CN114317628B - 一种低刺激性的γ-氨基丁酸产品及其制备方法和降低刺激性的应用 - Google Patents
一种低刺激性的γ-氨基丁酸产品及其制备方法和降低刺激性的应用 Download PDFInfo
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- C12R2001/85—Saccharomyces
- C12R2001/865—Saccharomyces cerevisiae
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Abstract
本发明提供一种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，其保藏编号为CCTCC NO:M 20211621。本发明还提供一种低刺激性的γ‑氨基丁酸产品的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将酵母菌接种到含有γ‑氨基丁酸的溶液中进行发酵，发酵结束后将发酵液中的菌体进行破碎、过滤，得到含有γ‑氨基丁酸的滤液，进一步的可将所述滤液加入辅料进行喷雾干燥，得到低刺激性的γ‑氨基丁酸组合物。本发明发现γ‑氨基丁酸的刺痛感可能部分是由γ‑氨基丁酸产品中杂质成分引起的，而通过本发明的生产工艺，既可以消耗掉部分引起刺激性的杂质，同时又能产生舒敏成分，从而降低γ‑氨基丁酸带来的不适感。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种低刺激性的γ-氨基丁酸组合物及其制备方法。
背景技术
γ-氨基丁酸，简称GABA，是一种天然存在的非蛋白质氨基酸，广泛分布于动、植物体内，但含量都较低。在动物体内，GABA仅存在于神经组织中，是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质，参与人体内的多种代谢和生理活动。当人体内GABA缺乏时，会产生焦虑、不安、疲倦、忧虑等情绪。
GABA在食品保健品中应用较多，也可作为治疗疾病的药物，同时也是一种国际公认的化妆品原料，被列入国际化妆品原料目录中。GABA分子量小，能迅速穿透皮肤，放松紧张的肌肉，从而显著减少细纹、淡化皱纹，但在使用时会带来即时的不适感，尤其是刺痛感，从而限制了在化妆品中的使用。
近年来关于如何解决GABA在使用时带来的刺痛感的方法的报道也比较多，如中国专利CN113143795A公开了“含γ-氨基丁酸的组合物及其应用”，其特征在于通过γ氨基丁酸与N乙酰壳糖胺协同复配，来减缓γ氨基丁酸使用时带来的刺痛感。中国专利CN105362091B公开了“一种含γ-氨基丁酸和透明质酸的组合物及其在化妆品中的应用”，其特征在于该组合物有效成分包括γ-氨基丁酸和透明质酸或其盐，能显著改善、降低γ-氨基丁酸对皮肤的不良反应，克服了单独使用γ-氨基丁酸对皮肤的刺激。中国专利CN112089637B公开了“具有协同抗衰作用的护肤组合物及其制备方法和应用”，其特征在于护肤组合物由γ氨基丁酸、花榈木树皮提取物和番茄/酵母菌发酵产物滤液组成，三者联合使用在降低皱纹数量、深度、长度、面积及提高皮肤弹性方面均表现出更强的作用，具有显著的协同作用，而且三者联合后克服了5％γ氨基丁酸单独使用存在的刺激性较大的问题。现有研究都是通过与GABA复配具有舒缓作用的物质来减轻GABA的刺痛感。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明提供一株发酵性能优异的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37，其保藏编号为CCTCC NO:M 20211621。
本发明还提供一种降低γ-氨基丁酸刺激性的制备方法。
具体来说，本发明涉及如下方面：
1.一种低刺激性的γ-氨基丁酸产品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
将酵母菌接种到含有γ-氨基丁酸的溶液中进行发酵；
发酵结束后将发酵液中的菌体进行破碎、过滤，得到含有γ-氨基丁酸的滤液。
2.根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤，将所述滤液加入辅料进行喷雾干燥，得到低刺激性的γ激氨基丁酸组合物。
3.根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述酵母菌选自保藏编号为CCTCC NO:M20211621的酿酒酵母或CGMCC NO.2.3854的酿酒酵母。
4.根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述含有γ-氨基丁酸的溶液中的γ-氨基丁酸通过酶催化得到，优选的，所述含有γ-氨基丁酸的溶液中γ-氨基丁酸的质量含量为10-100g/L，进一步优选地，所述菌体破碎方式包括搅拌、均质、超声、加热中的至少一种，更进一步优选地，所述发酵条件为22-27℃下，发酵至发酵液中不含葡萄糖，更进一步优选地，所述含有γ-氨基丁酸的溶液还包括1～30g/L蛋白胨、1～20g/L酵母粉和1～20g/L葡萄糖。
5.根据项2所述的制备方法，其特征在于，所述辅料选自羟丙基-β-环糊精、透明质酸或其盐、海藻糖、麦芽糊精、聚谷氨酸、微晶纤维素、甘露醇、乳糖、岩藻糖中的一种或两种以上，优选为羟丙基-β-环糊精和透明质酸或其盐的混合物，优选地，所述辅料与所述滤液的质量比为1:2.5-50。
6.一种低刺激性的γ-氨基丁酸产品，通过项1-5中任一项所述的制备方法制备得到。
7.根据项6所述的γ-氨基丁酸产品，其特征在于，所述γ-氨基丁酸为通过项2所述的制备方法制备得到的γ述氨基丁酸组合物，在所述组合物中，所述γ-氨基丁酸的质量含量为10-50％，所述辅料的质量含量为40-80％。
8.一种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，其保藏编号为CCTCC NO:M20211621。
9.根据项8所述的酿酒酵母，其26s DNA基因序列如SEQ ID NO：1所示。
10、保藏编号为CCTCC NO:M 20211621的酿酒酵母或CGMCC NO.2.3854的酿酒酵母菌株在降低γ-氨基丁酸产品刺激性中的应用。
本发明发现γ-氨基丁酸的刺痛感可能部分是由γ-氨基丁酸产品中杂质成分引起的，而通过本发明的生产工艺，既可以消耗掉部分引起刺激性的杂质，同时又能产生舒敏成分，从而降低γ-氨基丁酸带来的不适感。
保藏信息
本发明所述酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20211621，保藏日期为2021年12月13日，保藏地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编为430072。
附图说明
图1是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37CCTCC NO：M 20211621的菌落形态特征的照片。
图2是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37CCTCC NO：M20211621菌体的显微照片。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本发明，并非用于限制本发明。
除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但不用来限制本发明的范围。
本发明提供一株发酵性能优异的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，从渤海海泥中经过自行筛选得到。该酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37，已于2021年在中国典型培养物保藏中心进行保藏，保藏编号为CCTCC NO:M 20211621，保藏地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编：430072。
在本发明的一个具体的实施方式中，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37可以通过以下方法筛选得到：
以渤海海泥为原料，将渤海海泥用100质量倍无菌水分散，用涂布器将各溶液均匀涂布在含0.1mg/L氨苄青霉素钠的酵母菌固体培养基平板上，于25℃培养箱中静置培养1～2d，挑选菌落形态圆润光滑的单菌落，接种于酵母菌固体培养基试管斜面上，于25℃培养箱中静置培养1～2d，菌体长好后，于4℃冰箱保藏。
其中，酵母菌固体培养基为：蛋白胨20g/L，酵母粉10g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，其余为水。
该酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37的26s DNA基因序列如SEQ IDNO：1所示：
GCTTAGTACGGCGAGTGAAGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAATCTGGTACCTTCGGTGCCCGAGTTGTAATTTGGAGAGGGCAACTTTGGGGCCGTTCCTTGTCTATGTTCCTTGGAACAGGACGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTGTGGCGAGGAGTGCGGTTCTTTGTAAAGTGCCTTCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAGTGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACAGTGATGGAAAGATGAAAAGAACTTTGAAAAGAGAGTGAAAAAGTACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGGGCATTTGATCAGACATGGTGTTTTGTGCCCTCTGCTCCTTGTGGGTAGGGGAATCTCGCATTTCACTGGGCCAGCATCAGTTTTGGTGGCAGGATAAATCCATAGGAATGTAGCTTGCCTCGGTAAGTATTATAGCCTGTGGGAATACTGCCAGCTGGGACTGAGGACTGCGACGTAAGTCAAGGATGCTGC
针对现有技术中γ-氨基丁酸产品所带来的不适感，尤其是刺痛感的问题，本发明提供一种低刺激性的γ-氨基丁酸产品的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
步骤一：将酵母菌接种到含有γ-氨基丁酸的溶液中进行发酵，
步骤二：发酵结束后将发酵液中的菌体进行破碎、过滤，得到含有γ-氨基丁酸的滤液。
进一步地，所述制备方法可以包括步骤三：
步骤三：将所述滤液加入辅料进行喷雾干燥，得到低刺激性的γ-氨基丁酸组合物。
即本发明所述的γ-氨基丁酸产品可以是涵盖含有γ-氨基丁酸的各种形式的产品，例如可以为含有γ-氨基丁酸的滤液，也可以是干燥后的γ基氨基丁酸组合物。
在步骤一中，所述将酵母菌接入含有γ-氨基丁酸的溶液中进行发酵的步骤可以直接将酵母菌接入含有γ-氨基丁酸的溶液中，也可以将酵母菌活化后再进行发酵。
在一个具体的实施方式中，所述将酵母菌接入含有γ-氨基丁酸的溶液中进行发酵包括以下步骤：
将酵母菌接入种子培养基，培养得到种子液，
将所述种子液接种到含有γ-氨基丁酸的溶液中进行发酵。
进一步地，所述种子液的接种量为1-10％，即所述种子液与所述含有γ-氨基丁酸的溶液中的体积比为1-10％。
本发明制备方法中所用的酵母菌可以是本领域已知的各种酵母菌。在一个具体的实施方式中，所述酵母菌为上述酿酒酵母，即保藏编号为CCTCC NO:M20211621的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37。
在一个具体的实施方式中，所述酵母菌为保藏编号为CGMCC NO:2.3854的酿酒酵母，该酿酒酵母可以从中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)购买得到。
含有γ-氨基丁酸的溶液中的γ-氨基丁酸可以是各种来源的，比如可以是经过发酵、转化、纯化后得到的γ-氨基丁酸粉末产品，也可以是经过谷氨酸脱羧酶催化后得到的含有γ-氨基丁酸转化液。其中，谷氨酸脱羧酶可以是经过乳酸菌或者大肠杆菌发酵得到的。例如，当γ-氨基丁酸的来源是含有γ-氨基丁酸的转化液时，可以直接将含有γ-氨基丁酸的转化液用于配制含有γ-氨基丁酸的溶液。
其中，所述含有γ-氨基丁酸的溶液中γ-氨基丁酸的质量含量为10-100g/L。
所述含有γ-氨基丁酸的溶液还可以进一步包括用于酵母菌发酵的其他营养成分。在一个具体的实施方式中，所述含有γ-氨基丁酸的溶液还包括1～30g/L蛋白胨、1～20g/L酵母粉和1～20g/L葡萄糖。
在一个具体的实施方式中中，酵母菌在发酵条件为22-27℃的下，发酵至发酵液中不含葡萄糖。具体地，发酵方式可以为静置发酵。
在步骤二中，将发酵液中的菌体进行破碎的方式可以为搅拌、均质、超声、加热中的一种。
在步骤三中，所述辅料可以选自羟丙基-β-环糊精、透明质酸、海藻糖、麦芽糊精、聚谷氨酸、微晶纤维素、甘露醇、乳糖、岩藻糖中的一种或两种以上。在一个具体的实施方式中，所述辅料为羟丙基-β-环糊精和透明质酸的混合物，其中羟丙基-β-环糊精和透明质酸可以以任意比例混合，例如羟丙基-β-环糊精和透明质酸的质量比可以为10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10等。
在一个具体的实施方式中，辅料为羟丙基-β-环糊精和10KDa的透明质酸钠，羟丙基-β-环糊精和透明质酸钠的质量比为9:1。
喷雾干燥可以采用现有技术中已知的设备的进行，例如可以使用离心式喷雾干燥机。
本发明还提供一种由上述制备方法制备得到的低刺激性的γ-氨基丁酸产品。在一个具体的实施方式中，所述γ-氨基丁酸为上述制备方法制备得到的低刺激性的γ-氨基丁酸组合物，所述组合物包括γ-氨基丁酸和辅料。
进一步地，所述组合物中，所述γ-氨基丁酸的质量含量为10-50％，所述辅料的质量含量为40-80％。
其中，所述辅料可以选自羟丙基-β-环糊精、透明质酸、海藻糖、麦芽糊精、聚谷氨酸、微晶纤维素、甘露醇、乳糖、岩藻糖中的一种或两种以上。在一个具体的实施方式中，所述辅料为羟丙基-β-环糊精和透明质酸的混合物。
本文中的透明质酸可以涵盖透明质酸或其盐，例如透明质酸钠、透明质酸钙、透明质酸锌等。其中，透明质酸的分子量3KDa-30KDa。
进一步地，所述组合物通过上述的制备方法制备得到。
本发明还提供保藏编号为CCTCC NO:M 20211621的酿酒酵母或CGMCC NO.2.3854的酿酒酵母菌株在降低γ-氨基丁酸产品刺激性中的应用。
本发明的低刺激性的γ-氨基丁酸组合物的制备方法，将酵母菌接种到含有γ-氨基丁酸的溶液中进行发酵，并加入辅料进行干燥得到的组合物可以降低γ-氨基丁酸的刺激性。尤其是使用本发明的保藏编号为CCTCC NO:M 20211621的酿酒酵母，以及辅料羟丙基-β-环糊精和透明质酸，可以获得最佳的降低刺激性的效果。
实施例1酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37筛选及鉴定过程
以渤海海泥为原料，将渤海海泥用100质量倍无菌水分散，用涂布器将各溶液均匀涂布在含0.1mg/L氨苄青霉素钠的酵母菌固体培养基平板上，于25℃培养箱中静置培养1～2d，挑选菌落形态圆润光滑的单菌落，接种于酵母菌固体培养基试管斜面上，于25℃培养箱中静置培养1～2d，菌体长好后，于4℃冰箱保藏。其中，酵母菌固体培养基：蛋白胨20g/L，酵母粉10g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，其余为水。
筛选得到的菌种命名为WJ-37。
将筛选得到的菌种送至上海生工生物工程(上海)股份有限公司进行基因组测序鉴定，结果显示菌种为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。该菌株的26srDNA基因序列测定结果如SEQ ID NO：1所示：
GCTTAGTACGGCGAGTGAAGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAATCTGGTACCTTCGGTGCCCGAGTTGTAATTTGGAGAGGGCAACTTTGGGGCCGTTCCTTGTCTATGTTCCTTGGAACAGGACGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTGTGGCGAGGAGTGCGGTTCTTTGTAAAGTGCCTTCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAGTGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACAGTGATGGAAAGATGAAAAGAACTTTGAAAAGAGAGTGAAAAAGTACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGGGCATTTGATCAGACATGGTGTTTTGTGCCCTCTGCTCCTTGTGGGTAGGGGAATCTCGCATTTCACTGGGCCAGCATCAGTTTTGGTGGCAGGATAAATCCATAGGAATGTAGCTTGCCTCGGTAAGTATTATAGCCTGTGGGAATACTGCCAGCTGGGACTGAGGACTGCGACGTAAGTCAAGGATGCTGC
实施例2酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37的形态学观察
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WJ-37在酵母菌固体培养基平板上，菌落表面光滑、湿润、边缘整齐，质地均匀，颜色均一，如图1所示；该菌体为单细胞，成卵圆形，形态简单，出芽生殖，如图2所示。
实施例3
种子培养基：蛋白胨20g/L，酵母粉10g/L，葡萄糖20g/L，其余为水。
发酵培养基：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，葡萄糖5g/L，γ-氨基丁酸(购买自华熙生物科技股份有限公司，产品编号为1020010002)60g/L，其余为水。
将酵母菌WJ-37单菌落接入种子培养基中，24℃静置培养24h，转接入发酵培养基中，接种量为发酵培养基的5％，24℃静置培养至无残糖，将发酵液85℃加热1h，经过0.22μm聚醚砜滤芯过滤，得到滤液。
将上述滤液中加入质量比为9％的羟丙基-β-环糊精和质量比为1％的10KDa透明质酸钠，混匀，使用离心式喷雾干燥机喷雾。喷雾干燥中采用的进风温度为180℃，出风温度为90℃，得到含GABA的粉末S1。
实施例4
种子培养基和发酵培养基，同实施例3。
将购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)编号为2.3854的酵母菌单菌落接入种子培养基中，24℃静置培养24h，转接入发酵培养基中，接种量为发酵培养基的5％，24℃静置培养至无残糖，将发酵液85℃加热1h，经过0.22μm聚醚砜滤芯过滤，得到滤液。
将上述滤液加入质量比为9％的羟丙基-β-环糊精和质量比为1％的10KDa透明质酸钠，混匀，使用离心式喷雾干燥机喷雾。喷雾干燥中采用的进风温度为180℃，出风温度为90℃，得到含GABA的粉末S2。
实施例5
种子培养基和发酵培养基，同实施例3。
将酵母菌WJ-37单菌落接入种子培养基中，24℃静置培养24h，转接入发酵培养基中，接种量为发酵培养基的5％，24℃静置培养至无残糖，将发酵液85℃加热1h，经过0.22μm聚醚砜滤芯过滤，得到滤液。
将上述滤液加入质量比为10％的10KDa透明质酸钠，混匀，使用离心式喷雾干燥机喷雾。喷雾干燥中采用的进风温度为180℃，出风温度为90℃，得到含GABA的粉末S3。
实施例6
种子培养基和发酵培养基，同实施例3。
将酵母菌WJ-37单菌落接入种子培养基中，24℃静置培养24h，转接入发酵培养基中，接种量为发酵培养基的5％，24℃静置培养至无残糖，将发酵液85℃加热1h，经过0.22μm聚醚砜滤芯过滤，得到滤液。
将上述滤液加入质量比为10％的羟丙基-β-环糊精，混匀，使用离心式喷雾干燥机喷雾。喷雾干燥中采用的进风温度为180℃，出风温度为90℃，得到含GABA的粉末S4。
实施例7
种子培养基和发酵培养基，同实施例3。
将酵母菌WJ-37单菌落接入种子培养基中，24℃静置培养24h，转接入发酵培养基中，接种量为发酵培养基的5％，24℃静置培养至无残糖，将发酵液85℃加热1h，经过0.22μm聚醚砜滤芯过滤，得到滤液。
将上述滤液加入质量比为10％的海藻糖，混匀，使用离心式喷雾干燥机喷雾。喷雾干燥中采用的进风温度为180℃，出风温度为90℃，得到含GABA的粉末S5。
实施例8
种子培养基和发酵培养基，同实施例3。
将酵母菌WJ-37单菌落接入种子培养基中，24℃静置培养24h，转接入发酵培养基中，接种量为发酵培养基的5％，24℃静置培养至无残糖，将发酵液85℃加热1h，经过0.22μm聚醚砜滤芯过滤，得到滤液S6。
对比例1
将60g/LGABA的水溶液85℃加热1h，经过0.22μm聚醚砜滤芯过滤，得到滤液。
将上述滤液加入质量比为的9％羟丙基-β-环糊精和1％的10kDa透明质酸钠，混匀，使用离心式喷雾干燥机喷雾。喷雾干燥中采用的进风温度为180℃，出风温度为90℃，得到含GABA的粉末C1。
对比例2
种子培养基和发酵培养基，同实施例3。
将酵母菌WJ-37单菌落接入种子培养基中，24℃静置培养至与实施例3发酵结束时菌浓相同，将酵母发酵滤液与发酵培养基混合后85℃加热1h，经过0.22μm聚醚砜滤芯过滤，得到滤液。
将上述溶液加入9％羟丙基-β-环糊精和1％10kDa透明质酸钠，混匀，使用离心式喷雾干燥机喷雾。喷雾干燥中采用的进风温度为180℃，出风温度为90℃，得到含GABA的粉末C2。
对比例3
种子培养基和发酵培养基，同实施例3.
将枯草芽孢杆菌NT-11(Bacillus subtilis)(保藏编号为：CCTCC NO:M2019383，(在“一株枯草芽孢杆菌及其在生产γ-聚谷氨酸中的应用”专利中公开)单菌落接入种子培养基中，24℃静置培养至与实施例3发酵结束时菌浓相同，将NT-11发酵滤液与发酵培养基混合后85℃加热1h，经过0.22μm聚醚砜滤芯过滤，得到滤液。
将上述滤液加入9％羟丙基-β-环糊精和1％10kDa透明质酸钠，混匀，使用离心式喷雾干燥机喷雾。喷雾干燥中采用的进风温度为180℃，出风温度为90℃，得到含GABA的粉末C3。
对比例4
将60g/LGABA的水溶液85溶加热1h，经过0.22LG聚醚砜滤芯过滤，得到滤液C4。
上述各实施例和对比例的具体条件如表1所示。
表1
试验例1
将实施例8的样品S6和对比例4的样品C4，并将实施例3-7的样品S1-5与对比例1-3中的样品C1-3分别配成GABA含量为3％的水溶液，在人外眼角处滴1滴，涂抹均匀后，观测是否有刺痛感，评分标准如表2所示，试验人数为30人。
表2皮肤刺激反应标准
| 麻痒刺痛感 | |
| 无任何不适感 | 0 |
| 轻微麻痒感 | 1 |
| 严重麻痒感 | 2 |
| 轻微刺痛感 | 3 |
| 严重刺痛感 | 4 |
| 严重刺痛灼烧感 | 5 |
结果如表3所示，通过S1、S6和C1、C4的结果可以看出，使用酵母菌发酵可以有效降低GABA的刺激性，而通过加入辅料喷雾干燥后可进一步降低GABA的刺激性。从S1、S3、S4、S5，同时可以看出，不同的辅料对降低GABA刺激性的作用也不相同，其中羟丙基-β-环糊精和HA作用较好，海藻糖作用稍小一些。从样品S1、S2和C3可以看出，通过不同菌种发酵，作用效果不同，其中酵母菌WJ-37发酵后效果最好。从样品S1和C2的结果来看，使用酵母菌进行二次发酵，比单纯的将酵母菌溶胞产物加入GABA发酵液中，对于缓解GABA带来的刺激性效果要好，可能是不光酵母菌溶胞产物中有一些舒缓刺激性的物质，酵母菌在生长过程中还能消耗掉一些带来刺激性的杂质。
表3
| 皮肤刺激性评分 | |
| S1 | 1.42±0.37 |
| S2 | 2.01±0.65 |
| S3 | 1.59±0.68 |
| S4 | 1.48±0.32 |
| S5 | 1.95±0.76 |
| S6 | 1.98±0.76 |
| C1 | 2.65±0.54 |
| C2 | 2.09±0.39 |
| C3 | 2.59±0.78 |
| C4 | 3.01±0.25 |
SEQUENCE LISTING
<110> 华熙生物科技股份有限公司
华熙生物科技（天津）有限公司
<120> 一种低刺激性的γ-氨基丁酸产品及其制备方法和降低刺激性的应用
<130> TPE01877
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 536
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 1
gcttagtacg gcgagtgaag cggcaaaagc tcaaatttga aatctggtac cttcggtgcc 60
cgagttgtaa tttggagagg gcaactttgg ggccgttcct tgtctatgtt ccttggaaca 120
ggacgtcata gagggtgaga atcccgtgtg gcgaggagtg cggttctttg taaagtgcct 180
tcgaagagtc gagttgtttg ggaatgcagc tctaagtggg tggtaaattc catctaaagc 240
taaatattgg cgagagaccg atagcgaaca agtacagtga tggaaagatg aaaagaactt 300
tgaaaagaga gtgaaaaagt acgtgaaatt gttgaaaggg aagggcattt gatcagacat 360
ggtgttttgt gccctctgct ccttgtgggt aggggaatct cgcatttcac tgggccagca 420
tcagttttgg tggcaggata aatccatagg aatgtagctt gcctcggtaa gtattatagc 480
ctgtgggaat actgccagct gggactgagg actgcgacgt aagtcaagga tgctgc 536
Claims (12)
1.一种低刺激性的γ-氨基丁酸产品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
将酵母菌接种到含有γ-氨基丁酸的溶液中进行发酵；
发酵结束后将发酵液中的菌体进行破碎、过滤，得到含有γ-氨基丁酸的滤液；
将所述滤液加入辅料进行喷雾干燥，得到低刺激性的γ激氨基丁酸组合物；
其中所述酵母菌为保藏编号为CCTCC NO: M 20211621的酿酒酵母，所述辅料为羟丙基-β-环糊精、或透明质酸或其盐、或羟丙基-β-环糊精和透明质酸或其盐。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含有γ-氨基丁酸的溶液中的γ-氨基丁酸通过酶催化得到。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，对菌体进行破碎包括搅拌、均质、超声、加热中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，进行发酵的条件为22-27℃下，发酵至发酵液中不含葡萄糖。
5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含有γ-氨基丁酸的溶液还包括1~30 g/L蛋白胨、1~20 g/L酵母粉和1~20 g/L葡萄糖。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述辅料为羟丙基-β-环糊精和透明质酸或其盐的混合物。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述辅料与所述滤液的质量比为1:2.5-50。
8.一种低刺激性的γ-氨基丁酸产品，通过权利要求1-7中任一项所述的制备方法制备得到。
9.根据权利要求8所述的γ-氨基丁酸产品，其特征在于，所述γ-氨基丁酸为通过权利要求1所述的制备方法制备得到的γ述氨基丁酸组合物，在所述组合物中，所述γ-氨基丁酸的质量含量为10-50%，所述辅料的质量含量为40-80%。
10. 一种酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），其保藏编号为CCTCC NO: M20211621。
11. 根据权利要求10所述的酿酒酵母，其26s DNA基因序列如SEQ ID NO：1所示。
12.保藏编号为CCTCC NO: M 20211621的酿酒酵母在制备降低γ-氨基丁酸刺激性的产品中的应用。
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