CN114324653A - 一种花生品种的鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种花生品种的鉴定方法，包括：获取基础数据步骤：获取已知品种花生的脂质指标、蛋白指标和共有差异脂质代谢物作为基础数据；待测品种鉴定步骤：获取待测品种花生的脂质指标、蛋白指标和共有差异脂质代谢物数据，将其与基础数据进行比对，待测品种能与已知品种聚类的为遗传相同或相近的品种，不能聚类的为新品种；花生品种的鉴定方法，将花生品质检测从脂肪酸水平提升至脂质分子水平，能够高效鉴定花生品种。
Description
技术领域
本发明涉及一种花生品种的鉴定方法，属于生物品种鉴定技术领域。
背景技术
花生(Arachis hypogaea L.)是一种世界性的油料和蛋白质作物，也是我国四大油料作物之一，其单产和总产长期居油料作物之首。高油酸花生(油酸含量>50％)的保健作用与经济效益，使得选育高油酸花生品种成为国内花生品质改良育种的目标之一。与其他植物油相比，高油酸花生油具有货架期长、不饱和脂肪酸含量高、无豆腥和不含植物芥酸等特点，越发受到花生榨油企业与消费者青睐。
脂质与蛋白质含量作为考察花生品质的主要指标。通常，花生籽粒的品质指标通过近红外光谱分析技术已经能够准确快速、批量化与标准化地测定。然而，花生油作为我国主要的食用油之一，其不断增加的市场需求，导致不良商家使用不健康或较便宜的油进行掺假。而掺假物和花生油脂的纯光谱非常相似，目前花生近红外光谱无损检测仅能从脂肪酸水平进行检测，无法很好地识别掺假物。此外，当前花生品种的传统鉴定方法主要为形态学与分子标记鉴定。实践证明，大部分的花生品种能通过传统鉴定方法进行分辨，但对于某些特征特性相近的花生品种，由于其的农艺性状差异不显著，且品种间差异位点少，分子标记需要大量筛选引物，这些导致传统品种鉴定准确性差强人意。因此，近似花生品种与品质鉴定是花生领域的难点之一。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种花生品种的鉴定方法，将花生品质检测从脂肪酸水平提升至脂质分子水平，能够高效鉴定花生品种。
实现本发明的目的可以通过采取如下技术方案达到：一种花生品种的鉴定方法，包括：
获取基础数据步骤：获取已知品种花生的脂质指标、蛋白指标和共有差异脂质代谢物作为基础数据；共有差异脂质代谢物包括：
编号：LIPID-P-0993，脂质分子：TG(18:1/18:1/18:2)，测定精确分子量：882.767642；
编号：LIPID-P-1049，脂质分子：TG(18:1/18:2/18:2)，测定精确分子量：880.751992；
编号：LIPID-P-0329，脂质分子：PC(18:0/18:1)，测定精确分子量：787.609108；
编号：LIPID-P-0928，脂质分子：TG(18:0/18:1/18:2)，测定精确分子量：884.783292；
编号：LIPID-P-0860，脂质分子：TG(16:1/18:1/20:0)，测定精确分子量：886.798942；
编号：LIPID-P-0817，脂质分子：TG(14:0/20:1/22:0)，测定精确分子量：916.845892；
编号：LIPID-P-1093，脂质分子：TG(18:2/18:2/18:2)，测定精确分子量：878.736342；
编号：LIPID-P-0869，脂质分子：TG(18:1/18:1/20:0)，测定精确分子量：914.830242；
编号：LIPID-P-0807，脂质分子：TG(14:0/20:0/20:1)，测定精确分子量：888.814592；
编号：LIPID-P-0848，脂质分子：TG(16:0/16:1/18:1)，测定精确分子量：830.736342；
编号：LIPID-P-0932，脂质分子：TG(14:0/20:1/22:2)，测定精确分子量：912.814592；
编号：LIPID-P-0861，脂质分子：TG(18:0/18:1/18:1)，测定精确分子量：886.798942；
编号：LIPID-P-0998，脂质分子：TG(14:0/18:0/22:4)，测定精确分子量：882.767642；
编号：LIPID-P-0856，脂质分子：TG(14:0/18:0/20:2)，测定精确分子量：858.767642；
编号：LIPID-P-0931，脂质分子：TG(18:1/18:2/20:0)，测定精确分子量：912.814592；
编号：LIPID-P-0881，脂质分子：TG(14:0/22:0/22:2)，测定精确分子量：942.861542；
编号：LIPID-P-0157，脂质分子：DG(18:1/18:1/0:0)，测定精确分子量：620.537976；
编号：LIPID-P-0804，脂质分子：TG(18:0/18:0/18:1)，测定精确分子量：888.814592；
编号：LIPID-P-0797，脂质分子：TG(14:0/18:0/20:1)，测定精确分子量：860.783292；
编号：LIPID-P-0795，脂质分子：TG(16:0/16:1/20:0)，测定精确分子量：860.783292；
编号：LIPID-P-0803，脂质分子：TG(16:0/16:1/22:0)，测定精确分子量：888.814592；
编号：LIPID-P-0940，脂质分子：TG(14:0/20:0/22:3)，测定精确分子量：912.814592；
编号：LIPID-P-0814，脂质分子：TG(16:0/18:1/22:0)，测定精确分子量：916.845892；
编号：LIPID-P-1014，脂质分子：TG(18:1/18:3/20:0)，测定精确分子量：910.798942；
编号：LIPID-P-0950，脂质分子：TG(16:1/20:2/22:0)，测定精确分子量：940.845892；
编号：LIPID-P-0879，脂质分子：TG(18:1/18:1/22:0)，测定精确分子量：942.861542；
编号：LIPID-P-1006，脂质分子：TG(18:2/18:2/20:0)，测定精确分子量：910.798942；
编号：LIPID-P-0796，脂质分子：TG(14:0/18:1/20:0)，测定精确分子量：860.783292；
编号：LIPID-P-0812，脂质分子：TG(14:0/20:0/22:1)，测定精确分子量：916.845892；
编号：LIPID-P-0822，脂质分子：TG(14:0/22:0/22:1)，测定精确分子量：944.877192；
编号：LIPID-P-0849，脂质分子：TG(14:0/18:0/18:2)，测定精确分子量：830.736342；
待测品种鉴定步骤：获取待测品种花生的脂质指标、蛋白指标和共有差异脂质代谢物数据，将其与基础数据进行比对，待测品种能与已知品种聚类的为遗传相同或相近的品种，不能聚类的为新品种。
进一步地，已知品种和待测品种的脂质指标包括：脂肪、油酸、亚油酸、油酸/亚油酸含量比值、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸和二十四烷酸的指标。
进一步地，已知品种和待测品种的蛋白指标包括：蛋白质、氨基酸、苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸和脯氨酸的指标。
进一步地，已知品种和待测品种的共有差异脂质代谢物的获取方式包括：将花生的提取液先采用UPLC系统进行分析，流出物交替连接到电喷雾离子源-三重四极杆线性离子阱-质谱仪进行MRM实验，在三重四极杆中，每个离子对MRM是根据优化的去簇电压和碰撞能进行扫描检测，根据每个时期内洗脱的代谢物，对一组特定的MRM转换进行监测。
进一步地，获取基础数据步骤中，共有差异脂质代谢物基础数据的获取方法包括：对已知品种花生的脂质代谢物进行定性分析和定量分析，将定性分析和定量分析的数据进行组间显著差异分析，差异筛选条件为log2 fold change≥2，P≤0.05；然后进行主成分与偏最小二乘判别分析法分析，获得共有差异脂质代谢物基础数据。
进一步地，定性分析包括：将花生提取液采用UPLC-MS/MS采集质谱数据，一级谱、二级谱数据基于MVDB V2.0数据库及代谢物信息公共数据库进行物质定性。
进一步地，定量分析包括：通过三重四级杆质谱的多反应监测模式分析获得代谢物检测多峰图，去背景噪音及低质量的处理，对色谱峰进行积分和校正，每个色谱峰的峰面积代表对应物质的相对含量。
进一步地，共有差异脂质代谢物基础数据的获取方法还包括：主成分与偏最小二乘判别分析法分析后，基于PLS-DA变量投影重要度，选取VIP>1.0的变量作为筛选标准，获得共有差异脂质代谢物基础数据。
进一步地，待测品种鉴定步骤中，比对包括：将待测品种花生的脂质指标、蛋白指标和共有差异脂质代谢物数据与基础数据合并生成可视化热图，进行聚类分析。
进一步地，已知品种为高油酸品种和低油酸品种。
进一步地，已知品种和待测品种的花生均采用成熟期的花生，通过近红外光谱法筛选褐色果皮的成熟荚果得到。
本发明的设计原理如下：花生作为油料作物，其脂质组组分丰富，而各花生品种的不同基因组会引起脂质组不同程度的改变，因此，品种间脂质组谱差异分析可以成为花生品种与品质鉴定的新思路。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
1、本发明研究品种间的脂质、蛋白和脂质代谢的差异，从而获得可以区分花生品种的含量差异显著的脂质分子，克服了仅凭花生形态特征与分子标记的鉴定准确性与稳定性不足，建立一种新型的花生品种与品质鉴评的集成技术；
2、本发明与单一近红外光谱无损检测方法相比，不仅将花生品质检测从脂肪酸水平提升至脂质分子水平，实现了对未知花生品种鉴定、品质评价与质量监测；
3、本发明的共有差异脂质代谢物在花生品种间具有显著差异，因此能够覆盖各花生品种。
附图说明
图1为实施例1中高油酸与正常花生脂质组学的差异；
图2为实施例1中花生脂质组学的PCA图；
图3为实施例1中花生脂质组学的PLS-DA图；
图4为实施例1中花生脂质组学的投影重要度(VIP)得分图；
图5为实施例1中花生品质指标与共特异性脂质生物标志物的聚类热图；
图6为实施例2中花生脂质组学的PCA图；
图7为实施例2中花生脂质组学的PLS-DA图；
图8为实施例2中花生脂质组学的投影重要度(VIP)得分图；
图9为实施例2中花生品质指标与共特异性脂质生物标志物的聚类热图；
图10为实施例3中花生脂质组学的PCA图；
图11为实施例3中花生脂质组学的PLS-DA图；
图12为实施例3中花生脂质组学的投影重要度(VIP)得分图；
图13为实施例3中花生品质指标与共特异性脂质生物标志物的聚类热图。
具体实施方式
下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述：
一种花生品种的鉴定方法，包括：
一、获取基础数据步骤：
1)花生样品预处理：采集高油酸与低油酸品种的成熟期已知品种花生，清洗花生荚果，去除表面泥土，40℃烘干脱水，去壳；
2)花生籽粒成熟度与品质指标检测：随机选取20粒烘干花生籽粒，使用近红外谷物分析仪DA7250(Perten，瑞典)进行果实的成熟度(果皮颜色)一致性判定，选择褐色果皮的成熟荚果；品质指标检测，包括脂质指标：即脂肪(Fat)、油酸(Oleic acid，CHO)、亚油酸(Linoleic acid，CLA)、油酸/亚油酸含量比值(CHO/CLA)、棕榈酸(Palmitic acid)、硬脂酸(Stearic acid)、花生酸(Arachidic acid)、山嵛酸(Docosanoic acid)、二十四烷酸(Lignocer ic acid)；蛋白指标：蛋白质(Protein，Pr)、氨基酸(Amino acid，AA)、苏氨酸(Threonine，Thr)、缬氨酸(Valine，Val)、蛋氨酸(Methionine，Me t)、异亮氨酸(Isoleucine，Ile)、亮氨酸(Leucine，Leu)、苯丙氨酸(Phen ylalanine，Phe)、赖氨酸(Lysine，Lys)、组氨酸(Histidine，His)、精氨酸(Arginine，Arg)、脯氨酸(Proline，Pro)；
3)花生脂质代谢物的提取：对烘干脱水后的样品籽粒，用液氮进行预冷，研磨仪研磨(30Hz、1.5min)研磨成粉状样品，取50mg加入1mL甲醇提取溶液，其中提取液包含甲醇、MTBE和内标混合物，提取液的有机剂浓度为70％(v/v)；粉末样品与提取液混合后，急速涡旋2min；为提高提取率，混合物4℃下超声处理(超声清洗机型号SB-800 DTD，功率800W，频率40kHz)10min；而后混合物加入500μL超纯水，涡旋1min均匀；4℃，12000r/min离心10min，吸取上清液500μL于1.5mL离心管中，真空冷冻干燥(VIRTIS，美国)浓缩，用100μL流动相B复溶后，用0.22μm微孔滤膜过滤样品，得到待测液并保存于进样瓶中进行UPLC-MS/MS分析，每个样品3个生物重复；
4)花生脂质代谢物定性定量分析：将待测液采用UPLC系统(Shim-pack UFLCSHIMADZU CBM-30A)进行分析，分析条件如下，UPLC：色谱柱，Thermo C30(2.6μm，2.1mm*100mm)；液相条件，A相为：乙腈/水(60/40V，0.04％乙酸，5mmol/L甲酸铵)；与B相，乙腈/异丙醇(10/90V，含0.04％乙酸，5mmol/L甲酸铵)；梯度洗脱：0min时，A/B比例为80:20V/V；3min时，50:50V/V；5min时，35:65V/V；9min时，25:75V/V；15.5min时，10:90V/V；流速0.35mL/min；柱温45℃；进样量2μL；流出物交替连接到电喷雾离子源-三重四极杆线性离子阱-质谱仪(ESI-triple quadrupole-linear ion trap(QTRAP)-MS，ESI-QTRAP-MS/MS)；
流出物进行ESI-QTRAP-MS/MS(QTRAP 6500+)分析：该系统配备ESI涡轮离子喷射接口，以正负离子模式运行，由Analyst 1.6.3软件(Sciex)控制，ESI源操作参数如下：ESI温度550℃；离子喷射电压(IS)5500V；离子源气体I(GSI)、气体II(GSII)、帘气(CUR)分别设置为55、60和25psi；碰撞诱导电离(CAD)为中等；碰撞气体(氮气)设置为5psi进行MRM实验，获得三重四极杆扫描结果，在三重四极杆中，每个离子对MRM是根据优化的去簇电压和碰撞能进行扫描检测；根据每个时期内洗脱的代谢物，对一组特定的MRM转换进行监测；
一级谱、二级谱数据基于MVDB V2.0数据库及代谢物信息公共数据库Mass Bank、KNAPSAcK、HMDB和METLIN等进行物质定性，分析时去除了其中部分物质定性，分析时去除了同位素信号，含K+离子、Na+离子、NH4+离子的重复信号，以及本身是其他更大分子量物质的碎片离子的重复信号；代谢物定量则通过三重四级杆质谱的多反应监测模式(multiplereaction monitoring，MRM)分析获得代谢物检测多峰图，利用Analyst 1.6.3软件进行去背景噪音及低质量的处理，对色谱峰进行积分和校正，每个色谱峰的峰面积代表对应物质的相对含量，将质谱数据与现有数据库中的数据进行对比鉴定样品中的脂质分子，得到已知花生品种的脂质代谢物原始数据库；
5)脂质组学的数据处理与分析：对脂质代谢物原始数据库进行组间显著差异分析(差异筛选条件为log2 fold change≥2，P≤0.05)，初步筛选花生品种共同差异脂质代谢物；进而对初筛差异脂质代谢物进行主成分(PCA)与偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)分析，以便进一步可视化脂质代谢测试数据的组间差异；
6)共有差异脂质代谢物的筛选与聚类分析：基于PLS-DA变量投影重要度(variable importance in projection，VIP)，选取VIP>1.0的变量作为筛选标准获得共有差异脂质代谢物：
编号：LIPID-P-0993，脂质分子：TG(18:1/18:1/18:2)，测定精确分子量：882.767642；
编号：LIPID-P-1049，脂质分子：TG(18:1/18:2/18:2)，测定精确分子量：880.751992；
编号：LIPID-P-0329，脂质分子：PC(18:0/18:1)，测定精确分子量：787.609108；
编号：LIPID-P-0928，脂质分子：TG(18:0/18:1/18:2)，测定精确分子量：884.783292；
编号：LIPID-P-0860，脂质分子：TG(16:1/18:1/20:0)，测定精确分子量：886.798942；
编号：LIPID-P-0817，脂质分子：TG(14:0/20:1/22:0)，测定精确分子量：916.845892；
编号：LIPID-P-1093，脂质分子：TG(18:2/18:2/18:2)，测定精确分子量：878.736342；
编号：LIPID-P-0869，脂质分子：TG(18:1/18:1/20:0)，测定精确分子量：914.830242；
编号：LIPID-P-0807，脂质分子：TG(14:0/20:0/20:1)，测定精确分子量：888.814592；
编号：LIPID-P-0848，脂质分子：TG(16:0/16:1/18:1)，测定精确分子量：830.736342；
编号：LIPID-P-0932，脂质分子：TG(14:0/20:1/22:2)，测定精确分子量：912.814592；
编号：LIPID-P-0861，脂质分子：TG(18:0/18:1/18:1)，测定精确分子量：886.798942；
编号：LIPID-P-0998，脂质分子：TG(14:0/18:0/22:4)，测定精确分子量：882.767642；
编号：LIPID-P-0856，脂质分子：TG(14:0/18:0/20:2)，测定精确分子量：858.767642；
编号：LIPID-P-0931，脂质分子：TG(18:1/18:2/20:0)，测定精确分子量：912.814592；
编号：LIPID-P-0881，脂质分子：TG(14:0/22:0/22:2)，测定精确分子量：942.861542；
编号：LIPID-P-0157，脂质分子：DG(18:1/18:1/0:0)，测定精确分子量：620.537976；
编号：LIPID-P-0804，脂质分子：TG(18:0/18:0/18:1)，测定精确分子量：888.814592；
编号：LIPID-P-0797，脂质分子：TG(14:0/18:0/20:1)，测定精确分子量：860.783292；
编号：LIPID-P-0795，脂质分子：TG(16:0/16:1/20:0)，测定精确分子量：860.783292；
编号：LIPID-P-0803，脂质分子：TG(16:0/16:1/22:0)，测定精确分子量：888.814592；
编号：LIPID-P-0940，脂质分子：TG(14:0/20:0/22:3)，测定精确分子量：912.814592；
编号：LIPID-P-0814，脂质分子：TG(16:0/18:1/22:0)，测定精确分子量：916.845892；
编号：LIPID-P-1014，脂质分子：TG(18:1/18:3/20:0)，测定精确分子量：910.798942；
编号：LIPID-P-0950，脂质分子：TG(16:1/20:2/22:0)，测定精确分子量：940.845892；
编号：LIPID-P-0879，脂质分子：TG(18:1/18:1/22:0)，测定精确分子量：942.861542；
编号：LIPID-P-1006，脂质分子：TG(18:2/18:2/20:0)，测定精确分子量：910.798942；
编号：LIPID-P-0796，脂质分子：TG(14:0/18:1/20:0)，测定精确分子量：860.783292；
编号：LIPID-P-0812，脂质分子：TG(14:0/20:0/22:1)，测定精确分子量：916.845892；
编号：LIPID-P-0822，脂质分子：TG(14:0/22:0/22:1)，测定精确分子量：944.877192；
编号：LIPID-P-0849，脂质分子：TG(14:0/18:0/18:2)，测定精确分子量：830.736342；
括号中数据组数量表示物质上连有脂肪酸的数量，冒号前的数字表示脂肪酸的碳原子个数，冒号后的数字表示双键个数。
二、待测品种鉴定步骤：
同获取基础数据步骤中1)花生样品预处理、2)花生籽粒成熟度与品质指标检测、3)花生脂质代谢物的提取，获取成熟期待测品种花生的脂质指标、蛋白指标和共有差异脂质代谢物数据；
进行多元统计分析后，得到PCA与PLS-DA得分图，将待测品种花生的脂质指标、蛋白指标和共有差异脂质代谢物数据与基础数据合并生成可视化热图，进行聚类分析，待测品种能与已知品种聚类的为遗传相同或相近的品种，不能聚类的为新品种。
实施例1：
选用高油酸(开农1715，KN1715)与低油酸(冀花7号，JH7H)花生的品种作为已知品种，以具体实施方式中的方法获取基础数据，获得的数据如表格1-2所示：
表格1花生籽粒脂质相关指标含量(％)
表格2花生籽粒蛋白相关指标含量(％)
脂质组学的数据处理与分析过程中，利用火山图进行可视化，高油酸与正常花生的脂质组差异如图1所示，图1中红、绿与黑色分别表示正、负与无相关性，其颜色越深相关性越强；PCA如图2所示，PLS-DA如图3所示，从图2和图3可以看出，PCA与PLS-DA均可以将KN1715与JH7H的脂质代谢物完全分离为两组。
从图4可以看出，两品种中存在3类(即甘油二酯DG、甘油三酯TG与磷脂酰胆碱PC)31种脂质代谢物的VIP值>1.0，说明该31种脂质代谢物是能够区分两个品种的核心差异脂质代谢物，这些脂质分子尽可能全面涵盖现有花生栽培种。
根据确定的31种共有差异脂质代谢物的组分与相对含量，结合近红外数据，通过聚类分析，生成已知花生品种可视化特征图谱，见图5，能显示不同花生品种的共有差异脂质代谢物与品质的变化及差异，供待测花生进行查询和比对。
实施例2：
选用市售花生H176作为待测品种，以具体实施方式中的方法进行鉴定，获得的数据如表格3-4所示：
表格3花生籽粒脂质相关指标含量(％)
表格4花生籽粒蛋白相关指标含量(％)
PCA如图6所示，PLS-DA如图7所示，从图6和图7可以看出，H176与对照品种(KN1715与JH7H)的脂质代谢物完全分离。
从图8可以看出，两品种中存在3类(即甘油二酯DG、甘油三酯TG与磷脂酰胆碱PC)31种脂质代谢物的VIP值>1.0，且均被KN1715与JH7H的31种脂质代谢物覆盖。
以已构建的对照花生品种(KN1715与JH7H)可视化特征图谱为参照，根据上述确定的19种核心共有差异脂质代谢物的组分与相对含量，结合近红外数据，通过聚类分析，生成可视化特征图谱，见图9，经鉴定，H176也为高油酸花生，其部分品质指标与脂质组成分与对照花生品种差异明显，由此可判定市售花生H176为新品种且品质与高油酸花生KN1715相近。
实施例3：
选用市售花生L70作为待测品种，以具体实施方式中的方法进行鉴定，获得的数据如表格5-6所示：
表格5花生籽粒脂质相关指标含量(％)
表格6花生籽粒蛋白相关指标含量(％)
PCA如图10所示，PLS-DA如图11所示，从图10和图11可以看出，L70与对照品种(KN1715与JH7H)的脂质代谢物完全分离。
从图12可以看出，两品种中存在3类(即甘油二酯DG、甘油三酯TG与磷脂酰胆碱PC)31种脂质代谢物的VIP值>1.0，且均被KN1715与JH7H的31种脂质代谢物覆盖。
以已构建的对照花生品种(KN1715与JH7H)可视化特征图谱为参照，根据上述确定的21种核心共有差异脂质代谢物的组分与相对含量，结合近红外数据，通过聚类分析，生成可视化特征图谱，见图13，经鉴定，L70也为高油酸花生，其部分品质指标与脂质组成分与对照花生品种差异明显，由此可判定市售花生L70为新品种且品质与低油酸花生JH7H相近。
对于本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及变形，而所有的这些改变以及变形都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种花生品种的鉴定方法，其特征在于，包括：
获取基础数据步骤：获取已知品种花生的脂质指标、蛋白指标和共有差异脂质代谢物作为基础数据；所述共有差异脂质代谢物包括：
编号：LIPID-P-0993，脂质分子：TG 18:1/18:1/18:2，测定精确分子量：882.767642；
编号：LIPID-P-1049，脂质分子：TG 18:1/18:2/18:2，测定精确分子量：880.751992；
编号：LIPID-P-0329，脂质分子：PC 18:0/18:1，测定精确分子量：787.609108；
编号：LIPID-P-0928，脂质分子：TG 18:0/18:1/18:2，测定精确分子量：884.783292；
编号：LIPID-P-0860，脂质分子：TG 16:1/18:1/20:0，测定精确分子量：886.798942；
编号：LIPID-P-0817，脂质分子：TG 14:0/20:1/22:0，测定精确分子量：916.845892；
编号：LIPID-P-1093，脂质分子：TG 18:2/18:2/18:2，测定精确分子量：878.736342；
编号：LIPID-P-0869，脂质分子：TG 18:1/18:1/20:0，测定精确分子量：914.830242；
编号：LIPID-P-0807，脂质分子：TG 14:0/20:0/20:1，测定精确分子量：888.814592；
编号：LIPID-P-0848，脂质分子：TG 16:0/16:1/18:1，测定精确分子量：830.736342；
编号：LIPID-P-0932，脂质分子：TG 14:0/20:1/22:2，测定精确分子量：912.814592；
编号：LIPID-P-0861，脂质分子：TG 18:0/18:1/18:1，测定精确分子量：886.798942；
编号：LIPID-P-0998，脂质分子：TG 14:0/18:0/22:4，测定精确分子量：882.767642；
编号：LIPID-P-0856，脂质分子：TG 14:0/18:0/20:2，测定精确分子量：858.767642；
编号：LIPID-P-0931，脂质分子：TG 18:1/18:2/20:0，测定精确分子量：912.814592；
编号：LIPID-P-0881，脂质分子：TG 14:0/22:0/22:2，测定精确分子量：942.861542；
编号：LIPID-P-0157，脂质分子：DG 18:1/18:1/0:0，测定精确分子量：620.537976；
编号：LIPID-P-0804，脂质分子：TG 18:0/18:0/18:1，测定精确分子量：888.814592；
编号：LIPID-P-0797，脂质分子：TG 14:0/18:0/20:1，测定精确分子量：860.783292；
编号：LIPID-P-0795，脂质分子：TG 16:0/16:1/20:0，测定精确分子量：860.783292；
编号：LIPID-P-0803，脂质分子：TG 16:0/16:1/22:0，测定精确分子量：888.814592；
编号：LIPID-P-0940，脂质分子：TG 14:0/20:0/22:3，测定精确分子量：912.814592；
编号：LIPID-P-0814，脂质分子：TG 16:0/18:1/22:0，测定精确分子量：916.845892；
编号：LIPID-P-1014，脂质分子：TG 18:1/18:3/20:0，测定精确分子量：910.798942；
编号：LIPID-P-0950，脂质分子：TG 16:1/20:2/22:0，测定精确分子量：940.845892；
编号：LIPID-P-0879，脂质分子：TG 18:1/18:1/22:0，测定精确分子量：942.861542；
编号：LIPID-P-1006，脂质分子：TG 18:2/18:2/20:0，测定精确分子量：910.798942；
编号：LIPID-P-0796，脂质分子：TG 14:0/18:1/20:0，测定精确分子量：860.783292；
编号：LIPID-P-0812，脂质分子：TG 14:0/20:0/22:1，测定精确分子量：916.845892；
编号：LIPID-P-0822，脂质分子：TG 14:0/22:0/22:1，测定精确分子量：944.877192；
编号：LIPID-P-0849，脂质分子：TG 14:0/18:0/18:2，测定精确分子量：830.736342；
待测品种鉴定步骤：获取待测品种花生的脂质指标、蛋白指标和共有差异脂质代谢物数据，将其与基础数据进行比对，待测品种能与已知品种聚类的为遗传相同或相近的品种，不能聚类的为新品种。
2.如权利要求1所述的花生品种的鉴定方法，其特征在于，已知品种和待测品种的脂质指标包括：脂肪、油酸、亚油酸、油酸/亚油酸含量比值、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸和二十四烷酸的指标。
3.如权利要求1所述的花生品种的鉴定方法，其特征在于，已知品种和待测品种的蛋白指标包括：蛋白质、氨基酸、苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸和脯氨酸的指标。
4.如权利要求1所述的花生品种的鉴定方法，其特征在于，已知品种和待测品种的共有差异脂质代谢物的获取方式包括：将花生的提取液先采用UPLC系统进行分析，流出物交替连接到电喷雾离子源-三重四极杆线性离子阱-质谱仪进行MRM实验，在三重四极杆中，每个离子对MRM是根据优化的去簇电压和碰撞能进行扫描检测，根据每个时期内洗脱的代谢物，对一组特定的MRM转换进行监测。
5.如权利要求1所述的花生品种的鉴定方法，其特征在于，获取基础数据步骤中，共有差异脂质代谢物基础数据的获取方法包括：对已知品种花生的脂质代谢物进行定性分析和定量分析，将定性分析和定量分析的数据进行组间显著差异分析，差异筛选条件为log2fold change≥2，P≤0.05；然后进行主成分与偏最小二乘判别分析法分析，获得共有差异脂质代谢物基础数据。
6.如权利要求5所述的花生品种的鉴定方法，其特征在于，所述定性分析包括：将花生提取液采用UPLC-MS/MS采集质谱数据，一级谱、二级谱数据基于MVDB V2.0数据库及代谢物信息公共数据库进行物质定性。
7.如权利要求5所述的花生品种的鉴定方法，其特征在于，所述定量分析包括：通过三重四级杆质谱的多反应监测模式分析获得代谢物检测多峰图，去背景噪音及低质量的处理，对色谱峰进行积分和校正，每个色谱峰的峰面积代表对应物质的相对含量。
8.如权利要求5所述的花生品种的鉴定方法，其特征在于，共有差异脂质代谢物基础数据的获取方法还包括：主成分与偏最小二乘判别分析法分析后，基于PLS-DA变量投影重要度，选取VIP>1.0的变量作为筛选标准，获得共有差异脂质代谢物基础数据。
9.如权利要求1所述的花生品种的鉴定方法，其特征在于，待测品种鉴定步骤中，所述比对包括：将待测品种花生的脂质指标、蛋白指标和共有差异脂质代谢物数据与基础数据合并生成可视化热图，进行聚类分析。
10.如权利要求1所述的花生品种的鉴定方法，其特征在于，已知品种为高油酸品种和低油酸品种。
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2021
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