬浮在合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡或液体PEG中。另外，可添加稳定剂。也可使用配制用于经口施用的微球。这样的微球在本领域中已被很好地定义。所有用于经口施用的制剂应是以适合于这样的施用的剂量。

对于经颊施用，组合物可采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。

对于表面施用，可将化合物配制为本领域公知的溶液剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、混悬剂等。全身制剂包括设计用于通过注射施用的那些，例如皮下、静脉内、肌内、鞘内或腹膜内注射，以及设计用于经皮、经黏膜、经口或肺部施用的那些。

对于通过吸入施用，化合物可以以来自加压包装或喷雾器的气雾喷雾的形式方便地递送，并使用合适的抛射剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供阀门以递送计量的量来确定。用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒(cartridge)(例如，明胶的)可配制为包含化合物与合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

当期望全身递送化合物时，所述化合物可配制成用于通过注射(例如通过推注或连续输注)进行肠胃外施用。用于注射的制剂可在添加防腐剂的情况下以单位剂型的形式(例如在安瓿中或在多剂量容器中)存在。组合物可采用例如在油性或水性载剂中的混悬剂、溶液剂或乳剂的形式，并且包含配制剂，例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。

化合物可直接施用到血流中、肌肉中或内脏器官中。这样的肠胃外施用的合适途径包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、硬膜外、脑室内、尿道内、胸骨内、颅内、瘤内、肌内和皮下递送。用于肠胃外施用的合适方式包括针(包括微针)注射器、无针注射器和输注技术。

肠胃外制剂可以是水溶液，其可含有载体或赋形剂，例如盐、碳水化合物和缓冲剂(例如在3至9的pH下)，但是对于一些应用，其可以更适合地配制为无菌非水性溶液或干燥形式以与合适的载剂(例如无菌无热原水)结合使用。在另一些实施方案中，本文中所述的任何液体制剂可适用于本文中所述的化合物的肠胃外施用。在无菌条件下肠胃外制剂的制备(例如通过在无菌条件下冻干)可使用本领域技术人员公知的标准制药技术容易地完成。化合物在肠胃外制剂中的可溶性可通过使用适当的制剂技术来提高，例如并入增溶剂。

用于肠胃外施用的药物制剂包含水溶性形式的活性化合物的水性溶液。另外，可将活性化合物的混悬剂制备为合适的油性注射混悬剂。合适的亲脂性溶剂或载剂包括脂肪油(例如芝麻油)、或合成脂肪酸酯(例如油酸乙酯或甘油三酯)、或脂质体。水性注射悬浮液可含有提高混悬剂黏度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇或右旋糖酐。任选地，混悬剂还可含有合适的稳定剂或提高化合物的可溶性以允许制备高浓缩溶液的药剂。

用于肠胃外施用的制剂可配制用于立即释放和/或调节释放。活性剂(即，化合物)可以以定时释放制剂(例如，在包含缓释聚合物的组合物中)施用。活性剂可与保护化合物免于快速释放的载体(例如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统)一起制备。可使用生物可降解的、生物相容的聚合物(例如，乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、聚乳酸和聚乳酸、聚乙醇酸共聚物(PGLA))。用于制备这样的制剂的方法通常是本领域技术人员已知的。在另一些实施方案中，根据本教导的化合物或包含所述化合物的组合物可在适当时连续施用。

或者，活性化合物可以是粉末形式，以用于在使用之前与合适的载剂(例如无菌无热原水)构建。

化合物还可配制成直肠或阴道组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规栓剂基质，例如可可脂或其他甘油酯。

除上述制剂之外，化合物还可配制成贮库制剂。这样的长效制剂可用合适的聚合物或疏水性材料(例如作为可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂来配制，或配制为微溶性衍生物(例如微溶性盐)。

药物组合物还可包含合适的固相或凝胶相载体或赋形剂。这样的载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、多种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物(例如PEG)。

合适的液体或固体药物制剂形式为，例如，用于吸入的水性或盐溶液；微囊化、共螯合化(encochleated)、包衣于微观金颗粒(microscopic gold particle)上的、包含在脂质体中的、雾化的(nebulized)气雾剂；用于植入到皮肤中的、或干燥至尖锐物体上以被划进皮肤中的丸剂。药物组合物还包括颗粒剂、散剂、片剂、包衣片剂、(微)胶囊剂、栓剂、糖浆剂、乳剂、混悬剂、乳膏剂、滴剂或具有活性化合物延长性释放的制剂，在其制剂中，习惯上使用上述赋形剂和添加剂和/或助剂，例如崩解剂、黏合剂、包衣剂、溶胀剂、润滑剂、矫味剂、甜味剂或增溶剂。药物组合物适用于多种药物递送系统。关于用于药物递送的方法的简要综述，参见Langer,R.,Science 249:1527-33(1990)。

化合物和任选的其他治疗剂可以以本身(纯的)或以可药用盐的形式施用。当在药物中使用时，盐应是可药用的，但可方便地使用非可药用的盐以制备其可药用盐。这样的盐包括但不限于由以下酸制备的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬酸、甲烷磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。同样，这样的盐可制备为碱金属盐或碱土金属盐，例如羧酸基团的钠盐、钾盐或钙盐。

合适的缓冲剂包括乙酸和盐(1％至2％w/v)；柠檬酸和盐(1％至3％w/v)；硼酸和盐(0.5％至2.5％w/v)；以及磷酸和盐(0.8％至2％w/v)。合适的防腐剂包括苯扎氯铵(0.003％至0.03％w/v)；氯丁醇(0.3％至0.9％w/v)；对羟基苯甲酸酯(0.01％至0.25％w/v)和硫柳汞(0.004％至0.02％w/v)。

药物组合物含有包含在可药用载体中的有效量的化合物和任选的治疗剂。术语“可药用载体”是指一种或更多种相容的固体或液体填充剂、稀释剂或包封物质，其适合用于施用于人或其他脊椎动物。术语“载体”表示天然或合成的有机或无机成分，活性成分与其组合以促进施用。药物组合物的组分也可与化合物共混合，并且彼此是以不存在会显著损害期望药物效率的相互作用的方式。

治疗剂(具体地包括但不限于化合物)可以以颗粒形式提供。如本文中所用的粒子意指纳米粒或微米粒(或较大的颗粒)，其可全部或部分由如本文中所述的化合物或其他治疗剂组成。所述颗粒可在被包衣(包括但不限于肠溶衣)包围的芯中含有治疗剂。治疗剂也可分散在整个颗粒中。治疗剂也可吸附到颗粒中。颗粒可具有任何级别的释放动力学，包括零级释放、一级释放、二级释放、延迟释放、持续释放、立即释放，及其任何组合等。除治疗剂之外，颗粒可包含药学和医学领域中常规使用的那些材料中的任一种，包括但不限于可侵蚀的、不可侵蚀的、生物可降解的或非生物可降解的材料或其组合。颗粒可以是含有溶液或半固体状态的化合物的微胶囊。颗粒实际上可以是任何形状。

非生物可降解和生物可降解的聚合物材料均可用于制备用于递送治疗剂的颗粒。这样的聚合物可以是天然或合成聚合物。基于期望释放的时间段选择聚合物。特别感兴趣的生物黏附性聚合物包括Sawhney et al.,Macromolecules 26:581-587(1993)(其教导并入本文)中描述的可生物侵蚀的水凝胶。这些包括聚透明质酸、酪蛋白、明胶、明胶蛋白(glutin)、聚酐、聚丙烯酸、藻酸盐、壳聚糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸十二烷基酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)和聚(丙烯酸十八烷基酯)。

治疗剂可包含在控释系统中。术语“控释”旨在是指任何含有药物的制剂，其中药物从制剂中释放的方式和谱是受控的。这是指立即释放以及非立即释放制剂，其中非立即释放制剂包括但不限于持续释放和延迟释放制剂。术语“持续释放”(也被称为“延长释放”)以其常规含义使用，是指在延长的时间段内提供药物的逐渐释放并且在延长的时间段内可导致药物的基本上恒定的血液水平的药物制剂。术语“延迟释放”以其常规含义使用，是指在制剂施用和药物从其中释放之间存在时间延迟的药物制剂。“延迟释放”可涉及或可不涉及药物在延长的时间段内的逐渐释放，并且因此可以是或可以不是“持续释放”。

长期持续释放植入物的使用可特别适于治疗慢性病症。如本文中所用的“长期”释放意指构建和排列植入物以递送治疗水平的活性成分至少7天，并且最多30至60天。长期持续释放植入物是本领域普通技术人员公知的，并且包括上述的一些释放系统。

相关领域的普通技术人员将理解，鉴于普通技术人员已知的信息，对本文中所述的组合物和方法的其他合适的修改和改编从本文中包含的公开内容的描述中是显而易见的，并且可在不脱离本公开内容或其任何实施方案的范围的情况下进行。

实施例

实施例1：式(Q-L^Q)₂-Y-L^X的双-FAP预官能化缀合物的合成，其中L^X是树脂结合的间隔基。

图3概述了代表性的合成方案，其示出了树脂结合的多价缀合物中间体的合成。为了合成图3的缀合物中间产物，将无水DMF、N,N-双(N’-Fmoc-3-氨基丙基)甘氨酸半硫酸钾(1当量)、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)(2.5当量)和无水N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)(5当量)的溶液与乙二胺树脂合并并在氩气氛下搅拌6小时。从树脂上洗去偶联混合物，得到树脂结合的Fmoc保护的甘氨酸衍生物。将树脂重悬于无水DMF和哌啶或哌嗪的溶液中，用过量DMF洗涤。然后将树脂与无水DMF、CO₂H-PEGn-NHFmoc(2当量)、HATU(2.5当量)和无水DIPEA(5当量)的溶液混合并在室温下搅拌6小时。用溶剂洗涤偶联溶液，并如前所述用哌啶溶液除去Fmoc基团。通过在室温下搅拌6小时的同时将树脂、FAP配体(2当量)、HATU(2.5当量)、无水DIPEA(5当量)和无水DMF合并，将脱保护的胺与图3中所示的FAP配体的羧基尾部偶联。在最后的偶联步骤之后，用过量溶剂(DMF)洗涤树脂以除去残留的偶联试剂。

实施例2：双FAP罗丹明染料缀合物5b的合成。

如图4A和4B所述合成包含两个FAP靶向配体Q的多价缀合物(或化合物)。从经取代的吡啶开始，以7个步骤合成FAP-靶向配体，例如Q^A。使用与实施例1中所述的那些类似的条件将FAP配体与NHS PEG叠氮化物部分偶联。将FAP配体、NHS、PEG叠氮化物、无水DIPEA和DCM合并，并在室温下搅拌2小时。分离期望产物，产率66％。然后通过将FAP叠氮化物中间体、(2-(3,5-二乙炔基苯甲酰胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯、CuI和无水DIPEA在无水DMF中合并，将FAP-叠氮化物与二炔核偶联。将溶液加热至55℃持续12小时，产生60％产率的期望的Boc保护的中间体。将Boc保护的中间体(例如4a或4b)用三氟乙酸(TFA)和DCM的混合物处理并在室温下搅拌2小时，导致Boc基团的裂解。最后，向脱保护的中间体添加NHS-罗丹明、DCM和DIPEA，得到化合物5a或5b。

实施例3.双FAP近红外S0456染料缀合物6b的合成。

来自实施例2和图4A的中间体4a和4b用作合成化合物6a和6b的原料。首先通过将4b与TFA和DCM的溶液合并，并在室温下搅拌2小时对中间体4b进行Boc去保护。然后使用与先前所述的那些的类似条件将期望的Boc去保护的4b中间体与3-(4-羟基苯基)丙酸、HATU、DIPEA和DCM合并。随后在DMSO溶液中用K₂CO₃和Cl-S0456处理偶联反应的产物并在室温下搅拌4至5小时，得到化合物6b。使用类似条件合成化合物6a。

实施例4.双FAP多价缀合物的合成。

使用如实施例1至3中所述的类似方法合成多种化合物，例如下文和表9中的那些。

实施例5.单FAP和双FAP靶向配体的结合研究。

在该实施例中，在37℃下将HT1080-FAP细胞在4孔共聚焦平板中接种12小时。除去细胞生长培养基，并将细胞与浓度为3.0nM(最低)至25nM(最高)的FAP配体缀合物在1％FBS的PBS中孵育。在37℃下孵育1小时之后，用细胞生长培养基替换PBS并将细胞在37℃下孵育8小时至48小时。用冷的1％FBS的PBS(3×300uL)洗涤细胞。使用共聚焦显微术在1小时和8小时时间点(图7)以及24小时和48小时时间点(图8)处获取图像。双FAP靶向缀合物在用缀合物处理之后保留在细胞中长达48小时，而单FAP靶向缀合物在24小时被清除。

实施例6.双FAP靶向缀合物对非FAP HT1080细胞的结合研究。

不表达FAP的HT1080细胞用于研究双FAP靶向缀合物的结合。如图9所示，双FAP靶向缀合物的结合是FAP特异性的，并且尽管使用较高浓度的缀合物(25nM)，缀合物不与非FAP表达HT1080细胞结合。图9示出了双FAP配体在12.5nM或25nM处没有可检测到的保留。

实施例7.双FAP缀合物6b在携带KB肿瘤的小鼠上的体内成像。

将KB细胞在RPMI(含10％FBS、1％青霉素链霉素)生长培养基中培养。将400万个KB细胞/小鼠植入无胸腺雌性裸鼠的右肩(皮下注射)并维持直至肿瘤尺寸达到250至300mm³。具有上述标题结构的双FAP靶向缀合物6b以每次注射5纳摩尔，在100μL PBS溶液中稀释来制备。通过尾静脉注射将缀合物6b注射到携带KB细胞的小鼠中。在745/810nm(激发/发射)下在不同时间点获取小鼠的图像。图10示出了用双FAP缀合物6b对携带KB的小鼠进行的时程成像研究。图11示出了双FAP靶向的S0456在KB肿瘤中保留长达4天。双FAP靶向的S0456在注射之后114小时处的生物分布示出于图12，左侧是全身图像，并且右侧是肾被成像的配体覆盖。

实施例8.双FAP化合物7b对携带KB肿瘤的小鼠的体内评价。

使用类似于实施例7中所述的那些的方法，在携带KB肿瘤的小鼠中评价化合物7b。在该实施例中，7b是^99mTc-DOTA-7b，其中DOTA部分螯合^99mTc。在第1天，如实施例7所述用缀合物6b处理小鼠，以成像肿瘤尺寸。在第5天，并在此后每4天持续3个周期的时间，用^99mTc-DOTA-7b处理小鼠。在第17天，如前所述再次施用化合物6b以评估肿瘤尺寸的变化。拍摄治疗前和治疗后的图像以评价^99mTc-DOTA-7b在降低肿瘤尺寸中的功效。

实施例9

使用与实施例7和8中所述的那些一致的方法评价本文中公开的化合物(例如，上文标题中的那些)以确定每种化合物的成像和治疗功效。基于每个试验的可检测性和治疗功效优化间隔基长度、活性剂和FAP配体。

实施例10.与具有成像染料的双FAP靶向缀合物相比，具有过量游离FAP配体而不具有成像染料的竞争实验。

在该实施例中，如图13所示，每组的左侧小鼠注射与成像染料S0456缀合的双FAP靶向配体，并且每组的右侧小鼠用游离FAP配体处理，作为对双FAP靶向缀合物的竞争。每组右侧的小鼠顺序注射100倍过量的500纳摩尔竞争配体(即，无S0456染料的游离FAP配体)，随后注射5纳摩尔具有S0456染料的双FAP缀合物。如上所述在注射之后6小时采集图像。与靶向小鼠(高强度)相比，在竞争小鼠中观察到肿瘤部位的低荧光强度，这表明双FAP靶向配体是FAP特异性的。

实施例11.不同时间点的单价配体图像。

将KB肿瘤细胞植入无胸腺雌性裸鼠直至肿瘤尺寸达到约250至300mm³。在745nm/810nm的提取/发射下，获得成像数据。在图14中，在每组中，通过注射与成像染料S0456缀合的单FAP靶向配体来靶向左侧小鼠，并且用游离FAP配体处理右侧小鼠。每组右侧的小鼠顺序注射100倍过量的500纳摩尔竞争配体(即，无S0456染料的FAP配体)，随后注射5纳摩尔具有S0456染料的单FAP缀合物。如上所述在注射之后的不同时间点获取图像。与靶向小鼠(高强度)相比，观察到竞争小鼠的肿瘤部位完全没有荧光，这表明单FAP缀合物是高度FAP特异性的。在图15中，在24小时和48小时时间点处的单FAP和双FAP靶向缀合物之间的比较表明，双FAP缀合物保留超过48小时，而单FAP缀合物在两个时间点显著更检测不到，接近可检测性阈值48小时。

通过引用并入

本文中引用的所有专利、专利申请出版物、期刊文章、书籍和其他出版物在此通过引用并入。

等同方案

本领域技术人员将认识到或者能够使用不多于常规实验来确定本文中所述的本公开内容的多种实施方案的许多等同方案。这样的等同方案涵盖在所附权利要求书中。

Claims (71)

1.具有结构(Q-L^Q)_m-Y-L^X-X的化合物，其中

每个Q-L^Q是所述化合物的臂；

m是所述化合物中(Q-L^Q)臂的数目，

m是整数2、3、4、5或6；

Q是与靶细胞上的成纤维细胞活化蛋白(FAP)结合的配体；

L^Q是间隔基，其(i)连接Q与Y，并且(ii)为所述化合物的臂提供长度以到达所述靶细胞上的多个相邻FAP；

Y是与所述化合物的多个臂连接的多点模板；

L^X是连接X与Y的间隔基；并且

X是活性剂。

2.权利要求1所述的化合物，其中X包括可检测剂，其是荧光染料或放射显像剂。

3.权利要求1所述的化合物，其中X包括治疗剂，其是光动力治疗剂、放射治疗剂、化学治疗剂、抗纤维化剂、抗癌剂，或前述两种或更多种的组合。

4.权利要求1所述的化合物，其中X包括治疗剂，其是放射治疗剂。

5.权利要求1所述的化合物，其中Q具有以下结构：

其中

R₁、R₁’相同或不同，并且独立地选自-H、烷基、芳基、腈、-COOH、-B(OH)₂、SO₃H和PO₃H；

R₂、R₂’相同或不同，并且独立地选自H、卤素、二卤素、烷基、芳基和杂芳基；

R₃是H、CH₃、烷基、烯基、芳基或杂芳基；并且

R₄是H、烷基、烯基、芳基、杂芳基、卤素、二卤素、二烷基或二芳基。

6.权利要求5所述的化合物，其中R₂或R₂’是二卤素。

7.权利要求6所述的化合物，其中R₂或R₂’是二氟。

8.权利要求5所述的化合物，其中R₃是-CH₃。

9.权利要求5所述的化合物，其中R₃是-H。

10.权利要求5所述的化合物，其中R₄是卤素。

11.权利要求5所述的化合物，其中所述杂环

选自：

12.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中一个或更多个Q被W替代，其中每个W独立地为溶解度增强剂或药代动力学/药效学(PK/PD)调节剂，并且其中当存在两个或更多个W时，所述W可相同或不同。

13.权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中L^Q包括寡乙二醇、聚乙二醇、烷基链、肽聚糖、寡肽或多肽。

14.权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中L^Q包括寡乙二醇或聚乙二醇。

15.权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中L^Q包括寡肽或多肽。

16.权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中L^Q包括肽聚糖。

17.权利要求15中任一项所述的化合物，其中所述寡肽是刚性的并且包括寡脯氨酸或寡哌啶。

18.权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中L^Q是长度为15至200埃的间隔基。

19.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含X与两个Q之间的结构：

其中X和Q是连接点。

20.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含***与两个**之间的结构：

其中**表示Y与L^Q之间的连接点，并且***表示Y与L^X之间的连接点。

21.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含X与三个Q之间的结构或***与四个**之间的结构：

其中X和Q是连接点，**表示Y与L^Q之间的连接点，并且***表示Y与L^X之间的连接点。

22.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含作为两个Q与X之间的结构或者两个**与***之间的结构的基于三(2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇)的模板：

其中X和Q是连接点，**表示Y与L^Q之间的连接点，并且***表示Y与L^X之间的连接点。

23.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含以下结构之一：

其中**表示Y与L^Q之间的连接点，并且***表示Y与L^X之间的连接点。

24.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含以下结构：

其中**表示Y与L^Q之间的连接点，并且***表示Y与L^X之间的连接点。

25.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中所述化合物包含以下结构：

26.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含基于三元酸的模板。

27.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含基于寡赖氨酸的模板。

28.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含Trebler亚磷酰胺模板。

29.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含基于寡-羟基脯氨醇的模板。

30.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Y包含以下结构：

其中**表示Y与L^Q之间的连接点，并且***表示Y与L^X之间的连接点。

31.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中(Q-L^Q)_m-Y包含以下结构：

其中n＝1至32，m＝2至6，并且Q可相同或不同。

32.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包含以下结构：

其中***表示Y与L^X之间的连接点，并且****表示X与L^X之间的连接点。

33.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包含在Y与X之间的以下结构之一：

其中n＝0至10，并且X和Y是连接点。

34.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包含以下结构之一：

其中n＝0至10，***表示Y与L^X之间的连接点，并且****表示X与L^X之间的连接点。

35.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包含在Y与X之间的以下结构之一：

其中n＝1至32，并且X和Y是连接点。

36.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包含以下结构之一：

其中n＝1至32，***表示Y与L^X之间的连接点，并且****表示X与L^X之间的连接点。

37.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中除了Y和X之外，L^X包含以下结构之一：

其中n＝0至10，p＝1至32，并且X和Y是连接点。

38.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包含以下结构中的任一个：

其中n＝0至10，p＝1至32，***表示Y与L^X之间的连接点，并且****表示X与L^X之间的连接点。

39.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中除了Y和X之外，L^X包含以下结构之一：

其中n＝1至32，p＝1至32，并且X和Y是连接点。

40.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包含以下结构之一：

其中n＝1至32，p＝1至32，***表示Y与L^X之间的连接点，并且****表示X与L^X之间的连接点。

41.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中除了Y和X之外，L^X包含以下结构之一：

其中W包括溶解度增强剂、PK/PD调节剂，或者前述任一或二者中的两种或更多种的组合，并且其中X和Y是连接点。

42.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包含以下结构之一：

其中W包括溶解度增强剂、PK/PD调节剂，或者前述任一或二者中的两种或更多种的组合，并且其中***表示Y与L^X之间的连接，并且****表示X与L^X之间的连接。

43.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中除了Y和X之外，L^X包含以下结构之一：

其中W包括溶解度增强剂、PK/PD调节剂，或者前述任一或二者中的两种或更多种的组合，并且其中X和Y是连接点。

44.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包含以下结构之一：

其中W包括溶解度增强剂、PK/PD调节剂，或者前述任一或二者中的两种或更多种的组合，并且其中***表示Y与L^X之间的连接，并且****表示X与L^X之间的连接。

45.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包括寡乙二醇或聚乙二醇。

46.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包括寡肽或多肽。

47.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中L^X包括肽聚糖。

48.权利要求46所述的化合物，其中所述寡肽是刚性的并且包括寡脯氨酸或寡哌啶。

49.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中X包括激发或发射波长为400至1,000nm的荧光染料。

50.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中X包括荧光染料，其是激发或发射波长为650至850nm的近红外染料。

51.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中X包含具有选自以下的结构的螯合基团：

52.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中X包含具有选自以下的结构的螯合基团：

53.权利要求51所述的化合物，其中X与选自99mTc、111In、18F、68Ga、124I、125I和131I的放射显像剂结合。

54.权利要求52所述的化合物，其中X与选自99mTc、111In、18F、68Ga、124I、125I和131I的放射显像剂结合。

55.权利要求51所述的化合物，其中X与选自32P、89Sr、90Y、117mSn、131I、153Sm、169Er、177Lu、186Re、188Re、149Tb、211At、212Bi、213Bi和225Ac的放射治疗剂结合。

56.权利要求52所述的化合物，其中X与选自32P、89Sr、90Y、117mSn、131I、153Sm、169Er、177Lu、186Re、188Re、149Tb、211At、212Bi、213Bi和225Ac的放射治疗剂结合。

57.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中X包括选自化学治疗剂、抗有丝分裂剂、DNA烷化剂、蛋白质合成抑制剂、抗代谢物和抗肿瘤抗生素的治疗剂。

58.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中X包括选自抗体、抗体片段、毒素、siRNA、miRNA、shRNA和蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)的治疗剂。

59.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中X包含选自以下的治疗剂：成纤维细胞生长因子受体(FGFR)同种型的抑制剂、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)同种型的抑制剂、血管内皮生长因子受体(VEGFR)同种型的抑制剂、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)的抑制剂、rho相关激酶(ROCK)的抑制剂、黏着斑激酶(FAK)的抑制剂、SMAD的抑制剂和转化生长因子β(TGFβ)受体的抑制剂。

60.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中X包括NF-κB(活化B细胞的核因子κ-轻链增强剂)的抑制剂。

61.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Q全部是相同的。

62.权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中Q不全是相同的。

63.具有以下结构的化合物：

64.具有以下结构的化合物：

65.具有以下结构的化合物：

66.具有以下结构的化合物：

67.具有以下结构的化合物：

68.药物组合物，其包含权利要求1至67中任一项所述的化合物和可药用载体。

69.将活性剂递送至癌症相关成纤维细胞(CAF)或成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达细胞附近的方法，其包括向表达CAF或FAP的细胞施用权利要求1所述的化合物，从而使所述化合物在所述CAF或FAP表达细胞内保留至少24小时。

70.在对象中检测肿瘤或纤维化组织的存在的方法，其包括(i)向所述对象施用权利要求1所述的化合物，(ii)在所述对象内检测所述化合物(例如，光学地或放射性测量地)，和(iii)在所述对象中基于所述化合物的定位来鉴定肿瘤或纤维化组织，从而在所述对象中检测肿瘤或纤维化组织的存在。

71.在对象中治疗肿瘤或纤维化组织的方法，其包括向所述对象施用治疗有效量的权利要求1所述的化合物，从而治疗所述对象的肿瘤或纤维化组织。

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