CN114323903B - 一种脱落细胞的处理试剂、制备方法及其使用方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种脱落细胞的处理试剂、制备方法及其使用方法和应用。所述脱落细胞的处理试剂按质量百分含量计包括：缓冲剂0.02‑1.4％、非极性分子低渗剂14‑60％和非离子表面活性剂0.002‑0.11％。所述非极性分子低渗剂包括乙二醇、甲醇或异丙醇中的任意一种或至少两种的组合，所述非离子表面活性剂包括聚乙二醇200、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000中的任意一种或至少两种的组合。所述脱落细胞的处理试剂的制备方法与使用方法简便易行，能够用于血性标本的制片过程，可以有效去除红细胞，并保持目标细胞形态完好，便于观察。
Description
技术领域
本发明属于生物医学领域，具体涉及一种脱落细胞的处理试剂、制备方法及其使用方法和应用。
背景技术
脱落细胞学是通过采集人体各部位，特别是管腔器官表面的脱落细胞，经染色后用显微镜观察这些细胞的形态，并做出诊断的一门临床检验学科，又名诊断细胞学或临床细胞学，具有快速、准确、方便以及患者痛苦少等优点，已成为临床诊断的重要手段之一。但是在病理标本中，常见一些含有大量红细胞的血性标本，在制片过程中，红细胞过多会导致肿瘤细胞被覆盖遮挡或者因红细胞过多肿瘤细胞无法粘附在载玻片上，从而导致制片效果差，影响病理医生诊断。
目前，大多采用中间层法从脱落细胞中得到肿瘤细胞，即通过低速离心，使红细胞、肿瘤细胞以及上清液分层，而肿瘤细胞主要聚集在中间层，再通过轻轻吸取中间层的方法提取肿瘤细胞。但该方法中由于中间层细胞量很少，离心后约只有1mm，操作起来容易吸取到红细胞，从而导致取中间层失败，影响制片诊断。因此，也有众多报道通过在血性标本加入浓度不等的乙醇冰醋酸溶液，使红细胞裂解，再通过离心的方式去除破碎的红细胞，从而得到肿瘤细胞。
CN104893359A公开了一种脱落细胞标本快速染色剂，包括：苏木紫、无水乙醇、鉀明钒、蒸馏水、氧化汞和冰醋酸；将脱落细胞涂片标本用本脱落细胞标本快速染色剂染色30s，流水洗10s即可，缩短了染色时间，由1h缩短为1min内完成，临床诊断时间大为提前，方法简便易掌握，材料消耗成本低。但该方法并没有有效去除红细胞，会导致观察时背景不清楚，且冰醋酸的存在容易破坏要收集的待测细胞形态，从而影响诊断。
CN109425529A公开了一种用于液基细胞学实验的样本萃取液，由叠氮钠、氯化钾、乙醇、乙二醇、苯扎氯铵、十二烷基磺酸钠、冰醋酸和纯化水组成，降低了使用成本，有效的将样本中的红细胞、黏液团块等杂质分解清除，萃取出待测的有效细胞，以使液基细胞学实验时阅片背景清晰明了，具有诊断意义。但该方法中冰醋酸的存在容易破坏要收集的脱落细胞形态，从而影响诊断，且味道刺激，不利于操作人员的身体健康。
基于以上研究，可以看到目前针对脱落细胞学去除红细胞的方法主要有中间层法和冰醋酸试剂法，但前者操作难度大，后者容易破坏待测的目标细胞的形态。因此，找到一种有效的去除脱落细胞中红细胞的试剂，使得诊断过程中的阅片背景清晰，对于整个临床诊断具有重要的现实意义。
发明内容
针对现有技术的不足和现实实际的需求，本发明的目的在于提供一种脱落细胞的处理试剂、制备方法及其使用方法和应用。所述脱落细胞的处理试剂在使用时，能够有效去除红细胞，同时保证目标细胞的形态完好。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供一种脱落细胞的处理试剂，所述脱落细胞的处理试剂按质量百分含量计包括：缓冲剂0.02-1.4％、非极性分子低渗剂14-60％和非离子表面活性剂0.002-0.11％。
所述非极性分子低渗剂包括乙二醇、甲醇或异丙醇中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合可以是乙二醇与甲醇的组合或甲醇与异丙醇的组合等，其余任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
所述非离子表面活性剂包括聚乙二醇200、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合可以是聚乙二醇200与聚乙二醇4000的组合或聚乙二醇4000与聚乙二醇6000的组合等，其余任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
本发明所涉及的脱落细胞的处理试剂通过缓冲剂调节渗透压，采用非极性分子低渗剂和非离子表面活性剂搭配使用，其中，非极性分子低渗剂作为渗透助剂，能够促进助溶剂(即非离子表面活性剂)，渗透到红细胞中，溶解红细胞。所述非离子表面活性剂通过采用聚乙二醇，一方面能够起到助溶剂的作用，另一方面，也能够起到渗透助剂的作用，从而更好的促进助溶剂渗透至红细胞中，溶解红细胞。
需要说明的是，本发明提供的脱落细胞的处理试剂通过溶解红细胞，随后通过离心，能够有效去除红细胞，从而在制片后进行观察时，保证视野背景干净无杂质，且所述脱落细胞的处理试剂能够保证目标细胞的形态良好，便于观察。
所述0.02-1.4％，可以是0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％、0.3％、0.5％、0.7％、0.9％、1.1％、1.2％或1.4％等。
所述14-60％，可以是14％、16％、18％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％等。
所述0.002-0.11％，可以是0.002％、0.004％、0.006％、0.008％、0.01％、0.03％、0.05％、0.07％、0.09％或0.11％等。
上述数值范围内的其他点值均可选择，在此便不再一一赘述。
本发明中，所述脱落细胞的处理试剂按质量百分含量计包括：缓冲剂0.07-1.1％、非极性分子低渗剂14-46％和非离子表面活性剂0.002-0.015％。
本发明中，所述非极性分子低渗剂为乙二醇、甲醇与异丙醇的组合。
优选地，所述乙二醇在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为1-15％，优选为1-10％。
所述1-15％，可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％等。
优选地，所述甲醇在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为5-15％，优选为5-11％。
所述5-15％，可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％等。
优选地，所述异丙醇在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为8-30％，优选为8-25％。
所述8-30％，可以是8％、10％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％或30％等。
本发明中，所述非离子表面活性剂为聚乙二醇200与聚乙二醇4000的组合。
优选地，所述聚乙二醇200在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.02％，优选为0.001-0.005％。
所述0.001-0.02％，可以是0.001％、0.003％、0.005％、0.007％、0.009％、0.011％、0.013％、0.015％、0.017％、0.019％或0.02％等。
优选地，所述聚乙二醇4000在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.1％，优选为0.001-0.01％。
所述0.001-0.1％，可以是0.001％、0.005％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％等。
上述数值范围内的其他点值均可选择，在此便不再一一赘述。
本发明中，所述缓冲剂包括氯化钠、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钠或乙酸钠中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合可以是氯化钠与无水磷酸氢二钠的组合或无水磷酸氢二钠与磷酸二氢钠的组合等，其余任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述氯化钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.5％，优选为0.01-0.5％。
所述0.001-0.5％，可以是0.001％、0.005％、0.008％、0.01％、0.05％、0.08％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％等。
优选地，所述无水磷酸氢二钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.5％，优选为0.001-0.3％。
所述0.001-0.5％，，可以是0.001％、0.005％、0.008％、0.01％、0.05％、0.08％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％等。
优选地，所述磷酸二氢钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.01-0.1％，优选为0.05-0.1％。
所述0.01-0.1％，可以是0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％等。
优选地，所述乙酸钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.01-0.3％，优选为0.01-0.2％。
所述0.01-0.3％，可以是0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.10％、0.2％或0.3％等。
上述数值范围内的其他点值均可选择，在此便不再一一赘述。
第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述的脱落细胞的处理试剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
称取缓冲剂、非离子表面活性剂与纯化水混合，溶解完全，随后加入非极性分子低渗剂，混合均匀，得到所述脱落细胞的处理试剂。
本发明所涉及的脱落细胞的处理试剂的制备方法简单，只需要物理混合即可完成。
第三方面，本发明提供一种根据第一方面所述的脱落细胞的处理试剂的使用方法，所述使用方法包括以下步骤：
(1)取血性标本，离心，去除上清液，得到第一沉淀物；
(2)向步骤(1)得到的第一沉淀物中加入第一方面所述的脱落细胞的处理试剂，混合均匀，静置，离心，去除上清液，得到第二沉淀物；
(3)向步骤(2)得到的第二沉淀物加入缓冲溶液，离心，去除上清液，得到第三沉淀物；
(4)取出步骤(3)得到的第三沉淀物，进行制片，染色，将染色后的片子浸泡脱水，取出片子浸泡透明，封片，观察。
本发明所涉及的脱落细胞的处理试剂的使用方法简便易行，只涉及简单的加液、离心的步骤，成本低，危害性低，在有效去除红细胞的前提下，能够不破坏目标细胞的形态特征，提高血性标本的制片质量。
所述血性样本可以是胸水、腹水等浆膜腔样本、甲状腺穿刺样本、尿液样本或痰液样本中的任意一种，均来源于广州安必平医学检验所。
优选地，所述血性标本与第一方面所述的脱落细胞的处理试剂的体积比为(1-1.5):1。
所述(1-1.5):1，可以是1:1、1.15:1、1.2:1、1.25:1、1.3:1、1.35:1、1.4:1、1.45:1或1.5:1等。
上述数值范围内的其他点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，步骤(1)所述离心、步骤(2)所述离心和步骤(3)所述离心的离心力各自独立地为500-700g，步骤(1)所述离心、步骤(2)所述离心和步骤(3)所述离心的时间各自独立地为5-10min。
所述500-700g，可以是500g、520g、540g、560g、580g、600g、620g、640g、660g、680g或700g等。
所述5-10min，可以是5min、5.5min、6min、6.5min、7min、7.5min、8min、8.5min、9min、9.5min或10min等。
优选地，所述静置的时间为10-15min。
所述10-15min，可以是10min、10.5min、11min、11.5min、12min、12.5min、13min、13.5min、14min、14.5min或15min等。
上述数值范围内的其他点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述脱水的试剂包括无水乙醇。
优选地，所述脱水的时间为20-40s。
所述20-40s，可以是20s、22s、24s、26s、28s、30s、32s、34s、36s、38s或40s。
优选地，所述透明的试剂包括二甲苯。
优选地，所述透明的时间为3-6min。
所述3-6min，可以是3min、3.2min、3.4min、3.6min、3.8min、4min、4.2min、4.4min、4.6min、4.8min、5min、5.2min、5.4min、5.6min、5.8min或6min等。
上述数值范围内的其他点值均可选择，在此便不再一一赘述。
第四方面，本发明提供一种根据第一方面所述的脱落细胞的处理试剂在血性标本制片中的应用。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明所涉及的脱落细胞的处理试剂通过采用非极性分子低渗剂和非离子表面活性剂搭配使用，其中，非极性分子低渗剂作为渗透助剂，能够促进助溶剂，即非离子表面活性剂，渗透到红细胞中，溶解红细胞。所述非离子表面活性剂通过采用聚乙二醇，一方面能够起到助溶剂的作用，另一方面，也能够起到渗透助剂的作用，从而更好的促进助溶剂渗透至红细胞中，溶解红细胞；
(2)本发明所涉及的脱落细胞的处理试剂的使用方法简便易行，只涉及简单的加液、离心的步骤，成本低，危害性低，在有效去除红细胞的前提下，能够不破坏目标细胞的形态特征，提高血性标本的制片质量。
附图说明
图1是本发明应用例1的玻片成像结果图；
图2是本发明应用例2的玻片成像结果图；
图3是本发明应用例3的玻片成像结果图；
图4是本发明应用例4的玻片成像结果图；
图5是本发明应用例5的玻片成像结果图；
图6是本发明应用例6的玻片成像结果图；
图7是本发明应用例7的玻片成像结果图；
图8是本发明应用例8的玻片成像结果图；
图9是本发明应用例9的玻片成像结果图；
图10是本发明应用例10的玻片成像结果图；
图11是本发明应用例11的玻片成像结果图；
图12是本发明应用例12的玻片成像结果图；
图13是本发明应用例13的玻片成像结果图；
图14是本发明应用例14的玻片成像结果图；
图15是本发明对比应用例1的玻片成像结果图；
图16是本发明对比应用例2的玻片成像结果图；
图17是本发明对比应用例3的玻片成像结果图；
图18是本发明对比应用例4的玻片成像结果图；
图19是本发明对比应用例5的玻片成像结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例、对比例、应用例或对比应用例中相应材料和原料的购买来源如下：
其中，中性树胶购自国药化学试剂厂，型号为10004160；BD CytoRichTM redpreservative购自美国BD公司，型号为491336；血性胸腹水标本来源于广州安必平医学检验所。其余材料和原料无特殊说明，均可从其他商业途径获得。
实施例1
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，按质量百分含量计由以下组分组成：
其制备方法如下：
按配方量，称取缓冲剂、非极性分子低渗剂与纯化水混合，搅拌至完全溶解后，加入配方量的非离子表面活性剂，混合均匀，得到所述脱落细胞的处理试剂。
实施例2
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，按质量百分含量计由以下组分组成：
其制备方法如下：
按配方量，称取缓冲剂、非极性分子低渗剂与纯化水混合，搅拌至完全溶解后，加入配方量的非离子表面活性剂，混合均匀，得到所述脱落细胞的处理试剂。
实施例3
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，按质量百分含量计由以下组分组成：
其制备方法如下：
按配方量，称取缓冲剂、非极性分子低渗剂与纯化水混合，搅拌至完全溶解后，加入配方量的非离子表面活性剂，混合均匀，得到所述脱落细胞的处理试剂。
实施例4
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述原料不包括乙二醇，将其减少的质量由甲醇和异丙醇补足，所述甲醇和异丙醇的质量比保持不变，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
实施例5
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述原料不包括甲醇和异丙醇，将其减少的质量由乙二醇补足，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
实施例6
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，将所述原料聚乙二醇4000等量替换为聚乙二醇6000，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
实施例7
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述甲醇的质量分数为18.26％，纯化水的质量分数为55.98％，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
实施例8
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述甲醇的质量分数为3.57％，将其减少的质量由纯化水补足，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
实施例9
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述异丙醇的分数为5.86％，将其减少的质量由纯化水补足，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
实施例10
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述异丙醇的分数为35.44％，纯化水的质量分数为49.39％，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
实施例11
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述原料不包括聚乙二醇4000，将其减少的质量由聚乙二醇200补足，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
实施例12
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述原料不包括聚乙二醇200，将其减少的质量由聚乙二醇4000补足，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
实施例13
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述聚乙二醇4000的质量分数为0.3％，所述纯化水的质量分数为66.91％，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
实施例14
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述聚乙二醇200的质量分数为0.04％，所述纯化水的质量分数为67.09％，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
对比例1
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述脱落细胞的处理试剂不包括非极性分子低渗剂，将其减少的质量由非离子表面活性剂补足，非离子表面活性剂中各组分的质量比保持不变，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
对比例2
本实施例提供一种脱落细胞的处理试剂，与实施例1的区别仅在于，所述脱落细胞的处理试剂不包括非离子表面活性剂，将其减少的质量由非极性分子低渗剂补足，非极性分子低渗剂中各组分的质量比保持不变，其余参数与实施例1保持一致。制备方法参考实施例1。
应用例1
本应用例提供一种脱落细胞的处理试剂的使用方法，包括以下步骤：
(1)取50mL血性胸腹水标本于离心管中，600g离心10min，去除上清液，得到第一沉淀物；
(2)向步骤(1)得到的第一沉淀物中加入30mL实施例1制备的脱落细胞的处理试剂，混合均匀，静置10min，600g离心6min，去除上清液，得到第二沉淀物；
(3)向步骤(2)得到的第二沉淀物加入4mL PBS缓冲溶液，600g离心6min，去除上清液，得到第三沉淀物；
(4)取出步骤(3)得到的第三沉淀物，进行制片，染色，将染色后的片子放置于无水乙醇脱水30s，取出片子用二甲苯浸泡，透明5min，随后用中性树胶及盖玻片封片。
应用例2
本应用例提供一种脱落细胞的处理试剂的使用方法，包括以下步骤：
(1)取50mL血性胸腹水标本于离心管中，520g离心10min，去除上清液，得到第一沉淀物；
(2)向步骤(1)得到的第一沉淀物中加入30mL实施例2制备的脱落细胞的处理试剂，混合均匀，静置12min，500g离心8min，去除上清液，得到第二沉淀物；
(3)向步骤(2)得到的第二沉淀物加入4mL PBS缓冲溶液，520g离心6min，去除上清液，得到第三沉淀物；
(4)取出步骤(3)得到的第三沉淀物，进行制片，染色，将染色后的片子放置于无水乙醇脱水40s，取出片子用二甲苯浸泡，透明4min，随后用中性树胶及盖玻片封片。
应用例3
本应用例提供一种脱落细胞的处理试剂的使用方法，包括以下步骤：
(1)取50mL血性胸腹水标本于离心管中，650g离心8min，去除上清液，得到第一沉淀物；
(2)向步骤(1)得到的第一沉淀物中加入30mL实施例3制备的脱落细胞的处理试剂，混合均匀，静置15min，650g离心5min，去除上清液，得到第二沉淀物；
(3)向步骤(2)得到的第二沉淀物加入4mL PBS缓冲溶液，650g离心5min，去除上清液，得到第三沉淀物；
(4)取出步骤(3)得到的第三沉淀物，进行制片，染色，将染色后的片子放置于无水乙醇脱水25s，取出片子用二甲苯浸泡，透明5min，随后用中性树胶及盖玻片封片。
应用例4-14
本应用例提供11种脱落细胞的处理试剂的使用方法，与应用例1的区别仅在于，将所述实施例1制备的脱落细胞的处理试剂等量替换为实施例4-14制备的脱落细胞的处理试剂，其余参数与应用例1保持一致。实验方法参考应用例1。
对比应用例1-2
本对比应用例提供2种脱落细胞的处理试剂的使用方法，与应用例1的区别仅在于，将所述实施例1制备的脱落细胞的处理试剂等量替换为对比例1-2制备的脱落细胞的处理试剂，其余参数与应用例1保持一致。实验方法参考应用例1。
对比应用例3
本对比应用例提供一种脱落细胞的处理方法，包括以下步骤：
(1)取95mL的25wt％的酒精与5mL冰醋酸混合，得到酒精-冰醋酸溶液；
(2)取50mL血性胸腹水标本于离心管中，650g离心8min，倒掉上清液，震散混匀剩余的沉淀物；
(3)向步骤(2)得到的沉淀物中加入10mL步骤(1)得到的酒精-冰醋酸溶液，混合均匀，600g离心3min，倒掉上清液，震散混匀剩余的沉淀物；
(4)向步骤(3)得到的沉淀物中加入4mL PBS缓冲溶液，600g离心5min，去除上清液，得到沉淀物；
(5)取出步骤(4)得到的沉淀物，进行制片，染色，将染色后的片子放置于无水乙醇脱水30s，取出片子用二甲苯浸泡，透明5min，随后用中性树胶及盖玻片封片。
对比应用例4
本对比应用例提供一种脱落细胞的处理方法，包括以下步骤：
(1)取50mL血性胸腹水标本于离心管中，650g离心8min，轻轻倒掉上清液，用软吸管将中间的细胞层轻轻吸取至离心管中，剩余的沉淀物废弃；
(2)向步骤(1)装有细胞层的离心管中加入4mL PBS缓冲溶液，混合均匀，600g离心5min，去除上清液，震散混匀剩余的沉淀物，再次加入4mL PBS缓冲溶液，混合均匀，600g离心5min，去除上清液，得到沉淀物；
(3)取出步骤(2)得到的沉淀物，进行制片，染色，将染色后的片子放置于无水乙醇脱水30s，取出片子用二甲苯浸泡，透明5min，随后用中性树胶及盖玻片封片。
对比应用例5
本对比应用例提供一种脱落细胞的处理方法，包括以下步骤：
(1)取50mL血性胸腹水标本于离心管中，650g离心8min，倒掉上清液，震散混匀剩余的沉淀物；
(2)向步骤(1)中的沉淀物中加入40mL BD CytoRichTM red preservative，静置15min，600g离心5min，去除上清液，震散混匀剩余的沉淀物，随后加入4mL PBS缓冲溶液，混合均匀，600g离心5min，去除上清液，得到沉淀物；
(3)取出步骤(2)得到的沉淀物，进行制片，染色，将染色后的片子放置于无水乙醇脱水5s，取出片子用二甲苯浸泡，透明5min，随后用中性树胶及盖玻片封片。
测试例1
本测试例对应用例1-14与对比应用例1-5制备的玻片使用奥林巴斯BX53显微镜进行观察。
结果如图1-17所示，图1-14分别为应用例1-14的玻片成像结果图，图15-19分别为对比应用例1-5的玻片成像结果图。图1中背景清晰，无红细胞遮挡视野，目标细胞(箭头所指的细胞)形态完好，核浆分明。图2中背景无红细胞，视野清晰，目标细胞(箭头所指的细胞)轮廓清晰，细胞核清晰可见。图3中背景干净，无遮挡视野的杂质，目标细胞(箭头所指的细胞)胞浆胞核清晰容易辨认。图4中背景干净，目标细胞(箭头所指的细胞)核浆分明，可见核仁。图5的背景中无红细胞及其碎片遮挡视野，目标细胞(箭头所指的细胞)形态保持完好，核仁清晰可见，核浆分明。
由图6的结果可知：当聚乙二醇4000等量替换为聚乙二醇6000时，视野背景中会出现一些絮状物(如箭头所指)，但细胞形态还是比较完好的，部分细胞核浆对比明显。
由图7的结果可知：当甲醇的添加量比较高时，视野背景不清晰，部分细胞(箭头所指的细胞)的核浆对比不明显。由图8的结果可知：当甲醇的添加量比较低时，视野背景干净，部分细胞(箭头所指的细胞)的胞浆轮廓不清晰。由图9的结果可知：当异丙醇的添加量较低时，视野背景不清楚，目标细胞不清晰。由图10的结果可知：当异丙醇的添加量较高时，视野背景干净，但部分目标细胞(箭头所指的细胞)的胞浆出现溶解，开始退变，轮廓模糊。
由图11的结果可知：当不添加聚乙二醇4000时，视野背景不干净(箭头所指)，部分目标细胞有退变现象。由图12的结果可知：当不添加聚乙二醇200时，视野中存在红细胞残影(如图中的箭头所指)。由图13的结果可知：当聚乙二醇4000的添加量较高时，视野中背景杂乱(如图中的箭头所指)。由图14的结果可知：当聚乙二醇200的添加量较高时，视野中背景干净，但部分目标细胞(箭头所指的细胞)的胞浆出现溶解，细胞退变。
由图15的结果可知：当所述脱落细胞的处理试剂不包括非极性分子低渗剂时，视野背景下可以看见成团的红细胞破碎絮状物，背景杂乱。由图16的结果可知：当所述脱落细胞的处理试剂不包括非离子表面活性剂时，但部分目标细胞(箭头所指的细胞)的胞浆出现溶解，细胞退变。
由图17的结果可知：采用酒精-冰醋酸溶液处理脱落细胞，能够达到一定的去除红细胞的效果，但视野背景下可以看到许多破碎红细胞絮状物，部分目标细胞(如图中的箭头所指)的细胞浆模糊，且目标细胞量较少。由图18的结果可知：采用中间层法处理脱落细胞，视野背景下可以看到许多破碎红细胞絮状物(如图中的箭头所指)。由图19的结果可知：采用BD CytoRichTM red preservative处理脱落细胞，视野背景下可以看见成团的红细胞破碎絮状物(如图中的箭头所指)，遮挡目标细胞。
对比图1与图7-10可知，当甲醇或异丙醇的添加量过高或过低时，均会对脱落细胞的处理结果产生影响，使得无法很好的观察目标细胞的形态。对比图1与图11-12可知，当不添加聚乙二醇200或聚乙二醇4000时，视野背景或目标细胞的形态会受到影响。对比图1与图13-14可知，当聚乙二醇200或聚乙二醇4000的添加量过高时，视野背景或目标细胞的形态会受到影响。对比图1与图15-16可知，当所述脱落细胞的处理试剂不包括非极性分子低渗剂或非离子表面活性剂时，会导致视野背景杂乱或细胞形态发生改变。对比图1与图17-19可知，采用其他传统方式处理脱落细胞，会导致视野背景中存在红细胞的破碎絮状物，遮挡目标细胞，从而无法很好的观察目标细胞的形态。
综上所述，本发明提供的脱落细胞的处理试剂在使用时只涉及加液、离心的步骤，成本低，危害性低，在有效去除红细胞的前提下，能够不破坏目标细胞的形态特征，提高血性标本的制片质量。
申请人声明，以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，所属技术领域的技术人员应该明了，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (16)
1.一种脱落细胞的处理试剂，其特征在于，所述脱落细胞的处理试剂按质量百分含量计为：缓冲剂0.02-1.4%、非极性分子低渗剂14-60%和非离子表面活性剂0.002-0.11%，余量为纯化水；
所述非极性分子低渗剂为乙二醇、甲醇和异丙醇；
所述乙二醇在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为1-15%；
所述甲醇在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为5-15%；
所述异丙醇在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为8-30%；
所述非离子表面活性剂为聚乙二醇200和聚乙二醇4000；
所述聚乙二醇200在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.02%；
所述聚乙二醇4000在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.1%；
所述缓冲剂由氯化钠、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和乙酸钠组成。
2.根据权利要求1所述的脱落细胞的处理试剂，其特征在于，所述脱落细胞的处理试剂按质量百分含量计为：缓冲剂0.07-1.1%、非极性分子低渗剂14-46%和非离子表面活性剂0.002-0.015%，余量为纯化水。
3.根据权利要求2所述的脱落细胞的处理试剂，其特征在于，所述乙二醇在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为1-10%；
所述甲醇在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为5-11%；
所述异丙醇在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为8-25%。
4.根据权利要求2所述的脱落细胞的处理试剂，其特征在于，所述聚乙二醇200在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.005%；
所述聚乙二醇4000在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.01%。
5.根据权利要求1所述的脱落细胞的处理试剂，其特征在于，所述氯化钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.5%；
所述无水磷酸氢二钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.5%；
所述磷酸二氢钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.01-0.1%；
所述乙酸钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.01-0.3%。
6.根据权利要求2所述的脱落细胞的处理试剂，其特征在于，所述氯化钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.01-0.5%；
所述无水磷酸氢二钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.001-0.3%；
所述磷酸二氢钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.05-0.1%；
所述乙酸钠在脱落细胞的处理试剂中的质量分数为0.01-0.2%。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的脱落细胞的处理试剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
称取缓冲剂、非离子表面活性剂与纯化水混合，溶解完全，随后加入非极性分子低渗剂，混合均匀，得到所述脱落细胞的处理试剂。
8.根据权利要求1-6中任一项所述的脱落细胞的处理试剂的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：
（1）取血性标本，离心，去除上清液，得到第一沉淀物；
（2）向步骤（1）得到的第一沉淀物中加入权利要求1-6中任一项所述的脱落细胞的处理试剂，混合均匀，静置，离心，去除上清液，得到第二沉淀物；
（3）向步骤（2）得到的第二沉淀物加入PBS缓冲溶液，离心，去除上清液，得到第三沉淀物；
（4）取出步骤（3）得到的第三沉淀物，进行制片，染色，将染色后的片子浸泡脱水，取出片子浸泡透明，封片，观察。
9.根据权利要求8所述的脱落细胞的处理试剂的使用方法，其特征在于，所述血性标本与权利要求1-6中任一项所述的脱落细胞的处理试剂的体积比为(1-1.5):1。
10.根据权利要求8所述的脱落细胞的处理试剂的使用方法，其特征在于，步骤（1）所述离心、步骤（2）所述离心和步骤（3）所述离心的离心力各自独立地为500-700 g，步骤（1）所述离心、步骤（2）所述离心和步骤（3）所述离心的时间各自独立地为5-10 min。
11.根据权利要求8所述的脱落细胞的处理试剂的使用方法，其特征在于，步骤（2）所述静置的时间为10-15 min。
12.根据权利要求8所述的脱落细胞的处理试剂的使用方法，其特征在于，步骤（4）所述脱水的试剂包括无水乙醇。
13.根据权利要求8所述的脱落细胞的处理试剂的使用方法，其特征在于，步骤（4）所述脱水的时间为20-40 s。
14.根据权利要求8所述的脱落细胞的处理试剂的使用方法，其特征在于，步骤（4）所述透明的试剂包括二甲苯。
15.根据权利要求8所述的脱落细胞的处理试剂的使用方法，其特征在于，步骤（4）所述透明的时间为3-6 min。
16.根据权利要求1-6中任一项所述的脱落细胞的处理试剂在血性标本制片中的应用。
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