CN114317758B

CN114317758B - 一种肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估试剂盒及其应用

Info

Publication number: CN114317758B
Application number: CN202210045654.0A
Authority: CN
Inventors: 陈舌; 张思; 张宇清; 宣涛
Original assignee: Runan Medical Technology Suzhou Co ltd
Current assignee: Runan Medical Technology Suzhou Co ltd
Priority date: 2022-01-16
Filing date: 2022-01-16
Publication date: 2023-04-28
Anticipated expiration: 2042-01-16
Also published as: CN114317758A

Abstract

本发明涉及分子生物学技术领域，具体公开了snoRNA SNORD33在制备肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估试剂盒和/或制剂中的应用。铂类药物是治疗肺癌和膀胱癌患者的常用化疗药物，但患者血浆中snoRNA SNORD33的表达量不同，导致患者对铂类药物的疗效也不同，因此通过检测血浆中snoRNA SNORD33的表达量差异，能用于评估肺癌或膀胱癌患者的铂类药物疗效。本发明还提供了一种能检测snoRNA SNORD33表达量的试剂盒，包含逆转录反应体系和荧光定量PCR反应体系。所述试剂盒检测快速方便、准确率高，可以实现肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估。使用本发明可以协助医生对肺癌或膀胱癌患者的铂类药物疗效进行评估和判断，对医生选择合适的治疗方案提供有价值的决策依据和参考信息，有助于提高肺癌或膀胱癌患者的治疗效果及生存质量，具有非常重要的临床价值。

Description

一种肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估试剂盒及其应用

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及snoRNA SNORD33在制备肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估试剂盒和/或制剂中的应用和一种肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估试剂盒及其应用。

背景技术

铂类是经典的DNA损伤药物，铂类药物如顺铂或卡铂进入肿瘤细胞后，形成Pt-DNA加和物，使肿瘤细胞内部DNA和DNA之间形成交联，导致DNA结构破坏，DNA复制障碍，从而抑制DNA的复制和转录，诱导细胞死亡。目前，针对肺癌和膀胱癌患者标准的一线化疗方案仍是以铂类药物为主的方案。然而，在相同的治疗方案与给药剂量的情况下，患者的铂类药物疗效却差异巨大，从而严重影响患者的治疗效果、预后及生存质量。

目前，临床上尚未有性能良好的用于评估肺癌和膀胱癌患者铂类药物疗效的标志物及方法。因此，寻找能够评估肺癌和膀胱癌患者铂类药物疗效的分子标记物，对于提高用药的针对性，减少无效用药和不良反应，选择更适合患者的治疗方案，进而提高生存率具有重要的意义。

小核仁RNA（snoRNA）属于短链非编码RNA（ncRNA），广泛存在于真核生物核仁内，大小在60-300个核苷酸左右，参与核糖体RNA（rRNA）的修饰成熟。越来越多的研究显示，肿瘤组织、细胞及体液中存在着snoRNA的异常表达，参与肿瘤的生物学行为调控。研究表明，snoRNA SNORD33在不同的肺癌和膀胱癌患者的血浆中存在明显的表达差异，而这种表达差异与肺癌和膀胱癌患者对铂类药物的疗效有密切的关联，可以通过检测血浆中snoRNASNORD33的表达差异，来评估肺癌和膀胱癌患者对铂类药物的疗效。

发明内容

本发明公开了snoRNA SNORD33在制备肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估试剂盒和/或制剂中的应用，同时公开了一种能检测血浆snoRNA SNORD33表达量的试剂盒，包含逆转录反应体系和荧光定量PCR反应体系，通过检测肺癌或膀胱癌患者血浆中snoRNASNORD33的表达量差异，来评估肺癌或膀胱癌患者的铂类药物疗效。

具体的，本发明涉及以下技术方案：

首先，本发明公开了一种用于检测血浆snoRNA SNORD33表达量的试剂盒，含有一组由SEQ ID NO.1～2所示的核苷酸序列组成的引物对，用于特异性扩增样本中的snoRNASNORD33。

具体的，一组检测snoRNA SNORD33引物对，包括qRT-PCR正向引物、反向引物，核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示：

SNORD33-F（SEQ ID NO.1）：GCCGGTGATGAGAACTTCT；

SNORD33-R（SEQ ID NO.2）：CTCAGATGGTAGTGCATGT。

优选的，所述核苷酸序列SEQ ID NO.1～2所示的特异性引物浓度为10μM。

进一步的，所述试剂盒中还含有一组由SEQ ID NO.3～4所示的核苷酸序列组成的引物对，用于特异性扩增样本中的内参U6基因。

具体的，核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示：

U6-F（SEQ ID NO.3）：CGCTTCGGCAGCACATATA；

U6-R（SEQ ID NO.4）：GCTTCACGAATTTGCGTGT。

优选的，所述核苷酸序列SEQ ID NO.3～4所示的特异性引物浓度为10μM。

进一步的，所述试剂盒中还有逆转录反应液、荧光定量PCR反应液、阳性质控品、阴性质控品、无核酸酶水。

进一步的，所述逆转录反应液含有RNA逆转录酶、随机引物、5×缓冲液、DTT、dNTPs、RNA酶抑制剂。

进一步的，所述荧光定量PCR反应液含有高保真DNA聚合酶、SYBR GREEN染料、KCl、MgCl2、Tris-HCl、dNTPs。

进一步的，所述试剂盒中的阳性质控品为含有snoRNA SNORD33和内参U6的总RNA样本，阴性质控品为无核酸酶水。

所述试剂盒能用于评估肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效，其使用方法包括如下步骤：

(1) 待测样本中提取纯化RNA，对提取的RNA进行浓度和纯度检测；

(2) 以步骤(1) 提取的RNA为模板，通过逆转录生成相应的cDNA，纯化cDNA；

(3) 以步骤(2) 所述cDNA为模板，用SEQ ID NO.1～2所示的核苷酸序列为引物，进行snoRNA SNORD33荧光定量PCR扩增；用SEQ ID NO.3～4所示的核苷酸序列为引物，进行内参U6基因荧光定量PCR扩增；

(4) 在荧光定量PCR仪中读取Ct值结果；

(5) 检测结果判定。

优选的，检测结果判定包括如下步骤：

(1)判断检测体系是否合格，阳性质控品snoRNA SNORD33检测Ct值≤32，且内参U6基因检测Ct值≤28，阴性质控品snoRNA SNORD33和内参U6基因均未检出，判定检测体系合格；

(2) 判断样本是否合格，样本内参U6基因检测Ct值≤30判定样本合格；

(3) 如Ct= Ct SNORD33 - Ct U6 > 临界值，则该样本判断为snoRNA SNORD33表达量低，临床提示该患者对铂类药物疗效不佳；如ΔCt= Ct SNORD33 - CtU6 ≤临界值，则该样本判断为snoRNA SNORD33表达量高，临床提示该患者对铂类药物疗效良好。

优选的，所述临界值由具有不同铂类药物疗效的肺癌和膀胱癌患者血浆样本中snoRNA SNORD33表达水平以及内参U6基因的表达水平分别设定，用于区分患者对铂类药物疗效的差异，其中，肺癌患者的临界值为3.67，膀胱癌患者的临界值为4.07。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

（1）本发明首次公开了snoRNA SNORD33的表达量与肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效相关，snoRNA SNORD33可以作为评估肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效的分子标志物，应用于制备肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估试剂盒和/或制剂。

（2）本发明所述技术方案基于荧光定量PCR技术，其引物组合及检测方法具有检测灵敏度高、特异性好、重复性好的特点。

（3）本发明所述技术方案系通过实时荧光定量PCR检测，通过计算ΔCt值来比较样本中snoRNA SNORD33的表达量，无需在PCR后进行电泳、杂交等操作，减少了污染和操作误差。

（4）本发明所述技术方案设置有内参，从而避免漏检，以及能够有效判断样本量是否在有效范围内，本发明所述技术方案设置有阳性质控，若阳性质控品检测呈阳性结果，说明检测体系没有问题，不会出现假阴性结果及漏检，本发明所述技术方案设置还设置有阴性质控，若阴性质控检测呈阴性结果，说明检测体系正常，这样的设计使得检测严谨，有效避免漏检、错检的可能。

因此，使用本发明可以协助医生对肺癌或膀胱癌患者的铂类药物疗效进行评估和判断，对医生选择合适的治疗方案提供有价值的决策依据和参考信息，有助于提高肺癌或膀胱癌患者的治疗效果及生存质量，具有非常重要的临床价值。

附图说明

图1为snoRNA SNORD33表达量降低后，肺癌细胞对铂类药物的敏感性降低。

图2为snoRNA SNORD33表达量降低后，膀胱癌细胞对铂类药物的敏感性降低。

图3为对铂类药物不同疗效的肺癌患者血浆中snoRNA SNORD33的表达差异。

图4为对铂类药物不同疗效的膀胱癌患者血浆中snoRNA SNORD33的表达差异。

图5为阳性质控品snoRNA SNORD33和内参U6基因扩增曲线。

图6为阴性质控品snoRNA SNORD33和内参U6基因扩增曲线。

具体实施方式

为了更加透彻和全面地理解本发明所公开的内容，下面将参照附图对本发明进行详细的描述，但是本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例，通常属于本发明的技术领域的普通技术人员都能够理解这些描述，并可能在不脱离本发明方法的前提下，做出若干非意想不到的改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

实施例1 验证snoRNA SDORD33表达量下降导致肺癌细胞对顺铂药物的敏感性降低

先用不同浓度的顺铂药物分别处理四株肺癌细胞株A549、PC9、NCI-H1650、H4006，另外分别将这四株肺癌细胞株中的snoRNA SNORD33基因进行了基因敲除，48小时后，再用不同浓度的顺铂药物分别处理，进行CCK-8实验检测。结果显示，snoRNA SNORD33基因被敲除后，这四株肺癌细胞株中的snoRNA SNORD33表达量明显降低，顺铂药物对这四株肺癌细胞的杀伤力明显减弱，细胞存活数量显著增加，顺铂药物的半抑制浓度（IC50）显著升高（图1），从而说明snoRNA SNORD33表达下调与肺癌细胞对铂类药物敏感性密切相关。

实施例2 验证snoRNA SDORD33表达量下降导致膀胱癌细胞对顺铂药物的敏感性降低

先用不同浓度的顺铂药物分别处理两株膀胱癌细胞株J82、TCCSUP，另外分别将这两株膀胱癌细胞株中的snoRNA SNORD33基因进行了基因敲除，48小时后，再用不同浓度的顺铂药物分别处理，进行CCK-8实验检测。结果显示，snoRNA SNORD33基因被敲除后，这两株膀胱癌细胞株中的snoRNA SNORD33表达量明显降低，顺铂药物对这两株膀胱癌细胞的杀伤力明显减弱，细胞存活数量显著增加，顺铂药物的半抑制浓度（IC50）显著升高（图2），从而说明snoRNA SNORD33表达下调与膀胱癌细胞对铂类药物敏感性密切相关。

实施例3 验证对铂类药物有不同疗效的肺癌患者和膀胱癌患者的血浆样本中snoRNA SNORD33的表达存在显著差异

本发明人团队经过大量研究发现，对铂类药物有不同疗效的肺癌患者和膀胱癌患者的血浆样本中snoRNA SNORD33的表达存在显著差异，snoRNA SNORD33能够作为评估肺癌和膀胱癌患者铂类药物疗效的分子标志物。

收集了57例铂类药物疗效良好的肺癌患者血浆样本和62例铂类药物疗效不佳的肺癌患者血浆样本，48例铂类药物疗效良好的膀胱癌患者血浆样本和59例铂类药物疗效不佳的膀胱癌患者血浆样本，分别对这些样本中的snoRNA SNORD33表达情况进行检测，从而对铂类药物有不同疗效的肺癌患者和膀胱癌患者的血浆样本中snoRNA SNORD33的表达差异进行验证。

具体包括如下步骤：

（1）样本RNA提取：参照试剂盒说明书，使用miRcute Serum/Plasma miRNAisolation kit试剂盒（天根生物）提取RNA，使用NanoDrop进行浓度及纯度的测定，根据测定的核酸样本浓度结果，使用无核酸酶水将核酸样本稀释至10-50ng/μL作为反转录的核酸起始浓度。

（2）逆转录制备cDNA：

按照下面反应体系和扩增条件进行RNA逆转录：

试剂	体积
		随机引物	2μL
Total RNA	2μL
		2.5mM each dNTP Mix	4μL
无核酸酶水	5μL
		5×缓冲液	4μL
0.1M DTT	1μL
		RNA酶抑制剂	1μL
RNA逆转录酶	1μL

扩增程序设置：

温度	时间	循环数
			25 ˚C	5 min	1
50 ˚C	60 min	1
			70 ˚C	15 min	1

将获得的cDNA作为扩增反应模板备用。

（3）实时定量PCR检测snoRNA SNORD33的表达量：

以步骤（2）所述cDNA为模板，用SEQ ID NO.1～2所示的核苷酸序列为引物，进行snoRNA SNORD33荧光定量PCR扩增，同时用SEQ ID NO.3～4所示的核苷酸序列为引物，进行内参U6基因荧光定量PCR扩增。

按照下列反应体系和扩增条件进行PCR扩增：

试剂	体积
		荧光定量PCR反应液	12.5μL
上游引物	1μL
		下游引物	1μL
cDNA模板	2μL
		无核酸酶水	补足25μL

PCR扩增程序设置：

在荧光定量PCR仪中读取Ct值结果。

数据分析：采用U6为内参，使用2^-ΔΔCt法计算具有不同铂类药物疗效的肺癌患者血浆中snoRNA SNORD33表达量差异（图3）和膀胱癌患者血浆中snoRNA SNORD33表达量差异（图4），与铂类药物疗效良好的肺癌患者血浆样本相比，snoRNA SNORD33在铂类药物疗效不佳的肺癌患者血样本中表达量下调6.59倍，表达差异显著；与铂类药物疗效良好的膀胱癌患者血浆样本相比，snoRNA SNORD33在铂类药物疗效不佳的膀胱癌患者血浆样本中表达下调5.37倍，表达差异显著。

实施例4 利用血浆snoRNA SNORD33的表达量区分具有铂类药物不同疗效的肺癌患者的临界值设置。

在实施例3中，57例铂类药物疗效良好的肺癌患者血浆样本和62例铂类药物疗效不佳的肺癌患者血浆样本实时定量PCR检测snoRNA SNORD33的表达量，从荧光定量PCR仪中读取Ct值结果。通过分析可知，铂类药物疗效良好的肺癌患者snoRNA SNORD33可被检出的ΔCt（CtSNORD33-CtU6）值在1.27～3.68之间，铂类药物疗效不佳的肺癌患者snoRNASNORD33可被检出的ΔCt（CtSNORD33-CtU6）值在3.65～5.97之间。根据约登指数(Youdenindex)计算临界值为3.67。

实施例5 利用血浆snoRNA SNORD33的表达量区分具有铂类药物不同疗效的膀胱癌患者的临界值设置。

实施例3中48例铂类药物疗效良好的膀胱癌患者血浆样本和59例铂类药物疗效不佳的膀胱癌患者血浆样本实时定量PCR检测snoRNA SNORD33的表达量，荧光定量PCR仪中读取Ct值结果。通过分析可知，铂类药物疗效良好的膀胱癌患者snoRNA SNORD33可被检出的ΔCt（CtSNORD33-CtU6）值在2.19～4.08之间，铂类药物疗效不佳的膀胱癌患者snoRNASNORD33可被检出的ΔCt（CtSNORD33-CtU6）值在4.06～5.63之间。因此，设置临界值为4.07。

实施例6 利用血浆snoRNA SNORD33的表达量评估具有铂类药物不同疗效的肺癌和膀胱癌患者的结果判定方法

包括如下步骤：

本试剂盒采用U6基因为内参。阳性质控品snoRNA SNORD33检测Ct值≤32，且内参U6基因检测Ct值≤28（图5）；阴性质控品snoRNA SNORD33和内参U6基因均未检出（图6）；判定检测体系合格。

样本内参U6基因检测Ct值≤30判定样本合格。

ΔCt= Ct SNORD33-Ct U6>临界值，则该样本判断为snoRNA SNORD33表达量低，临床提示该患者的铂类药物疗效不佳；ΔCt= Ct SNORD33-Ct U6≤临界值，则该样本判断为snoRNA SNORD33表达量高，临床提示该患者的铂类药物疗效良好。

进一步地，临界值根据具有不同铂类药物疗效的肺癌和膀胱癌患者癌所检测的样本中snoRNA SNORD33表达水平以及内参U6基因的表达水平设定，用于区分具有不同铂类药物疗效的患者。所述临界值，肺癌患者为3.67，膀胱癌患者为4.07。

实施例7 验证本发明用于肺癌患者对铂类药物疗效评估时的性能

按照实施例3所述的检测方法，对46例铂类药物疗效良好的肺癌患者血浆样本和25例铂类药物疗效不佳的肺癌患者血浆样本进行检测，并使用实施例6所述方法对肺癌患者铂类药物疗效进行评估。将使用本发明所得肺癌患者铂类药物疗效评估结果与患者临床实际铂类药物疗效情况进行比较，具体如表1所示：

表1

序号	样本编号	临床疗效	本发明判断结果	一致性分析
					1	LC-F01	良好	良好	一致
2	LC-F02	不良	不良	一致
					3	LC-F03	良好	良好	一致
4	LC-F04	不良	不良	一致
					5	LC-F05	不良	良好	不一致
6	LC-F06	良好	良好	一致
					7	LC-F07	良好	良好	一致
8	LC-F08	良好	良好	一致
					9	LC-F09	不良	良好	不一致
10	LC-F10	良好	良好	一致
					11	LC-F11	良好	良好	一致
12	LC-F12	不良	不良	一致
					13	LC-F13	不良	不良	一致
14	LC-F14	良好	不良	不一致
					15	LC-F15	良好	良好	一致
16	LC-F16	良好	良好	一致
					17	LC-F17	不良	良好	不一致
18	LC-F18	良好	良好	一致
					19	LC-F19	良好	良好	一致
20	LC-F20	良好	良好	一致
					21	LC-F21	良好	良好	一致
22	LC-F22	不良	不良	一致
					23	LC-F23	良好	良好	一致
24	LC-F24	良好	良好	一致
					25	LC-F25	良好	不良	不一致
26	LC-F26	不良	不良	一致
					27	LC-F27	良好	良好	一致
28	LC-F28	不良	不良	一致
					29	LC-F29	良好	良好	一致
30	LC-F30	不良	不良	一致
					31	LC-F31	良好	良好	一致
32	LC-F32	良好	良好	一致
					33	LC-F33	良好	良好	一致
34	LC-F34	良好	良好	一致
					35	LC-F35	不良	不良	一致
36	LC-F36	良好	良好	一致
					37	LC-F37	良好	良好	一致
38	LC-F38	良好	不良	不一致
					39	LC-F39	良好	良好	一致
40	LC-F40	不良	不良	一致
					41	LC-F41	良好	良好	一致
42	LC-F42	良好	良好	一致
					43	LC-F43	不良	不良	一致
44	LC-F44	良好	良好	一致
					45	LC-F45	良好	良好	一致
46	LC-F46	良好	良好	一致
					47	LC-F47	不良	不良	一致
48	LC-F48	不良	不良	一致
					49	LC-F49	良好	良好	一致
50	LC-F50	不良	良好	不一致
					51	LC-F51	良好	良好	一致
52	LC-F52	良好	不良	不一致
					53	LC-F53	良好	良好	一致
54	LC-F54	不良	不良	一致
					55	LC-F55	良好	良好	一致
56	LC-F56	良好	良好	一致
					57	LC-F57	良好	良好	一致
58	LC-F58	良好	不良	不一致
					59	LC-F59	良好	良好	一致
60	LC-F60	不良	不良	一致
					61	LC-F61	良好	良好	一致
62	LC-F62	良好	不良	不一致
					63	LC-F63	不良	不良	一致
64	LC-F64	良好	良好	一致
					65	LC-F65	良好	良好	一致
66	LC-F66	不良	不良	一致
					67	LC-F67	不良	不良	一致
68	LC-F68	不良	不良	一致
					69	LC-F69	良好	良好	一致
70	LC-F70	良好	不良	不一致
					71	LC-F71	不良	不良	一致

针对这71例真实世界的肺癌临床样本，将依据本发明试剂盒检测的结果和实际临床治疗情况相对比，应用统计学方法计算得出，本发明试剂盒的敏感度达到了84.0%，特异性达到了84.8%，阳性预测值达到了75.0%，阴性预测值达到了90.7%，准确性达到了84.5%，达到了预期目标。

实施例8 验证本发明用于膀胱癌患者对铂类药物疗效评估时的性能

按照实施例3所述的检测方法，对27例铂类药物疗效良好的膀胱癌患者血浆样本和32例铂类药物疗效不佳的膀胱癌患者血浆样本进行检测，并使用实施例6所述方法对膀胱癌患者铂类药物疗效进行评估。将使用本发明所得膀胱癌患者铂类药物疗效评估结果与患者临床实际铂类药物疗效情况进行比较，具体如表2所示：

表2

序号	样本编号	临床疗效	本发明判断结果	一致性分析
					1	LC-P01	良好	良好	一致
2	LC-P02	不良	不良	一致
					3	LC-P03	良好	良好	一致
4	LC-P04	不良	不良	一致
					5	LC-P05	不良	不良	一致
6	LC-P06	良好	不良	不一致
					7	LC-P07	良好	良好	一致
8	LC-P08	不良	不良	一致
					9	LC-P09	不良	不良	一致
10	LC-P10	良好	良好	一致
					11	LC-P11	不良	良好	不一致
12	LC-P12	不良	不良	一致
					13	LC-P13	不良	不良	一致
14	LC-P14	良好	良好	一致
					15	LC-P15	不良	不良	一致
16	LC-P16	不良	良好	不一致
					17	LC-P17	良好	良好	一致
18	LC-P18	不良	不良	一致
					19	LC-P19	不良	不良	一致
20	LC-P20	良好	不良	不一致
					21	LC-P21	不良	不良	一致
22	LC-P22	良好	良好	一致
					23	LC-P23	不良	不良	一致
24	LC-P24	良好	良好	一致
					25	LC-P25	良好	良好	一致
26	LC-P26	不良	不良	一致
					27	LC-P27	不良	不良	一致
28	LC-P28	不良	不良	一致
					29	LC-P29	良好	良好	一致
30	LC-P30	良好	不良	不一致
					31	LC-P31	不良	不良	一致
32	LC-P32	良好	良好	一致
					33	LC-P33	不良	不良	一致
34	LC-P34	不良	不良	一致
					35	LC-P35	良好	良好	一致
36	LC-P36	良好	良好	一致
					37	LC-P37	不良	良好	不一致
38	LC-P38	不良	不良	一致
					39	LC-P39	良好	良好	一致
40	LC-P40	良好	良好	一致
					41	LC-P41	不良	不良	一致
42	LC-P42	良好	良好	一致
					43	LC-P43	良好	不良	不一致
44	LC-P44	良好	良好	一致
					45	LC-P45	不良	不良	一致
46	LC-P46	不良	不良	一致
					47	LC-P47	不良	良好	不一致
48	LC-P48	良好	良好	一致
					49	LC-P49	良好	良好	一致
50	LC-P50	不良	不良	一致
					51	LC-P51	不良	不良	一致
52	LC-P52	良好	良好	一致
					53	LC-P53	良好	良好	一致
54	LC-P54	不良	不良	一致
					55	LC-P55	良好	良好	一致
56	LC-P56	不良	不良	一致
					57	LC-P57	良好	良好	一致
58	LC-P58	不良	良好	不一致
					59	LC-P59	不良	不良	一致

针对这59例真实世界的膀胱癌临床样本，将依据本发明试剂盒检测的结果和实际临床治疗情况相对比，应用统计学方法计算得出：本发明试剂盒的敏感度达到了84.4%，特异性达到了85.2%，阳性预测值达到了87.1%，阴性预测值达到了84.2%，准确性达到了82.1%，达到了预期目标。

最后说明的是，以上所例举的实施例仅为本发明的优选实施例，并非对本发明的技术方案的限制。本领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，可以对本发明的形式、内容和细节做出非意想不到的改变，而这些改变并没有偏离本发明权利要求书所限定的范围。

序列表

<110> 润安医学科技（苏州）有限公司

<120> 一种肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估试剂盒及其应用

<141> 2022-01-16

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gccggtgatg agaacttct 19

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ctcagatggt agtgcatgt 19

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

cgcttcggca gcacatata 19

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gcttcacgaa tttgcgtgt 19

Claims

1.一种用于检测血浆snoRNA SNORD33表达量的引物在制备肺癌或膀胱癌患者顺铂类药物疗效评估试剂盒中的应用。

2.一种用于检测血浆snoRNA SNORD33表达量的引物在制备肺癌或膀胱癌患者顺铂类药物疗效评估制剂中的应用。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒中还有逆转录反应液、荧光定量PCR反应液、阳性质控品、阴性质控品、无核酸酶水。