CN114324898B - 用于肝素结合蛋白hbp检测的结合垫处理液 - Google Patents
用于肝素结合蛋白hbp检测的结合垫处理液 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液,配方包括:Tris‑HCl缓冲液50mM,其中,溶解于所述Tris‑HCl缓冲液中的Tween 20、Tween 80、海藻糖、BSA‑2、红细胞单抗和proclin 300的体积或质量体积比分别是0.2%~0.5%、0.2%~0.5%、1%~2%、0.5%~1%、0.025%~0.05%和0.01%~0.02%;其余为纯化水;将该用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液应用于对肝素结合蛋白HBP检测卡内结合垫的处理。
Description
技术领域
本发明涉及医学免疫诊断技术领域,尤其涉及一种用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液。
背景技术
肝素结合蛋白(HBP,HeparinBinding Protein)是一种由成熟中性粒细胞分泌的蛋白质,当细菌感染或出现急性呼吸窘迫综合症(ARDS)或者急性肺损伤(ALI)以及呼吸衰竭时,其水平会升高。非细菌感染HBP不会升高;HBP是细菌感染最早升高的标志物之一,出现局部的或轻微的细菌感染后1h内即可在血浆中检测到。这是相对降钙素原(PCT)的一个优势。
目前,HBP的检测方法主要为荧光免疫层析法,定量检测。该方法学具有操作过程简单、报告结果时间短、结果准确等优势,应用于各个临床科室可有效提高检测效率,特别对于危重症患者,可有效缩短样本流转时间,尽快帮助临床医生了解患者病情。
中国专利文献(申请号:201510466279.7)公开了一种流动相测试条组件、结合垫预处理溶液及其相关方法,其中结合垫预处理溶液,其包括至少一种蛋白质、至少一种表面活性剂、至少一种金属阳离子,以及至少一种聚合物。选自于由牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白,以及它们的混合物构成的组中的至少一种蛋白质;选自于由聚乙二醇十二烷基醚、聚乙二醇山梨糖醇单月桂酸酯,以及它们的混合物构成的组中的至少一种表面活性剂;选自于由四硼酸钠、偏硼酸钾,以及它们的混合物构成的组中的至少一种金属阳离子;以及选自于由蔗糖、聚乙烯醇,以及它们的混合物构成的组中的至少一种聚合物。使用该结合垫处理液的产品性能CV较高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是,提供一种用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液,该结合垫处理液的缓冲体系应有利于荧光物质于抗体的结合与释放;且结合垫处理液对于产品性能(空白限,CV)有一定的改善作用。
为了解决上述技术问题,本发明采用的技术方案为:该结合垫处理液的配方包括有:Tris-HCl缓冲液50mM,其中,溶解于所述Tris-HCl缓冲液中的Tween 20、Tween 80、海藻糖、BSA-2、红细胞单抗和proclin 300的体积或质量体积比分别是0.2%~0.5%、0.2%~0.5%、1%~2%、0.5%~1%、0.025%~0.05%和0.01%~0.02%;其余为纯化水。
采用上述技术方案,该配方中的Tween 20、Tween 80是表面活性剂,作用是更快地润湿(玻璃纤维素膜)结合垫的玻璃纤维,便于荧光微球附着和复溶,有助于待测物质与荧光标记物更好地结合;使用该两种表面活性剂配合使用是因为两种表面活性剂分子量不一样,两者配合可以针对不同大小的微粒;海藻糖的作用是对荧光微球上标记的抗体蛋白起到保护作用,使抗体更稳定;BSA-2的作用是对荧光微球上标记的抗体蛋白起到保护作用,使蛋白更稳定,另外对于非特异性反应有一定的抑制作用;红细胞单抗的作用是当检测样本为全血时,截留红细胞,防止红细胞阻碍荧光微球标记抗体的向后运动及对检测结果荧光信号的收集造成干扰;proclin 300作为防腐剂,可以使结合垫处理液稳定,延长其保存期。上述成分配合协同作用,使得该结合垫处理液的缓冲体系有利于荧光标记物在结合垫上的结合与释放;且结合垫处理液对于HBP检测卡的产品性能(空白限,CV)有一定的改善作用。
优选地,该结合垫处理液的配方包括有:Tris-HCl缓冲液50mM,其中,溶解于所述Tris-HCl缓冲液中的Tween 20、Tween 80、海藻糖、BSA-2、红细胞单抗和proclin 300的体积或质量体积比分别是0.5%、0.5%、2%、0.5%、0.025%和0.02%;其余为纯化水。
优选地,该结合垫处理液的配方包括有:Tris-HCl缓冲液50mM,其中,溶解于所述Tris-HCl缓冲液中的Tween 20、Tween 80、海藻糖、BSA-2、红细胞单抗和proclin 300的体积或质量体积比分别是0.2%、0.2%、1%、1%、0.025%和0.01%;其余为纯化水。
优选地,该结合垫处理液的配方包括有:Tris-HCl缓冲液50mM,其中,溶解于所述Tris-HCl缓冲液中的Tween 20、Tween 80、海藻糖、BSA-2、红细胞单抗和proclin 300的体积或质量体积比分别是0.5%、0.5%、1%、1%、0.05%和0.02%;其余为纯化水。
优选地,该用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液的制备方法具体包括以下步骤:
S1:称取Tris、BSA-2、海藻糖放入容器中;
S2:向容器中加入纯化水,再取Tween 20和Tween 80加入容器中,搅动溶解;
S3:再加入proclin 300混合均匀;
S4:再加入红细胞单抗混合均匀,获得配制好的结合垫处理液,保存备用。
优选地,所述步骤S2搅动溶解的时间至少1小时。
优选地,所述步骤S3中还包括用盐酸溶液调节pH至7.4±0.1。
优选地,所述步骤S4中保存的温度为2℃~8℃,保存期限为40天。
与现有技术相比,本发明的结合垫处理液的缓冲体系有利于荧光物质在结合垫上的结合与释放,且对于产品性能(空白限,CV)有一定的改善作用。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解,下面将结合实施例对本发明做进一步详细描述,该实施例仅用于解释本发明,并不对本发明的保护范围构成限定。
该结合垫处理液的配方包括有:Tris-HCl缓冲液50mM,其中,溶解于所述Tris-HCl缓冲液中的Tween 20、Tween 80、海藻糖、BSA-2、红细胞单抗和proclin 300的体积或质量体积比分别是0.2%~0.5%、0.2%~0.5%、1%~2%、0.5%~1%、0.025%~0.05%和0.01%~0.02%;其余为纯化水。
该用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液的制备方法具体包括以下步骤:
S1:称取Tris、BSA-2、海藻糖放入容器中;
S2:向容器中加入纯化水,再取Tween 20和Tween 80加入容器中,封口后进行搅动溶解;搅动溶解的时间至少1小时;
S3:再加入proclin 300混合均匀;再用盐酸溶液调节pH至7.4±0.1;
S4:再加入红细胞单抗混合均匀,获得配制好的结合垫处理液(记为CS008),保存备用,保存的温度为2℃~8℃,保存期限为40天。
采用该结合垫处理液对结合垫进行处理的过程具体包括以下步骤:
A.将结合垫处理液(CS008)摇匀,恢复室温;
B.取出结合垫,确认尺寸后待用;
C.将干净玻片平放在水平桌面待用;
D.将单张结合垫居中平放在玻片上,将处理液倒入量筒,再将量筒均匀以“N”型手法从结合垫左下角起至右上角倾倒完毕,倾倒完毕后用滚轮辅助溶液扩散至整张浸润,平衡静置约1min,将平衡静置结束的垫子放到事先清洗干净并烘干的指定网架上,放入干燥间烘箱进行干燥;
E.放入45℃烘箱干燥,要求至少4小时,湿度≤30%;
F.保持时间达到要求,即可收起已处理结合垫,放入铝箔袋,并在铝箔袋里放入干燥剂,至少200度封口机进行封口保存,铝箔袋外须标明:名称、批号、数量、操作人等,4℃~30℃保存备用。
对用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液的确定的方法具体包括以下步骤:
(1)包被:
配制T线包被液,T线包被液中添加HBP抗体(生产厂家:南京岚轩生物科技有限公司,货号:H01P2M)(T线),T线中的抗体的终浓度为1mg/mL;配制C线包被液,C线包被液中添加羊抗鸡IgY,使得抗体的终浓度为1mg/mL(C线);用划膜机按1µL/cm包被于硝酸纤维素膜的测试区和质控区,各包被液包被,干燥12-20h备用;
(2)荧光标记:按标记荧光微球的工艺,使用PBS标记缓冲液,200nm荧光微球,10:1的荧光微球与抗体蛋白用量标记HBP抗体(生产厂家:南京岚轩生物科技有限公司,货号:H01P1M),离心制备抗体荧光标记物备用,同时制备鸡IgY抗体荧光标记物,备用;
(3)喷金:将制备好的喷金液(抗体荧光标记物溶液)通过划膜喷金仪按2.0µL/cm分别喷到用不同方案的CS008结合垫处理液处理好的玻璃纤维素膜结合垫上,干燥备用;
(4)将采用不同结合垫处理液的结合垫、硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水垫、样品垫组装成检测卡,分别检测参考品;由于结合垫主要影响抗体荧光标记物的释放,因此测试10例阴性质控和10例阳性质控,分析数据的空白限和CV。
具体通过三个实施例对结合垫处理液的浓度的确定进行详细的描述;
实施例1:所述步骤(3)中使用的结合垫处理液的配方为:Tris-HCl缓冲液浓度为50mM,添加Tween 20的体积比为0.2%,Tween 80的体积比为0.2%,海藻糖的质量体积比为1%,BSA-2的质量体积比为1%,红细胞单抗的质量体积比为0.025%;proclin 300的体积比为0.01%;其余为纯化水。具体地,配制1000mL的结合垫处理液,各组分含量为:Tris 6.06g、Tween 20 2mL、Tween 80 2mL、海藻糖10g、BSA-2 10g、红细胞单抗250mg、proclin 3000.1mL。参考品1为HBP阴性质控品,选取10例阴性质控品,参考品2为HBP抗体浓度为10ng/mL的阳性质控品,选取10例阳性质控品。对10例阴性质控品和10例阳性质控品的具体测定数据如下表1所示:
表1 实施例1中10例阴性质控品和10例阳性质控品的测试结果
从表1的测试结果可以看出,参考品1即空白质控,测值较高,说明检测背景干扰较大;参考品2测值的CV为16.5%,偏大,产品要求一般需要小于15%。
实施例2:所述步骤(3)中使用的结合垫处理液的配方为:Tris-HCl缓冲液浓度为50mM,添加Tween 20的体积比为0.5%,Tween 80的体积比为0.5%,海藻糖的质量体积比为1%,BSA-2的质量体积比为1%,红细胞单抗的质量体积比为0.05%;proclin 300的体积比为0.02%;其余为纯化水。具体地,配制1000mL的结合垫处理液,各组分含量为:Tris 6.06g、Tween 20 5mL、Tween 80 5mL、海藻糖10g、BSA-2 10g、红细胞单抗500mg、proclin 3000.2mL。参考品1为HBP阴性质控品,选取10例阴性质控品,参考品2为HBP抗体浓度为10ng/mL的阳性质控品,选取10例阳性质控品。对10例阴性质控品和10例阳性质控品的具体测定数据如下表2所示:
表2 实施例2中10例阴性质控品和10例阳性质控品的测试结果
从表2的测试结果可以看出,参考品2测值的CV为9.0%,与实施例1对比得到了一定的优化,低于10%,参考品1的空白测值还是相对偏高。
实施例3:所述步骤(3)中使用的结合垫处理液的配方为:Tris-HCl缓冲液浓度为50mM,添加Tween 20的体积比为0.5%,Tween 80的体积比为0.5%,海藻糖的质量体积比为2%,BSA-2的质量体积比为0.5%,红细胞单抗的质量体积比为0.025%;proclin 300的体积比为0.02%;其余为纯化水。具体地,配制1000mL的结合垫处理液,各组分含量为:Tris 6.06g、Tween 20 5mL、Tween 80 5mL、海藻糖20g、BSA-2 5g、红细胞单抗250mg、proclin 3000.2mL。参考品1为HBP阴性质控品,选取10例阴性质控,参考品2为HBP抗体浓度为10ng/mL的阳性质控品,选取10例阳性质控品。对10例阴性质控品和10例阳性质控品的具体测定数据如下表3所示:
表3 实施例3中10例阴性质控品和10例阳性质控品的测试结果
从表3的测试结果可以看出,参考品2测值的CV为5.8%,相较于实施例2进一步得到优化,满足产品应用需求,参考品1的空白测值相对较低。从而可以确定实施例3中的结合垫处理液的浓度为最佳配方。
对于本领域的普通技术人员而言,具体实施例只是对本发明进行了示例性描述,显然本发明具体实现并不受上述方式的限制,只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进,或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的,均在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液,其特征在于,该结合垫处理液的配方包括有:Tris-HCl缓冲液50mM,其中,溶解于所述Tris-HCl缓冲液中的Tween 20、Tween80、海藻糖、BSA-2、红细胞单抗和proclin 300的体积或质量体积比分别是0.2%~0.5%、0.2%~0.5%、1%~2%、0.5%~1%、0.025%~0.05%和0.01%~0.02%;其余为纯化水。
2.根据权利要求1所述的用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液,其特征在于,该结合垫处理液的配方包括有:Tris-HCl缓冲液50mM,其中,溶解于所述Tris-HCl缓冲液中的Tween 20、Tween 80、海藻糖、BSA-2、红细胞单抗和proclin 300的体积或质量体积比分别是0.5%、0.5%、2%、0.5%、0.025%和0.02%;其余为纯化水。
3.根据权利要求1所述的用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液,其特征在于,该结合垫处理液的配方包括有:Tris-HCl缓冲液50mM,其中,溶解于所述Tris-HCl缓冲液中的Tween 20、Tween 80、海藻糖、BSA-2、红细胞单抗和proclin 300的体积或质量体积比分别是0.2%、0.2%、1%、1%、0.025%和0.01%;其余为纯化水。
4.根据权利要求1所述的用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液,其特征在于,该结合垫处理液的配方包括有:Tris-HCl缓冲液50mM,其中,溶解于所述Tris-HCl缓冲液中的Tween 20、Tween 80、海藻糖、BSA-2、红细胞单抗和proclin 300的质量体积比分别是0.5%、0.5%、1%、1%、0.05%和0.02%;其余为纯化水。
5.根据权利要求1-4任一项所述的用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液,其特征在于,该用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液的制备方法具体包括以下步骤:
S1:称取Tris、BSA-2、海藻糖放入容器中;
S2:向容器中加入纯化水,再取Tween 20和Tween 80加入容器中,搅动溶解;
S3:再加入proclin 300混合均匀;
S4:再加入红细胞单抗混合均匀,获得配制好的结合垫处理液,保存备用。
6.根据权利要求5所述的用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液,其特征在于,所述步骤S2搅动溶解的时间至少1小时。
7.根据权利要求5所述的用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液,其特征在于,所述步骤S3中还包括用盐酸溶液调节pH至7.4±0.1。
8.根据权利要求5所述的用于肝素结合蛋白HBP检测的结合垫处理液,其特征在于,所述步骤S4中保存的温度为2℃~8℃,保存期限为40天。
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Application publication date: 20220412 Assignee: Guangxi Aimin Biotechnology Co.,Ltd. Assignor: LANSION BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Contract record no.: X2023980041214 Denomination of invention: Binding pad treatment solution for detecting heparin binding protein HBP Granted publication date: 20220531 License type: Common License Record date: 20230905 |
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