CN114304618A - 一种发酵富集蒲公英根活性成分的方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种发酵富集蒲公英根活性成分的方法及其应用，包括以下步骤：A、将新鲜蒲公英根清洗，然后烘干磨粉，向得到的粉状产物中加水进行调浆，得到蒲公英根浆；B、加热蒲公英根浆进行灭菌处理，冷却后接种发酵，接种发酵所用的微生物为植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽胞杆菌的复合；C、发酵完成后，进行超声波辅助提取，然后再离心处理得到蒲公英根发酵物。本发明利用复配菌种对蒲公英根进行发酵处理，使蒲公英根活性成分得到了富集，赋予了蒲公英根特殊风味，以此得到的蒲公英含片，其多糖含量不低于30wt％，黄酮含量不低于5wt％，具有较好的溶解性和持水性，口感酸甜适中，具有蒲公英特殊香味，为蒲公英根综合利用提供了科学依据。

Description

一种发酵富集蒲公英根活性成分的方法及其应用

技术领域

本发明涉及食品加工技术领域，特别涉及一种发酵富集蒲公英根活性成分的方法及其应用。

背景技术

蒲公英又名为黄花地丁、婆婆丁，为菊科多年生草本植物，其种类繁多、资源丰富，植株内有白色乳汁，根呈圆锥状，表面棕褐色，皱缩，叶边缘具有波状齿或羽状深裂，花果期4-10月，是国家卫计委公布的药食同源材料之一。我国除华南地区外，几乎各地都有分布，野生的蒲公英资源，可直接取其根部用于栽培，蒲公英耐寒耐热，对生长条件要求不高，易成活。蒲公英具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗菌、抗肿瘤、抗炎和增强免疫力等功能。其药用价值早已载入各种医书，它性平味甘微苦，可清热解毒，消肿散结，有“天然抗生素”之美称。在食用方面，蒲公英自身可食部分达到84％，营养价值非常高，作为野菜资源可以采用不同的处理方式，比如凉拌、蒸菜、煮汤等，具有新鲜的独特味道，近年己被一些国家和地区列为“天然野味”和“健康食品”。

由于蒲公英是一种非常有潜力的食品和药品资源，有很大的发展空间和开发利用前景，很多研究者慢慢从蒲公英茎叶转移至蒲公英根，进行活性成分研究，发现蒲公英根具有很好的抗氧化活性，Belen等研究了蒲公英根提取物的体外清除自由基能力，抗氧化能力较强。蒲公英抗氧化作用成分主要是多糖、绿原酸类和总黄酮类化合物，它们能够有效的对氧化自由基进行清除。

目前，市场上的蒲公英的产品多用于医药领域，例如蒲公英根颗粒、蒲地蓝口服液等，而在食品领域仅最近几年出现了蒲公英叶茶、根茶和花茶，加工简单、深加工产品少且种类单一，质量参差不齐，蒲公英活性成分利用率低，风味欠佳，限制了消费者的选择，不能满足消费者健康和风味需求。

发明内容

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种发酵富集蒲公英根活性成分的方法及其应用，本发明筛选出的植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽胞杆菌对蒲公英根进行混菌发酵，使蒲公英根活性成分富集，然后通过超声辅助提取，多糖、黄酮等活性物质含量升高，并且，通过特定菌种混菌发酵后，赋予了蒲公英根发酵物特殊风味，然后进行产品研制得到了蒲公英含片，增加了蒲公英发酵产品种类，同时为蒲公英根发酵提供数据基础，克服了现有食品领域中蒲公英产品种类单一、活性成分利用率低、质量参差不齐、风味欠佳等问题。

本发明采用的技术方案如下：一种发酵富集蒲公英根活性成分的方法，包括以下步骤：

A、将新鲜蒲公英根清洗，然后烘干磨粉，向得到的粉状产物中加水进行调浆，得到蒲公英根浆；

B、加热蒲公英根浆进行灭菌处理，冷却后接种发酵，接种发酵所用的微生物为植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽胞杆菌的复合；

C、发酵完成后，进行超声波辅助提取，然后再离心处理得到蒲公英根发酵物。

在本发明中，虽然蒲公英根中含有多糖类、黄酮类、甾醇类和大量五环三萜类等化合物，具有抗氧化、抗菌、降血糖等功效，但口感及风味较差，制成的深加工产品不易为人们接受。为了充分发挥蒲公英根的作用效果，改善产品口感，本发明首先考虑蒲公英根制成蒲公英根浆后采用微生物发酵法，但由于单一菌种的富集效果不明显，基于此，发明人采用混菌发酵。由于蒲公英根中多糖、黄酮等含量较高，发酵工艺中较为重要的是发酵菌种，通过筛选，本发明筛选出酿酒酵母、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌发酵效果最好，植物乳杆菌能进行乳酸发酵，改善风味不足，枯草芽孢杆菌发酵能大大提高多糖等有益物质的含量，酿酒酵母同时减小多糖的分子量，提高其抗氧化、抗菌活性等，能较好的发挥其各类生物活性，将这些菌种复配后发酵，充分富集了蒲公英根中的活性成分，富集效果优于单一菌种发酵的富集效果。

在本发明中，植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽胞杆菌的活菌比例为(1-2)：(1-2)：(1-2)。本发明在考察菌种间复配比例对富集效果的影响时发现，当三种菌种的复配比例为1：1：1时，黄酮以及粗多糖含量均较低，而且明显低于单一菌种的使用效果，由此说明，在该复合比例下，菌种间的拮抗效果较突出，达不到预期的目的；当增加酵母菌和植物乳杆菌的复配量时，黄酮以及粗多糖含量均呈现大幅度上升的趋势，而当枯草芽孢杆菌含量过多，会加重菌种间的拮抗作用。因此酿酒酵母、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌三种菌种需要在特定比例下，才能取得优异的活性成分富集的效果，通过试验筛选，当酿酒酵母：植物乳杆菌：枯草芽孢杆菌＝2：2：1时，获得的黄酮以及粗多糖含量最高，因此，其复配比例优选为2：2：1。同时，在该复配比例下，酿酒酵母以及植物乳杆菌在发酵过程中产生的芳香气味更明显，能够有效改善蒲公英根的风味，为后期制备高品质的蒲公英口含片提供了良好基础。

在本发明中，采用混菌发酵时，其发酵条件为：发酵温度为28－40℃，发酵时间为24－72h，菌种接种量为蒲公英根浆体积的5－13％。本发明通过考察发酵条件对富集的多糖及黄酮含量影响时发现，发酵时间、发酵温度、菌种接种量在发酵过程中至关重要，由于是复配菌种，菌种发酵温度不易过高且不易过低，过高或过低都会降低复配菌种的有效利用率。对于发酵时间，发酵时间过短会导致产物积累过少或者目标产物还未合成，影响数据准确性，而发酵时间过长导致产物降解或代谢产物合成方向发生改变，对其数据产生误差，因此发酵时间需合适。对于菌种接种量，菌种接种量过少，微生物不能使其完全发酵；接种量过多时，发酵完全导致营养组分不能继续满足发酵要求，并且会导致快速多糖及黄酮含量下降。作为优选，发酵温度为37℃，发酵时间为48h，菌种接种量为蒲公英根浆体积的9％，在该发酵条件下，能够取得最优的发酵效果。

在本发明中，超声波辅助提取的提取条件为：超声时间为10-50min，超声温度为50-70℃，料液比为1:30-60。在超声波辅助提取蒲公英活性成分时，超声时间过长或过短都会降低活性成分的提取量，因此需要严格控制超声时间；相应地，超声温度以及料液比过低或过高也会降低活性成分的提取量，也需要严格控制超声温度以及料液比。作为优选，超声时间为30min，超声温度为60℃，料液比为1:30，在该提取条件下，活性成分的提取率最高。

本发明还包括一种蒲公英含片的制备方法，包括以下步骤：

S1、按照上述方法制备得到蒲公英根发酵物，采用冷冻干燥得到冻干粉，待用；

S2、将S1得到的冻干粉与填充剂和矫味剂按一定质量比例混合后，通过湿法制粒工艺制粒，然后烘干整粒，加入硬脂酸镁进行压片后即得。

在本发明中，冻干粉与填充剂和矫味剂的质量比为(1－2)：(1－4)：(1－2)。本发明以蒲公英含片感官评分为标准，对不同复配比例进行对比得到，复配比例为冻干粉：填充剂：矫味剂＝2：3：2时，感官评分达到最高，此时的蒲公英含片酸甜适中，具有蒲公英特殊香味，且含片表面光滑，口感细腻，可接受度高，具有一定的市场潜力，因此优选质量比为2：3：2。

在本发明中，所述填充剂选自微晶纤维素、玉米淀粉、麦芽糊精、β-环状糊精中的一种或多种。本发明在考察填充剂对成品质量影响时发现，这些填充剂都具有不粘手、制粒容易的优点，但每种填充剂特性不一，单一填充剂在压片效果以及口感上均有不同缺点，为了克服单一填充剂在制备蒲公英含片时所存在的不足，本发明通过复配使用填充剂来弥补彼此的缺陷。通过几种不同组合以及性状分析试验发现，玉米淀粉、麦芽糊精、β－环状糊精这三种填充剂复配使用时，制粒效果、压片效果以及口感均有很好的体现，含片口感细腻，故本发明优选玉米淀粉、麦芽糊精、β－环状糊精三者的复配来作为填充剂使用。进一步，玉米淀粉、麦芽糊精、β-环状糊精的质量比为(1-2)：(1-2)：(1-2)，优选质量比为2:1:1。

在本发明中，所述矫味剂选自白砂糖、柠檬酸、蜂蜜粉、三氯蔗糖、苹果酸中的一种或多种。本发明在考察矫味剂对成品质量影响时发现，每种矫味剂特性不一，由于蒲公英发酵物具有特殊风味和口感，需要通过矫味剂来改善，单一口味的矫味剂改善效果一般，而且大多数矫味剂会掩盖住蒲公英发酵物的特殊香味和口感，为了获得具有蒲公英特殊香味和口感的蒲公英含片，本发明通过复配矫味剂来克服使用单一矫味剂所存在的不足，本发明通过几种矫味剂组合以及性状分析试验发现，白砂糖、柠檬酸、蜂蜜粉这三种矫味剂复配使用时，口感有很好的体现，可接受度较高，故选用白砂糖、柠檬酸、蜂蜜粉作为复配的矫味剂。进一步，白砂糖、柠檬酸、蜂蜜粉的质量比为(1-2)：(1-2)：(1-2)，优选质量比为2:1:2。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：本发明筛选出的植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽胞杆菌对蒲公英根进行混菌发酵，使蒲公英根活性成分充分富集，然后通过超声辅助提取，增加提取率的同时，不会有溶剂残留，多糖、黄酮等活性物质含量升高，并且通过特定菌种混菌发酵后，赋予了蒲公英根发酵物特殊风味，然后进行产品研制得到了蒲公英含片，增加了蒲公英发酵产品种类，同时为蒲公英根发酵提供数据基础，克服了现有食品领域中蒲公英产品种类单一、活性成分利用率低、质量参差不齐、风味欠佳等问题，经检测，蒲公英含片中多糖含量不低于30wt％，黄酮含量不低于5wt％，具有较好的溶解性和持水性，具有抗氧化、抑菌等作用，口感酸甜适中，具有蒲公英特殊香味，含片表面光滑，可接受度高，在食品、药品及保健品等领域有着广泛的应用前景，为蒲公英根综合利用提供了科学依据。

附图说明

图1为本发明发酵富集蒲公英根活性成分工艺路线图；

图2为本发明蒲公英含片制备工艺路线图；

图3为本发明富集活性成分工艺中菌种种类对多糖含量、黄酮含量的影响图；

图4为不同菌种比例对多糖含量、黄酮含量的影响图；

图5为发酵时间对多糖含量、黄酮含量的影响图；

图6为发酵温度对多糖含量、黄酮含量的影响图；

图7为菌种添加量对多糖含量、黄酮含量的影响图；

图8为超声温度对多糖含量、黄酮含量的影响图；

图9为超声时间对多糖含量、黄酮含量的影响图；

图10为超声料液比对多糖含量、黄酮含量的影响图；

图11为蒲公英根冻干粉抗氧化能力测定情况图；

图12为蒲公英含片各物料比例对感官评分的影响图。

具体实施方式

下面结合附图，对本发明作详细的说明。

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

蒲公英根发酵工艺

请参考图1，蒲公英根的发酵工艺包括以下步骤：

S1、将新鲜蒲公英根清洗干净，然后在50-60℃下烘干磨粉，向得到的粉状产物中加水进行调浆，得到蒲公英根浆；

B、加热蒲公英根浆至121℃进行灭菌处理，灭菌处理10min，冷却后接种发酵；

C、发酵完成后，进行超声波辅助提取，然后再离心处理得到蒲公英根发酵物。

所用菌种：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus)CICC 6091、发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentium)CICC 6233、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)CICC 21728、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CICC 194165、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)CICC 6226、类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CICC 6244、克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)CICC 32845、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 22459、酿酒酵母(Saccharom yces cerevisiae)GIM 2.43、黑曲霉(Aspergillus niger)CICC 2041和米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 2011

(1)菌种活化

细菌活化：取菌种接种于200mL灭菌营养肉汤培养基中，于28℃在恒温培养箱中培养24h得到一代菌悬液；按12％的接种量将一代菌悬液接种于营养肉汤培养基中，28℃恒温培养18h得二代菌悬液；重复上述步骤28℃恒湿培养12h，进行第三次活化得到三代活化菌悬液，4℃冰箱储存备用。

乳酸菌活化：取菌种接种于200mL灭菌MRS肉汤培养基中，于37℃在恒温培养箱中培养24h得到一代菌悬液；按12％的接种量将一代菌悬液接种于MRS肉汤培养基中，37℃恒温培养18h得二代菌悬液；重复上述步骤37℃恒湿培养12h，进行第三次活化得到三代活化菌悬液，4℃冰箱储存备用。

真菌的活化：将菌种接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)斜面培养基，30℃恒温培养箱培养6d，使菌种充分活化。

(2)菌种及比例筛选

通过对蒲公英根发酵液的粗多糖含量和黄酮测定进行菌种筛选，筛选能够对蒲公英根进行良好发酵的菌种以及其复配比例。

(3)蒲公英根发酵工艺筛选

以蒲公英根发酵液中粗多糖得率、黄酮含量为指标，利用筛选的3株菌按(酿酒酵母：植物乳杆菌：枯草芽孢杆菌＝2：2：1)对蒲公英根进行发酵，不同发酵温度(28℃、31℃、34℃、37℃、40℃)、发酵时间(24h、36h、48h、60h、72h)、菌种接种量[按蒲公英根浆体积](5％、7％、9％、11％、13％)对发酵液中多糖及黄酮含量的影响。

发酵前后蒲公英根中多糖含量、黄酮含量分析

多糖含量的测定采用苯酚－硫酸法，黄酮含量测定方法如下：

①芦丁标准曲线的绘制

吸取一定体积的芦丁样品并将其配置为0.30、0.60、0.90、1.20、1.50、1.80mg/mL质量浓度的标准溶液。取1mL标准溶液，4mL浓度为50％的乙醇溶液、0.4mL 5％的NaNO2溶液，加入到准备好的5个10mL容量瓶中，然后将其充分混匀。静置6min后，向容量瓶中加入0.4mL 10％的Al(NO3)3溶液，充分振荡并摇匀。然后将其充分混匀。静置6min后，向容量瓶中加入0.4mL 10％的Al(NO3)3溶液，充分振荡并摇匀。同时，以50％乙醇溶液为对照组，绘制不同的芦丁质量浓度X(mg/mL)和吸光度Y对应的标准曲线，并通过线性回归得到其回归曲线方程：Y＝1.1563X+0.0009，R2＝0.9998。

②蒲公英根总黄酮的测定

将1mL提取液(发酵液经超声波提取后进行离心的上清液)放入10mL容量瓶中，根据以上方法测定，并根据下式计算石斛叶的总黄酮得率。

式中：A为石斛叶总黄酮得率，mg/g；C为总黄酮质量浓度，mg/mL；V为溶液体积，mL；N为稀释倍数；M为原料质量，g。

实施例2

超声波辅助提取蒲公英根活性成分提取工艺

以蒲公英根发酵液中粗多糖、黄酮得率为指标，考察超声时间(10min、20min、30min、40min、50min)，超声温度(50℃、55℃、60℃、65℃、70℃)、料液比(1：20、1：30、1：40、1：50、1：60(g/mL))对蒲公英多糖及黄酮含量的影响。

超声波提取后的离心条件如下：转速4000r/min，离心10min。

(1)DPPH·自由基清除能力测定。吸取0.2mL离心后的蒲公英根发酵液，加入31μg/mL DPPH溶液，充分振摇后，室温下暗处放置0.5h，517nm处测定吸光度，纯水替代蒲公英根发酵液作为空白，纯水代替DPPH溶液进行调零。

DPPH·清除率(％)＝[(s－sb)/(c－cb)]×100％

式中：s——DPPH·自由基清除能力吸光度，sb——样品干扰试验吸光度(调零)，c——DPPH纯水溶液吸光度，cb——纯水吸光度(调零)。

(2)还原力测定：取1mL不同浓度(0.5、1、1.5、2、3、4mg/mL)的多糖溶液于试管中，加入0.2mL磷酸盐缓冲液(0.2，pH＝6.6，PBS)，0.5mL 1％铁氰化钾，混匀，50℃水浴20min。取出迅速冷却，加入1mL 10％TCA，混匀，4000r/min离心10min，取上清液2.5mL，加入2.5mL蒸馏水和0.5mL 1％FeCl₃，在700nm波长测定吸光值，以蒸馏水调零。

空白组：用1mL蒸馏水代替多糖溶液。

对照组：用0.5mL蒸馏水代替铁氰化钾溶液。

按以下公式计算：还原力＝(A_样品－A_对照)－A_空白

(3)抑菌活性研究：将甘油保存的金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌接种于营养肉汤固体培养基中活化24h，挑选生长较好的单个菌落，接种于营养肉汤培养基中，37℃，恒温培养24h即可，备用；将其蒲公英根冻干粉配制不同浓度的水溶液，添加至灭菌后的营养肉汤培养基中，添加5％的金黄色葡萄球菌/沙门氏菌/大肠杆菌菌液，36℃培养24h，紫外分光光度计600nm测吸光值，平行组3个。

实施例3

蒲公英含片研制

请参考图2，一种蒲公英含片的制备方法，包括以下步骤：

S1、按照上述方法制备得到蒲公英根发酵物，采用冷冻干燥得到冻干粉，待用；

S2、将S1得到的冻干粉与填充剂和矫味剂按一定质量比例混合后，通过湿法制粒工艺制粒，然后烘干整粒，加入硬脂酸镁进行压片后即得。

以感官评分为指标，考察填充料种类及配比(1：1：1、1：2：1、1：2：2、2：1：1、2：2：1)、矫味料种类及配比(1：1：1、1：2：1、1：2：2、2：1：1、2：2：1)、主料与填充料、矫味料配比(1：1：1、2：2：1、2：3：2、2：4：1、2：3：1)对蒲公英含片的影响。

组织10位具有一定专业知识的人员经培训组成感官评定小组，分别从风味(20分)、色泽(20分)、口感(30分)及组织状态(30分)4个方面对蒲公英含片进行评分，感官评分标准见表1。

表1感官评分标准

结果分析

菌种筛选及比例确定

由图3可知，植物乳杆菌194165、酿酒酵母GIM 2.43、枯草芽胞杆菌22459三株菌种相对其他菌种，其粗多糖及黄酮含量较高。酵母菌能够通过自身生长繁殖提高发酵原料中蛋白含量及其他营养物质，而且产生的酶可以将发酵原料中部分大分子物质转化成易于消化的小分子物质，进而提高了转化率；乳酸菌可通过竞争限制潜在病原微生物的生长，并且通过产生细菌素抑制病原微生物，维持其活性物质转化；芽孢杆菌能够分泌蛋白酶等丰富酶系，在发酵过程中能够提高微生物对发酵物的利用率。因此，本发明菌种选择植物乳杆菌194165、酿酒酵母GIM 2.43、枯草芽胞杆菌22459三株菌种，如图4所示，通过对该三种菌种不同比例复合得到的复配菌种进行考察得到，当三种菌种的复配比例为1：1：1时，黄酮以及粗多糖含量均较低，而且明显低于单一菌种的使用效果，由此说明，在该复合比例下，菌种间的拮抗效果较突出，达不到预期的目的；当增加酵母菌和植物乳杆菌的复配量时，黄酮以及粗多糖含量均呈现大幅度上升的趋势，并达到最高值，由此说明，酵母菌和植物乳杆菌复配量增多，菌种间的拮抗作用减弱；通过对比1：2：1和1：2：2的结果可得，增加枯草芽孢杆菌的复配量，黄酮以及粗多糖含量会进一步降低，由此说明，枯草芽孢杆菌含量过多，会加重菌种间的拮抗作用。因此酿酒酵母、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌三种菌种的复配比例很重要，如果复配比例不合适，则使用效果会明显低于单一菌种的使用效果，如果复配比例合适，则能取得优于单一菌种的使用效果，通过图4可得，当酿酒酵母：植物乳杆菌：枯草芽孢杆菌＝2：2：1时，获得的黄酮以及粗多糖含量最高，因此，将其复配比例定为2：2：1最合适。同时，在该复配比例下，酿酒酵母以及植物乳杆菌在发酵过程中产生的芳香气味更明显，能够有效改善蒲公英根的风味，为后期制备高品质的蒲公英口含片提供了良好基础。

蒲公英根发酵工艺筛选

由图5－7可知，以蒲公英根发酵液中粗多糖得率以及黄酮含量为指标，利用筛选的3株菌按照一定比例对蒲公英根进行发酵，最适发酵温度为37℃，发酵时间为48h，菌种接种量[按蒲公英根发酵液体积]为9％。通过对比发酵前后蒲公英根中多糖及黄酮含量得到，发酵处理使得多糖及黄酮的含量均有一定程度的提升，说明发酵条件影响其活性物质富集。发酵时间、发酵温度、菌种接种量在发酵过程中至关重要，由于是复配菌种，因此菌种发酵温度不易过高且不易过低，使其复配菌种能够有效利用；发酵时间过短会导致产物积累过少或者目标产物还未合成，影响数据准确性，而发酵时间过长导致产物降解或代谢产物合成方向发生改变，对其数据产生误差，因此时间需合适；菌种接种量过少，微生物不能使其完全发酵；接种量过多时，发酵完全导致营养组分不能继续满足发酵要求，并且会导致快速多糖及黄酮含量下降，由此说明，接种量不易过多，否则会导致得到的活性成分较少，发酵处理所带来的积极效果不明显。

表2蒲公英根发酵前后活性物质成分含量对比

超声波辅助提取蒲公英根活性成分提取工艺单因素实验

由图8－图10可以看出，以蒲公英根发酵液中粗多糖得率为指标，最适宜的超声时间为30min，超声温度为60℃，料液比为1：30。在超声波辅助提取蒲公英活性成分时，超声时间过长或过短都会降低活性成分的提取量，因此需要严格控制超声时间；相应地，超声温度以及料液比过低或过高也会降低活性成分的提取量，也需要严格控制超声温度以及料液比。

发酵液抗氧化活性确定如图11所示，由图11可知：发酵液具有较强的抗氧化活性，能够DPPH自由基和还原力等，且存在浓度剂量依赖关系，随着浓度的增加，抗氧化能力持续加大。

表3蒲公英发酵物对三株致病菌的最小抑菌浓度

由表3可知，蒲公英根发酵物与蒲公英根提取物进行对比，发现对沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌有明显的抑菌作用，但对大肠杆菌无抑制作用，同时，蒲公英根发酵物的抑菌作用明显强于蒲公英根提取物的抑菌作用，由此说明，发酵处理不仅不会破坏蒲公英根中的有效活性成分的活性，而且还能有助于提高有效活性成分的提取率。

蒲公英含片制备单因素实验

1、蒲公英含片填充剂筛选

取冻干处理后的蒲公英发酵物，分别采用微晶纤维素、玉米淀粉、麦芽糊精、β－环状糊精、木糖醇、乳糖等填充剂制备蒲公英含片，然后进行质量评价，质量评价结果如表4所示：

表4蒲公英含片填充剂筛选

由表4可知，大部分种类的填充剂在制备时都具有不粘手、制粒容易的优点，但木糖醇、乳糖作为填充剂时，存在易粘手、制粒困难的缺陷，不适宜用作蒲公英含片的填充剂。进一步，对于能够用作蒲公英含片的填充剂来说，每种填充剂特性不一，单一填充剂在压片效果以及口感上均有不同缺点，例如，对于微晶纤维素来说，制备的蒲公英含片可压效果较差、糊口感较强，质量评分较低。为了克服单一填充剂在制备蒲公英含片时所存在的不足，本发明通过复配使用填充剂来弥补彼此的缺陷。通过几种不同组合以及性状分析试验发现，玉米淀粉、麦芽糊精、β－环状糊精这三种填充剂复配使用时，制粒效果、压片效果以及口感均有很好的体现，含片口感细腻，故本发明优选玉米淀粉、麦芽糊精、β－环状糊精三者的复配来作为填充剂使用。

2、蒲公英含片矫味剂筛选

取冻干处理后的蒲公英发酵物，将蒲公英发酵物、填充剂以及矫味剂混合，通过湿法制粒得到蒲公英含片，考察不同矫味剂对含片质量的影响，质量评价结果如表5所示：

表5蒲公英含片矫味剂筛选

矫味剂	滋味	压片效果	含片口感
				白砂糖	带有甜味	可压效果较好	口感较甜
柠檬酸	带有酸味	可压效果较好	口感偏酸
				蜂蜜粉	具有蜂蜜粉及蒲公英特殊香味	可压效果较好	口感甜
三氯蔗糖	带有甜味	可压效果较好	口感过甜
				苹果酸	带有酸味	可压效果较好	酸味不明显

由表5可知，每种矫味剂特性不一，由于蒲公英发酵物具有特殊风味和口感，需要通过矫味剂来改善，单一口味的矫味剂改善效果一般，而且大多数矫味剂会掩盖住蒲公英发酵物的特殊香味和口感，为了获得具有蒲公英特殊香味和口感，可接受度又高的高质量的蒲公英含片，本发明通过复配矫味剂来克服使用单一矫味剂所存在的不足，本发明通过几种矫味剂组合以及性状分析试验发现，白砂糖、柠檬酸、蜂蜜粉这三种矫味剂复配使用时，口感有很好的体现，可接受度较高，故选用白砂糖、柠檬酸、蜂蜜粉作为复配的矫味剂。

3、填充剂复配比例、矫味剂复配比例、物料复配比例筛选

以蒲公英含片感官评分为标准，将填充剂、矫味剂、物料复配比例筛选进行对比，对比结果如图12所示，由图12可知，当填充剂为玉米淀粉：麦芽糊精：β－环状糊精＝2：1：1、矫味剂为白砂糖：柠檬酸：蜂蜜粉＝2：1：2、物料复配比例为蒲公英根发酵物：填充剂：矫味剂＝2：3：2时，感官评分达到最高，此时的蒲公英含片酸甜适中，具有蒲公英特殊香味，且含片表面光滑，口感细腻，可接受度高，具有一定的市场潜力。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种发酵富集蒲公英根活性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、将新鲜蒲公英根清洗，然后烘干磨粉，向得到的粉状产物中加水进行调浆，得到蒲公英根浆；

B、加热蒲公英根浆进行灭菌处理，冷却后接种发酵，接种发酵所用的微生物为植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽胞杆菌的复合；

C、发酵完成后，进行超声波辅助提取，然后再离心处理得到蒲公英根发酵物。

2.如权利要求1所述的发酵富集蒲公英根活性成分的方法，其特征在于，植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽胞杆菌的活菌比例为(1-2)：(1-2)：(1-2)，优选活菌比例为2:2:1。

3.如权利要求2所述的发酵富集蒲公英根活性成分的方法，其特征在于，发酵条件为：发酵温度为28－40℃，发酵时间为24－72h，菌种接种量为蒲公英根浆体积的5－13％；作为优选，发酵温度为37℃，发酵时间为48h，菌种接种量为蒲公英根浆体积的9％。

4.如权利要求3所述的发酵富集蒲公英根活性成分的方法，其特征在于，超声波辅助提取的提取条件为：超声时间为10-50min，超声温度为50-70℃，料液比为1:30-60；作为优选，超声时间为30min，超声温度为60℃，料液比为1:30。

5.一种蒲公英含片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、按照权利要求1－4任一所述的方法制备得到蒲公英根发酵物，采用冷冻干燥得到冻干粉，待用；

S2、将S1得到的冻干粉与填充剂和矫味剂按一定质量比例混合后，通过湿法制粒工艺制粒，然后烘干整粒，加入硬脂酸镁进行压片后即得。

6.如权利要求5所述的发酵富集蒲公英根活性成分的方法，其特征在于，在S2中，冻干粉与填充剂和矫味剂的质量比为(1－2)：(1－4)：(1－2)，优选质量比为2：3：2。

7.如权利要求6所述的发酵富集蒲公英根活性成分的方法，其特征在于，所述填充剂选自微晶纤维素、玉米淀粉、麦芽糊精、β-环状糊精中的一种或多种。

8.如权利要求6所述的发酵富集蒲公英根活性成分的方法，其特征在于，所述填充剂为玉米淀粉、麦芽糊精、β-环状糊精三者的复配物，玉米淀粉、麦芽糊精、β-环状糊精的质量比为(1-2)：(1-2)：(1-2)，优选质量比为2:1:1。

9.如权利要求6所述的发酵富集蒲公英根活性成分的方法，其特征在于，所述矫味剂选自白砂糖、柠檬酸、蜂蜜粉、三氯蔗糖、苹果酸中的一种或多种。

10.如权利要求9所述的发酵富集蒲公英根活性成分的方法，其特征在于，所述矫味剂为白砂糖、柠檬酸、蜂蜜粉三者的复配物，白砂糖、柠檬酸、蜂蜜粉的质量比为(1-2)：(1-2)：(1-2)，优选质量比为2:1:2。

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